專利名稱：一種水解植物蛋白的生產(chǎn)方法及用該方法制得的產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于一種生產(chǎn)含有不可檢測(cè)量-氯丙醇之水解植物蛋白的方法，用該法生產(chǎn)的水解植物蛋白純度高、口味柔和并且具有香味顯著增強(qiáng)的特性。
通常，傳統(tǒng)的水解植物蛋白(簡(jiǎn)稱HVPs)的制備方法是采用鹽酸在回流條件下，進(jìn)一步說(shuō)是采用6M鹽酸于109℃、常壓下通過(guò)酸解進(jìn)行的。據(jù)證實(shí)在這種條件下水解植物蛋白會(huì)產(chǎn)生甘油氯化作用(由存在于粗蛋白質(zhì)中殘留脂肪物質(zhì)所致)，生成一氯丙醇(MCPs)和二氯丙醇(DCPs)。由于MCP和DCP具有一些有爭(zhēng)議的特性，在食品中存在是不理想的。在標(biāo)準(zhǔn)方法的蒸發(fā)或濃縮步驟中DCP很容易被除去，遺憾的是MCP無(wú)法除去，而且還富集在最終的產(chǎn)品中，因此，必須采取附加操作步驟以便從最終產(chǎn)品中除去MCP。
按傳統(tǒng)的酸解方法制備HVPs，通過(guò)采用硫酸或磷酸來(lái)代替鹽酸便可以避免MCP和DCP的形成，但是，用硫酸或磷酸水解生產(chǎn)的HVPs質(zhì)量差，產(chǎn)品具有苦味。
在傳統(tǒng)的酸解過(guò)程中，一個(gè)突出的問(wèn)題就是由于甘油的氯化作用產(chǎn)生了MCP，而甘油是由存在于粗蛋白質(zhì)中殘留的脂肪物質(zhì)衍生而來(lái)的。例如，蛋白質(zhì)含量約為75%并且還含有5.0-9.5%脂肪和其它脂類物質(zhì)的活性小麥谷蛋白是以單、二和三甘油脂、磷脂和糖脂之復(fù)雜混合物的形式作為甘油的豐富來(lái)源的。據(jù)信影響MCP形成的眾多因素包括高濃度氯離子的存在、大量過(guò)剩的酸、高回流溫度以及較長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間，一般認(rèn)為結(jié)合甘油比未結(jié)合甘油更容易形成MCPs。
人們已經(jīng)知道許多有關(guān)利用酶來(lái)水解食用植物蛋白的方法，但是都不是以提高風(fēng)味為目的的。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的披露，一般是致力于生產(chǎn)功能得到改進(jìn)的蛋白質(zhì)，如US4，636，388號(hào)專利所示，在酶水解時(shí)抑制苦味肽的形成，尤其是該專利公開(kāi)了一種特別適于采用酶水解法生產(chǎn)的低灰份蛋白質(zhì)產(chǎn)物，即將分散的蛋白質(zhì)形成凝膠，再洗滌使之在液體中呈粒狀，以便使非蛋白質(zhì)部分脫離凝膠進(jìn)入液體中，然后將液體與凝膠分離，再將予處理過(guò)的產(chǎn)物進(jìn)行酶分解，最好是采用真菌蛋白酶和胰酶進(jìn)行水解。
US4，757，007公開(kāi)并要求保護(hù)的是一種用蛋白酶部分水解大豆蛋白，然后用5%三氯乙酸水溶液分離該水解產(chǎn)物來(lái)制備水解大豆蛋白產(chǎn)品的方法，低溶解度的水解蛋白部分具有很好的乳化特性，而高溶解度的水解蛋白部分則具有極佳的發(fā)泡特性。
在US3，830，942號(hào)專利中，制備了一種可溶性蛋白產(chǎn)品，該產(chǎn)品特別適用于高酸性食品，所制備的不溶性蛋白產(chǎn)品可用于制作富含蛋白的焙烤類食品，該專利公開(kāi)了生產(chǎn)這兩種蛋白產(chǎn)品的方法，該方法包括形成脫脂油籽物料水溶液，調(diào)整漿液pH值至油籽物料的等電點(diǎn)，加熱漿液以提高溫度，加酶至漿液內(nèi)，在物料水解期間攪拌該混合物，然后分離水解蛋白產(chǎn)品和未水解的蛋白產(chǎn)品。
雖然酶水解和酸解一般是分開(kāi)進(jìn)行的，但有一篇專利已經(jīng)報(bào)道將酸解和酶水解結(jié)合起來(lái)制備蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物。在蘇聯(lián)未決專利申請(qǐng)442，800號(hào)中，披露了一種制備非腸道進(jìn)食的蛋白質(zhì)的方法，該方法包括使蛋白質(zhì)原料經(jīng)過(guò)酶裂解，接著于二氧化碳?xì)夥罩杏?.0%硫酸(4.0N)進(jìn)行酸解，然后使該水解產(chǎn)物通過(guò)陰離子交換柱，用氫氧化鋁處理，再通過(guò)含有陽(yáng)離子交換樹脂的柱，酸解在大約100℃下進(jìn)行大約7小時(shí)。
多年來(lái)，人們進(jìn)行了多方面的努力以生產(chǎn)出可用作不同目的的水解植物蛋白產(chǎn)品，可是，遲至今日，沒(méi)有一種方法可以生產(chǎn)出由于通過(guò)控制酸解工藝參數(shù)而防止了MCP和DCP產(chǎn)生，從而降低了或者不含有MCP和DCP，并且風(fēng)味大大增強(qiáng)了的水解植物蛋白。
本發(fā)明是關(guān)于含有不可檢測(cè)量MCP的水解植物蛋白生產(chǎn)的，該結(jié)果是通過(guò)將植物蛋白水解的兩種方法即酶水解和輕緩的酸解結(jié)合為一整體方法得到的。由該方法制得的水解產(chǎn)物純度高，口味柔和，香味大大增強(qiáng)，并且含有大量谷氨酸一鈉，其高達(dá)25%(重量，按干物質(zhì)計(jì))。
生產(chǎn)含有不可檢測(cè)量MCP之水解植物蛋白的方法首先是將蛋白質(zhì)物料加入到至少含一種蛋白酶的水溶液中進(jìn)行水解，將生成的已水解的可溶性蛋白與不溶物分離，接著加入酸并加熱該混合物，生成酸化水解產(chǎn)物，最后將其中和。
據(jù)信，酶水解過(guò)程通過(guò)將蛋白質(zhì)從大部分粗蛋白的非蛋白質(zhì)組分中溶解出來(lái)，有利于減少M(fèi)CP和DCP的形成。這樣就可以大大減少含有脂肪物質(zhì)之有效甘油的量，從而減少了在隨后酸解過(guò)程中形成MCP所需的關(guān)鍵物質(zhì)的量。酶對(duì)蛋白質(zhì)的另一水解作用是釋放小的肽和氨基酸。
酸解過(guò)程由于采用輕緩的酸解條件，所以也有利于減少M(fèi)CP含量，酸解或脫酰氨基發(fā)生的條件與傳統(tǒng)方法中所采用的條件相比要溫和的多，特別是與傳統(tǒng)的水解方法相比，進(jìn)行輕緩酸解時(shí)酸的濃度相當(dāng)?shù)?，而且溫度低時(shí)間短。通過(guò)控制水解條件，使脫酰氨基反應(yīng)優(yōu)先發(fā)生，即酰胺鍵被水解，而肽鍵水解受到抑制或被降低到最低程度。據(jù)信這些條件與通過(guò)酶水解把脂肪含量降低結(jié)合起來(lái)，是造成最終產(chǎn)品中沒(méi)有MCPs形成的原因。
本發(fā)明方法包括一系列水解植物蛋白的步驟，以生產(chǎn)出含有不可檢測(cè)量之MCP的產(chǎn)品，術(shù)語(yǔ)“不可檢測(cè)量”是指采用靈敏度為2ppm這樣低的量的氣相色譜法(GC)檢測(cè)，檢測(cè)不出的量。
具體地講，將植物蛋白加入到至少含一種蛋白酶的水溶液中進(jìn)行水解，所說(shuō)的植物蛋白可以是任意一種有效的植物蛋白，例如(但不限于)油籽蛋白(大豆、花生、葵花籽、棉籽)、血漿蛋白或葉蛋白。用于生產(chǎn)帶有原有濃郁香味特性之美味的優(yōu)選蛋白質(zhì)有小麥谷蛋白，這是由于它的高谷氨酸含量，最有代表性的是谷氨酰胺。
將蛋白質(zhì)加入到至少含一種胞內(nèi)蛋白酶的水溶液中，該溶液可以呈酸性，中性或堿性。蛋白酶的選擇取決于一系列具體酶/底物的綜合參數(shù)，例如(a)pH值多大才能達(dá)到最佳的蛋白質(zhì)水解活性;(b)肽鍵特性，即最適合于滿足最終產(chǎn)品要求的特性以及(c)底物是否需要脫除苦味。對(duì)于小麥谷蛋白來(lái)說(shuō)優(yōu)選的酶是中性胞內(nèi)蛋白酶，具體地說(shuō)就是Prozyme6(商品名)，(Amano International Enzyme，Troy，Virgina)。
用酶水解蛋白質(zhì)時(shí)溫度約為25°-75℃，pH值約為5.5-8.5，中性酶含量按底物重量計(jì)約為0.1%-2.0%，不過(guò)，上述條件將根據(jù)蛋白質(zhì)-蛋白酶的結(jié)合情況而發(fā)生變化，例如，pH值要根據(jù)所用酶的種類而定，當(dāng)采用酸性酶時(shí)，pH值應(yīng)為約1.5-4.0，當(dāng)采用堿性酶時(shí)，pH值則變?yōu)榧s7.0-12.0，上述所說(shuō)的pH值范圍是根據(jù)采用中性蛋白酶來(lái)確定的。
就采用小麥谷蛋白和中性蛋白酶Prozyme6的優(yōu)選條件來(lái)說(shuō)，酶水解時(shí)溫度約為40°-50℃，最好為45℃，pH值約為6.5-7.0，優(yōu)選的Prozyme6的用量約為0.5%-1.0wt%，酶水解反應(yīng)的時(shí)間取決于許多因素，具體地說(shuō)就是酶的濃度，pH值，反應(yīng)溫度、底物量以及所要求的水解程度，作為優(yōu)選的實(shí)施方案，建議反應(yīng)時(shí)間為約4小時(shí)。
在本發(fā)明的方法中，底物量也起著重要作用，按每批料總重量計(jì)，理想的用量約為1.0%-30%，最佳用量約為22%-26%，該用量特別高，一般來(lái)說(shuō)按傳統(tǒng)方法是不能達(dá)到的，為了達(dá)到理想的量，是將底物加到酶中，而不是象傳統(tǒng)方法那樣將酶加到底物中。
將酶水解設(shè)計(jì)成完成大部分肽鍵水解，這對(duì)于釋放風(fēng)味活性肽和氨基酸是必需的，并且不會(huì)從谷氨酰胺中釋放出谷氨酸或谷氨酸一鈉，也不會(huì)對(duì)鍵合在肽上的谷氨酰胺之酰胺鍵起作用，如上所述，有很多商購(gòu)的胞內(nèi)蛋白酶和蛋白外切酶可以被用來(lái)獲得理想的結(jié)果，具體的蛋白外切酶如Debitrase(帝國(guó)生物技術(shù)公司，Rosemont，Illinois)，其中含有亮氨酸氨肽酶，當(dāng)需要從存在于水解植物蛋白內(nèi)的疏水肽中除去苦味時(shí)可以采用之。
必須指出，胞內(nèi)蛋白酶對(duì)于最初的酶水解反應(yīng)來(lái)說(shuō)是絕對(duì)必要的，所以，如果只用一種蛋白酶，就必須是一種胞內(nèi)蛋白酶，如果采用一種以上的多種酶來(lái)進(jìn)行水解植物蛋白時(shí)，就可以是胞內(nèi)蛋白酶和蛋白外切酶的任意混合物，兩者即可以同時(shí)使用也可以按先后次序使用。
要說(shuō)明的一點(diǎn)是，通過(guò)向水溶液中加酸，可在所要求的階段中止酶解過(guò)程，盡管這一步驟是優(yōu)選方法中的一個(gè)步驟，但并不是必需的一步，沒(méi)有這一步操作，也可以將水解的可溶性蛋白質(zhì)與不溶性部分分離開(kāi)，不過(guò)加入食用級(jí)有機(jī)或無(wú)機(jī)酸使水溶液pH值至約2.0-4.0，便會(huì)中止酶解反應(yīng)，從而準(zhǔn)確控制反應(yīng)終點(diǎn)，并使得水解產(chǎn)物達(dá)到微生物學(xué)穩(wěn)定性。在所要求的時(shí)間加入食用級(jí)酸也有助于更好地分離水解的可溶性蛋白與不溶性部分，只要當(dāng)水解產(chǎn)物達(dá)到要求的溶解度和水解程度，就可以加入酸，具體地說(shuō)，從經(jīng)濟(jì)觀點(diǎn)考慮，溶解度應(yīng)該達(dá)到至少60%，較好的應(yīng)至少為90%，水解度應(yīng)該約為10%-70%，較好的約為20%-50%。
然后采用任何合適的傳統(tǒng)方法如過(guò)濾或離心分離或?qū)烧呓Y(jié)合，將水解植物蛋白與不溶性部分分離。
接著加入食用級(jí)酸并加熱使水解的可溶性蛋白進(jìn)行輕緩的酸解，所用的酸可以是單一的無(wú)機(jī)酸或?qū)⑵渑c有機(jī)酸結(jié)合起來(lái)，設(shè)計(jì)的輕緩的酸解條件要最大限度地提高游離氨基酸和肽的脫酰氨基作用，同時(shí)盡可能減少焦谷氨酸的形成，這是通過(guò)優(yōu)化過(guò)量氫離子濃度而得以實(shí)現(xiàn)的。具體地說(shuō)，在滴定水解蛋白之后，過(guò)量氫離子濃度約為0.5-2.0摩爾，較好的約為1.0摩爾，在該操作步驟中可采用的食用級(jí)酸的例子有鹽酸、磷酸、硫酸或它們的任意混合物。另外，可以用各種有機(jī)酸如蘋果酸來(lái)部分取代上述無(wú)機(jī)酸，本發(fā)明優(yōu)先選用的酸是鹽酸，脫酰胺氨基進(jìn)行時(shí)的溫度約為75℃-100℃，最好為約95℃，由脫酰氨基所得到的酸化水解產(chǎn)物接著被中和至pH值約為5.0-7.0，可以采用任意一種已知的試劑，優(yōu)選的試劑為食用級(jí)50%氫氧化鈉。
如果需要，可以將生成的經(jīng)中和的水解產(chǎn)物進(jìn)一步加工，以便使其變成更實(shí)用的產(chǎn)品，水解產(chǎn)物可以經(jīng)過(guò)脫色和脫臭加工，按常規(guī)是用活性碳來(lái)進(jìn)行的，然后將脫色、脫臭的水解產(chǎn)物進(jìn)一步濃縮，可以采用目前已知的任何一種方法進(jìn)行濃縮，如噴霧干燥，真空盤架式干燥或采用蒸發(fā)，例如用降薄膜式蒸發(fā)器。
在輕度酸脫酰氨基期間，由最初酶解過(guò)程所生成的谷氨酰胺全部被轉(zhuǎn)變成谷氨酸一鈉(MSG)，因此，要根據(jù)酶解過(guò)程和采用的底物來(lái)確定存在于最終產(chǎn)品中谷氨酸一鈉的量，例如，當(dāng)所采用的植物蛋白為小麥谷蛋白而且酶解過(guò)程使其全部轉(zhuǎn)變時(shí)，則最終產(chǎn)品中MSG的含量按干物質(zhì)重量計(jì)可高達(dá)約20%-25%。
以下為本發(fā)明的實(shí)施例，這些實(shí)施例絕對(duì)不是對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1酶水解將每種試樣置于配有14升容器且為標(biāo)準(zhǔn)構(gòu)造的新布魯斯威克科學(xué)MICROFERM型發(fā)酵器(New Brunswick scientific MICROFERM fermenter)中進(jìn)行酶水解，對(duì)于酶解小麥谷蛋白的一般方法是將應(yīng)被裝入的總水量之65%-90%的水裝入反應(yīng)容器內(nèi)，將反應(yīng)容器升溫，使pH電極達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)位置，并將自動(dòng)滴定儀裝入4.0M氫氧化鈉。滴定儀調(diào)至標(biāo)的pH值，準(zhǔn)備好酶溶液(將10%的酶，溶于D.I.水中，w/w)。
將2400克小麥谷蛋白(Manildra Milling Corp.，Shawnee Mission，Kansas 66205)加入到含有24克Prozyme 6(Amano Enzymes，美國(guó)試劑Mitsubishi International Corp.，紐約，紐約10022)的7500克水中連續(xù)攪拌15-20分鐘，保持pH7，于45℃下酶水解達(dá)4小時(shí)。
4小時(shí)后，迅速用20波美度(10.0N)食用級(jí)鹽酸(HCL)將水解產(chǎn)物滴定至pH為2，再將酸化的水解產(chǎn)物泵送至浸入冰水的管子，送入收集容器并立即使其冷卻。于離心機(jī)中以16，000×G的力離心全部水解產(chǎn)物達(dá)15分鐘回收可溶相，通過(guò)冷凍干燥濃縮被回收的上層清液，以備脫酰氨基用。
輕緩的酸脫酰氨基秤量9.63克冷凍干燥過(guò)的上層清液(0.1%水份)裝入50ml量瓶?jī)?nèi)，加入10M HCl至刻度50ml(當(dāng)要求過(guò)量1.0M HCl時(shí)，使用9.04克10M HCl;過(guò)量1.5M HCl時(shí)，用11.94克10M HCl;過(guò)量2.0M HCl時(shí)，則用14.84克10M HCl)。將試樣轉(zhuǎn)移至125ml wheaton血清瓶(wheaton目錄編號(hào)223748)，于水浴振動(dòng)器內(nèi)保溫1小時(shí)，該試樣再用50%食用級(jí)氫氯化鈉(NaOH，J.F.Henry化學(xué)公司，Union，New Jersey 07083)進(jìn)行中和。結(jié)果列表如下表1試樣 HCl 水浴溫度(℃) DH(%) DEAMID(%) GLU(g/l) PG(g/l)11.0M 95 44.867.7 11.5 2.522.0M 95 48.3106.0 12.6 1.7531.5M 85 NA NA 10.1 3.141.0M 75 34.654.9 6.0 5.352.0M 75 39.465.6 8.1 3.6DH＝水解度，全部被水解之肽鍵百分?jǐn)?shù);
Deamid＝以釋放的總氨計(jì)，脫酰氨基百分?jǐn)?shù);
GLU＝游離谷氨酸(MSG);
PG＝游離焦谷氨酸;
NA＝不可得實(shí)施例2酶水解按照實(shí)施例1的操作步驟進(jìn)行酶水解。
輕緩的酸脫酰氨基本實(shí)施例的關(guān)鍵是把實(shí)施例1的脫酰氨基反應(yīng)過(guò)程放大到1升。將686.7克水和183.3克10M HCl(1.0M過(guò)量)裝入反應(yīng)器內(nèi)，加熱至95℃，然后將200克水解產(chǎn)物(20%w/v)干粉通過(guò)側(cè)門裝入反應(yīng)器內(nèi)，大約需要5分鐘，將冷凝器置于側(cè)門處，于95℃恒溫下反應(yīng)1小時(shí)，然后將反應(yīng)容器上的熱源移走，并將反應(yīng)容器放入冰浴中快速冷卻至50℃以下以便停止反應(yīng)，將160克50%的NaOH加入到容器內(nèi)，使試樣pH值達(dá)到7，中和反應(yīng)是在冰浴中低于25℃下進(jìn)行的，以保持MSG含量，然后于室溫下將1100克中和的脫酰氨基產(chǎn)物用11克Darcok B活性碳(美國(guó)Norit公司，jacksonville，佛羅里達(dá))處理2小時(shí)，脫酰氨基產(chǎn)物再用裝有Whatman 42無(wú)灰濾紙的Buchaer漏斗進(jìn)行過(guò)濾，濾液在真空盤架式干燥器中于50℃、25mmHg下濃縮2小時(shí)，得到的產(chǎn)品濃度大約為70%(固體)，用水稀釋成固體濃度大約為40%的均勻溶液以便作分析，用對(duì)2ppm即靈敏的標(biāo)準(zhǔn)氣相色譜法測(cè)量MCP的含量，結(jié)果表明有不可檢測(cè)量的MCP。以干基計(jì)，MSG在最終產(chǎn)品中的含量為5%。
實(shí)施例3酶水解按照實(shí)施例1所述的步驟進(jìn)行酶水解。
輕緩的酸脫酰氨基重復(fù)進(jìn)行實(shí)施例2的操作步驟，試驗(yàn)一下采用2.0M過(guò)量HCl對(duì)于脫酰氨基和MCP形成所產(chǎn)生的作用。將200克(干重)水解產(chǎn)物裝入含有570克水和300克10M HCl(2.0M過(guò)量)的反應(yīng)器內(nèi)，于95℃下反應(yīng)1小時(shí)后，將脫酰氨基產(chǎn)物冷卻并用232克50% NaOH中和，608克中和過(guò)的脫酰氨基產(chǎn)物用6.1克Darco S-51活性碳于室溫下處理2小時(shí)，接著將脫酰氨基產(chǎn)物過(guò)濾、濃縮、約45%固體的均勻溶液采用氣相色譜法進(jìn)行分析，其結(jié)果是含有不可檢測(cè)量的MCP。
實(shí)施例4酶水解按照實(shí)施例1所述的步驟對(duì)試樣進(jìn)行酶水解。
輕緩的酸脫酰氨基重復(fù)進(jìn)行同樣的脫酰氨基操作，不過(guò)增加了酶水解產(chǎn)物的濃度以便試驗(yàn)一下其對(duì)脫酰氨基和MCP形成的作用，將400克水解產(chǎn)物(40%w/v)加入到含有250.6克10M HCl(1.0M過(guò)量)的490.0克水(底物密度為1.14)的溶液中，于95℃下反應(yīng)1小時(shí)后，將脫酰氨基產(chǎn)物冷卻并用220克50%NaOH中和，647克中和過(guò)的脫酰氨基產(chǎn)物用6.5克Darco S-51活性碳于室溫下處理2小時(shí)，經(jīng)過(guò)濾和濃縮后，將固體含量約為45%的溶液用氣相色譜進(jìn)行分析，其結(jié)果為含有不可檢測(cè)量的MCP。
實(shí)施例5
酶水解重復(fù)進(jìn)行實(shí)施例1的操作步驟，不同的是采用混合中性蛋白酶，首先將24克Prozyme 6和33.7克(0.5%酶/底物干基)Neutrase酶液(如標(biāo)準(zhǔn)的)(NOVO Industries，Danbury，Connecticut)加入到盛有水的反應(yīng)容器內(nèi)。
輕緩的酸脫酰氨基重復(fù)進(jìn)行實(shí)施例2的操作步驟，將200克水解產(chǎn)物加到含有183.3克10M HCl(1.0M過(guò)量)和686.7克水的溶液中，于95℃下反應(yīng)1小時(shí)，冷卻后的脫酰氨基產(chǎn)物用156克50%NaOH中和，400克脫酰氨基產(chǎn)物于室溫下用4克Darco KB活性碳處理2小時(shí)，經(jīng)過(guò)濾和冷凝后，約為40%固體的溶液經(jīng)氣相色譜分析，結(jié)果為含有不可檢測(cè)量的MCP。
實(shí)施例6酶水解重復(fù)實(shí)施例1所述的酶水解步驟，不同的是采用混合酶，而且酶是按順序地加入，進(jìn)行這一操作的目的是檢驗(yàn)肽鏈外切酶對(duì)于釋放MSG的作用，將24克prozyme 6首先加入盛有水的反應(yīng)器內(nèi)，重復(fù)上述操作步驟，然后將2400克小麥谷蛋白加到容器內(nèi)，30分鐘后，將13.0克Debitrase 4500.10(帝國(guó)生物技術(shù)公司，Rosemont Illinois)加入反應(yīng)器內(nèi)，自加入Debitrase后起使反應(yīng)進(jìn)行4小時(shí)，即總的反應(yīng)時(shí)間為4.5小時(shí)。
輕緩的酸脫酰氨基重復(fù)進(jìn)行實(shí)施例2的操作步驟，將200克水解產(chǎn)物加到含有183.3克10M HCl(1.0M過(guò)量)和686.7克水(底物密度為1.07)的溶液中，于95℃下反應(yīng)1小時(shí)后，冷卻的脫酰氨基產(chǎn)物用159克50%NaOH進(jìn)行中和，618克中性脫酰氨基產(chǎn)物于室溫下用6.2克Dacro S-51活性碳處理2小時(shí)，約為40%固體的溶液經(jīng)氣相色譜分析，結(jié)果為含有不可檢測(cè)量的MCP，按干物質(zhì)重量計(jì)，最終產(chǎn)品中MSG含量為10%。
實(shí)施例7酶水解重復(fù)進(jìn)行實(shí)施例1所述酶水解的一般操作步驟，不同的是采用不同的酶，以便改變酶水解反應(yīng)進(jìn)行時(shí)的時(shí)間和溫度，用36克Debitrase 4060.50(1.5%酶/底物干基)代替prozyme 6，在38℃下進(jìn)行水解6小時(shí)。
輕緩的酸脫酰氨基將200克水解產(chǎn)物加到含有183.3克10M HCl(1.0M過(guò)量)和686.7克水的溶液中，于95℃下反應(yīng)1小時(shí)后，加入153克50%NaOH中和冷卻的脫酰氨基產(chǎn)物，600克中和過(guò)的脫酰氨基產(chǎn)物于室溫下用6.0克Darco S-51活性碳處理2小時(shí)，含40%固體的試樣經(jīng)分析，產(chǎn)物MCP含量是不可檢測(cè)的。
權(quán)利要求
1.一種生產(chǎn)含有不可檢測(cè)量一氯丙醇之水解植物蛋白的方法，包括(a)將植物蛋白加入到至少含一種蛋白酶的水溶液中進(jìn)行水解；(b)將水解的可溶性蛋白與不溶性部分進(jìn)行分離；(c)將酸加入到水解的可溶性蛋白中，并加熱混合物使水解產(chǎn)物基本上脫除酰氨基；(d)中和脫酰氨基的水解產(chǎn)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，還包括將酸加到(a)步的水溶液中以中止酶反應(yīng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，還包括將(d)步得到的水解產(chǎn)物進(jìn)行脫臭和脫色。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，還包括濃縮經(jīng)脫臭和脫色的水解產(chǎn)物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中(a)步的蛋白酶是胞內(nèi)蛋白酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中的胞內(nèi)蛋白酶是酸性、中性或堿性的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中(a)步中的植物蛋白選自由油籽蛋白、血漿蛋白、葉蛋白組成的一組蛋白質(zhì)或它們的混合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中的植物蛋白是小麥谷蛋白。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中(a)步的水解是在溫度約為25°～75℃、pH值約為5.5～8.5的條件下進(jìn)行的。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中(a)步的水解是在溫度約為40°～50℃、pH值約為6.5～7.0的條件下進(jìn)行的。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中(b)步的分離采用的是過(guò)濾、離心分離法或兩者結(jié)合使用。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在(c)步中，滴定水解蛋白之后，加入的酸使氫離子濃度過(guò)量約0.5～2.0摩爾。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中(c)步中加入的酸使氫離子濃度過(guò)量1.0摩爾。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中(c)步的反應(yīng)是在溫度約為75°～100℃下進(jìn)行的。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中(c)步的反應(yīng)是在溫度約為95℃下進(jìn)行的。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中(d)步的中和反應(yīng)是在pH值約為5.0～7.0下進(jìn)行的。
17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中(a)步中的水解反應(yīng)是通過(guò)按順序加入至少兩種蛋白酶而得以實(shí)現(xiàn)的。
18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中(a)步中的水解反應(yīng)是通過(guò)同時(shí)加入至少兩種蛋白酶而得以實(shí)現(xiàn)的。
19.一種生產(chǎn)含有不可檢測(cè)量一氯丙醇之水解植物蛋白的方法，包括(a)將植物蛋白加到至少含一種蛋白酶的水溶液中進(jìn)行水解;(b)向(a)步水溶液中加入酸以中止酶反應(yīng);(c)將水解的可溶性蛋白與不溶性部分進(jìn)行分離;(d)向水解的可溶性蛋白中加入酸，并加熱以生成脫酰氨基水解產(chǎn)物;(e)中和脫酰氨基水解產(chǎn)物;(f)將(e)步得到的水解產(chǎn)物進(jìn)行脫色和脫臭;(g)將(f)步得到的水解產(chǎn)物進(jìn)行濃縮。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中(a)步的植物蛋白選自由油籽蛋白、血漿蛋白、葉蛋白組成的一組蛋白質(zhì)或者它們的混合物。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中(a)步的植物蛋白是小麥谷蛋白。
22.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中(f)步的脫色和脫臭是采用活性碳進(jìn)行的。
23.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中(b)步所用的酸為食用級(jí)無(wú)機(jī)酸。
24.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中(b)步所用的酸為食用級(jí)無(wú)機(jī)酸與有機(jī)酸的混合物。
25.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中(d)步所用的酸為食用級(jí)無(wú)機(jī)酸。
26.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中(d)步所用的酸為食用級(jí)無(wú)機(jī)酸與有機(jī)酸的混合物。
27.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中食用級(jí)無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸選自于由鹽酸、磷酸、硫酸、檸檬酸、蘋果酸組成的一組酸或它們的混合酸。
28.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法加工得到的產(chǎn)品。
29.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法加工得到的產(chǎn)品。
30.一種水解植物蛋白，其特征在于含有不可檢測(cè)量一氯丙醇，純度高，口味柔和并且具有香味明顯增強(qiáng)的特征。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的水解植物蛋白，其特征在于按干物質(zhì)重量計(jì)，含有含量高達(dá)25%的谷氨酸一鈉。
全文摘要
一種生產(chǎn)水解植物蛋白的方法及其產(chǎn)品，該方法采用酶水解蛋白后再用輕緩的酸解性，制得的產(chǎn)品含有不可檢測(cè)量一氯丙醇，并且具有香味顯著增強(qiáng)的特性。
文檔編號(hào)A23J3/18GK1049524SQ90106858
公開(kāi)日1991年2月27日 申請(qǐng)日期1990年7月13日 優(yōu)先權(quán)日1989年7月14日
發(fā)明者唐納德·J·漢姆 申請(qǐng)人:Cpc國(guó)際有限公司