專利名稱：核糖口服液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種核糖口服液，尤其是一種D-核糖口服液。
核糖是生物工程高科技產(chǎn)品。核糖是心肌細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)源，同時(shí)又是ATP合成的前體物質(zhì)。核糖對(duì)異丙基腎上腺素導(dǎo)致的必肌細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。核糖主要從分子水平調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理代謝功能，激活細(xì)胞內(nèi)代謝酶活性，修復(fù)損傷的細(xì)胞。核糖在體內(nèi)經(jīng)磷酸戊糖代謝途徑為體內(nèi)合成芳香族氨基酸、核苷酸提供前體物質(zhì)。
核糖和ATP有著特殊的關(guān)系，它是ATP的組成糖，是其中的核心物質(zhì)，在細(xì)胞中核酸類物質(zhì)包括ATP的體內(nèi)合成者是以D-核糖為底物經(jīng)若干步反應(yīng)后完成的。
外源ATP難以直接進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，會(huì)在胞外降解，而核糖卻可以很容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，這樣核糖就可以替代外源ATP來使用；因而就找到了一種方法可以通過腸胃吸收或非腸胃吸收的方式，提高體內(nèi)的核糖水平，誘導(dǎo)體內(nèi)內(nèi)源ATP的合成，提高細(xì)胞體內(nèi)的ATP水平，從而提高能量，這樣就實(shí)現(xiàn)的抗疲勞的保健功能。
D-核糖是五碳糖，以化合物的形式存在于一切細(xì)胞中。核糖是生命遺傳物質(zhì)脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的核心部分，也是各種核苷酸如三磷酸腺苷(ATP)的組成糖，還是各種核苷酸輔酶的組成糖。D-核糖在生物體內(nèi)的代謝、生理活性作用主要有以下幾方面(1)核糖是核苷酸合成的底物生物體在合成核苷酸的時(shí)候，是以核糖作為合成核酸的中心起始物質(zhì)。生物體在合成核酸時(shí)，首先從5’-磷酸核糖開始，然后生成5’-磷酸核糖焦磷酸(PRPP)，再經(jīng)過一系列酶促反應(yīng)，將碳、氮原子逐一加到環(huán)上，先生成次黃嘌呤核苷酸，然后再由次黃嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌堰屎塑账徇M(jìn)行核酸代謝。因此核糖是核苷酸合成的物質(zhì)基礎(chǔ)。
(2)提供生物體內(nèi)各種生化反應(yīng)的起始材料核糖進(jìn)入的氧化戊糖磷酸循環(huán)又稱為己糖——磷酸支路途徑。這一條途徑為一個(gè)多樣性的有機(jī)體在形成芳香族氨基酸與酚類物質(zhì)時(shí)，提供了部分碳架；同時(shí)提供生物合成還原作用所必須的還原勢(shì)源泉——還原型輔酶II(NADPH2)。還原性輔酶II是許多生化反應(yīng)所必不可少的。在戊糖磷酸循環(huán)途徑中，它的產(chǎn)物是許多重要物質(zhì)合成的必要產(chǎn)物，如核糖-5-磷酸是核苷酸的底物；赤蘚糖-4-磷酸是合成L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸等芳香族氨基酸的底物以及包括木質(zhì)素在內(nèi)的酚類物質(zhì)的前體物質(zhì)。
(3)戊糖磷酸循環(huán)代謝在糖代謝過程中，核糖利用無機(jī)磷形成核糖-1-磷酸，轉(zhuǎn)變成核糖-5-磷酸后，進(jìn)入戊糖磷酸循環(huán)轉(zhuǎn)變成3-磷酸-甘油醛和果糖-6-磷酸。3-磷酸-甘油醛在轉(zhuǎn)變成丙酮酸時(shí)產(chǎn)生三磷酸腺苷(ATP)，而果糖-6-磷酸變?yōu)槠咸烟?6-磷酸進(jìn)入酵解系統(tǒng)形成丙酮酸，請(qǐng)參見圖3。
D-核糖在戊糖磷酸循環(huán)途徑中，由一部分核糖-5-磷酸轉(zhuǎn)變成葡萄糖-6-磷酸時(shí)不需要消耗ATP。在酵解系統(tǒng)中，由葡萄糖形成葡萄糖-6-磷酸第一步反應(yīng)就需要ATP參與葡萄糖磷酸化。
(4)核糖與ATP的作用D-核糖參與戊糖磷酸循環(huán)途徑，經(jīng)戊糖磷酸支路，每一個(gè)分子的NADPH2經(jīng)呼吸鏈磷酸化可以合成3個(gè)分子的ATP，一個(gè)核糖分子可提供能量合成35個(gè)ATP分子。
人體內(nèi)ATP的作用是十分重要的，沒有內(nèi)源ATP的幫助，人的生命就不能繼續(xù)，這是由于沒有能量存在，所有的有機(jī)過程就不能發(fā)生。在氧化磷酸化途徑中，由于ATP的三磷酸鍵連在細(xì)胞膜上，外源ATP不能透過細(xì)胞壁，血液循環(huán)中的外源ATP難以直接進(jìn)入局部缺血組織細(xì)胞。而核糖在細(xì)胞內(nèi)可以合成ATP。人體能量?jī)?chǔ)存和利用均以ATP為中心。每個(gè)ATP含有2個(gè)高能磷酸鍵，水解為二磷酸腺苷(ADP)時(shí)可釋放8000卡熱量，能增加血流量，促進(jìn)組織代謝及蛋白質(zhì)合成。ATP對(duì)心臟的作用不僅是提供能量，它對(duì)心臟具有發(fā)動(dòng)機(jī)引火的作用。通過生成環(huán)腺苷酸(cAMP)而激活磷酸化酶的活性，增加糖的氧化，從而生成更多的ATP。缺血組織恢復(fù)與能量代謝即ATP儲(chǔ)備、合成和消耗密切相關(guān)。ATP減少，需能活動(dòng)受損，Na+進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞腫脹，細(xì)胞器(線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等)也發(fā)生腫脹；而ATP的缺乏又使離子轉(zhuǎn)運(yùn)發(fā)生障礙，從而加重了機(jī)體代謝的障礙，使缺血組織難于恢復(fù)，甚至由于溶酶體膜的通透性增加，溶酶釋放，導(dǎo)致細(xì)胞破壞、死亡。由于養(yǎng)分和氧的供應(yīng)障礙，有氧代謝停止，線粒體產(chǎn)能障礙，線粒體只能通過氧代謝產(chǎn)生能量，必然導(dǎo)致ATP儲(chǔ)備下降。
(5)核糖作用機(jī)理核糖是心肌細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)源，同時(shí)又是合成ATP的前體物質(zhì)，對(duì)異丙基腎上腺素導(dǎo)致的心肌細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。核糖主要從分子水平調(diào)節(jié)細(xì)胞生理代謝功能；激活細(xì)胞內(nèi)代謝酶活性，修復(fù)損傷的細(xì)胞。
心肌保護(hù)與ATP密切相關(guān)，心肌ATP含量是衡量細(xì)胞完整性以及恢復(fù)可能性的最好指標(biāo)。供心功能恢復(fù)與心肌ATP含量有關(guān)，供心功能恢復(fù)與供心能量代謝密切相關(guān)。當(dāng)ATP含量下降到缺血前的50％時(shí)，心肌將產(chǎn)生不可逆的病理變化，既使灌后收縮功能也難于恢復(fù)。
心肌缺氧后，若增加心臟組織中核糖含量，可以使得心肌合成腺苷酸的水平上升90％，同時(shí)還可以使5’-磷酸核糖焦磷酸(PRPP)在心肌組織中的積累量增加，保護(hù)心肌細(xì)胞，減少損傷。心肌缺血后，靜脈滴注核糖溶液后，可以使ATP再生能力提高8倍。
在局部缺氧的情況下，氧化磷酸化所儲(chǔ)存的ATP減少，而ATP是必須要提供肌肉收縮的能量，在這時(shí)候，肌細(xì)胞就利用無氧磷酸化來提供所需要的ATP。無氧磷酸化發(fā)生在胞質(zhì)和線粒體中，高能磷酸鍵以磷酸肌酸(CP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)的形式表現(xiàn)。
最主要的無氧磷酸化反應(yīng)；當(dāng)興奮持續(xù)時(shí)，ATP減少要通過CP供能來恢復(fù)ATP。當(dāng)CP減少時(shí)，就要使用其它儲(chǔ)存的能量。這時(shí)候，丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸，提供了額外的能量，而在核糖代謝時(shí)就同時(shí)產(chǎn)生了ATP和丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步產(chǎn)生ATP，這樣就提供了大量能量。從而降低疲勞程序。
第二個(gè)恢復(fù)ATP的反應(yīng)發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明依據(jù)上述相關(guān)理論，結(jié)合自身特點(diǎn)，選擇了前述配伍提供一種D-核糖口服液，經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)表明具有抗疲勞的作用，且無毒副作用。
本發(fā)明D-核糖口服液的功效成分、含量及功效成分的檢驗(yàn)方法如下(1)功效成分本產(chǎn)品的主要功效成分是D-核糖。
英文名稱D-Ribose化學(xué)名稱D-呋喃核糖。
分子式C5H10O5分子量150.13。
結(jié)構(gòu)式為 本產(chǎn)品功效成份D-核糖其理化性能為白色結(jié)晶粉末狀，微有芳香之味，極易吸潮，能溶于水和甲醇，在水中有過飽和傾向，常以糖漿形式存在。微溶于乙醇，不溶于醚、苯、丙酮及氯仿。熔點(diǎn)86-87℃，比旋度-19.5°--25.0°(24℃水中).
(2)含量(重量百分?jǐn)?shù))35-40％(3)功效成分的檢驗(yàn)方法參見產(chǎn)品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)Q/320201UCA02-2000。
圖2是D-核糖口服液生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)圖。
圖3是戊糖磷酸循環(huán)代謝示意圖。
下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
參見

圖1，D-核糖生產(chǎn)工藝以莽草酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株枯草桿菌(Bacillus subtilis JSIM-1018)，經(jīng)斜面活化、茄子瓶培養(yǎng)后接種于以葡萄糖、玉米漿、無機(jī)鹽組成的種子培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，種子液轉(zhuǎn)接于由淀粉水解糖、酵母粉、硫酸銨組成的發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)。
發(fā)酵液經(jīng)板框過濾、膜過濾去菌體、去蛋白等雜質(zhì)，過濾液經(jīng)離交法脫鹽、脫色后得到離交液，離交液經(jīng)濃縮、冷凍結(jié)晶、干燥、粉碎精制而成為D-核糖。
參見圖2，核糖口服液生產(chǎn)工藝本發(fā)明產(chǎn)品根據(jù)中國(guó)專利95112736.5號(hào)的發(fā)酵工程生產(chǎn)的D-核糖為主要生產(chǎn)原料。
取D-核糖200-500kg，溶解于600升蒸餾水中，用蒸餾水定容到1000升。核糖溶液經(jīng)膜過濾后分裝成10000小瓶，每瓶100ml。按巴斯德滅菌法消毒，經(jīng)檢驗(yàn)、包裝、抽檢后制備成為核糖口服液成品。
(一)D-核糖生產(chǎn)工藝操作過程(1)生產(chǎn)菌株枯草桿菌(Bacillus subtilis JSIM-1018)。莽草酸營(yíng)養(yǎng)素缺陷型，缺失轉(zhuǎn)酮醇酶。江蘇省微生物研究所選育并保存。
(2)菌株培養(yǎng)及培養(yǎng)條件保藏菌種接種于由葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、NaCl、瓊脂組成的培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)48小時(shí)。菌株經(jīng)活化后，轉(zhuǎn)接于茄子瓶斜面，茄子瓶斜面在30℃培養(yǎng)48小時(shí)后，用無菌水洗下，置于接種瓶?jī)?nèi)，備用。
(3)種子培養(yǎng)①種子罐種子罐為不銹鋼制標(biāo)準(zhǔn)罐，夾套冷卻，六彎葉型攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)/分，種子罐裝液量為70％。
②配料在種子罐內(nèi)加入適量自來水，在攪拌狀態(tài)下，將已稱量好的種子原料葡萄糖、磷酸二氫鉀、玉米漿、酵母膏投入種子罐內(nèi)。夾套加熱溶解，用液堿調(diào)節(jié)培養(yǎng)基PH到7.0-7.2左右后，投入適量消泡劑，用水定容后，滅菌。
③接種與培養(yǎng)接種量及接種。按100升種子液1-2只茄子瓶斜面計(jì)算茄子瓶用量。在生長(zhǎng)豐滿的茄子瓶中加入無菌水洗下菌落，合并到接種瓶?jī)?nèi)。用壓差法接入種子罐內(nèi)。
培養(yǎng)條件。接種完畢進(jìn)行通風(fēng)攪拌培養(yǎng)。罐壓0.05-0.1Mpa，培養(yǎng)溫度36±1℃，通風(fēng)量1∶0.3，攪拌轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分。培養(yǎng)時(shí)間18-22小時(shí)。
(4)發(fā)酵培養(yǎng)①發(fā)酵罐發(fā)酵罐為不銹鋼制標(biāo)準(zhǔn)發(fā)酵罐，列管冷卻，六彎葉二組攪拌漿，轉(zhuǎn)速140轉(zhuǎn)/分-200轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵罐裝液量為70％。
②配料發(fā)酵罐內(nèi)的料液主要是糖液、碳酸鈣、米玉漿、酵母粉、硫酸銨，用自來水配制，料液PH7.0-7.2，加入消泡劑，滅菌。
③移種與培養(yǎng)管道消毒；移種前一小時(shí)進(jìn)行移種管道消毒。管道消毒條件表壓0.2Mpa，溫度130℃；消毒時(shí)間30-40分鐘。
移種；待發(fā)酵罐內(nèi)溫度降至38±1℃，開始移種。移種時(shí)用壓差法將種子罐內(nèi)已培養(yǎng)好的種子液接入發(fā)酵罐內(nèi)。
發(fā)酵培養(yǎng)條件移種完畢進(jìn)行通風(fēng)攪拌培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為罐壓0.05Mpa-0.1Mpa；培養(yǎng)溫度38±1℃；攪拌轉(zhuǎn)速140-200轉(zhuǎn)/分；發(fā)酵周期68-76小時(shí)；風(fēng)量1∶0.35-0.6。
④提取、精制發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液經(jīng)板框過濾、膜過濾除去菌體、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)后，得到發(fā)酵清液。發(fā)酵清液經(jīng)陰、陽離交柱處理后，濃縮至糖漿狀，經(jīng)乙醇沉淀結(jié)晶后，60℃減壓濃縮、結(jié)晶、烘干，粉碎過篩后，得到D-核糖。
詳細(xì)制備D-核糖的方法參見中國(guó)專利95112736.5號(hào)內(nèi)容，該專利為本發(fā)明的參考文獻(xiàn)。
以下結(jié)合附圖2對(duì)D-核糖口服液生產(chǎn)工藝進(jìn)行詳細(xì)說明。
核糖口服液生產(chǎn)工藝操作過程(1)配料罐空消配料罐主要用于核糖口服液的配料。配料罐空消條件為表壓0.1-0.2Mpa，溫度121℃-130℃，空消時(shí)間30-40分鐘。
(2)罐裝瓶空消罐裝瓶空消條件為；表壓0.1-0.2Mpa，溫度121℃-130℃，空消時(shí)間30-40分鐘。
(3)蒸餾水制備蒸餾水制備按照《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版二部中蒸餾水的要求進(jìn)行制備。
(4)配料在配料罐內(nèi)加入適量蒸餾水，在攪拌狀態(tài)下，將已稱量好的D-核糖350-400kg，溶解于600升蒸餾水中，夾套加熱40-50℃溶解，用蒸餾水定容到1000升。
(5)膜過濾將已配置好的35-40％的核糖溶液通過0.2μ～0.45μ膜過濾設(shè)備進(jìn)行除菌過濾后，得到過濾液。
(6)分裝將已過濾的核糖溶液分裝成10000小瓶，每瓶100ml，壓蓋、封口。
(7)消毒按巴斯德滅菌法進(jìn)行消毒。
(8)成品經(jīng)檢驗(yàn)、包裝、抽檢合格后制成核糖口服液成品。
本發(fā)明中關(guān)鍵工序工藝控制點(diǎn)(1)種子培養(yǎng)液種子接種后12小時(shí)取樣分析。12小時(shí)后，每隔3小時(shí)取樣分析種子生長(zhǎng)過程中種子液PH、種子生長(zhǎng)光密度(O.D值)、殘?zhí)恰@微鏡檢查，跟蹤菌種生長(zhǎng)情況。
種子培養(yǎng)液質(zhì)量控制指標(biāo)及移種條件O.D凈長(zhǎng)0.2以上。
顯微鏡鏡檢革蘭氏染色陽性，菌種形態(tài)呈彎曲型、數(shù)字型、鎖狀型，無雜菌。
(2)發(fā)酵培養(yǎng)接種量；10％。發(fā)酵18-24小時(shí)后，每隔6小時(shí)取樣測(cè)定PH、菌種生長(zhǎng)光密度(O.D值)、殘?zhí)?、核糖產(chǎn)物、顯微鏡檢查，跟蹤發(fā)酵生長(zhǎng)情況。
(3)發(fā)酵放罐條件控制當(dāng)發(fā)酵接經(jīng)終點(diǎn)時(shí)，發(fā)酵液O.D值不變，PH值回升，葡萄糖耗盡，D-核糖濃度不再增加時(shí)，即可放罐。
(4)D-核糖質(zhì)量控制

(5)核糖口服液質(zhì)量控制

本發(fā)明中對(duì)工藝衛(wèi)生、環(huán)境衛(wèi)生的要求(1)空氣。發(fā)酵生產(chǎn)過程中種子罐、發(fā)酵罐內(nèi)所用的空氣，是經(jīng)過空氣凈化系統(tǒng)處理過的無菌空氣。
(2)種子室生產(chǎn)環(huán)境。種子室為無菌室，微生物菌種培養(yǎng)的操作在無菌室的無菌條件下進(jìn)行。
(3)操作材料.試管斜面、茄子瓶斜面制備時(shí)所需棉塞、試管、茄子瓶、三角瓶、接種瓶，口服液灌裝瓶，使用前必須在0.1Mpa 121℃滅菌30-40分鐘后方可使用。
(4)空氣分過濾器消毒。空氣分過濾器在發(fā)酵罐空消時(shí)同時(shí)進(jìn)行消毒。消毒完畢后用無菌風(fēng)吹干，備用。
(5)空消。配料前，種子罐、發(fā)酵罐空消。空消條件表壓0.1-0.2Mpa；溫度121℃-130℃；空消時(shí)間30-40分鐘。
(6)種子罐實(shí)消。滅菌條件表壓0.1Mpa，溫度121℃，時(shí)間10-20分鐘。滅菌結(jié)束后降溫冷卻，備用。
(7)發(fā)酵罐消毒.采取實(shí)罐消毒。滅菌條件表壓0.1Mpa。溫度118℃-120℃，時(shí)間10-20分鐘。滅菌溫度升到118℃時(shí)，開始計(jì)時(shí)。
(8)口服液配料罐空消。配料前，口服液配料罐必須空消。空消條件表壓0.1-0.2Mpa；溫度121℃-130℃；空消時(shí)間30-40分鐘。
(9)口服液生產(chǎn)環(huán)境?？诜荷a(chǎn)環(huán)境為潔凈區(qū)，空氣潔凈度為30萬級(jí)。
(10)工廠環(huán)境。工廠四周綠化，建立污水處理系統(tǒng)，注意環(huán)境保護(hù)，工廠生產(chǎn)環(huán)境為花園式工廠。
本發(fā)明的D-核糖口服液經(jīng)國(guó)家體育總局運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)研究所興奮劑檢測(cè)中心進(jìn)行興奮劑檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)國(guó)際奧委會(huì)2000年規(guī)定禁用的刺激劑、麻醉劑、B-阻斷劑、利尿劑和甾體激素類藥物。
本發(fā)明的核糖口服液，經(jīng)江蘇省疾病預(yù)防控制中心依據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法》評(píng)價(jià)，得出如下結(jié)論1.小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)雌雄小鼠經(jīng)口LD50值均大于21.50g/kg b.wt.，該樣品屬無毒級(jí)。
2.Ames試驗(yàn)平板摻入法，劑量達(dá)5000μg/皿，加及不加S9，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試菌TA97a、TA98、TA100和TA102均未檢出明顯的誘變活性。
3.小鼠骨髓嗜多染細(xì)細(xì)胞微核試驗(yàn)劑量達(dá)5.00g/kg b.wt/d，未檢出對(duì)雌雄小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞的致微核作用。
4小鼠睪丸初級(jí)精母細(xì)胞染色體畸變分析劑量達(dá)5.00g/kg b.wt。未檢出對(duì)雌雄小鼠睪丸初級(jí)精母細(xì)胞染色體的誘變活性。
5.30天喂養(yǎng)試驗(yàn)劑量達(dá)10.00g/kg b.wt/d.(雌雄大鼠實(shí)際攝入量分別為相當(dāng)于推薦劑量的193倍和169倍)，該樣品對(duì)大鼠各項(xiàng)受試指標(biāo)均未見明顯有害作用。
本發(fā)明的核糖口服液經(jīng)江蘇省疾病預(yù)防控制中心依據(jù)衛(wèi)生部(1996)《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》進(jìn)行評(píng)價(jià)，得出如下結(jié)論昆明種小鼠連續(xù)30天經(jīng)口灌胃給予本發(fā)明的核糖口服液，劑量分別為1.25、2.50(相當(dāng)于成人每日每千克體重推薦攝影入量的10倍)、5.00g/kgb.wt，另設(shè)陰性對(duì)照組(水)，灌胃量均為20ml/kg b.w.。結(jié)果如下1.本發(fā)明的核糖口服液各劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間均比陰性對(duì)照組延長(zhǎng)，其中低劑量組與陰性對(duì)照組相比具極顯著性差異(p<0.01>，高劑量組與陰性對(duì)照組相比具顯著性差異(p<0.01>，負(fù)重游泳試驗(yàn)陽性.
2.本發(fā)明的核糖口服液各劑量組小鼠肝糖原含量與陰性對(duì)照組相比均升高，其中低\中劑量組與陰性對(duì)照組相比具顯著性差異(p<0.05>，高劑量組與陰性對(duì)照組相比具極顯著性差異(p<0.01>。
3.本發(fā)明的核糖口服液各劑量組小鼠運(yùn)動(dòng)后血清BUN含量均低于陰性對(duì)照組，其中中劑量組與陰性對(duì)照組相比具顯著性差異(p<0.05>，低\高劑量組與陰性對(duì)照組相比具極顯著性差異(p<0.01>。
4.本發(fā)明的核糖口服液各劑量組小鼠運(yùn)動(dòng)后血乳酸升高幅度與陰性對(duì)照組相比無顯著性差異(p＞0.05>，休息45min后低、中劑量組血乳酸降低幅茺大于陰性對(duì)照組，其中低劑量組血乳酸降低幅度與陰性對(duì)照組相比具顯著性差異(p<0.05>。
根據(jù)保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明的核糖口服液具有抗疲勞作用。制備例1D-核糖的制備1.培養(yǎng)基配制(1).斜面培養(yǎng)基配制(％)取葡萄糖0.5，蛋白胨1.0，酵母膏0.4，氯化鈉0.1，瓊脂2.0，PH7.2。
(2)種子培養(yǎng)基(％)玉米淀粉酶解糖2.0，玉米漿1.0，磷酸氫二鉀0.5，磷酸二氫鉀0.2，硫酸鎂0.1，硫酸錳0.005，PH7.2。
(3)發(fā)酵培養(yǎng)基(％)玉米淀粉酶解糖18，玉米漿0.6，硫酸銨1.0，酵母粉0.2，硫酸鎂0.1，硫酸錳0.01，碳酸鈣2.0，PH7.5。
(4)發(fā)酵將保藏的Bacillus subtitis JSIM-1018菌株保藏號(hào)為CGMCC NO 0328接種至5只茄子瓶斜面上，30℃培養(yǎng)48小時(shí)，用無菌生理鹽水，將斜面上菌苔洗下，在無菌條件下合并入血清瓶中，用壓差法接入種子罐中。種子罐容積300升，裝液量200升，轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)/分，風(fēng)量1∶0.5，在溫度為35℃±1℃下，培養(yǎng)22小時(shí)，接入盛有發(fā)酵培養(yǎng)基2000升的發(fā)酵罐中，轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)/分，風(fēng)量1∶0.8，接種量10％，在溫度為38±1℃發(fā)酵70小時(shí)，發(fā)酵液中D-核糖含量81.75克/升。
將發(fā)酵液調(diào)PH8.0，加脫乙酰甲殼素300PPM，發(fā)酵液經(jīng)沉淀后將上清液與沉淀分開，沉淀部分用壓濾法除去沉淀，合并上清液。上清液經(jīng)陽柱、陰柱脫鹽，活性炭脫色，50℃減壓濃縮到35％的D-核糖漿，實(shí)際得純D-核糖124.5千克。實(shí)施例1D-核糖口服液的制備產(chǎn)品配方為(1)D-核糖，35-40千克。
(2)蒸餾水，60升，溶解后用蒸餾水定容到100升。
D-核糖相對(duì)含量的重量百分?jǐn)?shù)為35-40％。
制備的蒸餾水應(yīng)符合《中華人民共和國(guó)藥典》2000版二部中蒸餾水的要求.本品為口服液，內(nèi)容物為無色至淺黃色。核糖口服液的主要功效成分是D-核糖。根據(jù)功能性試驗(yàn)的結(jié)果，D-核糖單組分就具有所申報(bào)的功能，而D-核糖易吸潮，在水中溶解度極大，可以和水以任意比混溶。50％以上核糖溶液粘稠、流動(dòng)性差。為了便于貯藏和人體吸收，采用35-40％的D-核糖溶液形式進(jìn)行配比。如無特殊說明，本發(fā)明中所用的百分?jǐn)?shù)均為重量百分?jǐn)?shù)。
本發(fā)明的核糖口服液是生物工程高科技產(chǎn)品，經(jīng)功能實(shí)驗(yàn)證明，本品具有延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游時(shí)間和爬桿時(shí)間，降低小鼠運(yùn)動(dòng)時(shí)血清尿素并減少糖元消耗，具有明顯的抗疲勞作用。本品經(jīng)檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)國(guó)際奧委會(huì)2000年規(guī)定的禁用藥物，不含任何激素、無毒副作用。
核糖是人體心肌細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)源，又是ATP合成的前體物質(zhì)。核糖主要從分子水平調(diào)節(jié)細(xì)胞的的生理代謝酶的活性，修復(fù)損傷細(xì)胞。外源ATP難以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，會(huì)在胞外降解，核糖很容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，誘導(dǎo)ATP的合成，從而提供能量，實(shí)現(xiàn)抗疲勞的保健功能。
D-核糖在水中有極大的溶解度，核糖結(jié)晶固體的特性是在空氣中容易吸潮，不易保存。國(guó)外的D-核糖產(chǎn)品主要以粉末或膠囊的形式出，而本發(fā)明的D-核糖產(chǎn)品是以口服液形式出品。D-核糖這種物質(zhì)具有一些比較特殊的性質(zhì)，主要體現(xiàn)為吸濕性極強(qiáng)，粉末狀態(tài)很難貯藏；而如果采用添加固化劑如凝膠的辦法形式，則含量過低，且不易吸收，為了達(dá)到理想劑量必段吞服很多，給使用者帶來很多不便。采用口服液的形式則有效避免了以上問題，便于保藏，延長(zhǎng)有效期，降低貯藏條件的要求，便于使用者服用。
權(quán)利要求
1.一種核糖口服液，其特征在于D-核糖200-500千克，蒸餾水600升，溶解后用蒸餾水定容到1000升，D-核糖的相對(duì)含量為20-50％(重)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核糖口服液，其特征在于D-核糖350-400千克，蒸餾水600升，溶解后用蒸餾水定容到1000升，D-核糖的相對(duì)含量為35-40％(重)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核糖口服液，其特征在于該方法包括(1)配料罐空消配料罐主要用于核糖口服液的配料，配料罐空消條件為表壓0.1-0.2Mpa，溫度121℃-130℃，空消時(shí)間30-40分鐘；(2)灌裝瓶空消灌裝瓶空消條件為；表壓0.1-0.2Mpa，溫度121℃-130℃，空消時(shí)間30-40分鐘；(3)蒸餾水制備蒸餾水制備按照《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版二部中蒸餾水的要求進(jìn)行制備；(4)配料在配料罐內(nèi)加入適量蒸餾水，在攪拌狀態(tài)下，將已稱量好的D-核糖350-400kg，溶解于600升蒸餾水中，夾套加熱40-50℃溶解，用蒸餾水定容到1000升；(5)膜過濾將已配置好的35-40％的核糖溶液通過0.2μ∽0.45μ膜過濾設(shè)備進(jìn)行除菌過濾后，得到過濾液；(6)分裝將已過濾的核糖溶液分裝成10000小瓶，每瓶100ml，壓蓋、封口；(7)消毒按巴斯德滅菌法進(jìn)行消毒；(8)成品經(jīng)檢驗(yàn)、包裝、抽檢合格后制成核糖口服液成品。
全文摘要
一種核糖口服液，其特征在于；D－核糖350－400千克，蒸餾水600升，溶解后用蒸餾水定容到1000升，D－核糖的相對(duì)含量為35－40％(重)。本發(fā)明的核糖口服液是生物工程高科技產(chǎn)品，經(jīng)功能實(shí)驗(yàn)證明，本品具有延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游時(shí)間和爬桿時(shí)間，降低小鼠運(yùn)動(dòng)時(shí)血清尿素并減少糖元消耗，具有明顯的抗疲勞作用。本品經(jīng)檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)國(guó)際奧委會(huì)2000年規(guī)定的禁用藥物，不含任何激素、無毒副作用。
文檔編號(hào)A61K31/7004GK1421209SQ0114012
公開日2003年6月4日 申請(qǐng)日期2001年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月26日
發(fā)明者柏建新, 鄧崇亮, 朱曉宏 申請(qǐng)人:江蘇省微生物研究所