一種雞脾臟水解液、其制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種通過(guò)酶法水解得到的雞脾臟水解液、其 制備方法及應(yīng)用。 技術(shù)背景
[0002] 中國(guó)是家禽養(yǎng)殖大國(guó)，2014年禽肉產(chǎn)量達(dá)1751萬(wàn)噸（中國(guó)統(tǒng)計(jì)局）。雞脾臟是雞的 免疫器官，約占雞體重的0.2%，每年產(chǎn)量達(dá)3.5萬(wàn)噸。雞脾臟一般與雞腸道、膜腺等共同作為 下腳料低價(jià)處理。傳統(tǒng)制法是將雞脾臟下腳料加熱加壓處理，制成動(dòng)物源性飼料，飼喂動(dòng) 物，補(bǔ)充粗蛋白和微量元素。但是，傳統(tǒng)制法獲得的飼料產(chǎn)品功能單一、附加值低，不利于雞 脾臟的開(kāi)發(fā)利用。
[0003] 早在20世紀(jì)50年代，國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物脾臟含有大量的免疫活性物質(zhì)，具有免疫 增效作用，因此，W牛脾臟、豬脾臟為原料，通過(guò)反復(fù)凍融、低溫透析或超濾工藝，人們獲得 了具有免疫增效活性的轉(zhuǎn)移因子溶液，作為生物制品應(yīng)用于人醫(yī)領(lǐng)域。獸醫(yī)領(lǐng)域也開(kāi)展了 相關(guān)研究，主要是利用動(dòng)物脾臟制備轉(zhuǎn)移因子，生產(chǎn)周期一般為5天，生產(chǎn)周期長(zhǎng)，目前，W 豬脾臟為原料制備的轉(zhuǎn)移因子口服溶液已獲得新獸藥注冊(cè)并上市銷(xiāo)售，實(shí)現(xiàn)了豬脾臟的 "二次"開(kāi)發(fā)。然而，對(duì)于雞脾臟的開(kāi)發(fā)利用，將雞脾臟水解成小分子蛋白，制備成雞脾臟水 解液飼料，并對(duì)其功能進(jìn)行研究，國(guó)內(nèi)還未見(jiàn)有報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種通過(guò)酶法制備雞脾臟水解 液，解決了傳統(tǒng)方法附加值低、功能單一，制作周期長(zhǎng)、步驟繁瑣、成本高等問(wèn)題。
[0005] 本發(fā)明還提供了所述雞脾臟水解液的制備方法。
[0006] 本發(fā)明還提供了所述雞脾臟水解液在動(dòng)物飼養(yǎng)中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明為了實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案為： 本發(fā)明提供了一種雞脾臟水解液的制備方法，包括W下步驟： (1) 將去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的雞脾臟，用純化水清洗干凈，按照重量比1:1 比例加入生理鹽水，然后加入占雞脾臟重量0.12%的古爾膠和明膠，倒入膠體磨，剪切研磨， 得勻漿液； (2) 取勻漿液至反應(yīng)器中，按體積比1:1加入純化水混合均勻，得混合液，每16ml勻漿液 中加入3000-6000U蛋白酶，水解，得水解液； (3) 將水解液離屯、，上清液過(guò)IOKDa中空纖維超濾柱除去蛋白酶，得提取液，加入山梨酸 鐘，即得雞脾臟水解液。
[000引進(jìn)一步的，步驟(1)中，所述古爾膠和明膠的質(zhì)量比為1:3。
[0009] 進(jìn)一步的，步驟(1)中，所述剪切研磨的條件為:轉(zhuǎn)速為3900r/min，研磨時(shí)間為30-60s。
[0010] 進(jìn)一步的，本發(fā)明所使用的蛋白酶為復(fù)合蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一種或兩種。
[0011] 上述制備方法中，所述蛋白酶為復(fù)合蛋白酶時(shí)，調(diào)節(jié)混合液的PH值為6.8-7.0，水 解時(shí)間為3.化;所述蛋白酶為木瓜蛋白酶時(shí)，調(diào)節(jié)混合液的PH值為6.0-6.2，水解時(shí)間為4h; 所述蛋白酶為復(fù)合蛋白酶及木瓜蛋白酶兩種時(shí)，混合液中先加入木瓜蛋白酶，調(diào)節(jié)pH值為 6.0，水解1小時(shí)，再加入復(fù)合蛋白酶，調(diào)節(jié)pH值為6.6，繼續(xù)水解2小時(shí)，收集水解液;所述水 解的溫度均在47.5-52.5°C ;本發(fā)明所述PH值的調(diào)節(jié)采用PH值為3.2-4.0巧樣酸-巧樣酸鋼 緩沖液或PH值為9.0-9.4甘氨酸-氨氧化鋼緩沖液。
[0012] 進(jìn)一步的，所述蛋白酶為兩種時(shí)，所述木瓜蛋白酶同復(fù)合蛋白酶的質(zhì)量比為2:1。
[0013] 進(jìn)一步的，步驟（3)中，所述離屯、的條件為：在3000-400化/min的轉(zhuǎn)速下離屯、5-10min〇
[0014] 進(jìn)一步的，步驟(3)中，所述山梨酸鐘的加入量占提取液質(zhì)量的0.01-0.02%。
[0015] 根據(jù)上述制備方法制備的雞脾臟水解液也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0016] 本發(fā)明還提供了一種利用上述制備方法制備的雞脾臟水解液在動(dòng)物飼養(yǎng)中的應(yīng) 用。
[0017] 本發(fā)明利用復(fù)合蛋白酶、木瓜蛋白酶對(duì)雞脾臟進(jìn)行水解，獲得產(chǎn)品的主要成分是 小分子多膚、游離氨基酸、核酸、微量元素等，與傳統(tǒng)飼料相比，蛋白的消化吸收率顯著提 高，而且具有提高細(xì)胞免疫和體液免疫的功能，附加值高；與雞脾臟轉(zhuǎn)移因子相比，蛋白含 量高20倍、生產(chǎn)周期縮短60%W上、制作工藝簡(jiǎn)單、成本低;本發(fā)明通過(guò)加入適量的古爾膠及 明膠，能夠通過(guò)底物競(jìng)爭(zhēng)，使水解機(jī)制向著有利于生成無(wú)苦味產(chǎn)物方向轉(zhuǎn)變，同時(shí)起到一定 的掩蓋作用，制備的產(chǎn)物無(wú)苦味，蛋白含量為2.5%-5%。
[001引本發(fā)明的有益效果為： (1)本發(fā)明使用膠體磨進(jìn)行細(xì)胞破碎，可W將95%的細(xì)胞破碎，細(xì)胞內(nèi)容物充分釋放，提 高了蛋白水解效率，比常規(guī)方法的單位時(shí)間水解度提高20-30%; (2 )本發(fā)明采用木瓜蛋白酶或雙酶水解法，水解度高達(dá)60%-75%，氮回收率達(dá)90% W上， 聯(lián)合添加適量的古爾膠及明膠，獲得的蛋白水解液無(wú)苦味，分散性好，適合動(dòng)物口服使用； (3)本發(fā)明采用了超濾方法去除蛋白酶，與傳統(tǒng)加熱方法相比，保護(hù)了小分子蛋白的免 疫活性;生產(chǎn)周期短，僅需1-2天即可完成一批次生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 為了更好的理解本發(fā)明，下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明。
[0020] 本發(fā)明所使用的復(fù)合蛋白酶(20萬(wàn)U/g)及木瓜蛋白酶（10萬(wàn)U/g)均購(gòu)自山東西唐 生物科技有限公司。本發(fā)明制備過(guò)程中，PH值的調(diào)節(jié)采用PH值為3.2-4.0巧樣酸-巧樣酸鋼 緩沖液或PH值為9.0-9.4甘氨酸-氨氧化鋼緩沖液。
[0021] 實(shí)施例1 一種雞脾臟水解液的制備方法，包括W下步驟： (1) 將去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的雞脾臟，用純化水清洗干凈，按照重量比1:1 比例加入生理鹽水，然后加入占雞脾臟重量0.12%的古爾膠和明膠(古爾膠和明膠的質(zhì)量比 為1:3)，倒入膠體磨，W3900r/min剪切研磨30s，得勻漿液； (2) 取勻漿液至反應(yīng)器中，按體積比1:1加入純化水混合均勻，得混合液，按每16ml勻漿 液中加入4000U復(fù)合蛋白酶，調(diào)節(jié)混合液的PH值至6.2，在50°C下水解3.5小時(shí)，得水解液； (3)將水解液在3000r/min條件下離屯、10分鐘，上清液過(guò)IOKDa中空纖維超濾柱除去復(fù) 合蛋白酶，得提取液，加入占提取液重量0.01%的山梨酸鐘，即得雞脾臟水解液。
[0022] 實(shí)施例2 一種雞脾臟水解液的制備方法，包括W下步驟： (1) 將去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的雞脾臟，用純化水清洗干凈，按照重量比1:1 比例加入生理鹽水，然后加入占雞脾臟重量0.12%的古爾膠和明膠(古爾膠和明膠的質(zhì)量比 為1:3)，倒入膠體磨，W3900r/min剪切研磨30s，得勻漿液； (2) 取勻漿液至反應(yīng)器中，按1:1加入純化水混合均勻，得混合液，按每16ml勻漿液中加 入3000U的木瓜蛋白酶，調(diào)節(jié)混合液的pH值為6.2，50°C水解4小時(shí)，收集水解液； (3) 將水解液在4000r/min條件下離屯、5分鐘，上清液過(guò)IOKDa中空纖維超濾柱除去木瓜 蛋白酶，得提取液，加入占提取液重量0.01 %的山梨酸鐘，即得雞脾臟水解液。
[0023] 實(shí)施例3 一種雞脾臟水解液的制備方法，包括W下步驟： (1) 將去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的雞脾臟，用純化水清洗干凈，按照重量比1:1 比例加入生理鹽水，然后加入占雞脾臟重量0.12%的古爾膠和明膠(古爾膠和明膠的質(zhì)量比 為1:3)，倒入膠體磨，W3900r/min剪切研磨30s，得勻漿液； (2) 取勻漿液至反應(yīng)器中，按1:1加入純化水混合均勻，得混合液，按每16ml勻漿液中加 入木瓜蛋白酶4000U、復(fù)合蛋白酶2000U的比例，先加入木瓜蛋白酶，調(diào)節(jié)混合液pH值為6.0， 50°C水解1小時(shí)，再加入復(fù)合蛋白酶，調(diào)節(jié)混合液的pH值為6.6,繼續(xù)水解2小時(shí)，收集水解 液； (3) 將水解