頭孢克洛及其合成方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種頭孢克洛及其合成方法。頭孢克洛的合成方法包括，在酶存在的情況下，7·A?C?C?A與D·苯甘氨酸甲酯鹽衍生物形成反應混合液進行反應生成頭孢克洛，其中，在反應混合液中加入頭孢克洛晶種，晶種需在反應生成的頭孢克洛析出前加入。該方法提高了反應效率、縮短了合成周期、提高7·A?C?C?A的轉化率，并提高了所得頭孢克洛的純度。
【專利說明】頭孢克洛及其合成方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及頭孢克洛合成領域，特別地，涉及一種生物法合成頭孢克洛的方法及由該方法合成的頭孢克洛。
【背景技術】
[0002]頭孢克洛化學名:該品為(61?,71?)-7-【(1?)-2-氨基-2-苯乙酰氨基)】-3-氯-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環(huán)【4.2.0】辛-2-烯-2-甲酸一水合物。頭孢克洛是第二代口服頭孢菌素。對多種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均具有很強的殺滅作用。對不產酶金黃色葡萄球菌和肺炎球菌的抗菌作用較頭孢羥氨芐強2~4倍?？梢种扑辛鞲惺妊獥U菌，包括對氨芐西林耐藥的菌株。
[0003]目前，國內外生產頭孢克洛的工藝路線有化學法和生物法。目前國內主要采用化學法合成頭孢克洛，國內采用生物法(酶法)的只有DSM合資的新華-肯孚公司?；瘜W法以7-氨基-3-氯頭孢燒酸(7-ACCA)為母核與苯甘氨酸(需對氨基進行保護)在四氫呋喃或乙腈等溶劑中進行縮合合成頭孢克洛，再用DMF、2-萘酚等溶劑形成混合液對頭孢克洛進行純化制得頭孢克洛原料藥。化學法在四氫呋喃、乙腈等大量溶劑中進行合成，對有機溶劑的需求量大。反應過程劇烈，產物的純度低，有機溶媒殘留嚴重。“三廢”的產生量較多，對環(huán)境污染嚴重。
[0004]生物法(酶法)以7-ACCA和苯甘氨酸甲酯(或其他衍生物)為底物利用青霉素酰化酶酶促合成頭孢克洛。CN101090978A中提到在反應過程中加入7-ACCA和/或PGa，并將反應pH值優(yōu)選為6.8~7.2。整個過程中雖然沒有有機溶劑的加入，但產生的雜質較多，所得產物提純工藝非常復雜。經過較長反應周期后轉化率方可達到96%以上，如果縮短反應周期，轉化率會大幅降低。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明目的在于提供一種頭孢克洛及其合成方法，以解決現(xiàn)有技術中酶法合成頭孢克洛過程中雜質多，反應周期長，頭孢克洛純度低，頭孢克洛分離提純方法復雜的技術問題。
[0006]為實現(xiàn)上述目的，根據本發(fā)明的一個方面，提供了一種頭孢克洛合成方法，在酶存在的情況下，7-ACCA與D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物形成反應混合液進行反應生成頭孢克洛，在頭孢克洛析出之前，以純度大于50%的頭孢克洛作為晶種加入到反應混合液中。
[0007]進一步地，晶種濃度≥0.2% (w / V)。
[0008]進一步地，晶種濃度為0.5~5% (w / V)。
[0009]進一步地,晶種在反應混合液進行反應之前加入。
[0010]進一步地，晶種在反應混合液進行反應時加入。
[0011]進一步地，晶種在D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物滴加完后加入到反應混合液中。
[0012]進一步地，D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物為溶液，在反應開始后O~60分鐘內以滴加的方式加完。
[0013]進一步地，D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物在反應開始后O~30分鐘內以滴加的方式加完。
[0014]進一步地，反應pH值為6.0~6.5，溫度為9~17°C。
[0015]根據本發(fā)明的另一方面還提供了一種按上述方法制得的頭孢克洛。
[0016]進一步地，頭孢克洛HPLC含量大于99.6 %。
[0017]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0018]本發(fā)明提供的方法在反應前期加入頭孢克洛作為反應的晶種，提高了反應效率，縮短了合成周期提高7-ACCA的轉化率，并提高所得頭孢克洛的純度。
[0019]本發(fā)明提供的方法為酶法，反應過程中僅需酶催化而且以水為溶解相，無需任何有機溶劑，綠色環(huán)保，線路簡單，產品收率高，純度高。
[0020]除了上面所描述的目的、特征和優(yōu)點之外，本發(fā)明還有其它的目的、特征和優(yōu)點。下面將參照圖，對本發(fā)明作進一步詳細的說明。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]構成本申請的一部分的附圖用來提供對本發(fā)明的進一步理解，本發(fā)明的示意性實施例及其說明用于解釋本發(fā)明，并不構成對本發(fā)明的不當限定。在附圖中:
[0022]圖1是本發(fā)明優(yōu)選實施例的所得頭孢克洛的高效液相色譜(HPLC)圖。`【具體實施方式】
[0023]以下結合附圖對本發(fā)明的實施例進行詳細說明，但是本發(fā)明可以由權利要求限定和覆蓋的多種不同方式實施。
[0024]在頭孢克洛析出前加入頭孢克洛作為反應的晶種，提高反應過程中頭孢克洛的結晶速度，極大的縮短了反應周期?？刂艱-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物的添加方式，提高7-ACCA在反應體系中的溶解度，達到過飽和，提高產物的得率和純度。
[0025]本發(fā)明包括以下步驟:在酶存在的情況下，7-ACCA與D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物形成反應混合液進行反應得到頭孢克洛，在反應混合液中加入晶種，晶種為頭孢克洛。
[0026]反應體系中7-ACCA以溶液形式加入。當7-ACCA以固體進入反應體系后7-ACCA經溶解-擴散-發(fā)生反應過程。當7-ACCA以溶液形式加入反應體系后7-ACCA經擴散-發(fā)生反應過程。省去了溶解的過程，避免了 7-ACCA在反應體系中局部濃度過高導致反應不充分的問題。當7-ACCA固體形式加入后，此時反應體系中7-ACCA的濃度最高且過度集中與某個區(qū)域。頭孢克洛只能在7-ACCA濃度較高的區(qū)域生成，此時作為晶種添加的頭孢克洛無法擴散或靠近該區(qū)域，新生成的頭孢克洛也無法受到遠處晶種的吸引遷離固定化酶附近，而只能就近析出在固定化酶上。說明7-ACCA如果以固體形式加入，即使加入頭孢克洛作為晶體也無法防止頭孢克洛包覆固定化酶。
[0027]作為晶種的頭孢克洛純度需大于50%，晶種的純度表示其中含雜量，通常頭孢克洛中雜質為未反應完全的中間產物，由于不知中間產物具體為反應的哪個階段所產生，因而也不能知道在加入后，會對反應造成何種影響，因而純度不能過低。當雜質過多時，作為晶種加入的頭孢克洛會增加反應體系的雜質量，使得反應過程中發(fā)生其他未知的副反應，這些副反應會降低后續(xù)所得頭孢克洛的純度，增加過濾提純的難度，使得此法不適于工業(yè)運用。優(yōu)選為頭孢克洛晶種純度大于90%。
[0028]所用酶為固定化酶。固定化酶為多孔結構，易附著其他雜質。反應在固定化酶附近發(fā)生，反應體系中僅存在7-ACCA與D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物等物質，而這些物質的結構與頭孢克洛結構相差較大，不能作為頭孢克洛的晶種與之結合。反應所形成的新的頭孢克洛無法迅速進入溶液中，而此時反應快速進行，不斷有新的頭孢克洛生成。反應產生的頭孢克洛就近附著在固定化酶上并析出。隨著反應的進行固定化酶上裸露的酶被新產生的頭孢克洛覆蓋，反應體系中未反應的原料物無法接近酶發(fā)生反應，隨著反應時間的延長，反應不再進行。因而現(xiàn)有技術中酶法反應周期較長。
[0029]加入晶種后，晶種均勻分散于反應體系各處。反應在固定化酶附近發(fā)生，當產生第一個新的頭孢克洛分子后，該新產生的頭孢克洛水合物能受到其附近晶種的分子力吸引，迅速擺脫固定化酶而溶入反應體系中，結合于晶種上。隨著反應的進行，該過程重復多次，晶種體積逐漸擴大，頭孢克洛析出。晶種的加入能避免新產生的頭孢克洛對固定化酶的包覆。使得整個反應過程中固定化酶的酶能一直裸露，持續(xù)催化反應體系中的原料物，使得反應持續(xù)發(fā)生。隨著反應時間的延長，反應徹底進行，因而加入晶種后反應周期縮短，所得頭孢克洛的產率得到提高。晶種的添加使得反應得到的頭孢克洛在溶液中能盡快相互接觸結晶析出，促進反應正向進行，使得反應充分。
[0030]在晶種的選擇上，采 用反應體系中不存在的物質會引入新的雜質，為后續(xù)產物的分離制造麻煩。頭孢克洛本身對相同結構的物質親和力較強，因而能起到晶種的作用。此處的晶種可以各類頭孢克洛，既可以是不含水的頭孢克洛也可以含水量較高的頭孢克洛(含水量可以大于20% )。新生成的頭孢克洛溶于反應體系溶液中再析出，因而所得頭孢克洛含水量9%左右。但這并不會影響最終所得頭孢克洛的純度。優(yōu)選為經過2-萘酚、DMF分離提純得到的頭孢克洛。即含水量為4.6~6.0%的頭孢克洛。由于其分子結構中僅含一個水分子，與新生成的頭孢克洛結構最接近，因而析出效果最優(yōu)。此時晶種縮短反應周期的效果最優(yōu)。
[0031]晶種頭孢克洛在反應生成的頭孢克洛析出之前加入。進一步優(yōu)選為在反應混合液中反應發(fā)生前或反應發(fā)生時加入，此時可通過實時提取反應混合液測定其中頭孢克洛的生成量來確定反應是否發(fā)生。反應發(fā)生時可以是反應開始后至頭孢克洛析出前的任意時段。當然晶種也可以是在D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物滴加完后加入反應混合液中。
[0032]當反應體系中頭孢克洛的濃度大于40~45mg / ml時，頭孢克洛析出。頭孢克洛的加入方式既可以是在頭孢克洛析出前的某一個時間點一次全部加入反應體系中，也可以是分多次地加入反應體系中。優(yōu)選為在頭孢克洛析出前某一時間點一次全部加入晶種。按這種方式添加能使反應體系中快速形成多個晶種，晶種均勻分布于反應體系各部分。為產物的析出提供多個位點。反應才開始不久，無論所生成的頭孢克洛處于反應體系的任意位置，在其附近均有晶核等待與之結合，新生成的頭孢克洛與晶種結合后，析出，能進一步的降低反應體系中頭孢克洛的濃度，促進反應正向進行。能進一步縮短反應周期。優(yōu)選晶種的添加濃度>0.2% (w / V)。按此濃度添加，能在反應體系中提供足夠量的結晶核心，有利于進一步縮短反應周期。但晶種的添加量不能過大，否則反應體系粘度過大無法操作。優(yōu)選為0.5~5% (w / V)。按此比例添加，既能避免過濃的晶種加大反應體系粘度，使反應無法順暢進行，又能避免晶種的浪費，還能實現(xiàn)本發(fā)明的目的。
[0033]顯然的，在酶法反應中加入晶種后，可以按照常用工藝進行反應，同樣可以起到縮短反應周期的作用。優(yōu)選的將D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物溶解為溶液，在反應開始后O~60分鐘內以滴加的方式加完。進一步，在O~30分鐘內以滴加的方式加完。D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物可為D-苯甘酸甲酯鹽酸鹽、D-苯甘氨酸甲酯硫酸鹽、D-苯甘氨酸甲酯甲磺酸鹽等。由于反應開始后O~60分鐘7-ACCA為過飽和溶液，此時以滴加方式勻速加入D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物，D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物進入反應體系就與7-ACCA發(fā)生反應，反應發(fā)生點附近7-ACCA濃度降低，使得整個反應體系能溶解更多的7-ACCA，7-ACCA在反應體系中過飽。7-ACCA進入反應體系的量增加，為提高頭孢克洛的產率打好基礎。
[0034]反應時反應體系pH值優(yōu)選為5.8~6.6,進一步優(yōu)選為6.0~6.5。由于pH大于
7.0時頭孢克洛穩(wěn)定性變差，如果反應體系維持較高pH值，部分已生成的頭孢克洛會再次分解，使得體系中存在一些不確定的雜質，為后續(xù)分離提純增加難度。當pH值為6.0~6.5時，反應體系中新生成的頭孢克洛穩(wěn)定性高，同時配合晶種的作用，新生成的頭孢克洛能快速形成結晶，避免再次發(fā)生分解，從而縮短反應周期，提高產品產率和純度。反應體系的PH值升高時可通過任意常用溶劑進行調節(jié)，優(yōu)選為氨水進行調節(jié)。PH值控制手段簡便。反應發(fā)生溫度優(yōu)選為5~25°C，進一步優(yōu)選為9~17°C。溫度過高所得頭孢克洛會發(fā)生分解，增加體系中雜質的量，為分離提純制造困難。溫度過低會延長反應時間，降低酶活，使反應不充分。因而按此優(yōu)選反應溫度。
[0035]所加酶為酶法制備頭孢克洛常用的酶如:青霉素酰基轉移酶、青霉素?；傅瓤捎糜陬^孢克洛合成的酶。酶的加入量可按常規(guī)工藝進行選擇、7-ACCA與D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物的摩爾比也可按常規(guī)工藝選擇。
[0036]本發(fā)明另一方面提供了一種按上述方法制得的頭孢克洛，該頭孢克洛中雜質HPLC含量小于0.4%，頭孢克洛HPL`C含量大于99.6%。說明按此方法制得的頭孢克洛純度高，提純簡便，適于工業(yè)化應用。
[0037]實施例
[0038]以下實施例中所得頭孢克洛均以下步驟進行精制、回收。所用酶為青霉素?；D移酶購于湖南福來格生物技術有限公司。以下實施例中所用物質、儀器均為市售。
[0039]精制:用鹽酸完全溶解頭孢克洛懸濁液，過濾不溶物、碳脫后，溶液用氨水調PH4.0~5.5，溫度2~15°C，將頭孢克洛結晶出來，結晶后的溶液稱為結晶母液。此過程獲得的頭孢克洛濕品經干燥后即為精制的頭孢克洛。
[0040]回收:結晶母液中加入一定量的2-萘酚或DMF，使頭孢克洛形成相應的復合物，過濾收集頭孢復合物，加入一定量的水和鹽酸溶解復合物，加入乙酸乙酯或二氯甲烷萃取2-萘酚，分液后將水相用氨水調pH4.0~5.5，得回收的頭孢克洛濕品，經干燥后回收頭孢克洛。回收的頭孢克洛可做為的合成過程的晶種。
[0041]7-ACCA轉化率=(反應時投入的7-ACCA重量-反應后溶液中殘留的7-ACCA重量)/反應時投入7-ACCA的重量
[0042]頭孢克洛的重量收率=精制后頭孢克洛重量/反應時投入的7-ACCA重量
[0043]高效液相色譜法條件為:
[0044]流動相A:稱取6.8g磷酸二氫鉀，加1000ml超純水溶解后，用lmol / L的NaOH溶液調pH至5.8，用孔徑0.22 μ m的水系濾膜過濾后，脫氣20分鐘左右。
[0045]流動相B:量取50ml乙腈，加入到450ml的A相中，混勻后脫氣20分鐘左右。
[0046]柱子類型:KromasiIC185 μ m250mmX 4.6mm。
[0047]實施例1
[0048]取30g (128mmol) 7-ACCA加入200ml純水用6mol / L氨水溶解，溶解后ρΗ7.8~
8.1，加入2000U青霉素?；D移酶，O~10分鐘內勻速加入D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽溶液(溶液配制方法28.4g(141mmol)固體加入60ml純水)。反應開始5分鐘后，反應溶液中
0.2% (w / v)頭孢克洛未析出前，一次性加入頭孢克洛晶種(純度大于90% )。合成pH6.4，溫度15°C。
[0049]反應120分鐘取樣HPLC檢測，此時的7-ACCA濃度為0.27mg / ml (參見圖1)，7-ACCA轉化率99.6%，篩網分離青霉素酰基轉移酶與頭孢克洛懸濁液，頭孢克洛懸濁液精制后重量為43.6g，并從結晶母液中使用2-萘酚回收頭孢克洛，獲得回收的頭孢克洛2.9g，頭孢克洛總重量收率為1.49。
[0050]實施例2
[0051]取30g(128mmol)7-ACCA加入200ml純水后加6mol / L氨水溶解，加入2000U青霉素?；D移酶，O~10分鐘內勻速加入D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽溶液(溶液配制方法28.4g(Hlmmol)固體加入60ml純水)，反應開始15分鐘后，反應溶液中頭孢克洛未析出前，一次性加入實例I中2-萘酚回收的頭孢克洛2.9g晶種(純度大于90% )，合成pH6.4，溫度15°C。
[0052]反應120分鐘取樣HPLC檢測，此時的7-ACCA濃度為0.38mg / ml, 7-ACCA轉化率99.5%，篩網分離青霉素?；D移酶與頭孢克洛懸濁液，頭孢克洛懸濁液精制后重量為44.50g，頭孢克洛重量收率為1.48。
[0053]實施例3
[0054]按摩爾比1:1.05取7-ACCA與D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽。7-ACCA加入純水用6mol / L氨水溶解，加入12000U青霉素酰基轉移酶，O~30分鐘內勻速加入D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液，反應未開始時，分3次加入5% (w / v)頭孢克洛作為晶種(純度大于50% )，反應 pH5.8，溫度 5°C。
[0055]60分鐘取樣HPLC檢測，此時的7-ACCA濃度為0.18mg / ml，7-ACCA轉化率99.7%，頭孢克洛總重量收率為1.49。
[0056]實施例4
[0057]按摩爾比1:1.2取740^與0-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽。7-40^加入純水用611101 /L氨水溶解，加入1200U青霉素?；D移酶，O~60分鐘內勻速加入D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液，反應開始5分鐘后，反應溶液中頭孢克洛未析出前，等分四次加入0.5% (w / v)頭孢克洛作為晶種(純度大于60% )，反應pH6.6，溫度25°C。
[0058]60分鐘取樣HPLC檢測，此時的7-ACCA濃度為0.20mg / ml，7-ACCA轉化率99.7%，頭孢克洛總重量收率為1.47。
[0059]實施例5
[0060]按摩爾比1:1.05取7-ACCA與D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽。7-ACCA加入純水用6mol / L氨水溶解，加入2000U青霉素?；D移酶，O~35分鐘內勻速加入D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液，D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液滴加完成后，一次性加入0.7% (w / V)頭孢克洛作為晶種(純度大于80% )，反應pH6，溫度9°C。
[0061 ] 180分鐘取樣HPLC檢測，此時的7-ACCA濃度為0.62mg / ml，7-ACCA轉化率99.2%，頭孢克洛總重量收率為1.45。
[0062]對比例1I
[0063]取30g(128mmol) 7-ACCA加入200ml純水后加6mol / L氨水溶解，加入2000U青霉素?；D移酶，O~10分鐘內勻速加入D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽溶液(溶液配制方法28.4g(141mmol)固體加入 60ml 純水),合成 pH6.4,溫度 15。。。
[0064]120分鐘取樣HPLC檢測，此時的7-ACCA濃度為15.9mg / ml, 7-ACCA轉化率76.7 %，180分鐘取樣HPLC檢測，此時的7-ACCA濃度為14.5mg / ml，7-ACCA轉化率79.2%，反應360分鐘取樣HPLC檢測，此時的7-ACCA濃度為13.2mg / ml，7_ACCA轉化率
83.5%,
[0065]對比例2
[0066]取30g(128mmol) 7-ACCA加入200ml純水后加6mol / L氨水溶解，加入2000U青霉素?；D移酶，一次將D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽溶液(溶液配制方法28.4g(141mmol)固體加入60ml純水)加入，7-ACCA很快析出，合成pH6.4，溫度15°C。
[0067]反應180分鐘物料變得很粘稠，與青霉素酰基轉移酶難以分離。
[0068]對比例3
[0069]按摩爾比1:1.10取7-ACCA與D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽。7-ACCA加入純水用6mol / L氨水溶解，加入2000U青霉素?；D移酶，O~30分鐘內勻速加入D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液，反應開始第5分鐘時加入0.2% (w / V) 7-ACCA作為晶種，反應pH5.5，溫度 17。。。
[0070]當7-ACCA加入后，馬上發(fā)現(xiàn)有大量已溶解的7-ACCA再次析出，反應180分鐘物料變得很粘稠，與青霉素酰基轉移酶難以分離。
[0071]對比例4
[0072]按摩爾比1:1.10取7-ACCA與D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽。7-ACCA加入純水用6mol / L氨水溶解，加入2000U青霉素?；D移酶，O~70分鐘內勻速加入D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液，反應開始第5分鐘時加入0.1 % (w / v)頭孢克洛作為晶種，反應pH6.8，溫度18 °C。
[0073]120分鐘取樣HPLC檢測，此時的7-ACCA濃度為10.9mg / ml，7-ACCA轉化率
84.3%，180分鐘取樣HPLC檢測，此時的7-ACCA濃度為8.7mg / ml，7-ACCA轉化率87.5%,反應360分鐘取樣HPLC檢測，此時的7-ACCA濃度為2.9mg / ml, 7-ACCA轉化率95.6%.[0074]對比例5
[0075]按CN101090978A中的步驟合成頭孢克洛。
[0076]按摩爾比1:1.10取7-ACCA與D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽。7-ACCA加入純水用6mol / L氨水調pH7.0,使7-ACCA少量溶解，加入2000U青霉素?；D移酶，O~120分鐘內勻速加入D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液，pH7.0，溫度20°C。
[0077]反應270分鐘取樣HPLC檢測，此時的7-ACCA濃度為5.92mg / ml, 7-ACCA轉化率91 %，反應380分鐘取樣HPLC檢測，此時的7-ACCA濃度為1.24mg / ml, 7-ACCA轉化率97%，頭孢克洛總重量收率為1.43。反應開始200分鐘內7-ACCA未完全溶解。
[0078]實施例1中所得頭孢克洛經本公司以及第三方公司實驗驗證。反應發(fā)生120分鐘內7-ACCA的轉化率大于99%，頭孢克洛重量收率大于1.45，2-萘酚或DMF、乙酸乙酯(或二氯甲烷)殘留均少于lOppm。參見圖1為所得頭孢克洛的HPLC曲線，可知所得產物為頭孢克洛，且純度高，基本沒有其他雜質產生。
[0079]而未添加晶種的對比例I中，反應180分鐘后，7-ACCA的轉化率僅為79.2 %。
[0080]在不控制D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物的加入方式的對比例2中，得到頭孢克洛HPLC含量僅為90%，且其中雜志含量較多且復雜。
[0081 ] 對比例3中采用7-ACCA作為晶種，在7-ACCA加入后，溶解的7-ACCA再次析出，影響反應的進程，與青霉素?；D移酶難以分離，無法得到頭孢克洛，無法實現(xiàn)本發(fā)明目的。
[0082]按照CN101090978A方法復現(xiàn)實驗，反應270分鐘后7-ACCA轉化率僅為91 %，反應周期長，不能實現(xiàn)縮短反應周期的目的。
[0083]由上可見，本發(fā)明提供的方法能有效的縮短反應周期，所得頭孢克洛純度高，雜質基本沒有，適于工業(yè)運用。
[0084]以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領域的技術人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應`包含在本發(fā)明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種頭孢克洛合成方法，在酶存在的情況下，7-ACCA與D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物形成反應混合液進行反應生成頭孢克洛，其特征在于，在所述頭孢克洛析出之前，以純度大于50 %的頭孢克洛作為晶種加入到所述反應混合液中。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述晶種濃度≥0.2% (w / V)。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述晶種濃度為0.5~5% (w / V)。
4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述晶種在所述反應混合液進行反應之前加入。
5.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述晶種在所述反應混合液進行反應時加入。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述晶種在所述D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物滴加完后加入到所述反應混合液中。
7.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其特征在于，所述D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物為溶液，在反應開始后O~60分鐘內以滴加的方式加完。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述D-苯甘氨酸甲酯鹽衍生物在反應開始后O~30分鐘內以滴加的方式加完。
9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述反應PH值為6.0~6.5，溫度為9~17。。。
10.一種按權利要求1至9中任一項所述的頭孢克洛合成方法制得的頭孢克洛。
11.根據權利要求10所述的頭孢克洛，其特征在于，所述頭孢克洛HPLC含量大于99.6%。
【文檔編號】C12P35/04GK103757085SQ201310629212
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年11月28日 優(yōu)先權日:2013年11月28日
【發(fā)明者】許崗, 曾紅宇, 易杰 申請人:湖南福來格生物技術有限公司