專利名稱：用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種帶電荷柔性納米脂質(zhì)體，更具體地，本發(fā)明涉及一種用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體及其制備方法。
背景技術(shù)：
隨著技術(shù)、儀器和方法學(xué)的發(fā)展，人們對(duì)于人體自身的認(rèn)識(shí)越來(lái)越深刻，對(duì)于皮膚生理病理的認(rèn)識(shí)已經(jīng)深入到基因和分子生物學(xué)水平，對(duì)于相關(guān)的生物醫(yī)藥及化妝品產(chǎn)業(yè)的發(fā)展產(chǎn)生了巨大的推動(dòng)作用，越來(lái)越多的具有生物活性的動(dòng)植物成分和/或生物高分子成分應(yīng)用到化妝品行業(yè)，取得了巨大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。但是，將這些具有生物活性的物質(zhì)應(yīng)用到化妝品中，面臨著諸多難題，主要表現(xiàn)在以下二個(gè)方面1、這些生物活性物質(zhì)的穩(wěn)定性如何解決，這類物質(zhì)的穩(wěn)定性除了由其自身的結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)象決定外，外界環(huán)境因素的影響也不容小視，例如表皮活性因子溶液，在外界環(huán)境中的活性持續(xù)時(shí)間僅有短短的數(shù)小時(shí)，在其被皮膚吸收發(fā)揮作用之前就基本失活了，根本不能發(fā)揮其應(yīng)有的作用和效果；2、如何使這些高分子成分能夠被人體皮膚吸收，通常來(lái)說(shuō)，活性物分子量越小，越容易透過(guò)皮膚，一旦分子量大于600，活性物就很難被皮膚吸收了，而近年來(lái)應(yīng)用的具有特定皮膚活性功能的物質(zhì)大多數(shù)是肽類等高分子物質(zhì)，其分子量少則數(shù)千，多則數(shù)十萬(wàn)，這就決定了它們很難透過(guò)皮膚從而被有效吸收。通?；瘖y品中活性成分的種類少則十余種，多則達(dá)到數(shù)十種，活性成分之間的理化反應(yīng)限制了化妝品處方篩選的范圍。為了解決這些問(wèn)題，目前也采用了很多解決方法比如新的藥物制劑技術(shù)越來(lái)越多地被應(yīng)用到化妝品行業(yè)，目前，解決活性物穩(wěn)定性和相容性主要采取加入穩(wěn)定劑、冷凍干燥、制備成乳劑、用環(huán)糊精、微囊(球)、脂質(zhì)體進(jìn)行包裹等方法；而促進(jìn)皮膚吸收則采用了以下一些方法將藥物本身的顆粒制備成納米級(jí)、加入Azone 等透皮促進(jìn)劑、采用離子導(dǎo)入或電致孔、制備成具有促透性能的納米級(jí)包裹體等。另外將脂質(zhì)體制備工藝應(yīng)用到化妝品中，大量的研究事實(shí)證明，將化妝品活性成分包裹到脂質(zhì)體中，可以極大提高這些活性成分的穩(wěn)定性，這些活性成分從脂質(zhì)體中釋放具有緩釋性能，同時(shí)，由于脂質(zhì)體膜成分與人體細(xì)胞生物膜的成分極其接近，因此這類制劑生物相容性好，安全性高。特別是二十世紀(jì)六十年代出現(xiàn)的柔性納米脂質(zhì)體，可以通過(guò)其自身的柔性和變形性，高效地穿透比自身直徑小數(shù)倍的皮膚孔道從而達(dá)到良好的透皮吸收效果，柔性納米脂質(zhì)體不僅可以包裹小分子活性物，對(duì)于分子量高達(dá)IO6的生物大分子活性物質(zhì)亦具有比較優(yōu)良的皮膚透過(guò)性能，是化妝品制備中極具潛力的制備方法。另外，化妝品活性成分分別用脂質(zhì)體包裹，可以有效避免這些成分可能存在的相互作用和理化反應(yīng)。雖然普通脂質(zhì)體能提高穩(wěn)定性和使用的安全性，但其自身穩(wěn)定性還是相對(duì)不高；而且不容易促進(jìn)透皮吸收。所以市場(chǎng)上迫切需要一種應(yīng)用在化妝品中的制劑，其不僅能提高化妝品的生物活性物質(zhì)的穩(wěn)定性，而且能促進(jìn)透皮吸收，達(dá)到最佳的護(hù)膚養(yǎng)膚效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了解決上述問(wèn)題，提供一種透皮能力強(qiáng)且與皮膚結(jié)合更緊密的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體制劑。本發(fā)明的另一目的在于提供了一種用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體及其制備方法。本發(fā)明創(chuàng)新性地將帶電荷的脂質(zhì)成分嵌合到柔性納米脂質(zhì)體膜中，利用皮膚表面酸堿特性，使帶電荷脂質(zhì)體通過(guò)靜電吸引與局部皮膚結(jié)合更加緊密，以利于活性成分更有效地延長(zhǎng)在皮膚的作用時(shí)間，以利于充分發(fā)揮這些活性成分護(hù)膚養(yǎng)膚的作用效果。本發(fā)明的技術(shù)方案如下所述的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體包括下列重量份的組分 1-1000份中性磷脂、0. 5-500份帶電荷磷脂、1-1000份膽固醇、0. 5-500份表面活性劑、
0.1-20份透明質(zhì)酸、0. 5-250份化妝品活性成分、100-8000份的冷凍干燥保護(hù)劑。在本發(fā)明一較佳實(shí)施例中，本發(fā)明所述的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體包括下列重量份的組分100-120份中性磷脂、0. 5-100份帶電荷磷脂、15-100份膽固醇、10-100份表面活性劑、0. 1-2份透明質(zhì)酸、0. 5-250份化妝品活性成分、400-800份的冷凍干燥保護(hù)劑。在本發(fā)明一更佳實(shí)施例中，本發(fā)明所述的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體包括下列重量份的組分100-120份中性磷脂、0. 5-20份帶電荷磷脂、15-20份膽固醇、10-20份表面活性劑、
1.5份透明質(zhì)酸、20份化妝品活性成分、400-600份的冷凍干燥保護(hù)劑。其中，所述的中性磷脂選自大豆卵磷脂、氫化大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、腦磷脂，以及二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、 二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺等天然或合成磷脂中的一種或幾種；所述的帶電荷磷脂選自磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、雙鯨蠟磷脂酸肌醇等負(fù)電荷磷脂中的一種或幾種，或者是選自硬脂酰胺、3β-[Ν-(Ν，，Ν，_ 二甲基乙胺)胺基甲?；鵠膽固醇、N-[l-(2， 3-二油?；?丙基]-N，N，N-三乙胺氯、2，3_ 二油酰氧-N-[2-(精氨酸基酰胺)乙基]-N， N- 二甲基-1-丙基-三氟乙酸胺、1，2- 二油酰氧丙基-N，N, N-三甲基溴化銨等合成正電荷脂質(zhì)中的一種或幾種；所述的表面活性劑是膽酸鈉或去氧膽酸鈉。本發(fā)明優(yōu)選大豆卵磷脂、氫化大豆磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂酸、磷脂酰甘油、硬脂酰胺、3β-[Ν-(Ν’，N’ - 二甲基乙胺)胺基甲酰基]膽固醇中的一種或幾種。其中的磷脂酸、磷脂酰甘油屬于負(fù)電荷脂質(zhì)成分，賦予柔性納米脂質(zhì)體膜帶負(fù)電荷，以利于脂質(zhì)體與堿性呈正電性的局部皮膚的結(jié)合與吸收；硬脂酰胺、3 β-[N-(N’，N’ - 二甲基乙胺)胺基甲?；鵠膽固醇屬于正電荷脂質(zhì)成分，賦予柔性納米脂質(zhì)體膜帶正電荷，以利于脂質(zhì)體與酸性呈負(fù)電性的局部皮膚的結(jié)合與吸收。本發(fā)明膽固醇的使用，是為了調(diào)節(jié)脂質(zhì)體膜的流動(dòng)性和通透性，進(jìn)而調(diào)整脂質(zhì)體膜的穩(wěn)定性。本發(fā)明使用的表面活性劑，可以使脂質(zhì)體膜具有更大的彈性與變形性，從而促進(jìn)脂質(zhì)體的透皮吸收性能。優(yōu)選膽酸鈉或去氧膽酸鈉。本發(fā)明的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體開(kāi)可以包括常規(guī)用量的相當(dāng)于脂質(zhì)體總重量約 0. 2%抗氧化劑，以防止其在常溫條件下貯存時(shí)被氧化。所述的氧化劑可選用但不限于維生素C、維生素E、丁基羥基茴香醚(BHA) ,2,6- 二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)、茶多酚、愈創(chuàng)樹(shù)脂、芝麻酚、波爾定堿中的一種或多種。優(yōu)選維生素E和丁基羥基茴香醚(BHA)組成的混合抗氧化劑。本發(fā)明的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體可以包括相當(dāng)于脂質(zhì)體總重量4-8倍的冷凍干燥保護(hù)劑。所述的冷凍干燥保護(hù)劑可選用但不限于蔗糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖。優(yōu)選甘露醇。上述脂質(zhì)成分與所包裹活性成分的重量比，對(duì)脂質(zhì)體的穩(wěn)定性、包封率及載藥量有較大影響，適宜的脂質(zhì)成分與所包裹活性成分的重量比在2 1至5 1之間；凍干保護(hù)劑與脂質(zhì)體的重量比，對(duì)最終產(chǎn)品的載藥量亦有較大影響，適宜的比例范圍是凍干保護(hù)劑脂質(zhì)體3 1-6 1。本發(fā)明提供了脂質(zhì)體混懸液中，脂質(zhì)體包裹的活性成分與游離的活性成分分離的透析方法，還可以采用超速離心法、柱層析法等分離脂質(zhì)體與游離成分。本發(fā)明還提供了帶電荷柔性納米脂質(zhì)體的制備方法改良的逆相蒸發(fā)-超聲-均質(zhì)-擠出-凍干法。其中所述的改良的逆相蒸發(fā)亦可采用常規(guī)的脂質(zhì)體制備方法，包括薄膜分散法、注入法、加熱法、 乳化法等。本發(fā)明采用改良的逆相蒸發(fā)-超聲-均質(zhì)-擠出-凍干法制備帶電荷柔性納米脂質(zhì)體，具體步驟如下1)將磷脂、膽固醇、脂溶活性成分等脂溶性成分在35°C水浴條件下溶解于揮發(fā)性有機(jī)溶劑中；2)將透明質(zhì)酸、表面活性劑、水溶活性成分等水溶性成分在35°C水浴條件下溶解于磷酸緩沖溶液(pH = 7. 0)中；3)將步驟1)和2、超聲混合，使之形成穩(wěn)定的乳濁液，靜置30分鐘不分層；4)將步驟幻所得的乳濁液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直至形成脂質(zhì)體混懸液；5)將步驟4)所得脂質(zhì)體混懸液超聲破碎30次(超聲5秒、停5秒為1次)后， 5000PSI-10000PSI均質(zhì)3次，最后通過(guò)擠出儀過(guò)IOOnm濾膜3次；6)將步驟幻得到的溶液，采用透析法分離脂質(zhì)體包裹的活性成分和游離在磷酸緩沖液中的活性成分；7)在步驟6)得到的透析袋中的脂質(zhì)體混懸液中，加入5-8倍量的凍干保護(hù)劑， 于-40°C預(yù)凍12小時(shí)以上，再置于冷凍干燥機(jī)凍干，得到白色流動(dòng)性良好的凍干帶電荷柔性納米脂質(zhì)體粉末。本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明制備的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體粒徑在50-200nm 之間，表面電荷絕對(duì)值在50mV以上，使所包裹的活性成分具有更好的穩(wěn)定性。同時(shí)，在柔性納米脂質(zhì)體膜成分中引入帶電荷脂質(zhì)成分，除了使脂質(zhì)體具有良好的皮膚透過(guò)性外，脂質(zhì)體與細(xì)胞生物膜之間具有更強(qiáng)的粘附性，有利于局部充分發(fā)揮活性成分的作用功效和作用效率，減少活性成分的使用量，進(jìn)而利于節(jié)約資源。而本發(fā)明采用的改良的逆相蒸發(fā)-超聲-均質(zhì)-擠出-凍干法，使產(chǎn)品具有較高的包封率和載藥量；整個(gè)工藝過(guò)程均由機(jī)械手段完成，使產(chǎn)品工藝和質(zhì)量具有較好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性；本發(fā)明最終的產(chǎn)品為流動(dòng)性良好的粉末，便于使用、運(yùn)輸和貯存。


圖1為陽(yáng)離子積雪苷柔性納米脂質(zhì)體電鏡圖；其中A為剛制備的脂質(zhì)體原液；B為凍干后重新懸浮的脂質(zhì)體；C未加凍干保護(hù)劑的凍干脂質(zhì)體；D為加凍干保護(hù)劑的凍干脂質(zhì)體；圖2為不同樣品累積釋放結(jié)果；圖3為實(shí)驗(yàn)樣品M小時(shí)累積透皮吸收量；圖4為實(shí)驗(yàn)樣品M小時(shí)累積透皮吸收百分率(％ )。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1將IOOmg大豆卵磷脂、16mg硬脂酰胺、15mg膽固醇水浴超聲溶于氯仿中，將25mg 積雪苷、0. ^iig維生素E與BHA混可抗氧化劑溶于少量乙醇中，再與氯仿液混合；將12mg膽酸鈉、1. 7mg透明質(zhì)酸溶于pH7. 0的磷酸緩沖液中；將前述的磷酸緩沖液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得脂質(zhì)體混懸液；將脂質(zhì)體混懸液用探針式超聲細(xì)胞破碎儀超聲30個(gè)循環(huán)(每循環(huán)超聲5秒，間歇5秒)后，用AVESTIN高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)3次，再通過(guò)AVESTIN擠出儀過(guò)IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質(zhì)體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時(shí)；取透析袋中的脂質(zhì)體混懸液，加入4倍脂質(zhì)質(zhì)量的甘露醇，于_40°C預(yù)凍12小時(shí)后，放置于冷凍干燥機(jī)冷凍干燥成粉末狀。所得到的陽(yáng)離子積雪苷柔性納米脂質(zhì)體的粒徑和kta電位經(jīng)ktasizeHNano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測(cè)定其粒徑和kta電位分別為61. 72士 11. 29nm, 69. 1 士 5. 99mV ；采用透析法分離測(cè)得產(chǎn)品的包封率為四.7%。實(shí)施例2將120mg氫化大豆卵磷脂、20mg硬脂酰胺、18mg膽固醇水浴超聲溶于氯仿中，將 0. 25mg維生素E與BHA混可抗氧化劑溶于少量乙醇中，再與氯仿液混合；將2000UI表皮活性因子(EGF)、15mg膽酸鈉、1. 7mg透明質(zhì)酸溶于pH7. 0的磷酸緩沖液中；將前述的磷酸緩沖液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得脂質(zhì)體混懸液； 將脂質(zhì)體混懸液用探針式超聲細(xì)胞破碎儀超聲30個(gè)循環(huán)(每循環(huán)超聲5秒，間歇5秒)后， 用AVESTIN高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)3次，再通過(guò)AVESTIN擠出儀過(guò)IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質(zhì)體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時(shí)；取透析袋中的脂質(zhì)體混懸液，加入5倍脂質(zhì)質(zhì)量的海藻糖，于_40°C預(yù)凍12小時(shí)后，放置于冷凍干燥機(jī)冷凍干燥成粉末狀。所得到的陽(yáng)離子EGF柔性納米脂質(zhì)體的粒徑和kta電位經(jīng)ktasizer(Nano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測(cè)定其粒徑和kta電位分別為178. 2士21. 91nm、 65. 0 士 6. 04mV ；采用透析法分離測(cè)得產(chǎn)品的包封率為31. 7%。實(shí)施例3將IOmg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿、2mg硬脂酰胺、2mg膽固醇水浴超聲溶于氯仿中，將
0.20mg維生素C與BHA混可抗氧化劑溶于少量乙醇中，再與氯仿液混合；將5mg紫草素、
1.6mg膽酸鈉、1. 7mg透明質(zhì)酸溶于pH7. 0的磷酸緩沖液中；將前述的磷酸緩沖液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得脂質(zhì)體混懸液；將脂質(zhì)體混懸液用探針式超聲細(xì)胞破碎儀超聲30個(gè)循環(huán)(每循環(huán)超聲5秒，間歇5秒)后，用AVESTIN 高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)3次，再通過(guò)AVESTIN擠出儀過(guò)IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質(zhì)體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時(shí)；取透析袋中的脂質(zhì)體混懸液，加入5倍脂質(zhì)質(zhì)量的乳糖，于-40°C預(yù)凍12小時(shí)后，放置于冷凍干燥機(jī)冷凍干燥成粉末狀。所得到的陽(yáng)離子紫草素柔性納米脂質(zhì)體的粒徑和kta電位經(jīng)ktasizeHNano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測(cè)定其粒徑和kta電位分別為81. 55士31. 20nm、 63. 7 士 5. 4ImV ；采用透析法分離測(cè)得產(chǎn)品的包封率為30. 1%。實(shí)施例4將500mg氫化大豆卵磷脂、80mg硬脂酰胺、75mg膽固醇水浴超聲溶于氯仿中，將 1. Smg維生素E與茶多酚混可抗氧化劑溶于少量乙醇中，再與氯仿液混合；將5mg尿囊素、 75mg去氧膽酸鈉、8. 5mg透明質(zhì)酸溶于35°C pH7. 0的磷酸緩沖液中；將前述的磷酸緩沖液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得脂質(zhì)體混懸液；將脂質(zhì)體混懸液用探針式超聲細(xì)胞破碎儀超聲30個(gè)循環(huán)(每循環(huán)超聲5秒，間歇5秒)后，用 AVESTIN高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)3次，再通過(guò)AVESTIN擠出儀過(guò)IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質(zhì)體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時(shí)；取透析袋中的脂質(zhì)體混懸液，加入5倍脂質(zhì)質(zhì)量的甘露醇，于_40°C預(yù)凍12小時(shí)后，放置于冷凍干燥機(jī)冷凍干燥成粉末狀。所得到的陽(yáng)離子尿囊素柔性納米脂質(zhì)體的粒徑和kta電位經(jīng)ktasizeHNano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測(cè)定其粒徑和kta電位分別為88. 38士 14. 92nm、 51. 5 士 4. 26mV ；采用透析法分離測(cè)得產(chǎn)品的包封率為34. 1%。實(shí)施例5將500mg氫化大豆卵磷脂、50mg 3 β -[N-(N'，N’ -二甲基乙胺)胺基甲?；鵠膽固醇、75mg膽固醇水浴超聲溶于氯仿中，將200mg輔酶Q10、l. 8mg維生素E與BHA混可抗氧化劑溶于少量乙醇中，再與氯仿液混合；將75mg膽酸鈉、8. 5mg透明質(zhì)酸溶于35°C pH7. 0 的磷酸緩沖液中；將前述的磷酸緩沖液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得脂質(zhì)體混懸液；將脂質(zhì)體混懸液用探針式超聲細(xì)胞破碎儀超聲30個(gè)循環(huán) (每循環(huán)超聲5秒，間歇5秒)后，用AVESTIN高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)3次，再通過(guò)AVESTIN擠出儀過(guò)IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質(zhì)體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時(shí)；取透析袋中的脂質(zhì)體混懸液，加入6倍脂質(zhì)質(zhì)量的甘露醇，于_40°C預(yù)凍12小時(shí)后，放置于冷凍干燥機(jī)冷凍干燥成粉末狀。所得到的陽(yáng)離子輔酶QlO柔性納米脂質(zhì)體的粒徑和kta電位經(jīng)ktasizer (Nano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測(cè)定其粒徑和kta電位分別為106. 8士85. 51nm、 60. 3 士 5. 49mV ；采用透析法分離測(cè)得產(chǎn)品的包封率為31. 8%。實(shí)施例6將12mg氫化大豆卵磷脂、1. 5mg磷脂酰甘油、1. 5mg膽固醇水浴超聲溶于氯仿中， 將1. 25mg神經(jīng)酰胺2、0. 025mg維生素E與BHA混可抗氧化劑溶于少量乙醇中，再與氯仿液混合；將1. 5mg去氧膽酸鈉、0. 17mg透明質(zhì)酸溶于pH7. 0的磷酸緩沖液中；將前述的磷酸緩沖液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得脂質(zhì)體混懸液； 將脂質(zhì)體混懸液用探針式超聲細(xì)胞破碎儀超聲30個(gè)循環(huán)(每循環(huán)超聲5秒，間歇5秒)后，用AVESTIN高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)3次，再通過(guò)AVESTIN擠出儀過(guò)IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質(zhì)體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時(shí)；取透析袋中的脂質(zhì)體混懸液，加入5倍脂質(zhì)質(zhì)量的甘露醇，于_40°C預(yù)凍12小時(shí)后，放置于冷凍干燥機(jī)冷凍干燥成粉末狀。所得到的陰離子神經(jīng)酰胺2柔性納米脂質(zhì)體的粒徑和^ta電位經(jīng) Zetasizer (Nano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測(cè)定其粒徑和kta電位分別為 139. 7士23. Inm, -52. 1 士5. 95mV ；采用透析法分離測(cè)得產(chǎn)品的包封率為28. 3%0實(shí)施例7將120mg氫化大豆卵磷脂、20mg硬脂酰胺、18mg膽固醇水浴超聲溶于氯仿中，將 30mg水飛薊素、0. 20mg維生素E與BHT混可抗氧化劑溶于少量乙醇中，再與氯仿液混合；將 15mg去氧膽酸鈉、1. 7mg透明質(zhì)酸溶于pH7. 0的磷酸緩沖液中；將前述的磷酸緩沖液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得脂質(zhì)體混懸液；將脂質(zhì)體混懸液用探針式超聲細(xì)胞破碎儀超聲30個(gè)循環(huán)(每循環(huán)超聲5秒，間歇5秒)后，用AVESTIN 高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)3次，再通過(guò)AVESTIN擠出儀過(guò)IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質(zhì)體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時(shí)；取透析袋中的脂質(zhì)體混懸液，加入3倍脂質(zhì)質(zhì)量的蔗糖，于-40°C預(yù)凍12小時(shí)后，放置于冷凍干燥機(jī)冷凍干燥成粉末狀。所得到的陽(yáng)離子水飛薊素柔性納米脂質(zhì)體的粒徑和kta電位經(jīng)ktasizer (Nano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測(cè)定其粒徑和kta電位分別為117. 2士 19. 21nm、 57. 4 士 7. 25mV ；采用透析法分離測(cè)得產(chǎn)品的包封率為32. 9%。實(shí)施例8將IOOmg大豆卵磷脂、16mg硬脂酰胺、IOmg膽固醇水浴超聲溶于氯仿中，將0. 25mg 維生素E與BHA混可抗氧化劑溶于少量乙醇中，再與氯仿液混合；將20mg膠原蛋白、15mg去氧膽酸鈉、1. 7mg透明質(zhì)酸溶于pH7. 0的磷酸緩沖液中；將前述的磷酸緩沖液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得脂質(zhì)體混懸液；將脂質(zhì)體混懸液用探針式超聲細(xì)胞破碎儀超聲30個(gè)循環(huán)(每循環(huán)超聲5秒，間歇5秒)后，用AVESTIN高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)3次，再通過(guò)AVESTIN擠出儀過(guò)IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質(zhì)體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時(shí)；取透析袋中的脂質(zhì)體混懸液，加入4 倍脂質(zhì)質(zhì)量的甘露醇，于-40°C預(yù)凍12小時(shí)后，放置于冷凍干燥機(jī)冷凍干燥成粉末狀。所得到的陽(yáng)離子膠原蛋白柔性納米脂質(zhì)體的粒徑和kta電位經(jīng)ktasizer (Nano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測(cè)定其粒徑和Zeta電位分別為158. 7士 10. 68nm、 55. 0 士 5. 58mV。實(shí)施例9將120mg大豆卵磷脂、16mg硬脂酰胺、IOmg膽固醇水浴超聲溶于氯仿中，將0. 25mg 維生素E與BHA混可抗氧化劑溶于少量乙醇中，再與氯仿液混合；將25mg五肽、15mg去氧膽酸鈉、1. 7mg透明質(zhì)酸溶于pH7. 0的磷酸緩沖液中；將前述的磷酸緩沖液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得脂質(zhì)體混懸液；將脂質(zhì)體混懸液用探針式超聲細(xì)胞破碎儀超聲30個(gè)循環(huán)(每循環(huán)超聲5秒，間歇5秒)后，用AVESTIN高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)3次，再通過(guò)AVESTIN擠出儀過(guò)IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質(zhì)體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時(shí)；取透析袋中的脂質(zhì)體混懸液，加入4倍脂質(zhì)質(zhì)量的甘露醇，于-40°C預(yù)凍12小時(shí)后，放置于冷凍干燥機(jī)冷凍干燥成粉末狀。所得到的陽(yáng)離子五肽柔性納米脂質(zhì)體的粒徑和kta電位經(jīng) Zetasizer (NanoZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測(cè)定其粒徑和kta電位分別為 93. 3 士 22. 71nm、62. 7 士 6. 16mV。上述實(shí)施例中，中性磷脂由日油株式會(huì)社提供，硬脂酰胺為美國(guó)Sigma-Aldrich Chemie GmbH產(chǎn)品，磷脂酰甘油由美國(guó)Avanti Polar Lipids Inc.生產(chǎn)，磷脂酸由上海作舟化工科技有限公司提供，膽固醇、去氧膽酸鈉以及膽酸鈉由天津市大茂化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，透明質(zhì)酸由山東福瑞達(dá)生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，甘露醇由上海實(shí)驗(yàn)試劑有限公司生產(chǎn)，BHA由上海QIGANG Pd生產(chǎn)，維生素E為美國(guó)Sigma產(chǎn)品，磷酸緩沖液根據(jù)中國(guó)藥典自配，其余試劑均為市售產(chǎn)品，除有機(jī)溶劑外均符合食品或藥用標(biāo)準(zhǔn)。效果實(shí)施例1形態(tài)學(xué)將陽(yáng)離子積雪苷柔性納米脂質(zhì)體混懸液，磷鎢酸負(fù)染，透射電鏡下觀察形態(tài)；將凍干陽(yáng)離子積雪苷柔性納米脂質(zhì)體用磷酸緩沖液重新混懸，磷鎢酸負(fù)染，透射電鏡下觀察形態(tài)；在掃描電鏡下觀察未加凍干保護(hù)劑和加入凍干保護(hù)劑的陽(yáng)離子積雪苷柔性納米脂質(zhì)體見(jiàn)圖1。效果實(shí)施例2穩(wěn)定性取3批陽(yáng)離子EGF柔性納米脂質(zhì)體及凍干陽(yáng)離子EGF柔性納米脂質(zhì)體粉末，分別置于室溫、4°C條件下，于Om和: 測(cè)定其包封率、pH、粒徑和kta電位，并觀察外觀，以確定其穩(wěn)定性。見(jiàn)表1。表1脂質(zhì)體混懸液及凍干脂質(zhì)體分別放置3個(gè)月后其穩(wěn)定性結(jié)果
貯存時(shí)間(月)
脂質(zhì)體混懸液
凍干脂質(zhì)體
0
3***
3**
包封率(％或mg*)31.729.380.1340.130室溫pH7.037.166.98**7.03貯粒徑(nm)178.284.7467.5465.41存電位(mV)60.561.7-46.38-44.52條包封率(％)31.730.790.1340.132件A eppH7.037.056.986.874。粒徑(nm)178.275.0467.5463.79電位(mV)60.565.3-46.38-48.77 *脂質(zhì)體混懸液包封率單位為%，凍干脂質(zhì)體載藥量單位為mg/每mg凍干粉；** 凍干脂質(zhì)體的PH、粒徑和電位是將其用PBS溶液重新懸浮后測(cè)定；***表示與0月相比無(wú)顯著性差異(P > 0. 05)
效果實(shí)施例3體外釋放特性 分別取陽(yáng)離子積雪苷柔性納米脂質(zhì)體混懸液5ml (含積雪苷約78. 2 μ g)和積雪苷溶液5ml (含積雪苷約80. Oyg)，分別置于透析袋中；積雪苷脂質(zhì)體乳膏IOOmg (含積雪苷約78. 3μ g)置于濾紙筒中。按中國(guó)藥典規(guī)定的槳法測(cè)定其釋放特征，接收液PBS體積50ml， 釋放溫度保持37. O0C，磁力攪拌速度為50rpm。在事先確定的時(shí)間點(diǎn)吸取0. 5ml SBF接收液并隨即補(bǔ)充相同體積的SBF溶液。采用前述的HPLC方法檢測(cè)釋放出的藥物量。每個(gè)樣
10本平行實(shí)驗(yàn)3次。結(jié)果見(jiàn)圖2。效果實(shí)施例4體外透皮吸收分別配制積雪苷陽(yáng)離子柔性脂質(zhì)體(樣品A)、積雪苷柔性脂質(zhì)體(樣品B)、積雪苷一般陽(yáng)性脂質(zhì)體(樣品C)及積雪苷溶液(樣品D)，并分別加入到同配方的空白膏體中， 使每g膏體含積雪苷約0. 25mg ；去用于透皮吸收的商品化豬皮，根據(jù)Franz擴(kuò)散池的口徑 (0. 66cm2)，裁剪成適宜大小，使豬皮表面(角質(zhì)層)朝上，安裝于擴(kuò)散池上，各涂抹膏體Ig ； 接收液為PBS溶液，溫度37°C，接收液體積2. 5ml，在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)將所有接收液取出，同時(shí)補(bǔ)充新的接收液；按前面的方法檢測(cè)接收液積雪苷含量，計(jì)算積雪苷累積透皮吸收量和百分率；最后一個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣后，將豬皮正反面用蒸餾水沖洗，豬皮浸泡于50mlPBS液中M小時(shí)，測(cè)定浸泡液積雪苷含量，以確定積雪苷在豬皮中的滯留量。結(jié)果見(jiàn)圖3、圖4和表2。表4不同樣品在豬皮中的滯留量(n = 3)
權(quán)利要求
1.一種用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體，其特征在于所述的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體包括下列重量份的組分1-1000份中性磷脂、0. 5-500份帶電荷磷脂、1-1000份膽固醇、0. 5-500份表面活性劑、0. 1-20份透明質(zhì)酸、0. 5-250份化妝品活性成分、100-8000份的冷凍干燥保護(hù)劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體，其特征在于所述的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體包括下列重量份的組分100-120份中性磷脂、0. 5-100份帶電荷磷脂、15-100份膽固醇、10-100份表面活性劑、0. 1-2份透明質(zhì)酸、0. 5-250份化妝品活性成分、400-800份的冷凍干燥保護(hù)劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體，其特征在于所述的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體包括下列重量份的組分100-120份中性磷脂、0. 5-20份帶電荷磷脂、15-20份膽固醇、10-20份表面活性劑、1. 5份透明質(zhì)酸、20份化妝品活性成分、400-600 份的冷凍干燥保護(hù)劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體，其特征在于 化妝品活性成分選自膠原蛋白、水飛薊素、神經(jīng)酰胺、輔酶Q10、尿囊素、紫草素、UI表皮活性因子或積雪苷一種或者多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體，其特征在于 其還包括占脂質(zhì)體總重量0. 1-0. 5%的復(fù)核抗氧化劑，其中所述的復(fù)核抗氧化劑選自維生素C、維生素E、丁基羥基茴香醚、2，6_二叔丁基-4-甲基苯酚、茶多酚、愈創(chuàng)樹(shù)脂、芝麻酚、波爾定堿中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體，其特征在于 所述復(fù)核抗氧化劑為維生素E與丁基羥基茴香醚，其比例為10 1到10 5。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體，其特征在于 所述的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體的粒徑范圍為50-200nm。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體，其特征在于 所述的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體的kta-電位范圍為(-70)-70mV。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體，其特征在于 所述的中性磷脂選自大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、腦磷脂，以及二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺等天然或合成磷脂中的一種或幾種；所述的帶電荷磷脂選自磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、 磷脂酰絲氨酸、雙鯨蠟磷脂酸肌醇等負(fù)電荷磷脂中的一種或幾種，或者是選自硬脂酰胺、 3β-[Ν-(Ν，，Ν，- 二甲基乙胺)胺基甲?；鵠膽固醇、N-[l-(2，3-二油?；?丙基]-Ν，Ν， N-三乙胺氯、2，3- 二油酰氧-N-[2-(精氨酸基酰胺)乙基]-N，N- 二甲基-1-丙基-三氟乙酸胺、1，2_ 二油酰氧丙基-N，N, N-三甲基溴化銨合成正電荷脂質(zhì)中的一種或幾種；所述的表面活性劑是膽酸鈉或去氧膽酸鈉；所述的冷凍干燥保護(hù)劑選用蔗糖、甘露醇、葡萄糖、 海藻糖中的一種或幾種。
10.一種如權(quán)利要求1-3任一所述的用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體的制備方法，所述包括如下步驟1)將磷脂、膽固醇、脂溶活性成分在35°c水浴條件下溶解于揮發(fā)性有機(jī)溶劑中；2)將透明質(zhì)酸、表面活性劑、水溶活性成分等水溶性成分在35°C水浴條件下溶解于磷酸緩沖溶液(pH = 7. 0)中；3)將步驟1)和2、超聲混合，使之形成穩(wěn)定的乳濁液，靜置30分鐘不分層；4)將步驟幻所得的乳濁液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直至形成脂質(zhì)體混懸液；5)將步驟4)所得脂質(zhì)體混懸液超聲破碎30次后，5000PSI-10000PSI均質(zhì)3次，最后通過(guò)擠出儀過(guò)IOOnm濾膜3次；6)將步驟幻得到的溶液，采用透析法分離脂質(zhì)體包裹的活性成分和游離在磷酸緩沖液中的活性成分；7)在步驟6)得到的透析袋中的脂質(zhì)體混懸液中，加入5-8倍量的凍干保護(hù)劑， 于-40°C預(yù)凍12小時(shí)以上，再置于冷凍干燥機(jī)凍干，得到白色流動(dòng)性良好的凍干帶電荷柔性納米脂質(zhì)體粉末。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體及其制備方法。本發(fā)明的用于化妝品的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體包括下列重量份的組分1-1000份中性磷脂、0.5-500份帶電荷磷脂、1-1000份膽固醇、0.5-500份表面活性劑、0.1-20份透明質(zhì)酸、0.5-250份化妝品活性成分、100-8000份的冷凍干燥保護(hù)劑。本發(fā)明的化妝品活性成分帶電荷柔性納米脂質(zhì)體，可以顯著提高化妝品活性成分的穩(wěn)定性，促進(jìn)活性成分的透皮吸收并提高其作用效率，還能提高活性成分在皮膚表面和皮膚深層的滯留和作用時(shí)間；粉末狀態(tài)的化妝品活性成分帶電荷柔性納米脂質(zhì)體還利于使用、運(yùn)輸和貯存。本發(fā)明的帶電荷柔性納米脂質(zhì)體的制備方法均可采用機(jī)械化方法，產(chǎn)品工藝和質(zhì)量的穩(wěn)定性好、重現(xiàn)性高。
文檔編號(hào)A61Q19/00GK102397168SQ20111037513
公開(kāi)日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2011年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月23日
發(fā)明者江妍 申請(qǐng)人:蘇州瑞納生化技術(shù)有限公司