用于克羅諾菌冷熱損傷修復(fù)的前增菌液體培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于克羅諾菌冷熱損傷修復(fù)的前增菌液體培養(yǎng)基。前增菌液體培養(yǎng)基包括蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鈉、蔗糖、丙酮酸鈉、氯化鎂和水。通過(guò)大量的食源性致病菌驗(yàn)證該培養(yǎng)基修復(fù)效果，結(jié)果表明生長(zhǎng)效果和生理生化指標(biāo)修復(fù)效果較現(xiàn)有的BPW、EE、TSB等前增菌培養(yǎng)基均具有較大程度的提高，能克服克羅諾菌在食品檢驗(yàn)檢疫過(guò)程中出現(xiàn)漏檢缺陷，提高克羅諾菌的檢出率，且能有效抑制沙門氏菌等非目標(biāo)菌的生長(zhǎng)繁殖。本發(fā)明適用于各類食品中克羅諾菌的快速修復(fù)，對(duì)預(yù)防和控制由食源性克羅諾菌感染導(dǎo)致食源性疾病的發(fā)生與傳播具有重要意義。
【專利說(shuō)明】用于克羅諾菌冷熱損傷修復(fù)的前增菌液體培養(yǎng)基
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食品微生物檢驗(yàn)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種克羅諾菌冷熱損傷修復(fù)前增菌液體培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002]克羅諾菌iCronobacter),是一種重要食源性致病菌，屬腸桿菌科的革蘭氏陰性桿菌，能導(dǎo)致新生嬰幼兒腦膜炎、致死性結(jié)腸炎和菌血癥等，流行病數(shù)據(jù)調(diào)查表明嬰幼兒配方奶粉是其感染的主要傳播媒介。
[0003]食品加工過(guò)程中，經(jīng)過(guò)高熱、低冷、干燥、殺菌等加工工藝單元，易導(dǎo)致克羅諾菌損傷。因此，食品微生物檢驗(yàn)過(guò)程中，現(xiàn)有的前增菌培養(yǎng)基對(duì)損傷細(xì)菌修復(fù)效果不好或者含有選擇性抑制劑而導(dǎo)致?lián)p傷細(xì)菌無(wú)法生長(zhǎng)或者生理生化反應(yīng)發(fā)生很大變化，造成食品中克羅諾菌檢驗(yàn)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，導(dǎo)致被克羅諾菌污染的食品進(jìn)入消費(fèi)市場(chǎng)，而這些損傷細(xì)菌一旦通過(guò)食物進(jìn)入人體，在合適條件下可以復(fù)活，進(jìn)而引起克羅諾菌感染食源性疾病的流行暴發(fā)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了防止食品檢驗(yàn)檢疫過(guò)程中出現(xiàn)克羅諾菌漏檢，提高食品中克羅諾菌的檢出率，避免損傷克羅諾菌通過(guò)食物進(jìn)入人體導(dǎo)致食源性疾病的暴發(fā)，本發(fā)明提供一種用于克羅諾菌冷熱損傷修復(fù)的前增菌液體培養(yǎng)基。
`[0005]用于克羅諾菌冷熱損傷修復(fù)的前增菌液體培養(yǎng)基由下列重量的物質(zhì)組成:
蛋白胨12~15g、磷酸二氫鉀1.5~3.5g、十二水磷酸氫二鈉8~10g、氯化鈉5g、鹿糖100~120g、丙酮酸鈉0.8~1.2g、氯化鎂0.8~1.2g、水1000ml。
[0006]所述前增菌液體培養(yǎng)基由下列重量的物質(zhì)組成:
蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉9g、氯化鈉5g、鹿糖120g、丙酮酸鈉1.0g，氯化鎂 1.0g,7jC 1000ml。
[0007]所述前增菌液體培養(yǎng)基由下列重量的物質(zhì)組成:
蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉9g、氯化鈉5g、鹿糖100g、丙酮酸鈉
0.8g、氯化鎂 0.8g、水 1000ml。
[0008]所述前增菌液體培養(yǎng)基由下列重量的物質(zhì)組成:
蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉9g、氯化鈉5g、鹿糖110g、丙酮酸鈉
1.2g、氯化鎂 1.2g、水 1000ml。
[0009]本發(fā)明配方中各成份的作用說(shuō)明如下:
1.在緩沖蛋白胨水(BPW)中加入蔗糖的作用在于:蔗糖能抑制培養(yǎng)克羅諾菌時(shí)樣品中雜菌的生長(zhǎng)和繁殖。研究表明克羅諾菌可以利用蔗糖作為碳源，而很多腸道致病菌無(wú)法利用蔗糖作為碳源；2.本發(fā)明使用的丙酮酸鈉是三羧酸循環(huán)的中間代謝物丙酮酸的鈉鹽，可以為損傷細(xì)菌提供能量，有效彌補(bǔ)環(huán)境損傷過(guò)程中糖酵解過(guò)程中酶的失活，進(jìn)而導(dǎo)致的糖代謝障礙。另外，在細(xì)菌受冷熱損傷過(guò)程中，易導(dǎo)致重要金屬離子如Mg2+流出細(xì)胞，導(dǎo)致相關(guān)酶失活，進(jìn)而抑制重要生理生化與代謝過(guò)程如DNA復(fù)制等，加入氯化鎂(MgCl2)是為了克服鎂離子(Mg2+)的流失導(dǎo)致克羅諾菌的生長(zhǎng)障礙。
[0010]本發(fā)明與現(xiàn)有BPW、腸桿菌增菌肉湯(EE)及胰蛋白胨肉湯(TS) B培養(yǎng)基相比較具有以下方面的優(yōu)點(diǎn):
1.生長(zhǎng)修復(fù)效果好
用克羅諾菌標(biāo)準(zhǔn)菌株人工污染奶粉(無(wú)菌奶粉)，在高溫(58°C，5min)和低溫(_18°C，IOh)損傷處理人工污染樣品，取IOml人工污染樣品接種至BPW、EE、TSB和本發(fā)明培養(yǎng)基37°C培養(yǎng)8h中，通過(guò)梯度稀釋記錄不同培養(yǎng)基的菌落總數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)本發(fā)明培養(yǎng)基菌落生長(zhǎng)數(shù)量顯著高于其他培養(yǎng)基，表明該培養(yǎng)基的增菌效果好，修復(fù)效率高；相同接種量的情況下，37°C培養(yǎng)8h，菌落數(shù)量較BPW、TSB和EE增菌液增加10~100倍；
2.生化指標(biāo)變化小
用克羅諾菌標(biāo)準(zhǔn)菌株(ATCC28544和ATCC51329)和分離菌株(11株奶粉分離株)人工污染奶粉(無(wú)菌奶粉)，在低溫?fù)p傷處理人工污染樣品，取IOml人工污染樣品接種至BPW、EE、TSB和本發(fā)明培養(yǎng)基中，37 °C培養(yǎng)8h中，用無(wú)菌接種環(huán)挑取不同前增菌菌懸液接種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，采用AP1-20e生化試劑條檢測(cè)菌株生理生化指標(biāo)變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)其他前增菌培養(yǎng)基修復(fù)克羅諾菌生化指標(biāo)變化較大，而本發(fā)明培養(yǎng)基修復(fù)后，克羅諾菌的生化反應(yīng)指標(biāo)變化小，較BPW、EE和TSB培養(yǎng)基生化指標(biāo)變化率降低10%以上；
3.具有較好的選擇性
該培養(yǎng)基具有較好地抑制樣品中雜菌生長(zhǎng)，將克羅諾菌和沙門氏菌制備混合菌懸液，然后分別進(jìn)行熱和冷處理 ，加入到本發(fā)明培養(yǎng)基中，過(guò)夜搖床培養(yǎng)。取不同稀釋度的混合菌液涂布培養(yǎng)于含有5-溴-4-氯-3-吲哚-D-α-葡萄糖苷的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上,培養(yǎng)8h，觀察菌落生長(zhǎng)，發(fā)現(xiàn)95%以上菌落為藍(lán)綠色克羅諾菌的菌落。
【具體實(shí)施方式】
[0011]下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地說(shuō)明。
[0012]實(shí)施例1
用于克羅諾菌(frmo如cter)冷熱損傷修復(fù)的前增菌液體培養(yǎng)基由下列重量的物質(zhì)組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉(Na2HPO4.12H20) 9.0g、氯化鈉5g、鹿糖 120g、丙酮酸鈉 1.0g，氯化鎂 1.0g,7jC 1000ml ；
接種過(guò)夜克羅諾菌菌懸液1.0PL到緩沖蛋白胨水(BPW)、腸桿菌增菌肉湯(EE)、胰蛋白胨肉湯(TSB)中，37°C 120rpm搖床培養(yǎng)8h，取出培養(yǎng)基，將培養(yǎng)基做十倍稀釋測(cè)定菌落總數(shù)，結(jié)果顯示該修復(fù)培養(yǎng)基較BPW增加50倍，較EE和TSB增加10倍。
[0013]實(shí)施例2
用于克羅諾菌(frmo如cter)冷熱損傷修復(fù)的前增菌液體培養(yǎng)基由下列重量的物質(zhì)組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉(Na2HPO4.12H20) 9.0g、氯化鈉5g、鹿糖100g、丙酮酸鈉0.8g、氯化鎂0.8g、水1000ml ；接種過(guò)夜克羅諾菌菌懸液1.ομL到緩沖蛋白胨水(BPW)、腸桿菌增菌肉湯(EE)、胰蛋白胨肉湯(TSB)中，37°C 120rpm搖床培養(yǎng)8h，取出培養(yǎng)基，將培養(yǎng)基做十倍稀釋測(cè)定菌落總數(shù)(三個(gè)重復(fù))，結(jié)果顯示該修復(fù)培養(yǎng)基較BPW增加45倍，較EE和TSB增加10倍。
[0014]實(shí)施例3
用于克羅諾菌(frmo如cter)冷熱損傷修復(fù)的前增菌液體培養(yǎng)基由下列重量的物質(zhì)組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉(Na2HPO4.12H20)9g、氯化鈉5g、鹿糖110g、丙酮酸鈉1.2g、氯化鎂1.2g、水1000ml ；
接種過(guò)夜克羅諾菌菌懸液1.0PL到緩沖蛋白胨水(BPW)、腸桿菌增菌肉湯(EE)、胰蛋白胨肉湯(TSB)中，37°C 120rpm搖床培養(yǎng)8h，取出培養(yǎng)基，將培養(yǎng)基做十倍稀釋測(cè)定菌落總數(shù)，結(jié)果顯示該修復(fù)培養(yǎng)基較BPW增加65倍，較EE和TSB增加10倍。
[0015]實(shí)施例4
用于克羅諾菌(frmo如cter)冷熱損傷修復(fù)的前增菌液體培養(yǎng)基由下列重量的物質(zhì)組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉(Na2HPO4.12H20)9g、氯化鈉5g、鹿糖110g、丙酮酸鈉1.2g、氯化鎂1.2g、水1000rnl ；
接種克羅諾菌和沙門氏菌的菌懸液各1.ΟμL至緩沖蛋白胨水(BPW)、腸桿菌增菌肉湯(EE)、胰蛋白胨肉湯(TSB)中，37°C 120rpm搖床培養(yǎng)8h，取出培養(yǎng)基，將培養(yǎng)基做十倍稀釋測(cè)定菌落總數(shù)，涂布于克洛諾菌固體顯色培養(yǎng)基表面，37°C恒溫培養(yǎng)18h，結(jié)果顯示培養(yǎng)基表面95%的菌落均為藍(lán)綠色的克羅諾菌菌落。表明該培養(yǎng)基對(duì)部分雜菌還有較好的抑制作用。`
【權(quán)利要求】
1.用于克羅諾菌冷熱損傷修復(fù)的前增菌液體培養(yǎng)基，其特征在于:所述前增菌液體培養(yǎng)基由下列重量的物質(zhì)組成:蛋白胨12~15g、磷酸二氫鉀1.5~3.5g、十二水磷酸氫二鈉8~10g、氯化鈉5g、蔗糖100~120g、丙酮酸鈉0.8~1.2g、氯化鎂0.8~1.2g、水1000ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前增菌液體培養(yǎng)基，其特征在于:所述前增菌液體培養(yǎng)基由下列重量的物質(zhì)組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉9g、氯化鈉5g、蔗糖120g、丙酮酸鈉 1.0g，氯化鎂 1.0g,7jC 1000ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前增菌液體培養(yǎng)基，其特征在于:所述前增菌液體培養(yǎng)基由下列重量的物質(zhì)組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉9g、氯化鈉5g、蔗糖100g、丙酮酸鈉0.8g、氯化鎂0.8g、水1000ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前增菌液體培養(yǎng)基，其特征在于:所述前增菌液體培養(yǎng)基由下列重量的物質(zhì)組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉9g、氯化鈉5g、蔗糖110g、丙酮酸鈉1. 2g、氯化鎂1.2g、水1000ml。
【文檔編號(hào)】C12R1/01GK103865849SQ201410080751
【公開(kāi)日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2014年3月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月7日
【發(fā)明者】葉應(yīng)旺, 李輝, 凌娜, 韓永佳 申請(qǐng)人:合肥工業(yè)大學(xué)