一種檢測(cè)人血清中抗體的elisa試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型設(shè)及免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種檢測(cè)人血清中炎癥性腸病相 關(guān)抗體的酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA)試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 炎癥性腸?。↖抓）是一種病因尚未十分明確的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，包 括潰瘍性結(jié)腸炎（UC)和克羅恩?。–D)。炎癥性腸病的發(fā)病機(jī)制尚未闡明，目前認(rèn)為是基 因易感人群對(duì)腸道共生微生物產(chǎn)生的過(guò)度的先天或后天免疫反應(yīng)所致。是一種病變部位發(fā) 生在直腸和結(jié)腸的非特異性炎癥，病灶主要限于大腸黏膜與黏膜下層?？肆_恩病是一種慢 性肉芽腫性炎癥，病變可累及胃腸道各部位，而W末段回腸及臨近結(jié)腸為主，多呈節(jié)段性、 非對(duì)稱性分布。
[0003] 目前對(duì)于炎癥性腸病的診斷主要依靠臨床表現(xiàn)，結(jié)腸鏡檢查，影像學(xué)檢查W及病 理活檢等，誤診率較高。目前尚缺乏特異性血清學(xué)診斷指標(biāo)。酶聯(lián)免疫法所采用的的是抗 原-抗體的特異性免疫反應(yīng)，較目前臨床上所使用的診斷方法特異性較高，重復(fù)性好，試劑 穩(wěn)定，敏感性好，不需特殊儀器設(shè)備，目前是臨床檢測(cè)的一個(gè)重要方法。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0004] 本實(shí)用新型目的在于：提供一種檢測(cè)人血清中炎癥性腸病相關(guān)抗體的化ISA試劑 盒，為炎癥性腸病的診斷和鑒別診斷提供一種特異性血清學(xué)指標(biāo)，W提高診斷的準(zhǔn)確性。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型所采取的技術(shù)方案是：提供一種檢測(cè)人血清中炎癥 性腸病相關(guān)抗體的化ISA試劑盒。試劑盒由一塊包被有特異祀抗原的96孔酶標(biāo)板、6個(gè)已 知濃度的抗體溶液、陰陽(yáng)性對(duì)照品、酶標(biāo)二抗液、顯色液A、顯色液B、終止液、濃縮洗涂液、 樣品稀釋液、封板膜、錫錐袋、產(chǎn)品說(shuō)明書和產(chǎn)品質(zhì)檢報(bào)告。試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)化ISA方 法，檢測(cè)時(shí)，在相應(yīng)的反應(yīng)孔中加入陰陽(yáng)對(duì)照和待測(cè)樣品，若樣品中含有炎癥性腸病相關(guān)的 特異性抗體，則與微孔表面的祀抗原結(jié)合而形成抗原-抗體復(fù)合物。充分洗涂后加入酶標(biāo) 第二抗體。連接在第二抗體上的酶催化加入的酶底物使反應(yīng)液呈現(xiàn)藍(lán)色。在終止液的存在 下藍(lán)色液體改變?yōu)辄S色。顏色的深淺與樣品中抗體的含量成正相關(guān)。
[0006] 所述酶標(biāo)板是由外框支撐架及放置其上的可拆的12條酶標(biāo)反應(yīng)微孔條組成，每 個(gè)可拆裝酶標(biāo)反應(yīng)微孔條本身構(gòu)成了獨(dú)立的檢測(cè)單位。每個(gè)反應(yīng)微孔條有8個(gè)反應(yīng)孔，每 個(gè)反應(yīng)孔預(yù)包被了特異祀抗原。
[0007] 所述封板膜是可粘貼塑料膜，大小與酶標(biāo)板橫切面大小一致。
[0008] 所述試劑盒中的預(yù)裝試劑可W進(jìn)行滿足96樣本量測(cè)定(包括標(biāo)準(zhǔn)品及陰陽(yáng)性對(duì) 照品)。即可一次滿板大樣本量檢測(cè)，也可W通過(guò)可拆卸微孔板條分批多次檢測(cè)。由于用戶 臨床樣本量多少不同，運(yùn)一特征為客戶提供了多次檢測(cè)的方便條件。同時(shí)侶錐袋一端膠封 拉鏈?zhǔn)胶峡诳蒞反復(fù)操作，因此保證了未使用板條的效期內(nèi)存放。檢測(cè)時(shí)，待檢血清中目標(biāo) 抗體與包被抗原發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，加入標(biāo)記有辣根過(guò)氧化物酶（HRP酶）的第二抗體形 成抗原-抗體-抗體結(jié)合物，用TMB(3, 3'，5, 5'-四甲基聯(lián)苯胺)底物顯色，待檢血清中抗 體含量與底物顯色后的光吸光（OD值）成線性關(guān)系。根據(jù)試劑盒包含的標(biāo)準(zhǔn)曲線將待測(cè)樣 本的OD值代入根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的方程式計(jì)算出待測(cè)樣本中的抗體含量。
[0009] 根據(jù)方法驗(yàn)證程序，本試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品濃度與OD值的相關(guān)曲線的線性回歸系數(shù)（R2 值)大于或等于0. 990,靈敏度小于或等于0.抓/ml,批內(nèi)差小于10%。本試劑盒操作無(wú)需特 殊實(shí)驗(yàn)儀器，僅需酶標(biāo)儀、移液器、振蕩器等實(shí)驗(yàn)室基本儀器。試劑盒附有操作說(shuō)明書，操作 簡(jiǎn)便快捷。
[0010] 本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是：檢測(cè)人血清中炎癥性腸病相關(guān)抗體的ELISA試劑盒靈敏度 高、檢測(cè)快速并可量化，穩(wěn)定性好，可同時(shí)對(duì)多個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)樣本所需要的時(shí)間短， 操作簡(jiǎn)便，不需要特殊實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備，可廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。
【附圖說(shuō)明】
[0011] 圖1為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0012] 圖2為本實(shí)用新型的試劑擺放位置示意圖；
[0013] 圖3為本實(shí)用新型可拆酶標(biāo)板俯視圖；
[0014] 圖4為本實(shí)用新型蓋板膜平面圖；
[001引圖中：1、盒體；2、試劑固定件；3、包被特異祀抗原的酶t不板；4、封板胺；5、柄;準(zhǔn)品； 6、陽(yáng)性質(zhì)控品；7、陰性質(zhì)控品；8、顯色液A;9、顯色液B;10、酶標(biāo)抗原工作液；11、樣品稀釋 液；12、洗涂液；13、終止液。
【具體實(shí)施方式】
[0016] W下通過(guò)實(shí)施例和附圖詳細(xì)說(shuō)明本實(shí)用新型的技術(shù)方案，并不W此限定本實(shí)用新 型的實(shí)施范圍。凡依照本實(shí)用新型披露內(nèi)容所進(jìn)行的本領(lǐng)域等同替換，均屬于本實(shí)用新型 的保護(hù)范圍。
[0017] 參照?qǐng)D1至圖4所示，一種檢測(cè)人血清中炎癥性腸病相關(guān)抗體的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試 劑盒，由盒體1及試劑固定件2、包被特異祀抗原的酶標(biāo)板3遇于侶錐袋31內(nèi)）、封板膜4、 柄準(zhǔn)品5、陽(yáng)性質(zhì)巧品6、陰性質(zhì)巧品7、顯色液A8、、顯色液B9、酶柄;抗原工作液10、樣品稀 釋液11、洗涂液12和終止液13組成。
[001引實(shí)施例1
[0019] -種檢測(cè)人血清中的抗釀酒酵母抗體（ASCA)IgA的化ISA試劑盒。試劑盒由一 塊包被有特異祀抗原的96孔酶標(biāo)板、6個(gè)已知濃度的ASCAIgA抗體溶液、陰陽(yáng)性對(duì)照品、酶 標(biāo)二抗液、顯色液A、顯色液B、終止液、濃縮洗涂液、樣品稀釋液、封板膜、錫錐袋、產(chǎn)品說(shuō)明 書和產(chǎn)品質(zhì)檢報(bào)告。試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)化ISA方法，檢測(cè)時(shí)，在相應(yīng)的反應(yīng)孔中加入陰陽(yáng) 對(duì)照和待測(cè)樣品，若樣品中含有特異性抗體，則與微孔表面的祀抗原結(jié)合而形成抗原-抗 體復(fù)合物。充分洗涂后加入酶標(biāo)二抗液，連接在抗體上的酶催化底物使反應(yīng)液呈現(xiàn)藍(lán)色，在 終止液的存在下改變?yōu)辄S色。顏色的深淺與樣品中抗體的含量成正相關(guān)。
[0020] 所述酶標(biāo)板是由外框支撐架及放置其上的可拆的12條酶標(biāo)反應(yīng)微孔條組成，每 個(gè)可拆裝酶標(biāo)反應(yīng)微孔條有8個(gè)反應(yīng)孔，每個(gè)反應(yīng)孔預(yù)包被特異祀抗原。
[0021] 所述封板膜是可粘貼塑料膜，大小與酶標(biāo)板橫切面大小一致。
[00過(guò)實(shí)施例2
[0023] -種檢測(cè)人血清中抗人中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA)IgG的化ISA試劑盒，試劑 盒由一塊包被有特異祀抗原的96孔酶標(biāo)板、14瓶試劑及兩張封板膜；14瓶試劑分別為：6 瓶已知濃度的UC抗體溶液、陰性對(duì)照樣品、陽(yáng)性對(duì)照樣品、酶標(biāo)二抗液、顯