專利名稱：抑制fgfr3及治療多發(fā)性骨髓瘤的制作方法
發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明一般涉及抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3的方法和治療多發(fā)性骨髓瘤的方法，尤其是在具有t(4；14)染色體易位的患者或細(xì)胞中。本發(fā)明還涉及苯并咪唑喹啉酮(quinolinone)化合物在制備藥物中的應(yīng)用，該藥物用于抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3和治療多發(fā)性骨髓瘤，尤其是用于具有t(4；14)染色體易位的患者或細(xì)胞中。
背景技術(shù)：
毛細(xì)血管進(jìn)入人體的幾乎所有組織并向這些組織提供氧和養(yǎng)分，同時(shí)清除廢產(chǎn)物。在一般的條件下，排列成這些毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞不分裂，因此，在成人體內(nèi)這些毛細(xì)血管的數(shù)量或尺寸通常不增加。但是，在某些特定的正常條件下，比如組織遭受損傷時(shí)，或者在月經(jīng)周期的特定階段中，毛細(xì)血管開始快速增生。這種從現(xiàn)有的血管形成新的毛細(xì)血管的過程稱為血管發(fā)生或新血管形成。參見Folkman的J.Scientific American第275期，150-154頁(1996)。在傷口愈合過程中的血管發(fā)生是一個(gè)在成人生命過程中病理生理性的新血管形成的例子。在傷口愈合的過程中，附加的毛細(xì)血管提供氧和養(yǎng)分、促進(jìn)肉芽組織生長(zhǎng)、并有助于廢物的清除。在愈合過程終止之后，這些毛細(xì)血管正常地退化。Lymboussaki，A的學(xué)術(shù)論文Vascular EndothelialGrowth Factors and their Receptors in Embryos，Adults，and in Tumors(成人胚體和腫瘤中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及它們的受體)(Helsinki大學(xué)，分子/癌癥生物實(shí)驗(yàn)室和病理學(xué)部，Haartman研究院(1999))。
血管發(fā)生還對(duì)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)起重要的作用。已知一旦癌細(xì)胞巢達(dá)到一定的尺寸，大致直徑為1-2mm時(shí)，癌細(xì)胞必須發(fā)展向腫瘤的供血使之長(zhǎng)得更大，因?yàn)閿U(kuò)散作用將不足以向癌細(xì)胞提供足夠的氧和養(yǎng)分。因此，就期望通過抑制血管發(fā)生來使癌細(xì)胞的生長(zhǎng)停止。
受體酪氨酸激酶(RTK)是跨膜多肽，它調(diào)節(jié)發(fā)育細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化、成熟組織的重建和再生。Mustonen，T等人的J.Cell Biology第129期，895-898頁(1995)；Van derGeer，P等人的Ann Rev.Cell boil.第10期，251-337頁(1994)。已知稱為生長(zhǎng)因子或細(xì)胞因子的多肽配體能激活RTK。RTK的信號(hào)傳導(dǎo)涉及導(dǎo)致其二聚化的配體結(jié)合和該受體的外部結(jié)構(gòu)域內(nèi)的構(gòu)象變化。Lymboussaki，A的學(xué)術(shù)論文成人胚體和腫瘤中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及它們的受體(Helsinki大學(xué)，分子/癌癥生物實(shí)驗(yàn)室和病理學(xué)部，Haartman研究院(1999))；Ullrich，A等人的Cell第61期，203-212頁(1990)。配體與RTK的結(jié)合導(dǎo)致了受體在特定的酪氨酸殘基處的轉(zhuǎn)磷酸作用，以及隨后用于胞質(zhì)底物磷酸化作用的催化區(qū)域的激活。(同上)。
兩個(gè)亞族的RTK對(duì)血管內(nèi)皮是特異性的。它們包括血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)亞族和Tie受體亞族。第V類RTK包括VEGFR1(FLT-1)、VEGFR2(KDR(人))、FlK-1(小鼠))和VEGFR3(FLT-4)。Shibuya，M等人的Oncogene第5期，519-525頁(1990)；Terman，B等人的Oncogene第六期，1677-1683頁(1991)；Aprelikova，O等人的CancerRes.第52期，746-748頁(1992)。
VEGF亞族的成員已被描述為能誘發(fā)血管滲透性和內(nèi)皮細(xì)胞增生并進(jìn)一步被鑒定為血管發(fā)生和血管生成的主要誘導(dǎo)劑。Ferrara，N等人的Endocrinol.Rev.第18期，4-25頁(1997)。已知VEGF特異性地與包括FLT-1和FLK-1的RTK結(jié)合。參見DeVries，C等人的Science第255期，989-991(1992)；Quinn，T等人的Proc.Natl.Acad.Sci.第90期，7533-7537(1993)。VEGF刺激內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和增生，并在活體外和活體內(nèi)誘發(fā)血管發(fā)生。Connolly，D等人的J.Biol.Chem.第264期，20017-20024頁(1989)；Connolly，D等人的J.Clin.Invest.第84期，1470-1478頁(1989)；Ferrara，N等人的Endocrino.Rew.第18期，4-25頁(1997)；Leung，D.等人的Science第246期，1306-1309頁(1989)；Plouet，J.等人的EMBO J第8期，3801-3806頁(1989)。
由于已知血管發(fā)生對(duì)癌的生長(zhǎng)是關(guān)鍵性的并能被VEGF和VEGF-RTK控制，所以已作出相當(dāng)大的努力以開發(fā)能抑制或阻滯血管發(fā)生和抑制VEGF-RTK的化合物。
血小板衍生生長(zhǎng)因子受體激酶(PDGFR)是另一種RTK。從成膠質(zhì)細(xì)胞瘤到前列腺癌，許多不同實(shí)體瘤中都顯示有PDGF表達(dá)。在這些不同腫瘤類型中，PDGF信號(hào)傳導(dǎo)的生物學(xué)作用可在從癌細(xì)胞生長(zhǎng)的自分泌刺激到涉及鄰近間質(zhì)和血管發(fā)生的更精細(xì)的旁分泌相互作用的范圍內(nèi)變化。因此，用小分子抑制PDGFR激酶的活性可干擾腫瘤生長(zhǎng)和血管發(fā)生。
Tie-2是一種膜RTK。與其配體結(jié)合后，Tie-2被活化并將其下游信號(hào)蛋白磷酸化。然后，Tie-2激酶活性可觸發(fā)細(xì)胞應(yīng)答途徑，該途徑可導(dǎo)致癌內(nèi)的血管穩(wěn)定化。因此，阻遏Tie-2的激酶活性，同時(shí)阻遏如VEGF和FGFR1受體激酶等其它血管形成激酶的活性可有效切斷癌細(xì)胞的血液供應(yīng)并治療這種疾病。
FLT-3是PDGF受體家族的一種受體酪氨酸激酶，在大多數(shù)患者中它在急性骨髓性白血病(AML)上表達(dá)，并可以野生型存在或有活性突變，這導(dǎo)致組成性活化的激酶功能。內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)(ITD)突變?cè)诩s25％的AML患者中表達(dá)并與AML患者預(yù)后不良有關(guān)。Levis，M等，Blood，99，11；2002。
c-Kit是PDGF受體家族的另一種受體酪氨酸激酶，它通常在造血祖細(xì)胞、肥大細(xì)胞和胚細(xì)胞中表達(dá)。C-kit的表達(dá)牽涉到包括肥大細(xì)胞白血病、胚細(xì)胞瘤、小細(xì)胞肺癌、胃腸道間質(zhì)瘤、急性骨髓性白血病(AML)、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、黑色素瘤、卵巢癌、乳腺癌在內(nèi)的許多癌癥。Heinrich，M.C.等，J.Clin.Onc.20，61692-1703，2002(綜述文章)；Smolich，B.D.等，Blood，97，5；1413-1421。
c-ABL是一種酪氨酸激酶，它最初被認(rèn)為是Abelson鼠白血病病毒基因組產(chǎn)生的癌基因產(chǎn)物。約90％的慢性骨髓性白血病(CML)、20-30％的急性成淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)和約1％的急性髓母細(xì)胞性白血病(AML)在第9號(hào)和第22號(hào)染色體之間有相互易位。這種易位導(dǎo)致費(fèi)城染色體并且是嵌合BCR/ABL轉(zhuǎn)錄物表達(dá)的原因。
FGFR3是一種與各種癌癥有關(guān)的酪氨酸激酶。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3(FGFR3)是IV類受體酪氨酸激酶。在約15％的多發(fā)性骨髓瘤患者中由于t(4，14)易位而使FGFR3被失去調(diào)控。這種易位造成能響應(yīng)FGF1的功能性FGFR3在例如骨微環(huán)境中的表達(dá)。一些情況下，已鑒別了造成FGFR3配體非依賴性的的活化突變體。已發(fā)現(xiàn)這些活化的FGFR3突變會(huì)造成Ras樣腫瘤進(jìn)展且存在利用類似的信號(hào)途徑的證據(jù)(Chesi等，Blood，2001 97 729-736)。
多發(fā)性骨髓瘤(MM)是一種惡性B細(xì)胞疾病，其特征為同源漿細(xì)胞在骨髓(BM)中累積和溶骨性骨損傷。自體干細(xì)胞移植(ASCT)和支持療法的發(fā)展對(duì)該病和長(zhǎng)期存活率已有顯著影響。Attal，M.等，N.Engl.J.Med.，1996；33591-97；和Barlogie，B.等，Blood，1997；89789-793。然而，患者總是會(huì)復(fù)發(fā)，總的來說MM仍然是一種致命的疾病。對(duì)MM中非隨機(jī)染色體易位的鑒定導(dǎo)致了有效預(yù)后工具的發(fā)展和對(duì)新的分子靶點(diǎn)的鑒定。幾乎近半數(shù)的MM患者過表達(dá)由以下5種復(fù)發(fā)性免疫球蛋白重(IgH)易位中的1種異常調(diào)節(jié)的假定的癌基因11q13(細(xì)胞周期蛋白D1)、6p21(細(xì)胞周期蛋白D3)、4p16(FGFR3和MMSET)、16q23(c-maf)和20q11(mafB)。Kuehl，W.M.等，Nat Rev Cancer，2002；2175-187；和Avet-Loiseau，H.等，Blood，2002；992185-2191。這些易位可能代表MM發(fā)展中的早期并且可能是其中的原始事件。最近，已經(jīng)清楚這些特定的IgH易位具有預(yù)后意義。具體地說，在約20％的患者中發(fā)生的t(4；14)易位似乎會(huì)帶來特別不好的MM預(yù)后，且ASCT對(duì)其無明顯治療效果。Fonseca，R.等，Blood，2003；1014569-4575；Keats，J.J.等，Blood，2003；1011520-1529；Moreau，P.等，Blood，2002；1001579-1583；和Chang，H.等，Br.J.Haematol.，2004；12564-68。顯然，這些患者需要新的治療方法。
t(4；14)易位是異常的，這是因?yàn)樗坪醍惓Ｕ{(diào)節(jié)兩個(gè)可能的癌基因，der(4)上的MMSET和der(14)上的FGFR3。Chesi，M.等，Nat.Genet.，1997；16260-265；和Chesi，M.等，Blood，1998；923025-3034。還不知道對(duì)這些基因中的任何一個(gè)或兩個(gè)的異常調(diào)節(jié)是否是MM發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵原因，但一些證據(jù)支持FGFR3在腫瘤引發(fā)和發(fā)展中的作用。WT FGFR3(一種RTK)的活化促進(jìn)在骨髓瘤細(xì)胞中的增殖和存活，且在造血小鼠模型中弱轉(zhuǎn)化。Plowright，E.E.等，Blood，2000；95992-998；Chesi，M.等，Blood，2001；97729-736；和Pollett，J.B.等，Blood，2002；1003819-3821。隨后在一些MM中獲得FGFR3的活性突變體與晚期骨髓瘤的發(fā)展有關(guān)并且在一些試驗(yàn)?zāi)Ｐ椭袕?qiáng)烈轉(zhuǎn)化。Chesi，M.等，Blood，2001；97729-736；和Li，Z.等，Blood，2001；972413-2419。體外研究顯示，F(xiàn)GFR3可賦予化學(xué)抗性，由臨床數(shù)據(jù)支持的觀察結(jié)果證實(shí)了對(duì)常規(guī)化學(xué)療法的弱應(yīng)答和t(4；14)MM患者縮短的生存中值。Fonseca，R.等，Blood，2003；1014569-4575；Keats，J.J.等，Blood，2003；1011520-1529；Moreau，P.等，Blood，2002；1001579-1583；和Chang，H.等，Br.J.Haematol.，2004；12564-68。這些發(fā)現(xiàn)說明，F(xiàn)GFR3的異位表達(dá)在骨髓瘤腫瘤生成中起著雖然不是唯一但卻很重要的作用，因此使這種RTK成為分子治療的靶點(diǎn)。
在t(4；14)MM細(xì)胞系中對(duì)FGFR3的抑制誘導(dǎo)出細(xì)胞毒應(yīng)答說明，無論這些衍生自晚期患者的細(xì)胞內(nèi)遺傳改變的復(fù)雜性，這些細(xì)胞仍依賴于FGFR3信號(hào)過程。Trudel，S.等，Blood，2004；1033521-3528；Paterson，J.L.等，Br.J.Haematol.，2004；124595-603；和Grand，E.K.等，Leukemia，2004；18962-966。這些觀察結(jié)果與已經(jīng)在一些惡性腫瘤人群中證明獲得臨床成功的受體酪氨酸滅活的結(jié)果一致，并推動(dòng)了用于治療這些預(yù)后差的患者的FGFR3抑制劑的臨床發(fā)展。Druker，B.J.等，N.Engl.J.Med.，2001；3441031-1037；Demetri，G.D.等，N.Engl.J.Med.，2002；347472-480；Slamon，D.J.等，N.Engl.J.Med.2001；344783-792；和Smith，B.D.等，Blood，2004；1033669-3676。
糖元合酶激酶3(GSK-3)是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，它的兩個(gè)同工型α和β已被鑒定。Woodgett，Trends Biochem.Sci.，16177-81(1991)。GSK-3的兩種同工型在靜息細(xì)胞中是組成性激活(constitutively active)的。GSK-3最初被鑒定為一種通過直接磷酸化來抑制糖元合酶的激酶。在胰島素被活化后GSK-3失活，從而可使糖元合酶活化并可能發(fā)生其它的胰島素依賴性事件，如葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)。隨后已顯示，其它生長(zhǎng)因子如胰島素通過受體酪氨酸激酶(RTK)信號(hào)途徑也能使GSK-3活性失活。這種信號(hào)分子的例子包括IGF-1和EGF。Saito等，Biochem.J.，30327-31(1994)；Welsh等，Biochem.J.294625-29(1993)；和Cross等，Biochem.J.，30321-26(1994)。
抑制GSK-3活性的藥劑可用于治療由GSK-3活性介導(dǎo)的疾病。此外，對(duì)GSK-3的抑制模擬了生長(zhǎng)因子信號(hào)途徑的活化，因此GSK-3抑制劑可用于治療該途徑活化不足的疾病?？捎肎SK-3抑制劑治療的疾病的例子如下所述。
糖尿病是一種嚴(yán)重的代謝性疾病，它是由緩慢上升的血糖水平(高血糖)的存在而定義的。該高血糖狀態(tài)是肽激素即胰島素活性的相對(duì)或絕對(duì)缺乏的結(jié)果。胰島素是由胰臟的β細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的。胰島素被報(bào)道為能促進(jìn)葡萄糖利用、蛋白質(zhì)合成，以及將碳水化合物能量以形式糖元形成和儲(chǔ)藏。葡萄糖作為糖元儲(chǔ)藏在體內(nèi)，這是一種多聚葡萄糖的形式，其可轉(zhuǎn)化回葡萄糖以滿足代謝的要求。在正常情況下，胰島素以基礎(chǔ)速率和在葡萄糖刺激后的提高速率分泌，這些都是為了通過將葡萄糖轉(zhuǎn)化合成糖元來維持代謝體內(nèi)平衡。
術(shù)語糖尿病包括幾種不同的高血糖狀態(tài)。這些狀態(tài)包括1型(胰島素依賴性糖尿病或IDDM)和2型(非胰島素依賴性糖尿病或NIDDM)糖尿病?；加?型糖尿病的個(gè)體體內(nèi)高血糖的存在與胰島素水平的缺失、下降或不存在有關(guān)，它們不足以將血糖水平維持在生理范圍內(nèi)。常規(guī)說，通常通過以非腸道的途徑施用替代劑量的胰島素來治療1型糖尿病。由于GSK-3的抑制刺激胰島素依賴性過程，因此它在1型糖尿病的治療中是有用的。
2型糖尿病是老化過程中持續(xù)增長(zhǎng)的普遍疾病。其最初特征是對(duì)胰島素敏感性的降低，和循環(huán)胰島素濃度的代償性上升，后者是維持正常血液葡萄糖水平必需的。胰腺β細(xì)胞的分泌的增加導(dǎo)致了胰島素水平提高，所導(dǎo)致的高胰島素血癥與糖尿病的心血管并發(fā)癥相關(guān)。隨著胰島素抗性惡化，對(duì)胰腺β細(xì)胞的要求逐步提高，直到胰腺再不能提供足夠水平的胰島素，從而導(dǎo)致血糖水平提高。最終，發(fā)生明顯的高血糖癥和高脂血癥，導(dǎo)致與糖尿病有關(guān)的破壞性的長(zhǎng)期并發(fā)癥，包括心血管疾病、腎衰竭和失明。尚未了解導(dǎo)致2型糖尿病的確切機(jī)制，但其導(dǎo)致葡萄糖對(duì)骨骼肌的運(yùn)輸受到損害，肝葡萄糖生產(chǎn)增加，和胰島素應(yīng)答不充分。膳食改善通常是無效的，因此大多數(shù)病人最終需要藥物干預(yù)，來有效防止和/或減緩疾病并發(fā)癥的發(fā)展。可用多種可購得的口服抗-糖尿病藥劑中的一種或多種治療許多病人，包括磺酰脲，來提高胰島素分泌。磺酰脲藥物的例子包括抑制肝葡萄糖生產(chǎn)的二甲雙胍和曲格列酮(一種胰島素敏化藥物)。盡管使用了這些藥劑，仍有30-40％的糖尿病不能用這些藥物充分控制，而需要皮下胰島素注射。另外，這些治療各有副作用。例如，磺酰脲會(huì)導(dǎo)致低血糖，而曲格列酮能導(dǎo)致嚴(yán)重的肝中毒。目前，需要新穎和改良的藥物來治療前驅(qū)糖尿病和糖尿病病人。
如上所述，GSK-3抑制刺激胰島素依賴性的過程，而且因此在治療2型糖尿病中是有用的。最近用鋰鹽獲得數(shù)據(jù)提供了支持該觀點(diǎn)的證據(jù)。最近已報(bào)道鋰離子能抑制GSK-3活性。Klein等，PNAS 938455-9(1996)。1924年以來，已報(bào)道鋰具有抗糖尿病效果，包括降低血漿葡萄糖水平、提高糖元攝入、加強(qiáng)胰島素、上調(diào)葡萄糖合酶活性和刺激皮膚、肌肉和脂肪細(xì)胞中的糖元的合成。然而，在抑制GSK-3活性的使用中鋰還未被廣泛接受，可能是因?yàn)槲墨I(xiàn)記載了其對(duì)GSK-3以外的分子靶的效果。嘌呤類似物5-碘結(jié)核菌素(也是GSK-3抑制劑)，在大鼠肝細(xì)胞中也刺激糖元合成并拮抗胰高血糖素和后葉加壓素對(duì)糖元合成酶的失活作用。Fluckiger-Isler等，Biochem.J.，29285-91(1993)；和Massillon等，Biochem.J.299123-8(1994)。然而，也已顯示該化合物抑制其它絲氨酸/蘇氨酸和酪氨酸激酶。Massillon等，Biochem.J.299123-8(1994)。
在治療糖尿病病人中的一個(gè)主要目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)盡可能接近正常的血糖水平。一般而言，獲得正常的飯后血糖水平比使空腹高血糖正?；永щy。另外，一些流行病學(xué)研究提示，飯后高血糖癥(PPHG)或高胰島素血癥是糖尿病大血管并發(fā)癥發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。近來，開發(fā)了幾種具有不同藥物動(dòng)力學(xué)概況的藥物，它們靶向PPHG。這些包括賴脯胰島素、淀粉樣多肽類似物、α-葡萄糖苷酶抑制劑和氯茴苯酸類似物。賴脯胰島素與常規(guī)人胰島素相比，作用開始更快，效力持續(xù)時(shí)間短。在臨床試驗(yàn)中，使用賴脯胰島素與PPHG控制的提高和高血糖發(fā)病幾率的下降有關(guān)。一種氯茴苯酸類似物瑞格列奈是短效促胰島素藥物，它當(dāng)在飯前服用時(shí)，刺激內(nèi)源胰島素分泌并降低飯后高血糖的變化幅度(excursion)。賴氨酸脯氨酸胰島素和瑞格列奈都與飯后高胰島素血癥有關(guān)。相反，氯茴苯酸類似物通過延緩胃排空和將營(yíng)養(yǎng)物傳遞到小腸的吸收表面，減少PPHG。α-葡萄糖苷酶抑制劑，例如阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖也主要是通過干擾碳水化合物消化酶和延緩葡萄糖吸收來減少PPHG的。Yamasaki等，Tohoku J Exp Med 1997年11月；183(3)173-83。本發(fā)明的GSK抑制劑單獨(dú)或與上述藥物聯(lián)合，在飯后高血糖和空腹高血糖的治療中都是有用的。
GSK-3也涉及與阿爾茨海默氏病(AD)相關(guān)的生物學(xué)途徑。AD的病理學(xué)特征是淀粉樣前體蛋白(APP)的非正常加工形式的胞外斑，稱為β-淀粉狀肽(β-AP)，和含有大部分由高磷酸化τ蛋白組成的成對(duì)螺旋纖絲的胞內(nèi)神經(jīng)纖維纏結(jié)的發(fā)展。GSK-3是已發(fā)現(xiàn)的在體外對(duì)τ蛋白PHFτ特征性非正常位點(diǎn)上進(jìn)行磷酸化的激酶之一，而且是已被證明在活細(xì)胞和動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行該作用的唯一激酶。Lovestone等，CurrentBiology，41077-86(1994)；和Brownlees等，Neuroreport 83251-3255(1997)。另外，GSK-3激酶抑制劑，LiCl，在細(xì)胞中阻斷τ高磷酸化。Stambolic等，CurrentBiology，61664-8(1996)。因此GSK3活性可能對(duì)于神經(jīng)纖維纏結(jié)的產(chǎn)生和因此對(duì)于疾病的發(fā)展作出貢獻(xiàn)。近來已顯示GSK-3β和另一種AD發(fā)病機(jī)理中的關(guān)鍵蛋白，早老蛋白1(PS1)有關(guān)。Takashima等，PNAS，959637-9641(1998)。PS1基因中的突變導(dǎo)致β-AP產(chǎn)生的增加，但該文作者也證明突變的PS1蛋白與GSK-3β結(jié)合得更緊密，并且加強(qiáng)與PS1的相同區(qū)域結(jié)合的τ的磷酸化。
也已顯示另一種GSK-3底物，β-連環(huán)蛋白，與PS1結(jié)合。Zhong等，Nature，395698-702(1998)。GSK-3降解的目標(biāo)是磷酸化的胞液β-連環(huán)蛋白，而降低的β-連環(huán)蛋白活性與神經(jīng)元細(xì)胞對(duì)β-AP誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡敏感性的增加有關(guān)。因此，GSK-3β和突變PS1締合的增加可說明在PS1突變性AD病人大腦中已觀察到的β-連環(huán)蛋白水平的降低和疾病相關(guān)的神經(jīng)元細(xì)胞死亡的增加。與這些觀察一致，已顯示反義(而不是有義)GSK-3的注射，在體外阻斷β-AP對(duì)神經(jīng)元的病理學(xué)作用，從而使得細(xì)胞死亡的發(fā)生延遲24小時(shí)，并使1小時(shí)細(xì)胞存活從12％增加到35％。Takashima等，PNAS，907789-93(1993)。在這些后來的研究中，胞內(nèi)GSK-3活性的加倍使細(xì)胞死亡作用提前(施用β-AP的3-6小時(shí)內(nèi))，提示β-AP除了提高GSK-3對(duì)它的底物的親近性外的遺傳機(jī)制外，β-AP可能實(shí)際上提高了GSK-3活性。通過觀察到GSK-3蛋白質(zhì)表達(dá)水平(但就此處而言，不是比活性)在AD的突觸后小體上清液中，比在正常腦組織中增加了50％，提供了GSK-3對(duì)AD的作用的進(jìn)一步證據(jù)。Pei等，J.Neuropathol Exp.，5670-78(1997)。因此，相信GSK-3的特異性抑制劑將對(duì)緩解阿爾茨海默氏病的發(fā)展起作用。
除了上述的鋰鹽效果外，使用鋰鹽治療雙相性精神障礙疾病(躁狂抑郁綜合征)有很長(zhǎng)的歷史。該對(duì)鋰的臨床反應(yīng)可反映GSK-3和雙相性精神障礙的病源有關(guān)，在該情況下GSK-3抑制劑將與該適應(yīng)癥有關(guān)。為了支持該觀點(diǎn)，最近已顯示丙戊酸鹽(另一種常用于治療雙相性精神障礙的藥物)也是GSK-3抑制劑。Chen等，J.Neurochemistry，721327-1330(1999)。鋰和其它GSK-3抑制劑可對(duì)治療雙相性精神障礙起作用的機(jī)制之一是提高經(jīng)受由神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸誘導(dǎo)的反常高水平的興奮的神經(jīng)元的存活率。Nonaka等，PNAS，952642-2647(1998)。還相信谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元興奮性中毒是與急性損傷，如腦缺血、外傷性腦損傷和細(xì)菌感染等有關(guān)的神經(jīng)變性的主因。另外，相信過量谷氨酸信號(hào)傳導(dǎo)是阿爾茨海默氏病、亨廷頓氏舞蹈病、帕金森氏病、AIDS相關(guān)性癡呆、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(AML)和多發(fā)性硬化(MS)等疾病中可見的慢性神經(jīng)元損傷中的一個(gè)因素。Thomas，J.Am.Geriatr.Soc 431279-89(1995)。因此相信GSK-3抑制劑是對(duì)這些疾病和其它神經(jīng)變性疾病治療是有用的。
GSK-3的作用和鈣調(diào)磷酸酶的作用正相反，它使轉(zhuǎn)錄因子NF-AT磷酸化，并促進(jìn)其從核中輸出。Beals等，Science，2751930-33(1997)。因此，GSK-3通過NF-AT阻斷早期免疫應(yīng)答基因的活化，而且GSK-3抑制劑可允許并延長(zhǎng)免疫應(yīng)答的活化。因此，相信GSK抑制劑能延長(zhǎng)和加強(qiáng)某些細(xì)胞因子的免疫刺激作用，而且通常這種作用能加強(qiáng)那些用于腫瘤免疫治療或現(xiàn)實(shí)用于免疫治療的細(xì)胞因子的能力。
鋰還有其它生物學(xué)上的作用。它在體外和在體內(nèi)都是造血作用的強(qiáng)刺激劑。Hammond等，Blood，5526-28(1980)。在犬中，碳酸鋰消除了嗜中性白血球減少癥的復(fù)發(fā)，并使其它血細(xì)胞計(jì)數(shù)正?；oukas等，Exp.Hematol.，14215-221(1986)。如果鋰的這些作用是通過GSK-3的抑制介導(dǎo)的，GSK-3抑制劑將具有更廣泛的用途。由于GSK-3的抑制劑能用于治療許多疾病，對(duì)新穎GSK-3抑制劑的鑒定是非常需要的。
NEK-2是一種哺乳動(dòng)物絲氨酸蘇氨酸激酶，它在結(jié)構(gòu)上與真菌構(gòu)巢曲霉的NimA激酶相關(guān)。NimA突變導(dǎo)致細(xì)胞停留在G2期，且wt NimA的過表達(dá)導(dǎo)致未成熟的染色質(zhì)固縮(即便是在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中異位表達(dá))。蛋白質(zhì)和激酶水平在細(xì)胞周期S/G2期均達(dá)到峰值。cdk1/cyclinB復(fù)合體定位到細(xì)胞核和紡錘體極體也需要NimA。已知組蛋白H3是這種激酶的體外底物，如果在體內(nèi)也是這樣，這就可解釋這種激酶在染色體固縮中的作用。到目前為止已在哺乳動(dòng)物中鑒定出了六種NimA激酶，其中，NEK-2似乎與NimA最相關(guān)。其活性也是調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，在S/G2期達(dá)到峰值。然而，NEK-2的過表達(dá)不會(huì)影響染色質(zhì)固縮，相反，導(dǎo)致中心體的顯著分裂，這可能是由于中心粒/中心粒附著的喪失。有證據(jù)說明NEK-2受磷酸化作用調(diào)節(jié)并可與蛋白磷酸酶PP1相互作用。NEK-2是遍在表達(dá)的且似乎在睪丸中最豐富。只含有NEK-2序列的Hyseq簇374113在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶(13.3x)和原發(fā)瘤(6.5x)中顯示出驚人的NEK-2的過表達(dá)。通過反義寡核苷酸抑制NEK-2能抑制細(xì)胞增殖并降低細(xì)胞在軟瓊脂中生長(zhǎng)的能力。此外，在有或沒有順鉑時(shí)在這些細(xì)胞中都觀察到細(xì)胞死亡增加。
紫外線、電離輻射、環(huán)境因子和細(xì)胞毒藥物都會(huì)對(duì)細(xì)胞DNA的完整性造成損傷。當(dāng)這種損傷發(fā)生在DNA復(fù)制或細(xì)胞分裂期間時(shí)就可能是災(zāi)難性的并可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。細(xì)胞的反應(yīng)是在兩個(gè)關(guān)卡點(diǎn)(G1/S或G2/M)之一中止細(xì)胞周期以允許DNA修復(fù)的進(jìn)行或引發(fā)程序性細(xì)胞死亡。
G1/S關(guān)卡點(diǎn)由p53轉(zhuǎn)錄活化蛋白調(diào)節(jié)，這種關(guān)鍵蛋白質(zhì)的缺位通常是腫瘤發(fā)生的重要步驟，因此可將p53定義為腫瘤抑制劑。實(shí)際上，所有癌癥中的幾乎50％是由于突變?cè)斐蓀53缺失。T.Soussi，Ann.N.Y.Acad Sci.，910，121(2001)。在對(duì)DNA損傷的應(yīng)答中，關(guān)卡激酶2(CHK-2)將p53磷酸化，這導(dǎo)致該蛋白質(zhì)穩(wěn)定化并升高p53水平。A.Hirao等，Science，287，1824(2000)。從而，細(xì)胞周期負(fù)調(diào)節(jié)物，如p21Waf1/Cip1，被活化并使細(xì)胞周期停止在G1/S關(guān)卡點(diǎn)。B.Vogelstein等，Nature，408，307(2000)。
G2/M關(guān)卡點(diǎn)受絲氨酸/蘇氨酸關(guān)卡激酶1(CHK1)監(jiān)控。當(dāng)DNA受損時(shí)，蛋白激酶ATR(共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張性突變-rad53相關(guān)激酶)被活化。H.Zhao等，Mol.Cell Biol.，21，4129(2001)；Q.Liu等，Genes Dev.，14，1448(2000)。CHK1的SATR依賴性磷酸化促進(jìn)它的Cdc25和Wee1的磷酸化作用并最終使Cdc2失活。因此，CHK1對(duì)Cdc25c的磷酸化將其靶向到向胞質(zhì)的核輸出，其結(jié)果是使Cdc25c磷酸酶無法通過去磷酸化而活化Cdc2。Y.Sanchez等，Science，277，1497(1997)；C.Y.Peng等，Science，277，1501(1997)；T.A.Chen等，Nature，401，616(1999)；和A.Lopez-Girona等，Nature，397，172(1999)。此外，CHK1活化了蛋白激酶Wee1，后者使Cdc2磷酸化并失活。J.Lee等，Mol.Biol.Cell，12，551(2001)；L.L.Parker等，Science，257，1955(1992)。這兩個(gè)途徑匯合導(dǎo)致細(xì)胞周期中止。由于腫瘤細(xì)胞可通過中止細(xì)胞周期這種潛在的機(jī)制腫瘤細(xì)胞可克服由于細(xì)胞毒劑造成的損傷，用新的治療劑來廢除這些關(guān)卡點(diǎn)應(yīng)該可增強(qiáng)腫瘤對(duì)化療劑的敏感性。這兩個(gè)關(guān)卡點(diǎn)的存在，以及在50％的癌中通過p53突變腫瘤特異性廢除其中之一，可被用于設(shè)計(jì)腫瘤選擇性藥劑。因此，在p53缺陷型的腫瘤中，G2/M中止的治療性抑制可使癌細(xì)胞無法進(jìn)行DNA損傷修復(fù)并導(dǎo)致其程序性死亡。正常的細(xì)胞含有野生型p53并保留一個(gè)完整的G1/S關(guān)卡點(diǎn)。因此這些細(xì)胞有機(jī)會(huì)改正DNA損傷并存活。一種廢除G2/M關(guān)卡點(diǎn)的化學(xué)敏化劑設(shè)計(jì)的方法是鑒別關(guān)鍵的G2/M調(diào)節(jié)激酶CHK1的抑制劑。
已知PAR-1(也稱為HDAK，一種極性調(diào)節(jié)劑)是Wnt-β-連環(huán)蛋白信號(hào)過程的調(diào)節(jié)物，這表明了兩個(gè)重要的發(fā)育途徑之間的聯(lián)系。參見Sun，T-Q.等，Nature Cell Biology，3，628-636(2001)。β-連環(huán)蛋白的一個(gè)重要功能，即它在細(xì)胞信號(hào)過程中的作用，多年前就被闡述。β-連環(huán)蛋白是果蠅區(qū)段極性(segment polarity)基因armadillo的脊椎動(dòng)物同系物，armadillo基因是Wingless/Wnt(Wg/Wnt)信號(hào)途徑的重要元件。Wingless是果蠅中的一種細(xì)胞-細(xì)胞信號(hào)，它可觸發(fā)許多關(guān)鍵的發(fā)育過程，Wnt是脊椎動(dòng)物同系物。在不存在來自外部的有絲分裂信號(hào)時(shí)，細(xì)胞β-連環(huán)蛋白隱蔽在其與腺瘤性結(jié)腸息肉病(APC)基因產(chǎn)物(即絲氨酸蘇氨酸糖元合酶激酶(GSK-3β)和結(jié)合蛋白軸蛋白(或同系傳導(dǎo)蛋白conductin))的復(fù)合物中，使游離β-聯(lián)蛋白可在遍在蛋白-蛋白酶體系統(tǒng)作用下發(fā)生磷酸化和降解。該復(fù)合物中蛋白質(zhì)的功能和蛋白質(zhì)之間的相互作用直到最近才清楚。軸蛋白(Axin)，最近被確定為該復(fù)合物的一種組分，在多蛋白結(jié)構(gòu)中作為支架蛋白。軸蛋白調(diào)節(jié)的復(fù)合物的形成對(duì)GSK-3β的活性和β-連環(huán)蛋白的磷酸化和降解起關(guān)鍵作用，因?yàn)镚SK-3β不直接結(jié)合β-聯(lián)蛋白而需要軸蛋白的存在，軸蛋白同時(shí)結(jié)合這兩種蛋白質(zhì)。這種復(fù)合物的形成可維持低水平的游離胞質(zhì)β-連環(huán)蛋白。殘余的連環(huán)蛋白通過與鈣粘著蛋白結(jié)合使細(xì)胞聚集在附著連接點(diǎn)和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架上。
當(dāng)有絲分裂信號(hào)通過Wnt途徑傳導(dǎo)時(shí)，通過將分泌的糖蛋白與Wg/Wnt家族結(jié)合使它們的膜受體發(fā)生卷曲，從而將導(dǎo)致散亂(dishevelled，Dsh)蛋白活化，該蛋白將向細(xì)胞膜集中?；罨腄sh負(fù)調(diào)節(jié)此蛋白質(zhì)復(fù)合物，使得它就不能再磷酸化β-連環(huán)蛋白，所以β-連環(huán)蛋白就不再降解。Wnt信號(hào)是如何精確地使β-換聯(lián)蛋白穩(wěn)定化還不清楚，但關(guān)鍵步驟可能是GSK-3β在Dsh的幫助下從軸蛋白分離。由于GSK-3β不再與軸蛋白結(jié)合，它就不能磷酸化β-連環(huán)蛋白，從而導(dǎo)致β-連環(huán)蛋白水平升高。另一種假想的模型是通過Dsh在Wnt信號(hào)過程上抑制GSK-3β活性，這將導(dǎo)致軸蛋白去磷酸化，其結(jié)果是與β-連環(huán)蛋白結(jié)合的效率降低。β-連環(huán)蛋白從磷酸化復(fù)合物和降解復(fù)合物中釋放將促進(jìn)β-連環(huán)蛋白的穩(wěn)定化和信號(hào)過程。產(chǎn)生的增加的游離胞質(zhì)β-連環(huán)蛋白然后進(jìn)入細(xì)胞核。這導(dǎo)致游離的胞質(zhì)β-連環(huán)蛋白增加，它易位到細(xì)胞核并直接結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子Lef和Tcf，從而激活基因表達(dá)。最近，這些轉(zhuǎn)錄因子的靶基因已被鑒定。它們被認(rèn)為參與抑制細(xì)胞程序的死亡和促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移，其中包括c-myc癌基因和細(xì)胞周期中的一種調(diào)節(jié)物細(xì)胞周期蛋白D1。
成熟哺乳動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性腫瘤被認(rèn)為是Wg/Wnt途徑增大的反映，至少在部分腫瘤中是這樣。PAR-1基因與細(xì)胞中Wg/Wnt活性水平和游離β-連環(huán)蛋白的產(chǎn)生有關(guān)。已知負(fù)調(diào)節(jié)Wg/Wnt可限制β-連環(huán)蛋白，這與抗細(xì)胞凋亡信號(hào)發(fā)生有關(guān)。能夠抑制PAR-1的小分子抑制劑已顯示在癌細(xì)胞系中是有效的。監(jiān)測(cè)PAR-1(HDAK)抑制的篩選顯示了Wnt活性的有效降低，在基于細(xì)胞的測(cè)定中的EC50值小于10μM。因此，仍然需要能夠抑制Wg/Wnt信號(hào)過程和β-連環(huán)蛋白產(chǎn)生的PAR-1的小分子抑制劑，以通過刺激細(xì)胞凋亡來減慢腫瘤細(xì)胞系和腫瘤生長(zhǎng)。
WO 01/29025、WO 01/62251和WO 01/62252最近公開了各種吲哚基取代的化合物，且WO 01/28993最近公開了各種苯并咪唑基化合物。據(jù)報(bào)道，這些化合物能夠抑制、調(diào)節(jié)和/或調(diào)控受體類型和非受體酪氨酸激酶的信號(hào)傳導(dǎo)。一些公開的化合物含有與吲哚基或苯并咪唑基結(jié)合的喹諾酮片段。
合成4-羥基喹諾酮和4-羥基喹啉衍生物的方法公開于許多參考資料中，出于所有目的，它們已被全文參考，這就好像在這里完整列出一樣。例如，Ukrainets等公開了3-(苯并咪唑-2-基)-4-羥基-2-氧代-1，2-二氫喹啉的合成。Ukrainets，I.等，Tet.Lett.42，7747-7748(1995)；Ukrainets，I.等，Khimiya Geterotsiklicheskikh Soedinii，2，239-241(1992)。Ukrainets也公開了合成具有抗驚厥和抗甲狀腺活性的其它4-羥基喹諾酮和硫代類似物如1H-2-氧代-3-(2-苯并咪唑基)-4-羥基喹啉的方法。Ukrainets，I.等，Khimiya Geterotsiklicheskikh Soedinii，1，105-108(1993)；Ukrainets，I.等，KhimiyaGeterotsiklicheskikh Soedinii，8，1105-1108(1993)；Ukrainets，I.等，Chem.HeterocyclicComp.33，600-604，(1997)。
合成各種喹啉衍生物的方法公開在WO 97/48694。其中揭示這些化合物能夠結(jié)合核激素受體并可被用于刺激成骨細(xì)胞增殖和骨骼生長(zhǎng)。其中還揭示這些化合物可被用于治療或預(yù)防與核激素受體家族有關(guān)的疾病。
WO 92/18483公開了各種苯環(huán)被硫基取代的喹啉衍生物。其中揭示這些化合物可用于藥物制劑并被用作藥物。
已公開喹諾酮和香豆素衍生物在許多與藥物和藥物制劑無關(guān)的方面都有應(yīng)用。一些參考資料描述了用于可光聚合組合物或具有發(fā)光特性的喹諾酮衍生物的制備方法，其中包括Okamoto等的美國(guó)專利No.5,801,212；JP 8-29973；JP 7-43896；JP 6-9952；JP 63-258903；EP 797376和DE 23 63 459，出于所有目的，它們已被全文參考，這就好像在這里完整列出一樣。
美國(guó)專利申請(qǐng)No.09/951,265和WO 02/22598(2002/03/21出版)，美國(guó)專利申請(qǐng)No.09/943,382和WO 02/18383(2002/03/07出版)和已公開的美國(guó)專利申請(qǐng)No.10/116,117(2003/02/06出版，US 20030028018 A1)公開了各種可用于抑制血管發(fā)生和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶的喹諾酮苯并咪唑化合物，出于所有目的，它們已被全文參考，這就好像在這里完整列出一樣。
本申請(qǐng)要求了以下文件的優(yōu)先權(quán)，出于所有目的，它們已被全文參考，這就好像在這里完整列出一樣U.S.S.N.60/405,729，提交于2002/08/23；U.S.S.N.60/426,107，提交于2002/11/13；U.S.S.N.60/426,226，提交于2002/11/13；U.S.S.N.60/426,282，提交于2002/11/13；U.S.S.N.60/428,210，提交于2002/11/21；U.S.S.N.60/460,327，提交于2003/04/03；U.S.S.N.60/460,328，提交于2003/04/03；U.S.S.N.60/460,493，提交于2003/04/03；U.S.S.N.60/478,916，提交于2003/06/16；和U.S.S.N.60/484,048，提交于2003/07/01。
對(duì)下述化合物及含有所述化合物的藥物制劑和藥物的需求持續(xù)存在可抑制毛細(xì)血管增殖、抑制腫瘤生長(zhǎng)、治療癌癥、治療糖尿病、刺激胰島素依賴性過程、治療阿耳茨海默病、治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、延長(zhǎng)免疫應(yīng)答、減少中心體分裂、阻斷DNA修復(fù)、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期中止行為、和/或抑制例如FLT-1(VEGFR1)、VEGFR2(KDR、Flk-1)、VEGFR3、FGFR1、GSK-3、Cdk2、Cdk4、MEK1、CHK2、CK1ε、Raf、c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、FLT-3、NEK-2、CHK1、Rsk2、PAR-1、Cdc2、Fyn、Lck、Tie-2、PDGFRα和PDGFRβ等酶的化合物。同樣還存在對(duì)于給予有此需要的患者或受試者施用所述化合物、藥物制劑和藥物的方法的需求。
發(fā)明概述
本發(fā)明提供了抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3和治療由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀的方法。本發(fā)明還提供了化合物在制備用于抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3和用于治療由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀的藥物中的應(yīng)用。
一方面，本發(fā)明提供了在對(duì)象中抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3的方法和/或在對(duì)象中治療由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀的方法。所述方法包括給予對(duì)象結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物。給藥后，對(duì)象體內(nèi)的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3被抑制。本發(fā)明還提供了結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物在制備用于在對(duì)象內(nèi)抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3和/或在對(duì)象內(nèi)治療由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀的藥物中的應(yīng)用。
結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式
其中，
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S-雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-芳基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基，C(＝O)-O-芳基、-C(＝O)-O-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R4選自-H和取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基；
R5和R8獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、-NH2、或取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基；和
R10是-H。
一些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳。
一些實(shí)施方案中，R9是H。
一些實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的環(huán)烷基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的雜環(huán)氧基、或取代或未取代的雜環(huán)基烷氧基。一些這樣的實(shí)施方案中，R1是-F。
一些實(shí)施方案中，R2選自-H、-Cl、-F、-Br、-I、-NO2、-CN、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的噻吩基、取代或未取代的1、2、3、6-四氫吡啶基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的直鏈或支鏈烷氧基、取代或未取代的吡啶烷氧基、取代或未取代的二烷基氨基、或-CO2H。一些這樣的實(shí)施方案中，R2是-H。
一些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、甲氧基，或二甲基氨基。一些這樣的實(shí)施方案中，R3是-H。
一些實(shí)施方案中，R4是H。
一些實(shí)施方案中，R5是H，R8是H。
一些實(shí)施方案中，至少R6或R7之一是取代或未取代的雜環(huán)基。一些這樣的實(shí)施方案中，R6或R7之一是取代或未取代的雜環(huán)基，且所述雜環(huán)基選自嗎啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷、硫代嗎啉、高哌嗪(homopiperazine)、四氫噻吩、四氫呋喃、或四氫吡喃。在其它這樣的實(shí)施方案中，R6或R7之一選自取代或未取代的嗎啉基，或取代或未取代的哌嗪基。在其它這樣的實(shí)施方案中，R6或R7之一是N-烷基取代的哌嗪，如N-甲基哌嗪。再在其它這樣的實(shí)施方案中，R6或R7之一是N-烷基取代的哌嗪，而R6或R7中的另一個(gè)是H，且R5和R8都是H。
一些實(shí)施方案中，所述生物癥狀是多發(fā)性骨髓瘤，且所述對(duì)象是具有t(4；14)染色體易位的多發(fā)性骨髓瘤患者。
一些實(shí)施方案中，所述生物癥狀是多發(fā)性骨髓瘤，所述對(duì)象是多發(fā)性骨髓瘤患者，且所述多發(fā)性骨髓瘤表達(dá)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3。
一些實(shí)施方案中，所述對(duì)象是具有多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的多發(fā)性骨髓瘤患者，且在給予該對(duì)象結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物后在所述多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡。一些實(shí)施方案中，結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物被用來制備用于在多發(fā)性骨髓瘤患者的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡的藥物。
一些實(shí)施方案中，所述對(duì)象是多發(fā)性骨髓瘤患者，且在給予該對(duì)象結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物后所述對(duì)象中的溶骨性骨流失被降低。一些實(shí)施方案中，結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物被用來制備用于在多發(fā)性骨髓瘤患者中降低溶骨性骨流失的藥物。
一些實(shí)施方案中，所述對(duì)象是多發(fā)性骨髓瘤患者，且所述方法還包括在給予結(jié)構(gòu)I的化合物之前、期間或之后給予該對(duì)象地塞米松。
一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了含有結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物以及地塞米松的組合物。
一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了含有結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物以及地塞米松的治療組合物，作為同時(shí)、單獨(dú)或順序使用的聯(lián)合制劑以在對(duì)象內(nèi)抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3和/或在對(duì)象內(nèi)治療由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀。一些這樣的實(shí)施方案中，結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物以及地塞米松作為單一組合物提供，而在其它實(shí)施方案中，該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物以及地塞米松作為試劑盒的一部分分別提供。
一些實(shí)施方案中，結(jié)構(gòu)I的化合物或其互變體的乳酸鹽被給予對(duì)象和/或用來制造藥物。
一些實(shí)施方案中，結(jié)構(gòu)I的化合物具有以下結(jié)構(gòu)式
本發(fā)明還提供了結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽以及它們的混合物在抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3或用于治療諸如多發(fā)性骨髓瘤等由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽以及它們的混合物在制備和制造用于抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3或用于治療任何由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀的藥物中的應(yīng)用。一些實(shí)施方案中，該化合物可用來制備裝在容器內(nèi)的藥物，所述容器如小瓶、安瓿瓶或其它藥物制劑儲(chǔ)存設(shè)備，且這種儲(chǔ)存設(shè)備還可包括標(biāo)簽，標(biāo)簽上可包括用藥說明，如抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3的說明或治療具有由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀的對(duì)象的說明。
通過以下詳細(xì)描述將顯見本發(fā)明的其它目的、特征和優(yōu)點(diǎn)。
附圖簡(jiǎn)述


圖1所示是nu/nu小鼠KM12L4a結(jié)腸腫瘤模型中，存在4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)的抑制。
圖2所示是體內(nèi)基質(zhì)膠血管發(fā)生模型中，存在4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，血管發(fā)生的抑制。
圖3所示是SCID小鼠PC3人前列腺腫瘤模型中，存在間歇給予的4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)的抑制。
圖4所示是存在4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)的抑制。
圖5所示是nu/nu小鼠KM12L4a結(jié)腸腫瘤模型中，存在與伊立替康聯(lián)用的10mg/kg/d 4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)的抑制。
圖6所示是nu/nu小鼠KM12L4a結(jié)腸腫瘤模型中，存在與伊立替康聯(lián)用的50mg/kg/d 4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)的抑制。
圖7所示是erbB2過表達(dá)卵巢腫瘤模型SKOV3ip1中，存在與曲妥單抗(trastuzumab)聯(lián)用的50mg/kg/d 4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)的抑制。
圖8所示是A431表皮樣腫瘤模型中，存在與ZD1839聯(lián)用的50mg/kg/d 4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)的抑制。
圖9A和9B是存在4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，VEGF介導(dǎo)的HUVEC遷移和VEGF介導(dǎo)的血管形成抑制的圖示。
圖10所示是存在4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞從大鼠主動(dòng)脈環(huán)出芽的抑制。
圖11所示是SCID-NOD小鼠MV4-11(FLT-3 ITD突變)腫瘤模型中，存在10、30和70mg/kg/d 4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)的抑制圖示。
圖12所示是SCID-NOD小鼠MV4-11(FLT-3 ITD突變)腫瘤模型中，存在30mg/kg/d 4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，從不同腫瘤大小(300、500、1000mm3)開始的腫瘤生長(zhǎng)的抑制。
圖13所示是SCID-NOD小鼠MV4-11(FLT-3 ITD突變)腫瘤模型中，存在30mg/kg/d 4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)的抑制，該化合物以每天給藥、隔天給藥或給藥7天/停藥7天的方案施用。
圖14所示是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮對(duì)包括KMS11、OPM-2和H929在內(nèi)的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系增殖的抑制。
圖15的western印跡顯示4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮在0.5μM時(shí)在KMS11細(xì)胞中抑制FGFR3磷酸化。
圖16A、16B和16C的western印跡顯示4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮在0.5μM時(shí)在KMS11細(xì)胞中抑制ERK磷酸化(圖16A)、在0.1μM時(shí)在OPM-2細(xì)胞中抑制ERK磷酸化(圖16B)，且在高達(dá)5μM時(shí)在H929細(xì)胞中對(duì)ERK磷酸化無影響(圖16C)。
圖17所示是當(dāng)將KMS11細(xì)胞與各種濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮一起孵育時(shí)通過AnnexinVPE染色測(cè)得的該細(xì)胞的凋亡。
圖18所示是當(dāng)將4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮與KMS11細(xì)胞一起孵育72小時(shí)時(shí)，它對(duì)該細(xì)胞細(xì)胞周期的影響最小，但誘導(dǎo)凋亡。
圖19所示是當(dāng)將OPM-2細(xì)胞與各種濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮一起孵育時(shí)通過AnnexinVPE染色測(cè)得的該細(xì)胞的凋亡。
圖20所示是當(dāng)將4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮與OPM-2細(xì)胞一起孵育72小時(shí)時(shí)它對(duì)該細(xì)胞細(xì)胞周期的影響最小，但誘導(dǎo)凋亡。
圖21所示是當(dāng)將4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮與H929細(xì)胞一起孵育時(shí)它對(duì)該細(xì)胞細(xì)胞周期的影響最小或無影響。
圖22所示是當(dāng)將小鼠成髓細(xì)胞細(xì)胞系M-NFS-60與4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮一起孵育時(shí)M-CSF介導(dǎo)的小鼠成髓細(xì)胞細(xì)胞系M-NFS-60增殖的抑制(EC50為220nM)。
圖23所示是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮對(duì)表達(dá)FGFR3的B9細(xì)胞生存力的抑制，但不抑制親代白細(xì)胞介素-6(IL6)興奮細(xì)胞的生存力。該值表示為四次獨(dú)立試驗(yàn)的平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)差。
圖24所示是用膜聯(lián)蛋白V結(jié)合和碘化丙錠排除的流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)評(píng)價(jià)的各種人骨髓瘤細(xì)胞系的凋亡。KMS11、KMS18、OPM2、H929和8226細(xì)胞與載體(非陰影柱)；與100nM(陰影柱)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；以及與500nM(陰影線柱)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮一起孵育。該值表示為四次獨(dú)立試驗(yàn)的平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)差。
圖25A-25D所示是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮在表達(dá)FGFR3的原發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中對(duì)FGF-介導(dǎo)的ERK1/2磷酸化的抑制及對(duì)細(xì)胞毒性的誘導(dǎo)。圖25A所示的圖是用流式細(xì)胞術(shù)獲得的，細(xì)胞用FGFR3抗體(空白)或兔免疫前血清(填充)染色然后用山羊抗兔FITC染色。骨髓瘤細(xì)胞通過CD138標(biāo)記鑒定。圖25B所示的圖是用原發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)獲得的，細(xì)胞在不存在(填充)或存在aFGF(--)時(shí)孵育，或與500nM 4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮預(yù)孵育2小時(shí)然后用aFGF刺激。ERK1/2的磷酸化用流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估。圖25C和25D所示的圖是通過流式細(xì)胞術(shù)獲得的，將原發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞在存在DMSO(圖25C)或500nM 4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮(圖25D)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。7天后收獲細(xì)胞并用膜聯(lián)蛋白V-FITC染色，然后通過流式細(xì)胞術(shù)分析。骨髓瘤細(xì)胞通過CD38++/CD45-標(biāo)記鑒定。CD38++/CD45-/膜聯(lián)蛋白V+細(xì)胞的總百分比顯示在右上象限中。
圖26A和26B所示是在存在白細(xì)胞介素-6(IL6)、胰島素生長(zhǎng)因子(IGF-1)和骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSC)時(shí)，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮對(duì)KMS11細(xì)胞生存力的抑制。圖26A中，KMS11細(xì)胞在存在或不存在50ng/mL IL6或50ng/mL IGF-1時(shí)，與DMSO(非陰影柱)；與100nM(陰影柱)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；以及與500nM(陰影線柱)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮一起培養(yǎng)。在48小時(shí)后通過MTT測(cè)定法評(píng)估細(xì)胞生存力。圖26B中，將BMSC單獨(dú)或與KMS11一起與DMSO(非陰影柱)；與100nM(陰影柱)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；以及與500nM(陰影線柱)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮一起培養(yǎng)。在96小時(shí)后通過MTT測(cè)定法評(píng)估生存力。數(shù)據(jù)表示為四次培養(yǎng)的平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)差。
圖27所示是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮對(duì)M-NFS-60(一種M-CSF生長(zhǎng)驅(qū)動(dòng)小鼠成髓細(xì)胞細(xì)胞系)增殖的抑制，其EC50為220nM。M-NSF-60細(xì)胞在存在M-CSF和不存在GM-CSF時(shí)與連續(xù)稀釋的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮一起孵育。在72小時(shí)后用Cell Titer-GioTM測(cè)定法評(píng)估存活細(xì)胞的數(shù)目。
圖28所示是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮對(duì)FGFR3磷酸化的抑制，并證實(shí)了體內(nèi)的抗腫瘤效應(yīng)。當(dāng)腫瘤大小達(dá)到200mm3時(shí)將小鼠隨機(jī)分組(8-10只/組)，通過經(jīng)口管飼接受單獨(dú)的載體或不同劑量的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮21天。該圖顯示了腫瘤體積(平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)差)與治療天數(shù)的函數(shù)關(guān)系。
圖29顯示的是式I的化合物對(duì)KM12L4a腫瘤的抑制。
圖30顯示了在KM12L4a荷瘤小鼠中Cmax和AUC值與KML12L4a腫瘤生長(zhǎng)抑制百分比的關(guān)系。
發(fā)明詳述
本發(fā)明涉及新的一類作為絲氨酸/蘇氨酸激酶和酪氨酸激酶抑制劑的化合物，包括GSK-3、Cdk2、Cdk4、MEK1、NEK-2、CHK2、CK1ε、Raf、CHK1、Rsk2、PAR-1、Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、FLT-3、Fyn、Lck和Tie-2的抑制劑。本發(fā)明還涉及用于這些方法的化合物。這些化合物可被制成用于治療需要這種抑制劑的患者(例如那些患有癌癥的患者)的藥物制劑。這里所述的化合物還可用來在人類和細(xì)胞受試者中降低毛細(xì)血管增生以及治療癌癥和其它醫(yī)學(xué)病癥或細(xì)胞病癥。
在本申請(qǐng)的全文中使用了下列縮寫和定義
“ALS”是肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化的縮寫。
“AD”是阿爾茨海默氏病的縮寫。
“APP”是淀粉樣蛋白前體的縮寫。
“bFGF”是堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的縮寫。
“FGFR1”，也稱為bFGFR，是與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子FGF相互作用的酪氨酸激酶的縮寫。
“Cdc2”是細(xì)胞分裂周期蛋白2的縮寫。
“Cdk2”是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2的縮寫。
“Cdk4”是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4的縮寫。
“Chk1”是關(guān)卡激酶1的縮寫。
“CK1ε”是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，代表了酪蛋白激酶1(ε)。
“c-ABL”是一種酪氨酸激酶的縮寫，代表了一種通常從艾貝爾遜(氏)白血病病毒分離的癌基因產(chǎn)物。
“C-Kit”也稱為干細(xì)胞因子受體或肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體。
“FGF”是與FGFR1相互作用的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的縮寫。
“FGFR3”是通常在多發(fā)性骨髓瘤型癌中表達(dá)的酪氨酸激酶成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3的縮寫。
“Flk-1”是胚胎肝酪氨酸激酶1的縮寫，該酶也稱為激酶插入域酪氨酸激酶或KDR(人)，還稱為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-2或VEGFR2(KDR(人)、Flk-1(小鼠))。
“FLT-1”是fms樣酪氨酸激酶-1的縮寫，該酶也稱為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-1或VEGFR1。
“FLT-3”是fms樣酪氨酸激酶-3的縮寫，該酶也稱為干細(xì)胞酪氨酸激酶I(STK I)。
“FLT-4”是fms樣酪氨酸激酶-4的縮寫，該酶也稱為VEGFR3。
“Fyn”是與SRC、FGR、YES相關(guān)的FYN癌基因激酶的縮寫。
“GSK-3”是糖元合酶激酶3的縮寫。
“p60src”是最初被鑒定為勞斯肉瘤病毒的v-src癌基因的酪氨酸激酶。
“PAR-1”是一種激酶的縮寫，也稱為散亂相關(guān)激酶，也稱為HDAK。
“Lck”是淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪氨酸激酶的縮寫。
“MEK1”是MAPK(促分裂原活化蛋白激酶)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的絲氨酸蘇氨酸激酶的縮寫，該信號(hào)傳導(dǎo)途徑是一種由Raf-MEK1-ERK形成的模式。MEK1磷酸化ERK(胞外調(diào)節(jié)激酶)。
“MS”是多發(fā)性硬化的縮寫。
“NEK-2”是NIM-A相關(guān)激酶的縮寫。
“NIM-A”是從未發(fā)生有絲分裂(never in mitosis)的縮寫。
“PDGF”是血小板衍生生長(zhǎng)因子的縮寫。PDGF與酪氨酸激酶PDGFRα和PDGFRβ相互作用。
“PHF”是配對(duì)螺旋絲(helical filament)的縮寫。
“PS1”是早老蛋白(presenelin)1的縮寫。
“Rsk2”是核糖體S6激酶2的縮寫。
“Raf”是一種MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的絲氨酸/蘇氨酸激酶。
“RTK”是受體酪氨酸激酶的縮寫。
“Tie-2”是含有Ig和EGF同源結(jié)構(gòu)域的酪氨酸激酶的縮寫。
“VEGF”是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的縮寫。
“VEGF-RTK”是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶的縮寫。
通常，當(dāng)提到某些元素如氫或H時(shí)意味著包括該元素的所有同位素。例如，如果R基團(tuán)被定義為包括氫或H，則它還包括氘和氚。
術(shù)語“未取代的烷基”是指不含雜原子的烷基。因此，該術(shù)語包括直鏈烷基如甲基，乙基，丙基，丁基，戊基，己基，庚基，辛基，壬基，癸基，十一烷基，十二烷基等。該術(shù)語還包括直鏈烷基的支鏈異構(gòu)體，包括但不限于以下例舉的這些-CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH(CH2CH3)2、-C(CH3)3、-C(CH2CH3)3、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH(CH2CH3)2、-CH2C(CH3)3、-CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH2CH3)2、-CH2CH2C(CH3)3、-CH2CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH(CH3)CH(CH3)2、-CH(CH2CH3)CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)等等。該術(shù)語還包括環(huán)烷基，如環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基和環(huán)辛基以及被上述直鏈和支鏈烷基取代的這些環(huán)。該術(shù)語還包括多環(huán)烷基如，但不限于，金剛烷基、降冰片基和二環(huán)[2.2.2]辛基以及被上述直鏈和支鏈烷基取代的這些環(huán)。因此，術(shù)語“未取代的烷基”包括伯烷基、仲烷基和叔烷基。未取代的烷基可以與母體化合物中的一個(gè)或多個(gè)碳原子、氧原子、氮原子和/或硫原子連接。優(yōu)選的未取代的烷基包括有1-20個(gè)碳原子的直鏈和支鏈烷基和環(huán)烷基。更優(yōu)選的這種未取代的烷基含有1-10個(gè)碳原子，再優(yōu)選的這種基團(tuán)含有1-5個(gè)碳原子。最優(yōu)選的未取代的烷基包括含有1-3個(gè)碳原子的直鏈和支鏈烷基，其中包括甲基，乙基，丙基和-CH(CH3)2。
術(shù)語“取代的烷基”是指其中一個(gè)或多個(gè)與碳或氫的鍵被與非氫和非碳原子的鍵取代的如上面定義的未取代的烷基，非氫和非碳原子如，但不限于鹵素原子，例如F、Cl、Br和I；和羥基、烷氧基、芳氧基和酯基等基團(tuán)中的氧原子；硫醇基，烷基硫和芳基硫、砜基、磺?；蛠嗧炕然鶊F(tuán)中的硫原子；胺、酰胺、烷基胺，二烷基胺，芳胺，烷基芳胺，二芳基胺，N-氧化物，酰亞胺和烯胺等基團(tuán)中的氮原子；三烷基甲硅烷基、二烷基芳基甲硅烷基、烷基二芳基甲硅烷基和三芳基甲硅烷基等基團(tuán)中的硅原子；以及各種其它基團(tuán)中的雜原子。取代的烷基還包含一個(gè)或多個(gè)與碳或氫原子的鍵被與雜原子的鍵取代的基團(tuán)，所述雜原子如羰基，羧基和酯基中的氧；亞胺、肟、腙和腈等基團(tuán)中的氮。優(yōu)選的取代的烷基中包括其中一個(gè)或多個(gè)與碳或氫原子的鍵被一個(gè)或多個(gè)與氟原子的鍵取代的烷基。取代的烷基的一個(gè)例子是三氟甲基和其它含有三氟甲基基團(tuán)的烷基。其它烷基包括那些其中一個(gè)或多個(gè)與碳或氫原子的鍵被與氧原子的鍵取代的基團(tuán)，這樣所述取代的烷基含有羥基，烷氧基，芳氧基或雜環(huán)基氧基。再有其它的烷基包括含有胺、烷基胺、二烷基胺、芳胺、(烷基)(芳基)胺，二芳基胺，雜環(huán)基胺，(烷基)(雜環(huán)基)胺，(芳基)(雜環(huán)基)胺或二雜環(huán)基胺的烷基。
術(shù)語“未取代的芳基”是指不含雜原子的芳基。該術(shù)語包括但不限于，例如苯基，聯(lián)苯基，蒽基，萘次甲基。盡管術(shù)語“未取代的芳基”包括含有稠環(huán)的基團(tuán)，如萘，但它不包括有如連接到一個(gè)環(huán)原子上的烷基或鹵代基團(tuán)的其他基團(tuán)的芳基，如甲苯基之類的芳基在這里被認(rèn)為是如下所述的取代的芳基。優(yōu)選的未取代的芳基是苯基。然而，未取代的芳基可以連接到母體化合物的一個(gè)或多個(gè)碳原子、氧原子、氮原子和/或硫原子上。
術(shù)語“取代的芳基”相對(duì)于未取代的芳基的含義與取代的烷基相對(duì)于未取代的烷基的含義相同。但是，取代的芳基還包括其中一個(gè)芳族碳原子連接到上述一個(gè)非碳或非氫原子的芳基，還包括其中一個(gè)或多個(gè)芳族碳原子連接到上述取代和/或未取代的烷基、烯基或炔基的芳基。這包括以下連接類型芳基的兩個(gè)碳原子與烷基，烯基或炔基的兩個(gè)原子連接，構(gòu)成稠環(huán)體系(例如二氫萘基或四氫萘基)。因此，術(shù)語“取代的芳基”包括但不限于甲苯基和羥苯基。
術(shù)語“未取代的烯基”是指直鏈和支鏈以及環(huán)狀基團(tuán)，如對(duì)上面定義的未取代的烷基的所述的那些基團(tuán)，除了至少在兩個(gè)碳原子之間有一個(gè)雙鍵。例子包括但不限于乙烯基、-CH＝C(H)(CH3)、-CH＝C(CH3)2、-C(CH3)＝C(H)2、-C(CH3)＝C(H)(CH3)、-C(CH2CH3)＝CH2，環(huán)己烯基，環(huán)戊烯基，環(huán)己二烯基，丁二烯基，戊二烯基和己二烯基。
術(shù)語“取代的烯基”相對(duì)于未取代的烯基的含義與取代的烷基相對(duì)于未取代的烷基的含義相同。取代的烯基包括其中非碳或非氫原子與雙鍵連接到另一個(gè)碳原子上的碳連接的烯基，以及那些其中未與其它碳原子雙鍵連接的碳上連接有一個(gè)非碳或非氫原子的烯基。
術(shù)語“未取代的炔基”是指直鏈和支鏈基團(tuán)，如對(duì)上面定義的未取代的烷基的所述的那些，除了至少在兩個(gè)碳原子之間有一個(gè)三鍵。例子包括但不限于-C≡C(H)、-C≡C(CH3)、-C≡C(CH2CH3)、-C(H2)C≡C(H)、-C(H)2C≡C(CH3)和-C(H)2C≡C(CH2CH3)。
術(shù)語“取代的炔基”相對(duì)于未取代的炔基的含義與取代的烷基相對(duì)于未取代的烷基的含義相同。取代的炔基包括其中非碳或非氫原子與三鍵連接到其它碳原子上的碳連接的炔基，以及那些其中未與其它碳原子三鍵連接的碳上連接有一個(gè)非碳或非氫原子的炔基。
術(shù)語“未取代的芳烷基”是指其中未取代的烷基的氫或碳鍵被連接到上面定義的芳基的鍵代替的如上定義的未取代的烷基。例如，甲基(-CH3)是未取代的烷基。如果甲基的氫原子被與苯基的鍵代替，例如如果甲基的碳原子連接到苯基的碳原子，則該化合物是未取代的芳烷基(即芐基)。因此該術(shù)語包括但不限于芐基、聯(lián)苯基甲基和1-苯基乙基(-CH(C6H5)(CH3))等基團(tuán)。
術(shù)語“取代的芳烷基”相對(duì)于未取代的芳烷基的含義與取代的芳基相對(duì)于未取代的芳基的含義相同。然而，取代的芳烷基還包括基團(tuán)的烷基部分的碳或氫鍵被與非碳或非氫原子的鍵代替的基團(tuán)。取代的芳烷基的例子包括但不限于-CH2C(＝O)(C6H5)和-CH2(2-甲基苯基)。
術(shù)語“未取代的雜環(huán)基”是指芳族和非芳族環(huán)化合物，包括單環(huán)、二環(huán)和多環(huán)化合物，例如但不限于，奎寧環(huán)基，含有3個(gè)或多個(gè)環(huán)原子，其中的一個(gè)或多個(gè)是雜原子，例如但不限于，N，O和S。盡管術(shù)語“未取代的雜環(huán)基”包括稠合雜環(huán)如苯并咪唑基，但它不包括含有如連接到一個(gè)環(huán)原子的烷基或鹵代基團(tuán)的其他基團(tuán)的雜環(huán)基，如2-甲基苯并咪唑基是取代的雜環(huán)基。雜環(huán)基的例子包括但不限于含有1-4個(gè)氮原子的不飽和3-8元環(huán)，例如但不限于吡咯基，吡咯啉基，咪唑基，吡唑基，吡啶基、二氫吡啶基，嘧啶基，吡嗪基，噠嗪基，三唑基(例如4H-1，2，4-三唑基，1H-1，2，3-三唑基，2H-1，2，3-三唑基等)，四唑基，(例如1H-四唑基，2H四唑基等)；含有1-4個(gè)氮原子的飽和3-8元環(huán)，例如，但不限于，吡咯烷基，咪唑烷基，哌啶基，哌嗪基；含有1-4個(gè)氮原子的稠合的不飽和雜環(huán)基，例如但不限于，吲哚基，異吲哚基、二氫吲哚基，中氮茚基，苯并咪唑基，喹啉基，異喹啉基，吲唑基，苯并三唑基；含有1-2個(gè)氧原子和1-3個(gè)氮原子的不飽和3-8元環(huán)，例如但不限于，唑基，異唑基，
二唑基(例如1，2，4-二唑基，1，3，4-二唑基，1，2，5-二唑基等)；含有1-2個(gè)氧原子和1-3個(gè)氮原子的飽和3-8元環(huán)，例如但不限于，嗎啉基；含有1-2個(gè)氧原子和1-3個(gè)氮原子的不飽和稠合雜環(huán)基，例如，苯并唑基，苯并二唑基，苯并嗪基(例如2H-1，4-苯并嗪基等)；含有1-3個(gè)硫原子和1-3個(gè)氮原子的不飽和3-8元環(huán)，例如，但不限于，噻唑基，異噻唑基，噻二唑基(例如1，2，3-噻二唑基，1，2，4-噻二唑基，1，3，4-噻二唑基，1，2，5-噻二唑基等)；含有1-2個(gè)硫原子和1-3個(gè)氮原子的飽和3-8元環(huán)，例如但不限于，噻唑烷基(thiazolodinyl)；含有1-2個(gè)硫原子的飽和及不飽和3-8元環(huán)，例如但不限于，噻吩基、dihydrodithiinyl，二氫二亞硫?；?dihydrodithionyl)，四氫噻吩，四氫噻喃；含有1-2個(gè)硫原子和1-3個(gè)氮原子的不飽和稠合雜環(huán)，例如但不限于，苯并噻唑基，苯并噻二唑基，苯并噻嗪基(例如2H-1，4-苯并噻嗪基等)，二氫苯并噻嗪基(例如2H-3，4-二氫苯并噻嗪基等)，含有氧原子的不飽和的3-8元環(huán)，例如但不限于呋喃基；含有1-2個(gè)氧原子的不飽和稠合雜環(huán)，如苯并二氧雜環(huán)戊烯基(benzodioxolyl)(例如1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基(1，3-benzodioxoyl)等)；含有一個(gè)氧原子和1-2個(gè)硫原子的不飽和3-8元環(huán)，例如但不限于，二氫氧硫雜環(huán)己二烯基；含有1-2個(gè)氧原子和1-2個(gè)硫原子的飽和3-8元環(huán)，如1，4-氧硫雜環(huán)己烷；含有1-2個(gè)硫原子的不飽和稠環(huán)，如苯并噻吩基，苯并二硫雜環(huán)己二烯基(benzodithiinyl)；和含有一個(gè)氧原子和1-2個(gè)氧原子的不飽和稠合雜環(huán)，如苯并氧硫雜環(huán)己二烯基(benzoxathiinyl)。雜環(huán)基還包括上述那些基團(tuán)，但環(huán)中的一個(gè)或多個(gè)S原子雙鍵連接到一個(gè)或多個(gè)氧原子(亞砜和砜)。例如，雜環(huán)基包括四氫噻吩氧化物和四氫噻吩1，1-二氧化物。優(yōu)選的雜環(huán)基含有5或6個(gè)環(huán)原子。更優(yōu)選的雜環(huán)基包括嗎啉，哌嗪，哌啶，吡咯烷，咪唑，吡唑，1，2，3-三唑，1，2，4-三唑，四唑，噻吩、硫代嗎啉，其中S原子連接到一個(gè)或多個(gè)O原子的硫代嗎啉，吡咯，高哌嗪，唑烷-2-酮，吡咯烷-2-酮，唑，奎寧環(huán)，噻唑，異唑，呋喃和四氫呋喃。
術(shù)語“取代的雜環(huán)基”是指如上面定義的未取代的雜環(huán)基，但其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子連接到非氫原子，如上面對(duì)取代的烷基和取代的芳基所述的。例子包括但不限于，2-甲基苯并咪唑基、5-甲基苯并咪唑基、5-氯苯并噻唑基、N-烷基哌嗪基如1-甲基哌嗪基、哌嗪-N-氧化物、N-烷基哌嗪N-氧化物、2-苯氧基-噻吩和2-氯吡啶基等。此外，取代的雜環(huán)基還包括其中與非氫原子的鍵是與碳原子的鍵的雜環(huán)基，所述碳原子是取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基或未取代的雜環(huán)基的一部分。例子包括但不限于1-芐基哌啶基、3-苯基硫代嗎啉基、3-(吡咯烷-1-基)-吡咯烷基和4-(哌啶-1-基)-哌啶基?；鶊F(tuán)如N-烷基取代的哌嗪基，例如N-甲基哌嗪、取代的嗎啉基，和哌嗪N-氧化物基團(tuán)，例如哌嗪N-氧化物和N-烷基哌嗪N-氧化物，都是取代的雜環(huán)基的例子。基團(tuán)如取代的哌嗪基，例如N-烷基取代的哌嗪基，例如N-甲基哌嗪等，取代的嗎啉基，哌嗪N-氧化物基團(tuán)和N-烷基哌嗪N-氧化物基團(tuán)都是一些取代的雜環(huán)基的例子，這特別適合作為R6或R7基。
術(shù)語“未取代的雜環(huán)烷基(heterocyclylalkyl)”是指如上面定義的未取代的烷基，其中未取代的烷基的氫或碳鍵被與上述雜環(huán)基的鍵所取代。例如，甲基(-CH3)是未取代的烷基。如果甲基的氫原子被與雜環(huán)基的鍵取代，例如。如果甲基的碳原子連接到吡啶的碳2(一個(gè)連接到吡啶的N上的碳)上或吡啶的碳3或碳4上，則該化合物是未取代的雜環(huán)烷基。
術(shù)語“取代的雜環(huán)烷基”相對(duì)于未取代的雜環(huán)烷基的含義與取代的芳烷基相對(duì)于未取代的芳烷基的含義相同。然而，取代的雜環(huán)烷基還包括其中非氫原子連接到雜環(huán)烷基的雜環(huán)基的雜原子上(例如但不限于哌啶基烷基的哌啶環(huán)中的氮原子)的基團(tuán)。此外，取代的雜環(huán)烷基還包括基團(tuán)的烷基部分的碳鍵或氫鍵被和取代和未取代的芳基或取代和未取代的芳烷基的鍵取代的基團(tuán)。例子包括但不限于苯基-(哌啶-1-基)-甲基和苯基-(嗎啉-4-基)-甲基。
術(shù)語“未取代的烷基氨基烷基”是指如上面定義的未取代的烷基，其中的碳或氫鍵被與氮原子的鍵取代，所述氮原子連接到氫原子和上述未取代的烷基。例如，甲基(-CH3)是未取代的烷基。如果甲基的氫原子被連接到氫原子和乙基的氮原子的鍵取代，則所得化合物是-CH2-N(H)(CH2CH3)，這是未取代的烷基氨基烷基。
術(shù)語“取代的烷基氨基烷基”是指如上面定義的未取代的烷基氨基烷基，只是其中一個(gè)或多個(gè)與一個(gè)或兩個(gè)烷基中碳或氫原子的鍵被與非碳或非氫原子的鍵替代，如上文對(duì)取代的烷基的描述，但與所有烷基氨基烷基中氮原子的鍵自身不能證明(qualify)所有的烷基氨基烷基是被取代的。然而，取代的烷基氨基烷基包括連接到該基團(tuán)氮原子上的氫被非碳和非氫原子取代的基團(tuán)。
術(shù)語“未取代的二烷基氨基烷基”是指如上面定義的未取代的烷基，其中碳鍵或氫鍵被與氮原子的鍵取代，所述氮原子連接到其它兩個(gè)相同或不同的如上定義的未取代的烷基。
術(shù)語“取代的二烷基氨基烷基”是指如上定義的未取代的二烷基氨基烷基，其中一個(gè)或多個(gè)連接到一個(gè)或多個(gè)烷基中碳或氫原子的鍵被與非碳或非氫原子的鍵取代，如對(duì)取代的烷基的描述。所有二烷基氨基烷基中氮原子上的鍵自身不能證明所有的二烷基氨基烷基是被取代的。
術(shù)語“未取代的烷氧基”指羥基(-OH)，其中與氫原子的鍵被與上文定義的其它未取代的烷基的碳原子的鍵取代。
術(shù)語“取代的烷氧基”指羥基(-OH)，其中與氫原子的鍵被與上文定義的其它取代的烷基的碳原子的鍵取代。
術(shù)語“未取代的雜環(huán)氧基”指羥基(-OH)，其中與氫原子的鍵被與上文定義的其它未取代的雜環(huán)基的環(huán)原子的鍵取代。
術(shù)語“取代的雜環(huán)氧基”指羥基(-OH)，其中與氫原子的鍵被與上文定義的其它取代的雜環(huán)基的環(huán)原子的鍵取代。
術(shù)語“未取代的雜環(huán)氧基烷基”指上文定義的未取代的烷基，其中的碳鍵或氫鍵被與氧原子的鍵取代，所述氧原子連接到上文定義的未取代的雜環(huán)基。
術(shù)語“取代的雜環(huán)氧基烷基”指上文定義的未取代的雜環(huán)氧基烷基，其中與雜環(huán)氧基烷基的烷基部分的碳或氫的鍵被連接到上文在取代的烷基部分中所述的非碳和非氫原子，或者，其中所述雜環(huán)氧基烷基的雜環(huán)基是上文定義的取代的雜環(huán)基。
術(shù)語“未取代的雜環(huán)基烷氧基”指上文定義的未取代的烷基，其中的碳鍵或氫鍵被與連接到母體化合物的氧原子的鍵取代，且其中未取代的烷基的另一個(gè)碳鍵或氫鍵被連接到上文定義的未取代的雜環(huán)基。
術(shù)語“取代的雜環(huán)基烷氧基(heterocylylalkoxy)”指上文定義的未取代的雜環(huán)基烷氧基，其中與所述雜環(huán)基烷氧基的烷基部分的碳或氫的鍵被連接到上文在取代的烷基部分中所述的非碳和非氫原子，或者，其中所述雜環(huán)基烷氧基的雜環(huán)基是上文定義的取代的雜環(huán)基。此外，取代的雜環(huán)基烷氧基還包括以下基團(tuán)，其中連接到該基團(tuán)烷基部分的碳鍵或氫鍵可被一個(gè)或多個(gè)另外的取代和未取代的雜環(huán)所取代。例子包括但不限于吡啶-2-基嗎啉-4-基甲基和2-吡啶-3-基-2-嗎啉-4-基乙基。
術(shù)語“未取代的芳基氨基烷基”是指如上定義的未取代的烷基，其中碳鍵或氫鍵被與氮原子的鍵取代，所述氮原子連接到至少一個(gè)上述的未取代芳基。
術(shù)語“取代的芳基氨基烷基”是指如上定義的未取代的芳基氨基烷基，但是，芳基氨基烷基的烷基是上述取代的烷基，或者芳基氨基烷基的芳基是取代的芳基，但與所有芳基氨基烷基中氮原子的鍵自身不能證明所有的芳基氨基烷基是被取代的。然而，取代的芳基氨基烷基的確包括其中與該基團(tuán)的氮原子連接的氫被非碳和非氫原子取代的基團(tuán)。
術(shù)語“未取代的雜環(huán)基氨基烷基”是指如上定義的未取代的烷基，其中碳鍵或氫鍵被與氮原子的鍵取代，所述氮原子連接到至少一個(gè)上述的未取代雜環(huán)基。
術(shù)語“取代的雜環(huán)基氨基烷基”是指如上定義的未取代的雜環(huán)基氨基烷基，其中，雜環(huán)基是上述取代的雜環(huán)基和/或烷基是上述取代的烷基。與所有雜環(huán)基氨基烷基中氮原子的鍵自身不能證明所有的雜環(huán)基氨基烷基是被取代的。然而，取代的雜環(huán)基氨基烷基的確包括其中與該基團(tuán)的氮原子連接的氫被非碳和非氫原子取代的基團(tuán)。
術(shù)語“未取代的烷基氨基烷氧基”是指如上定義的未取代的烷基，其中碳鍵或氫鍵被與氧原子的鍵取代，所述氧原子連接母體化合物，且其中所述未取代的烷基的另一個(gè)碳或氫鍵連接到氮原子，所述氮原子連接到氫原子和如上定義的未取代的烷基。
術(shù)語“取代的烷基氨基烷氧基”是指如上定義的未取代的烷基氨基烷氧基，其中，與連接在母體化合物的氧原子連接的烷基的碳或氫原子的鍵被一個(gè)或多個(gè)與非碳和非氫原子的鍵取代，如以上對(duì)取代的烷基的描述，和/或如果連接到氨基的氫連接到非碳和非氫原子和/或如果連接到胺的氮的烷基連接到非碳和非氫原子，如以上對(duì)取代的烷基的描述。所有烷基氨基烷氧基基團(tuán)中出現(xiàn)的胺和烷氧基官能團(tuán)(functionality)自身不能證明所有這種基團(tuán)是取代的烷基氨基烷氧基。
術(shù)語“未取代的二烷基氨基烷氧基”是指如上定義的未取代的烷基，其中的碳或氫鍵被與氧原子的鍵取代，所述氧原子連接到母體化合物，且其中未取代的烷基的另一個(gè)碳或氫鍵連接到氮原子，所述氮原子連接兩個(gè)其它的相同或不同的如上定義的未取代的烷基。
術(shù)語“取代的二烷基氨基烷氧基”是指如上定義的未取代的二烷基氨基烷氧基，其中與連接在母體化合物的氧原子上的烷基的碳或氫原子的鍵被一個(gè)或多個(gè)與非碳和非氫原子的鍵取代，如以上對(duì)取代的烷基的描述，和/或如果一個(gè)或多個(gè)連接胺的氮的烷基連接到非碳和非氫原子，如以上對(duì)取代的烷基的描述。所有二烷基氨基烷氧基基團(tuán)中出現(xiàn)的胺和烷氧基官能團(tuán)自身不能證明所有這種基團(tuán)是取代的二烷基氨基烷氧基。
對(duì)羥基、胺和巰基的術(shù)語“被保護(hù)”是指用精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的保護(hù)基保護(hù)這些官能團(tuán)使其不參與不希望發(fā)生的反應(yīng)的形式，所述保護(hù)基列在，例如Protective Groups in Organic Synthesis，Greene，T.W.；Wuts，P.G.M.，John Wiley& Sons，New York，NY，(第三版，1999)，可以其中所述的方法加入或除去。被保護(hù)的羥基的例子包括但不限于甲硅烷醚，如將羥基和一種試劑反應(yīng)所得到的那些，所述試劑如，但不限于，叔丁基二甲基-氯硅烷，三甲基氯硅烷，三異丙基氯硅烷，三乙基氯硅烷；取代的甲基和乙基醚，例如，但不限于甲氧基甲基醚，甲硫基甲基醚，芐氧基甲基醚，叔丁氧基甲基醚，2-甲氧基乙氧基甲基醚，四氫吡喃基醚，1-乙氧基乙基醚，烯丙基醚，芐基醚；酯類，例如，但不限于，苯甲?；姿狨?，甲酸酯，乙酸酯，三氯乙酸酯和三氟乙酸酯。被保護(hù)的胺基的例子包括但不限于，酰胺類如，甲酰胺，乙酰胺，三氟乙酰胺和苯甲酰胺；酰亞胺類，如鄰苯二甲酰亞胺和二硫代琥珀酰亞胺等等。被保護(hù)的巰基的例子包括但不限于，硫醚類，如S-芐基硫醚和S-4-吡啶甲基硫醚；取代的S-甲基衍生物如半硫代、二硫代和氨基硫代乙縮醛等等。
“藥學(xué)上可接受的鹽”包括無機(jī)堿、有機(jī)堿、無機(jī)酸、有機(jī)酸、或堿性或酸性氨基酸的鹽。作為無機(jī)堿的鹽，本發(fā)明包括，例如，堿金屬如鈉或鉀；堿土金屬如鈣和鎂或鋁；以及銨。作為有機(jī)堿的鹽，本發(fā)明包括，例如，三甲胺，三乙胺，吡啶，甲基吡啶，乙醇胺，二乙醇胺和三乙醇胺。作為無機(jī)酸的鹽，本發(fā)明包括，例如，鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸和磷酸。作為有機(jī)酸的鹽，本發(fā)明包括，例如，甲酸，乙酸，三氟乙酸，富馬酸，草酸，酒石酸，馬來酸，乳酸，檸檬酸，琥珀酸，蘋果酸，甲磺酸，苯磺酸和對(duì)甲苯磺酸。作為堿性氨基酸的鹽，本發(fā)明包括，例如，精氨酸，賴氨酸和鳥氨酸。酸性氨基酸，包括，例如，天冬氨酸和谷氨酸。
本發(fā)明提供了抑制絲氨酸/蘇氨酸和酪氨酸激酶的方法，和治療絲氨酸/蘇氨酸和酪氨酸激酶介導(dǎo)的生物病癥的方法。特別地，本發(fā)明提供了抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶，包括糖元合酶激酶3(GSK-3)、依賴于細(xì)胞周期蛋白的激酶2(Cdk2)、依賴于細(xì)胞周期蛋白的激酶4(Cdk4)、MEK1、NEK-2、CHK2、CK1ε、Raf、關(guān)卡激酶1(CHK1)、核糖體S6激酶2(Rsk2)和PAR-1的方法，以及抑制酪氨酸激酶，包括細(xì)胞分化周期2激酶(Cdc2激酶)、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3、FLT-3、與SRC、FGR和YES(Fyn)相關(guān)的FYN癌基因激酶、淋巴細(xì)胞特異性蛋白質(zhì)酪氨酸激酶(Lck)和含有Ig和EGF同源結(jié)構(gòu)域的酪氨酸激酶(Tie-2)的方法。本發(fā)明也提供了治療絲氨酸/蘇氨酸激酶，包括GSK-3、Cdk2、Cdk4、MEK1、NEK-2、CHK2、CK1ε、Raf、CHK1、Rsk2和PAR-1介導(dǎo)的生物病癥的方法，和治療酪氨酸激酶，包括Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3、FLT-3、Fyn、Lck和Tie-2介導(dǎo)的生物病癥的方法。
與絲氨酸/蘇氨酸激酶有關(guān)的方法
一方面，本發(fā)明提供了在受試者中抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療絲氨酸/蘇氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法。該方法包括給予所述受試者結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物。在抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶的方法中，在給藥后所述絲氨酸/蘇氨酸激酶在受試者體內(nèi)被抑制。結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式
其中，
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基，-S(＝O)-NH2、取代和未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S-芳基、取代和未取代的-S-芳烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(芳基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(芳基)2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(芳烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-芳基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-芳基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-芳烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、-N(H)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R4選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基，-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基，-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、或取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基；
R5和R8獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的雜環(huán)基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基，-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基，-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2或取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(雜環(huán)烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代和未取代的烷氧基、或-NH2，或R9和R10連接在一起形成一個(gè)或多個(gè)環(huán)，每個(gè)環(huán)有5、6或7個(gè)環(huán)原子；和
R10是-H，或R9和R10連接在一起形成一個(gè)或多個(gè)環(huán)，每個(gè)環(huán)有5、6或7個(gè)環(huán)原子。
在受試者中抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療絲氨酸/蘇氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述絲氨酸/蘇氨酸激酶選自糖元合酶激酶3、依賴于細(xì)胞周期蛋白的激酶2、依賴于細(xì)胞周期蛋白的激酶4、MEK1、NEK-2、CHK2、CK1ε、Raf、關(guān)卡激酶1、核糖體S6激酶2或散亂相關(guān)激酶(PAR-1)。
與糖元合酶激酶3有關(guān)的方法
在用結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物在受試者中抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療絲氨酸/蘇氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述絲氨酸/蘇氨酸激酶是GSK-3。在一些此類方法中，在給藥后GSK-3在受試者體內(nèi)被抑制。結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式
其中
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的雜環(huán)基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基，-S(＝O)-NH2、取代和未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基，-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、-CO2H、或取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基；
R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的環(huán)烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的雜環(huán)基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-雜環(huán)基、-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)基、-N(H)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)2、-N(烷基)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、-CO2H、或取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基；或R2和R3可連接在一起形成環(huán)狀基團(tuán)；
R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)-NH2、取代和未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)(環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、-NH2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)基、-N(H)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)2、-N(烷基)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(烷基)取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、-CO2H、或取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基，或R2和R3可連接在一起形成環(huán)狀基團(tuán)；
R4選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基，-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基，-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、或取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基；
R5選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的雜環(huán)基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基，-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基，-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、或取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；
R6選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的雜環(huán)基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、-CO2H、或取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；
R7選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的脒基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、-CO2H、或取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在；
R8選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的雜環(huán)基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基，-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基，-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2或取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代和未取代的烷氧基、或-NH2，或R9和R10連接在一起形成5、6或7元環(huán)；和
R10是-H或R9和R10一起形成5、6或7元環(huán)。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-CN、-NO2、-OH、-SH、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基，-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基，-NH2、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、或取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基；
R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-OH、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的環(huán)烯基、取代或未取代的環(huán)烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-SH、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-雜環(huán)基、-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)基、-N(H)-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)2、-N(烷基)-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(烷基)、或取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)2；或R2和R3可連接在一起形成環(huán)狀基團(tuán)；
R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的烷氧基、-CO2H、-CN、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(H)(環(huán)烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-NO2、-SH、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基，-NH2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)基、-N(H)-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)2、-N(烷基)-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(烷基)、或取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)2；或R2和R3可連接在一起形成環(huán)狀基團(tuán)；
R4選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-CN、-NO2、-OH、-SH、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基，-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基，-NH2、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、或取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基；
R5選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-CN、-NO2、-OH、-SH、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基，-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基，-NH2、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、或取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；
R6選自-H、-Cl、-F、-Br、-OH、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代或未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-CN、-NO2、-OH、-SH、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基，-NH2、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-烷基、或取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；
R7選自-H、-Cl、-F、-Br、-OH、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代或未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-CN、-NO2、-OH、-SH、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基，-NH2、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-烷基、或取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)基；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在；
R8選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-CN、-NO2、-OH、-SH、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基，-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基，-NH2、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、或取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R9選自取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷氧基、-NH2、取代或未取代的環(huán)烷基、或取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，或R9和R10連接在一起形成5、6或7元環(huán)；或
R10是-H，或R9和R10連接在一起形成5、6或7元環(huán)。
在一些在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法實(shí)施方案中，
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I或含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；
R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CO2H、-NO2、含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的環(huán)烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、或取代和未取代的-N(烷基)2；
R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)(環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、或取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)；
R4選自-H、-F、-Cl、-Br、-I或含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；
R5選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、或取代和未取代的雜環(huán)基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；
R6選自-H、-F、-Cl、-Br、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、或取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；
R7選自-H、-Cl、-F、-Br、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基，-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)或取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在；和
R8選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、或取代和未取代的雜環(huán)基；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A和D之一是氮，且B和C都是碳。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代和未取代的烷氧基或-NH2。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基(其中雜環(huán)基是飽和的)、取代和未取代的雜環(huán)烷基(其中雜環(huán)基是不飽和的)、取代和未取代的烷氧基、-NH2、取代和未取代的烷氧基烷基、取代和未取代的羥基烷基、取代和未取代的二烷基氨基烷基、取代和未取代的烷基氨基烷基、取代和未取代的氨基烷基、取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代和未取代的(雜環(huán)基)(烷基)氨基烷基、或取代和未取代的烷基-(SO2)-烷基。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的飽和的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、或取代和未取代的氨基烷基。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自奎寧環(huán)基，哌啶基，哌啶基烷基，吡咯烷基、或氨基環(huán)己基。在一些此類實(shí)施方案中，R9是奎寧環(huán)基，在又一些此類實(shí)施方案中，R9是奎寧環(huán)-3-基。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自單環(huán)、二環(huán)或多環(huán)的飽和雜環(huán)基。
在一些在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl或-CH3。在一些此類實(shí)施方案中R1是-H或-F，在此類又一些實(shí)施方案中，R1是-H。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法實(shí)施方案中，R2選自-H、-Cl、-F、-Br、-I、-CH3、-NO2、-OMe、-CN、-CO2H、取代和未取代的1，2，3，6-四氫吡啶基、取代和未取代的噻吩基、取代和未取代的咪唑基、取代和未取代的吡咯基、取代和未取代的3-吡啶基、取代和未取代的4-吡啶基、苯基、2-取代的苯基、2，4-二取代的苯基、4-取代的苯基、3-取代的苯基、2，6-二取代的苯基、3，4-二取代的苯基、取代和未取代的二烷基氨基、或取代和未取代的烷基氨基。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2是取代和未取代的芳基，選自苯基、2-氯苯基、2-甲基苯基、2-乙基苯基、2-羥基苯基、2-甲氧基苯基、2-三氟甲基苯基、3-甲氧基苯基、3-硝基苯基、3-羧基苯基、3-乙酰苯基、3-氨基苯基、3-羥基苯基、3-乙酰胺基苯基、3-甲酯基苯基、3-三氟甲基苯基、3-脲基苯基、4-氯苯基、4-氰基苯基、4-羥基苯基、4-硝基苯基、4-乙基苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-乙酰苯基、4-乙酰氨基苯基、4-羧基苯基、4-甲酰苯基、4-甲硫基苯基、4-二甲基氨基苯基、4-甲酯基苯基、4-乙酯基苯基、4-酰胺基苯基、4-(甲基磺酰)苯基、4-三氟甲基苯基、2，4-二氟苯基、2-氟-4-氯苯基、2，4-二氯苯基、2-氨基-4-甲酯基苯基、2-氨基-4-羧基苯基、2，6-二氟苯基，或3，4-(亞甲二氧基)苯基。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法是某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-Cl、-F或-CH3。在一些此類實(shí)施方案中R2是-F。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法是某些實(shí)施方案中，R4選自-H或-CH3。在一些此類實(shí)施方案中，R4是-H。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R5和R8獨(dú)立選自-H、飽和的雜環(huán)基，或不存在。在一些此類實(shí)施方案中，R5和R8獨(dú)立選自-H或飽和的雜環(huán)基。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A和D都是碳，R5是-H，R8是-H。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-OH、或取代和未取代的雜環(huán)基。在一些此類實(shí)施方案中，R6是-H，R7是-H。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳，且R5、R6、R7和R8都是-H。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-CH3、-OH、-CN、取代和未取代的芳基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的烷基氨基、取代和未取代的二烷基氨基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2或-C(＝O)-NH2。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-CH3、-CN、-OMe、羥基烷基氨基、二烷基氨基、二烷基氨基烷基氨基，烷氧基烷基氨基、取代和未取代的雜環(huán)烷基氨基，乙酰氨基烷基氨基，氰基烷基氨基，烷硫基氨基(thioalkylamino group)，(甲基磺酰)烷基氨基，環(huán)烷基烷基氨基、二烷基氨基烷氧基、雜環(huán)基烷氧基、取代和未取代的哌啶基、取代和未取代的咪唑基、取代和未取代的嗎啉基、取代和未取代的吡咯基、取代和未取代的吡咯烷基、取代和未取代的哌嗪基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、或-C(＝O)-NH2。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自取代和未取代的烷基氨基或取代和未取代的二烷基氨基。在一些此類實(shí)施方案中，R3是二甲基氨基。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳和R4、R5、R6、R7、R8和R10都是-H。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，就GSK-3而言，化合物的IC50值小于或等于10μM。在其它此類實(shí)施方案中，IC50值小于或等于1μM，小于或等于0.1μM，小于或等于0.050μM，小于或等于0.030μM，小于或等于0.025μM，或小于或等于0.010μM。
在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述受試者是哺乳動(dòng)物，在一些此類實(shí)施方案中是人。
在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述生物病癥是糖尿病，在一些此類實(shí)施方案中所述生物病癥是非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)。在其它此類實(shí)施方案中，所述生物病癥是阿爾茨海默氏病或是雙相性精神障礙。
與依賴于細(xì)胞周期蛋白的激酶2有關(guān)的方法
用結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療由絲氨酸/蘇氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的一些實(shí)施方案中，所述絲氨酸/蘇氨酸激酶是Cdk2。在一些此類實(shí)施方案中，在給藥后Cdk2在受試者體內(nèi)被抑制。在抑制Cdk2的方法中，結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式
其中
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1、R4、R5和R8獨(dú)立選自-H或取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、或取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基；和
R10是-H。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，
R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、或取代和未取代的-N(芳基)2；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2，或如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在，如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A或D之一是氮，且B和C都是碳。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的鏈烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的烷氧基、或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的飽和雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基(其中雜環(huán)基部分是飽和的)、取代和未取代的烷氧基、或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基(其中雜環(huán)基部分是飽和的)。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、取代和未取代的飽和的雜環(huán)基、或取代和未取代的雜環(huán)烷基(其中雜環(huán)基部分是飽和的)。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自吡咯烷基，吡咯烷基烷基，哌啶基，哌啶基烷基，或奎寧環(huán)基。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R1是-H。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的芳基、或取代和未取代的吡啶基。在一些此類實(shí)施方案中，R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、未取代的含有1-8個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基、二鹵苯基、羧基苯基、氨基苯基、氨基羧基苯基、甲基羧基苯基或羥基苯基。在其它此類實(shí)施方案中，R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH3、2，6-二氟苯基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、2-氨基-4-甲基羧基苯基、3-甲基羧基苯基、或3-羥基苯基。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基。在一些此類實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，氨基烷基氨基、或取代的芳基。在其它此類實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-CH3、2-氨基丙基氨基或4-酰胺基苯基，或R3選自-H、-F、-Cl、-Br或-CH3。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R4是-H。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R5或R8是-H或都是-H。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、取代和未取代的-N(烷基)(哌啶基)、取代和未取代的哌啶基、取代和未取代的嗎啉基、或取代和未取代的哌嗪基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。在一些此類實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-OH、取代和未取代的-N(甲基)(4-(N-甲基哌啶基))，N-嗎啉基或4-N-甲基哌嗪基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。在其它此類實(shí)施方案中，R6和R7都是-H，B和C都是碳。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R5和R8都是-H，A和D都是碳。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，就Cdk2而言，化合物的IC50值小于或等于10μM。在其它此類實(shí)施方案中，IC50值小于或等于1μM，小于或等于O.1μM，小于或等于0.050μM，小于或等于0.030μM，小于或等于0.025μM或小于或等于0.010μM。
在受試者中抑制Cdk2的方法和/或在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述受試者是哺乳動(dòng)物或人。
在受試者中治療由Cdk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述生物病癥是癌癥。
與關(guān)卡激酶1有關(guān)的方法
在一些用結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療由絲氨酸/蘇氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的實(shí)施方案中，所述絲氨酸/蘇氨酸激酶是CHK1。在一些此類實(shí)施方案中，在給藥后CHK1在受試者體內(nèi)被抑制。在抑制CHK1的方法中，結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式
其中，
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基，-SH、取代和未取代的-S-烷基，-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、或取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2；
R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(芳基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(芳基)2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(芳烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-芳基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)烷基、-N(H)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(烷基)取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R4選自-H或取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基；
R5和R8獨(dú)立選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有l(wèi)-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(雜環(huán)烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代和未取代的烷氧基或-NH2、或R9和R10連接在一起形成一個(gè)或多個(gè)環(huán)，每個(gè)環(huán)有5、6或7個(gè)環(huán)原子；和
R10是-H或，R9和R10連接在一起形成一個(gè)或多個(gè)環(huán)，每個(gè)環(huán)有5、6或7個(gè)環(huán)原子。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、或取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)；
R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-N(H)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A或D之一是氮，且B和C都是碳。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、或取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的羥基烷基、取代和未取代的二烷基氨基烷基、取代和未取代的烷基氨基烷基、或取代和未取代的氨基烷基。在一些此類實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自2-氨基-4-甲基-戊基，2-氨基-3-甲基-丁基，2-氨基-丁基，2，2-二甲基-3-氨基-丙基，1-氨基甲基-丙基，2-羥基-3-氨基-丙基、3-氨基丙基，2-二甲基氨基-乙基，2-甲基氨基-乙基，2-羥基-乙基、或2-氨基-乙基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、或取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基。在一些此類實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自取代和未取代的苯基丙基、取代和未取代的苯基甲基、或取代和未取代的苯基。在其它此類實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自苯基、4-氨基甲基-苯基甲基，2-(2-氨基-乙氧基)-苯基甲基，4-(2-氨基-乙氧基)-苯基甲基，4-亞磺酰氨基(sulfonamido)-苯基甲基，1-芐基-2-氨基-乙基、或2-氨基-3-苯基-丙基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自取代和未取代的環(huán)己基、取代和未取代的環(huán)己基烷基、取代和未取代的吡咯烷基、取代和未取代的吡咯烷基烷基、取代和未取代的四氫呋喃基烷基、取代和未取代的哌啶基、取代和未取代的哌啶基烷基、取代和未取代的哌嗪基烷基、取代和未取代的嗎啉基烷基、或取代和未取代的奎寧環(huán)基。在一些此類實(shí)施方案中，R9選自環(huán)己基，環(huán)己基甲基，1-環(huán)己基乙基，2-氨基-環(huán)己基，4-氨基-環(huán)己基，吡咯烷-3-基，1-甲基-吡咯烷-3-基，1-乙基-吡咯烷-2-基，吡咯烷-2-基甲基，1-乙基-吡咯烷-2-基甲基，吡咯烷-1-基乙基，1-甲基-吡咯烷-2-基乙基，吡咯烷-1-基丙基，2-氧代-吡咯烷-1-基丙基，四氫呋喃-2-基甲基，哌啶-3-基，1-乙基-哌啶-3-基，哌啶-4-基，1-甲基-哌啶-4-基，1-芐基-哌啶-4-基，哌啶-2-基甲基，哌啶-3-基甲基，哌啶-4-基甲基，哌啶-1-基乙基，哌啶-2-基乙基，4-甲基-哌嗪-1-基丙基，嗎啉-4-基乙基，嗎啉-4-基丙基、或奎寧環(huán)-3-基。在其它此類實(shí)施方案中，R9是奎寧環(huán)-3-基。在又一些此類實(shí)施方案中，R9是哌啶-3-基甲基。在其它此類實(shí)施方案中，R9選自吡咯烷-3-基，1-甲基-吡咯烷-3-基或吡咯烷-2-基甲基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自取代和未取代的咪唑基烷基、取代和未取代的吡啶基、取代和未取代的吡啶基烷基、取代和未取代的吡啶基氨基烷基、取代和未取代的嘧啶基烷基、取代和未取代的吡嗪基烷基、取代和未取代的吲哚基烷基、取代和未取代的苯并咪唑基烷基。在一些此類實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自3-(咪唑-1-基)-丙基、3-(咪唑-4-基)-丙基，吡啶-2-基，吡啶-4-基，2-甲氧基-吡啶-5-基，2-(哌啶-4-基氧)-吡啶-3-基，2-(哌啶-3-基氧)-吡啶-5-基，吡啶-3-基甲基，吡啶-4-基甲基，吡啶-2-基乙基，吡啶-3-基乙基，2-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氨基)-乙基，2-(2-酰胺基-吡啶-5-基氨基)-乙基，2-(4-氨基-5-硝基-吡啶-2-基氨基)-乙基，吡啶-2-基丙基，吡嗪-2-基，2-甲基-4-氨基-吡嗪-5-基，5-氟-吲哚-3-基乙基，苯并咪唑-2-基甲基，苯并咪唑-5-基甲基，2-哌啶-4-基-苯并咪唑-5-基甲基和苯并咪唑-2-基乙基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自單環(huán)、二環(huán)和多環(huán)的飽和雜環(huán)基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9和R10連接在一起形成一個(gè)或多個(gè)環(huán)，每個(gè)環(huán)有5、6或7個(gè)環(huán)原子。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的含有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、或取代和未取代的-N(H)(烷基)。在一些此類實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl、-CH3、取代和未取代的哌嗪基，-OCH3、取代和未取代的苯氧基、取代和未取代的哌啶氧基(piperidinyloxy)、取代和未取代的奎寧環(huán)氧基(quinuclidinyloxy)、取代和未取代的嗎啉基烷氧基或-NCH3。在其它此類實(shí)施方案中，R1選自4-甲基-哌嗪-1-基，4-乙基-哌嗪-1-基，4-氨基-苯氧基、3-二甲基氨基-苯氧基、3-乙酰氨基-苯氧基，4-乙酰氨基-苯氧基或2-(嗎啉-4-基)-乙氧基。再在其它此類實(shí)施方案中，R1是-H。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-N(H)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-N(H)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、-CO2H、或取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自2-取代的苯基、3-取代的苯基、4-取代的苯基、2，4-二取代的苯基、2，6-二取代的苯基、取代或未取代的吡咯基、取代和未取代的噻吩基、取代和未取代的四氫吡啶基、或取代和未取代的吡啶基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2是取代和未取代的芳基，選自苯基、2-氯苯基、2-乙基苯基、2-羥基苯基、2-甲氧基苯基、2-甲基苯基、2-三氟甲基苯基、3-乙酰苯基、3-乙酰氨基苯基、3-氨基苯基、3-甲氧基羰基苯基、3-羧基苯基、3-羥基苯基、3-甲氧基苯基、3-硝基苯基、3-三氟甲基苯基、4-乙酰苯基、4-甲氧基羰基苯基、4-酰胺基苯基、4-羧基苯基、4-氯苯基、4-氰基苯基、4-二甲基氨基苯基、4-乙基苯基、4-甲酰苯基、4-羥基苯基、4-甲氧基苯基、4-甲硫基苯基、4-硝基苯基、4-(甲基磺酰)-苯基、2，4-二氟苯基、2-氟-4-氯苯基、2，4-二氯苯基、2-氨基-4-甲氧基羰基苯基、2-氨基-4-羧基苯基或2，6-二氟苯基。在一些此類實(shí)施方案中，R2選自2-羥基苯基、2-甲氧基苯基、3-羥基苯基、3-甲氧基苯基、3-氨基苯基、4-氰基苯基、4-羥基苯基和4-甲氧基苯基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2是取代和未取代的雜環(huán)基或雜環(huán)烷基，選自1-叔丁氧羰基-吡咯-2-基，噻吩-2-基，噻吩-3-基，1，2，5，6-四氫吡啶-4-基，4-(叔丁氧羰基)-1，2，5，6-四氫吡啶-4-基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基(benzo[1，3]dioxol-5-yl)或苯并[b]噻吩-2-基。在一些此類實(shí)施方案中，R2選自噻吩-2-基或噻吩-3-基。在其它此類實(shí)施方案中，R2選自吡啶-2-基，吡啶-3-基或吡啶-4-基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-Cl、-F、-Br、-I、-NO2、-CN、-CH3、-OH、-OCH3、-CO2H或-CO2CH3。在一些此類實(shí)施方案中，R2是-Cl。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-N(H)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、或取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的實(shí)施方案中，R2選自-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、或取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)。在一些此類實(shí)施方案中，R2選自-NH2、-N(H)(甲基)、-N(甲基)2、-N(H)(2-甲基-丙基)、-N(H)(2，2-二甲基-丙基)、-N(H)(2-甲基-丁基)、-N(H)(庚基)、-N(H)(環(huán)己基甲基)、-N(甲基)(異丁基)、-N(甲基)(環(huán)己基甲基)、-N(H)(芐基)、-N(H)(哌啶-4-基)，-N(H)(吡咯烷-2-基甲基)、-N(H)(2-二甲基氨基甲基-呋喃-5-基甲基)，-N(H)(3-甲基-噻吩-2-基甲基)、-N(H)(3-苯氧基-噻吩-2-基甲基)、-N(H)(2-乙基-5-甲基-咪唑-4-基甲基)、-N(H)(5-甲基-異惡唑-3-基甲基)、-N(H)(噻唑-2-基甲基)、-N(H)(吡嗪-2-基甲基)、或-N(甲基)(1-甲基-哌啶-4-基)。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基，其中，烷基部分是有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、或取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)。在一些此類實(shí)施方案中，R2選自取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-甲基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-環(huán)己基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-苯基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-苯基烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-呋喃、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-苯硫基(thiophenyl)烷基。在其它此類實(shí)施方案中，R2選自-N(H)-C(＝O)-甲基，-N(H)-C(＝O)-丙基，-N(H)-C(＝O)-異丙基，-N(H)-C(＝O)-芐氧基甲基，N(H)-C(＝O)-芐基氨基甲基，-N(H)-C(＝O)-環(huán)己基，-N(H)-C(＝O)-4-乙基-苯基，-N(H)-C(＝O)-4-氰基-苯基，-N(H)-C(＝O)-2-苯基-乙基，-N(H)-C(＝O)-呋喃-2-基，-N(H)-C(＝O)-噻吩-2-基甲基、或-N(H)-C(＝O)-吡嗪-2-基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-N(H)-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)。在一些此類實(shí)施方案中，R2選自取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)，其中烷基部分是含有1-12個(gè)碳的直鏈和支鏈烷基，取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(苯基)或取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(苯基烷基)。在其它此類實(shí)施方案中，R2選自-N(H)-C(＝O)-N(H)(異丙基)，-N(H)-C(＝O)-N(H)(庚基)，-N(H)-C(＝O)-N(H)(苯基)，-N(H)-C(＝O)-N(H)(2-乙氧基苯基)，-N(H)-C(＝O)-N(H)(2-甲硫基苯基)，-N(H)-C(＝O)-N(H)(3-三氟甲基苯基)，-N(H)-C(＝O)-N(H)(3，5-二甲基苯基)或-N(H)-C(＝O)-N(H)(芐基)。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、-CO2H、或取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基。在一些此類實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-CN、-CH3、-OH、-OCH3、2-二甲基氨基-乙氧基，吡咯烷-2-基甲氧基或2-氧代-吡咯烷-1-基乙氧基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、或取代和未取代的雜環(huán)烷基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自2-取代的苯基、3-取代的苯基、4-取代的苯基、2，4-二取代的苯基、取代或未取代的吡咯基、取代和未取代的噻吩基、取代和未取代的哌啶基、取代和未取代的哌嗪基、取代和未取代的嗎啉基、取代和未取代的氮雜環(huán)庚烷(azepane)、取代和未取代的吡咯基、取代和未取代的咪唑基、取代和未取代的吡啶基、或取代和未取代的苯并間二氧雜環(huán)戊烯基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3是取代和未取代的芳基，選自2-甲氧基-苯基、2-甲基苯基、2-三氟甲基-苯基、3-乙酰苯基、3-乙酰氨基苯基、3-甲氧基羰基-苯基、3-羧基苯基、4-乙酰苯基、4-酰胺基苯基、4-羧基苯基、4-氰基苯基、4-甲酰苯基、4-甲氧基羰基-苯基、4-甲基磺酰-苯基、2，4-二氯苯基、2-氨基-4-甲氧基羰基苯基或2-氨基-4-甲氧基羰基-苯基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3是取代和未取代的雜環(huán)基，選自吡咯烷-1-基、3-二甲基氨基-吡咯烷-1-基、3-乙酰胺基-吡咯烷-1-基、3-羥基-吡咯烷-1-基、3-甲基磺酰-吡咯烷-1-基、3-三氟乙酰胺基-吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，2-羥基-哌啶-1-基、3-氨甲酰(carboxamide)-哌啶-1-基、3-羧基-哌啶-1-基、3-甲氧基羰基-哌啶-1-基、3-(吡啶-4-基)-吡咯烷-3-基、4-酰胺基(carboxamido)-哌啶-1-基、4-羧基-哌啶-1-基、4-乙氧基羰基-哌啶-1-基、4-甲基-哌嗪-1-基、4-(吡啶-2-基甲基)-哌嗪-1-基、嗎啉-4-基、氮雜環(huán)庚烷-1-基、吡咯-1-基、3-乙酰-吡咯-1-基、3-羧基-吡咯-1-基、咪唑-1-基、2-甲基-咪唑-1-基、2-乙基-咪唑-1-基、2-異丙基-咪唑-1-基或苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)或取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-NH2、-N(H)(甲基)，-N(H)(2-甲基丙基)，-N(H)(2-乙酰氨基乙基)，-N(H)(2-氨基乙基)，-N(H)(2-氰基乙基)，-N(H)(2-二乙基氨基-乙基)，-N(H)(2-二甲基氨基-乙基)，-N(H)(2-羥基乙基)，-N(H)(2-甲氧基乙基)，-N(H)(2-硫乙基)(2-thioethyl)，-N(H)(3-二甲基氨基丙基)，-N(H)(3-羥基丙基)，-N(H)(3-甲氧基丙基)，-N(H)(2-甲基磺酰-乙基)，-N(H)(環(huán)丙基)，-N(H)(4-羥基-環(huán)己基)，-N(H)(1-羥基-環(huán)己基甲基)，-N(甲基)2，-N(乙基)2，-N(甲基)(乙基)，-N(甲基)(2-二甲基氨基-乙基)，-N(H)(嗎啉-4-基乙基)，-N(H)(吡咯烷-1-基乙基)，-N(H)(1-甲基-吡咯烷-2-基乙基)，-N(H)(吡咯烷-1-基丙基)，-N(H)(2-氧代-吡咯烷-1-基丙基)，-N(H)(哌啶-3-基甲基)，-N(H)(哌啶-1-基乙基)，-N(H)(吡啶-2-基甲基)，-N(H)(吡啶-2-基乙基)，-N(H)(吡啶-3-基乙基)或-N(H)(吡啶-4-基乙基)。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的一些實(shí)施方案中，R3選自取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2或-CO2H。在一些此類實(shí)施方案中，R3選自-C(＝O)-嗎啉-4-基，-C(＝O)-NH2、-C(＝O)-N(甲基)2或-CO2H。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R4選自-H或-CH3。在一些此類實(shí)施方案中，R4是-H。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R5和R8獨(dú)立選自-H或飽和的雜環(huán)基或不存在。在一些此類實(shí)施方案中，A和D都是碳，R5是-H，R8是-H。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。在一些此類實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I或-CH3。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自取代和未取代的雜環(huán)基或取代和未取代的雜環(huán)烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自取代和未取代的吡咯烷基、取代和未取代的哌啶基烷基、取代和未取代的哌嗪基、取代和未取代的嗎啉基、取代和未取代的硫代嗎啉基、取代和未取代的二氮雜環(huán)庚烷基(dizaepanyl)、取代和未取代的氧氮雜環(huán)庚烷基(oxazepanyl)或吡啶基烷基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自3-(乙酰-甲基-氨基)-吡咯烷-1-基、3-二乙基氨基-吡咯烷-1-基、3-二甲基氨基-吡咯烷-1-基、3-(N-氧化-N，N-二甲基氨基)-吡咯烷-1-基、3-(吡咯烷-1-基)-吡咯烷-1-基，2-(吡咯烷-1-基甲基)-吡咯烷-1-基，4-(哌啶-1-基)-哌啶-1-基，1-乙酰-哌嗪-4-基，1-羧基甲基-哌嗪-4-基，1-甲基-哌嗪-4-基，1-乙基-哌嗪-4-基，1-環(huán)己基-哌嗪-4-基，1-異丙基-哌嗪-4-基，嗎啉-4-基，2-二甲基氨基-嗎啉-4-基，2，6-二甲基-嗎啉-4-基，2-二甲基氨基-5-甲基-嗎啉-4-基，硫代嗎啉-4-基，硫代嗎啉-4-基1-氧化物1-甲基-[1，4]二氮雜環(huán)庚烷-1-基，2-二甲基氨基甲基-[1，4]氧氮雜環(huán)庚烷-4-基或吡啶-4-基甲基。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)或取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-OH、取代和未取代的烷氧基烷氧基、取代和未取代的吡咯烷基氧基(pyrrolidinyloxy)、取代和未取代的四氫呋喃基氧基(tetrahydrofuranyloxy)、取代和未取代的吡咯烷基烷氧基、取代和未取代的嗎啉基烷氧基、取代和未取代的吡啶基氧基(pyridinyloxy)、-NH2、取代和未取代的-N(H)(吡咯烷基)、取代和未取代的-N(H)(哌啶基)、取代和未取代的-N(H)(哌啶基烷基)、取代和未取代的-N(H)(吡啶基烷基)或取代和未取代的-N(烷基)(哌啶基)。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-OH、甲氧基、2-甲氧基-乙氧基、4-乙酰胺基-苯氧基、1-甲基-吡咯烷-3-氧基、吡啶-3-氧基、3-(吡咯烷-1-基)-丙氧基、四氫呋喃-2-基甲氧基、2-(嗎啉-4-基)-乙氧基、3-(嗎啉-4-基)-丙氧基、-NH2、-N(H)(2-(甲氧基甲基)-吡咯烷-4-基)、-N(H)(哌啶-3-基)、-N(H)(1，3-二甲基-哌啶-4-基)、-N(H)(1-(乙氧基羰基)-哌啶-4-基)、-N(甲基)(1-甲基哌啶-1-基)、-N(H)(哌啶-1-基乙基)或-N(H)(吡啶-2-基甲基)。在一些此類實(shí)施方案中、R6和R7獨(dú)立選自-H或-N(甲基)(1-甲基哌啶-1-基)。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)或-CO2H；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-吡咯烷基、取代和未取代的-C(＝O)-哌啶基、取代和未取代的-C(＝O)-吡嗪基、取代和未取代的-C(＝O)-二氮雜二環(huán)庚基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(哌啶基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(吡啶基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(吡咯烷基烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(哌啶基烷基)或取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(哌啶基)。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-S(＝O)2-N(甲基)2，-C(＝O)-3-氨基-吡咯烷-1-基，-C(＝O)-3-(二甲基氨基甲?；?-吡咯烷-1-基，-C(＝O)-3-羥基-吡咯烷-1-基，-C(＝O)-4-二甲基氨基-哌啶-1-基，-C(＝O)-3-羥基-哌啶-1-基，-C(＝O)-4-(哌啶-1-基)-哌啶-1-基，-C(＝O)-吡啶-3-基，-C(＝O)-哌嗪-1-基，-C(＝O)-1-乙酰-哌嗪-4-基，-C(＝O)-1-環(huán)己基-哌嗪-4-基，-C(＝O)-1-(乙氧基羰基甲基)-哌嗪-4-基，-C(＝O)-1-羥基乙基-哌嗪-4-基，-C(＝O)-1-異丙基-哌嗪-4-基，-C(＝O)-1-甲基-哌嗪-4-基，-C(＝O)-2-甲基-哌嗪-4-基，-C(＝O)-嗎啉-4-基，-C(＝O)-2-甲基-2，5-二氮-二環(huán)[2.2.1]庚-5-基，-C(＝O)-N(甲基)(2-二甲基氨基-乙基)，-C(＝O)-N(乙基)(2-二甲基氨基-乙基)，-C(＝O)-N(H)(哌啶-4-基)，-C(＝O)-N(H)(哌啶-3-基)，-C(＝O)-N(H)(1-乙氧基羰基-3-甲氧基-哌啶-4-基)，-C(＝O)-N(H)(1-氮雜-二環(huán)[2.2.1]庚-3-基)，-C(＝O)-N(H)(2-(吡咯烷-1-基)-乙基)，-C(＝O)-N(H)(2-(哌啶-1-基)-乙基)，-C(＝O)-N(甲基)(1-甲基-吡咯烷-3-基)或-C(＝O)-N(甲基)(1-甲基-哌啶-4-基)。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，B和C都是碳和R6是-H，R7是-H。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳和R5、R6、R7和R8都是-H。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳和R4、R5、R6、R7、R8和R10都是-H。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，就CHK1而言，化合物的IC50值小于或等于10μM。在其它此類實(shí)施方案中，IC50值小于或等于1μM，小于或等于0.1μM，小于或等于0.050μM，小于或等于0.030μM，小于或等于0.025μM，小于或等于0.010μM或小于或等于0.001μM。
在受試者中抑制CHK1的方法和/或在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述受試者是哺乳動(dòng)物或人。
在受試者中治療CHK1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述生物病癥是癌癥。
與核糖體S6激酶2有關(guān)的方法
在一些用結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物在受試者中抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療絲氨酸/蘇氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的實(shí)施方案中，所述絲氨酸/蘇氨酸激酶是Rsk2。在一些此類實(shí)施方案中，在給藥后Rsk2在受試者體內(nèi)被抑制。在抑制Rsk2的方法中，結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式
其中
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S-芳基、取代和未取代的-S-芳烷基，-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-O-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；或R2和R3可連接在一起形成環(huán)狀基團(tuán)，
R4、R5和R8獨(dú)立選自-H或取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在。
R6選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-CO2H、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基或取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基；
R7選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、SH、取代和未取代的-S-烷基、-CO2H、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基或取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的芳基烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基；或R9和R10連接在一起形成5、6或7元環(huán)；和
R10是-H，或R9和R10連接在一起形成5、6或7元環(huán)。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；
R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基或-CO2H；或R2和R3可連接在一起形成環(huán)狀基團(tuán)
R6選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；
R7選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A或D是氮，且B和C都是碳。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的烷氧基或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的飽和的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基(其中雜環(huán)基部分是飽和的)、取代和未取代的烷氧基或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基(其中雜環(huán)基部分是飽和的)。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自-H、未取代的含有1-12個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、未取代的環(huán)烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、氨基環(huán)己基、取代和未取代的飽和的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基(其中雜環(huán)基部分是飽和的)。在一些此類實(shí)施方案中，R9選自吡咯烷基、吡咯烷基烷基、哌啶基、哌啶基烷基、奎寧環(huán)基或氨基環(huán)己基。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl、取代和未取代的嗎啉基、取代和未取代的嗎啉基烷基、或取代和未取代的嗎啉基烷氧基。在一些此類實(shí)施方案中，R1選自-H或-F。在其它此類實(shí)施方案中，R1是-H。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CH3、-OCH3、-CO2H、取代和未取代的芳基、或取代和未取代的吡啶基。在一些此類實(shí)施方案中，R2選自-H、-Br、-I、-CH3、-CO2H、-NH2或4-羥基苯基。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CH3、-OCH3、取代和未取代的咪唑基、取代和未取代的二烷基氨基烷氧基、或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基。在一些此類實(shí)施方案中，R3選自-H或-F。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R4是-H。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R5是-H；或可以不存在。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6選自-H、-F、-Cl、-Me、取代和未取代的嗎啉基、取代和未取代的嗎啉基烷氧基、取代和未取代的哌啶基、或取代和未取代的哌嗪基；或可以不存在。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，其中，R7選自-H、-F、-Me、取代和未取代的嗎啉基、取代和未取代的吡咯烷基、取代和未取代的哌啶基、或取代和未取代的哌嗪基；或可以不存在。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R8是-H；或可以不存在。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，就CHK1而言，化合物的IC50值小于或等于10μM。在其它此類實(shí)施方案中，IC50值小于或等于1μM，小于或等于0.1μM，小于或等于0.050μM，小于或等于0.030μM，小于或等于0.025μM，小于或等于0.010μM或小于或等于0.001μM。
在受試者中抑制Rsk2的方法和/或在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述受試者是哺乳動(dòng)物或人。
在受試者中治療Rsk2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述生物病癥是癌癥。
與PAR-1有關(guān)的方法
用結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物在受試者中抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療絲氨酸/蘇氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述絲氨酸/蘇氨酸激酶是PAR-1。在一些此類實(shí)施方案中，在給藥后PAR-1在受試者體內(nèi)被抑制。在抑制PAR-1的方法中，結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式
其中，
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基或取代和未取代的雜環(huán)烷基；
R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基，-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-芳基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-芳烷基；
R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-芳基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-芳基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-O-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R4、R5和R8獨(dú)立選自-H或取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S-雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)或取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；和
R10是-H。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，
R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A或D之一是氮，且B和C都是碳。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的雜環(huán)基或取代和未取代的雜環(huán)烷基。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的二烷基氨基烷基、取代和未取代的烷基氨基烷基、取代和未取代的氨基烷基、或取代和未取代的烷基磺酰烷基。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、未取代的含有1-8個(gè)碳的直鏈和支鏈烷基、取代和未取代的烷基氨基烷基、取代和未取代的二烷基氨基烷基、取代和未取代的烷基磺酰烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的飽和的雜環(huán)基或取代和未取代的雜環(huán)烷基，其中雜環(huán)基部分是飽和的。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自取代和未取代的甲基氨基乙基、取代和未取代的二甲基氨基乙基、取代和未取代的甲基磺酰乙基、取代和未取代的奎寧環(huán)基、取代和未取代的哌嗪基烷基、取代和未取代的哌啶基、取代和未取代的哌啶基烷基、取代和未取代的吡咯烷基、取代和未取代的吡咯烷基烷基、取代和未取代的咪唑基烷基、或取代和未取代的環(huán)己基。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、甲基氨基乙基、二甲基氨基乙基，甲基磺酰乙基，1-氨基環(huán)己基，奎寧環(huán)基，4-甲基哌嗪-1-基丙基，1-芐基哌啶基，哌啶-3-基，哌啶-4-基，哌啶-3-基乙基，哌啶-4-基乙基，咪唑-5-基乙基，吡咯烷-1-基乙基，1-甲基吡咯烷-2-基乙基或吡咯烷-3-基。在一些此類實(shí)施方案中，R9是奎寧環(huán)基。在其它此類實(shí)施方案中，R9是奎寧環(huán)-3-基。再在其它此類實(shí)施方案中，R9是-H。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自單環(huán)、二環(huán)或多環(huán)的飽和雜環(huán)基。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、或取代和未取代的雜環(huán)基。在一些此類實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl或取代和未取代的哌嗪基。在其它此類實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl或4-乙基哌嗪-1-基。在其它此類實(shí)施方案中，R1是-H。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳基、或取代和未取代的芳烷基。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-Cl、-F、-Br、-I、-CN、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基、或取代和未取代的苯基。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2是取代和未取代的芳基，選自2-氨基-4-羧基甲基苯基、2-甲基苯基、2-乙基苯基、2-甲氧基苯基、2，4-二氯苯基、2-氟-4-氯苯基、2，6-二氟苯基、3-甲氧基苯基、3-羧基苯基、3-乙酰苯基、3-乙酰胺基苯基、3-甲基羧基苯基、4-乙酰苯基、4-二甲基氨基苯基、4-氰基苯基、4-酰胺基苯基、4-羧基苯基、4-甲基羧基苯基、4-甲基磺酰苯基或苯基。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-F、-Cl、-Br、-I、-CN、甲基、甲氧基或-CO2H。在一些此類實(shí)施方案中，R2是-Cl。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2或取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，-OH、未取代的直鏈和支鏈烷氧基、二烷基氨基烷氧基或取代和未取代的吡咯烷基烷氧基。在一些此類實(shí)施方案中，R3選自-H、-Cl、甲氧基、2-(二甲基氨基)乙基-1-氧和吡咯烷-2-基甲氧基。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自取代和未取代的苯基或取代和未取代的不飽和雜環(huán)基。在一些此類實(shí)施方案中，R3選自2-氨基-4-羧基苯基、3-乙酰胺基苯基、3-羧基苯基、4-羧基苯基、4-甲基磺酰苯基、2-乙基-咪唑-1-基、2-甲基-咪唑-1-基、咪唑-1-基和3-乙酰吡咯-1-基。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3是飽和的雜環(huán)基。在一些此類實(shí)施方案中，R3是飽和的雜環(huán)基，選自取代和未取代的硫代嗎啉基、取代和未取代的哌嗪基、取代和未取代的哌啶基、或取代和未取代的吡咯烷基。在其它此類實(shí)施方案中，R3選自3-苯基硫代嗎啉-4-基(3-phenylthiomorpholin-4-yl)、嗎啉-4-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-甲基羧基哌啶-1-基、哌啶-1-基、3-二甲基氨基吡咯烷-1-基、或3-乙酰胺基吡咯烷-1-基。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2或取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)，其中雜環(huán)基部分是飽和的。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自取代和未取代的-N(H)(羥基烷基)、取代和未取代的-N(H)(氨基烷基)、取代和未取代的-N(H)(二烷基氨基烷基)、取代和未取代的-N(H)(烷基酰胺基烷基)、取代和未取代的-N(H)(烷氧基烷基)、取代和未取代的-N(H)(芳基磺酰烷基)、取代和未取代的-N(H)(烷基磺酰烷基)、取代和未取代的-N(H)(環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)(嗎啉基烷基)、取代和未取代的-N(H)(哌啶基烷基)、或取代和未取代的-N(H)(吡咯烷酮基烷基(pyrrolidinonylalkyl)。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-N(H)(2-羥基乙基)，-N(H)(2-氨基乙基)，-N(H)(二甲基氨基乙基)，-N(H)(2-二乙基氨基乙基)，-N(H)(3-二甲基氨基丙基)，-N(H)(2-乙酰氨基乙基)，-N(H)(2-甲氧基乙基)，-N(H)(2-(甲基磺?；?乙基)，-N(H)(2-(苯基磺?；?乙基)，-N(H)(環(huán)丙基)，-N(甲基)(乙基)，-N(甲基)2，-N(H)(2-嗎啉-4-基-2-苯基乙基)，-N(H)(2-哌啶-1-基乙基)或-N(H)(3-吡咯烷酮-1-基丙基)。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R4是-H。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A和D都是碳，R5是-H，R8是-H。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、-OH或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的嗎啉基、取代和未取代的哌嗪基、取代和未取代的吡咯烷基、-OH或吡咯烷基烷氧基；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在。在一些此類實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、甲基，嗎啉-4-基，4-異丙基-哌嗪-1-基，4-甲基哌嗪-1-基，-OH；和3-(吡咯烷-1-基)丙基-1-氧基；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在。在其它此類實(shí)施方案中，B和C都是碳和R6和R7都是-H。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳和R5、R6、R7和R8都是-H。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，就PAR-1而言，化合物的IC50值小于或等于10μM。在其它此類實(shí)施方案中，IC50值小于或等于1μM，小于或等于0.1μM，小于或等于0.050μM，小于或等于0.030μM，小于或等于0.025μM或小于或等于0.010μM。
在受試者中抑制PAR-1的方法和/或在受試者中治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述受試者是哺乳動(dòng)物或人。
治療PAR-1活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述生物病癥是受Wnt途徑控制的，和/或受平面細(xì)胞的極性途徑(planar cell polarity pathway)控制的。一些情況下，所述生物病癥是癌癥，在一些實(shí)施方案中，在哺乳動(dòng)物如人中，所述癌癥是由Wnt途徑的異常調(diào)控造成的。因此，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了在受試者中調(diào)控Wnt途徑的方法。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)Wntβ-聯(lián)蛋白信號(hào)發(fā)生的方法。
與酪氨酸激酶有關(guān)的方法
另一方面，本發(fā)明提供了在受試者中抑制酪氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療由酪氨酸激酶介導(dǎo)的生物病癥的方法。所述酪氨酸激酶是Cdc2激酶、Fyn、Lck、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3、FLT-3或Tie-2。在一些實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是Cdc2激酶、Fyn、Lck或Tie-2，而在其它一些實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ或FLT-3。該方法包括給予所述受試者結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物。在抑制酪氨酸激酶的方法中，在給藥后所述酪氨酸激酶在受試者體內(nèi)被抑制。結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式
其中，
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S-雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-芳基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、C(＝O)-O-芳基-C(＝O)-O-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R4選自-H或取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基；
R5和R8獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、-NH2、或取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基；和
R10是-H。
用結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物在受試者中抑制酪氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療酪氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是FLT-3。在其它實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是c-Kit。還有一些其它實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是c-ABL。還有一些其它實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是FGFR3。還有一些其它實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是p60src。再在其它實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是VEGFR3。還有一些其它實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是PDGFRα。在其它實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是PDGFRβ。
用結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物在受試者中抑制酪氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療酪氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述結(jié)構(gòu)I的化合物具有以下結(jié)構(gòu)式。
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3有關(guān)的方法
一方面，本發(fā)明提供了在對(duì)象內(nèi)抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3的方法和/或在對(duì)象內(nèi)治療由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀的方法。該方法包括給予對(duì)象結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物。給藥后對(duì)象體內(nèi)的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3被抑制。本發(fā)明還提供了結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物在制備用于在對(duì)象內(nèi)抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3和/或在對(duì)象內(nèi)治療由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀的藥物中的應(yīng)用。
結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式
其中
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R′選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S-雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基和取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-芳基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基，C(＝O)-O-芳基-C(＝O)-O-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基和取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R4選自-H和取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基；
R5和R8獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基(arylakyl)、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基和取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、-NH2和取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基；和
R10是-H。
一些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳。
一些實(shí)施方案中，R9是H。
一些實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的環(huán)烷基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的雜環(huán)氧基或取代或未取代的雜環(huán)基烷氧基。一些這樣的實(shí)施方案中，R1是-F。
一些實(shí)施方案中，R2選自-H、-Cl、-F、-Br、-I、-NO2、-CN、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的噻吩基、取代或未取代的1，2，3，6-四氫吡啶基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的直鏈或支鏈烷氧基、取代或未取代的吡啶基烷氧基、取代或未取代的二烷基氨基或-CO2H。一些這樣的實(shí)施方案中，R2是-H。
一些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、甲氧基或二甲基氨基。一些這樣的實(shí)施方案中，R3是-H。
一些實(shí)施方案中，R4是H。
一些實(shí)施方案中，R5是H，R8是H。
一些實(shí)施方案中，R6或R7中至少一個(gè)是取代或未取代的雜環(huán)基。一些這樣的實(shí)施方案中，R6或R7之一是取代或未取代的雜環(huán)基，且所述雜環(huán)基選自嗎啉，哌嗪，哌啶，吡咯烷，硫代嗎啉，高哌嗪，四氫噻吩，四氫呋喃，或四氫吡喃。在其它這樣的實(shí)施方案中，R6或R7之一選自取代或未取代的嗎啉基或取代或未取代的哌嗪基。在其它這樣的實(shí)施方案中，R6或R7之一是N-烷基取代的哌嗪如N-甲基哌嗪。再在其它這樣的實(shí)施方案中，R6或R7之一是N-烷基取代的哌嗪，而R6或R7中的另一個(gè)是H，且R5和R8都是H。
一些實(shí)施方案中，所述生物癥狀是多發(fā)性骨髓瘤，且所述對(duì)象是具有t(4；14)染色體易位的多發(fā)性骨髓瘤患者。
一些實(shí)施方案中，所述生物癥狀是多發(fā)性骨髓瘤，所述對(duì)象是多發(fā)性骨髓瘤患者，所述多發(fā)性骨髓瘤表達(dá)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3。
一些實(shí)施方案中，所述對(duì)象是具有多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞多發(fā)性骨髓瘤患者，且在給予對(duì)象結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物之后在所述多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)出程序性細(xì)胞死亡。一些實(shí)施方案中，結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物被用來制備用于在多發(fā)性骨髓瘤患者的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡的藥物。
一些實(shí)施方案中，所述對(duì)象是多發(fā)性骨髓瘤患者，且在給予所述對(duì)象結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物之后所述對(duì)象的溶骨性骨流失被降低。一些實(shí)施方案中，結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物被用來制備用于降低多發(fā)性骨髓瘤患者中溶骨性骨流失的藥物。
一些實(shí)施方案中，所述對(duì)象是多發(fā)性骨髓瘤患者，且所述方法還包括在給予結(jié)構(gòu)I的化合物之前、期間或之后給予該對(duì)象地塞米松。
一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了含有結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物以及地塞米松的組合物。
一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了含有結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物以及地塞米松的治療組合物，作為同時(shí)、單獨(dú)或順序使用的聯(lián)合制劑以在對(duì)象內(nèi)抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3和/或在對(duì)象內(nèi)治療由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀。一些這樣的實(shí)施方案中，結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物以及地塞米松作為單一組合物提供，而在其它實(shí)施方案中，該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物以及地塞米松作為試劑盒的一部分分別提供。
一些實(shí)施方案中，結(jié)構(gòu)I的化合物或其互變體的乳酸鹽被給予對(duì)象和/或用來制造藥物。
一些實(shí)施方案中，結(jié)構(gòu)I的化合物具有以下結(jié)構(gòu)式
本發(fā)明還提供了結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽以及它們的混合物在抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3或用于治療諸如多發(fā)性骨髓瘤等由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽以及它們的混合物在制備和制造用于抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3或用于治療任何由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀的藥物中的應(yīng)用。一些實(shí)施方案中，該化合物可用來制備裝在容器內(nèi)的藥物，所述容器如小瓶、安瓿瓶或其它藥物制劑儲(chǔ)存設(shè)備，且這種儲(chǔ)存設(shè)備還可包括標(biāo)簽，標(biāo)簽上可包括用藥說明，如抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3的說明或治療具有由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀的對(duì)象的說明。
與細(xì)胞分化周期2激酶有關(guān)的方法
用結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物在受試者中抑制酪氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療酪氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是Cdc2、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3。在一些此類實(shí)施方案中，在給藥后，Cdc2或其它激酶在受試者體內(nèi)被抑制。在抑制Cdc2的方法中，結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式
其中，
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S-雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-芳基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基，C(＝O)-O-芳基-C(＝O)-O-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R4選自-H或取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基；
R5和R8獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、或-NH2；和
R10是-H。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)或取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2；
R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A或D之一是氮，且B和C都是碳。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的烷氧基或-NH2。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的羥基烷基，-NH2、取代和未取代的二烷基氨基烷基、取代和未取代的烷基氨基烷基、或取代和未取代的氨基烷基。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的飽和雜環(huán)基、取代和未取代的稠合不飽和雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基(其中雜環(huán)基部分是飽和的)、或取代和未取代的氨基烷基。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自4-氨基甲基芐基，苯并咪唑基、奎寧環(huán)基，哌啶基，哌啶基烷基，吡咯烷基、吡咯烷基烷基，N-烷基吡咯烷基烷基，咪唑基烷基，四氫呋喃基烷基，氨基環(huán)己基，羥基環(huán)己基或2，2-二甲基-3-氨基丙基。在一些此類實(shí)施方案中，R9是奎寧環(huán)基。在其它此類實(shí)施方案中，R9是奎寧環(huán)-3-基。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自單環(huán)、二環(huán)和多環(huán)的飽和雜環(huán)基。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9是-H。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl、取代和未取代的直鏈和支鏈烷氧基、取代和未取代的哌啶氧基(piperidinyloxy)、取代和未取代的嗎啉基、或取代和未取代的哌嗪基。在一些此類實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl。甲氧基、N-甲基哌啶-3-氧基(N-methylpiperidin-3-yloxy)，N-甲基哌啶-4-氧基，嗎啉-4-基，N-甲基哌嗪-4-基或N-乙基哌嗪-4-基。在其它此類實(shí)施方案中，R1是-H。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2或-CO2H。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-Cl、-F、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的苯基、取代和未取代的噻吩基、取代和未取代的1，2，3，6-四氫吡啶基、取代和未取代的吡啶基、取代和未取代的直鏈和支鏈烷氧基、取代和未取代的吡啶基烷氧基、取代和未取代的二烷基氨基或-CO2H。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2是取代和未取代的芳基，選自苯基、2-羥基苯基、2-氨基-4-羧基苯基、2，6-二氟苯基、3-甲氧基苯基、3-羧基苯基、3-乙酰苯基、3-氨基苯基、3-羥基苯基、3-乙酰氨基苯基、3-酰胺基苯基、4-氰基苯基、4-羥基苯基、4-甲氧基苯基或4-羧基苯基。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、甲基，甲氧基或-CO2H。在一些此類實(shí)施方案中，R2是-CO2H。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、或取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的苯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、未取代的直鏈和支鏈烷氧基、二烷基氨基烷氧基、取代和未取代的吡咯烷基烷氧基、取代和未取代的吡咯烷酮烷氧基(pyrrolidinonealkoxy)、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、或取代和未取代的-N(H)(吡咯烷基烷基)。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自甲氧基、3-乙酰氨基苯基、4-酰胺基苯基、4-羧基苯基、2-烷基咪唑基、N-烷基哌嗪基、3-取代的吡咯烷基、4-羧基氨基哌啶基(4-carboxyamidopiperidinyl)、二甲基氨基、或-N(H)(環(huán)己基烷基)，其中環(huán)己基部分被羥基取代。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、甲氧基和二甲基氨基。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R4選自-H或-CH3。在一些此類實(shí)施方案中，R4是-H。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R5和R8獨(dú)立選自-H、-F、-OH或飽和的雜環(huán)基；或者如果A是氮?jiǎng)tR5不存在；或如果D是氮?jiǎng)tR8不存在。在一些此類實(shí)施方案中，A和D都是碳，R5是-H，R8是-H。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、或取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-CN、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的直鏈和支鏈烷氧基、取代和未取代的吡咯烷基氧基、取代和未取代的哌啶基氧基、取代和未取代的吡咯烷基烷氧基、取代和未取代的四氫呋哺基烷氧基、取代和未取代的嗎啉基烷氧基、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(哌啶基)、取代和未取代的-N(烷基)(哌啶基)、取代和未取代的-N(H)(哌啶基烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、或取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-CN、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的吡咯烷基、取代和未取代的嗎啉基、取代和未取代的哌嗪基、取代和未取代的二氮雜基(diazepinyl)、取代和未取代的三唑基、取代和未取代的硫代嗎啉1-氧化物基團(tuán)、取代和未取代的吡啶基烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的直鏈和支鏈烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(哌啶基)、取代和未取代的-C(＝O)-(嗎啉-4-基)、或取代和未取代的-C(＝O)-(哌嗪-1-基)；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在。在一些此類實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-CN或-OH；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在。在其它此類實(shí)施方案中，B和C都是碳和R6和R7都是-H。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳和R5、R6、R7和R8都是-H。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，就Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ或FLT-3而言，化合物的IC50值小于或等于10μM。在其它此類實(shí)施方案中，IC50值小于或等于1μM，小于或等于0.1μM，小于或等于0.050μM，小于或等于0.030μM，小于或等于0.025μM或小于或等于0.010μM。
在受試者中抑制Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3的方法和/或在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述受試者是哺乳動(dòng)物或人。
在受試者中治療由Cdc2激酶、c-Kit、p60src、c-ABL、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3或FLT-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述生物病癥是癌癥。
與SRC、FGR、YES相關(guān)的FYN癌基因激酶有關(guān)的方法
用結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物在受試者中抑制酪氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療酪氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是Fyn。在一些此類實(shí)施方案中，在給藥后Fyn在受試者體內(nèi)被抑制。在抑制Fyn的方法中，結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式
其中
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、或取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；
R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的芳基、或取代和未取代的芳烷基；
R4選自-H或取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；
R5和R8獨(dú)立選自-H或取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基，-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；和
R10是-H。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、或取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A或D之一是氮，且B和C都是碳。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基或取代和未取代的雜環(huán)氧基。
在一些在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法實(shí)施方案中，R9選自-H、烷基氨基烷基、取代和未取代的飽和的雜環(huán)基或取代和未取代的雜環(huán)烷基，其中雜環(huán)基部分是飽和的。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、取代和未取代的奎寧環(huán)基、取代和未取代的哌啶基、取代和未取代的N-烷基哌啶基、取代和未取代的哌啶基烷基、取代和未取代的吡咯烷基、取代和未取代的N-烷基-吡咯烷基、或取代和未取代的吡咯烷基烷基。在一些此類實(shí)施方案中，R9是-H。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自奎寧環(huán)-3-基，哌啶-3-基，哌啶-4-基，N-甲基哌啶-4-基、3-哌啶基甲基或吡咯烷-3-基。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R1和R3獨(dú)立選自-H或-F。在一些此類實(shí)施方案中，R1是-H。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基、或取代和未取代的芳基。在一些此類實(shí)施方案中，R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代的含有1-4個(gè)碳的直鏈和支鏈烷基、或取代的芳基。在其它此類實(shí)施方案中，R2選自-H、-Cl、-Br和-I。還有一些其它此類實(shí)施方案中，R2是-H。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3是-H。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3是-F。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R4是-H。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R5是-H；或者B是氮而R5不存在。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、或取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)或取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的飽和的雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)，其中，所述雜環(huán)基部分是飽和的、或取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。在其它此類實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F或-Cl；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。在其它此類實(shí)施方案中，B是碳和R6是-H；或C是碳和R7是-H。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自取代和未取代的哌嗪基、取代和未取代的嗎啉基、取代和未取代的吡咯烷基、取代和未取代的-N(烷基)(哌啶基)或取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自4-烷基哌嗪-1-基，4-烷基-2-烷基-哌嗪-1-基，4-烷基-3-烷基哌嗪-1-基，嗎啉-4-基，2-二烷基氨基烷基-5-烷基嗎啉-4-基、3-二烷基氨基吡咯烷-1-基、3-二烷基氨基烷基吡咯烷-1-基，-N(烷基)(1-烷基哌啶基)、或-N(烷基)-C(＝O)-烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自4-甲基哌嗪-1-基，4-乙基哌嗪-1-基，4-異丙基哌嗪-1-基，4-甲基-2-甲基哌嗪-1-基，4-乙基-2-甲基哌嗪-1-基，4-異丙基-2-甲基哌嗪-1-基，4-環(huán)丁基-2-甲基哌嗪-1-基，4-甲基-3-甲基哌嗪-1-基，嗎啉-4-基，2-二甲基氨基甲基-5-甲基嗎啉-4-基、3-二甲基氨基吡咯烷-1-基、3-二甲基氨基甲基吡咯烷-1-基，-N(甲基)(1-甲基哌啶-4-基)、或-N(甲基)-C(＝O)-甲基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，就Fyn而言，化合物的IC50值小于或等于10μM。在其它此類實(shí)施方案中，IC50值小于或等于1μM，小于或等于0.1μM，小于或等于0.050μM，小于或等于0.030μM，小于或等于0.025μM或小于或等于0.010μM。
在受試者中抑制Fyn的方法和/或在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述受試者是哺乳動(dòng)物或人。
在受試者中治療由Fyn活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述生物病癥是自身免疫疾病，在一些此類實(shí)施方案中所述生物病癥是風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或系統(tǒng)性紅斑狼瘡。在其它此類實(shí)施方案中，所述生物病癥是器官移植排斥。
與淋巴細(xì)胞特異性蛋白質(zhì)酪氨酸激酶有關(guān)的方法
用結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物在受試者中抑制酪氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療酪氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是Lck。在一些此類實(shí)施方案中，在給藥后Lck在受試者體內(nèi)被抑制。在抑制Lck的方法中，結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式
其中，
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1，R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、或取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；
R4選自-H或取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；
R5和R8獨(dú)立選自-H或取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基，-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的烷氧基或取代和未取代的雜環(huán)氧基；和
R10是-H。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基，-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、或取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳。
在一些在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的實(shí)施方案中，A或D之一是氮，且B和C都是碳。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、取代和未取代的含有1-8個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、或取代和未取代的雜環(huán)氧基。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、取代和未取代的飽和的雜環(huán)基或取代和未取代的雜環(huán)烷基，其中，所述雜環(huán)基部分是飽和的。在一些此類實(shí)施方案中，R9選自奎寧環(huán)基，哌啶基，N-烷基哌啶基，哌啶基烷基，吡咯烷基或吡咯烷基烷基。在其它此類實(shí)施方案中，R9是-H。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R1和R3獨(dú)立選自-H或-F。在一些此類實(shí)施方案中，R1是-H。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I或取代和未取代的含有1-4個(gè)碳的直鏈和支鏈烷基。在一些此類實(shí)施方案中，R2選自-H、-F、-Cl、-Br和甲基。在其它此類實(shí)施方案中，R2選自-H、-Cl和-Br。再在其它此類實(shí)施方案中，R2是-H。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的脈沖實(shí)施方案中，R3是-H。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R4是-H。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A是碳且R5是-H；或D是碳且R8是-H。在一些此類實(shí)施方案中，A和D都是碳，R5和R8都是-H。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、或取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)或取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的飽和的雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)，其中，所述雜環(huán)基部分是飽和的，取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。在一些此類實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F或-Cl；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。在其它此類實(shí)施方案中，B是碳且R6是-H；或C是碳且R7是-H。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自取代和未取代的哌嗪基、取代和未取代的嗎啉基、取代和未取代的吡咯烷基、取代和未取代的-N(烷基)(哌啶基)或取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自4-烷基哌嗪-1-基，4-烷基-2-烷基-哌嗪-1-基，4-烷基-3-烷基哌嗪-1-基，嗎啉-4-基，2-二烷基氨基烷基-5-烷基嗎啉-4-基、3-二烷基氨基吡咯烷-1-基、3-二烷基氨基烷基吡咯烷-1-基，-N(烷基)(1-烷基哌啶基)、或-N(烷基)-C(＝O)-烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自4-甲基哌嗪-1-基，4-乙基哌嗪-1-基，4-異丙基哌嗪-1-基，4-甲基-2-甲基哌嗪-1-基，4-乙基-2-甲基哌嗪-1-基，4-異丙基-2-甲基哌嗪-1-基，4-環(huán)丁基-2-甲基哌嗪-1-基，4-甲基-3-甲基哌嗪-1-基，嗎啉-4-基，2-二甲基氨基甲基-5-甲基嗎啉-4-基、3-二甲基氨基吡咯烷-1-基、3-二甲基氨基甲基吡咯烷-1-基，-N(甲基)(1-甲基哌啶-4-基)、或-N(甲基)-C(＝O)-甲基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，就Lck而言，化合物的IC50值小于或等于10μM。在其它此類實(shí)施方案中，IC50值小于或等于1μM，小于或等于0.1μM，小于或等于0.050μM，小于或等于0.030μM，小于或等于0.025μM或小于或等于0.010μM。
在受試者中抑制Lck的方法和/或在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述受試者是哺乳動(dòng)物或人。
在受試者中治療由Lck活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述生物病癥是自身免疫疾病，在一些此類實(shí)施方案中所述生物病癥是風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或系統(tǒng)性紅斑狼瘡。在其它此類實(shí)施方案中，所述生物病癥是器官移植排斥。
與Tie-2有關(guān)的方法
用結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物在受試者中抑制酪氨酸激酶的方法和/或在受試者中治療酪氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是Tie-2。在一些此類實(shí)施方案中，在給藥后Tie-2在受試者體內(nèi)被抑制。在抑制Tie-2的方法中，結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式
其中，
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基，-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-SH、取代和未取代的-S-烷基，-CO2H、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、或取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基；或R2和R3可連接在一起形成環(huán)狀基團(tuán)；
R3和R4獨(dú)立選自-H或取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；
R5選自-H、-F、-Cl、-Br、-I或取代和未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；
R6選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；
R7選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基，-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在；
R8選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、-NH2、或取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基；或R9和R10連接在一起形成5、6或7元環(huán)；和
R10是-H。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、或取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；
R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的環(huán)烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；
R6選自-H、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、或取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；
R7選自-H、-Cl、-F、-Br、取代和未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基，-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、或取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)，；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A或D之一是氮，且B和C都是碳。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基，-NH2、或取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、取代和未取代的飽和的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基(其中雜環(huán)基部分是飽和的)、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基(其中雜環(huán)基部分是飽和的)、或取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基(其中雜環(huán)基部分是飽和的)。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自-H、取代和未取代的環(huán)烷基、取代和未取代的飽和的雜環(huán)基或取代和未取代的烷氧基。在一些此類實(shí)施方案中，R9選自-H或奎寧環(huán)基。在其它此類實(shí)施方案中，R9是-H。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl，-OCH3取代和未取代的哌啶氧基、取代和未取代的哌啶基烷氧基、取代和未取代的嗎啉氧基、或取代和未取代的嗎啉基烷氧基。在一些此類實(shí)施方案中，R1選自-H或-Cl。在其它此類實(shí)施方案中，R1是-H。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CH3、取代和未取代的吡啶基烷氧基。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2是-H。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3是-H。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R4是-H。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R5是-H，或者如果A是氮?jiǎng)t不存在。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6選自-H、取代和未取代的嗎啉基、取代和未取代的嗎啉基烷氧基、取代和未取代的吡咯烷基、取代和未取代的吡咯烷基烷氧基、取代和未取代的哌啶基、取代和未取代的哌啶氧基、取代和未取代的哌嗪基、或取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2；或者如果B是氮?jiǎng)t可以不存在。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R7選自-H、-F、-Cl、取代和未取代的嗎啉基、取代和未取代的吡啶基烷基、或取代和未取代的哌嗪基；或者如果C是氮?jiǎng)t可以不存在。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R8是-H，或者如果D是氮?jiǎng)t不存在。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，就Tie-2而言，化合物的IC50值小于或等于10μM。在其它此類實(shí)施方案中，IC50值小于或等于1μM，小于或等于0.1μM，小于或等于0.050μM，小于或等于0.030μM，小于或等于0.025μM或小于或等于0.010μM。
在受試者中抑制Tie-2的方法和/或在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述受試者是哺乳動(dòng)物或人。
在受試者中治療由Tie-2活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述生物病癥是癌癥。
在受試者中治療由絲氨酸/蘇氨酸激酶或酪氨酸激酶活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述化合物、互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，是藥物制劑或藥物的一種組分，所述藥物制劑或藥物中還含藥學(xué)上可接受的載體。在一些此類實(shí)施方案中，所述絲氨酸/蘇氨酸激酶或酪氨酸激酶活性選自FLT-1、VEGFR2、VEGFR3、FGFR1、GSK-3、Cdk2、NEK-2、CHK1、Rsk2、PAR-1、Cdc2、c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、FLT-3、Fyn、Lck、Tie-2、PDGFRα或PDGFRβ活性。在其它此類實(shí)施方案中，所述絲氨酸/蘇氨酸激酶或酪氨酸激酶活性選自GSK-3、Cdk2、CHK1、Rsk2、PAR-1、Cdc2、c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ，F(xiàn)LT-3、Fyn、Lck或Tie-2活性。在其它此類實(shí)施方案中，所述絲氨酸/蘇氨酸激酶活性是CHK1活性。
在其它方面，本發(fā)明提供了結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽、及其混合物。本發(fā)明也提供了具有上文所述的各個(gè)實(shí)施方案中所描述的R1-R10含義的化合物。
本發(fā)明還提供了結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，及其混合物在制備藥物和治療由FLT-1、VEGFR2、VEGFR3、FGFR1、GSK-3、Cdk2、NEK-2、CHK1、Rsk2、PAR-1、Cdc2、c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、FLT-3、Fyn、Lck、Tie-2、PDGFRα或PDGFRβ活性介導(dǎo)的生物病癥中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了用結(jié)構(gòu)IB的化合物在受試者中抑制GSK-3的方法和治療由GSK-3介導(dǎo)的生物病癥的方法。本發(fā)明也提供了結(jié)構(gòu)IB的化合物在制備用于在受試者中抑制GSK-3和/或用于治療由GSK-3介導(dǎo)的生物病癥的藥物中的應(yīng)用。一方面，抑制GSK-3或治療由GSK-3介導(dǎo)的生物病癥的方法包括給予所述受試者結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物。本發(fā)明還提供了用結(jié)構(gòu)IB的化合物抑制本文所述的任何其它激酶的方法和由這些激酶介導(dǎo)的生物病癥的方法。在一些實(shí)施方案中，在給藥后GSK-3在受試者體內(nèi)被抑制。結(jié)構(gòu)IB具有以下結(jié)構(gòu)式
其中
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
W、X、Y和Z獨(dú)立選自碳和氮，且W、X、Y和Z至少之一是氮；
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-CN、-NO2、-OH、-SH、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基，-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基，-NH2、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、或取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基；或如果W是氮?jiǎng)tR1可以不存在；
R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-OH、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的環(huán)烯基、取代或未取代的環(huán)烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-SH、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-雜環(huán)基、-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)基、-N(H)-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)2、-N(烷基)-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(烷基)、或取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)2；或當(dāng)X和Y都是碳時(shí)R2和R3可連接在一起形成環(huán)狀基團(tuán)；或如果X是氮?jiǎng)tR2可以不存在；
R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的烷氧基、-CO2H、-CN、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(H)(環(huán)烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-NO2、-SH、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基，-NH2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)基、-N(H)-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-N(烷基)2、-N(烷基)-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(H)(烷基)或取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-N(烷基)2；或當(dāng)X和Y都是碳時(shí)R2和R3可連接在一起形成環(huán)狀基團(tuán)；或如果Y是氮?jiǎng)tR3可以不存在；
R4選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-CN、-NO2、-OH、-SH、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基，-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基，-NH2、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、或取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基；或如果Z是氮?jiǎng)tR4可以不存在；
R5選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-CN、-NO2、-OH、-SH、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基、-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基、-NH2、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、或取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；
R6選自-H、-Cl、-F、-Br、-OH、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代或未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-CN、-NO2、-OH、-SH、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基，-NH2、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-烷基、或取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；
R7選自-H、-Cl、-F、-Br、-OH、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代或未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-CN、-NO2、-OH、-SH、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基，-NH2、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基、取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-烷基、或取代或未取代的-N(烷基)-S(＝O)-雜環(huán)基；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在；
R8選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的烯基、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的炔基、-CN、-NO2、-OH、-SH、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-S-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代或未取代的-S(＝O)2-烷基、取代或未取代的-S(＝O)-烷基、-S(＝O)-NH2、取代或未取代的-S(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-S(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代或未取代的-C(＝O)-O-烷基、-NH2、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、或取代或未取代的-N(H)-S(＝O)-烷基；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R9選自取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷氧基、-NH2、取代或未取代的環(huán)烷基、或取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，或R9和R10連接在一起形成5、6或7元環(huán)；或
R10是-H，或R9和R10連接在一起形成5、6或7元環(huán)。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I或有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；或如果W是氮?jiǎng)tR1可以不存在；
R2選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-OH、有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的環(huán)烯基、取代或未取代的環(huán)烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的雜環(huán)基、或取代或未取代的芳基；或如果X是氮?jiǎng)tR2可以不存在；
R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的烷氧基、-CO2H、-CN、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(H)(環(huán)烷基)、取代或未取代的-N(烷基)2、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-C(＝O)-烷基、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、-C(＝O)-NH2、取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、或取代或未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)；或如果Y是氮?jiǎng)tR3可以不存在；
R4選自-H、-F、-Cl、-Br、-I或有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；或如果Z是氮?jiǎng)tR4可以不存在；
R5選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、或取代或未取代的雜環(huán)基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；
R6選自-H、-Cl、-F、-Br、-OH、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代或未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代或未取代的烷氧基、或取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基；或者如果B是氮?jiǎng)tR6可以不存在；
R7選自-H、-Cl、-F、-Br、-OH、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的-N(H)(烷基)、取代或未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代或未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代或未取代的烷氧基、或取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的烷基；或者如果C是氮?jiǎng)tR7可以不存在；和
R8選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、或取代或未取代的雜環(huán)基；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，抑制GSK-3的方法的某些實(shí)施方案中，A、B、C和D都是碳。在一些此類實(shí)施方案中，R5是-H、R6是-H、R7是-H，R8是-H
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，A或D之一是氮，且B和C都是碳。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，W是氮。在一些此類實(shí)施方案中，X、Y和Z都是碳。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，X是氮。在一些此類實(shí)施方案中，W、Y和Z都是碳。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，Y是氮。在一些此類實(shí)施方案中，W、X和Z都是碳。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，Z是氮。在一些此類實(shí)施方案中，W、X和Y都是碳。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的互變體的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，W、X、Y和Z中有兩個(gè)是氮原子。在一些此類實(shí)施方案中，X和Z是氮原子，W和Y是碳原子。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷氧基、-NH2、取代或未取代的環(huán)烷基、或取代或未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的芳基，未取代的烷氧基、-NH2、取代或未取代的環(huán)烷基，未取代的有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的雜環(huán)烷基(其中所述雜環(huán)基是飽和的)、取代或未取代的雜環(huán)烷基(其中所述雜環(huán)基是不飽和的)、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的羥基烷基、取代或未取代的二烷基氨基烷基、取代或未取代的烷基氨基烷基、取代或未取代的氨基烷基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代或未取代的(雜環(huán)基)(烷基)氨基烷基、或取代或未取代的烷基-(SO2)-烷基。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R10是-H，R9選自取代或未取代的飽和的雜環(huán)基、取代或未取代的氨基烷基、取代或未取代的環(huán)烷基、或取代或未取代的雜環(huán)烷基。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自奎寧環(huán)基，哌啶基，吡咯烷基和氨基環(huán)己基。在一些此類實(shí)施方案中，R9是奎寧環(huán)基，在一些此類實(shí)施方案中，R9是奎寧環(huán)-3-基。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R9選自單環(huán)、二環(huán)或多環(huán)的飽和雜環(huán)基。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R1選自-H、-F、-Cl或-CH3。在一些此類實(shí)施方案中，R1是-H或-F。在其它此類實(shí)施方案中，R1是-H。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2選自-H、-Cl、-F、-Br、-I、-CH3、-NO2、-OMe、-CN、-CO2H、取代或未取代的1，2，3，6-四氫吡啶、取代或未取代的噻吩基、取代或未取代的咪唑基、取代或未取代的3-吡啶基、取代或未取代的4-吡啶基、2-取代的苯基、2，4-二取代的苯基、4-取代的苯基、3-取代的苯基、2，6-二取代的苯基、苯基、取代或未取代的二烷基氨基、或取代或未取代的烷基氨基。在一些此類實(shí)施方案中，R2選自-H、-Cl、-F或-CH3。在其它此類實(shí)施方案中，R2是-F。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R2是取代或未取代的芳基，選自苯基、2-氯苯基、2-甲基苯基、2-乙基苯基、2-羥基苯基、2-甲氧基苯基、2-三氟甲基苯基、3-甲氧基苯基、3-硝基苯基、3-羧基苯基、3-乙酰苯基、3-氨基苯基、3-羥基苯基、3-乙酰氨基苯基、3-甲酯基苯基、3-三氟甲基苯基、3-脲基苯基、4-氯苯基、4-氰基苯基、4-羥基苯基、4-硝基苯基、4-乙基苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-乙酰苯基、4-乙酰氨基苯基、4-羧基苯基、4-甲酰苯基、4-甲硫基苯基、4-二甲基氨基苯基、4-甲酯基苯基、4-乙酯基苯基、4-酰胺基苯基、4-(甲基磺酰)苯基、4-三氟甲基苯基、2，4-二氟苯基、2-氟-4-氯苯基、2，4-二氯苯基、2-氨基-4-甲酯基苯基、2-氨基-4-羧基苯基、2，6-二氟苯基或3，4-(亞甲二氧基)苯基。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R4是-H或-CH3。在一些此類實(shí)施方案中，R4是-H。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R5和R8獨(dú)立選自-H或飽和雜環(huán)基或不存在。在一些此類實(shí)施方案中，R5和R8獨(dú)立選自-H或飽和雜環(huán)基。在一些此類實(shí)施方案中R5是-H，R8是-H。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-OH或取代或未取代的雜環(huán)基。在一些此類實(shí)施方案中，R6是-H，R7是-H。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R5是-H、R6是-H、R7是-H，R8是-H。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-CH3、-OH、-CN、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的烷基氨基、取代或未取代的二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、或-C(＝O)-NH2。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-CH3、-CN、-OMe、羥基烷基氨基、二烷基氨基、二烷基氨基烷基氨基，烷氧基烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)烷基氨基，乙酰胺基烷基氨基，氰基烷基氨基，烷氧基烷基氨基，烷硫基氨基，(甲基磺酰)烷基氨基，環(huán)烷基烷基氨基、二烷基氨基烷氧基、雜環(huán)基烷氧基、取代或未取代的哌啶基、取代或未取代的咪唑基、取代或未取代的嗎啉基、取代或未取代的吡咯基、取代或未取代的吡咯烷基、取代或未取代的哌嗪基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代或未取代的-C(＝O)-N(烷基)2或-C(＝O)-NH2。在一些實(shí)施方案中，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、-CH3、-OH、-CN、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的烷基氨基、取代和未取代的二烷基氨基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2和-C(＝O)-NH2。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R3選自取代或未取代的烷基氨基或取代或未取代的二烷基氨基。在一些此類實(shí)施方案中，R3是二甲基氨基。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，R4、R5、R6、R7、R8和R10都是-H。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，就GSK-3而言，化合物的IC50值小于或等于10μM。在其它此類實(shí)施方案中，IC50值小于或等于1μM，小于或等于0.1μM，小于或等于0.050μM，小于或等于0.030μM，小于或等于0.025μM或小于或等于0.010μM。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物，在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述受試者是哺乳動(dòng)物，在一些實(shí)施方案中是人。
用結(jié)構(gòu)IB的化合物在受試者中抑制GSK-3的方法和/或在受試者中治療由GSK-3活性介導(dǎo)的生物病癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述生物病癥是糖尿病，在一些此類實(shí)施方案中所述生物病癥是非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)。在其它此類實(shí)施方案中，所述生物病癥是阿爾茨海默氏病或是雙相性精神障礙(bipolar disorder)。
在含有雜環(huán)基的基團(tuán)中，雜環(huán)基可以各種方式連接。例如，在雜環(huán)基烷氧基中，雜環(huán)基可通過不同環(huán)原子連接到雜環(huán)基烷氧基的烷氧基的亞甲基碳上。以非限制性例子表述，雜環(huán)基烷氧基的雜環(huán)基是四氫呋喃，該基團(tuán)可用式-OCH2CH2(四氫呋喃基)表示，它相應(yīng)于以下兩種結(jié)構(gòu)
結(jié)構(gòu)II表示的基團(tuán)可叫做-OCH2CH2(2-四氫呋喃基)或-OCH2CH2(四氫呋喃-2-基)，結(jié)構(gòu)III表示的基團(tuán)可叫做-OCH2CH2(3-四氫呋喃基)或-OCH2CH2(四氫呋喃-3-基)。當(dāng)雜環(huán)基是一含N雜環(huán)時(shí)，例如但不限于哌啶，哌嗪，嗎啉或吡咯烷，該雜環(huán)可通過環(huán)碳原子或通過含N雜環(huán)的環(huán)氮原子連接到亞甲基碳上。這兩種都是優(yōu)選的。當(dāng)對(duì)-OCH2CH2CH2(雜環(huán)基)的雜環(huán)基是哌啶時(shí)，以下結(jié)構(gòu)是可能的并且是優(yōu)選的
結(jié)構(gòu)IV是-O(CH2)3(N-哌啶基)或-O(CH2)3(1-哌啶基)或-O(CH2)3(哌啶-1-基)的例子。結(jié)構(gòu)V是-O(CH2)3-(2-哌啶基)或-O(CH2)3-(哌啶-2-基)的例子。結(jié)構(gòu)VI是-O(CH2)3(3-哌啶基)或-O(CH2)3(哌啶-3-基)的例子。結(jié)構(gòu)VII是-O(CH2)3(4-哌啶基)或-O(CH2)3(哌啶-4-基)的例子。當(dāng)-OCH2CH2(雜環(huán)基)的雜環(huán)基是哌嗪時(shí)，以下結(jié)構(gòu)是可能的并且是優(yōu)選的
結(jié)構(gòu)VIII是-O(CH2)2(2-哌嗪基)或-O(CH2)2(哌嗪-2-基)的例子，結(jié)構(gòu)IX是-O(CH2)2(1-哌嗪基)或-O(CH2)2(N-哌嗪基)或-O(CH2)2(哌嗪-1-基)的例子。當(dāng)-OCH2CH2(雜環(huán)基)的雜環(huán)基是嗎啉時(shí)，以下結(jié)構(gòu)是可能的并且是優(yōu)選的
結(jié)構(gòu)X是-O(CH2)2(3-嗎啉基)或-O(CH2)2(嗎啉-3-基)的例子，結(jié)構(gòu)XI是-O(CH2)2(4-嗎啉基)或-O(CH2)2(N-嗎啉基)或-O(CH2)2(嗎啉-4-基)的例子，結(jié)構(gòu)XII是-O(CH2)2(2-嗎啉基)或-O(CH2)2(嗎啉-2-基)的例子?？捎^察到，當(dāng)-OCH2CH2(雜環(huán)基)中的雜環(huán)基是吡咯烷時(shí)，可以存在的結(jié)構(gòu)包括-O(CH2)2(1-吡咯烷基)或-O(CH2)2(N-吡咯烷基)基或-O(CH2)2(吡咯烷-1-基)，-O(CH2)2(2-吡咯烷基)或-O(CH2)2(吡咯烷-2-基)和-O(CH2)2(3-吡咯烷基)或-O(CH2)2(吡咯烷-3-基)。
結(jié)構(gòu)I和IB的化合可由簡(jiǎn)單的起始分子合成，如過程1-6和實(shí)施例所示。如過程1所示，結(jié)構(gòu)I的化合物的羥基衍生物通常用被胺和羧酸基取代的芳族化合物制備?？捎眠^程3和5以及實(shí)施例中所描述的方法將這些化合物轉(zhuǎn)化成結(jié)構(gòu)I的化合物?？捎迷摶衔锏暮线m的雜芳類似物類似地制備結(jié)構(gòu)I的雜環(huán)類似物(如結(jié)構(gòu)IB的化合物)的羥基衍生物，如過程2所示。然后可用過程4和5中所述的方法將這些化合物轉(zhuǎn)化成結(jié)構(gòu)I的雜環(huán)類似物，如結(jié)構(gòu)IB的化合物。
過程1
如過程1所示，取代的芳族化合物如取代或未取代的2-氨基苯甲酸可與酰鹵如2-(氯羰基)乙酸甲酯反應(yīng)產(chǎn)生酰胺，所得酰胺再與取代或未取代的1，2-二氨基苯反應(yīng)。所得產(chǎn)物是結(jié)構(gòu)I化合物的4-羥基-取代的類似物。
過程2
如過程2所示，可將取代的吡啶，如取代或未取代的3-氨基-吡啶-4-羧酸，與酰鹵如2-(氯羰基)乙酸甲酯反應(yīng)，得到一種酰胺，此酰胺與取代或未取代的1，2-二氨基苯或吡啶類似物反應(yīng)。所得產(chǎn)物是結(jié)構(gòu)I或IB化合物的4-羥基-取代的雜環(huán)類似物。使用具有不同取代基模式的起始吡啶，如2-氨基煙酸(2-氨基吡啶-4-羧酸)，可得到氮在最終化合物的吡啶環(huán)不同位置的化合物。精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員將知道，可改變過程2中所列的步驟，制備結(jié)構(gòu)I和IB的化合物的各種4-羥基雜環(huán)類似物。
過程3例舉了結(jié)構(gòu)I的各種化合物的常規(guī)合成途徑。由過程3可見，通過與磷酰氯或亞硫酰氯反應(yīng)，可將結(jié)構(gòu)I化合物的4-羥基取代的類似物轉(zhuǎn)化成4-氯衍生物。然后將此4-氯衍生物與合適的胺，如烷基胺、二烷基胺、雜環(huán)基胺、環(huán)烷基胺、芳胺等反應(yīng)，制得相應(yīng)的被保護(hù)的結(jié)構(gòu)I化合物。脫保護(hù)后得到最終所需的結(jié)構(gòu)I的化合物。
用來合成靛紅酸酐的各種2-氨基苯甲酸原料可獲自商業(yè)來源，或用精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的方法制備。常規(guī)的靛紅酸酐合成法描述在J.Med.Chem.1981，24(6)，735和J.Heterocycl.Chem.1975，12(3)，565，出于所有目的，它們已被全文引入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣。
過程3
過程4例舉了合成結(jié)構(gòu)IB的各種雜環(huán)化合物的常規(guī)合成途徑。由過程4可見，通過與磷酰氯或亞硫酰氯反應(yīng)，可將結(jié)構(gòu)I的4-羥基取代的類似物轉(zhuǎn)化成4-氯衍生物。然后將此4-氯衍生物與合適的胺，如烷基胺、二烷基胺、雜環(huán)基胺、環(huán)烷基胺、芳胺等反應(yīng)，制得相應(yīng)的被保護(hù)的結(jié)構(gòu)IB化合物。脫保護(hù)后得到最終所需的結(jié)構(gòu)I的雜環(huán)類似物。
過程4
過程5例舉了合成結(jié)構(gòu)I的各種化合物的常規(guī)合成途徑。由過程5可見，用三氟甲磺酸化試劑如三氟甲磺酸酐通過三氟甲磺酸化可將結(jié)構(gòu)I的化合物的4-羥基取代的類似物的羥基轉(zhuǎn)化成離去基團(tuán)。所得三氟甲磺酸酯可與各種含氮親核試劑如3-氨基奎寧環(huán)和其它的胺反應(yīng)以制得被保護(hù)的結(jié)構(gòu)I的化合物的類似物。將所得產(chǎn)物脫保護(hù)得到所需的結(jié)構(gòu)I的化合物?？捎妙愃频姆椒▉碇苽浣Y(jié)構(gòu)I的雜環(huán)化合物。
過程5
如過程6所示，可簡(jiǎn)便地制備雜芳二胺并將其用作結(jié)構(gòu)I和IB的化合物的前體和結(jié)構(gòu)I和IB化合物的雜環(huán)類似物的前體(其中A、B、C或D中的一個(gè)或多個(gè)是氮)。
過程6
如過程6所示，氰基乙酸乙酯等化合物可與含有兩個(gè)鄰位氨基的取代或未取代的雜環(huán)如取代或未取代的1，2-二氨基吡啶縮合，得到取代或未取代的2-咪唑并[5，4-b]吡啶-2-基乙腈，隨后在酸性介質(zhì)中將其水解，得到取代或未取代的2-咪唑并[5，4-b]吡啶-2-基乙酸乙酯。另一種方法是，可從3-乙氧基-3-亞氨基丙酸酯的鹽酸鹽的化合物和取代或未取代的1，2-二氨基吡啶得到取代或未取代的2-咪唑并[5，4-b]吡啶-2-基乙酸乙酯。取代或未取代的2-咪唑并[5，4-b]吡啶-2-基乙酸乙酯與合適的芳香化合物反應(yīng)得到了結(jié)構(gòu)I化合物，和其中A、B、C或D中一個(gè)或多個(gè)是氮原子的結(jié)構(gòu)I的化合物的雜環(huán)類似物。
過程7
在苯并咪唑環(huán)上引入取代基不必局限于合成的早期階段，可在喹啉酮環(huán)形成后再完成。例如可將過程7中所示的預(yù)先的酸中間體與各種胺偶合，得到酰胺。
過程8
將C-6或C-7鹵化物轉(zhuǎn)化成酸基是用以下文獻(xiàn)中所述的方法實(shí)現(xiàn)的--Koga，H.等，Tet.Let.，1995，36，1，87-90和Fukuyama，T.等，J.Am.Chem.Soc.，1994，116，3125-3126，出于所有目的，它們已被全文參考，這就好像在這里完整列出一樣。
過程9
將C-6或C-7鹵化物轉(zhuǎn)化成氰基是用在以下文獻(xiàn)中的方法實(shí)現(xiàn)的--Anderson，B.A.等，J.Org.Chem.，1998，63，8224-828，出于所有目的，它們已被全文參考，這就好像在這里完整列出一樣。優(yōu)選的過程9的反應(yīng)條件在下面的方法26中描述。
過程10
將C-6或C-7鹵化物轉(zhuǎn)化成芳基是用標(biāo)準(zhǔn)Suzuki法或Stille法實(shí)現(xiàn)的，如下所述。
過程11
如過程11所述，通過使二氫喹諾酮與親核試劑如胺、醇和硫醇反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)了使用二鹵喹諾酮的其它功能化。
結(jié)構(gòu)I和IB的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，及其混合物可用來制備藥物，該藥物可用于本文所述的目的，并可用來治療本文所述的各種生物病癥。
藥物制劑可含有上文所述的任何實(shí)施方案中的任何化合物，以及本文所述的藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明也提供了組合物，所述組合物可通過將本發(fā)明的一種或多種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽互變體，或其混合物，與藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、粘合劑、稀釋劑等混合來制備，該組合物可用來治療或緩解各種與VEGF-RTK活性有關(guān)的病癥，更具體是伴隨癌癥的血管發(fā)生，或與FLT-1、VEGFR2、VEGFR3、FGFR1、GSK-3、Cdk2、Cdk4、MEK1、NEK-2、CHK2、CK1ε、Raf、NEK-2、CHK1、Rsk2、PAR-1、Cdc2、c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、FLT-3、Fyn、Lck、Tie-2、PDGFRα和PDGFRβ活性有關(guān)的病癥。本發(fā)明的組合物可用來制造制劑，如抑制酪氨酸激酶和/或絲氨酸/蘇氨酸激酶的藥物或藥物制劑，并可被用來治療由這些激酶介導(dǎo)的生物病癥。所述組合物可以是以下形式，例如，顆粒、粉劑、片劑、膠凝劑、糖漿、栓劑、注射劑、乳劑、酏劑、懸浮或溶液。本發(fā)明的組合物可被制成通過各種途徑給藥。例如，通過口服給藥、通過鼻給藥、通過直腸給藥、皮下注射、靜脈注射、肌肉內(nèi)注射或腹膜內(nèi)注射。例舉了以下劑型但本發(fā)明不限于此。
對(duì)于口服、含服和舌下給藥，可接受的固體劑型有粉劑，懸浮劑，顆粒劑，片劑，丸劑，膠囊劑，凝膠膠囊和囊片。這些劑型可通過，例如，將一種或多種本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、互變異構(gòu)體或混合物與至少一種添加劑如淀粉或其它添加劑混合制得。合適的添加劑是蔗糖、乳糖、纖維素糖、甘露醇、麥芽糖醇、葡聚糖、淀粉、瓊脂、藻酸鹽、殼多糖、殼聚糖、果膠、黃蓍膠、阿拉伯膠、明膠、膠原、酪蛋白、白蛋白、合成或半合成聚合物或甘油酯。任選地，口服劑型可含有其它成分以幫助用藥，如惰性稀釋劑，或潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂，或防腐劑如對(duì)羥基苯甲酸酯或山梨酸，或抗氧化劑如抗壞血酸，生育酚或半胱氨酸，崩解劑，粘合劑，增稠劑，緩沖劑，增甜劑，調(diào)味劑或香味劑。還可用此領(lǐng)域已知的合適的包衣材料來處理片劑和丸劑。
供口服的液體劑型可用是藥學(xué)上可接受的乳劑、糖漿劑、酏劑、懸浮劑和溶液劑，它可含有惰性稀釋劑，如水。所述藥物制劑和藥物可用無菌液體，例如但不限于油、水、醇和它們的混合物，制成液體懸浮劑或溶液劑?？杉尤胫扑幧虾线m的表面活性劑、懸浮劑、乳化劑以進(jìn)行口服或腸胃外給藥。
如上所述，懸浮劑可包括油類。所述油包括但不限于花生油、芝麻油、棉籽油、玉米油和橄欖油。懸浮制劑還可含有脂肪酸的酯類，如油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、甘油脂肪酸酯和乙?；母视椭舅狨?。懸浮制劑可含有醇類，例如但不限于乙醇，異丙醇、十六醇、甘油和丙二醇。醚類，例如但不限于，聚(乙二醇)，石油烴類，如礦物油和礦脂；并可在懸浮制劑中使用水。
對(duì)于鼻內(nèi)給藥，所述藥物制劑和藥物可以是噴霧劑或氣霧劑，其中含有合適溶劑和任選的其它化合物，例如但不限于穩(wěn)定劑、殺菌劑、抗氧化劑、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、生物利用度修飾劑及其組合。氣霧劑的推進(jìn)劑可包括壓縮空氣、氮?dú)狻⒍趸蓟蚧跓N的低沸點(diǎn)溶劑。
可注射的劑型通常包括水性懸液或油性懸液，它可用合適的分散劑或潤(rùn)濕劑以及懸浮劑制備。可注射形式可以在溶液相中或?yàn)閼腋∫旱男问?，它可用溶劑或稀釋劑制備?？山邮艿娜軇┗蛸x形劑包括無菌水、林格溶液或等滲生理鹽水?；蛘?，可將無菌油類用作溶劑或懸浮劑。優(yōu)選的，所述油或脂肪酸是非揮發(fā)性的，包括天然或合成油類、脂肪酸、單-、二-或三-甘油酯。
對(duì)于注射，所述藥物制劑和/或藥物可以是適合用上述合適溶液重建的粉劑。其例子包括但不限于，凍干、旋轉(zhuǎn)干燥或噴霧干燥的粉末、無定形粉末、微粒、沉淀物或顆粒。對(duì)于注射，所述制劑可任選含有合適的穩(wěn)定劑、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、生物利用度修飾劑及其組合。
對(duì)于直腸給藥，所述藥物制劑和藥物可以是栓劑、軟膏劑、灌腸劑、片劑或乳膏形式，以將化合物釋放到腸、乙狀結(jié)腸和/或直腸。直腸栓劑可通過將一種或多種本發(fā)明的化合物或該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或互變異構(gòu)體與可接受的載體混合制得，所述載體如可可脂或聚乙二醇，所述直腸栓劑在正常儲(chǔ)存溫度下是固相而在適合將藥物釋放到體內(nèi)如直腸的溫度下是液相。油還可用來制備軟凝膠類型的制劑和栓劑。水、鹽水、含水葡萄糖和相關(guān)的糖溶液以及甘油可用于制備懸浮制劑，該制劑也可含有果膠，卡波姆，甲基纖維素，羥基丙基纖維素或羧甲基纖維素之類的懸浮劑，以及緩沖劑和防腐劑。
除了上述代表劑型，藥學(xué)上可接受的賦形劑和載體通常是那些精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的，因此也包含在本發(fā)明中。這種賦形劑和載體描述在，例如，“RemingtonsPharmaceutical Sciences”Mack Pub.Co.，New Jersey(1991)，全文引入本文作為參考，就好像在此全文列出。
本發(fā)明的制劑還可被設(shè)計(jì)成短期作用、快速釋放、長(zhǎng)期作用和持續(xù)釋放的形式，如下所述。因此，所述藥物制劑還可被制成受控釋放或緩慢釋放形式。
所述組合物還包括，例如，微膠?；蛑|(zhì)體，或一些其它的被囊形式，或者可以延遲釋放的形式施用，以提供延長(zhǎng)的儲(chǔ)存和/或釋放效果。因此，所述藥物制劑和藥物可被壓縮成小丸或筒狀物，并作為緩釋注射物(depot injection)或作為植入物(如移植片固定模(stent))進(jìn)行肌肉內(nèi)或皮下移植。
特定劑量可根據(jù)患者的疾病狀況、年齡、體重、身體健康狀況、性別和飲食、劑量間隔、給藥途徑、排泄率和藥物組合進(jìn)行調(diào)節(jié)。含有有效量的任何上述劑型都在常規(guī)試驗(yàn)方法范圍之內(nèi)，故而也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
治療有效量可根據(jù)給藥途徑和劑型變化。優(yōu)選的一種或多種本發(fā)明的化合物是具有高治療指數(shù)的制劑。所謂治療指數(shù)是指毒性和治療效果的劑量比，它可表示為L(zhǎng)D50和ED50之間的比例。LD50是導(dǎo)致50％群體死亡的劑量，ED50是在50％的群體中治療有效的劑量。LD50和ED50是在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物或試驗(yàn)動(dòng)物中通過標(biāo)準(zhǔn)藥物方法測(cè)定的。
“治療”在本發(fā)明中是指與病癥或疾病有關(guān)的癥狀的減輕，或那些癥狀的進(jìn)一步進(jìn)展或惡化的停止，或防止或預(yù)防疾病或病癥。例如，在治療需要VEGF-RTK抑制劑的患者時(shí)，成功的治療可以包括向腫瘤或疾病組織提供營(yíng)養(yǎng)的毛細(xì)血管增殖減少，與癌性生長(zhǎng)或腫瘤、毛細(xì)血管增殖或疾病組織有關(guān)的癥狀的減輕，毛細(xì)血管增殖停止，或癌癥等疾病進(jìn)展的停止或癌細(xì)胞生長(zhǎng)停止。治療還包括與其它療法聯(lián)合施用本發(fā)明的藥物制劑。例如，可在手術(shù)過程和/或放療前、期間或之后給予本發(fā)明的化合物和藥物制劑。本發(fā)明的化合物還可與其它抗癌藥物一起施用，所述抗癌藥物包括那些用于反義(antisense)和基因治療的藥物。精通腫瘤學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員能確定合適的組合。
本發(fā)明的藥物制劑和藥物含有本文所述的任何化合物和藥學(xué)上可接受的載體。因此，本發(fā)明的化合物可用來制備藥物和藥物制劑。在一些此類實(shí)施方案中，所述藥物和藥物制劑含有結(jié)構(gòu)I或結(jié)構(gòu)IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的任何化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明也提供了結(jié)構(gòu)I或結(jié)構(gòu)IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的任何化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，它們被用于抑制FLT-1、VEGFR2、VEGFR3、FGFR1、GSK-3、Cdk2、Cdk4、MEK1、NEK-2、CHK2、CK1ε、Raf、NEK-2、CHK1、Rsk2、PAR-1、c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、FLT-3、Cdc2、Fyn、Lck、Tie-2、PDGFRα和PDGFRβ等酶，或用于治療與下面詳細(xì)描述的任何與酶有關(guān)的疾病或病癥。本發(fā)明也提供了結(jié)構(gòu)I或結(jié)構(gòu)IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的任何化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，它們被用于制造酶抑制劑，如酪氨酸激酶抑制劑或絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑，用于制造抑制FLT-1、VEGFR2、VEGFR3、FGFR1、GSK-3、Cdk2、Cdk4、MEK1、NEK-2、CHK2、CK1ε、Raf、NEK-2、CHK1、Rsk2、PAR-1、c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、FLT-3、Cdc2、Fyn、Lck、Tie-2、PDGFRα和PDGFRβ等酶的藥物制劑或藥物，或用于治療與下面詳細(xì)描述的酶有關(guān)的疾病或病癥。
治療需要血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶的抑制劑的患者的方法包括給予有此需要的患者有效量的本發(fā)明的藥物制劑、藥物或結(jié)構(gòu)I或IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的任何化合物。
在患者中抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法包括給予腫瘤患者有效量的結(jié)構(gòu)式I或IB的化合物、結(jié)構(gòu)I或IB的任何化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，或藥物。
在患者中抑制血管生成和腫瘤生長(zhǎng)的方法包括給予有此需要的患者有效量的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明提供了治療有各種腫瘤的受試者的方法。所述方法包括給予所述受試者，如人受試者，結(jié)構(gòu)I或IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些此類實(shí)施方案中，所述方法包括治療癌癥患者的方法。
本發(fā)明提供了抑制酪氨酸激酶等酶的方法。所述方法包括給予受試者，如人受試者、哺乳動(dòng)物受試者或細(xì)胞受試者，結(jié)構(gòu)I或IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些此類實(shí)施方案中，所述酪氨酸激酶是VEGF。
本發(fā)明提供了治療有II型糖尿病的受試者的方法。所述方法包括給予所述受試者，如人受試者，結(jié)構(gòu)I或IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些此類實(shí)施方案中，所述方法包括治療前驅(qū)糖尿病患者或糖尿病患者的方法。
本發(fā)明提供了在患者中刺激胰島素依賴過程的方法。所述方法包括給予患者，如人類患者，結(jié)構(gòu)I或IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些此類實(shí)施方案中，所述方法包括降低血漿葡萄糖水平、提高糖元攝取、增強(qiáng)胰島素、正調(diào)節(jié)葡萄糖合成酶活性和刺激諸如皮膚、肌肉和脂肪細(xì)胞中的糖元合成。
本發(fā)明提供了治療有阿爾茨海默氏病的受試者的方法。所述方法包括給予所述受試者，如人受試者，結(jié)構(gòu)I或IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些此類實(shí)施方案中，所述方法包括降低τ磷酸化、降低神經(jīng)纖維纏結(jié)的產(chǎn)生并減慢阿爾茨海默氏病的進(jìn)展。
本發(fā)明提供了治療有中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的受試者的方法。所述方法包括給予所述受試者，如人受試者，結(jié)構(gòu)I或IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些此類實(shí)施方案中，所述方法包括治療雙相性精神障礙；提高受到由甘氨酸鹽誘導(dǎo)的異常高水平的興奮作用(excitation)的神經(jīng)元的存活率，；降低與急性損傷如腦缺血、外傷性腦損傷和細(xì)菌性損傷有關(guān)的神經(jīng)變性；和降低與阿爾茨海默氏病，亨廷頓病、帕金森病、AIDS相關(guān)癡呆、肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)和多發(fā)性硬化有關(guān)的慢性神經(jīng)損傷的方法。
本發(fā)明提供了在受試者中延長(zhǎng)免疫應(yīng)答的方法。所述方法包括給予所述受試者，如人受試者，結(jié)構(gòu)I或IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些此類實(shí)施方案中，所述方法包括延長(zhǎng)和/或加強(qiáng)細(xì)胞因子的免疫刺激作用，并增強(qiáng)細(xì)胞因子對(duì)免疫治療如腫瘤免疫治療的潛能。
本發(fā)明提供了在受試者細(xì)胞中降低中心體分裂的方法。所述方法包括給予所述受試者，如人受試者，結(jié)構(gòu)I或IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些此類實(shí)施方案中，所述受試者是癌癥患者。
本發(fā)明提供了在癌癥患者的癌細(xì)胞中阻斷DNA復(fù)制的方法。所述方法包括給予患者，如人患者，結(jié)構(gòu)I或IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明提供了在患者中促進(jìn)Cdc25和Weel磷酸化的方法。所述方法包括給予患者，如人患者，結(jié)構(gòu)I或IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明提供了在細(xì)胞中調(diào)節(jié)和/或防止細(xì)胞周期中止的方法。所述方法包括使所述細(xì)胞與結(jié)構(gòu)I或IB的化合物的任何實(shí)施方案中所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽接觸。在一種方法中，所述細(xì)胞的p53基因有缺陷和/或有p53突變和/或缺乏p53。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是癌細(xì)胞，如缺乏p53的癌細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，在G2/M關(guān)卡點(diǎn)(checkpoint)的細(xì)胞周期中止被預(yù)防或抑制。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括用本發(fā)明的任何化合物來治療患者，如人患者，又一些此類實(shí)施方案中，所述方法還包括用其它治療劑，如化療劑，或用放療或熱療來治療患者。
制備藥物制劑和藥物的方法包括將任何上述化合物與藥學(xué)上可接受的載體混合。
如上所述，結(jié)構(gòu)I和IB的化合物、結(jié)構(gòu)I和IB的化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，及其混合物是有效的CHK1的抑制劑。這些化合物的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，它們對(duì)CHK1的選擇性高于對(duì)其他激酶如CHK2和FLT-1、VEGFR2以及FGFR1的選擇性。在一些實(shí)施方案中，CHK1的IC50值顯示，，本發(fā)明的抑制劑對(duì)CHK1的選擇性比對(duì)CHK2的選擇性高1,000倍、100倍或10倍。本發(fā)明的CHK1抑制劑可單獨(dú)施用于癌癥患者，或與其它抗癌藥或治療一起施用。本發(fā)明的CHK1抑制劑可特別有效地抵抗p53癌癥。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的CHK1抑制劑可有效治療的癌癥包括乳腺癌，尤其是人乳腺癌，以及結(jié)腸癌。
本發(fā)明的CHK1抑制劑特別適合用于聯(lián)合治療，已顯示當(dāng)它們與喜樹堿、亞德利亞霉素、順鉑、伊立替康(CPT-11)、烷基化劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶I和II抑制劑等抗癌藥以及放療聯(lián)用時(shí)具有協(xié)同效應(yīng)。當(dāng)本發(fā)明的CHK1抑制劑與抗癌藥如喜樹堿、順鉑、伊立替康或亞德利亞霉素聯(lián)用時(shí)，等效線圖顯示由于CHK1抑制劑和常規(guī)抗癌藥之間的協(xié)同作用(超加和性)，可減少抗癌藥的量。因此，本發(fā)明提供了一種含有與抗癌藥聯(lián)合的結(jié)構(gòu)I和IB的化合物的藥物制劑，以及該化合物在在制造這種制劑和藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的化合物可用于在各種受試者中抑制激酶和用于治療由激酶介導(dǎo)的生物病癥。合適的受試者包括動(dòng)物，如哺乳動(dòng)物和人。合適的哺乳動(dòng)物包括但不限于靈長(zhǎng)類，例如但不限于狐猴、猿和猴；嚙齒類，例如大鼠、小鼠和豚鼠；家兔和野兔；牛；馬；豬；山羊；綿羊；有袋類動(dòng)物；和肉食動(dòng)物，如貓、犬和熊。在一些實(shí)施方案中，所述受試者或患者是人。在其它實(shí)施方案中，所述受試者或患者是嚙齒類動(dòng)物，如小鼠或大鼠。在一些實(shí)施方案中，所述受試者或患者是除了人的其它動(dòng)物，在一些此類實(shí)施方案中，所述受試者或患者是人以外的哺乳動(dòng)物。
應(yīng)該理解，本發(fā)明的有機(jī)化合物具有互變異構(gòu)現(xiàn)象。由于本說明書中的化學(xué)結(jié)構(gòu)僅表示了一種可能的互變異構(gòu)形式，但應(yīng)該理解，本發(fā)明包括圖示結(jié)構(gòu)的任何互變異構(gòu)形式。例如，下面顯示了結(jié)構(gòu)I的一種互變體—互變體Ia
I 互變體Ia
結(jié)構(gòu)I的其它互變體，互變體Ib和互變體Ic，如下
互變體Ib互變體Ic
顯然，結(jié)構(gòu)IB的化合物也有相同類型的互變體。
因此，通過參見以下實(shí)施例將更加容易理解上面概述的發(fā)明，以下實(shí)施例是以舉例方式提供，而不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例
用獲自Advanced Chemistry Development，Inc.的ACD Name軟件(版本5.07)(2001/11/14)、獲自ChemInnovation Software，Inc.的ChemInnovation NamExpert+NomenclatorTM品牌軟件和獲自CambridgeSoft Corporation(劍橋，MA)的ChemOfficeUltra軟件包(版本7.0)中的AutoNom(版本2.2)，命名實(shí)施例中的化合物。一些化合物和起始物質(zhì)用標(biāo)準(zhǔn)IUPAC命名法命名。
根據(jù)化學(xué)術(shù)語，本申請(qǐng)中使用了以下縮寫
AcOH乙酸
ATP 三磷酸腺苷
BINAP2，2’-二(二苯膦基)-1，1’-聯(lián)萘
Boc N-叔丁氧羰基
Bn 芐基
BSA 牛血清白蛋白
Cbz 芐酯基
DEAD 偶氮二羧酸二乙酯
DIEA 二異丙基乙胺
DMA N，N-二甲基乙酰胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF N，N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亞砜
dppf 1，1’(二苯膦基)二茂鐵
DTT DL-二硫蘇糖醇
ED50對(duì)50％的群體有療效的劑量
EDC或EDCI1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽
EDTA 乙二胺四乙酸
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH乙醇
Fmoc 9-芴基甲基
HBTU 六氟磷酸O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲
(tetramethyluronium)
HPLC 高壓液相色譜
IC50值 使被測(cè)活性降低50％的抑制劑的濃度
KHMDS二(三甲基甲硅烷基)酰胺鉀
LC/MS液相色譜/質(zhì)譜
LiHMDS 二(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰
MeOH甲醇
NMP N-甲基吡咯烷酮
Pd(dba)2二(二芐叉丙酮)鈀
PPTS 對(duì)甲苯磺酸吡啶
Pyr吡啶
SEMCl 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯
TBAF 氟化四丁基銨
TEA三乙胺
TES三乙基甲硅烷基
TFAA 三氟乙酸酐
THF四氫呋喃
TMS三甲基甲硅烷基
化合物的純化和表征
用帶有2690 Separation Module的Waters Millenium色譜系統(tǒng)(Milford，馬薩諸塞州)通過高效液相色譜表征本發(fā)明的化合物。分析柱是Alltech(Deerfield，伊利諾斯州)的Alltima C-18反相柱，4.6×250mm。采用梯度洗脫，通常從5％乙腈/95％水開始，并在40分鐘內(nèi)達(dá)到100％乙腈。所有的溶劑中都含有0.1％三氟乙酸(TFA)。用在220或254nm處的紫外光(UV)吸收檢測(cè)化合物。HPLC溶劑來自Burdickand Jackson(Muskegan，密歇根州)或Fisher Scientific(Pittsburg，賓西法尼亞州)。在一些例子中，純度是通過薄層層析(TLC)估計(jì)的，所述薄層色譜采用玻璃或塑料背襯的硅膠平板，例如Baker-Flex硅膠1B2-F彈性平板。在紫外光下容易通過視覺檢測(cè)TLC結(jié)果，或采用熟知的碘蒸氣或其它各種顯色技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。
在兩個(gè)LCMS裝置之一上進(jìn)行質(zhì)譜分析Waters系統(tǒng)(Alliance HT HPLC和Micromass ZQ質(zhì)譜儀；柱Eclipse XDB-C18，2.1×50mm；溶劑系統(tǒng)5-95％乙腈，在含有0.05％TFA的水中；流速0.8mL/分鐘；分子量范圍150-850；Cone電壓20V；柱溫40℃)或Hewlett Packard系統(tǒng)(1100 HPLC系列；柱Eclipse XDB-C18，2.1×50mm；溶劑系統(tǒng)1-95％乙腈，在含有0.05％TFA的水中；流速0.4mL/分鐘；分子量范圍150-850；Cone電壓50V；柱溫30℃)。所有的質(zhì)量均以其質(zhì)子化的母體離子計(jì)算。
GCMS分析在Hewlet Packard設(shè)備(HP6890系列氣相色譜儀，帶有質(zhì)量選擇檢測(cè)器5973；注入器體積1μL；最初柱溫50℃；最終柱溫250℃；梯度時(shí)間20分鐘；氣體流速1mL/分鐘；柱5％苯基甲基硅氧烷，型號(hào)#HP 190915-443，規(guī)格30.0m×25μm×0.25μm)上進(jìn)行。
用Flash 40色譜系統(tǒng)和KP-Sil，60A(Biotage，Charlottesville，弗吉尼亞)或用HPLC采用C-18反相柱進(jìn)行制備型分離。Flash 40 Biotage系統(tǒng)通常采用的溶劑是二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、己烷和三乙胺。反相HPLC通常采用的溶劑是含有0.1％三氟乙酸的濃度不同的乙腈和水。
各種官能化的芳基二胺可從商業(yè)來源獲得，用精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的方法制備或按以下常規(guī)方法制備。一些芳基二胺和實(shí)施例是用美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No.60/405,729中列舉的方法制備的。因此，出于所有目的，將美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No.60/405,729全文參考結(jié)合于此，這就好像在這里將其中列舉的方法和實(shí)施例完整列出一樣。
方法1
將2，4-二氟硝基苯(1.0當(dāng)量)置于裝配有充滿丙酮和干冰的干冰冷凝器的干燥的圓底燒瓶中。將氨冷凝進(jìn)燒瓶并將所得溶液回流攪拌7小時(shí)。1小時(shí)內(nèi)有黃色沉淀形成。7小時(shí)后移去冷凝器并使液氨蒸發(fā)數(shù)小時(shí)。粗制產(chǎn)物在硅膠上通過快速層析純化(85∶15己烷∶乙酸乙酯，產(chǎn)物的Rf＝0.32，雜質(zhì)的Rf＝0.51)；GC/MS m/z 156.1(M+)，Rt 11.16分鐘。
將所得5-氟-2-硝基苯胺(1.0當(dāng)量)和一種胺(1.1當(dāng)量)，例如N-甲基哌嗪，溶于NMP，并加入三乙胺(2.0當(dāng)量)。反應(yīng)混合物在100℃加熱3小時(shí)。然后將溶液冷卻至室溫并用水稀釋。濾出形成的沉淀并在真空下干燥，得到2-硝基-二氨基產(chǎn)物?；蛘?，可由商業(yè)獲得的5-氯-2-硝基苯胺在相同的條件下獲得相同的產(chǎn)物，但是需在130℃加熱1-2天。在一些實(shí)施例中，分別在100℃或130℃，在純胺(5當(dāng)量)中在5-氟-2-硝基苯胺或5-氯-2-硝基苯胺上進(jìn)行置換。產(chǎn)物用同樣的方法分離。LC/MS m/z237.1(MH+)，Rt 1.304分鐘。
室溫下，將硝基胺(1.0當(dāng)量)和10％Pd/C(0.1當(dāng)量)懸浮于無水乙醇。將反應(yīng)燒瓶抽空并隨后充滿氫氣。所得混合物然后在氫氣氛下攪拌過夜。所得溶液通過硅藻土(Celite)過濾并在真空下濃縮，得到粗制產(chǎn)物，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
方法2
在圓底燒瓶中加入2，3-二氟-6-硝基苯胺(1當(dāng)量)和足量的NMP以得到粘性漿液。加入一種胺(5當(dāng)量)，例如N-甲基哌嗪，并將溶液在100℃加熱。2小時(shí)后，將溶液冷卻并倒入水中。有淡黃色固體形成，將其過濾并干燥。用方法1將硝基胺還原，得到粗制產(chǎn)物，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。LC/MS m/z 225.1(MH+)，Rt0.335分鐘。
方法3
在0.1M的1，3-二氟-2-硝基苯的DMF溶液中加入Et3N(2當(dāng)量)，然后加入一種胺(1當(dāng)量)，例如嗎啉。將混合物攪拌18小時(shí)，然后用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。LC/MS m/z 227.2(MH+)，Rt 2.522分鐘。合并的有機(jī)層用MgSO4干燥，過濾并濃縮。將氨冷凝進(jìn)含有粗制產(chǎn)物的壓力容器(pressure vessel)。將此壓力容器密封并加熱至100℃(超過400psi)。72小時(shí)后，將壓力容器冷卻，蒸發(fā)氨，得到微紅色固體。硝基胺按照方法1還原，得到粗制產(chǎn)物，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。LC/MS m/z194.1(MH+)，Rt1.199分鐘。
方法4
邊攪拌邊在含有NaH(1.3當(dāng)量)的NMP溶液中加入一種醇(1.0當(dāng)量)，例如2-甲氧基乙醇。然后將所得混合物攪拌30分鐘。然后緩慢加入在NMP中的5-氟-2-硝基苯胺漿液。然后將混合物加熱至100℃。2小時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷卻并加入水。然后過濾混合物，所得固體用水洗滌，并通過硅膠層析純化(1∶1乙酸乙酯∶己烷)。LC/MS m/z 213.2(MH+)，Rt 2.24分鐘。硝基胺按照方法1還原，得到粗制產(chǎn)物，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。LC/MS m/z 183.1(MH+)，Rt 0.984分鐘。
方法5
0℃，將偶氮二羧酸二異丙酯(1.1當(dāng)量)逐滴加入攪拌下的3-氨基-4-硝基苯酚(1.0當(dāng)量)、三苯膦(1.1當(dāng)量)和一種醇，例如N-(2-羥乙基)嗎啉(1.0當(dāng)量)的四氫呋喃溶液中。使混合物升溫至室溫并攪拌18小時(shí)。蒸發(fā)去溶劑，產(chǎn)物通過硅膠層析純化(98∶2 CH2Cl2∶甲醇)，得到暗紅色-棕色油狀的4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)-2-硝基苯胺。LC/MS m/z 268.0(MH+)，Rt 1.01分鐘。硝基胺按照方法1還原，得到粗制產(chǎn)物，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。LC/MS m/z 238.3(MH+)，Rt 0.295分鐘。
方法6
在裝有4-氨基-3-硝基苯酚(1當(dāng)量)、K2CO3(2當(dāng)量)和2-丁酮的燒瓶中加入一種二溴化烷，例如1，3-二溴丙烷(1.5當(dāng)量)。所得混合物然后在80℃加熱18小時(shí)。冷卻后，將混合物過濾、濃縮并用水稀釋。溶液然后用CH2Cl2萃取(3x)，將合并的有機(jī)層濃縮，得到一種固體物質(zhì)，然后用戊烷洗滌該固體物質(zhì)。LCMS m/z 275.1(MH+)，Rt 2.74分鐘。
將按上述方法制備的溴化物、一種胺如吡咯烷(5當(dāng)量)、Cs2CO3(2當(dāng)量)和Bu4NI(0.1當(dāng)量)的乙腈溶液在70℃加熱48小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻，過濾并濃縮。將殘余物溶于CH2Cl2，用水洗滌，并濃縮以得到所需的硝基胺，2-硝基-4-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)苯胺。LCMS m/z 266.2(MH+)，Rt 1.51分鐘。硝基胺按照方法1還原，得到粗制產(chǎn)物，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
方法7
在6-氯-3-硝基吡啶-2-胺(1當(dāng)量)的乙腈懸液中加入一種胺，例如嗎啉(4當(dāng)量)。所得反應(yīng)混合物在70℃攪拌5小時(shí)。減壓蒸發(fā)去溶劑，并將殘余物與醚一起研磨，得到所需淡黃色粉末狀的化合物。LC/MS m/z 225.0(MH+)，Rt 1.79分鐘。硝基胺按照方法1還原，得到粗制產(chǎn)物，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
方法8
將苯酚(1當(dāng)量)和5-氯-2-硝基苯胺(1當(dāng)量)溶于DMF，并一次性加入固體K2CO3(2當(dāng)量)。反應(yīng)混合物在120℃加熱過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，蒸餾除去大部分DMF，在殘余物中加入水得到沉淀。將此固體物質(zhì)干燥并通過硅膠層析純化(2-10％MeOH/CH2Cl2)，得到所需產(chǎn)物。硝基胺按照方法1還原，得到粗制產(chǎn)物，產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
方法9
將嗎啉(1當(dāng)量)和5-氯-2-硝基苯胺(1當(dāng)量)溶于DMF并加入TEA(2當(dāng)量)。反應(yīng)混合物在120℃加熱過夜。然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，蒸餾除去大部分DMF，并在殘余物中加入水得到為沉淀的粗產(chǎn)物。將此固體物質(zhì)干燥并通過硅膠層析純化(2-10％MeOH/CH2Cl2)，得到所需產(chǎn)物，5-嗎啉-4-基-2-硝基-苯胺。
用來合成靛紅酸酐的各種2-氨基苯甲酸起始物質(zhì)可獲自商業(yè)來源、用精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的方法合成或用下面的常規(guī)方法合成。靛紅酸酐的常規(guī)合成法描述在J.Med.Chem.1981，24(6)，735和J.Heterocycl.Chem.1975，12(3)，565。
方法10
化合物1-3是用與美國(guó)專利No.4,287,341所述類似的方法制造的，出于所有目的，它們已被全文參考，這就好像在這里完整列出一樣。用標(biāo)準(zhǔn)氫化條件于50℃在NH4OH中用10％Pd/C將化合物3還原48小時(shí)。產(chǎn)物通過冰醋酸中和沉淀，過濾，并用水和乙醚洗滌。產(chǎn)率約為50％?；衔?是用與美國(guó)專利No.5,716,993所述類似的方法制造的，出于所有目的，它們已被全文參考，這就好像在這里完整列出一樣。
方法11
含有苯胺的化合物的碘化用類似于J.Med.Chem.2001，44，6，917-922中所述的方法進(jìn)行碘化，出于所有目的，該參考文獻(xiàn)已被全文參考，這就好像在這里完整列出一樣。將EtOH中的氨茴酸酯加入硫酸銀(1當(dāng)量)和I2(1當(dāng)量)的混合物中。反應(yīng)通常在室溫下進(jìn)行3小時(shí)。反應(yīng)物通過硅藻土過濾并濃縮。將殘余物用EtOAc溶解并用飽和的NaHCO3水溶液(3x)、水(3x)、鹽水(1x)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。所得粗產(chǎn)物(約5g)溶于MeOH(60-100ml)，NaOH 6N(25ml)和水(250ml)。反應(yīng)通常在70-80℃加熱4小時(shí)。反應(yīng)混合物用EtOAc(2x)萃取，用HCl水溶液中和，過濾以收集固體，所得固體產(chǎn)物用水洗滌。產(chǎn)物在真空中干燥。
方法12
2-氨基-6-甲氧基-芐腈
按照以下參考文獻(xiàn)中列出的方法，用2，6-二硝基芐腈制備標(biāo)題化合物，出于所有目的，該參考文獻(xiàn)已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣Harris，V.N.SmitH、C；Bowden，K.；J.Med.Chem.1990，33，434；和Sellstedt，J.H.等，J.Med.Chem.1975，18，926。LC/MS m/z 405.4(MH+)，Rt 1.71分鐘。
方法13
2-氨基-4-氟苯甲腈(benzenecarbonitrile)
按照以下參考文獻(xiàn)的描述，通過在濃HCl中用SnCl2進(jìn)行還原，從市售的2-硝基-4-氟苯甲腈獲得標(biāo)題化合物，出于所有目的，它們已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣Hunziker，F(xiàn).等，Eur.J.Med.Chem.，Chim.Ther.1981，16(5)，391。GC/MS m/z136.1(M+，100％)，Rt 9.26分鐘。
方法14
2-氨基-5-氟苯甲腈
按照以下參考文獻(xiàn)的描述，通過在濃HCl中用SnCl2進(jìn)行還原，從市售的2-硝基-5-氟苯甲腈合成標(biāo)題化合物，出于所有目的，它們已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣Hunziker，F(xiàn).等，Eur.J.Med.Chem.，Chim.Ther.1981，16(5)，391。GC/MS m/z136.1(M+，100％)，Rt 8.87分鐘。
方法15
該化合物按照WO 97/14686的方法合成，出于所有目的，WO 97/14686已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣。將2，4，6-三氟芐腈溶于CH3CN和濃氨水的混合物(1∶2)中，在室溫下攪拌2天。將反應(yīng)混合物濃縮并用CH2Cl2萃取。收集有機(jī)萃取物，干燥(Na2SO4)，并蒸發(fā)，得到約1∶1的2-氨基-4，6-二氟芐腈和4-氨基-2，6-二氟芐腈的混合物。所需2-氨基-4，6-二氟芐腈通過硅膠柱層析分離(EtOAc/己烷1∶2)，化合物有最高Rf；LC/MS m/z 155.1(MH+)，Rt 2.08分鐘；GC/MS m/z154.1(M+)，Rt 9.35分鐘。
方法16
2-氨基-6-三氟甲基苯甲腈
將2-氟-6-三氟甲基苯甲腈在飽和NH3的EtOH溶液中于100℃加熱過夜。將反應(yīng)混合物濃縮并通過硅膠柱層析純化殘余物(EtOAc/己烷1∶5)，得到為白色固體狀的標(biāo)題化合物。GC/MS m/z 186.1(M+)，Rt 10.1分鐘。
方法17
5-乙酰-2-氨基苯甲腈
標(biāo)題化合物是按照Goidl，J.O.和Claus，T.H.的美國(guó)專利No.4,814,350中描述的方法由市售的前體物質(zhì)獲得的，出于所有目的，美國(guó)專利No.4,814,350已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣。GC/MS m/z160(M+，45％)，Rt 15.04分鐘；LC/MS m/z161.2(MH+)，Rt 1.75分鐘。
方法18
二甲基(1，4-氧氮雜全氫-2-基甲基)胺[Dimethyl(1，4-oxazaperhydroepin-2-ylmethyl)amine]
標(biāo)題化合物是按照上述合成(2S，5R)-2-[二甲基氨基(甲基)]-5-甲基嗎啉的合成途徑從3-氨基丙-1-醇獲得的(還可參見Harada H.等，Chem.Pharm.Bull.，1995，43(8)，1364和Freifelder.M.等，J.Am.Chem.Soc.，1958，80，4320，出于所有目的，它們已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣)。LC/MS m/z159.1(MH+)，Rt 0.39分鐘。
方法19
步驟12-硝基-5-(3-乙酰氨基)苯氧基苯甲腈
將5-氟-2-硝基苯甲腈和3-乙酰氨基苯酚溶于DMF，一次性加入固體K2CO3(2當(dāng)量)。反應(yīng)混合物在120℃加熱過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，蒸餾除去大部分DMF并在殘余物中加入水。濾出所得固體并干燥，得到所需產(chǎn)物。LC/MS m/z298.1(MH+)，Rt 2.55分鐘。
步驟22-氨基-5-(3-乙酰氨基)苯氧基苯甲腈
將2-硝基-5-(3-乙酰氨基)苯氧基苯甲腈溶于EtOH，加入10％Pd/C。將反應(yīng)燒瓶抽空并用氫氣吹掃三次。反應(yīng)混合物在1個(gè)大氣壓的氫氣下攪拌過夜，然后過濾并濃縮。所得殘余物通過硅膠層析純化(2-5％MeOH/CH2Cl2)，得到所需產(chǎn)物。LC/MSm/z268.2(MH+)，Rt 2.28分鐘
方法20
在吡啶(20當(dāng)量)存在下，將3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氯-4-羥基-1-(4-甲氧基-芐基)-1H-喹啉-2-酮(1)(1當(dāng)量)懸浮于二氯甲烷或氯仿(0.01M)中。加熱混合物以確保最大溶解。然后將混合物冷卻至-5℃，逐滴加入三氟甲磺酸酐(8當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在-5℃攪拌直到反應(yīng)完全(1-4小時(shí))，加入飽和的NaHCO3水溶液。水相用CH2Cl2萃取，收集有機(jī)萃取物，用1M檸檬酸溶液(x1)、1M NaHCO3溶液、水(x1)洗滌，并用Na2SO4干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到為固體狀的標(biāo)題化合物6-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2-氧代-3-{1-[(三氟甲基)磺酰]-苯并咪唑-2-基}-4-氫喹啉基(三氟甲基)磺酸酯(2)。
將6-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2-氧代-3-{1-[(三氟甲基)磺酰]-苯并咪唑-2-基}-4-氫喹啉基(三氟甲基)磺酸酯(2)(1當(dāng)量)、合適的胺(1.2當(dāng)量)和Hunig堿(4當(dāng)量)在乙腈(0.15M)中的溶液在80℃加熱20小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用EtOAc稀釋，用飽和的NaHCO3水溶液、水和鹽水洗滌，并用Na2SO4干燥。將有機(jī)溶液濃縮得到產(chǎn)物(3)，該產(chǎn)物直接用于下一步驟。將化合物3溶于三氟乙酸和濃HCl的混合物(7∶1)中，在90℃加熱過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后加入水。水溶液用EtOAc洗滌并加入飽和的NaHCO3使其呈堿性。通過過濾收集由此形成的沉淀，用水洗滌并干燥該沉淀，得到所需產(chǎn)物(4)。
方法21
將粗制的甲酯(1)溶于1∶1的EtOH和30％KOH水溶液的混合物并在70℃攪拌過夜。然后冷卻反應(yīng)混合物并用1N HCl酸化以得到沉淀。將所得固體過濾，用水洗滌并干燥，得到為棕色固體狀的2-(4-氨基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-1H-苯并咪唑-6-羧酸。LC/MS m/z321.1(MH+)，Rt 2.26分鐘。
將DMF中的2-(4-氨基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-1H-苯并咪唑-6-羧酸(1當(dāng)量)、胺(1當(dāng)量)、EDC(1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，1.2當(dāng)量)、HOAT(1-羥基-7-氮雜苯并三唑，1.2當(dāng)量)和三乙胺(2.5當(dāng)量)的混合物在23℃攪拌20小時(shí)。將反應(yīng)混合物在水和乙酸乙酯之間分配。將合并的有機(jī)層干燥(Na2SO4)并濃縮。加入水，過濾由此形成的沉淀并干燥，得到所需酰胺產(chǎn)物(2)。
方法22
將EtOH∶NMP(1∶1)中的7-氟喹諾酮衍生物的8M的MeNH2溶液置于微波爐中照射4次，5分鐘，溫度為220℃。冷卻后加入水，混合物用EtOAc萃取。收集有機(jī)萃取物并用Na2SO4干燥。減壓蒸發(fā)溶劑并通過反相制備型HPLC純化殘余物，得到所需產(chǎn)物。其它純的伯胺和仲胺與NMP 1∶1混合使用。
方法23
X＝I、Br、TfO Y＝B(OH)2或Sn(nBu)3
將C-6或C-7鹵化物轉(zhuǎn)化成芳基是用標(biāo)準(zhǔn)Suzuki法或Stille法實(shí)現(xiàn)的，如下所述。
Suzuki法在1打蘭(4ml)管形瓶(vial)中依次加入喹諾酮(1當(dāng)量)、硼酸(1.2-1.5當(dāng)量)、Pd(dppf)Cl2，Cl2CH2(0.2當(dāng)量)、DMF(0.5-1ml)和TEA(4當(dāng)量)。反應(yīng)用氬氣吹掃，加蓋并在85℃加熱12小時(shí)。一旦反應(yīng)完全，將反應(yīng)冷卻至室溫并用針筒濾盤過濾。然后用TFA(兩滴)中和澄清的濾液，并直接注射到制備型HPLC。產(chǎn)物被凍干。
Stille法在1打蘭(4ml)管形瓶中依次加入喹諾酮(1當(dāng)量)、錫試劑(1.8當(dāng)量)、Pd(dppf)Cl2.Cl2CH2(0.2當(dāng)量)和DMF(0.5-1ml)。反應(yīng)用氬氣吹掃，加蓋并在60-85℃加熱4小時(shí)。一旦反應(yīng)完全，將反應(yīng)物冷卻至室溫并用針筒濾盤過濾。然后用TFA(兩滴)中和澄清的濾液并直接注射到制備型HPLC。產(chǎn)物被凍干。
方法24
將二鹵代喹諾酮如二氟喹諾酮(12-15mg)置于1打蘭(2ml)管形瓶。在管形瓶中加入NMP(干燥的并用氬氣預(yù)吹掃5分鐘)(0.5ml)。然后加入選擇的胺試劑(40-50mg)。如果該胺是鹽酸鹽，則反應(yīng)物用TEA(約1.2-1.5當(dāng)量)中和。反應(yīng)再用氬氣吹掃約5秒鐘并立即加蓋。反應(yīng)物通常在加熱塊中于90-95℃加熱18小時(shí)。然后用HPLC或LCMS跟蹤。為HPLC取樣后，再用氬氣吹掃管形瓶并加蓋。一些偶合反應(yīng)物(coupling partners)需要24或48小時(shí)以完成反應(yīng)。親核性較低的胺類如吡咯需要加入強(qiáng)堿以完成反應(yīng)。此時(shí)需在反應(yīng)中加入碳酸銫(2當(dāng)量，基于所用的胺)。一旦反應(yīng)完全，將反應(yīng)物冷卻至室溫并用針筒濾盤過濾。然后用TFA(兩滴)中和澄清的濾液并直接注射到制備型HPLC。產(chǎn)物被凍干。
實(shí)施例14-氨基-3-苯并咪唑-2-基-6-(4-甲基哌嗪基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟12-苯并咪唑-2-基乙酸乙酯
1，2-苯二胺(1.0當(dāng)量)和3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯鹽酸鹽(1.3當(dāng)量)的乙醇溶液在90℃攪拌過夜。將反應(yīng)冷卻至室溫并在真空下除去溶劑。在殘余物中加入水和CH2Cl2。有機(jī)層被分離，用Na2SO4干燥并除去溶劑?；厥盏墓腆w無需純化即可使用。LC/MS m/z 205.2(MH+)、Rt 1.44分鐘。
步驟25-(4-甲基哌嗪基)-2-硝基苯甲腈
將5-氟-2-硝基苯甲腈(1.02當(dāng)量)和N-甲基哌嗪(1.0當(dāng)量)溶于NMP。加入三乙胺(2.1當(dāng)量)并將所得溶液在100℃加熱1小時(shí)。將溶液冷卻至室溫并倒入水中。將形成的沉淀過濾，得到所需的綠色固體狀的產(chǎn)物。LC/MS m/z 247.3(MH+)、Rt 1.46分鐘。
步驟32-氨基-5-(4-甲基哌嗪基)苯甲腈
將5-(4-甲基哌嗪基)-2-硝基苯甲腈(1.0當(dāng)量)溶于EtOAc。燒瓶用氮?dú)獯祾撸尤?0％Pd/C(0.1當(dāng)量)。抽空燒瓶并用H2吹掃三次。所得混合物在室溫下攪拌3天?；旌衔锿ㄟ^硅藻土過濾，濾餅用EtOAc洗滌。在真空下除去溶劑以得到黃色固體，該黃色固體通過硅膠層析純化(5∶1∶95 MeOH∶Et3N∶EtOAc)，得到黃色固體狀的所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 217.3(MH+)、Rt 0.95分鐘。
步驟44-氨基-3-苯并咪唑-2-基-6-(4-甲基哌嗪基)氫喹啉-2-酮
將2-苯并咪唑-2-基乙酸乙酯(1.1當(dāng)量)和2-氨基-5-(4-甲基哌嗪基)苯甲腈(1.0當(dāng)量)溶于1，2-二氯乙烷，然后加入SnCl4(11當(dāng)量)?；旌衔锛訜峄亓鬟^夜。冷卻后，在真空下濃縮混合物。向固體中加入NaOH(3M)并將混合物在80℃加熱0.5小時(shí)。將固體過濾并依次用H2O，CH2Cl2和丙酮洗滌。LC/MS證實(shí)產(chǎn)物存在于丙酮層和固體中。將這些組分合并并通過硅膠層析純化(CH2Cl2中含有5-10％MeOH，含有1％Et3N)，得到所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 375.4(MH+)、Rt 1.65分鐘。
實(shí)施例24-氨基-3-苯并咪唑-2-基-5-(2-嗎啉-4-基乙氧基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟16-氨基-2-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯甲腈
將4-(羥乙基)嗎啉(1.02當(dāng)量)加入NMP中的NaH(1.2當(dāng)量)。10分鐘后在NMP中加入6-氨基-2-氟苯甲腈(1.0當(dāng)量)。所得混合物在100℃加熱1小時(shí)。然后將混合物冷卻并倒入水中。水層用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并在真空下濃縮，得到棕色膠狀物。該粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化(5∶1∶95MeOH∶Et3N∶EtOAc)，得到所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 248.3(MH+)、Rt 1.26分鐘。
步驟24-氨基-3-苯并咪唑-2-基-5-(2-嗎啉-4-基乙氧基)氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例1(步驟4)所述，用6-氨基-2-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯甲腈合成的。LC/MS m/z 406.4(MH+)、Rt 1.67分鐘。
實(shí)施例34-氨基-3-[5-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯并咪唑-2-基]-6-硝基氫喹啉-2-酮的合成
步驟14-(2-嗎啉-4-基乙氧基)-2-硝基苯胺
0℃，將偶氮二羧酸二異丙酯(1.1當(dāng)量)逐滴加入攪拌的4-氨基-3-硝基苯酚(1.0當(dāng)量)、三苯基膦(1.1當(dāng)量)和N-(2-羥乙基)嗎啉(1.0當(dāng)量)的THF溶液。使混合物升溫至室溫，再攪拌18小時(shí)。蒸發(fā)除去溶劑，產(chǎn)物通過硅膠層析純化(98∶2CH2Cl2∶MeOH)，得到暗紅色-棕色的油狀物。LC/MS m/z 268.0(MH+)、Rt 1.01分鐘。
步驟24-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯-1，2-二胺
在4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)-2-硝基苯胺(1.0當(dāng)量)的EtOH溶液中加入Pd/C(0.1當(dāng)量)。反應(yīng)容器反復(fù)用氮?dú)獯祾?，然后在氫氣?1atm)下攪拌18小時(shí)。產(chǎn)物通過硅藻土塞過濾，并用EtOH洗滌塞子。所得二胺無需純化即可使用。LC/MS m/z238.3(MH+)、Rt 0.295分鐘。
步驟32-[5-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯并咪唑-2-基]乙酸乙酯
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例1的描述用4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯-1，2-二胺合成的。濃縮有機(jī)層，殘余物通過硅膠層析純化(10∶1∶2 CH2Cl2∶MeOH∶EtOAc)，得到暗紅色-棕色油狀物。LC/MS m/z 334.4(MH+)Rt 1.08分鐘。
步驟44-氨基-3-[5-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯并咪唑-2-基]-6-硝基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例1(步驟4)所述用2-[5-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯并咪唑-2-基]乙酸乙酯和5-硝基氨基苯甲腈合成的。粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化(CH2Cl2中含有5-10％MeOH，含有1％Et3N)，得到所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 451.2(MH+)、Rt 1.89分鐘。
實(shí)施例44-氨基-5-(2-嗎啉-4-基乙氧基)-3-[5-(2-嗎啉-4-基乙氧基)-苯并咪唑-2-基]氫喹啉-2-酮的合成
步驟1標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例1(步驟1)的描述用2-[5-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯并咪唑-2-基]乙酸乙酯和6-氨基-2-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯甲腈合成的。LC/MSm/z 535.4(MH+)，Rt 1.44分鐘。
實(shí)施例5[2-(4-氨基-2-氧代(3-氫喹啉基))苯并咪唑-5-基]-N，N-二甲基羧酰胺的合成
步驟12-[(乙氧基羰基)甲基]苯并咪唑-5-羧酸
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例1的描述用3，4-二氨基苯甲酸合成的。粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化(5∶95 MeOH∶CH2Cl2)，得到白色到米色固體狀的所需產(chǎn)物。LC/MS m/z249.1(MH+)，Rt 1.35分鐘。
步驟22-[5-(N，N-二甲基氨基甲?；?苯并咪唑-2-基]乙酸乙酯
2-[(乙氧基羰基)甲基]苯并咪唑-5-羧酸(1.0當(dāng)量)溶于THF。加入HBTU(1.1當(dāng)量)和二異丙基乙胺(2.0當(dāng)量)，然后加入二甲胺(2.0M的THF溶液，1.1當(dāng)量)。反應(yīng)物在室溫下攪拌過夜，然后濃縮，所得殘余物通過硅膠層析純化(5∶95MeOH∶CH2Cl2)，得到所需化合物。LC/MS m/z 276.2(MH+)、Rt 1.18分鐘。
步驟3[2-(4-氨基-2-氧代(3-氫喹啉基))苯并咪唑-5-基]-N，N-二甲基羧酰胺
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例1(步驟4)的描述用2-[5-(N，N-二甲基氨基甲?；?苯并咪唑-2-基]乙酸乙酯和氨基苯甲腈合成的。通過過濾收集所得固體并用水和丙酮洗滌，得到白色固體狀的所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 348.3(MH+)，Rt 1.87分鐘。
實(shí)施例64-氨基-3-[5-(嗎啉-4-基羰基)苯并咪唑-2-基]氫喹啉-2-酮的合成
將2-[(乙氧基羰基)甲基]苯并咪唑-5-羧酸(1.0當(dāng)量)溶于THE。加入HBTU(1.1當(dāng)量)和二異丙基乙胺(2.0當(dāng)量)，然后加入嗎啉(1.1當(dāng)量)。反應(yīng)物在室溫下攪拌3天，然后濃縮，并通過硅膠層析純化(5-10％甲醇/二氯甲烷)。將含有產(chǎn)物的組分濃縮并溶于無水1，2-二氯乙烷。加入氨基苯甲腈(1.0當(dāng)量)，然后加入SnCl4(5.0當(dāng)量)，將反應(yīng)物在90℃加熱過夜。濃縮反應(yīng)混合物，所得殘余物重溶于NaOH(2M)并在90℃加熱4小時(shí)。冷卻至室溫后，收集所得固體并用水洗滌，隨后用丙酮洗滌，得到所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 390.2(MH+)、Rt 1.95分鐘。
實(shí)施例74-氨基-3-[5-(2-噻吩基)苯并咪唑-2-基]氫喹啉-2-酮的合成
步驟14-溴苯-1，2-二胺
將4-溴-2-硝基苯胺(1.0當(dāng)量)和SnCl2(2.2當(dāng)量)的EtOH溶液加熱回流3小時(shí)。然后將溶液倒入冰中，用2M NaOH調(diào)節(jié)pH至10，用Et2O萃取。合并的有機(jī)層用MgSO4干燥并濃縮。所得棕色油狀物通過硅膠層析純化(0-50％EtOAc∶己烷)，得到淡黃色固體。LC/MS m/z 187.1(MH+)，Rt 1.33分鐘。
步驟22-硝基-4-(2-噻吩基)苯胺
室溫下將4-溴苯-1，2-二胺(1.0當(dāng)量)和Na2CO3(2.0當(dāng)量)溶于DMF/H2O(5∶1)。在反應(yīng)混合物中鼓入氮?dú)?分鐘，加入PdCl2(dppf)2(0.1當(dāng)量)。在23℃攪拌大約10分鐘后，加入DMF中的2-噻吩硼酸(1.1當(dāng)量)，將反應(yīng)在90℃加熱12小時(shí)。然后，將溶液濃縮并在EtOAc和水之間分配。將各層分離，水層用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層用MgSO4干燥并減壓濃縮。所得黑色殘余物通過硅膠層析純化(0-20％EtOAc∶己烷)，得到橙色固體。LC/MS m/z 221.1(MH+)，Rt 2.67分鐘。
步驟32-[5-(2-噻吩基)苯并咪唑-2-基]乙酸乙酯
室溫下將2-硝基-4-(2-噻吩基)苯胺(1.0當(dāng)量)和10％Pd/C(0.1當(dāng)量)懸浮于無水EtOH。抽空反應(yīng)燒瓶然后充滿H2。所得混合物在氫氣氛下攪拌3小時(shí)。然后加入3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯鹽酸鹽(2.0當(dāng)量)，所得混合物加熱回流12小時(shí)。之后將溶液通過硅藻土塞過濾，濃縮，溶于50ml 2N HCl，用CH2Cl2洗滌。用濃氨水將水層的pH調(diào)節(jié)至12，并用CH2Cl2萃取。合并的有機(jī)層用MgSO4干燥并濃縮，得到棕色油狀物，將此油狀物通過硅膠層析純化(5∶95 MeOH∶CH2Cl2)，得到黃色固體。LC/MSm/z 287.1(MH+)、Rt 1.98分鐘。
步驟44-氨基-3-[5-(2-噻吩基)苯并咪唑-2-基]氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例1(步驟4)的描述用2-[5-(2-噻吩基)苯并咪唑-2-基]乙酸乙酯和氨基苯甲腈合成的。LC/MS m/z 359.2(MH+)，Rt 2.68分鐘。
實(shí)施例84-氨基-3-{5-[1-(1，2，4-三唑基)]苯并咪唑-2-基}氫喹啉-2-酮的合成
步驟15-氟-2-硝基苯胺
按照方法1進(jìn)行合成。粗制產(chǎn)物在硅膠上通過快速層析純化(85∶15 己烷∶EtOAc，產(chǎn)物的Rf＝0.32，雜質(zhì)的Rf＝0.51)。GC/MS m/z 156.1(M+)，Rt 11.16分鐘。
步驟22-硝基-5-[1-(1，2，4-三唑基)]苯胺
將NMP中的5-氟-2-硝基苯胺(1.0當(dāng)量)，1H-1，2，4-三唑(3.0當(dāng)量)和NaH(3.0當(dāng)量)在100℃加熱1小時(shí)。將溶液冷卻至室溫并緩慢倒入冰水中。所得沉淀過濾并在真空下干燥，得到所需產(chǎn)物。所得固體從EtOH重結(jié)晶，得到淡黃色固體狀的純產(chǎn)物。LC/MS m/z 206.2(MH+)、Rt 1.88分鐘。
步驟32-{5-[1-(1，2，4-三唑基)]苯并咪唑-2-基}乙酸乙酯
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例7的描述用2-硝基-5-[1-(1，2，4-三唑基)]苯胺合成的。LC/MS m/z 272.1(MH+)，Rt 1.19分鐘。
步驟44-氨基-3-{5-[1-(1，2，4-三唑基)]苯并咪唑-2-基}氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例1(步驟4)的描述用2-{5-[1-(1，2，4-三唑基)]苯并咪唑-2-基}乙酸乙酯和氨基苯甲腈合成的。收集粗制固體并通過硅膠層析純化(92∶7∶1CH2Cl2∶MeOH∶Et3N)。LC/MS m/z 344.3(MH+)，Rt 2.01分鐘。
實(shí)施例94-氨基-6-氯-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成N-(4-氯-2-氰基苯基)-2-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)乙酰胺
-78℃，將LiHMDS(2.5當(dāng)量)加入在THF中的2-[5-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯并咪唑-2-基]乙酸乙酯(1.0當(dāng)量)。1小時(shí)后，加入在THF中的2-氨基-5-氯苯甲腈(0.82當(dāng)量)。使反應(yīng)物升溫至23℃并攪拌過夜。所得混合物用NH4Cl(飽和的水溶液)淬滅并用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并在真空下濃縮，得到棕色固體。粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化(5∶1 EtOAc∶己烷)，得到所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 396.1(MH+)、Rt 1.79分鐘。N-(4-氯-2-氰基苯基)-2-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)乙酰胺(1.0當(dāng)量)于70℃在NaOMe(0.5M的MeOH溶液，18當(dāng)量)中加熱2小時(shí)。將所得混合物冷卻，并將所得固體過濾，用水洗滌，得到所需產(chǎn)物。LC/MS m/z396.4(MH+)、Rt 2.13分鐘。
實(shí)施例104-氨基-3-(5-哌啶基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟12-硝基-5-哌啶基苯胺
標(biāo)題化合物是按方法1的描述用哌啶(3.0當(dāng)量)合成的。得到黃色結(jié)晶固體狀的所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 222.2(MH+)，Rt 2.53分鐘。
步驟22-(5-哌啶基苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例7的描述用2-硝基-5-哌啶基苯胺合成的。得到黃色油狀的所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 288.3(MH+)，Rt 1.31分鐘。
步驟34-氨基-3-(5-哌啶基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按方法9的描述用2-(5-哌啶基苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯和氨基苯甲腈合成的。在NaOMe環(huán)化步驟采用粗制無環(huán)酰胺。用硅膠層析(96.5∶3.0∶0.5CH2Cl2∶MeOH∶Et3N、Rf0.2)純化后得到所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 360.4(MH+)、Rt 1.83分鐘。
實(shí)施例114-氨基-3-{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷基]苯并咪唑-2-基}-6-氯氫喹啉-2-酮的合成
步驟1[1-(3-氨基-4-硝基苯基)吡咯烷-3-基]二甲胺
標(biāo)題化合物是按方法1的描述用3-(二甲基氨基)吡咯烷(3.0當(dāng)量)合成的。LC/MSm/z 251.3(MH+)，Rt 1.25分鐘。
步驟22-{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷基]苯并咪唑-2-基}乙酸乙酯
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例7的描述用[1-(3-氨基-4-硝基苯基)吡咯烷-3-基]二甲胺合成的。得到黃色油狀的所需固體。LC/MS m/z 317.4(MH+)，Rt 1.36分鐘。
步驟34-氨基-3-{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷基]苯并咪唑-2-基}-6-氯氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按方法9的描述用2-{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷基]苯并咪唑-2-基}-N-(4-氯-2-氰基苯基)乙酰胺合成的。LC/MS m/z 423.4(MH+)，Rt 1.71分鐘。
實(shí)施例124-氨基-3-[5-(二甲基氨基)苯并咪唑-2-基]氫喹啉-2-酮的合成
步驟12-[5-(二甲基氨基)苯并咪唑-2-基]乙酸乙酯
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例7所述用(3-氨基-4-硝基苯基)二甲胺合成的。所得棕褐色薄膜通過硅膠層析純化(5∶1∶94 MeOH∶Et3N∶CH2Cl2)，得到所需產(chǎn)物。LC/MS 248.3m/z(MH+)、Rt 1.24分鐘。
步驟24-氨基-3-[5-(二甲基氨基)苯并咪唑-2-基]氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例9所述用2-[5-(二甲基氨基)苯并咪唑-2-基]-N-(2-氰基苯基)乙酰胺合成的。LC/MS m/z 320.2(MH+)、Rt 1.72分鐘。
實(shí)施例132-(4-氨基-2-氧代-3-氫喹啉基)苯并咪唑-5-腈(carbonitrile)的合成
步驟12-(5-氰基苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例7的描述用4-氨基-3-硝基-芐腈合成的。LC/MS m/z230.2(MH+)，Rt 1.29分鐘。
步驟22-(4-氨基-2-氧代-3-氫喹啉基)苯并咪唑-5-腈
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例9所述用2-(5-氰基苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯和氨基苯甲腈合成的(未觀察到無環(huán)酰胺，所以無需NaOMe步驟)。LC/MS m/z 302.3(MH+)、Rt 2.62分鐘。
實(shí)施例142-(4-氨基-2-氧代-3-氫喹啉基)苯并咪唑-5-甲脒(carboxamidine)的合成
將在EtOH中的2-(4-氨基-2-氧代-3-氫喹啉基)苯并咪唑-5-腈(1.0當(dāng)量)置于玻璃壓力容器，冷卻至0℃并用HCl(氣體)鼓泡15分鐘。然后密封壓力容器，使其回到室溫并攪拌過夜。在真空下除去溶劑。將殘余物在玻璃壓力容器中溶于EtOH中，并冷卻至0℃。用NH3(氣體)鼓泡15分鐘，密封壓力容器并加熱至80℃，持續(xù)5小時(shí)。在真空下除去溶劑，并通過反相HPLC純化粗產(chǎn)物。LC/MS m/z 319.2(MH+)、Rt 1.70分鐘。
實(shí)施例154-氨基-3-[5-(2-嗎啉-4-基乙氧基)-苯并咪唑-2-基]氫喹啉-2-酮的合成
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例9(步驟1)所述用氨基苯甲腈合成的。粗制無環(huán)酰胺無需純化即可用于NaOMe環(huán)化步驟中。通過反相HPLC(DMSO/5％TFA)純化粗制的最終產(chǎn)物。LC/MS m/z 406.4(MH+)、Rt 1.56分鐘。
實(shí)施例164-羥基-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟15-嗎啉-4-基-2-硝基苯胺
標(biāo)題化合物是按方法9所述用嗎啉合成的。LC/MS m/z 224.1(MH+)，Rt 1.89分鐘。
步驟22-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯
室溫下，將按照方法9制備的5-嗎啉-4-基-2-硝基苯胺(1.0當(dāng)量)和10％Pd/C(0.1當(dāng)量)懸浮于無水EtOH。將反應(yīng)燒瓶抽空并隨后充滿氫氣。所得混合物在氫氣氛下攪拌過夜。然后加入3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯鹽酸鹽(2.0當(dāng)量)，所得混合物加熱回流過夜。所得溶液通過硅藻土過濾并減壓蒸發(fā)。將殘余物懸浮于CH2Cl2，加入濃NH4OH直到pH達(dá)11。濾出由此形成的NH4Cl。將兩相分離，有機(jī)相用Na2SO4干燥。蒸發(fā)除去溶劑，將殘余物和乙醚一起研磨，得到淡綠色粉末狀的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 290.3(MH+)，Rt 1.31分鐘。
步驟34-羥基-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮
-78℃氮?dú)夥障拢?-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯(1.0當(dāng)量)的無水THF中溶液中加入LiHMDS(1M的THF溶液，3.1當(dāng)量)，并將溶液攪拌1小時(shí)。然后逐滴加入無水THF中的1-芐基苯并[d]1，3-oxazaperhydroine-2，4-二酮(1.05當(dāng)量)溶液，并用1小時(shí)使所得溶液回到0℃。所得混合物用飽和氯化銨水溶液淬滅并分離有機(jī)層。水層用CH2Cl2萃取(4次)。合并的有機(jī)層用Na2SO4干燥，在真空下濃縮，將粗產(chǎn)物溶于甲苯并加熱回流16小時(shí)。在真空下除去甲苯，粗產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。得到白色固體狀的產(chǎn)物。LC/MS m/z 453.1(MH+)、Rt 2.91分鐘。將粗制4-羥基-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮(1.0當(dāng)量)溶于三氟甲烷磺酸，并在40℃加熱16小時(shí)。所得溶液用水稀釋并用6N NaOH(水溶液)中和，有黃色沉淀形成。粗制固體通過離心分離并用反相HPLC純化，制得淡黃色固體狀的所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 363.3(MH+)、Rt 1.77分鐘。
實(shí)施例173-[5-(3-氨基吡咯烷基)苯并咪唑-2-基]-4-羥基氫喹啉-2-酮的合成
步驟1N-[1-(3-氨基-4-硝基苯基)吡咯烷-3-基](叔丁氧基)羧酰胺
標(biāo)題化合物是按方法1的描述用3-(叔丁氧羰基氨基)吡咯烷(1.01當(dāng)量)和二異丙基乙胺(2.0當(dāng)量)合成的。得到橙色結(jié)晶固體的產(chǎn)物。LC/MS m/z 323.3(MH+)，Rt2.53分鐘。
步驟22-(5-{3-[(叔丁氧基)羰基氨基]吡咯烷基}苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例7的描述用N-[1-(3-氨基-4-硝基苯基)吡咯烷-3-基](叔丁氧基)羧酰胺合成。得到黃色油狀產(chǎn)物。LC/MS m/z 323.3(MH+)，Rt 2.53分鐘。
步驟33-[5-(3-氨基吡咯烷基)苯并咪唑-2-基]-4-羥基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例16所述的方法用2-(5-{3-[(叔丁氧基)羰基氨基]吡咯烷基}苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯合成的。得到黃色固體狀產(chǎn)物，然后除去芐基(參見實(shí)施例15的方法)。LC/MS m/e 362.3(MH+)、Rt 1.55分鐘。
實(shí)施例183-(5-{[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基}苯并咪唑-2-基)-4-羥基氫喹啉-2-酮的合成
步驟1(3-氨基-4-硝基苯基)[2-(二甲基氨基)乙基]甲胺
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例8所述用1，1，4-三甲基乙二胺(1.01當(dāng)量)與二異丙基乙胺(2.0當(dāng)量)合成的。得到的產(chǎn)物為淡黃色結(jié)晶固體。LC/MS m/z 239.3(MH+)、Rt 1.29分鐘。
步驟22-(5-{[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基}苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例7所述用(3-氨基-4-硝基苯基)[2-(二甲基氨基)乙基]甲胺合成的。得到黃色油狀的所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 305.2(MH+)、Rt 1.17分鐘。
步驟33-(5-{[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基}苯并咪唑-2-基)-4-羥基-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例16所述用2-(5-{[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基}苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯合成的。得到淡黃色固體的產(chǎn)物。LC/MS m/z 468.4(MH+)，Rt 2.26分鐘。
步驟43-(5-{[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基}苯并咪唑-2-基)-4-羥基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例16所述用3-(5-{[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基}苯并咪唑-2-基)-4-羥基-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。粗產(chǎn)物通過反相HPLC純化，得到黃色固體的產(chǎn)物。LC/MS m/z 378.4(MH+)，Rt 1.99分鐘。
實(shí)施例194-[(2-甲氧基乙基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟14-氯-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮
將在干燥的圓底燒瓶中的4-羥基-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮(1.0當(dāng)量)和POCl3的溶液在80℃加熱2小時(shí)。在真空下除去多余的POCl3并將粗產(chǎn)物用水淬滅。粗產(chǎn)物通過過濾收集并通過硅膠層析純化(1∶9 MeOH∶CH2Cl2)。分離得到紅色固體的4-氯-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮。LC/MS m/z 471.4(MH+)，Rt 2.35分鐘。
步驟24-[(2-甲氧基乙基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮
在室溫下用2-甲氧基乙基-胺(10當(dāng)量)處理4-氯-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮(1.0當(dāng)量)和EtOH的溶液。所得溶液加熱回流16小時(shí)，然后在真空下除去溶劑。粗制固體在水中聲波處理，過濾，再在己烷中聲波處理并再次過濾。粗產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。LC/MS m/z 510.4(MH+)，Rt 2.20分鐘。
步驟34-[(2-甲氧基乙基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮
4-[(2-甲氧基乙基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮用實(shí)施例16所述的方法脫芐基以制造標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 420.2(MH+)，Rt 1.57分鐘。得到的副產(chǎn)物是4-[(2-羥乙基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮(見下)。
實(shí)施例204-[(2-羥乙基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成
標(biāo)題化合物是用實(shí)施例16所述的方法將4-[(2-甲氧基乙基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮脫芐基后得到的副產(chǎn)物，該化合物通過反相HPLC分離為一種黃色固體。LC/MS m/z 406.2(MH+)，Rt 1.39分鐘。
實(shí)施例214-(甲氧基氨基)-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟14-(甲氧基氨基)-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用O-甲羥基胺合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟24-(甲氧基氨基)-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮
用實(shí)施例16中所述的方法將4-(甲氧基氨基)-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮脫芐基后得到黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z392.2(MH+)，Rt 1.82分鐘。
實(shí)施例223-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-(3-哌啶基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟13-{[3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}哌啶羧酸叔丁酯
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟23-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-(3-哌啶基氨基)氫喹啉-2-酮
用實(shí)施例16所述的方法將3-{[3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}哌啶羧酸叔丁酯脫芐基后得到黃色固體的標(biāo)題化合物。在反應(yīng)條件下除去叔丁氧羰基。LC/MS m/z 445.4(MH+)，Rt 1.73分鐘。
實(shí)施例233-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-[(3-哌啶基甲基)氨基]]-氫喹啉-2-酮的合成
步驟13-({[3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}甲基)哌啶羧酸叔丁酯
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用1-叔丁氧羰基-3-氨基甲基哌啶合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟23-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-[(3-哌啶基甲基)氨基]-氫喹啉-2-酮
用實(shí)施例16中所述的方法將3-({[3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}甲基)哌啶羧酸叔丁酯脫芐基后得到黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 459.6(MH+)，Rt 1.71分鐘。
實(shí)施例244-{[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟14-{[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用1，1-二甲基乙二胺合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟24-{[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮
用實(shí)施例16中所述的方法將4-{[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮脫芐基后得到黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MSm/z 433.4(MH+)，Rt 1.55分鐘。
實(shí)施例253-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-[(氧雜環(huán)戊烷-2-基甲基)氨基]-氫喹啉-2-酮的合成
步驟13-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-[(氧雜環(huán)戊烷-2-基甲基)氨基]-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用2-氨基甲基四氫呋喃合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟23-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-[(氧雜環(huán)戊烷-2-基甲基)氨基]-氫喹啉-2-酮
用實(shí)施例16中所述的方法將3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-[(氧雜環(huán)戊烷-2-基甲基)氨基]-1-芐基氫喹啉-2-酮脫芐基后得到黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MSm/z 446.5(MH+)，Rt 2.19分鐘。
實(shí)施例264-{[2-(甲基氨基)乙基]氨基}-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟14-{[2-(甲基氨基)乙基]氨基}-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用1-叔丁氧羰基-1-甲基乙二胺合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟24-{[2-(甲基氨基)乙基]氨基}-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮
用實(shí)施例16中所述的方法將4-{[2-(甲基氨基)乙基]氨基}-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮脫芐基后得到黃色固體的標(biāo)題化合物。在反應(yīng)條件下除去叔丁氧羰基。LC/MS m/z 419.4(MH+)，Rt 1.50分鐘。
實(shí)施例273-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-(吡咯烷-3-基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟13-{[3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}吡咯烷羧酸叔丁酯
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用1-叔丁氧羰基-3-氨基吡咯烷合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟23-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-(吡咯烷-3-基氨基)氫喹啉-2-酮
用實(shí)施例16中所述的方法將3-{[3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}吡咯烷羧酸叔丁酯脫芐基后得到黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 431.4(MH+)，Rt 1.50分鐘。
實(shí)施例284-[((2S)-2-氨基-4-甲基戊基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟14-[((2S)-2-氨基-4-甲基戊基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用(2S)-2-叔丁氧羰基氨基-4-甲基戊基胺合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟24-[((2S)-2-氨基-4-甲基戊基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮
用實(shí)施例16中所述的方法將4-[((2S)-2-氨基-4-甲基戊基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮脫芐基后得到黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 461.4(MH+)，Rt 1.78分鐘。
實(shí)施例294-[((2S)-2-氨基-3-甲基丁基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟1叔丁氧羰基保護(hù)的4-[((2S)-2-氨基-3-甲基丁基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用(2S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁胺合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟24-[((2S)-2-氨基-3-甲基丁基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮
用實(shí)施例16中所述的方法將4-[((2S)-2-氨基-3-甲基丁基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮脫芐基后得到黃色固體的標(biāo)題化合物。在反應(yīng)條件下除去叔丁氧羰基。LC/MS m/z 447.5(MH+)，Rt 2.96分鐘。
實(shí)施例304-氨基-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟14-氨基-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述在密封的玻璃試管中用氨合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟24-氨基-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮
用實(shí)施例16中所述的方法將4-氨基-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮脫芐基，并通過反相HPLC純化后得到亮黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z362.3(MH+)，Rt 1.61分鐘。
實(shí)施例313-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮的合成
步驟13-苯并咪唑-2-基-4-羥基-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例16的描述用2-苯并咪唑-2-基乙酸乙酯合成的。得到白色固體的產(chǎn)物，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。LC/MS m/z 368.4(MH+)，Rt 2.99分鐘。
步驟23-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用3-苯并咪唑-2-基-4-羥基-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。粗產(chǎn)物無需純化即可使用。
實(shí)施例323-苯并咪唑-2-基-4-(甲基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按實(shí)施例19的描述用甲胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后得到黃色固體狀的產(chǎn)物。LC/MS m/z 291.3(MH+)，Rt 1.64分鐘。
實(shí)施例333-苯并咪唑-2-基-4-(乙基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按實(shí)施例19的描述用乙胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后得到黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 305.3(MH+)，Rt 2.01分鐘。
實(shí)施例343-苯并咪唑-2-基-4-[(氧雜環(huán)戊烷-2-基甲基)氨基]氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按實(shí)施例19的描述用2-氨基甲基四氫呋喃和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后得到黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 361.2(MH+)，Rt 1.74分鐘。
實(shí)施例353-苯并咪唑-2-基-4-[(4-哌啶基甲基)氨基]氫喹啉-2-酮的合成
被保護(hù)的標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用1-叔丁氧羰基-4-氨基甲基哌啶和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法進(jìn)行脫保護(hù)和脫芐基后得到黃色固體狀的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 374.3(MH+)，Rt1.29分鐘。
實(shí)施例363-苯并咪唑-2-基-4-[(4-氟苯基)氨基]氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按實(shí)施例19的描述用4-氟苯胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 371.2(MH+)，Rt 1.92分鐘。
實(shí)施例373-苯并咪唑-2-基-4-(甲氧基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
3-苯并咪唑-2-基-4-(甲氧基氨基)氫喹啉-2-酮
芐基化的標(biāo)題化合物是按實(shí)施例19的描述用O-甲基羥基胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 307.3(MH+)，Rt 1.77分鐘。
實(shí)施例383-苯并咪唑-2-基-4-(苯并咪唑-6-基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
3-苯并咪唑-2-基-4-(苯并咪唑-6-基氨基)氫喹啉-2-酮
芐基化的標(biāo)題化合物是按實(shí)施例19的描述用5-氨基苯并咪唑和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 393.4(MH+)，Rt 1.41分鐘。
實(shí)施例393-苯并咪唑-2-基-4-(苯基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
3-苯并咪唑-2-基-4-(苯基氨基)氫喹啉-2-酮
芐基化的標(biāo)題化合物是按實(shí)施例19的描述用苯胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 353.4(MH+)，Rt 2.38分鐘。
實(shí)施例403-苯并咪唑-2-基-4-(奎寧環(huán)-3-基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按實(shí)施例19的描述用3-氨基奎寧環(huán)和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 386.4(MH+)，Rt 1.82分鐘。
實(shí)施例413-苯并咪唑-2-基-4-[(咪唑-5-基甲基)氨基]氫喹啉-2-酮的合成
3-苯并咪唑-2-基-4-[(咪唑-5-基甲基)氨基]氫喹啉-2-酮
芐基化的標(biāo)題化合物是按實(shí)施例19的描述用4-氨基甲基-1H-咪唑和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 357.4(MH+)，Rt 1.34分鐘。
實(shí)施例423-苯并咪唑-2-基-4-(嗎啉-4-基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按實(shí)施例19的描述用4-氨基嗎啉和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 362.4(MH+)，Rt 1.42分鐘。
實(shí)施例433-苯并咪唑-2-基-4-肼基氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按實(shí)施例19的描述用肼和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 292.3(MH+)，Rt 1.19分鐘。
實(shí)施例443-苯并咪唑-2-基-2-氧代氫喹啉-4-腈的合成
將3-苯并咪唑-2-基-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮(1當(dāng)量)溶于DMA，并一次性加入CuCN(10當(dāng)量)。反應(yīng)混合物在90℃攪拌過夜。所得混合物冷卻至室溫，加入水并過濾分離除去橙色沉淀。所得固體用水合FeCl3溶液在70℃處理1小時(shí)。將該懸液離心并除去溶液。剩下的固體用6N HCl(2次)，飽和Na2CO3(2次)，水(2次)洗滌并凍干。將所得粉末溶于1mL三氟甲磺酸并于60℃加熱過夜。將所得混合物冷卻至0℃并緩慢加入水。在懸液中逐滴加入飽和LiOH至pH達(dá)8，然后將固體濾出并用水洗滌(3次)。通過反相HPLC純化得到所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 287.1(MH+)，Rt 1.89分鐘。
實(shí)施例453-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-4-(3-哌啶基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟12-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例1的描述用4，5-二甲基苯-1，2-二胺合成的。粗制的黃色油狀物首先通過硅膠層析純化(96.5∶3.0∶0.5，CH2Cl2∶MeOH∶Et3N)，然后從甲苯中重結(jié)晶，得到淡黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 233.1(MH+)，Rt 1.73分鐘。
步驟23-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-4-羥基-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例16所述用2-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯合成的。粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化(98.5∶1.5，CH2Cl2∶MeOH)，得到黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 396.2(MH+)、Rt 3.60分鐘。
步驟33-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例19所述用3-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-4-羥基-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。得到橙色-黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 414.2(MH+)、Rt 2.47分鐘。
步驟43-{[3-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}哌啶羧酸叔丁酯
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例19所述用1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶合成的。粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化(99∶1 CH2Cl2∶MeOH)，得到黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z578.5(MH+)、Rt 3.05分鐘。
步驟53-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-4-(3-哌啶基氨基)氫喹啉-2-酮
3-{[3-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}哌啶-羧酸叔丁酯按實(shí)施例16的描述脫芐基。粗產(chǎn)物通過反相HPLC純化，得到為淡黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 388.4(MH+)，Rt 1.61分鐘。
實(shí)施例464-氨基-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮的合成
步驟13H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基乙腈
氰乙酸乙酯(1.5當(dāng)量)和2，3-二氨基吡啶(1當(dāng)量)在185℃加熱30分鐘。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并用乙醚研磨黑色固體。然后得到深棕色粉末狀的所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 159.1(MH+)，Rt 0.44分鐘。
步驟23H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基乙酸乙酯
3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基乙腈懸浮于EtOH并用HCl氣體鼓泡3小時(shí)。懸液一開始似乎溶解，但幾乎立即開始形成沉淀。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃并小心加入冷的飽和NaHCO3溶液。還加入NaHCO3固體以將pH調(diào)至7.6。然后用EtOAc萃取水相并將有機(jī)萃取物干燥(Na2SO4)。減壓除去溶劑后，在硅膠上通過層析純化殘余物(CH2Cl2中含有10％MeOH，含有1％Et3N)以得到為淡棕色固體的所需產(chǎn)物。LC/MS m/z206.1(MH+)，Rt 0.97分鐘。
步驟34-氨基-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮
于-78℃，將LiHMDS(3.0當(dāng)量)加入在THF中的3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基乙酸乙酯(1.0當(dāng)量)。20分鐘后，加入溶于THF的2-氨基苯甲腈(1.1當(dāng)量)溶液。使所得混合物升溫至室溫，攪拌3小時(shí)然后回流過夜。將混合物冷卻至0℃并用飽和的NH4Cl水溶液淬滅。有沉淀形成，將其濾出并用乙醚重復(fù)洗滌，得到淡棕色固體的所需化合物。LC/MS m/z 278.2(MH+)、Rt 1.82分鐘。
實(shí)施例474-氨基-3-(5-嗎啉-4-基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮的合成
步驟16-嗎啉-4-基-3-硝基吡啶-2-胺
將嗎啉(4當(dāng)量)加入到在CH3CN中的6-氯-3-硝基吡啶-2-胺(1當(dāng)量)懸液，并將反應(yīng)混合物在70℃攪拌5小時(shí)。減壓蒸發(fā)除去溶劑，并將殘余物和醚研磨，得到淡黃色粉末的所需化合物。LC/MS m/z 225.0(MH+)，Rt 1.79分鐘。
步驟2(5-嗎啉-4-基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)乙酸乙酯
在6-氯-3-硝基吡啶-2-胺(1.0當(dāng)量)的EtOH溶液中加入Pd/C(0.1當(dāng)量)。用氫反復(fù)吹掃反應(yīng)容器，然后在氫氣氛(1atm)下攪拌18小時(shí)。一次性加入3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯鹽酸鹽(2.0當(dāng)量)并將反應(yīng)混合物回流過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，通過硅藻土塞過濾并用EtOH洗滌塞子。減壓蒸發(fā)除去溶劑后，將殘余物通過硅膠層析純化(CH2Cl2中含有5％MeOH，含有1％Et3N)，得到棕色固體狀的所需產(chǎn)物。LC/MSm/z 291.3(MH+)，Rt 1.71分鐘。
步驟34-氨基-3-(5-嗎啉-4-基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮
標(biāo)題化合物是按實(shí)施例46的描述用2-(5-嗎啉-4-基咪唑并[5，4-b]吡啶-2-基)乙酸乙酯和2-氨基苯甲腈合成的，有改進(jìn)的后處理(workup)步驟。用飽和的氯化銨水溶液淬滅后將兩相分離并用EtOAc萃取水相。靜置后有固體形成并從有機(jī)萃取物中沉淀出來。將這種深棕色的固體沉淀濾出并干燥。通過反相層析純化得到微紅色固體狀的所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 363.2(MH+)，Rt 2.20分鐘。
實(shí)施例484-氨基-5-[(2R，6S)-2，6-二甲基嗎啉-4-基]-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮的合成
于-78℃，將LiHMDS(3.0當(dāng)量)加入在THF中的3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基乙酸乙酯(1.0當(dāng)量)。20分鐘后加入2-氨基-6-[(2R，6S)-2，6-二甲基嗎啉-4-基]芐腈(1.1當(dāng)量)的THF溶液。使所得混合物升溫至室溫，攪拌2小時(shí)，然后加熱至60℃過夜。將混合物冷卻至0℃并用飽和的NH4Cl水溶液淬滅。水相用CH2Cl2萃取(5次)，收集有機(jī)萃取物，將其干燥(Na2SO4)并濃縮。粗產(chǎn)物通過HPLC純化。LC/MS m/z 391.2(MH+)，Rt 2.35分鐘。
實(shí)施例494-氨基-3-{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基}喹啉-2(1H)-酮的合成
步驟1{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基}乙酸乙酯
將6-氯-3-硝基-2-氨基吡啶(1.0當(dāng)量)和3-(二甲基氨基)吡咯烷(1.1當(dāng)量)溶于CH3CN，加入異丙基乙胺(2.0當(dāng)量)。反應(yīng)混合物于70℃加熱過夜。將溶液冷卻至室溫并蒸發(fā)除去溶劑。所得殘余物與乙醚和水一起研磨并在真空下干燥(LC/MS m/z252.2(MH+)，Rt 1.09分鐘)。室溫下，將分離的產(chǎn)物(1.0當(dāng)量)和10％Pd/C(0.1當(dāng)量)懸浮于無水EtOH。將反應(yīng)燒瓶抽空，然后充滿H2。將所得混合物在氫氣氛下攪拌過夜。然后加入3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯鹽酸鹽(2.0當(dāng)量)，將所得混合物加熱回流過夜。然后通過硅藻土過濾并減壓蒸發(fā)。將殘余物懸浮于CH2Cl2并加入濃NH4OH直到pH達(dá)11。濾出由此形成的NH4Cl。將兩相分離并干燥有機(jī)相(Na2SO4)。蒸發(fā)溶劑，將殘余物與乙醚一起研磨，得到一種淡綠色粉末。LC/MS m/z 318.1(MH+)，Rt 1.11分鐘。
步驟24-氨基-3-{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基}喹啉-2(1H)-酮
于-40℃，將LiHMDS(3.5當(dāng)量)加入在THF中的{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基}乙酸乙酯(1.0當(dāng)量)。10分鐘后加入2-氨基苯甲腈(1.1當(dāng)量)的THF溶液。使所得混合物升溫至室溫，攪拌1小時(shí)，然后加熱至60℃過夜。將混合物冷卻至室溫并用NH4Cl(飽和水溶液)淬滅。水相用CH2Cl2萃取(5次)。在萃取時(shí)從有機(jī)溶液中有產(chǎn)物析出(crash out)。減壓蒸發(fā)溶劑得到一種棕色固體，將其與MeOH和丙酮反復(fù)研磨，得到黃綠色粉末。LC/MS m/z 390.2(MH+)，Rt 1.48分鐘。
實(shí)施例504-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)喹啉-2(1H)-酮的合成
步驟12-(4-乙基哌嗪基)-6-硝基苯甲腈
將2，6-二硝基苯甲腈(1.0當(dāng)量)和乙基哌嗪(3.6當(dāng)量)溶于DMF。所得溶液在90℃加熱2小時(shí)。將溶液冷卻至室溫并倒入水中。過濾所形成的沉淀，得到棕色固體狀的所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 260.1(MH+)，Rt 1.69分鐘。
步驟26-氨基-2-(4-乙基哌嗪基)苯甲腈
將2-(4-乙基哌嗪基)-6-硝基苯甲腈(1.0當(dāng)量)溶于EtOH和EtOAc。燒瓶用N2吹掃并加入10％Pd/C(0.1當(dāng)量)。將燒瓶抽空并用H2吹掃三次。所得混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物通過硅藻土過濾并用EtOAc洗滌過濾墊(filter pad)。在真空下除去溶劑以得到黃色固體狀的所需產(chǎn)物。LC/MS m/z 231.2(MH+)，Rt 1.42分鐘。
步驟34-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)喹啉-2(1H)-酮
于0℃，將t-BuLi(3.1當(dāng)量)加入在THF中的2-苯并咪唑-2-基乙酸乙酯(1.0當(dāng)量)和6-氨基-2-(4-乙基哌嗪基)苯甲腈(1.0當(dāng)量)。將反應(yīng)物攪拌過夜。所得混合物用NH4Cl(水溶液，飽和)淬滅并用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并在真空下濃縮，得到棕色固體。粗產(chǎn)物和CH2Cl2及MeOH一起研磨，得到棕褐色固體。LC/MS m/z 389.1(MH+)，Rt 1.80分鐘。
實(shí)施例513-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-羥基-1H-[1，7]二氮雜萘-2-酮的合成
步驟13-[2-(甲氧基羰基)乙酰氨基]吡啶-4-羧酸
將3-氨基吡啶-4-羧酸(1.0當(dāng)量)、2-(氯羰基)乙酸甲酯(1.1當(dāng)量)和三乙胺(2.0當(dāng)量)的丙酮溶液在室溫下攪拌過夜。在真空下除去溶劑。產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。LC/MS m/z 239.2(MH+)，Rt 1.40分鐘。
步驟23-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-羥基-1H-[1，7]二氮雜萘-2-酮
將3-[2-(甲氧基羰基)乙酰氨基]吡啶-4-羧酸(1.1當(dāng)量)和1，2-苯二胺(1.0當(dāng)量)合并，并在150℃加熱3小時(shí)。粗產(chǎn)物通過反相HPLC純化(DMSO/5％TFA)。LC/MS m/z279.3(MH+)，Rt 1.73分鐘。
實(shí)施例524-羥基-3-(6-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-[1，7]二氮雜萘-2-酮的合成
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例50的描述用3-[2-(甲氧基羰基)乙酰氨基]-吡啶-4-羧酸和4-甲基-1，2-苯二胺合成的。粗制產(chǎn)物通過反相HPLC純化(DMSO/5％TFA)。LC/MSm/z 293.3(MH+)，Rt 1.99分鐘。
實(shí)施例534-[(2-羥乙基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例16中所述的方法將4-[(2-甲氧基乙基)氨基]-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮(實(shí)施例52)脫芐基后得到的副產(chǎn)物，該化合物通過反相HPLC分離得到黃色固體。LC/MS m/z 406.2(MH+)，Rt 1.39分鐘。
實(shí)施例544-(甲氧基氨基)-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟14-(甲氧基氨基)-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用O-甲基羥基胺作為親核試劑合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟24-(甲氧基氨基)-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例16中所述的方法將4-(甲氧基氨基)-3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-1-芐基氫喹啉-2-酮脫芐基后得到黃色固體。LC/MS m/z392.2(MH+)，Rt 1.82分鐘。
實(shí)施例553-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-(3-哌啶基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟13-{[3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}哌啶羧酸叔丁酯
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶作為胺合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟23-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-(3-哌啶基氨基)氫喹啉-2-酮
產(chǎn)物是用實(shí)施例16中描述的方法將3-{[3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}哌啶羧酸叔丁酯脫芐基后得到的黃色固體。在反應(yīng)條件下除去叔丁氧羰基。LC/MS m/z 445.4(MH+)，Rt1.73分鐘。
實(shí)施例563-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-[(3-哌啶基甲基)氨基]-氫喹啉-2-酮的合成
步驟13-({[3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}甲基)哌啶羧酸叔丁酯
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用1-叔丁氧羰基-3-氨基甲基哌啶作為胺合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟23-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-[(3-哌啶基甲基)氨基]-氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是用實(shí)施例16中所述的方法將3-({[3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}甲基)哌啶羧酸叔丁酯脫芐基后得到黃色固體。LC/MS m/z 459.6(MH+)，Rt1.71分鐘。
實(shí)施例573-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-[(氧雜環(huán)戊烷-2-基甲基)氨基]-氫喹啉-2-酮的合成
步驟13-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-[(氧雜環(huán)戊烷-2-基甲基)氨基]-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用2-氨基甲基四氫呋喃作為胺合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟23-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-[(氧雜環(huán)戊烷-2-基甲基)氨基]-氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是用實(shí)施例16中所述的方法將3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-[(氧雜環(huán)戊烷-2-基甲基)氨基]-1-芐基氫喹啉-2-酮脫芐基后得到黃色固體。LC/MS m/z 446.5(MH+)，Rt2.19分鐘。
實(shí)施例583-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-(吡咯烷-3-基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟13-{[3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}吡咯烷羧酸叔丁酯
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用1-叔丁氧羰基-3-氨基吡咯烷作為胺合成的。產(chǎn)物無需純化即可使用。
步驟23-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-4-(吡咯烷-3-基氨基)氫喹啉-2-酮
用實(shí)施例16中所述的方法將3-{[3-(5-嗎啉-4-基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}吡咯烷羧酸叔丁酯脫芐基后，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 431.4(MH+)，Rt1.50分鐘。
實(shí)施例593-苯并咪唑-2-基-4-(乙基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用乙胺作為胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 305.3(MH+)，Rt2.01分鐘。
實(shí)施例603-苯并咪唑-2-基-4-[(氧雜環(huán)戊烷-2-基甲基)氨基]氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用2-氨基甲基四氫呋喃作為胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 361.2(MH+)，Rt1.74分鐘。
實(shí)施例613-苯并咪唑-2-基-4-[(4-哌啶基甲基)氨基]氫喹啉-2-酮的合成
被保護(hù)的標(biāo)題化合物是按照過程11的描述用1-叔丁氧羰基-4-氨基甲基哌啶作為胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法進(jìn)行脫保護(hù)和脫芐基后，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 374.3(MH+)，Rt1.29分鐘。
實(shí)施例623-苯并咪唑-2-基-4-[(4-氟苯基)氨基]氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用4-氟苯胺作為胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法進(jìn)行脫芐基后，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 371.2(MH+)，Rt1.92分鐘。
實(shí)施例633-苯并咪唑-2-基-4-(甲氧基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用O-甲基羥基胺作為胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 307.3(MH+)，Rt1.77分鐘。
實(shí)施例643-苯并咪唑-2-基-4-(苯并咪唑-6-基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用5-氨基苯并咪唑作為胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 393.4(MH+)，Rt1.41分鐘。
實(shí)施例653-苯并咪唑-2-基-4-(苯基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用苯胺作為胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 353.4(MH+)，Rt2.38分鐘。
實(shí)施例663-苯并咪唑-2-基-4-(奎寧環(huán)-3-基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用3-氨基奎寧環(huán)作為胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 386.4(MH+)，Rt1.82分鐘。
實(shí)施例673-苯并咪唑-2-基-4-[(咪唑-5-基甲基)氨基]氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用4-氨基甲基-1H-咪唑作為胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 357.4(MH+)，Rt1.34分鐘。
實(shí)施例683-苯并咪唑-2-基-4-(嗎啉-4-基氨基)氫喹啉-2-酮
芐基化的標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用4-氨基嗎啉作為胺和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 362.4(MH+)，Rt1.42分鐘。
實(shí)施例693-苯并咪唑-2-基-4-肼基氫喹啉-2-酮的合成
芐基化的標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用肼作為親核試劑和3-(苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。用實(shí)施例16中所述的方法脫芐基后，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 292.3(MH+)，Rt1.19分鐘。
實(shí)施例703-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-4-(3-哌啶基氨基)氫喹啉-2-酮的合成
步驟12-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例16的描述用4，5-二甲基苯-1，2-二胺作為二胺合成的。粗制黃色油狀物通過硅膠層析純化(96.5∶3.0∶0.5，CH2Cl2∶MeOH∶TEA)，然后從甲苯重結(jié)晶，得到淡黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 233.1(MH+)，Rt1.73分鐘。
步驟23-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-4-羥基-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例16的描述用2-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯合成的。粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化(98.5∶1.5，CH2Cl2∶MeOH)，得到黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 396.2(MH+)，Rt3.60分鐘。
步驟33-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用3-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-4-羥基-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。得到橙黃色固體狀的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z414.2(MH+)，Rt2.47分鐘。
步驟43-{[3-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}哌啶羧酸叔丁酯
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例19的描述用1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶作為胺和3-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-4-氯-1-芐基氫喹啉-2-酮合成的。粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化(99∶1CH2Cl2∶MeOH)，得到黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 578.5(MH+)，Rt3.05分鐘。
步驟53-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-4-(3-哌啶基氨基)氫喹啉-2-酮
按照實(shí)施例16的描述將3-{[3-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1-芐基-4-氫喹啉基]氨基}哌啶-羧酸叔丁酯脫芐基。粗產(chǎn)物通過反相HPLC純化，得到淡黃色固體的標(biāo)題化合物。LC/MS m/z 388.4(MH+)，Rt1.61分鐘。
實(shí)施例714-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-(4-甲氧基苯基)喹啉-2(1H)-酮的合成
在管形瓶中裝入4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-溴喹啉-2(1H)-酮(1.0當(dāng)量)的鹽酸鹽和4-甲氧基苯基硼酸(1.3當(dāng)量)。在此溶液中加入DME和2M Na2CO3水溶液(10％)。在溶液中鼓入氬氣5分鐘，使混合物脫氣。然后在脫氣的溶液中加入Pd(dppf)2Cl2.CH2Cl2(0.2當(dāng)量)?；旌衔镌?0℃加熱16小時(shí)，分離頂部有機(jī)層并過濾。除去溶劑，并通過反相HPLC純化殘余物，得到所需產(chǎn)物。MS m/z 492.6(M+H)。
實(shí)施例724-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-(4-羥基苯基)喹啉-2(1H)-酮的合成
將4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-(4-甲氧基苯基)喹啉-2(1H)-酮(實(shí)施例70)溶于30％HBr/AcOH，并在60℃加熱直到反應(yīng)完全。將所得混合物冷卻，然后用2M NaOH中和。所得混合物用EtOAc萃取，有機(jī)層用Na2SO4干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。殘余物通過反相HPLC純化，得到所需產(chǎn)物。MS m/z478.6(M+H)。
實(shí)施例734-[((3S)-奎寧環(huán)-3-基)氨基]-3-苯并咪唑-2-基-6-氯-氫化吡啶并[3，4-b]吡啶-2-酮的合成
步驟15-[(叔丁氧基)羰基氨基]-2-氯吡啶-4-羧酸甲酯
將5-[(叔丁氧基)羰基氨基]-2-氯吡啶-4-羧酸(1當(dāng)量)溶于THF和MeOH。將混合物加熱至50℃以完全溶解起始物質(zhì)。然后將溶液冷卻至0℃，并加入TMSCHN2(2M，THF中，2當(dāng)量)。使反應(yīng)物升溫至室溫并攪拌過夜。將反應(yīng)物濃縮，得到棕色固體狀的甲酯(100％)。
步驟25-{(叔丁氧基)-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]羰基氨基}-2-氯吡啶-4-羧酸甲酯
用己烷洗滌置于圓底燒瓶中的NaH(60％，在油中，1.5當(dāng)量)以除去礦物油。然后在洗滌過的NaH中加入DMF。用另一個(gè)漏斗將5-[(叔丁氧基)羰基氨基]-2-氯吡啶-4-羧酸甲酯(1當(dāng)量)的DMF溶液加入到DMF中的NaH混合物，然后在室溫下攪拌15分鐘?；旌衔镌?0℃加熱1.5小時(shí)。然后將反應(yīng)物冷卻至室溫，并通過另一個(gè)漏斗加入溶于DMF的4-甲氧基芐基氯(1.3當(dāng)量)。反應(yīng)在50℃攪拌過夜。冷卻后，在反應(yīng)混合物中加入水。然后加入乙酸乙酯并將混合物攪拌15分鐘。水層用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層合并，用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到棕色油狀的5-{(叔丁氧基)-N-{(4-甲氧基苯基)-甲基}-羰基氨基}-2-氯吡啶-4-羧酸甲酯(81％)。
步驟32-氯-5-{(4-甲氧基苯基)甲基}氨基}吡啶-4-羧酸甲酯
在粗制5-{(叔丁氧基)-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]羰基氨基}-2-氯吡啶-4-羧酸甲酯(1當(dāng)量)的CH2Cl2溶液中加入1M HCl(2當(dāng)量)。反應(yīng)攪拌過夜，然后濃縮，得到粗制的2-氯-5-{(4-甲氧基苯基)甲基}}-氨基}吡啶-4-羧酸甲酯(80％)。
步驟42-氯-5-{[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基}吡啶-4-羧酸
在5-{(叔丁氧基)-N-[(4-甲氧基苯基)-甲基]羰基氨基}-2-氯吡啶-4-羧酸甲酯(1當(dāng)量)的MeOH溶液中加入NaOH水溶液(3當(dāng)量)。立即有沉淀形成。加熱反應(yīng)物直到溶液變得澄清，然后在室溫下攪拌1小時(shí)。然后加入檸檬酸水溶液(1M)使產(chǎn)物從溶液中析出。然后收集產(chǎn)物以得到標(biāo)題化合物，產(chǎn)率為77％。
步驟56-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吡啶并[3，4-d]-1，3-oxazaperhydroine-2二酮
在2-氯-5-{[(4-甲氧基苯基)甲基]-氨基}吡啶-4-羧酸(1當(dāng)量)的二烷溶液中加入光氣/甲苯(過量)。反應(yīng)攪拌過夜，然后蒸發(fā)，得到所需產(chǎn)物(63％)。
步驟63-苯并咪唑-2-基-6-氯-4-羥基-1-[(4-甲氧基苯基)-甲基]氫化吡啶并[3，4-b]吡啶-2-酮
在-78℃，在DMF和THF(2∶1)中的2-苯并咪唑-2-基乙酸乙酯(1當(dāng)量)溶液中逐滴加入LiHMDS(3當(dāng)量)。攪拌1小時(shí)后逐滴加入DMF和THF(1∶2)中的6-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吡啶并-[3，4-d]-1，3-oxazaperhydroine-2，4-二酮溶液，并將反應(yīng)物攪拌1.5小時(shí)。用NH4Cl水溶液淬滅反應(yīng)，并使其升溫至室溫。水相用EtOAc萃取，將有機(jī)層合并，用H2O和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，并濃縮。在殘余物中加入甲苯，并將反應(yīng)物回流過夜。然后冷卻混合物以使產(chǎn)物析出。過濾反應(yīng)物，用甲苯和EtOH洗滌產(chǎn)物以得到該產(chǎn)物(45％)。
步驟76-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2-氧代-3-{1-[(三氟甲基)磺酰]-苯并咪唑-2-基}氫化吡啶并[3，4-b]吡啶-4-基(三氟甲基)磺酸酯
將3-苯并咪唑-2-基-6-氯-4-羥基-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]氫化吡啶并[3，4-b]吡啶-2-酮(1當(dāng)量)的CH2Cl2溶液冷卻至-10℃，并加入吡啶(16當(dāng)量)。然后用注射器緩慢地滴加三氟甲烷-磺酸酐(8當(dāng)量)，使溫度不要超過-4℃。反應(yīng)在-4℃攪拌2小時(shí)。使反應(yīng)物升溫至室溫并攪拌直到澄清(4小時(shí))。然后用飽和NaHCO3淬滅反應(yīng)。有機(jī)層用飽和NaHCO3水溶液、1.0M檸檬酸、H2O、飽和NaHCO3水溶液、H2O和鹽水洗滌。有機(jī)層用MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到黃色固體的產(chǎn)物(96％)。
步驟84-[((3S)-奎寧環(huán)-3-基)氨基]-6-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-{1-[(三氟甲基)磺酰]苯并咪唑-2-基}氫化吡啶并[3，4-b]吡啶-2-酮
在6-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2-氧代-3-{1-[(三氟甲基)磺酰]苯并咪唑-2-基}氫化吡啶并[3，4-b]吡啶-4-基(三氟甲基)磺酸酯(1當(dāng)量)的CH3CN溶液中加入三乙胺(4當(dāng)量)，然后加入(3S)-氨基奎寧環(huán)(3當(dāng)量)。然后將反應(yīng)物在80℃攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻至室溫并蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物用于下面的步驟。
步驟94-[((3S)-奎寧環(huán)-3-基)氨基]-3-苯并咪唑-2-基-6-氯-氫化吡啶并[3，4-b]吡啶-2-酮
將粗制的4-[((3S)奎寧環(huán)-3-基)氨基]-6-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-{1-[(三氟甲基)磺酰]苯并咪唑-2-基}氫化吡啶并[3，4-b]吡啶-2-酮溶于TFA和HCl的混合物(比例8∶1，預(yù)混合)。反應(yīng)在80℃攪拌過夜。然后將反應(yīng)物冷卻至室溫，蒸發(fā)除去溶劑。中和粗制產(chǎn)物，隨后用制備型HPLC純化。首先用NaOH使從制備型LC得到的合并組分為堿性，然后用NaHCO3(飽和)使游離堿沉淀。30分鐘后，收集沉淀并用水洗滌幾次。將沉淀置于一個(gè)燒瓶中，加入H2O/CH3CN(1∶1)溶液。在此溶液中加入HCl(1M)，將溶液凍干，得到產(chǎn)物鹽(17％兩個(gè)步驟)。MS m/z 421.9(M+H)。
實(shí)施例744-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-(1，2，3，6-四氫-吡啶-4-基)-1H-喹啉-2-酮的合成
步驟14(R)-[4-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-6-基]-3，6-二氫-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(3)。
類似的方法可參見以下參考資料，出于所有目的，它們已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣Eastwood，P.R.Tetrahedron Letters 2000，41，3705-3708。室溫下，在攪拌的、氬氣吹掃(1分鐘)的6-碘代喹諾酮(1)(25mg，0.049mmol)和4-三甲基甲錫烷基-3，6-二氫-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(2)(24mg，0.069mmol)的DMF溶液中一次性加入鈀催化劑Pd(dppf)2Cl2.CH2Cl2(6mg，0.007mmol)溶液。在氬氣中反應(yīng)物在85℃加熱2小時(shí)。產(chǎn)物通過制備型HPLC純化，用反相Ultro 120 C18柱，采用2％梯度(AcCN/水，0.1％TFA)。將純化的餾份凍干，得到6mg白色粉末，產(chǎn)率為21％，純度＞97％。
步驟24-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-(1，2，3，6-四氫-吡啶-4-基)-1H-喹啉-2-酮
在凍干的Boc-哌啶喹諾酮(3)粉末(5mg，0.009mmol)中加入1M HCl水溶液(1mL)。所得溶液在50℃攪拌3小時(shí)。產(chǎn)物通過制備型HPLC純化，用反相Ultro 120 C18柱，采用2％梯度(AcCN/水，0.1％TFA)。將純化的餾份凍干以得到4mg白色粉末，產(chǎn)率為78％，純度＞98％。
實(shí)施例754-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6，7-二羥基-1H-喹啉-2-酮的合成
將BCl3(1M的CH2Cl2溶液)(5mL)加入到在8mL管形瓶?jī)?nèi)的6，7-二甲氧基喹諾酮(1)粉末(20mg，0.045mmol)中。將瓶加帽，并將所得溶液在40℃攪拌2天。通過HPLC和LCMS監(jiān)測(cè)反應(yīng)過程。如果需要加入更多BCl3。將反應(yīng)物濃縮至干，將殘余物溶于DMSO(1mL)。產(chǎn)物通過制備型HPLC純化，用反相Ultro 120 C18柱，采用2％梯度(AcCN/水，0.1％TFA)。將純化的組分凍干以得到6mg白色粉末，產(chǎn)率為32％，純度＞98％。
實(shí)施例764-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-(嗎啉-4-羰基)-1H-喹啉-2-酮的合成
步驟14-溴-2-硝基-苯甲酸
使用了以下參考資料中所述方法的改進(jìn)方案，出于所有目的，這些參考資料已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣Boojamra，C.G.；Burow，K.M.；Thompson，L.A.；Ellman，J.A.J.Org.Chem.，1997，62，1240-1256。將NaNO2(1.9g，27.4mmol)的水溶液(65mL)加入0℃的正在攪拌的4-氨基-2-硝基-苯甲酸(1)(5g，27.4mmol)在48％HBr(40mL)和水(82mL)中的溶液。約15分鐘后混濁的反應(yīng)混合物變成澄清的橙黃色溶液。攪拌25分鐘后，在0℃下，將該溶液逐滴加入到CuBr(5.2g，36.3mmol)在48％HBr水溶液(90mL)中的溶液。棕紫色混合物中有黃色泡沫生成并有氣體產(chǎn)生。在0℃攪拌1小時(shí)后，將混合物減壓濃縮。水層用EtOAc萃取(4×300mL)，用Na2SO4干燥并濃縮至干，得到黑色固體。粗制產(chǎn)物通過含有弗洛里西(florisil)(約20g)的塞子過濾并用EtOAc洗脫。合并的有機(jī)組分蒸發(fā)至約200mL，并用1M HCl(2×50mL)和鹽水(50mL)洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干，得到6.1g淡黃色固體產(chǎn)物(2)，產(chǎn)率為91％，用HPLC測(cè)得純度＞90％。
步驟22-氨基-4-溴-苯甲酸
使用了以下參考資料中所述方法的改進(jìn)方案，出于所有目的，這些參考資料已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣Boojamra，C.G.；Burow，K.M.；Thompson，L.A.；E1lman，J.A.J.Org.Chem.，1997，62，1240-1256。室溫下，將(NH4)2Fe(II)(SO4)2·6H2O(24.4g，63mmol)的水溶液(60mL)加入正在攪拌的4-溴-2-硝基-苯甲酸(2)(3.05g，12.45mmol)在濃氨水(40mL)中的溶液。再用一份水(20mL)洗滌硫酸亞鐵溶液的燒瓶，將其加到反應(yīng)中。16小時(shí)后，反應(yīng)物由暗綠色溶液變成銹棕色混合物，通過硅藻土塞子過濾，并用濃氨水(80mL)和水(4×80mL)洗滌。用濃鹽酸將合并的含水組分酸化至pH 1-2，并用EtOAc(4×500mL)萃取。將有機(jī)組分減壓蒸發(fā)成棕色固體。將粗制產(chǎn)物溶于EtOAc(300mL)，用水(40mL)和鹽水(40mL)洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干，得到2.47g棕色固體產(chǎn)物(3)，產(chǎn)率為91％，并通過HPLC測(cè)得純度＞90％。
步驟34-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-溴-1H-喹啉-2-酮
(R)-喹諾酮4是用本文列出的其它實(shí)施例中所述的標(biāo)準(zhǔn)方法制備的。
步驟44-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-7-腈
使用了以下參考資料中所述方法的改進(jìn)方案，出于所有目的，這些參考資料已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣Anderson，B.A.；Bell，E.C.；Ginah，F(xiàn).O.；Harn，N.K.；PagH、L.M.；Wepsiec，J.P.J.Org.Chem.，1998，63，8224-8228。在THF(20mL)和CH3CH2CN(5mL)中的6-溴-(R)-喹諾酮(4)(99mg，0.21mmol)、KCN(85mg，1.3mmol)、CuI(70mg，0.37mmol)、Pd(PPh3)4(207mg，0.18mmol)的混合物用干氬氣吹掃(1分鐘)并進(jìn)行聲波處理直到有均勻的黃色混濁懸浮物形成。反應(yīng)于85℃在氬氣下攪拌4天，直到用HPLC和LCMS確定反應(yīng)完全。過濾乳狀黃綠色混合物，濾液用AcCN(100mL)洗滌。減壓蒸發(fā)濾液得到黃色固體。粗制產(chǎn)物溶于DMSO(1mL)。產(chǎn)物通過制備型HPLC純化，用反相Ultro 120 C18柱，采用1％梯度(AcCN/水，0.1％TFA)。然后凍干純化的組分，得到60mg白色固體狀的5，產(chǎn)率為70％，純度為98％。
步驟5a4-(S)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-7-羧酸
將6-氰基-喹諾酮(5(S))(12mg，0.029mmol)的TFA(3.75mL)溶液、濃鹽酸水溶液(1.25mL)和水(2.5mL)在75℃攪拌20小時(shí)。LCMS分析顯示產(chǎn)物酸(6)和伯胺的形成。黃色溶液在75℃再攪拌20小時(shí)，直到大部分伯胺被水解。減壓蒸發(fā)反應(yīng)物，得到一種黃色玻璃物質(zhì)。粗制產(chǎn)物溶于DMSO(1mL)。產(chǎn)物通過制備型HPLC純化，用反相BDX C18(20×50mm)柱，采用3％梯度(AcCN/水，0.1％TFA)。將純化的組分凍干，得到2.5mg黃色固體6(S)，產(chǎn)率為16％，純度＞95％。
步驟5b4-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-7-羧酸
將6-氰基-喹諾酮(5(R))(56mg，0.136mmol)的TFA(7.5mL)溶液、濃鹽酸水溶液(5.0mL)和水(2.5mL)在85℃攪拌40小時(shí)。HPLC和LCMS分析顯示了85％產(chǎn)物酸(6(R))和15％伯胺形成。減壓蒸發(fā)黃色溶液，得到黃色固體。從AcCN/水(1∶1)凍干粗制產(chǎn)物兩次，得到51mg黃色固體，為TFA鹽，產(chǎn)率為69％，純度為85％。
步驟64-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-(嗎啉-4-羰基)-1H-喹啉-2-酮
在6-羧基-(R)-喹諾酮(6)(15mg，0.035mmol)、HBTU(19mg，0.05mmol)和DIEA(18μL，0.1mmol)的NMP(0.5mL)的預(yù)混合(攪拌20分鐘)溶液中加入嗎啉(30μL，0.34mmol)。攪拌12小時(shí)后粗制產(chǎn)物通過制備型HPLC純化，用反相BDX C18柱，采用1.5％梯度(AcCN/水，0.1％TFA)。將純化的組分凍干，得到4mg白色固體的產(chǎn)物7，為TFA的鹽，產(chǎn)率為19％，純度為97％。
實(shí)施例774-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6，7-二氯-1H-喹啉-2-酮的合成
步驟16，7-二氯-1H-苯并[d][1，3]嗪-2，4-二酮
將6，7-二氯-1H-苯并[d][1，3]嗪-2，4-二酮(1)(4.34g，20mmol)和TMS-疊氮化物(4mL，30mmol)的甲苯(60mL)溶液在80℃攪拌3小時(shí)。然后將此混濁溶液在110℃加熱16小時(shí)。冷卻后，通過LCMS鑒定反應(yīng)產(chǎn)生了一些所需產(chǎn)物(3)。在反應(yīng)物中再加入等量TMS-疊氮化物(4mL，30mmol)，并在氮?dú)庀掠?0℃再加熱攪拌2小時(shí)并在110℃加熱攪拌16小時(shí)。HPLC和LCMS顯示反應(yīng)幾乎完全。將反應(yīng)物減壓濃縮以得到黃色漿狀物，該漿狀物用無水EtOH(8mL)洗脫。有象牙色固體形成并可通過吸濾收集。用無水EtOH(50mL)洗滌固體并在真空下干燥以得到2.9g純的產(chǎn)物3，產(chǎn)率為63％。
步驟24-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6，7-二氯-1H-喹啉-2-酮
4-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6，7-二氯-1H-喹啉-2-酮(4)是用前面的實(shí)施例中所述的標(biāo)準(zhǔn)方法制備的。
步驟34-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6，7-二氯-1H-喹啉-2-酮
將鼓入氬氣的6，7-二氯-喹諾酮(4)(20mg，0.044mmol)和嗎啉(1mL)的DMA(2mL)溶液在120℃攪拌48小時(shí)。HPLC和LCMS顯示反應(yīng)進(jìn)行到約60％反應(yīng)完全。在120℃加熱有一些氯損失。再在反應(yīng)物中鼓入氬氣，加蓋并在100℃加熱3天，直到通過LCMS鑒定反應(yīng)完全。粗制產(chǎn)物通過制備型HPLC純化，用反相BDX C18柱，采用4％梯度(AcCN/水，0.1％TFA)。將純化的組分凍干，得到7mg白色固體的產(chǎn)物5，為TFA鹽，產(chǎn)率為25％，純度為97％。
實(shí)施例784-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6，7-二氯-1H-喹啉-2-酮
將鼓入氬氣(1分鐘)的6，7-二氯-喹諾酮(4)(20mg，0.044mmol)和嗎啉(100μL)的NMP(800μL)溶液在95℃攪拌48小時(shí)。HPLC和LCMS顯示反應(yīng)已經(jīng)完全。粗制產(chǎn)物通過制備型HPLC純化，用反相BDX C18柱，采用3％梯度(AcCN/水，0.1％TFA)。將純化的組分凍干，得到9mg白色固體狀的產(chǎn)物2，為TFA的鹽，產(chǎn)率為35％，純度為97％。
實(shí)施例794-(R)-(1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-[1，7]二氮雜萘-2-酮的合成
邊攪拌邊在3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-羥基-1H-[1，7]二氮雜萘-2-酮(1)(200mg，0.72mmol)中加入POCl3(1.5mL，5.94mmol)。在反應(yīng)中加入TEA(153μL，1.1mmol)，反應(yīng)在60℃加熱1.5小時(shí)。將棕色溶液減壓濃縮，得到棕色固體。將此固體溶于EtOAc(100mL)并用飽和NaHCO3(50mL)洗滌。將有機(jī)層減壓蒸發(fā)，得到淡黃色固體，將其溶于DMA(5mL)。加入3-(R)-氨基奎寧環(huán)二鹽酸鹽(200mg，1.0mmol)和DIEA(430μL)后，將溶液在65℃攪拌10小時(shí)。LCMS顯示產(chǎn)物已經(jīng)形成。粗制產(chǎn)物通過制備型HPLC純化，用反相BDX C18柱，采用3％梯度(AcCN/水，0.1％TFA)。將純化的組分凍干，得到黃色固體的產(chǎn)物2，為TFA的鹽，。
實(shí)施例804-氨基-3-{6-[(2，4-二甲基嗎啉-2-基)甲基氨基]苯并咪唑-2-基}氫喹啉-2-酮的合成
步驟12-(甲基氨基)甲基-4-芐基嗎啉
將市售的2-氯甲基-4-芐基嗎啉溶于8M的NH2Me的EtOH溶液，并在玻璃壓力容器中于110℃加熱過夜。在真空下除去溶劑，該化合物無需進(jìn)一步純化即可用于下一步驟。LC/MS m/z221.2(MH+)，Rt0.55分鐘。
步驟22-[(3-氨基-4-硝基苯基)甲基氨基]-2-甲基嗎啉-4-基苯基酮
標(biāo)題化合物是用實(shí)施例46中所述的方法合成的。LC/MS m/z357.3(MH+)，Rt1.98分鐘。
步驟32-(6-{甲基[2-甲基-4-(苯基羰基)嗎啉-2-基]氨基}苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯
標(biāo)題化合物的合成是按照實(shí)施例46中所述的合成方法進(jìn)行的。LC/MSm/z317.3(MH+)，Rt2.45分鐘。
步驟44-氨基-3-(6-{甲基[2-甲基-4-(苯基羰基)嗎啉-2-基]氨基}苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮
4-氨基-3-(6-{甲基[2-甲基-4-(苯基羰基)嗎啉-2-基]氨基}苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成是按照實(shí)施例19中所述的常規(guī)合成方法進(jìn)行的。
步驟54-氨基-3-{6-[(2，4-二甲基嗎啉-2-基)甲基氨基]苯并咪唑-2-基}氫喹啉-2-酮
a)上述步驟4的化合物的脫芐基是按照以下方法進(jìn)行的。室溫下，將芐基化的化合物(1.0當(dāng)量)和10％Pd/C(0.1當(dāng)量)懸浮于1∶1的乙醇和1N HCl水溶液。將反應(yīng)燒瓶抽空并隨后充滿氫氣。所得混合物在氫氣氛下攪拌過夜。所得溶液通過硅藻土過濾并在真空下濃縮。然后用30％的KOH水溶液使水堿化，產(chǎn)物用EtOAc萃取。濃縮合并的有機(jī)層。將所得殘余物溶于CH2Cl2∶MeOH∶AcOH(2∶2∶1)。
b)甲基化是按照以下方法完成的。加入低聚甲醛(1.2當(dāng)量)和BH3吡啶(3當(dāng)量，8M溶液)，并將混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去溶劑，并加入水。產(chǎn)物用EtOAc萃取(3x)。濃縮合并的有機(jī)層。殘余物通過硅膠層析純化(10％MeOH/CH2Cl2)，得到所需產(chǎn)物。
實(shí)施例812-(4-氨基-5-氟-2-氧代-3-氫喹啉基)苯并咪唑-6-羧酸的合成
步驟12-[5-(甲氧基羰基)苯并咪唑-2-基]乙酸酯
將3，4-二氨基苯甲酸甲酯(1當(dāng)量)與EtOH中的3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯鹽酸鹽(2當(dāng)量)一起在70℃攪拌過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并減壓除去EtOH。將殘余物溶解在水中并用CH2Cl2萃取(3x)。有機(jī)萃取物用Na2SO4干燥，并除去溶劑。將固體與Et2O一起研磨，得到為乳白色固體的所需2-[5-(甲氧基羰基)-苯并咪唑-2-基]乙酸乙酯。LC/MSm/z263.2(MH+)，Rt1.80分鐘。
步驟22-(4-氨基-5-氟-2-氧代-3-氫喹啉基)苯并咪唑-6-羧酸甲酯
用與實(shí)施例9所述類似的方法，于0℃，將LiHMDS(1.0N的THF溶液，4.0當(dāng)量)加入已經(jīng)火焰干燥(flame dried)的圓底燒瓶?jī)?nèi)的2-[5-(甲氧基羰基)苯并咪唑-2-基]乙酸酯(1.0當(dāng)量)和2-氨基-6-氟苯甲腈(1.1當(dāng)量)的無水THF溶液中。使所得混合物升溫至室溫并攪拌過夜，然后在55℃加熱8小時(shí)。將混合物冷卻至0℃并用飽和NH4Cl淬滅。水相用EtOAc萃取(3x)，收集有機(jī)萃取物，并干燥(Na2SO4)。減壓除去溶劑，將殘余物與MeOH一起研磨，得到一種白色固體，其中含有50％的2-(4-氨基-5-氟-2-氧代-3-氫喹啉基)苯并咪唑-6-羧酸甲酯和50％的它的未環(huán)化的異構(gòu)體。LC/MS m/z 353.2(MH+)，Rt2.14分鐘。
步驟32-(4-氨基-5-氟-2-氧代-3-氫喹啉基)苯并咪唑-6-羧酸
將步驟2得到的粗制產(chǎn)物溶于1∶1的EtOH和30％KOH水溶液的混合物，并在70℃攪拌過夜。將反應(yīng)混合物冷卻并用1N HCl酸化。有沉淀析出。將該固體過濾，用水洗滌并干燥，得到190mg棕色固體狀的(40％)2-(4-氨基-5-氟-2-氧代-3-氫喹啉基)苯并咪唑-6-羧酸。LC/MS m/z339.1(MH+)，Rt2.41分鐘。
步驟42-(4-氨基-2-氧代-3-氫喹啉基)-苯并咪唑-6-羧酸的酰胺官能化
將DMF中的2-(4-氨基-2-氧代-3-氫喹啉基)苯并咪唑-6-羧酸(1當(dāng)量)、伯胺或仲胺(1當(dāng)量)、EDC(1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，1.2當(dāng)量)、HOAT(1-羥基-7-氮雜苯并三唑，1.2當(dāng)量)和三乙胺(2.5當(dāng)量)的混合物在23℃攪拌20小時(shí)。反應(yīng)混合物在水和乙酸乙酯之間分配。將合并的有機(jī)層干燥(Na2SO4)并濃縮。加入水，過濾由此形成的沉淀并干燥。粗產(chǎn)物通過反相制備型HPLC純化，得到所需羧酰胺。
實(shí)施例82和833-(6-{(2R，5R)-2-[(二甲基氨基)甲基]-5-甲基嗎啉-4-基}苯并咪唑-2-基)-4-氨基氫喹啉-2-酮(7a)和3-(6-{(2S，5R)-2-[(二甲基氨基)甲基]-5-甲基嗎啉-4-基}苯并咪唑-2-基)-4-氨基氫喹啉-2-酮的合成
步驟1(2R)-2-[芐基氨基]丙-1-醇
將(2R)-2-氨基丙醇(1.2當(dāng)量)、苯甲醛(1當(dāng)量)、NaHCO3(1.5當(dāng)量)和MeOH(約1M)的混合物加熱回流4小時(shí)，然后冷卻至0℃。在大約10℃下，在2小時(shí)內(nèi)，邊攪拌邊在反應(yīng)混合物中分批加入硼氫化鈉(4.8當(dāng)量)。將所有反應(yīng)物在室溫下攪拌4小時(shí)。濾出不溶物，然后將濾液濃縮至干。將殘余物溶于CH2Cl2，并依次用水(2x)和鹽水(1x)洗滌溶液。收集有機(jī)萃取物并干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)除去溶劑，得到所需無色油狀產(chǎn)物，將其靜置固化，且無需進(jìn)一步純化即可用于下面的步驟。GC/MS134(100％，M+-CH2OH)，Rt11.57分鐘。
步驟2a和2b(2S，5R)-2-(氯甲基)-5-甲基-4-芐基嗎啉和(2R，5R)-2-(氯甲基)-5-甲基-4-芐基嗎啉
將(2R)-2-[芐基氨基]丙-1-醇(1當(dāng)量)和表氯醇(2當(dāng)量)的混合物在40℃攪拌2.5小時(shí)，并減壓濃縮。將殘余物冷卻至0℃，并非常緩慢地加入冷的三氟甲磺酸(3當(dāng)量)。燒瓶上裝有回流冷凝器，將混合物在160℃攪拌過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，將由此形成的黑色焦油溶于CH2Cl2，并轉(zhuǎn)移到裝有磁力攪拌子(stir bar)的Erlenmeyer燒瓶。將溶液冷卻至0℃，緩慢加入冰水。用30％的NaOH溶液使黑色的兩相混合物成為堿性(pH＝12)。將兩相分離，水相再用CH2Cl2萃取。有機(jī)層用水洗滌，用鹽水處理，干燥(Na2SO4)，并濃縮以得到黑棕色油狀物。粗制產(chǎn)物的混合物中含有(2S，5R)-2-(氯甲基)-5-甲基-4-芐基嗎啉和(2R，5R)-2-(氯甲基)-5-甲基-4-芐基嗎啉的混合物，通過硅膠層析將其分離(EtOAc/己烷1∶20至1∶8)。(2S，5R)異構(gòu)體TLC(EtOAc/己烷1∶8)Rf＝0.75；GC/MS239(10％，M+)，Rt15.17分鐘；LC/MS m/z240.0(MH+)，Rt1.60分鐘。(2R，5R)異構(gòu)體TLC(EtOAc/己烷1∶8)Rf0.60；GC/MS239(15％，M+)，Rt15.08分鐘；LC/MS m/z 240.0(MH+)，Rt1.56分鐘。
步驟3a(2S，5R)-2-[二甲基氨基(甲基)]-5-甲基-4-芐基嗎啉
將(2S，5R)-2-(氯甲基)-5-甲基-4-芐基嗎啉(1當(dāng)量)和二甲胺在乙醇(33％，約5.6M，5當(dāng)量)中的混合物在玻璃壓力容器中于150℃加熱兩天以上。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并減壓濃縮。將殘余物溶于1N HCl并用CH2Cl2洗滌溶液。水相用30％的NaOH溶液堿化(至pH＝12)并用CH2Cl2萃取。收集有機(jī)萃取物并干燥(Na2SO4)。減壓蒸發(fā)溶劑，得到棕色油狀的(2S，5R)-2-[二甲基氨基(甲基)]-5-甲基-4-芐基嗎啉，該物質(zhì)無需純化即可用于下面的步驟。GC/MS247(2％，M-H)，204(55％，M-NMe2)，Rt15.5分鐘；LC/MS m/z 249.2(MH+)，Rt0.72分鐘。
步驟4a(2S，5R)-2-[二甲基氨基(甲基)]-5-甲基嗎啉
將(2S，5R)-2-[二甲基氨基(甲基)]-5-甲基-4-芐基嗎啉(28g，113mmol，1當(dāng)量)溶于EtOH(1M)，將溶液轉(zhuǎn)移到裝有壓力表的不銹鋼高壓容器。加入10％Pd/C(2.8g，10wt.％)并在容器中充滿H2。反應(yīng)混合物在130℃和200磅/平方英寸(psi)H2下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，過濾并蒸發(fā)。以定量產(chǎn)率得到黃色油狀的所需的胺。GC/MS128(10％，M+-2xCH3)，58(100％，NHCH2CHO)，Rt8.16分鐘。
步驟3b(2R，5R)-2-[二甲基氨基(甲基)]-5-甲基-4-芐基嗎啉
標(biāo)題化合物是在EtOH中用二甲胺處理(2R，5R)-2-(氯甲基)-5-甲基-4-芐基嗎啉得到的，如上述(步驟3a)非對(duì)映體。GC/MS247(2％，M-H)，204(55％，M-NMe2)，Rt15.40分鐘；LC/MS m/z 249.2(MH+)，Rt0.79分鐘。
步驟4b(2R，5R)-2-[二甲基氨基(甲基)]-5-甲基嗎啉
標(biāo)題產(chǎn)物是按前面的描述(步驟4a)將(2R，5R)-2-[二甲基氨基(甲基)]-5-甲基-4-芐基嗎啉脫芐基獲得的。GC/MS158(1％，M+)，128(3％，M+-2xCH3)，58(100％，NHCH2CHO)，Rt7.64分鐘。
用同樣的方法來制備(2S，5S)-2-[二甲基氨基(甲基)]-5-甲基嗎啉和(2R，5S)-2-[二甲基氨基(甲基)]-5-甲基嗎啉，條件是用(2S)-2-氨基丙醇作為起始物質(zhì)。
步驟5a{[(2S，5R)-4-(3-氨基-4-硝基苯基)-5-甲基嗎啉-2-基]甲基}二甲胺
將5-氟-2-硝基苯胺(1.1當(dāng)量)、[((2S，5R)-5-甲基嗎啉-2-基)甲基]二甲胺(1當(dāng)量)、三乙胺(3當(dāng)量)和NMP的混合物在密封的高壓容器中于140℃加熱48小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至25℃并溶于CH2Cl2。溶液用水洗滌(2x)并干燥(Na2SO4)。通過硅膠層析純化(10％的MeOH的二氯甲烷溶液)，得到暗黃色泡沫狀的所需產(chǎn)物。LC/MSm/z 295.2(MH+)Rt1.86分鐘。
步驟6a2-(6-{(2R，5R)-2-[(二甲基氨基)甲基]-5-甲基嗎啉-4-基}苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯
標(biāo)題化合物是用合成苯并咪唑的常規(guī)方法合成的，但是在室溫下放置2天。通過硅膠柱層析純化，得到純化的產(chǎn)物。LC/MS m/z 361.2(MH+)Rt1.27分鐘。
步驟5b{[(2R，5R)-4-(3-氨基-4-硝基苯基)-5-甲基嗎啉-2-基]甲基}二甲胺
將5-氟-2-硝基苯胺(1.1當(dāng)量)、[((2R，5R)-5-甲基嗎啉-2-基)甲基]二甲胺(1當(dāng)量)、三乙胺(3當(dāng)量)和NMP的混合物在密封的高壓容器中于140℃加熱48小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至25℃并溶于CH2Cl2。溶液用水洗滌(2x)并干燥(Na2SO4)。通過硅膠柱層析(10％的MeOH的二氯甲烷溶液)純化，得到暗黃色泡沫狀的所需產(chǎn)物。LC/MSm/z295.1(MH+)Rt1.85分鐘。
步驟6b2-(6-{(2R，5R)-2-[(二甲基氨基)甲基]-5-甲基嗎啉-4-基}苯并咪唑-2-基)乙酸乙酯
標(biāo)題化合物是用合成苯并咪唑的常規(guī)方法合成的，但是在室溫下放置2天。通過硅膠柱層析純化，得到純化的產(chǎn)物。LC/MS m/z 361.2(MH+)Rt1.20分鐘。
步驟7a；3-(6-{(2R，5R)-2-[(二甲基氨基)甲基]-5-甲基嗎啉-4-基}苯并咪唑-2-基)-4-氨基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例46的方法合成的(LC/MS m/z 433.1(MH+)Rt1.58分鐘)。
步驟7b3-(6-{(2S，5R)-2-[(二甲基氨基)甲基]-5-甲基嗎啉-4-基}苯并咪唑-2-基)-4-氨基氫喹啉-2-酮
標(biāo)題化合物是按照實(shí)施例46的方法合成的(LC/MS m/z 433.1(MH+)Rt1.58分鐘)。
實(shí)施例844-氨基-3-[5-(4-甲基哌嗪基)苯并咪唑-2-基]-2-氧代氫喹啉-6-腈的合成
使用了以下參考資料中所述方法，出于所有目的，這些參考資料已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣J.Med.Chem.2000，43，4063。在干燥的圓底燒瓶中加入2-氨基-5-溴芐腈(1當(dāng)量)和氰化鋅(2當(dāng)量)，并加入DMF，在溶液中鼓入5分鐘氮?dú)猓⒁淮涡约尤隤d[P(Ph)3]4。反應(yīng)混合物在90℃攪拌過夜。冷卻至室溫后，加入飽和NaHCO3，該混合物用EtOAc萃取。收集有機(jī)萃取物并干燥(Na2SO4)。減壓蒸發(fā)溶劑，并通過硅膠柱層析純化(2％甲醇，在二氯甲烷中)，得到所需的白色固體的4-氨基苯-1，3-二腈。GC/MS m/z143(M+，100％)，Rt14.7分鐘。
4-氨基-3-[5-(4-甲基哌嗪基)苯并咪唑-2-基]-2-氧代氫喹啉-6-腈
4-氨基-間苯二腈和2-[5-(4-甲基哌嗪基)苯并咪唑-2-基]乙酸乙酯是按照實(shí)施例46反應(yīng)的。LC/MS m/z 400.1(MH+)，Rt1.54分鐘。
實(shí)施例854-氨基-3-[5-(4-甲基哌嗪基)苯并咪唑-2-基]-2-氧代氫喹啉-6-羧酸的合成
將4-氨基-3-[5-(4-甲基哌嗪基)苯并咪唑-2-基]-2-氧代氫喹啉-6-腈(實(shí)施例84)衍生物溶于1∶1的EtOH和30％NaOH水溶液的混合物。將溶液在100℃加熱2小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，濃縮并用1N HCl酸化直到產(chǎn)物從溶液中沉淀出來。所得固體用水洗滌兩次并干燥，得到所需產(chǎn)物。然后通過從1∶1的CH3CN和1N HCl的混合物中凍干得到鹽酸鹽。(LC/MS m/z 331.3(MH+)Rt1.60分鐘)。
實(shí)施例86{4-氨基-3-[5-(4-甲基哌嗪基)苯并咪唑-2-基]-2-氧代(6-氫喹啉基)}-N-芐基羧酰胺的合成
將4-氨基-3-[5-(4-甲基哌嗪基)苯并咪唑-2-基]-2-氧代氫喹啉-6-羧酸(實(shí)施例85)的鹽酸鹽(1當(dāng)量)懸浮于DMF。加入Et3N(2當(dāng)量)和一種伯胺或仲胺(1.2當(dāng)量)，然后加入EDC(1.2當(dāng)量)和HOAT(1.2當(dāng)量)。反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?天。加入水，混合物用EtOAc萃取。殘余物通過制備型HPLC純化以得到所需產(chǎn)物。
實(shí)施例874-氨基-3-(6-{3-[(二甲基氨基)甲基]吡咯烷基}苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮的合成
二甲基(吡咯烷-3-基甲基)胺是按照以下文獻(xiàn)中所述的方法用市售的5-氧代-1-(苯基甲基)吡咯烷羧酸甲酯合成的(Domagala，J.M.美國(guó)專利No.5,281,612，出于所有目的，它們已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣)。LC/MS m/z265.1(MH+)，1.62分鐘。隨后按照實(shí)施例8中所述的方法將其轉(zhuǎn)化成伴生物4-氨基-3-(6-{3-[(二甲基氨基)甲基]吡咯烷基}苯并咪唑-2-基)氫喹啉-2-酮(LC/MS m/z403.2(MH+)，Rt1.64分鐘)。
實(shí)施例883-[6-((1S)-3，6-二氮雜二環(huán)[4.3.0]壬-3-基)苯并咪唑-2-基]-4-氨基-5-氟氫喹啉-2-酮的合成
如上所述，(6S)-1，4-二氮雜二環(huán)[4.3.0]壬烷是用以下參考資料中列出的方法用LAH(氫化鋁鋰)還原市售的環(huán)-Gly-Pro合成的，出于所有目的，它們已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣de Costa B.R.等，J.Med.Chem.，1993，36，2311。隨后按照實(shí)施例8所述的方法將其轉(zhuǎn)化成伴生物3-[6-((1S)-3，6-二氮雜二環(huán)[4.3.0]壬-3-基)苯并咪唑-2-基]-4-氨基-5-氟氫喹啉-2-酮(LC/MS m/z419.1(MH+)，Rt1.96分鐘)。
實(shí)施例894-氨基-3-[6-(2，4-二甲基哌嗪基)苯并咪唑-2-基]-5-氟氫喹啉-2-酮的合成
-10℃下，在攪拌的2-甲基哌嗪(2當(dāng)量)的二氯甲烷溶液中加入二碳酸二叔丁酯(di-t-butyl dicarbonate)(1當(dāng)量)。將混合物在-10℃攪拌10分鐘，然后用飽和NaHCO3水溶液淬滅。將兩相分離，有機(jī)層用二氯甲烷萃取。收集有機(jī)萃取物，干燥(Na2SO4)，并濃縮，得到所需3-甲基哌嗪-羧酸叔丁酯(LC/MS m/z 201.0(MH+)，Rt1.67分鐘)。用實(shí)施例8所述的方法將其轉(zhuǎn)化成4-[2-(4-氨基-5-氟-2-氧代(3-氫喹啉基))苯并咪唑-6-基]-3-甲基哌嗪羧酸叔丁酯(LC/MS m/z 493.3(MH+)，Rt2.45分鐘)。隨后通過在MeOH溶液中鼓入HCl氣體直到飽和來除去Boc基(LC/MS m/z 393.2(MH+)，Rt1.95分鐘)。隨后在80℃下使游離胺與用分子篩干燥過的MeOH∶AcOH(5∶1)中的低聚甲醛(5當(dāng)量)和NaCNBH4(4當(dāng)量)(paraformaldehyde(5equivalents)inMeOH∶AcOH(5∶1)and NaCNBH4(4equivalents)over molecular sieves)反應(yīng)。10小時(shí)后冷卻混合物，過濾并濃縮。將殘余物溶于CH2Cl2，用飽和的NaHCO3洗滌，并用Na2SO4干燥，以得到所需的4-氨基-3-[6-(2，4-二甲基哌嗪基)苯并咪唑-2-基]-5-氟氫喹啉-2-酮(LC/MS m/z 407.3(MH+)，Rt2.03分鐘)。通過反相制備型HPLC進(jìn)一步純化。
實(shí)施例904-氨基-3-[6-(3，4-二甲基哌嗪基)苯并咪唑-2-基]氫喹啉-2-酮
將3-甲基哌嗪羧酸叔丁酯(參見實(shí)施例89；1當(dāng)量)和低聚甲醛(5當(dāng)量)溶于用分子篩干燥過的MeOH和AcOH(5∶1)的混合物(a mixture of MeOH and AcOH(5∶1)onmolecular sieves)。在25℃下在此懸液中加入NaCNBH3(4當(dāng)量)。隨后將此漿液加熱至80℃。10小時(shí)后將混合物冷卻，過濾并濃縮。將殘余物溶于二氯甲烷并用飽和NaHCO3水溶液洗滌。將有機(jī)溶液干燥(Na2SO4)，并濃縮。在室溫下，用飽和的HCl的MeOH溶液處理粗制的胺30分鐘，以此除去叔丁氧羰基。然后濃縮混合物并在真空下除去過量的HCl。所需1，2-二甲基哌嗪是作為二鹽酸鹽獲得的(LC/MS m/z 115.0(MH+)，Rt0.33分鐘)。隨后用實(shí)施例8中所述的方法將其轉(zhuǎn)化成4-[2-(4-氨基-2-氧代(3-氫喹啉基))苯并咪唑-6-基]-3-甲基哌嗪羧酸叔丁酯(LC/MS m/z 389.2(MH+)，Rt1.84分鐘)。
實(shí)施例914-氨基-5-氟-3-(6-氨基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮的一般合成
將甲酯I以細(xì)粉懸浮于甲苯。室溫下，用另一個(gè)漏斗在此懸液中加入DIBAL-H(10當(dāng)量，1M甲苯溶液)，加入的速度應(yīng)使氣體的產(chǎn)生穩(wěn)定并可控制。加入完成后，將均勻的溶液攪拌10小時(shí)。然后加入NaF(40當(dāng)量)和水(10當(dāng)量)。將所得混合物在室溫下攪拌4小時(shí)，此間有固體沉淀形成。收集此固體并在二甲基乙酰胺(DMA)中于120℃加熱2小時(shí)，然后將剩余的固體濾出，并將所得溶液濃縮成稠的油狀物。所得油狀物用水處理，將所得固體收集并干燥，得到黃色固體狀的化合物II。MH+＝325.1。
室溫下，將醇II溶于DMA并用MnO2(15當(dāng)量)處理。將反應(yīng)物在120℃加熱3小時(shí)并通過硅藻土墊熱過濾此混合物。所得溶液在真空下濃縮以得到一種黃色固體，經(jīng)鑒定為醛III MH+＝323.1。
將醛III溶于DMA并用一種合適的胺(2.0當(dāng)量)處理，然后用三乙酸基硼氫化鈉(2.5當(dāng)量)處理。將反應(yīng)物在室溫下攪拌12小時(shí)并濃縮，得到一種稠的油狀物。通過反相HPLC純化此油狀物以得到所需化合物。
實(shí)施例924-氨基-5-氟-3-(6-氨基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮的一般合成
室溫下，將胺I溶于DMA并隨后用溴乙酰氯(1.5當(dāng)量)和三乙胺(5當(dāng)量)處理。將反應(yīng)物攪拌2小時(shí)，然后倒入水中。將所得固體收集并干燥，得到所需的溴化物II。MH+＝444。
室溫下，將溴化物II溶于DMA并加入合適的胺(10當(dāng)量)。將反應(yīng)物攪拌12小時(shí)，然后濃縮成黑色油狀物，通過反相HPLC純化此油狀物以得到所需產(chǎn)物。
實(shí)施例934-{[2-(4-氨基-5-氟-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基]氧基}-N-甲基吡啶-2-羧酰胺的合成
將4-氨基-3-硝基苯酚(1.0當(dāng)量)和二(三甲基甲硅烷基)酰胺鉀(2.0當(dāng)量)在DMF中攪拌2小時(shí)。在此混合物中加入(4-氯(2-吡啶基))-N-甲氧基羧酰胺(1.0當(dāng)量)和K2CO3(1.2當(dāng)量)?；旌衔镌?0℃加熱過夜。然后除去溶劑并用水稀釋混合物。水層用EtOAc萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌(2x)，用Na2SO4干燥，過濾并濃縮以得到棕色油狀物。此粗產(chǎn)物通過柱層析純化(50％EtOAc/己烷和2％Et3N)，得到化合物I。MH+＝289.2。
室溫下，將化合物I(1.0當(dāng)量)和10％Pd/C(0.1當(dāng)量)懸浮于無水EtOH。將反應(yīng)燒瓶抽空并隨后充滿氫氣。將所得混合物在氫氣氛下攪拌2天。然后加入3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯鹽酸鹽(2.0當(dāng)量)并將所得混合物加熱回流過夜。溶液然后通過硅藻土塞過濾，濃縮并溶于CH2Cl2。有機(jī)層用NH4OH(濃的水溶液)、H2O(3x)和鹽水洗滌，然后用Na2SO4干燥，過濾并濃縮以得到棕色膠狀物，將此膠狀物通過硅膠層析純化(EtOAc到10％的CH2Cl2中的，含有2％Et3N)，得到棕褐色固體狀的產(chǎn)物II。MH+＝287.1。
室溫下，向DMF中的化合物II(1.4當(dāng)量)和2-氨基-6-氟苯甲腈(1.0當(dāng)量)中加入KHMDS(4.2當(dāng)量)。將反應(yīng)物在50℃加熱過夜。將所得混合物倒入EtOAc并用H2O萃取(3x)。有機(jī)層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并在真空下濃縮，得到棕色固體。粗產(chǎn)物在5％丙酮/94.5％Et2O/0.5％MeOH中聲波處理，得到棕褐色固體狀的所需產(chǎn)物。在通過反相HPLC純化此固體物質(zhì)。MH+＝445.2。
實(shí)施例944-氨基-3-[5-(4-乙基-4-氧化哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-5-氟喹啉-2(1H)-酮(4-amino-3-[5-(4-ethyl-4-oxidopiperazin-1-yl)-1H-benzimidazol-2-yl]-5-fluoroquinolin-2(1H)-one)的合成
將哌嗪I懸浮于EtOH∶DMA(10∶1)。加入過氧化氫(10當(dāng)量)，將反應(yīng)物加熱至85℃，這期間形成均勻的溶液。1小時(shí)后通過LC/MS證明反應(yīng)完全。將反應(yīng)物在室溫下攪拌過夜，期間有沉淀形成。過濾固體并用EtOH，然后Et2O洗滌，得到4-氨基-3-[5-(4-乙基-4-氧化哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-5-氟喹啉-2(1H)-酮。MH+＝423.3。
實(shí)施例954-氨基-6-氯-1-甲基-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮的合成
室溫下，將喹啉酮I(10mg，1當(dāng)量)與2，4-二甲氧基芐基胺(10μL，2.7當(dāng)量)在1mL二氯甲烷中反應(yīng)過夜。然后蒸發(fā)溶劑并將產(chǎn)物溶解于乙酸乙酯。乙酸乙酯層用水、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉洗滌，然后干燥。芐基化的產(chǎn)物用1mL 5％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液處理1小時(shí)后蒸發(fā)。最終的產(chǎn)物通過HPLC純化，得到5mg氨基喹啉酮，它是三氟乙酸的鹽。MH+＝410.2。
實(shí)施例964-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氯-1-甲基喹啉-2(1H)-酮的合成
室溫下，將喹啉酮I(20mg，1當(dāng)量)與2，4-二甲氧基芐基胺(20μL，2當(dāng)量)在1mL二氯甲烷中反應(yīng)過夜。然后蒸發(fā)溶劑并將產(chǎn)物溶解于乙酸乙酯。乙酸乙酯層用水、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉洗滌，然后干燥。芐基化產(chǎn)物用1mL 5％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液處理1小時(shí)后蒸發(fā)。最終的產(chǎn)物通過HPLC純化，得到17.2mg氨基喹啉酮，它是三氟乙酸的鹽。MH+＝325.1。
實(shí)施例974-氨基-6-氯-1-甲基-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮的合成
室溫下，將喹啉酮I(20mg，1當(dāng)量)與2，4-二甲氧基芐基胺(20μL，2當(dāng)量)在1mL二氯甲烷中反應(yīng)過夜。然后蒸發(fā)溶劑并將產(chǎn)物溶解于乙酸乙酯。乙酸乙酯層用水、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉洗滌，然后干燥。芐基化產(chǎn)物用1mL 5％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液處理1小時(shí)后蒸發(fā)。最終的產(chǎn)物通過HPLC純化，得到11.5mg氨基喹啉酮，它是三氟乙酸的鹽。MH+＝423.1。
實(shí)施例984-氨基-1-甲基-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮的合成
室溫下，將喹啉酮起始物質(zhì)I(20mg，1當(dāng)量)與2，4-二甲氧基芐基胺(20μL，2當(dāng)量)在1mL二氯甲烷中反應(yīng)過夜。然后蒸發(fā)溶劑并將產(chǎn)物溶解于乙酸乙酯。乙酸乙酯層用水、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉洗滌，然后干燥。芐基化的產(chǎn)物用1mL 5％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液處理1小時(shí)后蒸發(fā)。最終的產(chǎn)物通過HPLC純化，得到16.6mg氨基喹啉酮，它是三氟乙酸的鹽。MH+＝376.3。
實(shí)施例994-氨基-5-氟-3-{5-[4-(2，2，2-三氟乙基)哌嗪-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮的合成
將4-氨基-5-氟-3-(6-哌嗪-1-基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-喹啉-2-酮溶解于三氟乙酸乙酯和N，N-二甲基乙酰胺(DMA)。所得溶液在密封的管形瓶中于130℃加熱30分鐘。將反應(yīng)物冷卻至室溫，并加入飽和碳酸氫鈉，然后將混合物倒入水中來淬滅反應(yīng)。通過過濾收集所得固體，并用二乙醚洗滌，得到4-氨基-5-氟-3-{6-[4-(2，2，2-三氟-乙酰)-哌嗪-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}-1H-喹啉-2-酮(Rt2.63分鐘，MH+＝457.1)，將此產(chǎn)物立即溶解于THF。加入硼烷-THF絡(luò)合物(3.3當(dāng)量)，將反應(yīng)物在室溫下攪拌過夜。用過量的硼烷和水淬滅后，用乙酸乙酯萃取混合物，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮成棕色固體，該物質(zhì)通過反相HPLC純化，得到所需化合物。MH+＝461.1。
實(shí)施例1004-氨基-5-氟-3-(6-{甲基[(4-甲基嗎啉-3-基)甲基]氨基}-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮的合成
喹啉酮I是用實(shí)施例49的常規(guī)方法從市售的2-氯甲基-4-芐基嗎啉、甲胺、4-氯-2-硝基苯胺和2-氨基-6-氟芐腈合成的。(將2-(甲基氨基)甲基-4-芐基嗎啉溶于8M的NH2Me的EtOH溶液，并在玻璃容器中于110℃加熱過夜，除去溶劑后形成產(chǎn)物2-(甲基氨基)甲基-4-芐基嗎啉)。室溫下，將化合物I(1.0當(dāng)量)和10％Pd/C(0.1當(dāng)量)懸浮于1∶1的乙醇和1N HCl水溶液。將反應(yīng)燒瓶抽空并隨后充滿氫氣。所得混合物在氫氣氛下攪拌過夜，通過硅藻土過濾，并在真空下濃縮。用30％KOH水溶液堿化該溶液，產(chǎn)物用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)層濃縮并重新懸浮于CH2Cl2∶MeOH∶AcOH(2∶2∶1)。然后加入低聚甲醛(1.2當(dāng)量)和BH3·吡啶(3當(dāng)量，8M)，將混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去溶劑，并用水洗滌。水層用EtOAc萃取(3x)，將合并的有機(jī)層濃縮，通過硅膠層析純化(10％MeOH/CH2Cl2)，得到所需產(chǎn)物。MH+＝437.4。
實(shí)施例1014-氨基-3-1H-苯并咪唑-2-基-5-氟喹啉-2(1H)-酮丙酰胺的一般合成
在化合物I(1當(dāng)量)的DMF溶液中加入胺(1.1當(dāng)量)和EDC(1.1當(dāng)量)。隨后將溶液在室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)混合物用水淬滅并過濾，得到所需產(chǎn)物II。
在微波管中，將化合物II(1當(dāng)量)懸浮于芐基胺中，并在微波爐中于150℃加熱5分鐘。所得粗制產(chǎn)物III在乙醚中聲波處理并過濾。
在高壓不銹鋼容器中裝入化合物III(1當(dāng)量)的EtOH溶液并加入10％Pd/C，然后充入120psi H2。然后將混合物在100℃放置1天，然后加入3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯鹽酸鹽(2.5當(dāng)量)。將反應(yīng)物在氮?dú)庀掠?0℃再放置1天。然后通過硅藻土墊過濾除去鈀，所得EtOH混合物在真空下蒸發(fā)。然后將產(chǎn)物溶解于過量的CH2Cl2，使其堿化，通過硫酸鈉層過濾，并在真空下濃縮。通過硅膠層析純化(10％MeOH∶CH2Cl2)，得到化合物IV，將其與2-氨基-6-氟苯甲腈偶合，然后進(jìn)行實(shí)施例49的常規(guī)方法，得到丙酰胺V。
實(shí)施例1024-氨基-3-[5-(1-乙基哌啶-4-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-5-氟喹啉-2(1H)-酮的合成
將化合物I(1當(dāng)量)溶于DMF并在0℃緩慢加入Et3SO4(4當(dāng)量)。將溶液在室溫下攪拌過夜。將所得混合物邊攪拌邊倒入Et2O中。濾去固體化合物II，用EtOH洗滌一次，重新懸浮于EtOH。在此混合物中加入5％PtO2，并將所得混合物在1標(biāo)準(zhǔn)大氣壓的氫氣氛下放置過夜。用硅藻土墊濾除PtO2，得到橙色固體狀的所需產(chǎn)物III，產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。將化合物III硝化，無需將其純化即可用于下面的步驟。在化合物IV的MeOH溶液中加入過量30％KOH以得到淡黃色溶液，將此溶液攪拌過夜。在真空下除去MeOH并將殘余物溶解于CH2Cl2，用水萃取，得到化合物V，用實(shí)施例49中所述的方法將其轉(zhuǎn)化成所需產(chǎn)物VII。該產(chǎn)物在乙醚∶丙酮∶乙醇(10∶1∶1)中通過聲波處理純化，然后在乙腈中回流過夜。MH+＝406.3。
實(shí)施例1034-(1-甲基哌啶-4-基)-2-硝基苯胺的合成
步驟1N-(4-(4-吡啶基)苯基)乙酰胺
在圓底燒瓶中裝入2N Na2CO3溶液(4當(dāng)量)和THF，并通過分散管在混合物中鼓入N2。然后加入4-溴吡啶鹽酸鹽(1當(dāng)量)和N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼戊環(huán)-2-基)苯基]乙酰胺(N-[4-(4，4，5，5-tetramethyl-1，3，2-dioxaborolan-2-yl)phenyl]acetamide)(1.2當(dāng)量)，再加入Pd(dppf)2Cl2(2.5mol％)。將反應(yīng)混合物回流過夜，冷卻至室溫和用EtOAc稀釋。將兩相分離，有機(jī)相用2N Na2CO3溶液和鹽水洗滌并干燥(Na2SO4)。減壓蒸發(fā)溶劑并通過硅膠層析純化得到白色固體狀的所需產(chǎn)物。MH+＝213.1。
步驟2N-[4-(1-甲基-4-哌啶基)苯基]乙酰胺
將N-(4-(4-吡啶基)苯基)乙酰胺(1.0當(dāng)量)溶于DMF并逐滴加入硫酸二甲酯(1.5當(dāng)量)。一段時(shí)間后有固體析出。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌6小時(shí)，然后倒入二乙醚。粘性固體析出后，潷析出醚，并將殘余物和EtOH一起研磨，過濾，并用EtOH洗滌，得到淡黃色固體。將所得吡啶鹽(MH+＝227.3)懸浮于EtOH并加入PtO2(5mol％)，將混合物在大氣壓下氫化3天。用硅藻土墊濾去催化劑后，用水反復(fù)洗滌濾餅，并將所得EtOH/水混合物減壓濃縮。溶液用30％ NaOH堿化并用CH2Cl2萃取。收集有機(jī)萃取物并干燥(Na2SO4)。減壓蒸發(fā)溶劑，得到白色固體狀的所需產(chǎn)物。MH+＝233.1。
步驟3N-[4-(1-甲基(4-哌啶基))-2-硝基苯基]乙酰胺
在圓底燒瓶中加入乙酸酐和乙酸，用冰/鹽浴將混合物冷卻至-10℃以下。加入HNO3(2當(dāng)量)，然后加入2滴H2SO4。將N-[4-(1-甲基-4-哌啶基)苯基]乙酰胺(1當(dāng)量)的乙酸(其用量可使AcO2和AcOH的最終比例為1∶1)溶液逐滴加入此冷溶液。反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌6小時(shí)。然后將反應(yīng)物倒入乙醚。有粘性固體析出，潷析出醚，并將殘余物溶于水。用30％NaOH堿化此水溶液，有橙色固體沉淀。濾出此固體并干燥，得到所需產(chǎn)物。MH+＝278.3。
步驟44-(1-甲基哌啶-4-基)-2-硝基苯胺
將N-[4-(1-甲基(4-哌啶基))-2-硝基苯基]乙酰胺(1當(dāng)量)溶于甲醇并邊劇烈攪拌邊逐滴加入30％KOH(2.5當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)然后減壓濃縮。將殘余物溶于CH2Cl2并用水(2x)和鹽水(1x)洗滌。將有機(jī)溶液干燥(Na2SO4)和蒸發(fā)，得到橙棕色固體狀的所需產(chǎn)物。MH+＝236.2。
實(shí)施例1045-氨基丙基苯并咪唑的一般合成
炔丙基胺可通過商業(yè)獲得或用以下常規(guī)方法制備(參見Banholzer，R.等，美國(guó)專利No.4,699,910出于所有目的，它們已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣)。將炔丙基溴(70％甲苯溶液，1.1當(dāng)量)、胺1(1當(dāng)量)、Na2CO3(2.5當(dāng)量)在乙腈(約0.2M)中的混合物回流過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并濾出固體。溶液減壓蒸發(fā)，將殘余物溶于EtOAc(或CH2Cl2)并用水洗滌。將有機(jī)溶液干燥(Na2SO4)。減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到棕色油狀的所需炔丙基胺II，該物質(zhì)無需進(jìn)一步純化即可用于下面的步驟。
芳炔是按照以下改進(jìn)方法制造的(Jon L.Wright等，J.Med.Chem.2000，43，3408-3419出于所有目的，它們已被全文并入作為參考，這就好像在這里完整列出一樣)。在圓底燒瓶中裝入THF并使用分散管在溶劑中鼓入10分鐘氮?dú)?。加入炔丙基胺II(1當(dāng)量)、吡咯烷(2當(dāng)量)和2-硝基-4-溴苯胺III(1當(dāng)量)，同時(shí)繼續(xù)向溶液中鼓入氮?dú)?。最后加入Pd[P(Ph)3]4(2.5mol％)并停止鼓氣。在燒瓶上裝備回流冷凝器，將反應(yīng)混合物在氮?dú)庵谢亓鬟^夜，然后冷卻至室溫。蒸發(fā)THF，將得到粗制的混合物通過硅膠層析(通常EtOAc/己烷1∶1)，獲得所需產(chǎn)物IV。
將IV暴露于催化氫化條件，通常得到完全還原的烷烴，然后如實(shí)施例49所述將此烷烴轉(zhuǎn)化成酯V。
實(shí)施例1054-氨基-5-氟-3-{5-[3-(甲基氨基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮的合成
將芐基喹啉酮I(1.0當(dāng)量)懸浮于EtOH并加入1N HCl(1.1當(dāng)量)，得到澄清溶液。加入10％Pd/C(12重量％)，將反應(yīng)混合物在鋼容器中在200psi H2和60℃下氫化兩天。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，過濾并減壓蒸發(fā)除去溶劑。殘余物通過反相制備型HPLC純化，得到所需產(chǎn)物。MH+＝366.1。
實(shí)施例1064-氨基-5-氟-3-(5-{3-[甲基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]丙基}-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮的合成
在喹啉酮I(1.0當(dāng)量)的MeOH溶液中加入1-甲基-4-哌啶酮(1.5當(dāng)量)，然后加入NaCNBH3(3當(dāng)量)。然后將反應(yīng)混合物回流過夜并冷卻至室溫。加入15％NaOH，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。減壓濃縮溶劑，將殘余物溶于DMSO，并通過反相制備型HPLC純化，得到所需產(chǎn)物。MH+＝463.2。
實(shí)施例107-211
下表中的各化合物是按照實(shí)施例所述方法以及上述方法合成的。通過以上描述，用來合成以下化合物的起始物質(zhì)是精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員容易知道的。
表1.實(shí)施例107-211
實(shí)施例212-338
表2中所列的實(shí)施例212-338是按照上述方法如方法1-24和過程以及其它實(shí)施例中所列的那些方法或精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員顯見的改進(jìn)方法，用市售的物質(zhì)合成的。
表2.實(shí)施例212-338.
實(shí)施例339-1273
表3中所列的實(shí)施例339-1273是按照上述方法如方法1-24和過程以及其它實(shí)施例中所列的那些方法或精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員顯見的改進(jìn)方法，用市售的物質(zhì)合成的。
表3.實(shí)施例339-1273
實(shí)施例1274-1404
表4中所列的實(shí)施例1274-1404是按照上述方法如方法1-24和過程以及其它實(shí)施例中所列的那些方法或精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員顯見的改進(jìn)方法，用市售的物質(zhì)合成的。
表4.實(shí)施例1274-1415
實(shí)施例1416-1457
表5中所列的實(shí)施例1416-1457是按照上述方法如方法1-24和過程以及其它實(shí)施例中所列的那些方法或精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員顯見的改進(jìn)方法，用市售的物質(zhì)合成的。
表5.實(shí)施例1416-1457
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮的合成
A.5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺的合成
過程A
將5-氯-2-硝基苯胺(500g，2.898mol)和1-甲基哌嗪(871g，8.693mol)置于裝有冷凝器并用氮?dú)獯祾哌^的2000mL燒瓶中。將該燒瓶置于100℃的油浴中并加熱直到通過HPLC測(cè)定5-氯-2-硝基苯胺完全反應(yīng)(通常過夜)。通過HPLC證實(shí)5-氯-2-硝基苯胺消失后，邊機(jī)械攪拌邊將反應(yīng)混合物直接(仍舊是溫的)倒入2500mL室溫的水中。攪拌所得混合物直到其到達(dá)室溫，然后將其過濾。將如此獲得的黃色固體加入1000mL水中并攪拌30分鐘。過濾所得混合物并用TBME(500mL，2×)洗滌所得固體，然后用橡皮障在真空下干燥1小時(shí)。將所得固體轉(zhuǎn)移到干燥盤中并在50℃的真空烘箱內(nèi)干燥至恒重，得到670g(97.8％)黃色粉末狀的標(biāo)題化合物。
過程B
將5-氯-2-硝基苯胺(308.2g，1.79mol)加入一裝有頂部攪拌器(overhead stirrer)、冷凝器、氣體入口、加料漏斗和溫度計(jì)探頭的5000mL的4-頸圓底燒瓶中。然后用氮?dú)獯祾咴摕?。在反?yīng)燒瓶中邊攪拌邊加入1-甲基哌嗪(758.1g，840mL，7.57mol)和200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度酒精(508mL)。再用氮?dú)獯祾邿坎⒃诘獨(dú)庀戮S持反應(yīng)。用加熱套加熱該燒瓶使其內(nèi)部溫度達(dá)到97℃(+/-5℃)并維持該溫度直到通過HPLC確定反應(yīng)完成(通常約40小時(shí))。反應(yīng)結(jié)束后停止加熱，邊攪拌邊使反應(yīng)物冷卻至內(nèi)部溫度約為20℃-25℃，并將反應(yīng)物攪拌2-3小時(shí)。除非已經(jīng)發(fā)生沉淀，否則在反應(yīng)混合物中加入5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺晶種(0.20g，0.85mmol)。在1小時(shí)內(nèi)向攪拌的反應(yīng)混合物中加入水(2450mL)并使內(nèi)部溫度維持在約20-30℃。加完水后將所得混合物在約20-30℃的溫度下攪拌約1小時(shí)。然后過濾所得混合物并用水(3×2.56L)洗滌燒瓶和濾餅。在約50℃的真空烘箱內(nèi)將此金黃色固體產(chǎn)物干燥至恒重416g(產(chǎn)率98.6％)。
過程C
將5-氯-2-硝基苯胺(401g，232mol)加入一裝有頂部攪拌器、冷凝器、氣體入口、加料漏斗和溫度計(jì)探頭的12L的4-頸圓底燒瓶中。該燒瓶然后用氮?dú)獯祾?。在反?yīng)燒瓶中邊攪拌邊加入1-甲基哌嗪(977g，1.08L，9.75mol)和100％酒精(650mL)。再用氮?dú)獯祾邿坎⒃诘獨(dú)庀戮S持反應(yīng)。用加熱套加熱該燒瓶使其內(nèi)部溫度達(dá)到97℃(+/-5℃)并維持該溫度直到通過HPLC確定反應(yīng)完成(通常約40小時(shí))。反應(yīng)結(jié)束后停止加熱，邊攪拌邊使反應(yīng)物冷卻至內(nèi)部溫度約為80℃，并通過加料漏斗在1小時(shí)內(nèi)向混合物中加入水(3.15L)同時(shí)使內(nèi)部溫度維持在82℃(+/-3℃)。加完水后停止加熱，并使反應(yīng)混合物冷卻至少4小時(shí)使內(nèi)部溫度為20-25℃。然后再將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，期間內(nèi)部溫度為20-30℃。然后過濾所得混合物并用水(1×1L)、50％乙醇(1×1L)和95％乙醇(1×1L)洗滌燒瓶和濾餅。在約50℃的真空烘箱內(nèi)將此金黃色固體產(chǎn)物干燥至恒重546g(產(chǎn)率99％)。
B.[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯的合成
過程A
在一5000mL的4-頸燒瓶上裝上攪拌器、溫度計(jì)、冷凝器和氣體入口/出口。在裝備好的燒瓶?jī)?nèi)裝入265.7g(1.12mol.1.0當(dāng)量)5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺和2125mL 200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度EtOH。所得溶液用氮?dú)獯祾?5分鐘。然后加入20.0g 5％Pd/C(50％H2O重量/重量)。將反應(yīng)物在40-50℃(內(nèi)部溫度)劇烈攪拌并在混合物中鼓入氫氣。通過HPLC每小時(shí)監(jiān)測(cè)5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺的消失。反應(yīng)時(shí)間通常為6小時(shí)。
在所有5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺從反應(yīng)物中消失后用氮?dú)獯祾咴撊芤?5分鐘。然后加入440.0g(2.25mol)3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯鹽酸鹽(ethyl3-ethoxy-3-iminopropanoate hydrochloride)固體。將反應(yīng)物在40-50℃(內(nèi)部溫度)攪拌直到反應(yīng)完成。通過HPLC根據(jù)二氨基化合物的消失監(jiān)測(cè)反應(yīng)。反應(yīng)時(shí)間通常為1-2小時(shí)。反應(yīng)完成后將其冷卻至室溫并通過硅藻土墊過濾。用絕對(duì)EtOH(2×250mL)洗滌硅藻土過濾物質(zhì)并減壓濃縮濾液得到粘稠的棕/橙色油狀物。將所得油狀物放入850mL 0.37％的HCl溶液。然后一次性加入固體NaOH(25g)，有沉淀形成。將所得混合物攪拌1小時(shí)然后過濾。固體用H2O(2×400mL)洗滌并在50℃的真空烘箱內(nèi)干燥，得到251.7g(74.1％)淡黃色粉末狀的[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯。
過程B
在一5000mL的4-頸夾套式燒瓶上裝上機(jī)械攪拌器、冷凝器、溫度計(jì)探頭、氣體入口和油起泡器(oil bubbler)。在裝備好的燒瓶?jī)?nèi)裝入300g(1.27mol)5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺和2400mL 200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度EtOH(該反應(yīng)可用，并且已經(jīng)用95％的乙醇進(jìn)行，該反應(yīng)無需使用200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度酒精)。攪拌所得溶液并用氮?dú)獯祾?5分鐘。然后在反應(yīng)燒瓶中加入22.7g 5％Pd/C(50％H2O重量/重量)。反應(yīng)容器用氮?dú)獯祾?5分鐘。用氮?dú)獯祾咧螅咕徛愣魉俚臍錃獬掷m(xù)通過燒瓶以便用氫氣吹掃反應(yīng)容器。將反應(yīng)物在45-55℃(內(nèi)部溫度)攪拌，同時(shí)在混合物中鼓入氫氣，直到通過HPLC確定5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺被完全消耗。反應(yīng)時(shí)間通常為6小時(shí)。
在反應(yīng)物所有5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺消失后用氮?dú)獯祾咴撊芤?5分鐘。二胺中間體在空氣中是敏感的，因此需小心以免接觸空氣。在約30分鐘內(nèi)在反應(yīng)混合物中加入500g(2.56mol)3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯鹽酸鹽。將反應(yīng)物在45-55℃(內(nèi)部溫度)在氮?dú)庀聰嚢柚钡酵ㄟ^HPLC確定二胺被完全消耗。反應(yīng)時(shí)間通常約為2小時(shí)。反應(yīng)完成后，通過硅藻土墊趁熱過濾反應(yīng)物。然后用200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度EtOH(3×285mL)洗滌反應(yīng)燒瓶和硅藻土。將濾液合并在5000mL的燒瓶中并在真空下除去約3300mL乙醇得到橙色油狀物。在所得油狀物中加入水(530mL)然后加入1M HCl(350mL)并攪拌所得混合物。劇烈攪拌所得溶液同時(shí)在約20分鐘內(nèi)加入30％NaOH(200mL)，保持內(nèi)部溫度約為25-30℃同時(shí)使pH在9和10之間。將所得懸浮液攪拌約4小時(shí)同時(shí)保持內(nèi)部溫度約為20-25℃。過濾所得混合物并用H2O(3×300mL)洗滌濾餅。將收集的固體在真空烘箱中于50℃真空干燥至恒重，得到345.9g(90.1％)淡黃色粉末狀的[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯。在另一后處理過程中，將濾液合并并在真空下除去乙醇直到至少除去約90％的乙醇。然后在所得油狀物中加入中性pH的水并將溶液冷卻至約0℃。然后緩慢加入20％的NaOH水溶液，同時(shí)劇烈攪拌以使pH升至9.2(用pH計(jì)讀數(shù))。然后按上述方法過濾和干燥所得混合物。這種后處理過程得到淡棕褐色至淡黃色產(chǎn)物，產(chǎn)率可高達(dá)97％。
降低[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯含水量的方法
將已經(jīng)后處理并干燥至含水量約為8-9％H2O的[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯(120.7克)置于一2000mL的圓底燒瓶中并溶于無水乙醇(500mL)。用旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀將該琥珀色溶液濃縮成粘稠的油狀物，同時(shí)加熱直到所有溶劑被除去。該過程被重復(fù)兩次或多次。將如此獲得的粘稠的油狀物放置在燒瓶中并至于真空烘箱中在50℃加熱過夜。Karl Fisher分析結(jié)果顯示含水量為5.25％。用這種方法獲得的降低的含水量提高了以下實(shí)施例的過程的產(chǎn)率。也可用甲苯和THF等其它溶劑代替這種干燥方法中的乙醇。
C.4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮的合成
過程A
在一5000mL的裝備有冷凝器、機(jī)械攪拌器、溫度計(jì)探頭并用氬氣吹掃過的燒瓶中將[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯(250g，820mmol)(如上所述用乙醇干燥)溶于THF(3800mL)。在該溶液中加入2-氨基-6-氟-芐腈(95.3g，700mmol)，并使內(nèi)部溫度升至40℃。當(dāng)所有固體溶解且溶液溫度達(dá)到40℃時(shí)在5分鐘內(nèi)加入固體KHMDS(376.2g，1890mmol)。當(dāng)加完鉀鹽時(shí)得到不均一的黃色溶液，同時(shí)內(nèi)部溫度升至62℃。60分鐘后，內(nèi)部溫度降至40℃，通過HPLC確定反應(yīng)完全(不存在原料或未環(huán)化的中間體)。然后將此粘稠的反應(yīng)混合物倒入H2O(6000mL)中并攪拌所得混合物直到其達(dá)到室溫，以此將其淬滅。然后過濾混合物并用水(1000mL2×)洗滌濾餅。將亮黃色固體置于干燥盤中并在真空烘箱中于50℃干燥過夜，得到155.3g(47.9％)所需4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮。
過程B
在一5000mL的4-頸夾套式燒瓶上裝上蒸餾設(shè)備、溫度計(jì)探頭、氮?dú)馊肟?、加料漏斗和機(jī)械攪拌器。在此反應(yīng)器中加入[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯(173.0g，570mmol)并用氮?dú)獯祾咴摲磻?yīng)器15分鐘。然后在燒瓶中邊攪拌邊加入無水THF(2600mL)。所有固體溶解后通過蒸餾(真空或大氣下(較高溫度有助于除去水)，需要時(shí)可加熱)除去溶劑。除去1000mL溶劑后停止蒸餾并用氮?dú)獯祾叻磻?yīng)物。然后在反應(yīng)容器中加入1000mL無水THF，當(dāng)所有固體溶解時(shí)再次進(jìn)行蒸餾(真空或大氣下)直到又除去1000mL溶劑。加入無水THF和除去溶劑的過程重復(fù)至少4次(第四次蒸餾時(shí)，60％的溶劑被除去，而在第三次蒸餾時(shí)只有40％)，之后取出1mL樣品進(jìn)行Karl Fischer分析以確定含水量。如果該分析顯示樣品含有少于0.20％的水則按照下段的描述繼續(xù)反應(yīng)。然而，如果分析顯示含有超過0.20％的水則繼續(xù)上述干燥過程直到含水量低于0.20％。
用上段所述的過程實(shí)現(xiàn)含水量低于或約為0.20％后用回流冷凝器代替蒸餾設(shè)備，并在反應(yīng)物中加入2-氨基-6-氟-芐腈(66.2g，470mmol)(有些方法中用0.95當(dāng)量)。然后加熱反應(yīng)物至內(nèi)部溫度為38-42℃。當(dāng)內(nèi)部溫度已經(jīng)達(dá)到38-42℃時(shí)通過加料漏斗在5分鐘內(nèi)在反應(yīng)物中加入KHMDS溶液(1313g，1.32mol，20％KHMDS，用THF配制)，加入過程中維持內(nèi)部溫度在約為38-50℃。當(dāng)加完鉀鹽后將反應(yīng)物攪拌3.5-4.5小時(shí)(一些實(shí)施例中攪拌30-60分鐘，反應(yīng)可在該時(shí)間內(nèi)完成)，同時(shí)維持內(nèi)部溫度在38-42℃。然后取出反應(yīng)物樣品并通過HPLC分析。如果反應(yīng)不完全，則在5分鐘內(nèi)再在燒瓶?jī)?nèi)加入KHMDS溶液并在38-42℃將反應(yīng)物攪拌45-60分鐘(加入的KHMDS溶液的量可按以下方法確定如果IPC率＜3.50，則加入125mL；如果10.0≥IPC率≥3.50，則加入56mL；如果20.0≥IPC率≥10，則加入30mL。IPC率等于4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮)的面積除以未環(huán)化的中間體的面積)。一旦反應(yīng)完成(IPC率＞20)，將反應(yīng)器冷卻至內(nèi)部溫度為25-30℃，并在15分鐘內(nèi)在反應(yīng)器中加入水(350mL)，同時(shí)維持內(nèi)部溫度為25-35℃(一種替換方案中，反應(yīng)在40℃進(jìn)行并在5分鐘內(nèi)加入水。較快的淬滅減少了隨時(shí)間形成的雜質(zhì)的量)。然后用蒸餾設(shè)備代替回流冷凝器并通過蒸餾(真空或大氣下)除去溶劑，需要時(shí)可加熱。除去1500mL溶劑后停止蒸餾并用氮?dú)獯祾叻磻?yīng)物。然后在反應(yīng)燒瓶中加水(1660mL)同時(shí)維持內(nèi)部溫度在20-30℃。然后在20-30℃攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，之后冷卻至內(nèi)部溫度為5-10℃，然后再攪拌1小時(shí)。過濾所得懸浮液，用水(3×650mL)洗滌燒瓶和濾餅。將由此獲得的固體在真空烘箱中于50℃真空干燥至恒重，得到103.9g(產(chǎn)率42.6％)黃色粉末狀的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮。
過程C
將[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯(608g，2.01mol)(干燥的)和2-氨基-6-氟-芐腈(274g，2.01mol)加入放在加熱套上的12L的4-頸燒瓶中，該燒瓶上裝有冷凝器、機(jī)械攪拌器、氣體入口和溫度計(jì)探頭。反應(yīng)容器用氮?dú)獯祾?，并邊攪拌邊在反?yīng)混合物中加入甲苯(7.7L)。反應(yīng)容器再用氮?dú)獯祾卟⒕S持在氮?dú)庀?。升高混合物的?nèi)部溫度至63℃(+/-3℃)。將混合物的內(nèi)部溫度維持在63℃(+/-3℃)，同時(shí)在減壓(380+/-10托，蒸餾頭t＝40℃(+/-10℃)條件下從燒瓶中蒸餾出約2.6L甲苯(用Karl Fischer分析來檢測(cè)混合物的含水量。如果含水量大于0.03％，則再加入2.6L甲苯并再次蒸餾。重復(fù)該過程直到含水量低于0.03％)。當(dāng)含水量低于0.03％后停止加熱，在氮?dú)庀吕鋮s反應(yīng)物至內(nèi)部溫度為17-19℃。然后在氮?dú)庀孪蚍磻?yīng)物中加入叔丁醇鉀的THF溶液(20％的THF溶液；3.39kg，6.04摩爾叔丁醇鉀)，加入速度為使反應(yīng)物的內(nèi)部溫度維持低于20℃。加完叔丁醇鉀之后在內(nèi)部溫度低于20℃下攪拌反應(yīng)物30分鐘。然后將溫度升高至25℃，并攪拌反應(yīng)物至少1小時(shí)。然后將溫度升高至30℃，并攪拌反應(yīng)物至少30分鐘。然后用HPLC檢測(cè)原料的消耗情況來監(jiān)測(cè)反應(yīng)是否完成(通常需2-3小時(shí)，兩種原料都被消耗(HPLC面積％小于0.5％))。如果2小時(shí)后反應(yīng)未完成，再一次加入0.05當(dāng)量叔丁醇鉀，直到HPLC顯示反應(yīng)完成才結(jié)束該過程。反應(yīng)完成后，邊攪拌邊在反應(yīng)混合物中加入650mL水。然后加熱反應(yīng)物使內(nèi)部溫度為50℃并從反應(yīng)混合物中減壓蒸餾出THF(體積約為3L)。然后用加料漏斗在反應(yīng)混合物中逐滴加入水(2.6L)。然后將混合物冷卻至室溫并攪拌至少1小時(shí)。然后過濾反應(yīng)物，濾餅用水(1.2L)、70％乙醇(1.2L)和95％乙醇(1.2L)洗滌。將亮黃色固體置于干燥盤中并在50℃的真空烘箱中干燥至恒重，得到674g(85.4％)所需4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮。
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮的純化
將裝有冷凝器、溫度計(jì)探頭、氮?dú)馊肟诤蜋C(jī)械攪拌器的3000mL的4-頸燒瓶置于加熱套中。在該燒瓶中裝入4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮(101.0g，0.26mol)，使該黃色固體懸浮于95％的乙醇(1000mL)中并攪拌。有些情況下使用8∶1的溶劑比例。然后加熱該懸浮液至溫和回流(溫度約為76℃)并攪拌約1小時(shí)。然后將反應(yīng)物攪拌回流45-75分鐘。此時(shí)停止加熱燒瓶并使懸浮液冷卻至25-30℃。然后過濾懸浮液，濾餅用水(2×500mL)洗滌。然后將黃色固體置于干燥盤中并在50℃的真空烘箱中干燥至恒重(通常為16小時(shí))以得到97.2g(96.2％)黃色粉末狀的純化的產(chǎn)物。
D.4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮的乳酸鹽的制備
在一3000mL的4-頸夾套式燒瓶上裝備冷凝器、溫度計(jì)探頭、氮?dú)馊肟诤蜋C(jī)械攪拌器。用氮?dú)獯祾叽朔磻?yīng)容器至少15分鐘，然后裝入4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮(484g，1.23mol)。準(zhǔn)備D，L-乳酸(243.3g，1.72摩爾單體，見下段)、水(339mL)和乙醇(1211mL)，然后將它們加入反應(yīng)燒瓶。以中等速度開始攪拌，然后加熱反應(yīng)物使內(nèi)部溫度為68-72℃。使反應(yīng)物的內(nèi)部溫度在68-72℃維持15-45分鐘，然后停止加熱。所得混合物通過10-20微米的燒結(jié)玻璃濾器(frit)過濾，將濾液收集在一12L的燒瓶中。該12L燒瓶裝備有內(nèi)部溫度計(jì)探頭、回流冷凝器、加料漏斗、氣體入口出口和頂部攪拌器。然后以中等速度攪拌濾液并加熱至回流(內(nèi)部溫度約為78℃)。保持溫和回流，在約20分鐘內(nèi)在燒瓶中加入乙醇(3596mL)。然后在15-25分鐘內(nèi)冷卻反應(yīng)燒瓶使內(nèi)部溫度范圍約為64-70℃并維持該溫度約30分鐘。檢查反應(yīng)器中是否有晶體。如果不存在晶體，則在燒瓶中加入4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮的乳酸鹽晶體(484mg，0.1摩爾％)，并在64-70℃攪拌反應(yīng)物30分鐘，然后再檢查燒瓶中是否有晶體。一旦出現(xiàn)晶體則將攪拌降低至低速并再在64-70℃攪拌反應(yīng)物90分鐘。然后在約2小時(shí)內(nèi)使反應(yīng)物冷卻至約0℃，所得混合物通過25-50微米的燒結(jié)玻璃濾器過濾。反應(yīng)器用乙醇(484mL)洗滌并攪拌直到內(nèi)部溫度約為0℃。用冷的乙醇來洗滌濾餅，并將該過程再重復(fù)兩次。收集的固體在真空烘箱中于50℃真空干燥至恒重，得到510.7g(85.7％)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮乳酸鹽黃色晶體。過濾過程中通常采用橡皮障或惰性條件。盡管干燥的固體似乎不十分吸濕，但濕的濾餅會(huì)吸水并變得粘稠。需采取注意事項(xiàng)以避免濕的濾餅長(zhǎng)期暴露于空氣。
商品乳酸通常含有約8-12重量％的水，且除了單體乳酸還含有二聚體和三聚體。乳酸二聚體與單體的摩爾比通常約為1.0∶4.7。商品級(jí)乳酸可用于上段所述的過程，因?yàn)閱稳樗猁}優(yōu)先從反應(yīng)混合物中沉淀出來。
測(cè)定方法
絲氨酸/蘇氨酸激酶
各種蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸激酶的激酶活性可通過提供ATP和含有用于磷酸化的絲氨酸或蘇氨酸殘基的合適肽或蛋白質(zhì)，并測(cè)定磷酸部分向絲氨酸或蘇氨酸殘基的轉(zhuǎn)移來測(cè)定。用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(InVitrogen)在Sf9昆蟲細(xì)胞中表達(dá)含有GSK-3、RSK-2、PAR-1、NEK-2和CHK-1酶的激酶域的重組蛋白質(zhì)，并通過Glu抗體相互作用(對(duì)于Glu-表位標(biāo)記的構(gòu)建物)或通過金屬離子色譜(對(duì)于His6(SEQ ID NO1)標(biāo)記的構(gòu)建物)純化。用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在Sf9昆蟲細(xì)胞中共表達(dá)Cdc2(GST融合構(gòu)建物)和細(xì)胞周期蛋白B。重組的活性Cdk2/細(xì)胞周期蛋白A可通過商業(yè)獲得，購自UpstateBiotechnology。測(cè)定中使用的經(jīng)純化的Cdc2酶可通過商業(yè)獲得，可購自New EnglandBio Labs。對(duì)于各個(gè)測(cè)定，將測(cè)試化合物連續(xù)稀釋在DMSO中，然后與合適的添加有5-10nM 33Pγ-標(biāo)記的ATP的激酶反應(yīng)緩沖液混合。加入激酶蛋白質(zhì)和適當(dāng)?shù)纳锼鼗碾牡孜锸棺罱K體積為150μL。將反應(yīng)物在室溫下孵育3-4小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移到含有100μL終止反應(yīng)緩沖液的涂有抗生蛋白鏈菌素的白色微量滴定板(ThermoLabsystems)上以終止反應(yīng)。終止反應(yīng)緩沖液中含有50mM未標(biāo)記的ATP和30mM EDTA。培育1小時(shí)后用PBS洗滌抗生蛋白鏈菌素板，并在每個(gè)孔中加入200μL Microscint 20閃爍液。封板并用TopCount計(jì)數(shù)。用XL Fit數(shù)據(jù)分析軟件采用非線性回歸計(jì)算各種化合物的50％抑制濃度(IC50)。
反應(yīng)緩沖液含有30mM Tris-HCl2 pH 7.5、10mM MgCl2、2mM DTT、4mM EDTA、25mMβ-磷酸甘油、5mM MnCl2、0.01％BSA/PBS、0.5μM肽底物和1μM未標(biāo)記的ATP。GSK-3酶用量為27nM，CHK1 5nM，Cdc2 1nM，Cdk2 5nM和Rsk2 0.044單位/mL。為測(cè)定GSK-3，使用生物素-CREB肽(生物素-SGSGKRREILSRRP(pS)YR-NH2(SEQID NO4))。為測(cè)定CHK1，使用生物素-Cdc25c肽(生物素-[AHX]SGSGSGLYRSPSMPENLNRPR[CONH2](SEQ ID NO5))。為測(cè)定Cdc2和Cdk2，使用生物素-組蛋白H1肽([1c生物素]GGGGPKTPKKAKKL[CONH2](SEQ ID NO6))。在Rsk2測(cè)定中使用了生物素-p70肽、15mM MgCl2、1mM DTT、5mM EDTA、2.7μM PKC抑制劑肽和2.7μM PKA抑制劑肽。
酪氨酸激酶
許多蛋白酪氨酸激酶的激酶活性可通過提供ATP和含有用于磷酸化的酪氨酸殘基的合適的肽或蛋白質(zhì)，并測(cè)定磷酸部分向酪氨酸殘基的轉(zhuǎn)移來測(cè)定。用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(InVitrogen)在Sf9昆蟲細(xì)胞中表達(dá)與FLT-1(VEGFR1)、VEGFR2、VEGFR3、Tie-2、PDGFRα、PDGFRβ和FGFR1受體的胞質(zhì)域相應(yīng)的重組蛋白質(zhì)，并通過Glu抗體相互作用(對(duì)于Glu-表位標(biāo)記的構(gòu)建物)或通過金屬離子色譜(對(duì)于His6(SEQ ID NO1)標(biāo)記的構(gòu)建物)純化。對(duì)于各個(gè)測(cè)定，將測(cè)試化合物連續(xù)稀釋在DMSO中，然后與合適的添加有ATP的激酶反應(yīng)緩沖液混合。加入激酶蛋白質(zhì)和適當(dāng)生物素化的肽底物使最終體積為50-100μL，將反應(yīng)物在室溫下孵育1-3小時(shí)，并加入25-50μL的45mM EDTA、50mM Hepes pH 7.5來終止反應(yīng)。將終止反應(yīng)混合物(75μL)轉(zhuǎn)移到涂有抗生蛋白鏈菌素的微量滴定板(Boehringer Mannheim)上并孵育1小時(shí)。磷酸化的肽產(chǎn)物用DELFIA時(shí)間分辨熒光系統(tǒng)(Wallac或PE Biosciences)采用銪標(biāo)記的抗磷酸酪氨酸抗體PT66測(cè)量，有以下改進(jìn)在DELFIA測(cè)定緩沖液中添加1mM MgCl2以稀釋抗體。在Wallac 1232 DELFIA熒光計(jì)上或PE Victor II多信號(hào)閱讀計(jì)上讀取時(shí)間分辨熒光。用XL Fit數(shù)據(jù)分析軟件通過非線性回歸計(jì)算各個(gè)化合物的50％抑制濃度(IC50)。
在50mM Hepes pH 7.0、2mM MgCl2、10mM MnCl2、1mM NaF、1mM DTT、1mg/mlBSA、2μM ATP和0.20-0.50μM相應(yīng)的生物素化的肽底物中測(cè)定FLT-1、VEGFR2、VEGFR3、FGFR3、Tie-2和FGFR1激酶。分別加入0.1μg/mL、0.05μg/mL或0.1μg/mL的FLT-1、VEGFR2、VEGFR3、Tie-2和FGFR1激酶。在PDGFR激酶測(cè)定中，使用120μg/mL酶并采用與上述相同的緩沖條件，但將ATP和肽底物的濃度改變?yōu)?.4μM ATP和0.25μM生物素-GGLFDDPSYVNVQNL-NH2(SEQ ID NO2)肽底物。就FLT-1、VEGFR2、VEGFR3和FGFR1而言，上述各個(gè)化合物的IC50值小于10μM。
重組體和活性酪氨酸激酶Fyn和Lck可通過商業(yè)獲得，可購自UpstateBiotechnology。對(duì)于各個(gè)測(cè)定，將測(cè)試化合物連續(xù)稀釋在DMSO中，然后與合適的添加有10nM 33Pγ-標(biāo)記的ATP的激酶反應(yīng)緩沖液混合。加入激酶蛋白質(zhì)和適當(dāng)生物素化的肽底物使最終體積為150μL。將反應(yīng)物在室溫下孵育3-4小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移到含有100μL終止反應(yīng)緩沖液的涂有抗生蛋白鏈菌素的白色微量滴定板(ThermoLabsystems)以終止反應(yīng)，終止反應(yīng)緩沖液中含有100mM EDTA和50μM未標(biāo)記的ATP。孵育1小時(shí)后用PBS洗滌抗生蛋白鏈菌素板，并在每個(gè)孔中加入200μL Microscint 20閃爍液。封板并用TopCount計(jì)數(shù)。用XL Fit數(shù)據(jù)分析軟件采用非線性回歸計(jì)算各化合物的50％抑制濃度(IC50)。
Fyn、Lck和c-ABL激酶反應(yīng)緩沖液含有50mM Tris-HCl pH 7.5、15mM MgCl2、30mM MnCl2、2mM DTT、2mM EDTA、25mMβ-磷酸甘油、0.01％BSA/PBS、0.5μM合適的肽底物(生物素化的Src肽底物生物素-GGGGKVEKIGEGTYGVVYK-NH2(SEQ IDNO3)，用于Fyn和Lck)，1μM未標(biāo)記的ATP和1nM激酶。
c-Kit和FLT-3的激酶活性可通過提供ATP和含有用于磷酸化的酪氨酸殘基的肽或蛋白質(zhì)底物，并測(cè)定磷酸部分向酪氨酸殘基的轉(zhuǎn)移來測(cè)定。與c-Kit和FLT-3受體胞質(zhì)域相應(yīng)的重組蛋白購自(Proquinase)。在測(cè)試示例化合物，例如4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，將其稀釋在DMSO中，然后與下面所述添加有ATP的激酶反應(yīng)緩沖液混合。加入激酶蛋白(c-Kit或FLT-3)和適當(dāng)生物素化的肽底物(生物素-GGLFDDPSYVNVQNL-NH2(SEQ ID NO2))使最終體積為100μL。將反應(yīng)物在室溫下孵育2小時(shí)，并加入50μL 45mM EDTA、50mM HEPES pH 7.5終止反應(yīng)。將終止的反應(yīng)混合物(75μL)轉(zhuǎn)移到涂有抗生蛋白鏈菌素的微量滴定板(Boehringer Mannheim)并孵育1小時(shí)。磷酸化的肽產(chǎn)物用DELPHIA時(shí)間分辨熒光系統(tǒng)(Wallac或PE Biosciences)，采用銪標(biāo)記的抗磷酸酪氨酸抗體PT66進(jìn)行測(cè)量，進(jìn)行以下改進(jìn)在DELFIA測(cè)定緩沖液中添加1mM MgCl2以稀釋抗體。在Wallac 1232 DELFIA熒光計(jì)或PE Victor II多信號(hào)閱讀器上讀取時(shí)間分辨熒光值。用XL Fit數(shù)據(jù)分析軟件通過非線性回歸計(jì)算各化合物的50％抑制濃度(IC50)。
在50mM Hepes pH 7.5、1mM NaF、2mM MgCl2、10mM MnCl2和1mg/mL BSA、8μM ATP和1μM相應(yīng)的生物素化的肽底物(生物素-GGLFDDPSYVNVQNL-NH2(SEQ ID NO2))中測(cè)定FLT-3和c-Kit激酶。測(cè)定FLT-3和c-Kit激酶的濃度為2nM。
合成了在實(shí)施例中制造的各化合物并用上述方法進(jìn)行分析。就VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、FGFR1、CHK1、Cdc2、GSK-3、NEK-2、Cdk2、Cdk4、MEK1、NEK-2、CHK2、CK1ε、Raf、Fyn、Lck、Rsk2、PAR-1、c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、FLT-3、PDGFRα和PDGFRβ而言，多數(shù)示例化合物的IC50值小于10μM。此外，許多示例化合物的IC50值在nM范圍，且對(duì)VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、FGFR1、FGFR3、c-Kit、c-ABL、FLT-3、CHK1、Cdc2、GSK-3、NEK-2、Cdk2、MEK1、NEK-2、CHK2、Fyn、Lck、Rsk2、PAR-1、PDGFRα和PDGFRβ具有很強(qiáng)活性，其IC50值小于1μM。其它實(shí)施例也顯示了這種對(duì)VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3，F(xiàn)GFR1、FGFR3、c-Kit、c-ABL、p60src、FLT-3、CHK1、Cdc2、GSK-3、NEK-2、Cdk2、Cdk4、MEK1、NEK-2、CHK2、CK1ε、Raf、Fyn、Lck、Rsk2、PAR-1、PDGFRα和PDGFRβ的活性，或?qū)@示具有這種活性。示例化合物還對(duì)VEGFR2具有抑制活性。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽、該化合物的對(duì)映體或非對(duì)映體、該互變體的對(duì)映體或非對(duì)映體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的對(duì)映體或非對(duì)映體、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽的對(duì)映體或非對(duì)映體、或化合物、對(duì)映體、互變體或鹽的混合物，其中，所述化合物選自實(shí)施例51-90、實(shí)施例93-100、實(shí)施例102、實(shí)施例104、實(shí)施例105和實(shí)施例339-1457的標(biāo)題化合物。這些實(shí)施方案涉及具體標(biāo)題化合物的化合物、鹽、對(duì)映體以及其混合物，且不限于用于制造這些化合物的方法，例如，實(shí)施例51-90、93-100、102、104和105中所述的方法。在一些此類實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，其中，所述化合物選自實(shí)施例51-90、實(shí)施例93-100、實(shí)施例102、實(shí)施例104、實(shí)施例105和實(shí)施例339-1457。在一些此類實(shí)施方案中，所述化合物選自表3、表4和表5命名的那些化合物。在一些實(shí)施方案中，所述化合物選自表3中命名的那些化合物。在其它實(shí)施方案中，所述化合物選自表4中命名的那些化合物。在其它實(shí)施方案中，所述化合物選自表5中命名的那些化合物。本發(fā)明還提供了這些化合物在制造用于抑制這里所述的絲氨酸/蘇氨酸或酪氨酸激酶的激酶活性的藥物或藥物制劑中的應(yīng)用；這些化合物在制造用于治療這里所述的絲氨酸/蘇氨酸或酪氨酸激酶介導(dǎo)的生物病癥的藥物或藥物制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了用這些化合物抑制這里所述的絲氨酸/蘇氨酸激酶或酪氨酸激酶的方法，以及用這些化合物治療這里所述的絲氨酸/蘇氨酸或酪氨酸激酶介導(dǎo)的生物病癥的方法。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制FLT-1(VEGFR1)的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制VEGFR2(KDR(人)、Flk-1(小鼠))的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制VEGFR3(FLT-4)的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制FGFR1的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制NEK-2的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB的化合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制PDGFRα和PDGFRβ的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制FGFR3的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制FLT-3的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制FLT-3或Stat5磷酸化的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制c-Kit的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制c-ABL的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制p60src的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制FGFR3的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制ErB2的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制Cdk 2的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制Cdk 4的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制MEK1的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制NEK-2的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制CHK2的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制CK1ε的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制Raf的方法。所述方法包括給予有此需要的受試者(如人)有效量的結(jié)構(gòu)I或IB化合物的任何實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
如上所述，示例化合物在一個(gè)或多個(gè)重要測(cè)定中顯示出活性，或被發(fā)現(xiàn)可具有這種活性。由于這個(gè)原因，每個(gè)示例化合物都是優(yōu)選的，且它們作為一個(gè)組也是優(yōu)選的。一個(gè)、兩個(gè)或多個(gè)本發(fā)明的化合物可結(jié)合在藥物制劑、藥物中使用，并被用于治療受試者的方法中。此外，示例化合物的R1-R10基團(tuán)中的每一個(gè)都是優(yōu)選的，無論是單獨(dú)的還是作為一組的一個(gè)成員。
與血管發(fā)生和腫瘤細(xì)胞增殖有關(guān)的
生長(zhǎng)因子酪氨酸激酶受體的小分子抑制劑
對(duì)激酶的抑制
4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮是一種口服的生物可利用的苯并咪唑-喹啉酮，它對(duì)驅(qū)使內(nèi)皮和腫瘤細(xì)胞增殖的受體酪氨酸激酶具有很強(qiáng)抑制作用。4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮對(duì)9種酪氨酸激酶FGFR1、FGFR3、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、PDGFRβ、c-Kit、p60src和FLT-3的抑制作用是用上述測(cè)定方法測(cè)定的。發(fā)現(xiàn)這些酪氨酸激酶的IC50小于30nM。還顯示這些化合物對(duì)fyn、p56lck、c-ABL、CHK1、CHK2、PAR-1、MEK和RSK2的IC50小于1μM。4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮在這些濃度(IC50s＞2μM)時(shí)不能顯著抑制EGFR家族激酶或胰島素受體激酶。4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮在腫瘤細(xì)胞系MV4-11細(xì)胞中對(duì)FLT-3磷酸化的抑制作用描述如下。
在細(xì)胞系中的抗增殖作用
在27種不同的癌細(xì)胞系和原代細(xì)胞系中驗(yàn)證4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮(實(shí)施例166)的抗增殖活性，在其中的26種細(xì)胞系中其EC50值小于10μM。這種示例化合物的抗增殖活性是通過將加入可被代謝活性細(xì)胞生物降解為可溶性有色甲產(chǎn)物的MTS四唑化合物(獲自Promega，Madison，威斯康星州)，并通過用分光光度計(jì)測(cè)量490nm的吸光度記錄有色甲產(chǎn)物來測(cè)定的。為確定示例化合物在各個(gè)細(xì)胞系的EC50值，確定了給出最佳信號(hào)的合適的細(xì)胞數(shù)目(見表6)并將其置于100μL生長(zhǎng)培養(yǎng)基中種于96孔板內(nèi)的。將連續(xù)稀釋的DMSO貯備液中的示例化合物加到含100μL生長(zhǎng)培養(yǎng)基的平板上，起始濃度通常為20μM，并在37℃和5％CO2孵育72小時(shí)。各個(gè)細(xì)胞系的DMSO終濃度為0.5％或更低(見表6)。用來測(cè)定示例化合物EC50值的細(xì)胞系列在表6中，且除非另有說明，它們是人源的。對(duì)于HMVEC和TF-1細(xì)胞系，分別測(cè)定了對(duì)VEGF和SCF(干細(xì)胞因子)介導(dǎo)的增殖抑制的EC50。孵育72小時(shí)后，在孔中加入40μL MTS溶液并在3-5小時(shí)后在490nm測(cè)定OD。用非線性回歸計(jì)算EC50值。示例化合物對(duì)所有被測(cè)細(xì)胞系具有EC50＜10μM的抗增殖效應(yīng)，除了U87MG細(xì)胞系，計(jì)算得示例化合物對(duì)U87MG細(xì)胞系的EC50約為10μM。
表6.用來測(cè)定示例化合物抗增殖活性的細(xì)胞系和條件
*除非另有說明，均為人源。
在內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞系亞型中觀察到明顯的抗增殖效應(yīng)。已證實(shí)，數(shù)種人癌細(xì)胞系對(duì)4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮抗增殖效應(yīng)的敏感程度至少比其它被測(cè)細(xì)胞系高10倍。該化合物在HMVEC(人微血管內(nèi)皮細(xì)胞)中以IC50為25nM抑制VEGF介導(dǎo)的增殖，且該化合物以劑量依賴的方式以9nM的EC50抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞系KM12L4a。SCF(干細(xì)胞因子)介導(dǎo)的TF-1細(xì)胞增殖被4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮抑制，這說明c-Kit RTK活性被調(diào)節(jié)。該化合物在FLT-3突變型和野生型細(xì)胞中具有抗增殖活性對(duì)MV4-11(FLT-3 ITD突變型)的EC50為13nM，對(duì)RS4(FLT-3野生型)的EC50為510nM。通過Ki67免疫組織化學(xué)染色在體內(nèi)證實(shí)減弱的腫瘤細(xì)胞增殖。因此，4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮不是常規(guī)的″非特異性″細(xì)胞毒劑，而是對(duì)許多癌細(xì)胞系具有強(qiáng)烈活性。
在基于細(xì)胞的測(cè)定中對(duì)磷酸化的抑制
用4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮處理后收集自小鼠的血漿和腫瘤，以評(píng)價(jià)可能的藥效終點(diǎn)。用4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮處理后，對(duì)KM12L4a腫瘤中靶向調(diào)節(jié)的分析說明，VEGFR1、VEGFR2、PDGFRβ和FGFR1的磷酸化以時(shí)間依賴和劑量依賴的方式被抑制。例如，HMVEC細(xì)胞顯示了對(duì)VEGF介導(dǎo)的VEGFR2磷酸化的抑制，其IC50約為0.1μM。此外，用4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮處理內(nèi)皮細(xì)胞可抑制VEGF介導(dǎo)的MAPK和Akt的磷酸化。
此外，在KM12L4A細(xì)胞中觀察到了ERK(MAPK，是受體酪氨酸激酶的下游靶點(diǎn))活性的時(shí)間和劑量依賴型抑制，其IC50在0.1-0.5μM之間。(KM12L4A細(xì)胞在其表面表達(dá)PDGFRβ和VEGFR1/2。)4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮對(duì)受體磷酸化和ERK活性的抑制作用在治療后可維持24小時(shí)。示例化合物以劑量依賴的方式在MV4-11細(xì)胞中抑制ERK1/2的磷酸化，其IC50為0.01-0.1μM。
當(dāng)MV4-11細(xì)胞被處理1小時(shí)時(shí)，濃度為0.1-0.5μM的4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮可抑制FLT-3和Stat5的磷酸化。對(duì)該示例化合物的劑量應(yīng)答研究顯示，在0.1μM時(shí)MV4-11細(xì)胞中的Stat5磷酸化被完全抑制。用示例化合物在MV4-11細(xì)胞中進(jìn)行脈沖-洗出實(shí)驗(yàn)顯示可完全抑制Stat5磷酸化至少4小時(shí)，并在24和44小時(shí)部分抑制。當(dāng)示例化合物的濃度為0.1、1和3μM時(shí)在RS4細(xì)胞中可抑制FLT-3的磷酸化。
在HCT116人結(jié)腸腫瘤模型中觀察到了顯著的體內(nèi)活性。在HCT116腫瘤中，4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮以劑量和時(shí)間依賴的方式抑制ERK(MAPK)的磷酸化，并觀察到腫瘤的組織學(xué)分析明顯改變。
這些在臨床模型中進(jìn)行的PK/PD評(píng)價(jià)說明，4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮對(duì)目標(biāo)受體和下游信號(hào)分子ERK(MAPK)都顯示了劑量和時(shí)間依賴性抑制作用。這些研究將有助于鑒定潛在的生物標(biāo)記，以在臨床實(shí)驗(yàn)中支持對(duì)4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮生物活性的監(jiān)測(cè)。
體內(nèi)腫瘤模型研究
在寬范圍的人和鼠科動(dòng)物腫瘤模型中，體內(nèi)日口服劑量的4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮產(chǎn)生顯著抗腫瘤活性。所建立的前列腺、結(jié)腸、卵巢和血液衍生癌癥細(xì)胞的腫瘤異種移植物都證實(shí)對(duì)劑量依賴型治療有反應(yīng)，它們的ED50在4-65mg/kg/d之間。體內(nèi)活性作用包括生長(zhǎng)抑制、穩(wěn)定疾病和消退腫瘤。例如，該化合物在nu/nu小鼠中可導(dǎo)致KM12L4a人結(jié)腸腫瘤皮下異種移植物的消退和生長(zhǎng)抑制。圖1顯示了在各種4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮?jiǎng)┝肯履[瘤體積隨時(shí)間變化的情況。當(dāng)腫瘤異種移植物體積達(dá)到125mm3時(shí)開始用藥。結(jié)果顯示，以大于或等于30mg/kg的劑量用藥四次后，腫瘤生長(zhǎng)受到顯著抑制，且當(dāng)劑量為60和100mg/kg時(shí)腫瘤消退。在90-100％的有較大KM12L4a結(jié)腸腫瘤異種移植物的動(dòng)物中觀察到了類似的結(jié)果。當(dāng)腫瘤大小達(dá)到500-1000mm3時(shí)開始治療。組織濃度研究顯示，給藥后24小時(shí)，4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮在腫瘤中的濃度是血漿濃度的65-300倍。此外，目標(biāo)調(diào)節(jié)研究顯示，抑制作用可維持24小時(shí)以上。
實(shí)施例166還顯示，SCID-NOD小鼠皮下MV4-11(FLT-3ITD突變體)腫瘤模型(當(dāng)腫瘤體積為300mm3時(shí)開始治療；見圖11)中的ED50為4mg/kg/d。30mg/kg/d的劑量抑制較大MV4-11腫瘤的生長(zhǎng)(治療開始時(shí)腫瘤體積為500mm3時(shí)＞86％；為1000mm3時(shí)＞80％)并造成一些完全消退(見圖12)。停止用藥后發(fā)現(xiàn)消退是穩(wěn)定的。在那些復(fù)發(fā)的腫瘤中，第二周期30mg/kg/d的示例化合物的使用再次造成部分消退，這說明對(duì)該化合物沒有獲得耐藥性。
還證實(shí)4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移研究也有效，該研究中將4T1鼠乳腺腫瘤細(xì)胞移植到BALB/c小鼠皮下。當(dāng)腫瘤達(dá)到150mm3時(shí)開始治療，給予小鼠口服日劑量17天。在植入細(xì)胞30天后，研究終點(diǎn)是相對(duì)載體的原發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)抑制，同時(shí)通過肉眼計(jì)算肝臟轉(zhuǎn)移的總數(shù)。當(dāng)劑量超過10mg/kg/d的所有劑量時(shí)，實(shí)施例166以高達(dá)82％的比例抑制原發(fā)性腫瘤，并以超過75％的比例抑制肝臟轉(zhuǎn)移。
血管生成抑制效應(yīng)
在一些體外血管生成抑制測(cè)定和離體大鼠主動(dòng)脈環(huán)測(cè)定(見圖10)中研究了4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮，體外血管生成抑制測(cè)定包括內(nèi)皮細(xì)胞遷移和纖維蛋白凝膠上血管的形成(見圖9A和9B)。與對(duì)照組相比，研究顯示了各個(gè)測(cè)定終點(diǎn)的劑量依賴性抑制。
在體內(nèi)基質(zhì)膠模型中，4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮誘導(dǎo)血管發(fā)生的劑量依賴型抑制。將添加有bFGF的基質(zhì)膠皮下注射進(jìn)小鼠。將所述化合物通過口服給予小鼠，給藥8天。除去基質(zhì)膠栓并測(cè)定其中的血紅蛋白濃度。如圖2所示，觀察到對(duì)新血管形成的顯著抑制，ED50為3mg/kg/天。此外，在8天的研究中，動(dòng)物對(duì)所有的劑量都可被良好耐受。
給藥方案的效果
進(jìn)行給藥方案研究以評(píng)價(jià)延長(zhǎng)的腫瘤半衰期和持續(xù)的抗腫瘤效應(yīng)的生物活性之間的關(guān)系。在一些間歇性和循環(huán)性給藥方案中觀察到明顯活性。例如，在間歇性給藥方案中，4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮被給予具有PC3人前列腺腫瘤皮下異種移植物的SCID小鼠。當(dāng)腫瘤尺寸達(dá)到150mm3時(shí)開始治療。劑量為每天、每?jī)商?、每三天和每四天口?00mg/kg。如圖3所示，在所有治療組中都觀察到顯著和類似的腫瘤抑制。
在循環(huán)性給藥試驗(yàn)中，4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮被給予具有KM12L4a人結(jié)腸腫瘤異種移植物的nu/nu小鼠。當(dāng)腫瘤尺寸達(dá)到500mm3時(shí)開始治療。在第1-5、18-22和26-30天給予100或150mg/kg的劑量。與載體相比，有50％或更多的腫瘤消退。在更高劑量時(shí)，腫瘤繼續(xù)消退，然后穩(wěn)定約10天。在另一劑量研究中，在SCID-NOD小鼠中的人MV4-11(FLT-3ITD突變體)皮下腫瘤模型中研究了示例化合物的效果。30mg/kg 4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮的另一種給藥方案(q.o.d.或給藥7天/停藥7天)同樣有效(見圖13)。
聯(lián)合治療結(jié)果
在KM12L4a結(jié)腸腫瘤模型中用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞毒類物質(zhì)伊立替康和5-FU進(jìn)行了聯(lián)合治療研究。如圖5所示，最引人注目的效果是，當(dāng)采用低的、無效劑量的4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮的時(shí)觀察到活性顯著增強(qiáng)。將50mg/kg的化合物以循環(huán)給藥方案與伊立替康聯(lián)合使用收到了極好的效果，3成的腫瘤完全消退，并有7成部分消退，如圖6所示。在erbB2-過表達(dá)卵巢腫瘤模型SKOV3ip1中聯(lián)合使用曲妥單抗和4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮也觀察到了協(xié)同效應(yīng)和好于加合效應(yīng)的結(jié)果(見圖7)。此外，在A431表皮腫瘤模型中，當(dāng)4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮與ZD1839(Iressa)聯(lián)合使用時(shí)，腫瘤的反應(yīng)和消退情況較之單獨(dú)使用單個(gè)藥劑治療明顯改善(見圖8)。這些數(shù)據(jù)說明，4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮有希望成為一種可廣泛使用并有效治療實(shí)體瘤和血癌的物質(zhì)。
代謝和藥代動(dòng)力學(xué)研究
對(duì)4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮進(jìn)行了代謝和藥代動(dòng)力學(xué)研究。該化合物在人類肝臟微粒體中是穩(wěn)定的。但未證明它具有抑制5種常見cDNA衍生的CYP同工酶(1A2、2C9、2C19、2D6、3A4)的顯著潛能，對(duì)每一種同工酶的IC50大于25μM。此外，該化合物顯示出適合每天給藥一次的半衰期。因此，該化合物具有良好的代謝和藥代動(dòng)力學(xué)特性。
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮對(duì)CSF-1介導(dǎo)的生長(zhǎng)的抑制
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮的抗增殖活性，顯示在它能以300nM的EC50抑制CSF-1(集落剌激因子-1)介導(dǎo)的M-NFS-60細(xì)胞(小鼠骨髓母細(xì)胞系)的增殖。通過在96孔板中50微升試驗(yàn)培養(yǎng)基(不含67.1ng/mlGM-CSF的生長(zhǎng)培養(yǎng)基RPMI-1640+10％FBS+0.044mMβ-巰基乙醇+2mML-Glut+Pen/Strep)中每孔接種5000個(gè)細(xì)胞進(jìn)行該試驗(yàn)。將起始濃度為20μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮的DMSO貯存液作連續(xù)稀釋后加入到50微升含CSF-1的試驗(yàn)培養(yǎng)基的板中使最終濃度為10ng/ml，然后在37℃和5％CO2孵育72小時(shí)。DMSO終濃度為0.2％。孵育72小時(shí)后，在板中加入100微升Cell Titer Glo(Promega#G755B)，搖勻后孵育10分鐘，測(cè)定發(fā)光。用非線性回歸計(jì)算出EC50。
濃度低于1μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮可抑制CSFR1的自身磷酸化。孵育結(jié)束時(shí)用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮處理M-NFS-60細(xì)胞和用CSF-1處理該細(xì)胞5分鐘，導(dǎo)致受體酪氨酸磷酸化受到抑制，可用抗磷酸酪氨酸抗體的CSFR1免疫沉淀和免疫印跡法測(cè)到。
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮對(duì)FGFR3的抑制
T(4；14)易位獨(dú)特地發(fā)生在多發(fā)性骨髓瘤(MM)患者的一個(gè)亞型(15-20％)中，導(dǎo)致受體酪氨酸激酶(RTK)、FGFR3的異位表達(dá)。后來測(cè)到某些MM中的FGFR3激活突變與疾病進(jìn)程有關(guān)，且在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭芯哂泻軓?qiáng)的轉(zhuǎn)化作用。
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮以100nM的EC50抑制了由于K650E突變而表達(dá)組成性激活的FGFR3的OPM-2細(xì)胞的增殖。通過在96孔板每孔50微升試驗(yàn)培養(yǎng)基(RPMI-1640+10％FBS+Pen/Strep)中接種8000個(gè)細(xì)胞進(jìn)行該試驗(yàn)。將起始濃度為20μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮的DMSO貯存液作連續(xù)稀釋后加入到培養(yǎng)板中的50微升試驗(yàn)培養(yǎng)基中，然后37℃和5％CO2孵育72小時(shí)。DMSO終濃度為0.2％。孵育72小時(shí)后，在板中加入100微升Cell Titer Glo(Promega#G755B)，搖勻后孵育10分鐘，讀取發(fā)光值。用非線性回歸計(jì)算出EC50。在表達(dá)WT FGFR3受體的H929細(xì)胞系(IMDM+10％FBS+Pen/Strep)中，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮的EC50為0.63μM。如上所述用含有50ng/ml aFGF、10μg/ml肝素和1％FBS的試驗(yàn)培養(yǎng)基測(cè)定EC50。加入MTS四唑鎓試劑(Promega)4小時(shí)后測(cè)定490nm處的OD值，用線性回歸計(jì)算出EC50。
用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮處理OPM-2細(xì)胞6天后觀察到明顯的細(xì)胞凋亡(用Guava Technologies的檢測(cè)膜聯(lián)蛋白V陽性細(xì)胞的方案和儀器檢測(cè)，＞60％細(xì)胞為膜聯(lián)蛋白V陽性)。
OPM-2細(xì)胞與0.1μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮共孵育后下游信號(hào)傳導(dǎo)組分ERK的磷酸化受到完全抑制。
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮對(duì)C-Met的抑制
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮抑制c-MET的IC50＞3μM。在存在1μM的生物素化底物(KKKSPGEYVNIEFG(SEQ ID NO8))時(shí)通過提供終濃度為25μM的ATP和10nM的c-MET酶(Upstate#14-526)來測(cè)定了c-MET的激酶活性。與抗生物素蛋白鏈菌素板結(jié)合的底物用銪標(biāo)記的抗磷酸酪氨酸抗體PT66檢測(cè)。磷酸化的肽底物用DELPHIA時(shí)間分辨熒光系統(tǒng)檢測(cè)，利用XL Fit數(shù)據(jù)分析軟件以非線性回歸計(jì)算出IC50。在對(duì)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮(EC50為20nM)抑制增殖最敏感細(xì)胞系之一的KM12L4A細(xì)胞中，C-MET被組成性激活。這提示4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮可抑制突變的c-MET，或是c-MET下游信號(hào)傳導(dǎo)通路中的激酶。
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮對(duì)抗各種RTK的體外活性
4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物，如4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮及其互變異構(gòu)體和鹽，是各種激酶如VEGFR2(KDR、Flk-1)、FGFR1和PDGFRβ的強(qiáng)抑制劑，IC50范圍為10-27nM。見美國(guó)專利6,605,617和美國(guó)專利申請(qǐng)10/644,055與10/706,328(各自以其全文的內(nèi)容納入本文作參考，目的是為了說明本文)，其中列出了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮顯示對(duì)之具有活性、可用于試驗(yàn)過程的各種酪氨酸、絲氨酸/蘇氨酸激酶。這些RTK對(duì)啟動(dòng)和維持新血管生長(zhǎng)和腫瘤增殖很重要。針對(duì)III-IV類RTK以及其它類型的RTK亞型的系統(tǒng)性剖析顯示了對(duì)CSF-R1/c-fms、c-kit、flt3和FGFR3的強(qiáng)抑制作用。FGFR3在某些病例中的異常表達(dá)和在多發(fā)性骨髓瘤患者一個(gè)亞型中的組成性激活是t(4；14)易位的結(jié)果(約15-20％)。
研究了4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物，如4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮對(duì)含有t(4；14)易位的多發(fā)性骨髓瘤有關(guān)增殖、細(xì)胞周期、凋亡和FGFR3與ERK(受胞外調(diào)節(jié)的激酶)磷酸化的作用。多發(fā)性骨髓瘤的骨損失嚴(yán)重，主要由于大量產(chǎn)生IL-6和并發(fā)負(fù)責(zé)骨吸收反應(yīng)的破骨細(xì)胞的激活所介導(dǎo)。M-CSF有募集破骨前體細(xì)胞的作用可促進(jìn)它們的存活。阻斷通過CSF-1R的信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)多發(fā)性骨髓瘤患者可提供額外益處。抑制M-CSF介導(dǎo)的鼠骨髓樣細(xì)胞系M-NFS-60的增殖與抑制體外針對(duì)c-fms/CSF-1R的激酶活性相關(guān)。
4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物，如4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮及其互變異構(gòu)體和鹽的作用是III-V類RTK的強(qiáng)抑制劑。在下表中提供了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮的IC50值。
表7.4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮對(duì)各種RTK的活性
在ATP濃度為所用酶的三倍或其Km(這些酶的Km已知)時(shí)，進(jìn)行了制作上表所用的體外RTK試驗(yàn)。用銪標(biāo)記的抗磷酸酪氨酸抗體(PT66)檢測(cè)磷酸化的肽底物。對(duì)于某些試驗(yàn)，在存在各種濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮時(shí)，將γ-P33 ATP與酶一起孵育，定量檢測(cè)磷酸化肽底物的放射活性，用于計(jì)算IC50。
圖14顯示，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮抑制了多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系的增殖。將多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系KMS11、OPM-2和H929與4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮的連續(xù)稀釋液一起孵育。72小時(shí)后用CellTiter-GloTM試驗(yàn)(Promega)檢測(cè)剩余的活細(xì)胞數(shù)。KMS11和OPM-2在其FGFR3受體中含有活化突變，而H929可表達(dá)WT FGFR3。4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮抑制了FGFR3受體激酶(IC50＝9nM，表7)，阻斷了具有活化FGFR3突變的兩種細(xì)胞系的增殖對(duì)KMS11(Y373C)和OPM-2(K650E)細(xì)胞的EC50分別為60nM和87nM(見圖14)。H929細(xì)胞表達(dá)WT FGFR3和突變體N-ras(13G＞D)，此細(xì)胞增殖受到4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的抑制，但較弱(EC50＝2.6μM，在血清減少的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中EC50＝0.6μM)。
在KMS11細(xì)胞中0.5μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮抑制了FGFR3酪氨酸磷酸化(見圖15)。使KMS11細(xì)胞在含1％FBS的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中饑餓2小時(shí)。然后在無FBS的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中與不同濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮孵育2小時(shí)，洗滌、裂解、用FGFR3Ab(sc123 Santa Crus Biotech)作免疫沉淀。裂解液用免疫印跡法和抗磷酸酪氨酸抗體4G10(Upstate Biotech)探針檢測(cè)進(jìn)行分析。下方的圖顯示剝離(stripping)免疫印跡條帶后再用FGFR3Ab探測(cè)的總FGFR3(見圖15)。
發(fā)現(xiàn)在KMS11細(xì)胞中，0.5μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮可抑制ERK的磷酸化。使KMS11細(xì)胞在含1％FBS的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中饑餓2小時(shí)。然后在無FBS的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中與不同濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮孵育2小時(shí)，洗滌、裂解、用免疫印跡法和抗磷酸-ERK抗體(Cell Signaling)作探針檢測(cè)進(jìn)行分析。圖16A下方的圖顯示作為加載對(duì)照(loading control)的親環(huán)素蛋白(Upstate Biotech)的結(jié)果。在OPM-2細(xì)胞中0.1μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮也抑制了ERK的磷酸化。將OPM-2細(xì)胞在含1％FBS的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中與不同濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮孵育1小時(shí)，洗滌、裂解、用免疫印跡法和抗磷酸化ERK的抗體(Cell Signaling)作探針檢測(cè)進(jìn)行分析。圖16B下方的圖顯示作為加載對(duì)照的14-3-3蛋白(Santa Cruz Biotech)的結(jié)果。MAPK通路中的ERK是下游FGFR3信號(hào)傳導(dǎo)組分，0.5μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮抑制了OPM-2和KMS11二種細(xì)胞中的ERK磷酸化(見圖16A和16B)。相反，高達(dá)5μM的該化合物對(duì)H929細(xì)胞中的磷酸化ERK水平無影響。使H929細(xì)胞在無FBS的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中饑餓2天。然后在無FBS的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中與不同濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮孵育1小時(shí)，洗滌后用50ng/ml aFGF和10μg/ml肝素剌激5分鐘，裂解、用免疫印跡法和抗磷酸化ERK的抗體(Cell Signaling)作探針檢測(cè)進(jìn)行分析。在血清饑餓2天后對(duì)aFGF剌激的反應(yīng)中磷酸化ERK只有很小的變化，表明由于Ras突變此通路被組成性激活(見圖16C)。
將KMS11細(xì)胞與不同濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮孵育96小時(shí)。洗滌孵育后的KMS11細(xì)胞，用膜聯(lián)蛋白VPE和7AAD按Nexin試驗(yàn)方案(Guava Technologies)染色。在Guava PCRTM儀器上運(yùn)作樣品，用Guava NexinTM軟件分析各類細(xì)胞的百分比。將OPM-2細(xì)胞與不同濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮孵育72小時(shí)。洗滌孵育后的OPM-2細(xì)胞，用膜聯(lián)蛋白VPE和7AAD按Nexin試驗(yàn)方案(Guava Technologies)染色。在Guava PCRTM儀器上運(yùn)作樣品，用Guava NexinTM軟件分析各類細(xì)胞的百分比。將OPM-2細(xì)胞與不同濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮孵育72小時(shí)。洗滌孵育后的OPM-2細(xì)胞，用膜聯(lián)蛋白VPE和7AAD按Nexin試驗(yàn)方案(Guava Technologies)染色。在Guava PCATM儀器上運(yùn)作樣品，用Guava NexinTM軟件分析各類細(xì)胞的百分比。上述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，用膜聯(lián)蛋白VPE染色測(cè)定時(shí)，起始濃度分別為0.1μM和0.5μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮誘導(dǎo)了KMS11和OPM-2細(xì)胞的凋亡(圖17和19)。
細(xì)胞周期分析觀察到0.1μM或更高濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮顯著提高了G1期細(xì)胞亞群數(shù)量，證實(shí)了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮在KMS11和OPM-2細(xì)胞中誘導(dǎo)凋亡的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)(圖18)。將KMS11細(xì)胞與0.001μM、0.01μM、0.1μM和1μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮孵育72小時(shí)。固定細(xì)胞并用碘化丙錠染色，然后用FACS分析樣品(見圖18)。這些結(jié)果顯示，該化合物對(duì)細(xì)胞周期作用甚微，但在0.1μM時(shí)可誘導(dǎo)KMS11細(xì)胞凋亡。也將OPM-2細(xì)胞與與0.001μM、0.01μM、0.1μM和1μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮孵育72小時(shí)。同樣固定細(xì)胞并用碘化丙錠染色，然后用FACS分析樣品(見圖20)。這些結(jié)果顯示，該化合物對(duì)細(xì)胞周期作用甚微，但在0.5μM時(shí)可誘導(dǎo)OPM-2細(xì)胞凋亡。該化合物對(duì)細(xì)胞周期的其它作用很小，如無明顯G1期停滯作用。在起始0.5μM濃度時(shí)，OPM-2細(xì)胞中G1期細(xì)胞亞群的增加不及KMS11細(xì)胞明顯(圖20)。
將H929細(xì)胞與0.01μM、0.1μM、0.5μM和1μM濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮孵育72小時(shí)。固定細(xì)胞并用碘化丙錠染色，然后用FACS分析樣品(見圖21)。濃度高達(dá)1μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)H929細(xì)胞的細(xì)胞周期無作用，證實(shí)表達(dá)FGFR3的N-ras突變細(xì)胞系對(duì)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的敏感性不如KMS11和OPM-2細(xì)胞。
破骨性骨損失是多發(fā)性骨髓瘤的主要并發(fā)癥之一。參與骨吸收的主要細(xì)胞因子是IL1β和IL6。此外，在患者中測(cè)到M-CSF血清濃度升高。4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮抑制CSF-1R(M-CSF的唯一已知受體)活性的IC50為36nM(見表7)。以220nM的EC50抑制了M-CSF介導(dǎo)的小鼠髓母細(xì)胞系M-NFS-60的增殖(圖22)。在含10ng/ml M-CSF和無GM-CSF的試驗(yàn)培養(yǎng)基中，將小鼠M-NFS-60細(xì)胞與連續(xù)稀釋的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮一起孵育。對(duì)照孔細(xì)胞只用試驗(yàn)培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)72小時(shí)后，用Cell Titer GloTM試驗(yàn)(Promega)測(cè)定所余的活細(xì)胞數(shù)。用非線性回歸確定EC50值(圖22)。
在含有活化FGFR3突變的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系中，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮具有顯著的抗增殖活性，抑制了FGFR3受體的磷酸化和ERK磷酸化。因此，本發(fā)明提供了一種在含有活化FGFR3突變的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系中抑制FGFR3受體磷酸化和ERK磷酸化的方法，該方法包括給予罹患含活化FGFR3突變的多發(fā)性骨髓瘤對(duì)象有效量的4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物、其互變異構(gòu)體，4位氨基替代的喹啉酮苯并咪唑基化合物的鹽、其互變異構(gòu)體的鹽，或它們的組合；或給予一種藥物制劑，其含有4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物、其互變異構(gòu)體，4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物的鹽、其互變異構(gòu)體的鹽，或它們的組合；在給予上述化合物或藥物制劑后可抑制FGFR3受體磷酸化和/或ERK磷酸化。某些實(shí)施方式中，該4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮。在某些實(shí)施方式中，所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物如鼠類或靈長(zhǎng)類動(dòng)物。在某些這類實(shí)施方式中，所述對(duì)象是小鼠，而在其它實(shí)施方式中，所述對(duì)象是人。本發(fā)明還提供4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物、其互變異構(gòu)體，4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物的鹽、其互變異構(gòu)體的鹽在制備能抑制FGFR3受體磷酸化和/或ERK磷酸化的藥物中的應(yīng)用。某些這類實(shí)施方式中，所述4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮。
在FGFR3突變細(xì)胞系中，濃度＜0.5μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮可引起凋亡，但對(duì)細(xì)胞周期無作用。因此，本發(fā)明提供了誘導(dǎo)FGFR3突變細(xì)胞系凋亡的方法，在某些實(shí)施方式中，這樣做不會(huì)伴有對(duì)細(xì)胞周期的大影響。該方法包括給予罹患含活化FGFR3突變的多發(fā)性骨髓瘤對(duì)象有效量的4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物、其互變異構(gòu)體，4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物的鹽、其互變異構(gòu)體的鹽，或它們的組合；或給予一種藥物制劑，其含有4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物、其互變異構(gòu)體，4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物的鹽、其互變異構(gòu)體的鹽，或它們的組合，給藥后可誘導(dǎo)FGFR3突變細(xì)胞系凋亡。在某些實(shí)施方式中，所述4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮。在某些這類實(shí)施方式中，所述對(duì)象是小鼠，而在其它實(shí)施方式中，對(duì)象是人。本發(fā)明還提供4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物、其互變異構(gòu)體，4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物的鹽、其互變異構(gòu)體的鹽在制備能誘導(dǎo)FGFR3突變細(xì)胞系凋亡的藥物中的應(yīng)用；這種應(yīng)用在某些實(shí)施方式中，不會(huì)伴有對(duì)經(jīng)指定時(shí)間孵育后細(xì)胞周期大的影響。在某些這類實(shí)施方式中，所述4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮。
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮抑制小鼠骨髓樣細(xì)胞系M-NFS-60的M-CSF介導(dǎo)的增殖與其體外抑制CSF-1R的激酶活性相關(guān)連。觀察到4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)t(4；14)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系，特別是含有活化FGFR3的細(xì)胞系具有強(qiáng)活性。此外，該化合物和其鹽與互變異構(gòu)體可用于保護(hù)多發(fā)性骨髓瘤患者避免破骨性骨損失和病損。因此，在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供抑制M-CSF介導(dǎo)的骨髓樣細(xì)胞系的增殖和抑制CSF-1R活性的方法。該方法包括給予帶有髓樣細(xì)胞系的對(duì)象有效量的4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物、其互變異構(gòu)體，4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物的鹽、其互變異構(gòu)體的鹽，或它們的組合，或給予一種藥物制劑，其含有4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物、其互變異構(gòu)體，4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物的鹽、其互變異構(gòu)體的鹽，或它們的組合，從而抑制M-CSF介導(dǎo)的髓樣細(xì)胞系增殖和/或CSF-1R的活性。在某些實(shí)施方式中，所述4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮。本發(fā)明還提供4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物、其互變異構(gòu)體，4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物的鹽、其互變異構(gòu)體的鹽或它們的組合，在制備能抑制M-CSF介導(dǎo)的髓樣細(xì)胞系增殖和/或CSF-1R活性的藥物中的應(yīng)用。在某些這類實(shí)施方式中，所述4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮。本發(fā)明也提供減少罹患多發(fā)性骨髓瘤對(duì)象破骨性骨損失或病損的方法，該方法包括給予罹患多發(fā)性骨髓瘤的對(duì)象有效量的4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物、其互變異構(gòu)體，4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物的鹽、其互變異構(gòu)體的鹽，或它們的組合；給予一種藥物制劑，其含有4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物、其互變異構(gòu)體，4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物的鹽、其互變異構(gòu)體的鹽，或它們的組合，給藥后可在所述對(duì)象中觀察到破骨損失或病損減少。在某些實(shí)施方式中，所述4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮。在某些實(shí)施方式中，所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物如鼠類或靈長(zhǎng)類動(dòng)物。在某些這類實(shí)施方式中，所述對(duì)象是小鼠，而在其它實(shí)施方式中，所述對(duì)象是人。本發(fā)明也提供4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物、其互變異構(gòu)體，4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物的鹽、其互變異構(gòu)體的鹽或它們的組合，在制備能減少罹患多發(fā)性骨髓瘤對(duì)象中破骨損失或病損藥物中的應(yīng)用。在某些這類實(shí)施方式中，所述4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮。
抑制FGF3和治療多發(fā)性骨髓瘤
T(4；14)易位獨(dú)特地發(fā)生在多發(fā)性骨髓瘤(MM)患者的一個(gè)亞型中，導(dǎo)致受體酪氨酸激酶(RTK)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3(FGFR3)的異位表達(dá)。抑制MM細(xì)胞中FGFR3的活化可導(dǎo)致凋亡，證實(shí)FGFR3可作為t(4；14)MM的治療靶標(biāo)，鼓勵(lì)了對(duì)用來治療預(yù)后差的那些患者FGFR3抑制劑的臨床開發(fā)。4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物，如4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮可作為FGFR3的抑制劑。在體外激酶試驗(yàn)中，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮以5nM的IC50強(qiáng)烈抑制FGFR3，并選擇性抑制表達(dá)野生型(WT)或活化突變FGFR3的B9細(xì)胞和人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系的生長(zhǎng)。在反應(yīng)性細(xì)胞系中，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮誘導(dǎo)了細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和細(xì)胞毒性作用。重要的是，加入白介素-6(IL-6)、胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)或在基質(zhì)上共培養(yǎng)不能賦予對(duì)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的耐受性。在t(4；14)患者的原代骨髓瘤細(xì)胞中，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮抑制了下游ERK1/2的磷酸化伴有細(xì)胞毒反應(yīng)。最后，4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物，如4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的治療效果在FGFR3MM異種移植小鼠模型中得到證明。4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物，如4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮是表達(dá)WT或突變型FGFR3的FGFR3轉(zhuǎn)化的造血細(xì)胞系和人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系的強(qiáng)抑制劑。此外，這些化合物是FGFR3介導(dǎo)MM的小鼠模型的強(qiáng)抑制劑，并對(duì)t(4；14)患者的原代骨髓瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒性。綜合在一起，這些數(shù)據(jù)表明4位氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物，如4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮在治療與FGFR3表達(dá)相關(guān)的MM中具有明顯的潛能。
方法
化學(xué)化合物和生物學(xué)試劑
將4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮溶于DMSO中，貯存液濃度為20mM。對(duì)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，用5mM檸檬酸緩沖液配制4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮。酸性FGF(aFGF)和肝素分別購自R&D Systems(Minneapolis，MN)和Sigma(Ontario，Canada)。FGFR3抗體(C15，H100和B9)購自Santa Cruz Biotechnology(Santa Cruz，CA)，和AG10購自Upstate Biotechnology(Lake Placid，NY)。
體外激酶試驗(yàn)
通過用時(shí)間分辨熒光法(TRF)或放射活性方法測(cè)定4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)各酶將磷酸轉(zhuǎn)移給其底物的抑制，來得到4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮抑制RTK的IC50值。簡(jiǎn)言之，表達(dá)或購賣代表RTK結(jié)構(gòu)域的重組蛋白質(zhì)，在存在底物和該酶Km2-3倍濃度的ATP條件下，與4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的連續(xù)稀釋液一起孵育。用非線性回歸計(jì)算出IC50，代表至少二次實(shí)驗(yàn)的平均值。
FGFR3表達(dá)載體和B9細(xì)胞轉(zhuǎn)染子
表達(dá)WT FGFR3(B9-WT)、FGFR3-K650E(B9-K650E)的B9細(xì)胞和空逆轉(zhuǎn)錄病毒(B9-MINV)已如上所述。Plowright，EE等，Blood.2000；95992-998。將含F(xiàn)384L、Y373C或J807C的全長(zhǎng)FGFR3 cDNA(Marta Chesi贈(zèng)送，Weill Medical College ofCornell，New York，NY)克隆到含有綠色熒光蛋白(GFP)表達(dá)盒的基于MSCV逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中。通過用獲自上述KMS18的相同片段替代氨基酸290和413之間的PmII-BglII片段，從FGFR3-WT產(chǎn)生攜帶G384D突變的構(gòu)建物。Ronchetti，D等，Oncogene.2001；203553-3562。將構(gòu)建的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染入GP-E親嗜性(ecotropic)包裝細(xì)胞中。利用得到的逆轉(zhuǎn)錄病毒將FGFR3導(dǎo)入IL-6依賴性小鼠骨髓瘤細(xì)胞系B9中。再進(jìn)行有限細(xì)胞稀釋產(chǎn)生單個(gè)細(xì)胞克隆。深低溫保藏各構(gòu)建物的高表達(dá)克隆(B9-F384L、B9-Y373C、B9-G384D和B9-J807C)。
細(xì)胞系和組織培養(yǎng)
將所有的人MM細(xì)胞系和B9細(xì)胞維持在Iscove修飾的Dulbecco培養(yǎng)基(IMDM)中，其中添加有5％FCS、100μg/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素(Gibco，InvitrogenCanada，Ontario)及1％IL-6條件培養(yǎng)液((只對(duì)B9細(xì)胞)。BM基質(zhì)細(xì)胞(BMSC)來源于獲自MM患者的BM標(biāo)本。如前所述，用Ficoll-Hipaque密度沉降法分離單個(gè)核細(xì)胞，用于建立長(zhǎng)期培養(yǎng)物。Hideshima，T等，Blood.2000；962943-2950。為了測(cè)定細(xì)胞生存力，接種96孔板后用20Gy照射BMSC。
生存力試驗(yàn)
用3-(4，5二甲基噻唑)-2，5-二苯基四唑(MTT)染料吸收法評(píng)估細(xì)胞生存力。將細(xì)胞接種在96孔板中，在含5％FCS的IDMD中接種細(xì)胞，密度為每孔5,000個(gè)(B9細(xì)胞)或20,000個(gè)(MM細(xì)胞系)。細(xì)胞與30ng/ml aFGF和100μg/ml肝素，或所示濃度的IL-6及遞增濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮一起孵育。在各種濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮加入用培養(yǎng)基稀釋的10μl等份藥物或DMSO。對(duì)于藥物聯(lián)用研究，將細(xì)胞與0.5μM的地塞米松、100nM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮一起孵育，或以所示的二者濃度同時(shí)孵育。為了評(píng)價(jià)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)粘附于BMSC的MM細(xì)胞的生長(zhǎng)影響，在存在或不存在4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的BMSC包被的96孔板中培養(yǎng)10,000個(gè)KMSll細(xì)胞。細(xì)胞板于37℃、5％CO2培養(yǎng)48-96小時(shí)。按廠商(Boehringer MannheimMannheim，Germany)說明書進(jìn)行MTT試驗(yàn)。為評(píng)估巨噬細(xì)胞-集落剌激因子(M-CSF)介導(dǎo)的生長(zhǎng)，將每孔5000個(gè)M-NFS-60細(xì)胞與4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的連續(xù)稀釋液一起培養(yǎng)，培養(yǎng)基含有10ng/ml的M-CSF但沒有粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落剌激因子(GM-CSF)。72小時(shí)后，用Cell Titer GloTM試驗(yàn)(Promega，Madison，WI)檢測(cè)細(xì)胞生存力。用非線性回歸確定EC50值。各實(shí)驗(yàn)條件重復(fù)三次。
細(xì)胞內(nèi)磷酸化蛋白染色
用如前所述的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)ERK1/2的磷酸化。Chow，S等，Cytometry.2001；4672-78和Irish，JM等，Cell.2004；118217-228。簡(jiǎn)言之，將細(xì)胞血清饑餓過夜，然后在37℃用30ng/ml aFGF和100μg/ml肝素剌激10分鐘。直接在培養(yǎng)基中加入10％福爾馬林達(dá)到2％終濃度立即固定細(xì)胞。將固定的細(xì)胞37℃孵育10分鐘，然后置冰上2分鐘。加入冰冷的甲醇(終濃度90％)，在冰上孵育30分鐘增加細(xì)胞膜通透性。用抗ERK1/2抗體(Cell Signaling Technology，Beverly，MA)染色細(xì)胞15分鐘，再如所示用FITC標(biāo)記的山羊抗兔和抗CDl38-PE抗體(PharMinogen，San Diego，CA)染色。能表達(dá)高水平CDl38的細(xì)胞鑒定為惡性細(xì)胞。在FACS Caliber流式細(xì)胞儀(BDBioscences，San Jose，CA)上進(jìn)行流式細(xì)胞計(jì)數(shù)，用Collquest軟件(Becton Dickison)分析。
細(xì)胞凋亡分析
為研究凋亡，將細(xì)胞以2×105個(gè)/ml的初始密度接種在含DMSO、100nM或500nM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至6天。每隔三天更新一次培養(yǎng)基和藥物并將細(xì)胞密度調(diào)整為2×105個(gè)/ml。用膜聯(lián)蛋白V染色(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)測(cè)定凋亡并作流式細(xì)胞計(jì)數(shù)分析。
原發(fā)性患者樣品
通過熒光原位雜交(FISH)測(cè)定該研究的患者是否有t(4；14)易位。如上所述的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)證實(shí)了FGFR3表達(dá)。Chesi.M等，Blood.2001；97729-736。簡(jiǎn)言之，裂解紅細(xì)胞，將BM單核細(xì)胞與兔抗FGFR3(H100)或兔免疫前血清在冰上孵育30分鐘。用FITC-偶聯(lián)山羊抗兔IgG和小鼠抗-CD138-PE染色細(xì)胞，來鑒定MM細(xì)胞。用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)分析樣品。
進(jìn)一步分析了所有t(4；14)陽性樣品是否存在FGFR3或Ras突變。設(shè)計(jì)了4對(duì)引物來擴(kuò)增含F(xiàn)GFR3密碼子區(qū)域的胞外結(jié)構(gòu)域(EC)、跨膜(TM)結(jié)構(gòu)域、酪氨酸激酶(TK)結(jié)構(gòu)域和終止密碼子(SC)，它們均是活化突變的已知熱點(diǎn)。設(shè)計(jì)了二對(duì)引物來擴(kuò)增N-ras和K-ras的密碼子12、13和61區(qū)域。Chesi.M等，Blood.2001；97729-736。在提取自CD138純化骨髓瘤細(xì)胞的基因組DNA上進(jìn)行第一輪PCR反應(yīng)，利用擴(kuò)增子進(jìn)行DHPLC分析。用PCR產(chǎn)物的序列分析證實(shí)了上述結(jié)果。
對(duì)于細(xì)胞死亡分析，用Ficoll-Hipaque梯度沉降法分離單核細(xì)胞，以5×105個(gè)細(xì)胞/ml的密度接種在含20％FCS和30ng/ml aFGF及10μg/ml肝素的IDMD中。在存在DMSO或500nM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮時(shí)培養(yǎng)細(xì)胞至12天。每隔三天更新一次培養(yǎng)基、aFGF/肝素和藥物。3、7和12天后，用抗-CD38-PE、抗-CD45-CyChrome(PharMinogen)和FITC偶聯(lián)膜聯(lián)蛋白V如上所述對(duì)細(xì)胞進(jìn)行三次染色。LeBlanc，R等，Cancer Res.，2002；624996-5000。對(duì)照包括未染色的細(xì)胞、同型對(duì)照染色細(xì)胞和單一染色細(xì)胞。將表達(dá)高水平CD38和不表達(dá)或表達(dá)低水平CD45的細(xì)胞(CD38++/CD45-)定義為惡性細(xì)胞。用使用Cellquest軟件的FACScan分析法分析樣品。在IRB批準(zhǔn)方案同意下獲得了BM抽出物。
異種移植小鼠模型
如前所述制備異種移植小鼠模型。Mohammadi，M等，I Embo J.1998；175896-5940。簡(jiǎn)言之，給獲自Frederick癌癥研究開發(fā)中心(Frederick，MD)的6-8周齡雌性BNX小鼠右腹皮下接種150微升含3×107個(gè)KMS11細(xì)胞和150微升基質(zhì)膠基底膜基質(zhì)(Becton Dickinson，Bedford，MA)。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到約200mm3時(shí)開始治療，小鼠隨機(jī)接受10、30或60mg/kg的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮或5mM檸檬酸鹽緩沖液。每天以管飼法進(jìn)行給藥并持續(xù)21天。每個(gè)治療組包括8-10只小鼠。每周兩次用卡尺測(cè)定估計(jì)腫瘤體積，采用以下公式4π/3×(寬/2)2×(長(zhǎng)/2)。用單向方差分析比較載體與4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮治療組間的差異。
免疫沉淀和免疫印跡試驗(yàn)
如前所述進(jìn)行免疫沉淀和免疫印跡試驗(yàn)。LeBlanc，R等，Cancer Res.2002；624996-5000。簡(jiǎn)言之，處死小鼠取出腫瘤立即在冰上均漿化并用去污劑緩沖液裂解。將澄清的細(xì)胞提取液(1mg/樣品)與C15 FGFR3抗體孵育6小時(shí)，然后加入蛋白A/G瓊脂糖(Santa Cruz)再2小時(shí)。用抗磷酸酪氨酸抗體4G10評(píng)估磷酸化的FGFR3，或用抗-FGFR3(B9)測(cè)定總FGFR3來進(jìn)行免疫印跡試驗(yàn)。
組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)分析
將組織樣品用10％福爾馬林固定、石蠟包埋，切成5微米厚組織切片用蘇木精伊紅染色。用TechMate500TMBioTek自動(dòng)免疫染色儀(Ventana MedicalSystems，Inc.，Yucson，AZ)和如上所述用能識(shí)別FGFR3的抗體(C15)、識(shí)別Ki-67的抗體(Zymed，San Francisco，CA)和裂解的半胱天冬酶3(Signaling Cell Technology)對(duì)石蠟組織切片作間接免疫過氧化物酶染色，進(jìn)行免疫組織化學(xué)(IHC)研究。
FGFR3和多發(fā)性骨髓瘤研究的結(jié)果
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的選擇性激酶抑制作用
用廣泛的激酶測(cè)定了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮抑制其對(duì)外源性底物磷酸化的能力。表7報(bào)告了導(dǎo)致受體酪氨酸激酶活性降低50％的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮濃度(IC50)。4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮能抑制許多III型激酶，包括FLT3、c-Kit、CSF-R1和PDGFRα/β，體外激酶試驗(yàn)評(píng)估的IC50值為0.001-0.21mM。此外，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮能強(qiáng)烈抑制IV型(FGFR1和3)與V型(VEGFR1-4)RTK，IC50值為0.008-0.013mM。對(duì)InsR、FGFR、c-MET、EphA2、TIE2、IGFR1和HER2進(jìn)行了類似的激酶試驗(yàn)，只在10倍以上更高濃度時(shí)才觀察到明顯抑制。這些研究證明，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮是III、IV和V型RTK的選擇性但多靶標(biāo)抑制劑，對(duì)FGFR特別強(qiáng)的抑制。
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)WT和突變FGFR3轉(zhuǎn)化細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制
還測(cè)定了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮抑制在MM患者中鑒定到的組成性激活FGFR3突變體(Y373C、G384D、K650E、J807C)的能力。Chesi，M等，Blood.2001；97729-736和Ely，S.A等，Cancer.2000；89445-452。這些cDNA的穩(wěn)定表達(dá)賦予了B9細(xì)胞的IL-6非依賴性生長(zhǎng)，證明這些突變體保持了生物學(xué)活性，提供了檢測(cè)針對(duì)各種類型FGFR3突變體潛在FGFR3抑制劑的平臺(tái)。為了測(cè)定4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)FGFR3介導(dǎo)的細(xì)胞生長(zhǎng)作用，將表達(dá)FGFR3-WT、FGFR3-F384L(一種非轉(zhuǎn)化多態(tài)型)和FGFR3活化突變體培養(yǎng)在遞增濃度的抑制劑中暴露48小時(shí)，然后用MTT試驗(yàn)檢測(cè)生存力(圖23)。如預(yù)期的那樣，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮強(qiáng)烈抑制了表達(dá)WT和F384L-FGFR3的B9細(xì)胞的FGF剌激下的生長(zhǎng)，IC50值為25nM。此外，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮抑制了表達(dá)各種活化FGFR3突變體任何一種的B9細(xì)胞的增殖。令人感興趣的是，很少觀察到不同F(xiàn)GFR3突變體對(duì)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮敏感性有何差異，各種突變體的IC50值范圍都在70-90nM。利用只含有載體(B9-MINV)的IL-6依賴性B9細(xì)胞11來檢測(cè)非特異性毒性。B9-MINV細(xì)胞能抵抗?jié)舛雀哌_(dá)1μM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的抑制活性。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步證實(shí)了體外激酶數(shù)據(jù)所證明的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)FGFR3的抑制，并表明非特異性細(xì)胞毒作用在藥物有效濃度范圍內(nèi)不會(huì)觀察到。這些結(jié)果還表明4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)MM中所述的各種FGFR3活化突變有強(qiáng)(抑制)活性。
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)表達(dá)FGFR3的骨髓瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性
為了評(píng)估4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮作為MM治療制劑的潛力，還研究了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)人骨髓瘤細(xì)胞系生長(zhǎng)與存活的作用。將FGFR3陽性細(xì)胞系(KMS11、KMS18、OPM-2、H929)和FGFR3陰性細(xì)胞系(U266和8226)培養(yǎng)在遞增濃度的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮中，監(jiān)測(cè)細(xì)胞生存力(表8)。4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮抑制了KMS11(FGFR3-Y373C)和OPM-2(FGFR3-K650E)及KMS18(FGFR3-G384D)細(xì)胞的增殖，IC50值分別為90nM(KMS11和OPM2)與550nM。FGFR3陰性細(xì)胞系和H929(FGFR3-WT，是容納N-Ras下游活化突變的細(xì)胞系)(Chesi，M等，Blood.2001；97729-736)具有抗性，需要高于5倍的濃度才能抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。如流式細(xì)胞計(jì)數(shù)所測(cè)定，此種細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制與下游ERK1/2磷酸化消失有關(guān)。4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮敏感的細(xì)胞系(KMS11、KMS18、OPM2)都顯示在存在有效劑量4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮時(shí)喪失了ERK1/2磷酸化。相反，H929細(xì)胞對(duì)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮只顯示微小的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制反應(yīng)，證明MAP激酶活性基礎(chǔ)水平高是由于組成性Ras激活并顯示ERK1/2磷酸化無改變，表明4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮作用于Ras的上游。
表84-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)人骨髓瘤細(xì)胞系的IC50值
表中列出了MM細(xì)胞系和有(+)或無(-)t(4；14)轉(zhuǎn)位和FGFR3突變體。WT表示野生型基因型，N/D表示沒檢測(cè)。測(cè)定了用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮孵育72小時(shí)后，與DMSO對(duì)照相比能抑制50％生存力(IC50)的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮濃度(MTT試驗(yàn)或Cell Titer Glo)。
在具有反應(yīng)性的表達(dá)FGFR3的細(xì)胞系中，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮也誘導(dǎo)了凋亡。用500nM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮處理KMS11、OPM2和KMS18細(xì)胞96小時(shí)，導(dǎo)致與DMSO對(duì)照相比，膜聯(lián)蛋白V結(jié)合細(xì)胞的百分率顯著增加(圖24)。在某些骨髓瘤細(xì)胞系中觀察到的凋亡延遲誘導(dǎo)與先前用更具選擇性的抑制劑PD173074(Trude，S等，Blood，2004；1033521-3528)所報(bào)告的相似。對(duì)FGFR3陰性細(xì)胞(U266，未顯示)的處理對(duì)膜聯(lián)蛋白V結(jié)合無作用，提示可能受到4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮抑制的III和V型RTK不表達(dá)，或不是這些骨髓瘤細(xì)胞存活所必需。
評(píng)估了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)原代人骨髓瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒潛在作用。從事先經(jīng)FISH鑒定為t(4；14)陽性或陰性的患者獲得新鮮分離的BM單核細(xì)胞。Chang，H等，Br J Haematol.2004；12564-68。用流式細(xì)胞法驗(yàn)證有無FGFR3表達(dá)(圖25A)。5個(gè)t(4；14)陽性樣品中只有一個(gè)在CD138骨髓瘤細(xì)胞上顯示出高水平FGFR3表達(dá)(表8)。此外，用DHPLC篩檢這些樣品中的FGFR3突變和下游的N和K-Ras突變。通過序列分析證實(shí)結(jié)果。未鑒定到突變。用FGF剌激培養(yǎng)的原代骨髓瘤細(xì)胞導(dǎo)致CD138陽性骨髓瘤細(xì)胞中ERK1/1磷酸化上調(diào)，表明FGFR3在這些細(xì)胞中具有活性(圖25B)。500nM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮完全抑制了所有樣品中的ERK1/2磷酸化。此外，用500nM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮或DMSO載體孵育單核細(xì)胞，用膜聯(lián)蛋白V染色檢測(cè)凋亡。5個(gè)t(4；14)骨髓瘤樣品中有4個(gè)顯示了對(duì)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的細(xì)胞毒反應(yīng)，而作為對(duì)照的載體對(duì)其它骨髓瘤樣品均無作用(圖25C和12D，以及表9)。令人感興趣的是，顯示低水平表達(dá)的t(4；14)陽性樣品有抗性，提示只有高水平WT FGFR3表達(dá)才能賦予依賴。在腸胃道腫瘤(Rubin，BP等，CancerRes.2001；618118-9121)中的c-KIT研究和AML中的FLT3研究(Armstrong，SA.等，Cancer Res.2003；3173-183)提供了對(duì)此假說的支持，這些研究表明有WT受體的高水平表達(dá)、及受體突變導(dǎo)致組成性活化和對(duì)抑制劑敏感。此外，乳腺癌對(duì)Herciptin敏感與HER2/neu表達(dá)水平相關(guān)。Vogel，CL等，J Clin Oncol.2002；20719-726。或者，這些患者的MM細(xì)胞可能通過其它依賴于FGFR3信號(hào)傳導(dǎo)的途徑活化。
表9原代MM細(xì)胞上FGFR3的表達(dá)與對(duì)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮(化合物)的敏感性相關(guān)性概要
用流式細(xì)胞法分析CD138原代MM細(xì)胞的FGFR3表達(dá)，熒光表示如下+，弱；++，中等；+++，強(qiáng)；-，無。在CD138選擇性細(xì)胞中篩檢選出含F(xiàn)GFR3和N及K-Ras突變體。WT表示野生型，N/D表示未檢測(cè)。
IL-6、IGF-1和基質(zhì)對(duì)MM與4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮反應(yīng)性的影響
鑒于已知IL-6(Klein，B等，Blood.1995；85863-872；和Anderson，KC等，SeminHematol.1999；3614-20)和更近的IGF-1(Ogawa，M等，Cancer Res.2000；604264-4269和Mitsiades，C.S等，Cancer Cell.2004；5221-230)在腫瘤細(xì)胞增殖、存活和在MM中的藥物抗性，進(jìn)行了確定外源性IL-6和IGF-1能否克服4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮產(chǎn)生的生長(zhǎng)抑制作用的試驗(yàn)。當(dāng)KMS11細(xì)胞在存在50ng/ml IL-6或50ng/ml IGF-1時(shí)培養(yǎng)，仍能觀察到4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的抑制作用(圖26A)，這點(diǎn)可與存在aFGF比擬。這些研究強(qiáng)調(diào)了FGFR3在這些細(xì)胞的生長(zhǎng)因子受體譜系中起著關(guān)鍵作用。
因?yàn)橐炎C明BM的微環(huán)境賦予了MM細(xì)胞中的藥物抗性(Dalton，WS等，SeminHematol.2004；411-5；和Hideshima，T等，Semin Oncol.，2001；28607-612)，在BM內(nèi)環(huán)境中研究了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)MM細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。用MTT試驗(yàn)測(cè)定4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)BMSC的直接毒性，經(jīng)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮處理的細(xì)胞與DMSO對(duì)照相比，沒觀察到細(xì)胞生存力的顯著差異。然后在有或無4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮時(shí)將KMS11細(xì)胞與或不與BMSC一起培養(yǎng)。BMSC的確賦予了中等程度的抗性，用500nM 4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮處理的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率為44.6％，與之相比，用基質(zhì)培養(yǎng)而無BMSC的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率為71.6％。然而，盡管存在基質(zhì)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮仍顯著抑制了細(xì)胞生長(zhǎng)。
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)地塞米松在多發(fā)性骨髓瘤中細(xì)胞毒性的增強(qiáng)作用
與撤出IL-6的親代B9細(xì)胞相比，觀察到FGFR3表達(dá)導(dǎo)致STAT3磷酸化增加和高水平的Bcl-xL表達(dá)。Plowright，E.E等，Blood.2000；95992-998和Polltt，J.B等，Blood.2002；1003819-3821。這些發(fā)現(xiàn)與抑制地塞米松誘導(dǎo)的凋亡(此現(xiàn)象可用Bcl-xL反義寡核苷酸逆轉(zhuǎn))有關(guān)。處理表達(dá)FGFR3的MM細(xì)胞可克服對(duì)地塞米松的抗性。如表10所示，KMS11細(xì)胞對(duì)地塞米松相對(duì)耐藥，然而當(dāng)聯(lián)用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮時(shí)，觀察到協(xié)同性抑制作用。這些資料表明，聯(lián)用地塞米松與4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮可作為一種治療策略。
表10 4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮(化合物)和/或地塞米松對(duì)KMS11細(xì)胞生存力的影響
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)M-CSF介導(dǎo)的細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制
破骨性損失是MM中的主要并發(fā)癥之一。參與骨吸收的主要破骨細(xì)胞激活因子是IL-1β、IL-6、RANK-L和M-CSF。Croucher，P.I等，Br J Haemaatol.，1998；103902-910。在BM中表達(dá)M-CSF的MM細(xì)胞、成骨細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞，加上RANK-L都是破骨細(xì)胞形成所必須的。Quinn，J.M等，Endocrinology.1998；1394424-4427。已在MM患者中測(cè)到MCSF血清濃度的升高。Janowska-Wieczorek，A等，Blood.1991；771796-1803。體外激酶試驗(yàn)表明，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)CSF-R1(已知M-CSF的唯一受體)有強(qiáng)活性，IC50值為36nM(表7)。4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮能抑制M-NFS-60(M-CSF生長(zhǎng)驅(qū)動(dòng)的小鼠髓母細(xì)胞系)增殖，EC50值為220nM(圖27)。因此，看來除抑制MM細(xì)胞生長(zhǎng)外，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮具有可能抑制腫瘤相關(guān)的破骨的優(yōu)點(diǎn)。
在異種移植小鼠模型中進(jìn)行的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮體內(nèi)評(píng)價(jià)
在皮下注射了KMS11細(xì)胞的BNX小鼠模型中檢測(cè)了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的效果。Grad，J.M等，Blood.2001；805-913和Lentzsch，S等，Leukemia.2003；1741-44。在Bortezomib和IMiDs的MM臨床前研究中已采用了類似的漿細(xì)胞瘤異種移植小鼠模型。給36只BNK小鼠每只腹側(cè)皮下注射3×107個(gè)KMS11細(xì)胞和基質(zhì)膠。當(dāng)腫瘤達(dá)到約200mm3時(shí)隨機(jī)給予小鼠(n＝8-10)載體或4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮，劑量為10mg/kg、30mg/kg和60mg/kg，經(jīng)口管飼每天一次共21天。與載體對(duì)照相比，在所有三個(gè)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮?jiǎng)┝拷M中均觀察到顯著(p＜0.001＝的抗腫瘤作用，最低有效劑量是10mg/kg/d(圖28)。具體說，與安慰劑治療小鼠相比，10mg/kg、30mg/kg和60mg/kg治療動(dòng)物計(jì)算出的生長(zhǎng)抑制率分別為48％，78.5％和94％。給藥最后一天，最高劑量治療組中10只小鼠中有7只達(dá)到和維持了腫瘤體積比給藥第一天相比＞50％的部分消退。在任何治療組中沒觀察到作為顯著毒性標(biāo)志的體重減輕。
為了證明所觀察到的反應(yīng)與FGFR3抑制有關(guān)，在接受最后一劑4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮4小時(shí)后處死小鼠收集腫瘤作體內(nèi)FGFR3磷酸化分析。免疫沉淀腫瘤細(xì)胞裂解液中的FGFR3，用免疫印跡測(cè)定表達(dá)水平和磷酸化水平。觀察到給予60mg/kg劑量時(shí)體內(nèi)FGFR3完全抑制。FGFR3磷酸化的抑制為劑量依賴性，與抗腫瘤反應(yīng)相關(guān)。
與安慰劑對(duì)照相比，組織病理學(xué)檢查取自代表性動(dòng)物的腫瘤進(jìn)一步支持了該藥物治療小鼠腫瘤縮小的解釋。取自藥物治療小鼠的腫瘤出現(xiàn)了大面積的腫瘤壞死。對(duì)增殖性抗原Ki-67表達(dá)和裂解的半胱天冬酶3的免疫組化檢查，證明4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮抑制了細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡。這些發(fā)現(xiàn)提示，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮在體內(nèi)能誘導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和細(xì)胞毒反應(yīng)，導(dǎo)致表達(dá)FGFR3的腫瘤的消退。
FGFR3抑制和多發(fā)性骨髓瘤實(shí)例的討論
對(duì)MM中反復(fù)性細(xì)胞遺傳異常的鑒定和易位配對(duì)的特征分析鑒定到了新的分子靶，提供了分子靶向性治療這種普遍性致死疾病的可能性。Kuehl，W.M等，Nat RevCancer.2002；2175-187；和Chesi，M等，Nat Genet.，1997；16260-265。通過對(duì)存在的IgH-MMSET雜交轉(zhuǎn)錄物的檢測(cè)，得出將近20％的新診斷MM病例包含t(4；14)易位(Santa，M等，Blood.2003；1012374-2376)，據(jù)報(bào)告其存在通常與預(yù)后不良相關(guān)。Fonseca，R等，Blood.2003；1014569-4575；Keats，J.J等，Blood.2003；1011520-1529；Moreau，P等，Blood.2002；1001579-1583和Chang，H等，Br J Haematol.，2004；12564-68。這些病例的約70％表達(dá)FGFR3(Keats，J.J等，Blood.2003；1011520-1529和Quinn J.M等，Endocrinology.1998；1394424-4427)，10％的患者具有與疾病發(fā)展相關(guān)的FGFR3活化突變(Intini，D等，Br J Haematol.2001；114362-364)。
了解到遺傳缺陷涉及到癌癥發(fā)生的原因，導(dǎo)致對(duì)許多癌癥的靶向治療。Druker，B.J等，N Engl J Med.，2001；3441031-1037；Demetri，G.D等，N Engl J Med.，2002；347472-480；Slamon，DJ等，N Eng J Med.2001；344783-792和Smith，BD等，Blood.2004；1033669-3676。最值得注意的是，ST1571對(duì)BCR-ABL激酶活性的抑制在慢性髓性白血病(CML)中產(chǎn)生了主要的細(xì)胞遺傳學(xué)消退。Druker，BJ等，N Engl JMed.，2001；3441031-1037。ST1571對(duì)腸胃道基質(zhì)瘤中對(duì)活化的c-Kit的抑制也對(duì)此化療耐藥性腫瘤有效。Demetri，GD等，N Engl J Med.，2002；347472-480。此外，赫賽汀，一種靶向HER2/neu的單克隆抗體導(dǎo)致了乳腺癌患者化療反應(yīng)的改善和存活時(shí)間延長(zhǎng)。Slamon，DJ等，N Eng J Med.2001；344783-792。在急性髓性白血病(AML)中靶向FLT3的類似激酶抑制劑策略也在II期臨床試驗(yàn)中顯示了具有良好前景的結(jié)果。Smith，BD等，Blood.2004；1033669-3676。在t(4；14)骨髓瘤中對(duì)FGFR3抑制的臨床前研究也鑒定到此RTK可作為靶向治療的合理候選靶標(biāo)。FGFR3的2種拮抗劑PD173074和SU5402抑制了表達(dá)FGFR3突變體的MM細(xì)胞的生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Trudel，S等，Blood.2004；1033521-3528；Paterson，JL等，Br J Haematol.2004；124595-603和Grand，EK等，Leukemia.2004；18962-966。這些研究共同支持了為這些患者臨床開發(fā)FGFR3抑制劑。不幸的是，PD173074不是臨床的候選化合物，而SU5402在體內(nèi)似乎不可能達(dá)到抑制FGFR3所需的IC50值。
4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮是FGFR3和III、IV與V類RTK(包括FLT3、c-Kit、c-Fms、PDGFR和VEGFR)的強(qiáng)抑制劑。此研究中，證明了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮是WT和FGFR317酪氨酸激酶二者的高活性抑制劑。此抑制劑具有針對(duì)廣譜RTK的活性，提示4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮結(jié)合激酶結(jié)構(gòu)域所需的結(jié)構(gòu)嚴(yán)謹(jǐn)性較低，這與4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)許多FGFR3突變體具有活性相一致。4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮治療選擇性誘導(dǎo)了MM細(xì)胞系和含有FGFR3的患者原代樣品的細(xì)胞凋亡。4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮治療MM的可能臨床應(yīng)用，利用異種移植小鼠模型得到了進(jìn)一步驗(yàn)證，在這些模型中4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮治療在體內(nèi)抑制了FGFR3活性并產(chǎn)生了腫瘤消退和顯著減緩了疾病進(jìn)展。
雖然以上數(shù)據(jù)提示，F(xiàn)GFR3是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮在MM細(xì)胞中的主要靶分子，但重要的是注意到，OPM2細(xì)胞能應(yīng)答這種具有廣泛活性的RTK抑制劑，而對(duì)更具選擇性的FGFR3抑制劑PD173074卻沒有反應(yīng)。Trudel，S等，Blood.2004；1033521-3528和Paterson，JL等，Br J Haematol.2004；124595-603。此細(xì)胞系的特征是AKT磷酸化基礎(chǔ)水平高(數(shù)據(jù)未顯示)和PTEN雙等位基因缺失。與我們的結(jié)果相符，Grand等證明，多靶向RTK抑制劑SU5402能在OPM2細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞毒反應(yīng)，而PD173074不能誘導(dǎo)凋亡。Grand，EK等，Leukemia.2004；18962-966。這些發(fā)現(xiàn)也提出了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮可能還靶向其它對(duì)骨髓瘤細(xì)胞生存力的重要靶標(biāo)(還有待證實(shí))，事實(shí)上鑒于在疾病發(fā)展中FGFR3有時(shí)會(huì)丟失，可能由其它下游信號(hào)傳導(dǎo)介質(zhì)來提供這種相關(guān)作用。
記住后一點(diǎn)，重要的是注意到，在某些骨髓瘤患者中有der(14)染色體缺失而對(duì)FGFR3在t(4；14)骨髓瘤的臨床相關(guān)性提出疑問，有人提出FGFR3沒有也行，而MMSET才是t(4；14)MM的真正致病靶分子。Keats，JJ等，Blood.2003；1011520-1529和Intini，D等，Br J Haematol.，2001；114362-364。然而，模型系統(tǒng)的研究表明，WTFGFR3不是主要的轉(zhuǎn)化形式，需要其它合作性致癌基因事件互補(bǔ)才能轉(zhuǎn)化。Chesi，M等，Blood.2001；97729-736和Li，Z等，Blood.2001；972413-2419。然而，以上提供的資料表明，明確表達(dá)FGFR3的原代MM細(xì)胞仍依賴此通路存活，除非存在其它遺傳途徑。因此可能FGFR3與TACC3和MMSET共同起作用，通過在BM微環(huán)境中表達(dá)的FGF配體剌激提供存活信號(hào)。在這些細(xì)胞系中，在急性淋巴母細(xì)胞白血病中描述了FLT3突變及其高水平表達(dá)，MLL(一種類似于MMSET的基因)也有所表達(dá)。Armstrong，S等，Cancer Cell.2003；3173-183。這些觀察提示酪氨酸激酶與trithorax基因之間可能存在互補(bǔ)機(jī)制。
MM細(xì)胞系中FGFR3抑制的研究表明，只有能表達(dá)組成性激活受體的細(xì)胞系才對(duì)FGFR3抑制起反應(yīng)。Trudel，S等，Blood.2004；1033521-3528和Paterson，JL等，Br J Haematol.2004；124595-603。這提出了采用生長(zhǎng)不依賴于BM微環(huán)境因而其生長(zhǎng)和存活不再依賴于基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的FGF的MM細(xì)胞的局限性。因此采用原代患者材料做研究很關(guān)鍵。接觸4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的原代MM細(xì)胞所證明的細(xì)胞毒作用表明，此藥物是表達(dá)WT或突變FGFR3患者的有效治療藥物。然而在原代MM細(xì)胞中只觀察到對(duì)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的中等和延遲的細(xì)胞毒反應(yīng)，可能提示W(wǎng)T FGFR3抑制本身不會(huì)誘導(dǎo)促凋亡信號(hào)，但很可能導(dǎo)致強(qiáng)抗凋亡信號(hào)的撤消。因此有人預(yù)測(cè)正如在KMS11細(xì)胞中證明的那樣，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的最有效用法可能是與化療制劑(如地塞米松)聯(lián)用。
BM微環(huán)境在支持腫瘤生長(zhǎng)中的重要性越發(fā)清楚。Mitsiades，CS等，Cancer Cell.2004；5221-230和Dalton，WS等，Semin Hematol.，2004；411-5。具體說，已證明諸如IL-6和IGF-1的細(xì)胞因子直接與BMSC相互作用可賦予藥物抗性。體外實(shí)驗(yàn)顯示這些旁分泌因子不能克服4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮的抗腫瘤作用。鑒于其靶分子譜，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮也能影響B(tài)M中涉及支持腫瘤生長(zhǎng)的宿主衍生腫瘤相關(guān)細(xì)胞。在數(shù)個(gè)血管生成試驗(yàn)(包括纖維凝膠上血管形成試驗(yàn)和內(nèi)皮細(xì)胞遷移試驗(yàn)以及活體外大鼠主動(dòng)脈環(huán)試驗(yàn))中，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮都顯示了強(qiáng)的抗血管生成活性。Wiesmann，M等，Proc AACR.2003；44934a.。同樣一致的是，取自用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮治療小鼠的腫瘤血管少于對(duì)照(未示出數(shù)據(jù))。已證明，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮也能抑制CSF-1R(M-CSF的受體，一種成骨細(xì)胞活化因子，可引起MM中骨病的病理過程)的活性。綜合在一起，數(shù)據(jù)提示，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮可能靶向BM微環(huán)境中的MM細(xì)胞和直接靶向BM微環(huán)境。
總之，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮代表了一種新的治療t(4；14)骨髓瘤的小分子強(qiáng)效FGFR3抑制劑。4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮對(duì)MM細(xì)胞系和患者原代樣品的細(xì)胞毒作用及靶分子譜，提示它可能有利地調(diào)節(jié)BM微環(huán)境，預(yù)計(jì)這將導(dǎo)致有效治療這種預(yù)后不良的疾病，特別是聯(lián)合治療時(shí)。此治療策略的最終是否成功等待臨床試驗(yàn)的結(jié)果，臨床試驗(yàn)將很快評(píng)價(jià)4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-喹啉-2(1H)-酮治療t(4；14)MM的效果。
癌癥的治療和藥代動(dòng)力學(xué)研究
測(cè)試了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮(化合物1)對(duì)于大量的癌細(xì)胞系和原代非惡性細(xì)胞系的抗增生活性。方法如下將細(xì)胞鋪于96孔板；讓貼壁細(xì)胞系的附著(gelling)3至5個(gè)小時(shí)后，添加化合物的稀釋液，3天后，通過添加MTS溶液(Promega)來測(cè)定活細(xì)胞的數(shù)目。檢測(cè)490nm處的吸光度，利用非線性回歸法計(jì)算EC50值。對(duì)于HMVEC的測(cè)定，在5ng/mL重組VEGF存在的情況下，將化合物與細(xì)胞共同孵育3天。對(duì)于SCF/c-KIT測(cè)定，TF-1和H526細(xì)胞在分別有40ng/mL和100ng/mL重組SCF存在下孵育3天。通過加入MTS溶液和測(cè)定490nm處的吸光度來檢測(cè)增殖情況。用非線性回歸法計(jì)算EC50。結(jié)果列于表11。
在癌細(xì)胞系的和內(nèi)皮細(xì)胞的亞型中，細(xì)胞增殖受到抑制，其EC50≤50nM，這與它們依賴于化合物1所靶向的RTK是一致的(MV4；11組成型激活的FLT3的表達(dá)；HMVECVEGFR2介導(dǎo)的增殖；TF-1c-KIT介導(dǎo)的增殖)，KM12L4a細(xì)胞系除外。雖然此細(xì)胞系確實(shí)表達(dá)一些被靶向的RTK(如通過RT-PCR測(cè)定的VEGFR 1/2和PDGFR)，但是實(shí)驗(yàn)表明，這些單獨(dú)的RTK的抑制并不能充分解釋所觀察到的化合物1的強(qiáng)抗增殖作用。這一發(fā)現(xiàn)提示，此細(xì)胞系中，由化合物1介導(dǎo)的抗增殖作用是由于多種RTK受到抑制而引起的，或者是由一些尚未明確的作用所引起的。
大多數(shù)的細(xì)胞系與化合物1共同孵育時(shí)均顯示了抗增殖反應(yīng)，其EC50在1至10μM之間，其中包括兩種原代細(xì)胞系HMEC(人正常乳腺上皮細(xì)胞)和PrEC(正常的人前列腺上皮細(xì)胞)。與體外結(jié)果一致的是，化合物1有效地抑制KM12L4a和MV4；11異種移植物在小鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)。
表11
a除非另有說明，所有的測(cè)試細(xì)胞系均為人體來源。
代謝物的鑒定
通過2周的毒性研究，化合物1的兩個(gè)代謝產(chǎn)物在合并的大鼠血漿中被識(shí)別和部分鑒定。所分析的對(duì)象為每日1次口服劑量30或80mg/kg的動(dòng)物組，在第1天和第14天給藥后用UV和LC/MS分析動(dòng)物血漿。兩個(gè)鑒別的代謝產(chǎn)物為哌嗪N-氧化物化合物(化合物2)和N-去甲基化合物(化合物3)(這些化合物的合成及特征如下)。代謝產(chǎn)物水平的評(píng)估(基于紫外吸收結(jié)果以及與以前分析中相同樣品中化合物1的已知定量水平的比較而得出的)在表12中給出。已發(fā)現(xiàn)，在所有給藥后的合并血漿樣品中，N-去甲基代謝產(chǎn)物的豐度比化合物1的豐度要低得多。N-氧化物代謝產(chǎn)物的豐度，除了在80mg/kg劑量組第14天的24小時(shí)和30mg/kg劑量組第1天的1-2小時(shí)以外，其余各觀察到的豐度值都比化合物1的豐度值低(表12)。代謝情況并不隨著劑量或劑量持續(xù)時(shí)間的變化而變化。通常隨著劑量的增加，代謝產(chǎn)物的水平會(huì)隨化合物1的水平同比升高。
化合物2
化合物3
對(duì)于兩個(gè)劑量組，不同的劑量持續(xù)時(shí)間(1天或是14天)似乎并未單獨(dú)引起血漿代謝產(chǎn)物水平的升高(表12)，或沒有引起代謝產(chǎn)物相對(duì)于化合物1水平的升高?；衔?的水平隨著劑量的持續(xù)時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，這也可以從代謝產(chǎn)物水平的降低中得以顯現(xiàn)。這提示如果誘導(dǎo)發(fā)生，化合物1代謝的增加影響到這兩種循環(huán)期I的代謝產(chǎn)物。第14天，24小時(shí)的樣品中所含的化合物1和其代謝產(chǎn)物的水平低于第1天24小時(shí)的樣品中這兩者的水平，這就說明使用每天1次30或80mg/kg的劑量方案時(shí)，不會(huì)有代謝產(chǎn)物或化合物1的蓄積。在80mg/kg劑量組的所有檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)和30mg/kg劑量組的所有時(shí)間點(diǎn)(除了第1天后24小時(shí)這一時(shí)間點(diǎn)外)，N-氧化物代謝產(chǎn)物的豐度要高于N-去甲基代謝產(chǎn)物的豐度。N-去甲基代謝產(chǎn)物水平的下降較化合物1水平的下降緩慢，這就提示該代謝產(chǎn)物具有較長(zhǎng)的T1/2，同時(shí)表明此代謝產(chǎn)物的血漿水平很可能由其清除速率而并非其生成的速率所決定(而N-氧化物則很可能與此相反)。
表12.大鼠血漿中化合物1水平和化合物1的代謝產(chǎn)物的評(píng)估水平
1代謝產(chǎn)物的評(píng)估水平基于對(duì)代謝產(chǎn)物紫外吸收面積與化合物1紫外面積的比較，并且使用先前報(bào)道的化合物1的水平。2在先前的另一項(xiàng)單獨(dú)研究中，已對(duì)此處分析所用的相同血漿樣品中化合物1水平進(jìn)行了定量。
化合物1-3的IC50
用上述用于化合物1-3的方法檢測(cè)了許多蛋白酪氨酸激酶的激酶活性，IC50值示于表13。
表13.
KM12L4a人結(jié)腸癌模型中的口服劑量
此項(xiàng)單劑研究評(píng)估了，在KM12L4a人結(jié)腸癌模型中化合物1的每日口服劑量。
在7-8周齡的雌性Nu/Nu小鼠(Charles River)的右側(cè)腹部皮下接種2×106個(gè)KM12L4a細(xì)胞。7天后當(dāng)平均腫瘤體積達(dá)到125mm3時(shí)開始治療。將這天定為研究第1天。用10mM的H3PO4將化合物1制備成溶液形式，通過管飼的方式口服給藥。
本項(xiàng)研究包括7個(gè)治療組(n＝10/組)載體(水)口服(p.o.)，1次/日(q.d.)；六個(gè)施用化合物1組的劑量為3、10、30、100、200、300mg/kg口服(p.o.)，1次/日(q.d.)。
在不同天內(nèi)，從每個(gè)劑量組的個(gè)別動(dòng)物身上抽取血漿樣品，以此測(cè)定化合物1在荷瘤小鼠體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征(N＝2/時(shí)間點(diǎn)/劑量組)。在第22日給藥后的8和24小時(shí)，檢測(cè)從100和200mg/kg劑量組的動(dòng)物身上采集的樣品的組織和腫瘤中化合物1濃度(N＝2/時(shí)間點(diǎn)/劑量組)。
血漿化合物1濃度用未經(jīng)確證的LC/MS/MS分析來測(cè)定，其校正范圍為1-8000ng/mL，定量下限(LLOQ)為1ng/mL(Charles River Laboratories，Worcester，MA)。組織和腫瘤中化合物1的濃度還使用另一未經(jīng)確證的LC/MS/MS分析而測(cè)定，其校正范圍為20至43740ng/g，定量下限(LLOQ)為20ng/g。
復(fù)合的藥代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)(Cmax和AUC)采用標(biāo)準(zhǔn)的無房室法分析獲得，在每個(gè)取樣日分析各劑量組的平均血漿化合物的濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)(WinNonlin Professional，版本4)。報(bào)道的AUC值是用3個(gè)濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)點(diǎn)確定的。報(bào)道的給藥前濃度值是恰在給藥前所觀測(cè)到的濃度。
通過4-7日的治療，所有的劑量組中均觀察到顯著的劑量依賴性的腫瘤生長(zhǎng)抑制(見表14)。計(jì)算所得的ED50值為17mg/kg。在大部分的化合物1施用量為200和300mg/kg的小鼠中，觀察到的腫瘤消退程度均超過其初始大小的50％，然而這些劑量并非在整個(gè)研究期間均可被耐受。到第12-16天，施用300mg/kg藥量進(jìn)行治療的小鼠體重降低了20-30％并被無痛處死。施用200mg/kg藥量進(jìn)行治療的小鼠，到第14天有22％的體重降低的十分之一小鼠被無痛處死，其余小鼠于第21-24日被無痛處死，它們體重降低超過25％。以100mg/kg藥量持續(xù)37天給藥的小鼠，其體重保持在初始體重的98％；在這個(gè)劑量下，腫瘤也保持穩(wěn)定(圖29)。載體組的小鼠在第9日病倒，并計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制(TGI)(表14)。
表14.化合物1的劑量反應(yīng)活性
在給藥次日(第2日)，化合物1的血漿濃度在所有劑量組中均隨著劑量(表15)成比例地升高。在至少2周施用不同劑量的藥物后，血漿濃度與第2日的濃度仍具有可比性，這表示在每日一次給藥的情況下，藥物在小鼠內(nèi)無蓄積(表15)。同樣地，收集于第3、8和15日的化合物1的給藥前血漿濃度在每個(gè)劑量組中是相似的，這就表示第2日后達(dá)到了穩(wěn)態(tài)。因此，這些數(shù)據(jù)提示化合物1在荷瘤小鼠中顯示出劑量非依賴性和時(shí)間非依賴性的藥物代謝動(dòng)力學(xué)。
分別在10和30mg/kg劑量組中觀察到35-60％的腫瘤生長(zhǎng)抑制。用Cmax和AUC值評(píng)估相應(yīng)的化合物1的血漿接觸劑量，其范圍分別為163-742ng/mL和1420-5540ng*hr/mL(圖30)。給藥前，相應(yīng)的血漿濃度在2-135ng/mL之間。
表15.以每日1次口服劑量給SC KM1214a荷瘤小鼠施藥后，化合物1的復(fù)合藥
物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)和血漿濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)
1根據(jù)3個(gè)濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)對(duì)計(jì)算出的AUC
-未測(cè)定
*給藥前濃度
在第22日2個(gè)取樣時(shí)間(施藥后的8和24小時(shí))中的每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，100和200mg/kg的劑量組組織中化合物1的濃度高于血漿中的濃度(表16)。在這兩個(gè)劑量組中，施藥后的8或24小時(shí)時(shí)，腦和心臟的化合物1的濃度較血漿中的濃度高13至34倍；而肝、肺和腎的濃度較血漿中濃度高40至126倍。通常，在8小時(shí)的組織-血漿濃度比與在24小時(shí)的具有可比性。此外，24小時(shí)時(shí)的組織濃度總是相應(yīng)低于8小時(shí)時(shí)的濃度。綜上所述，這些結(jié)果提示組織中化合物1的濃度似乎與血漿中的濃度平行下降。因此，化合物1似乎與血漿成比例地廣泛分布于組織中(包括腦)，但是并不隨著多次口服給藥而在組織中蓄積。
表16.以100或200mg/kg/日的劑量每日1次給KM12L4a荷瘤小鼠施用
化合物1后，第22日時(shí)組織、腫瘤和血漿中的平均濃度
N＝2/時(shí)間點(diǎn)/劑量組，除了在200mg/kg組中24hr時(shí)，N＝1
在100和200mg/kg劑量組中，每組在第22日給藥后的2個(gè)取樣時(shí)間(施藥后8和24小時(shí))中時(shí)，腫瘤化合物1的濃度在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)比血漿中的濃度高37至354倍。然而，在這兩個(gè)劑量組中，施藥后24小時(shí)的腫瘤濃度僅比施藥后8小時(shí)的濃度低17至65％，這就提示該化合物從腫瘤中清除的速率比它從其它正常組織中(如腦、心、肝、肺和腎)清除的速率要慢。因此，相對(duì)于血漿，化合物1似乎更廣泛地分布于腫瘤，但是相對(duì)于在血漿或正常組織，該化合物更優(yōu)先滯留于腫瘤中。
總的來說，化合物1的功效和耐受性是與劑量相關(guān)的，4至7日治療后出現(xiàn)顯著的抑制效果。在300和200mg/kg組中觀察到腫瘤消退；這些劑量是每日耐受的，分別持續(xù)約14和21日。體重降低是與毒性相關(guān)的臨床癥狀。100mg/kg的劑量耐受了37日，無不利的臨床癥狀出現(xiàn)，與對(duì)照相比80％的腫瘤生長(zhǎng)得到抑制。30mg/kg的劑量抑制生長(zhǎng)60％。化合物1在荷瘤小鼠中呈現(xiàn)出不依賴于劑量和時(shí)間的藥代謝動(dòng)力學(xué)。與35-60％的腫瘤生長(zhǎng)抑制有關(guān)的血漿中化合物1的Cmax、AUC和Cmin值的范圍分別在163-742ng/mL、1420-5540ng*hr/mL和2-135ng/mL?；衔?廣泛分布于組織，然而似乎不隨著多次口服給藥而在組織中蓄積?？诜o藥后，相對(duì)于在其它組織，化合物1有在腫瘤中優(yōu)先滯留的傾向。
PC3人前列腺腫瘤模型中的間隔口服劑量
此項(xiàng)單劑研究評(píng)估了，在PC3人前列腺腫瘤模型中，化合物1的間隔口服劑量。
在雄性SCID小鼠(9-10周齡)，腹部皮下接種PC3人前列腺細(xì)胞。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到150mm3時(shí)，開始治療。此日即定為研究第1天。將化合物1制備成水溶液，經(jīng)管飼口服給藥。
本研究包括5個(gè)治療組(n＝10/組)載體(水)口服(p.o.)，1次/日(q.d.)；和100mg/kg化合物1劑量的四個(gè)組1次/日(q.d.)、1次/2日(q.2.d.)、1次/3日(q.3.d.)、1次/4日(q.4.d.)。
如表17中所示，在所有治療組中均觀察到顯著的和近似的腫瘤抑制結(jié)果。對(duì)于每日給藥組，此研究在第11日暫停。對(duì)于其余組，此研究于研究的第25日結(jié)束，然后測(cè)量平均腫瘤體積并與載體組比較。作為毒性的臨床指征，每組的體重降低百分率均被測(cè)定。
表17
4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基-4-氧化哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮
(化合物2)和4-氨基-5-氟-3-(5-哌嗪-1-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮
(化合物3)的合成
為了確定化合物1的已確認(rèn)的代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)，代謝產(chǎn)物被單獨(dú)合成。
化合物2(化合物1的N-氧化物代謝產(chǎn)物)，如以下流程中所示進(jìn)行合成。將化合物1在乙醇、二甲基乙酰胺和過氧化氫的混合物中加熱。反應(yīng)完成時(shí)，過濾分離化合物2，并用乙醇洗滌。如果需要，可將產(chǎn)物通過柱色譜進(jìn)一步純化。
化合物3(化合物1的N-去甲基代謝產(chǎn)物)，如以下流程中所示進(jìn)行合成。用哌嗪處理5-氯-2-硝基苯胺以產(chǎn)生化合物4，隨后用叔丁氧基羰基(Boc)保護(hù)化合物4，產(chǎn)生化合物5。還原硝基，接著與3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯縮合得到化合物6。用六甲基二硅氮烷鉀(potasssium hexamethyl disilazide)作為堿，將化合物6與6-氟氨基苯甲腈縮合，得到化合物7。粗產(chǎn)物7用鹽酸水溶液處理，純化后得到所需的代謝產(chǎn)物，其為黃/棕色固體。
模型評(píng)價(jià)
此項(xiàng)研究評(píng)估了化合物1在添加FGF的基質(zhì)膠模型中的抗血管生成潛力。
在11-12周齡的雌性BDF1小鼠(Charles River，Wilmington，MA)的皮下植入0.5mL添加了2μg FGF-2的基質(zhì)膠(BD生物科學(xué)，Bedford，MA)。通過測(cè)定從動(dòng)物中取出的基質(zhì)膠栓中的血色素水平而定量檢測(cè)添加FGF-2的血管形成情況(血管再生或血管生成)。
實(shí)驗(yàn)藥物的口服給藥開始于植入基質(zhì)膠的前1天，并以每日1次的劑量持續(xù)施藥8次。用10mM H3PO4將化合物1制備為溶液。12個(gè)治療組包括載體(10mM H3PO4)口服(p.o.)，1次/日(q.d.)×8日(2個(gè)對(duì)照組；植入了未添加FGF的基質(zhì)膠(基線血色素水平)或添加FGF的基質(zhì)膠(陽性對(duì)照)的小鼠)；化合物1以3、10、30、100、200、300mg/kg口服(p.o.)，1次/日(q.d.)×8日的劑量給藥。每組有8只小鼠，除了給藥劑量為200和300mg/kg的小鼠組為每組4只。
將施用化合物治療的小鼠的血色素水平與用載體治療的小鼠相比，所得的血色素的百分比抑制率表明此化合物的抗血管生成的功效。結(jié)果以每個(gè)基質(zhì)膠栓的總血色素(mg/dL)表示。ED50定義為有效抑制約50％血管生成的劑量。從小鼠體內(nèi)取出并快速冷凍的基質(zhì)膠栓經(jīng)過均質(zhì)化后，使用Drabkin試劑(Sigma Diagnostic，St.Louis，MO)通過吸收光譜來確定血色素濃度。
為了評(píng)估化合物1的血漿接觸度(plasma exposure)，在8次連續(xù)劑量(第8日)后的第2和24小時(shí)收集血液。在200和300mg/kg劑量組中，僅在2小時(shí)時(shí)間點(diǎn)收集血液?；衔?的血漿濃度采用未經(jīng)驗(yàn)證的LC/MS/MS分析而測(cè)定，其校正范圍1-8000ng/mL，定量下限(LLOQ)為1ng/mL(Charles River Laboratories，Worcester，MA)。
在第8日測(cè)定基質(zhì)膠栓中的血色素水平和化合物1的血漿濃度。整個(gè)研究中，觀察動(dòng)物并測(cè)量體重。
與對(duì)載體處理組動(dòng)物的基質(zhì)膠栓的評(píng)估相比，由于化合物1的施用，各劑量組動(dòng)物體內(nèi)的基質(zhì)膠栓內(nèi)血色素的濃度均被顯著抑制(表18)。計(jì)算所得的ED50為2.6mg/kg。3和10mg/kg劑量分別引起54％和57％的抑制，而30、100、200和300mg/kg劑量組的血色素水平則降低至未添加FGF的基質(zhì)膠的水平，與添加FGF的對(duì)照組比較，抑制率為70-92％。在第8日服藥后2小時(shí)，化合物1的血漿濃度與施用劑量成比例升高，濃度范圍從3mg/kg組的44ng/mL到300mg/kg組的3920ng/mL(表19)。所有劑量都很好地被耐受，未觀察到體重的減輕。
表18.化合物1口服給藥后，在基質(zhì)膠中的血色素濃度和
基質(zhì)膠栓中的血色素濃度劑量依賴型降低的抑制作用
表19.在8次連續(xù)給藥后測(cè)定的化合物1的血漿濃度
a血漿濃度低于定量檢測(cè)的下限(≤1ng/mL)
NS＝未收集樣品
#給藥后2小時(shí)和24小時(shí)收集的樣品
化合物1的血漿濃度(給藥后2小時(shí))隨劑量成比例升高。在基質(zhì)膠栓內(nèi)，觀察到依賴于劑量和血漿濃度的血色素含量的減少。44ng/mL的血漿濃度(給藥后2小時(shí)，第8日)似乎與此模型中的抗血管生成活性有關(guān)。
總的來說，化合物1對(duì)于血色素的抑制是劑量依賴性的，在治療8日后有顯著的抑制。在所有劑量的化合物1的給藥情況下，都觀察到統(tǒng)計(jì)上顯著的血色素的抑制。所有劑量均被良好耐受，未觀察到體重降低或不利的臨床癥狀。44ng/mL的化合物1血漿濃度(給藥后2小時(shí))與此模型中的抗血管生成活性有關(guān)。
猴多種口服劑量實(shí)驗(yàn)
在第1和14個(gè)給藥日的樣品中，測(cè)定來自5mg/kg每日2次(BID)多次口服給藥劑量組的猴血漿中化合物1的代謝情況。一種通過去甲基化而產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物(化合物3)是通過LC/UV和LD/MS/MS而鑒定的。母(P)化合物1產(chǎn)生的m/z＝393.3的M+H+離子，其色譜保留時(shí)間為18.3分鐘。去甲基的代謝產(chǎn)物(P-CH3)經(jīng)鑒定，其m/z＝379.3(M+H+)，色譜保留時(shí)間為18.1分鐘。代謝產(chǎn)物和化合物1間的14道爾頓的質(zhì)量差別與去甲基后的化合物1相一致。代謝產(chǎn)物的質(zhì)量和色譜保留時(shí)間與單獨(dú)合成的化合物3是一致的。在此劑量水平，未檢測(cè)到化合物1的哌嗪N-氧化物(N-氧化物化合物2)相應(yīng)的代謝產(chǎn)物。在356nm的吸收譜測(cè)定中，位于17.7和18.5分鐘的UV信號(hào)處的成分，通過與化合物1的UV譜相比較并且由于它們?cè)诳瞻籽獫{中同樣存在(時(shí)間0，給藥第1天)，而被確定是基質(zhì)成分而非代謝產(chǎn)物。
去甲基代謝產(chǎn)物的評(píng)估水平在表20中給出。代謝產(chǎn)物的評(píng)估水平(以化合物1等價(jià)物形式)，是基于代謝產(chǎn)物與此分析中獲得的化合物1的UV吸收峰高度比，用此吸收率之比乘以先前定量分析研究的相同樣品中已確定的化合物1的水平來外推代謝產(chǎn)物的水平。發(fā)現(xiàn)在所有的合并(pooled)時(shí)間點(diǎn)，母化合物的豐度均高于代謝產(chǎn)物的豐度。發(fā)現(xiàn)在第14日的樣品中化合物1的水平相當(dāng)?shù)?，與之相平行的是N-去甲基代謝產(chǎn)物基本檢測(cè)不到。在給藥的第1或14日，血漿樣品中未檢測(cè)到其它的代謝產(chǎn)物，包括共軛相的II型代謝產(chǎn)物(葡萄糖醛酸化物或硫酸鹽)。
表10.化合物1的多次口服劑量給藥后(5mg/kg，每日2次(BID))，大鼠血漿(N＝2)
中化合物1的水平和所評(píng)估的化合物1代謝產(chǎn)物的水平。
a.以12小時(shí)的時(shí)間間隔(T＝0和T＝12小時(shí))對(duì)大鼠給藥(劑量5/mg/kg化合物1每日2次)。
b.基于此分析中獲得的代謝產(chǎn)物/化合物1的UV吸收峰高度比，用此吸收率之比乘以先前定量分析研究的相同樣品中已確定的化合物1的水平，來得出代謝產(chǎn)物的水平。
c.此表中所列出的化合物1水平是在先前的單獨(dú)研究中已定量水平的平均值。
ND無法檢測(cè)到
藥效終點(diǎn)分析
收集用化合物1治療后的小鼠的血漿和腫瘤進(jìn)行研究，用以評(píng)估潛在的藥效終點(diǎn)。施用化合物1治療以后，分析KM12L4a腫瘤中的靶向調(diào)節(jié)，結(jié)果顯示VEGFR1、VEGFR2、PDGFRβ和FGFR1的磷酸化以時(shí)間依賴性和劑量依賴性方式受到抑制。例如，HMVEC細(xì)胞顯示出VEGF介導(dǎo)的VEGFR2磷酸化的抑制，其IC50約為0.1μM。此外，用化合物1處理的內(nèi)皮細(xì)胞抑制了VEGF的介導(dǎo)的MAPK和Akt磷酸化。
此外，還在KM12L4A細(xì)胞中觀察到了時(shí)間依賴性和劑量依賴性的對(duì)于ERK(MAPK，受體酪氨酸激酶的下游靶標(biāo))活化的抑制，，其IC50范圍在0.1至0.5μM。(KM12L4A細(xì)胞在其表面表達(dá)PDGFRβ和VEGFR1/2)。將KM12L4A細(xì)胞與化合物1在無血清的DMEM中孵育3h。采集后，將裂解液用SDS-PAGE分離并用磷-ERK1/2和ERK1/2抗體檢測(cè)。使用了ECL試劑(Amersham)?；衔?對(duì)受體磷酸化和ERK活性的抑制效果在治療后持續(xù)了24小時(shí)?；衔?以劑量-依賴的方式抑制MV4-11細(xì)胞中ERK1/2的磷酸化，其IC50為0.01至0.1μM。
在HCT116人結(jié)腸腫瘤模型中觀察到了顯著的體內(nèi)活性。在HCT116腫瘤中，化合物1以劑量依賴性和時(shí)間依賴性方式抑制ERK(MAPK)的磷酸化，并且在腫瘤組織學(xué)分析中觀察到了的顯著改變。
這些在臨床前模型中的PK/PD的評(píng)估表明，化合物1表現(xiàn)出對(duì)靶受體和下游信號(hào)分子ERK(MAPK)的時(shí)間依賴性和劑量依賴性的抑制作用。這些研究將有助于鑒別潛在的生物標(biāo)記，以支持臨床試驗(yàn)中化合物1生物活性的監(jiān)測(cè)。
組織分布
將14C-標(biāo)記的化合物1以單一口服(PO)劑量(5mg/kg)施藥給雄性和雌性SpragueDawley(SD)大鼠后，通過全身放射自顯影術(shù)(WBA)檢測(cè)其組織中放射性的分布。用于WBA的血液和尸體在給藥后24小時(shí)內(nèi)的特定時(shí)間點(diǎn)采集。用液體閃爍計(jì)數(shù)(LSC)來分析血漿中的放射性濃度。
14C-化合物1口服給藥后，來自14C-化合物1的放射性在給藥后的1小時(shí)廣泛分布于所有的組織中，在給藥后的4小時(shí)在大多數(shù)組織中達(dá)到Cmax。在雄性和雌性組織中放射性的總體分布是相似的。來自14C-化合物1的放射性從組織中的清除率要比從血漿中的清除率慢得多。在雄性和雌性中，最高的14C-化合物1的組織濃度(除了24小時(shí)通過胃腸道的情況)，在哈氏淚腺、腎上腺、腎髓質(zhì)、眼眶內(nèi)淚腺和眼眶外淚腺中檢測(cè)到的。來自14C-化合物1的放射性在口服劑量給藥后穿過血/腦屏障。
合成了以下各種化合物，并用上述方法對(duì)它們進(jìn)行了測(cè)試
3-{5-[2-(乙基苯胺基)乙氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-4-羥基-2(1H)-喹啉酮；3-[5-(4-氨基苯氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-羥基-2(1H)-喹啉酮；3-{6-[[2-(二甲基氨基)乙基](甲基)氨基]-1H-苯并咪唑-2-基}-4-羥基-2(1H)-喹啉酮；4-羥基-3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；3-[5-(3-氨基-1-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-2-基]4-羥基-2(1H)-喹啉酮；N，N-二甲基-2-(2-氧代-1，2-二氫-3-喹啉基)-1H-苯并咪唑-5-羧酰胺；3-{5-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-2(1H)-喹啉酮；3-{5-[3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-1H-苯并咪唑-2-基}-2(1H)-喹啉酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1，2-二氫-4-喹啉腈；4-氨基-3-{5-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-[6-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-[6-(3-氨基-1-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；2-(4-氨基-2-氧代-1，2-二氫-3-喹啉基)-1H-苯并咪唑-5-腈；2-(4-氨基-2-氧代-1，2-二氫-3-喹啉基)-N，N-二甲基-1H-苯并咪唑-5-羧酰胺；4-氨基-3-{5-[3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-1H-苯并咪唑-2-基}-2(1H)-喹啉酮；2-(4-氨基-2-氧代-1，2-二氫-3-喹啉基)-1H-苯并咪唑-6-羰亞酰胺酸酰胺(carboximidamide)；4-氨基-3-[5-(4-嗎啉基羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-[5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-[5-(二甲基氨基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-[5-(1-哌啶基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-[5-(2-噻吩基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-{5-[3-(1-吡咯烷基)丙氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-{5-[3-(4-嗎啉基)丙氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-[5-(3，5-二甲基-1-哌嗪基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-[5-(2，6-二甲基-4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-[5-(4-甲基-1-哌嗪基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-[羥基(氧化)氨基]-2(1H)-喹啉酮(4-amino-3-(1H-benzimidazol-2-yl)-6-[hydroxy(oxido)amino]-2(1H)-quinolinone)；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-[(1-甲基-3-哌啶基)氧]-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-6-氯-3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-6-氯-3-{5-[3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-1H-苯并咪唑-2-基}-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-6-[羥基(氧化)氨基]-3-{5-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-5-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-3-{5-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-(2-吡啶基甲氧基)-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-6-氟-3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-氨基-3-{5-[3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-1H-苯并咪唑-2-基}-6-氟-2(1H)-喹啉酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(四氫-2-呋喃基甲基)氨基]-2(1H)-喹啉酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-(甲基氨基)-2(1H)-喹啉酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-(乙基氨基)-2(1H)-喹啉酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-{[2-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙基]氨基}-2(1H)-喹啉酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(4-哌啶基甲基)氨基]-2(1H)-喹啉酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-(4-氟苯胺基)-2(1H)-喹啉酮；4-(1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2(1H)-喹啉酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-(1H-苯并咪唑-6-基氨基)-2(1H)-喹啉酮；4-苯胺基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2(1H)-喹啉酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-(甲氧基氨基)-2(1H)-喹啉酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(1H-咪唑-5-基甲基)氨基]-2(1H)-喹啉酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-(4-嗎啉基氨基)-2(1H)-喹啉酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-肼基-2(1H)-喹啉酮；4-(1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2(1H)-喹啉酮；4-(1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2(1H)-喹啉酮；4-[(2-甲氧基乙基)氨基]-3-[6-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-[(2-羥乙基)氨基]-3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-(甲氧基氨基)-3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-(3-哌啶基氨基)-2(1H)-喹啉酮；3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-[(3-哌啶基甲基)氨基]-2(1H)-喹啉酮；4-{[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}-3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-[(四氫-2-呋喃基甲基)氨基]-2(1H)-喹啉酮；4-{[2-(甲基氨基)乙基]氨基}-3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-(3-吡咯烷基氨基)-2(1H)-喹啉酮；4-[(2-氨基-4-甲基戊基)氨基]-3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-[(2-氨基-3-甲基丁基)氨基]-3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；3-(5，6-二甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-(3-哌啶基氨基)-2(1H)-喹啉酮；4-[(2-氨基環(huán)己基)氨基]-3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；4-[(2-氨基環(huán)己基)氨基]-3-[5-(4-嗎啉基)-1H-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-喹啉酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-羥基苯并[g]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(5-嗎啉-4-基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-5-[(2R，6S)-2，6-二甲基嗎啉-4-基]-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(3S)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氯喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氯喹啉-2(1H)-酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(3R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]喹啉-2(1H)-酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氯-4-[(3R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[5-(4-乙基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1-甲基喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(6-哌嗪-1-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[6-(吡啶-4-基甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(6-甲基-5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(1-甲基哌啶-3-基)氧]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(2R，6S)-2，6-二甲基嗎啉-4-基]-6-氟-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(1-甲基吡咯烷-3-基)氧]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[5-(4-甲基-1，4-二氮雜環(huán)庚烷-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(3R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-6-氯-3-{5-[(3R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；{4-[2-(4-氨基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基]哌嗪-1-基}乙酸乙酯；4-氨基-3-{6-[甲基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；3-[6-(4-乙酰哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-氨基喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[6-(1，4’-聯(lián)哌啶-1’-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；2-(4-氨基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-1H-苯并咪唑-6-羧酸；4-氨基-5-(甲氧基)-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{6-[4-(1-甲基乙基)哌嗪-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；{4-[2-(4-氨基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基]哌嗪-1-基}乙酸；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[5-(4-乙基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(5-{(2S，5S)-2-[(二甲基氨基)甲基]-5-甲基嗎啉-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-6-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-6-氯-3-{5-[(3S)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-5，6-二氯-3-{5-[(3S)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-5，6-二氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-[(吡啶-2-基甲基)氧]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-[(2R，6S)-2，6-二甲基嗎啉-4-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-嗎啉-4-基喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-[(1-甲基哌啶-3-基)氧]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-[(吡啶-2-基甲基)氧]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-5-[(吡啶-4-基甲基)氧]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-(甲氧基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(5-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-5-(甲氧基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(2R，6S)-2，6-二甲基嗎啉-4-基]-1H-苯并咪唑-2-基}-5-(甲氧基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-嗎啉-4-基喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-[(2R，6S)-2，6-二甲基嗎啉-4-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-5，6-二氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；3-{5-[(2-嗎啉-4-基乙基)氧]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(3-吡咯烷-1-基丙基)氧]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(3-嗎啉-4-基丙基)氧]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-6-氟-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}-6-氟喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(6-氟-5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(四氫呋喃-2-基甲基)氧]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-6-氟-3-(6-氟-5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[6-氟-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(5-{[2-(甲氧基)乙基]氧}-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[4，6-二氟-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}-5-氟喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-5-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-6-氟-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-5-氯-3-{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-6-氯-3-{5-[3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-6-氟-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-5-[(2R，6S)-2，6-二甲基嗎啉-4-基]-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(6-硫代嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[5-(4-環(huán)己基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{6-[3-(二乙基氨基)吡咯烷-1-基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[6-(4-吡啶-2-基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-6-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基]喹啉-2(1H)-酮；2-(4-氨基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-N-甲基-N-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-苯并咪唑-5-羧酰胺；4-氨基-3-(5-{[4-(1-甲基乙基)哌嗪-1-基]羰基}-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-6-硝基喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[5-(1，4’-聯(lián)哌啶-1’-基羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[5-(1-氧化硫代嗎啉-4-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；3-{5-[(4-乙酰哌嗪-1-基)羰基]-1H-苯并咪唑-2-基}-4-氨基喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(5-{[(3R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]羰基}-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(5-{[(3S)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]羰基}-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(5-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；2-(4-氨基-5-氟-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-1H-苯并咪唑-6-羧酸甲酯；4-氨基-3-[5-(1，3’-二吡咯烷-1’-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[5-(吡啶-3-氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-5，6-二(甲氧基)-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；2-(4-氨基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-N-[2-(二甲基氨基)乙基]-N-甲基-1H-苯并咪唑-5-羧酰胺；2-(4-氨基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-N-甲基-N-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-苯并咪唑-5-羧酰胺；4-氨基-3-{5-[(5-甲基-2，5-二氮雜二環(huán)[2.2.1]庚-2-基)羰基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(4-環(huán)己基哌嗪-1-基)羰基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(2-哌啶-1-基乙基)氨基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-{[2-(4-氨基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基]氨基}哌啶-1-羧酸乙酯；4-氨基-3-[5-({(5R)-5-[(甲氧基)甲基]吡咯烷-3-基}氨基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-{5-[(吡啶-2-基甲基)氨基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-[5-(哌啶-3-基氨基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-5-氟-3-{5-[(吡啶-2-基甲基)氨基]-1H-苯并咪唑-2-基}喹啉-2(1H)-酮；4-{[2-(4-氨基-5-氟-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基]氨基}哌啶-1-羧酸乙酯；4-氨基-5-氟-3-[5-(哌啶-3-基氨基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-溴喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-溴喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(5-溴-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；N，N-二甲基-2-(2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-1H-苯并咪唑-5-羧酰胺；4-氨基-3-(5-噻吩-2-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；2-(4-氨基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)-N，N-二甲基-1H-苯并咪唑-5-磺酰胺；4-氨基-6-碘代-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-氨基-3-(5-{2-[(二甲基氨基)甲基]嗎啉-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-氯-6-碘代喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-硝基喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-甲基喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6，7-二氟喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-氯喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-溴喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1，2-二氫喹啉-6-腈；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6，7-二(甲氧基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6，7-二氯喹啉-2(1H)-酮；1-[4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟-2-氧代-1，2-二氫喹啉-7-基]哌啶-4-羧酰胺；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟-7-[(3-羥基丙基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-(二甲基氨基)-6-氟喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-氟喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-(4-硝基苯基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-{[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}-6-氟喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟-7-(1H-咪唑-1-基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-[4-(甲氧基)苯基]喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟-7-嗎啉-4-基喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-6，7-二氟-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-(3-硝基苯基)喹啉-2(1H)-酮；1-[4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟-2-氧代-1，2-二氫喹啉-7-基]哌啶-3-羧酰胺；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-甲基喹啉-2(1H)-酮；6-(3-乙酰苯基)-4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-氯喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-6-氟-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)-7-嗎啉-4-基喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-(環(huán)丙基氨基)-6-氟喹啉-2(1H)-酮；N-{3-[4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)-2-氧代-1，2-二氫喹啉-6-基]苯基}乙酰胺；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-6-氟-7-(1H-咪唑-1-基)-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟-7-[(2-吡啶-2-基乙基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟-7-哌啶-1-基喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮；1-[4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟-2-氧代-1，2-二氫喹啉-7-基]哌啶-4-羧酸乙酯；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-(1-苯并噻吩-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟-7-吡咯烷-1-基喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)-6-[2-(三氟甲基)苯基]喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)-6-[2-(甲氧基)苯基]喹啉-2(1H)-酮；1-[4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟-2-氧代-1，2-二氫喹啉-7-基]哌啶-3-羧酸乙酯；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-(4-乙基苯基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟-7-[(2-甲基丙基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-甲基喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-6-(2，4-二氯苯基)-3-(3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-[3-(三氟甲基)苯基]喹啉-2(1H)-酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-4-(二甲基氨基)喹啉-2(1H)-酮；4-羥基-3-(1H-咪唑并[4，5-f]喹啉-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-羥基-3-(1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-[4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫喹啉-6-基]苯甲酸；4-[4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫喹啉-6-基]苯甲酰胺；N-{3-[4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫喹啉-6-基]苯基}乙酰胺；3-[4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫喹啉-6-基]苯甲酸；4-[4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-氟-2-氧代-1，2-二氫喹啉-6-基]苯甲酸；N-{3-[4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-氟-2-氧代-1，2-二氫喹啉-6-基]苯基}乙酰胺；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-氯-6-(2-甲基苯基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1，2-二氫喹啉-7-腈；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-(甲氧基)喹啉-2(1H)-酮；4-[4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2-氧代-1，2-二氫喹啉-7-基]苯甲酰胺；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氟-7-(甲氧基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氯-7-(二甲基氨基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-(二甲基氨基)-6-碘代喹啉-2(1H)-酮；3-[4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-(1H-咪唑-1-基)-2-氧代-1，2-二氫喹啉-6-基]苯甲酸；4-[4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-2-氧代-7-哌啶-1-基-1，2-二氫喹啉-6-基]苯甲酸；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-7-(甲氧基)-6-[4-(甲基磺酰)苯基]喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-8-甲基喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6，7-二氟喹啉-2(1H)-酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-甲基-4-(哌啶-3-基氨基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-[2-(甲氧基)苯基]喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-[3-(甲氧基)苯基]喹啉-2(1H)-酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6，7-二氟-4-(哌啶-4-基氨基)喹啉-2(1H)-酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6，7-二氟-4-(吡咯烷-3-基氨基)喹啉-2(1H)-酮；3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氯-4-[(3-嗎啉-4-基丙基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-(哌啶-4-基氨基)喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(哌啶-2-基甲基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-(哌啶-3-基氨基)喹啉-2(1H)-酮；6-氯-4-{[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(3R)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(哌啶-3-基甲基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(哌啶-4-基甲基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；4-{[(1R，2R)-2-氨基環(huán)己基]氨基}-6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-[(4-氨基環(huán)己基)氨基]-6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-{[(2S)-2-氨基-3-甲基丁基]氨基}-6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-({[4-(氨基甲基)苯基]甲基}氨基)-6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(吡咯烷-2-基甲基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；4-{[(1R)-1-(氨基甲基)丙基]氨基}-6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；4-{[(1S)-2-氨基-1-(苯基甲基)乙基]氨基}-6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；6-氯-4-{[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]氨基}-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-{[1-(苯基甲基)哌啶-4-基]氨基}喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(3-嗎啉-4-基丙基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(2-哌啶-1-基乙基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(吡啶-3-基甲基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；6-氯-4-{[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]氨基}-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(吡啶-4-基甲基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；6-氯-4-{[2-(甲基氨基)乙基]氨基}-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；6-氯-4-{[(2-甲基-1-哌啶-4-基-1H-苯并咪唑-5-基)甲基]氨基}-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(2-吡咯烷-1-基乙基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-(吡咯烷-3-基氨基)喹啉-2(1H)-酮；4-{[(1R，2R)-2-氨基環(huán)己基]氨基}-6-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-[(4-氨基環(huán)己基)氨基]-6-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-({[4-(氨基甲基)苯基]甲基}氨基)-6-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；6-氯-4-{[2-(甲基氨基)乙基]氨基}-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-{[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]氨基}喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-{[1-(苯基甲基)哌啶-4-基]氨基}喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-[(2-吡咯烷-1-基乙基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-(吡咯烷-3-基氨基)喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-(哌啶-4-基氨基)喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-[(2-哌啶-2-基乙基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-7-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮；7-氯-3-(5-嗎啉-4-基-1H-苯并咪唑-2-基)-4-(哌啶-3-基氨基)喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-[(哌啶-2-基甲基)氨基]喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-{[(2S)-吡咯烷-2-基甲基]氨基}喹啉-2(1H)-酮；6-氯-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-4-{[(2R)-吡咯烷-2-基甲基]氨基}喹啉-2(1H)-酮；6-氯-4-({[(2S)-1-乙基吡咯烷-2-基]甲基}氨基)-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；6-氯-4-({[(2R)-1-乙基吡咯烷-2-基]甲基}氨基)-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮；4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-[4-(甲氧基)苯基]喹啉-2(1H)-酮；和6-(3-氨基苯基)-4-[(3S)-1-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛-3-基氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶或酪氨酸激酶的方法，所述酪氨酸激酶選自Fyn、Lck、c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FLT-3或Tie-2；治療由絲氨酸/蘇氨酸激酶或酪氨酸激酶介導(dǎo)的生物病癥的方法，所述酪氨酸激酶選自Fyn、Lck、c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FLT-3或Tie-2；以及在制造用于抑制或治療由絲氨酸/蘇氨酸激酶或酪氨酸激酶介導(dǎo)的生物病癥的藥物中的應(yīng)用，所述酪氨酸激酶選自Fyn、Lck、c-Kit、c-ABL、p60src、FGFR3、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FLT-3或Tie-2。在這些實(shí)施方案中，所述化合物選自以下物質(zhì)之一上面列出的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽、該化合物的對(duì)映體或非對(duì)映體、該互變體的對(duì)映體或非對(duì)映體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的對(duì)映體或非對(duì)映體、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽的對(duì)映體或非對(duì)映體，或化合物、對(duì)映體、互變體或鹽的混合物。在一些此類實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，或其混合物。本發(fā)明還提供了用這些化合物抑制本文所述的任何絲氨酸/蘇氨酸激酶的方法和用這些化合物治療由任何絲氨酸/蘇氨酸激酶介導(dǎo)的生物病癥的方法。
應(yīng)理解，本發(fā)明不限于這里列出的用于說明的實(shí)施方案，而是包括以下權(quán)利要求范圍內(nèi)其所有的形式。
權(quán)利要求
1.一種在對(duì)象中抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3或在對(duì)象內(nèi)治療由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的生物癥狀的方法，所述方法包括給予該對(duì)象結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物，其中，結(jié)構(gòu)I具有以下結(jié)構(gòu)式，且在給予結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物之后對(duì)象體內(nèi)的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3被抑制
其中，
A、B、C和D獨(dú)立選自碳或氮；
R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S-雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R2和R3獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-O-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-S(＝O)2-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、取代和未取代的-S(＝O)-烷基、取代和未取代的-S(＝O)-雜環(huán)基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的芳氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(芳基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-N(芳基)2、取代和未取代的-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-N(芳烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-芳基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-芳基、取代和未取代的-C(＝O)-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(芳烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(芳烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基，C(＝O)-O-芳基、-C(＝O)-O-芳烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；
R4選自-H和取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基；
R5和R8獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基；或如果A是氮?jiǎng)tR5可以不存在；或者如果D是氮?jiǎng)tR8可以不存在；
R6和R7獨(dú)立選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-SH、取代和未取代的-S-烷基、取代和未取代的-S-雜環(huán)基、-S(＝O)2-NH2、取代和未取代的-S(＝O)2-N(H)(烷基)、取代和未取代的-S(＝O)2-N(烷基)2、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、取代和未取代的雜環(huán)基烷氧基、-NH2、取代和未取代的-N(H)(烷基)、取代和未取代的-N(烷基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-N(雜環(huán)烷基)2、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(烷基)-C(＝O)-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-烷基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)基、取代和未取代的-N(H)-S(＝O)2-雜環(huán)烷基、取代和未取代的-C(＝O)-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)基、取代和未取代的-C(＝O)-雜環(huán)烷基、-C(＝O)-NH2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、取代和未取代的-C(＝O)-N(H)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)烷基)、取代和未取代的-C(＝O)-N(雜環(huán)烷基)2、-CO2H、取代和未取代的-C(＝O)-O-烷基、取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)基、或取代和未取代的-C(＝O)-O-雜環(huán)烷基；如果B是氮?jiǎng)tR6不存在；或如果C是氮?jiǎng)tR7不存在；
R9選自-H、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳原子的烷基、取代和未取代的含有1-12個(gè)碳的烯基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基、取代和未取代的雜環(huán)基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、-OH、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的雜環(huán)氧基、-NH2、或取代和未取代的雜環(huán)基氨基烷基；和
R10是-H。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，A、B、C和D都是碳。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，R9是H。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，R1選自-H、-F、-Cl、-Br、-I、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的環(huán)烷基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的雜環(huán)氧基或取代或未取代的雜環(huán)基烷氧基。
5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，R1是F。
6.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，R2選自-H、-Cl、-F、-Br、-I、-NO2、-CN、取代或未取代的含有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的噻吩基、取代或未取代的1、2、3、6-四氫吡啶基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的直鏈或支鏈烷氧基、取代或未取代的吡啶基烷氧基、取代或未取代的二烷基氨基或-CO2H。
7.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，R2是H。
8.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，R3選自-H、-F、-Cl、-Br、甲氧基，或二甲基氨基。
9.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，R3是H。
10.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，R4是H。
11.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，R5是H，R8是H。
12.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，R6或R7中至少一個(gè)是取代或未取代的雜環(huán)基。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，R6或R7之一是取代或未取代的雜環(huán)基，且所述雜環(huán)基選自嗎啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷、硫代嗎啉、高哌嗪、四氫噻吩、四氫呋喃或四氫吡喃。
14.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，R6或R7之一選自取代或未取代的嗎啉基或取代或未取代的哌嗪基。
15.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，R6或R7之一是N-烷基取代的哌嗪。
16.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，R6或R7之一是N-甲基哌嗪。
17.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，R6或R7之一是N-烷基取代的哌嗪，而R6或R7中的另一個(gè)是H，且R5和R8都是H。
18.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物癥狀是多發(fā)性骨髓瘤，且所述對(duì)象是具有t(4；14)染色體易位的多發(fā)性骨髓瘤患者。
19.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物癥狀是多發(fā)性骨髓瘤，所述對(duì)象是多發(fā)性骨髓瘤患者，且所述多發(fā)性骨髓瘤表達(dá)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3。
20.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述對(duì)象是具有多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的多發(fā)性骨髓瘤患者，且在給予該對(duì)象結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物后在所述多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡。
21.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述對(duì)象是多發(fā)性骨髓瘤患者，且在給予該對(duì)象結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物后所述對(duì)象中的溶骨性骨流失被降低。
22.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述結(jié)構(gòu)I的化合物或其互變體的乳酸鹽被給予所述對(duì)象。
23.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述結(jié)構(gòu)I的化合物具有以下結(jié)構(gòu)式
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其特征在于，所述生物癥狀是多發(fā)性骨髓瘤，且所述對(duì)象是具有t(4；14)染色體易位的多發(fā)性骨髓瘤患者。
25.如權(quán)利要求23所述的方法，其特征在于，所述生物癥狀是多發(fā)性骨髓瘤，所述對(duì)象是多發(fā)性骨髓瘤患者，且所述多發(fā)性骨髓瘤表達(dá)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3。
26.如權(quán)利要求23所述的方法，其特征在于，所述對(duì)象是具有多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的多發(fā)性骨髓瘤患者，且在給予該對(duì)象結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物后在所述多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡。
27.如權(quán)利要求23所述的方法，其特征在于，所述對(duì)象是多發(fā)性骨髓瘤患者，且在給予該對(duì)象結(jié)構(gòu)I的化合物、該化合物的互變體、該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物后所述對(duì)象中的溶骨性骨流失被降低。
28.如權(quán)利要求24所述的方法，其特征在于，所述結(jié)構(gòu)I的化合物或其互變體的乳酸鹽被給予所述對(duì)象。
全文摘要
本發(fā)明提供了抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3和治療由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的各種癥狀的方法，該方法包括給予對(duì)象結(jié)構(gòu)I的化合物，其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體或藥學(xué)上可接受的互變體的鹽。結(jié)構(gòu)I的化合物具有以下結(jié)構(gòu)，其中含有文中所述的變量。這種化合物可用來制備用于抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3和用于治療如多發(fā)性骨髓瘤等由成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3介導(dǎo)的癥狀的藥物。
文檔編號(hào)A61K31/496GK1976706SQ200480032700
公開日2007年6月6日 申請(qǐng)日期2004年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月7日
發(fā)明者S·卡伊, J·周, E·哈伍德, C·C·海斯, T·D·馬查朱斯基, D·里克曼, X·尚, M·維斯曼, S·朱 申請(qǐng)人:希龍公司