專利名稱：一種復(fù)合酶法制備茶樹菇水解液的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物提取領(lǐng)域，尤其是一種復(fù)合酶法制備茶樹菇水解液的方法。
背景技術(shù)：
茶樹菇(Agrocybe aegerita)又叫茶薪菇、楊樹菇、柱狀田頭菇、柳松茸等，是一種被人們稱為“菇中珍品”的食用菌，享有“中華神菇”，“神仙菇”之稱，屬于真菌界、擔(dān)子菌門、層菌綱、傘菌目、糞銹傘科、田蘑屬，民間常用于多種常見病、多發(fā)病的防治，曬干后可治療頭暈、頭痛、嘔吐及小兒低燒、老人氣喘等癥，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，可滋陰壯陽，對(duì)腎虛、尿頻、水腫、癌癥、高血壓、早衰及小兒低熱、尿床等都有較理想的輔助治療功能。這些功能來自于茶樹菇中的多種生物活性物質(zhì)，而茶樹菇多糖就是其中的主要成分。目前提取茶樹菇多糖的方法包括水提、微波及超聲波輔助提取法，這些方法耗費(fèi)大量的能量，而且多糖的提取率較低，酶制劑作為一類綠色食品添加劑，用于改善食品品質(zhì)和食品制造工藝已經(jīng)越來越普遍。從早期的釀造、發(fā)酵食品開始，食品用酶已廣泛應(yīng)用到各種食品上。隨著生物科技進(jìn)展，不斷研究、開發(fā)出新的酶制劑，已成為當(dāng)今新的食品原料開發(fā)、品質(zhì)改良、工藝改造的重要環(huán)節(jié)。首先，酶制劑本身具有安全性，酶源于自然界中的生命體，如微生物、植物、動(dòng)物； 其次，酶不會(huì)殘留在食品中，酶有催化化學(xué)反應(yīng)的功能，具有專一性高，無副產(chǎn)物生成的特點(diǎn)，酶制劑在食品加工過程中只是起加速反應(yīng)的作用，反應(yīng)完鈍化后變成一個(gè)蛋白顆粒，因此，不會(huì)在最終產(chǎn)品里檢測出來；第三，酶的反應(yīng)條件溫和，對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)損傷低，可以保證食品的營養(yǎng)。由此可見，在食品加工過程中應(yīng)用酶制劑是非常安全的，可以替代那些對(duì)人體有害的物質(zhì)，或者把有害的物質(zhì)轉(zhuǎn)化為無害，降低食品不安全因素，另外，酶制劑還具有縮短生產(chǎn)過程、用量少、綠色、安全、高效等優(yōu)點(diǎn)。據(jù)檢索，現(xiàn)有的提取方法包括單一提取法和由單一提取法組成的幾種組合法提取茶樹菇多糖，但是目前的提取方法提取效率都較低，提取后酶活力不高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種酶解完全、多糖含量高的復(fù)合酶法制備茶樹菇水解液的方法。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)目的的技術(shù)方案如下一種復(fù)合酶法制備茶樹菇水解液的方法，方法和步驟如下(1)將茶樹菇粉碎，調(diào)漿，煮沸滅菌，得漿液；(2)第一次酶解加水調(diào)整漿液的濃度，使干茶樹菇原料與水的kg L比為 1 15-25，調(diào)節(jié)其PH值，使PH值在4.5-6，加入復(fù)合酶I，復(fù)合酶I的質(zhì)量為干茶樹菇質(zhì)量的0. 05% -0. 3%，在45-55°C條件下，酶解2-4小時(shí)，得到第一次酶解液；其中，復(fù)合酶I由纖維素酶木聚糖酶β-葡聚糖酶甘露聚糖酶幾丁質(zhì)酶 =1:1:1:1:1-1:2:2:2:5 組成；
(3)第二次酶解加水調(diào)整第一次酶解液的濃度，使干茶樹菇原料與酶解液的 kg L比值為1 25-35，調(diào)節(jié)pH值，使pH值在3.0-6. 0，加入占干茶樹菇重量0. 1-0. 3% 的復(fù)合酶II，在50-60°C條件下，酶解2-4小時(shí)，得到第二次酶解液；其中，復(fù)合酶II由果膠酶蛋白酶脂肪酶=1 1 1-1 4 6組成；(4)將第二次酶解液煮沸滅酶，加重量百分比為0. 5% -1%吸附劑吸附，過濾、濃縮制成茶樹菇水解液。而且，所述pH調(diào)節(jié)劑為食用級(jí)檸檬酸或稀鹽酸。而且，所述步驟(4)的吸附劑為活性炭。而且，所述復(fù)合酶I中纖維素酶木聚糖酶β-葡聚糖酶甘露聚糖酶幾丁質(zhì)酶=1.5 1.5 2 2 3或纖維素酶木聚糖酶β-葡聚糖酶甘露聚糖酶幾丁質(zhì)酶=3:3:4:4:6。而且，所述復(fù)合酶II中果膠酶蛋白酶脂肪酶=2 2.5 3或果膠酶蛋白酶脂肪酶=4:5:6。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果如下1、本發(fā)明利用復(fù)合酶在較溫和的條件下將細(xì)胞組織分解，加速有效成分的釋放， 從而提高生物活性物質(zhì)得率，利用二次酶解法，使細(xì)胞中的多糖得到充分溶出，解決了一次酶解中生物活性物質(zhì)提取率低的弊端，使茶樹菇中的多糖更加充分的被溶出，有效提高多糖的含量。2、本發(fā)明將纖維素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、幾丁質(zhì)酶以及蛋白酶、果膠酶、脂肪酶組成的兩種復(fù)合酶用于活性物質(zhì)的提取，以去除細(xì)胞壁和細(xì)胞膜上的果膠、纖維素及蛋白質(zhì)等成分，使得細(xì)胞順利破裂，有利于促進(jìn)胞內(nèi)活性物質(zhì)的溶出，達(dá)到提高提取率、縮短提取時(shí)間、減少能耗和有效保存生物活性的目的，然而由于加酶提取會(huì)提高生產(chǎn)成本，在添加量上需嚴(yán)格控制。3、本發(fā)明采用酸性及中性酶水解茶樹菇，在整個(gè)反應(yīng)過程中無須加入大量堿，因此在提取后得到的茶樹菇多糖中含鹽量極少，不用再脫鹽，減少操作步驟，降低生產(chǎn)成本。4、本發(fā)明利用復(fù)合生物酶制劑制取茶樹菇水解液，可充分發(fā)揮復(fù)合酶的協(xié)同增效作用，并采取分段加工工藝，最大限度地使茶樹菇中的生物活性物質(zhì)釋放出來。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例的工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容做進(jìn)一步說明；下述實(shí)施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實(shí)施例來限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。以下實(shí)施例所述的纖維素酶、木聚糖酶、β -葡聚糖酶、甘露聚糖酶、幾丁質(zhì)酶、脂肪酶、果膠酶和蛋白酶均為市售產(chǎn)品。實(shí)施例1一種復(fù)合酶法制備茶樹菇水解液的方法，步驟如下(1)將Ikg干茶樹菇洗凈，粉碎成80目，按照茶樹菇與水的重量比例為1 2加水調(diào)漿，煮沸15分鐘滅菌，得漿液； (2)第一次酶解首先，加水調(diào)整漿液的濃度，使干茶樹菇原料的重量與水的比為
1 20 (kg L)，Ikg茶樹菇中加入20L水，再采用食用級(jí)檸檬酸或稀鹽酸調(diào)節(jié)其pH值，使 PH值在4. 5，然后，加入復(fù)合酶I，在45-55°C條件下，酶解3小時(shí)，溫度調(diào)節(jié)可采用水浴加熱器，酶解在慢速攪拌狀態(tài)下進(jìn)行，得到第一次酶解液； 其中，復(fù)合酶I由纖維素酶1. 5g，木聚糖酶1. 5g，β -葡聚糖酶2g，甘露聚糖酶2g， 幾丁質(zhì)酶3g組成，酶的活力以80萬單位/克計(jì)，其中，纖維素酶木聚糖酶β-葡聚糖酶甘露聚糖酶幾丁質(zhì)酶的推薦重量百分比為1:1:1:1:1-1:2:2:2:5， 本實(shí)施例的比例為1.5 1.5 2 2 3。(3)第二次酶解首先，加水調(diào)整第一次酶解液的濃度，使干茶樹菇的重量與酶解液的體積為1 30(kg L)，補(bǔ)充水分至30L，再采用食用級(jí)檸檬酸或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值，使 PH值在5. 0左右，然后，加入復(fù)合酶II，在55°C條件下，酶解2. 5小時(shí)，得到第二次酶解液；復(fù)合酶II由果膠酶2g，蛋白酶2. 5g，脂肪酶3g組成，酶的活力以80萬單位/克計(jì)，其中，果膠酶蛋白酶脂肪酶的推薦比例為1 :1:1-1:4: 6，本事實(shí)例的比例為
2· 2 · 5 · 3 ο(4)將第二次酶解液煮沸15分鐘滅酶，加重量百分比為0. 5%活性炭吸附，然后過濾、濃縮制成澄清的水解液。根據(jù)苯酚硫酸法測得其中多糖含量189. 45mg/g,茚三酮法測得α _氨基氮含量 99. 36mg/g，與對(duì)比試驗(yàn)1的結(jié)果相比，比單酶酶解有明顯提高。對(duì)比試驗(yàn)1 單酶酶解將Ikg干茶樹菇洗凈，粉碎成80目，加水調(diào)整漿液濃度，使干茶樹菇原料的重量與水的比為1 20(kg L)，Ikg茶樹菇中加入20L水，再采用食用級(jí)檸檬酸或稀鹽酸調(diào)節(jié)其PH值，使pH值在4. 5，加入纖維素酶，木聚糖酶，β -葡聚糖酶，甘露聚糖酶， 幾丁質(zhì)酶，果膠酶，蛋白酶，脂肪酶在45-55°C條件下，分別酶解3小時(shí)，溫度調(diào)節(jié)可采用水浴加熱器，酶解在慢速攪拌狀態(tài)下進(jìn)行，得單酶酶解液，煮沸15分鐘滅酶，加重量百分比為 0. 5%活性炭吸附，過濾、濃縮制成澄清的水解液。其中纖維素酶酶解后所得多糖的含量最高，為145. 21mg/g，蛋白酶酶解后所得 α -氨基氮的含量最高，為78. 65mg/g。實(shí)施例2一種復(fù)合酶法制備茶樹菇水解液的方法，步驟如下(1)將業(yè)8干茶樹菇洗凈，粉碎，按照茶樹菇與水的重量比例為1 5加水調(diào)漿，煮沸15分鐘滅菌，得漿液；(2)第一次酶解首先，加水調(diào)整漿液的濃度，是干茶樹菇原料的重量與水的比為 1 20 (kg L)，Ikg茶樹菇中加入40L水，再采用食用級(jí)檸檬酸或稀鹽酸調(diào)節(jié)其pH值，使 PH值在5. 0，然后，加入復(fù)合酶I，在50°C條件下，酶解3小時(shí)，溫度調(diào)節(jié)可采用水浴加熱器， 酶解在慢速攪拌狀態(tài)下進(jìn)行，得到第一次酶解液；復(fù)合酶I由纖維素酶3g，木聚糖酶3g，β -葡聚糖酶4g，甘露聚糖酶4g，幾丁質(zhì)酶 6g，酶的活力以80萬單位/克計(jì)，本實(shí)施采用的比例為3 3 4 4 6。(3)第二次酶解首先，加水調(diào)整第一次酶解液的濃度，使干茶樹菇的重量與酶解液的比為1 30(kg L)，補(bǔ)充水分至60L，再采用食用級(jí)檸檬酸或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值，使pH 值在4. 5，然后，加入復(fù)合酶II，在50°C條件下，酶解3小時(shí)，得到第二次酶解液；復(fù)合酶II由果膠酶4g，蛋白酶5g，脂肪酶6g組成，酶的活力以80萬單位/克計(jì)， 本實(shí)施采用的比例為4 5 6。(4)將第二次酶解得到的酶解液煮沸15分鐘滅酶，加重量百分比為活性炭吸附，過濾、濃縮制成澄清的水解液，根據(jù)苯酚硫酸法測得其中多糖含量193. 21mg/g，茚三酮法測得α-氨基氮含量101. 18mg/g。與對(duì)比實(shí)驗(yàn)2的結(jié)果相比，比單酶酶解有明顯提高。對(duì)比試驗(yàn)2:單酶酶解加水調(diào)整漿液濃度，使干茶樹菇原料的重量與水的比為 1 20 (kg L)，Ikg茶樹菇中加入20L水，再采用食用級(jí)檸檬酸或稀鹽酸調(diào)節(jié)其pH值，使 PH值在5. 0，加入纖維素酶，木聚糖酶，β -葡聚糖酶，甘露聚糖酶，幾丁質(zhì)酶，果膠酶，蛋白酶，脂肪酶在50°C條件下，分別酶解3小時(shí)，溫度調(diào)節(jié)可采用水浴加熱器，酶解在慢速攪拌狀態(tài)下進(jìn)行，得單酶酶解液，煮沸15分鐘滅酶，加重量百分比為活性炭吸附，過濾、濃縮制成澄清的水解液。其中纖維素酶解后所得多糖的含量最高，為163. 18mg/g，蛋白酶酶解后所得 α -氨基氮的含量最高，為90. 32mg/g。上述實(shí)施例所述的纖維素酶、木聚糖酶、β -葡聚糖酶、甘露聚糖酶、幾丁質(zhì)酶、脂肪酶、果膠酶和蛋白酶均為市售產(chǎn)品。將茶樹菇加工行業(yè)中的下腳料如畸形菇、殘次菇等利用復(fù)合酶法分步進(jìn)行酶解， 酶解液中的多糖含量能達(dá)到201. 36mg/g, α -氨基氮含量102. 23mg/g。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)合酶法制備茶樹菇水解液的方法，其特征在于方法和步驟如下(1)將茶樹菇粉碎，調(diào)漿，煮沸滅菌，得漿液；(2)第一次酶解加水調(diào)整漿液的濃度，使干茶樹菇原料與水的kg L比為1 15-25， 調(diào)節(jié)其PH值，使pH值在4. 5-6，加入復(fù)合酶I，復(fù)合酶I的質(zhì)量為干茶樹菇質(zhì)量的 0. 05% -0. 3%，在45-55°C條件下，酶解2_4小時(shí)，得到第一次酶解液；其中，復(fù)合酶I由纖維素酶木聚糖酶β-葡聚糖酶甘露聚糖酶幾丁質(zhì)酶= 1:1:1:1:1-1:2:2:2:5 組成；(3)第二次酶解加水調(diào)整第一次酶解液的濃度，使干茶樹菇原料與酶解液的kg L 比值為1 25-35，調(diào)節(jié)pH值，使pH值在3. 0-6.0，加入占干茶樹菇重量0. 1-0. 3%的復(fù)合酶II，在50-60°C條件下，酶解2-4小時(shí)，得到第二次酶解液；其中，復(fù)合酶II由果膠酶蛋白酶脂肪酶=1 1 1-1 4 6組成；(4)將第二次酶解液煮沸滅酶，加重量百分比為0.5%-1%吸附劑吸附，過濾、濃縮制成茶樹菇水解液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合酶法制備茶樹菇水解液的方法，其特征在于所述PH調(diào)節(jié)劑為食用級(jí)檸檬酸或稀鹽酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合酶法制備茶樹菇水解液的方法，其特征在于所述步驟 (4)的吸附劑為活性炭。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合酶法制備茶樹菇水解液的方法，其特征在于所述復(fù)合酶I中纖維素酶木聚糖酶β-葡聚糖酶甘露聚糖酶幾丁質(zhì)酶= 1.5:1.5:2:2:3或纖維素酶木聚糖酶β -葡聚糖酶甘露聚糖酶幾丁質(zhì)酶 =3:3:4:4:6。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合酶法制備茶樹菇水解液的方法，其特征在于所述復(fù)合酶II中果膠酶蛋白酶脂肪酶=2 2.5 3或果膠酶蛋白酶脂肪酶=4 5 6。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復(fù)合酶法制備茶樹菇水解液的方法，其步驟包括1)將茶樹菇子實(shí)體洗凈，破碎，打漿；2)按茶樹菇與水的比例為1∶2-1∶5加水調(diào)漿；3)第一次酶解再加入由纖維素酶，木聚糖酶、β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶和幾丁質(zhì)酶組成的復(fù)合酶I，加量為茶樹菇原料的0.05％-0.3％，在45-55℃條件下酶解2-4小時(shí)，4)第二次酶解加入復(fù)合酶II，在50-60℃條件下酶解2-4小時(shí)，5)將酶解液煮沸滅酶，6)吸附，過濾、濃縮制成透明的水解液。本發(fā)明利用復(fù)合生物酶制劑制取茶樹菇水解液，可充分發(fā)揮復(fù)合酶的協(xié)同增效作用，并采取分段加工工藝，最大限度地使茶樹菇中的生物活性物質(zhì)釋放出來。
文檔編號(hào)C08B37/00GK102199225SQ20111008157
公開日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2011年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月1日
發(fā)明者華伯元, 周瑤, 毛淑紅, 王娜, 王春霞, 路福平 申請(qǐng)人:天津科技大學(xué)