一種中國被毛孢菌絲體提取物的制備方法及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及中國被毛孢菌絲體提取物的制備方法及其在抗氧化方面的應(yīng)用。該提取物是由中國被毛孢菌絲體經(jīng)粉碎、提取、大孔樹脂吸附、濃縮干燥所得。該提取物是一種天然的，微生物源的、無毒的抗氧化劑；經(jīng)檢測該其清除自由基IC50為0.052±0.003mg/mL，其活性能達(dá)到Vc的1/10；該提取物作為活性成分制成各種劑型的抗氧化產(chǎn)品，具有功效活性顯著和作用機(jī)理清楚等特點(diǎn)，且性質(zhì)穩(wěn)定，成分確定，安全性高，可靠性強(qiáng)。本發(fā)明中國被毛孢菌絲體提取物能用于抗氧化藥品、保健食品和食品。
【專利說明】
一種中國被毛孢菌絲體提取物的制備方法及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及中國被毛孢菌絲體提取物的制備方法及其在抗氧化方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]中國被毛孢(Hirsutella sinensis)是從天然蟲草中分離得到的無性型蟲草菌株。由于野生冬蟲夏草本身的生長周期和生長環(huán)境限制，其表現(xiàn)為資源稀缺，而且產(chǎn)業(yè)化對其資源和生境具有毀滅性傷害。因此，通過人工方法分離和培育的菌種來獲得冬蟲夏草菌絲體，對冬蟲夏草藥用價值的開發(fā)和產(chǎn)業(yè)化具有重要的意義。
[0003]現(xiàn)代藥理研究結(jié)果表明，冬蟲夏草有較明顯的抗氧化功效。實(shí)驗(yàn)證實(shí)天然冬蟲夏草和冬蟲夏草菌絲體均表現(xiàn)出較好的抗氧化活性，可以保護(hù)脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和低密度脂蛋白過氧化。
[0004]越來越多的研究顯示抗氧化是預(yù)防衰老的重要步驟，因?yàn)樽杂苫蜓趸瘎⒓?xì)胞和組織分解，影響代謝功能，并會引起不同的健康問題。如果能夠消除過多的氧化自由基，對于許多由自由基引起的、與老化相關(guān)的疾病都能夠預(yù)防。例如常見的癌癥、動脈硬化、糖尿病、白內(nèi)障、心血管病、老年癡呆、關(guān)節(jié)炎等，這些疾病都被認(rèn)為與自由基相關(guān)。而目前抗氧化劑大都為化學(xué)合成產(chǎn)品，隨著生活水平的提高，人們越來越追求純天然產(chǎn)品，因此，以天然抗氧化劑取代合成抗氧化劑是今后的發(fā)展趨勢。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明目的是提供一種中國被毛孢菌絲體提取物，其重金屬含量低、溶解性好、產(chǎn)品不易氧化，服用劑量小，能用于抗氧化藥品、保健食品和食品。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種中國被毛孢菌絲體提取物的制備方法，包含以下步驟:中國被毛孢菌絲體干燥，粉碎，取60目篩粉，得到中國被毛孢菌粉;將中國被毛孢菌粉和提取溶劑乙醇混合均勻，微波提取1~3次，得到中國被毛孢菌絲體提取液;提取液減壓濃縮，大孔樹脂靜態(tài)吸附12?24h后，分別用水、30?50% (v/v)乙醇和80?90%( v/v)乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮、干燥，得到中國被毛孢菌絲體提取物。
[0006]所述的提取溶劑乙醇的濃度為50%?70%(v/v)。
[0007]所述的提取溶劑的用量與中國被毛孢菌粉的比例為20:1?40:1mL/go
[0008]所述的微波提取的條件為:微波功率500?600W，溫度40?60°C，提取時間15?45min。
[0009]所述的大孔樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂。
[0010]所述的乙醇洗脫液為80?90%( v/v)的乙醇洗脫液。
[0011]本發(fā)明還包含上述中國被毛孢菌絲體提取物在制備抗氧化藥物、保健食品和食品中的應(yīng)用。本發(fā)明提取物經(jīng)藥理活性檢驗(yàn)，具有較強(qiáng)的抗氧化活性，且所需劑量低。
[0012]本發(fā)明的有益效果: (I)本發(fā)明從中國被毛孢菌絲體中可制取得到一種具有抗氧化活性的提取物，是一種天然的，微生物源的、無毒的抗氧化劑。
[0013](2)本發(fā)明得到的提取物具有顯著地抗氧化活性，測定結(jié)果顯示，中國被毛孢菌絲體提取物的清除自由基IC5Q為0.052 ± 0.003mg/mL，其活性能達(dá)到Vc的1/10。
[0014](3)本發(fā)明的提取物作為活性成分制成各種劑型的抗氧化產(chǎn)品，具有功效活性顯著和作用機(jī)理清楚等特點(diǎn)，且性質(zhì)穩(wěn)定，成分確定，安全性高，可靠性強(qiáng)，符合藥物制劑的開發(fā)要求。
[0015](4)冬蟲夏草是一種珍稀的藥用資源，本發(fā)明從中國被毛孢菌絲體中制取的提取物，可替代冬蟲夏草的部分功效，對其資源的保護(hù)和產(chǎn)業(yè)的開發(fā)具有一定的意義。
【具體實(shí)施方式】
[0016]實(shí)施例1
中國被毛孢菌絲體提取物的制備及檢測 (I)中國被毛孢菌絲體提取物的制備
中國被毛孢菌絲體干燥，粉碎，過60目篩，得到中國被毛孢菌粉;將中國被毛孢菌粉和提取溶劑50%乙醇溶液混合均勻，置于微波萃取儀中，微波功率500W，固液比1:20g/mL，提取時間45min，萃取溫度60°C的條件下，提取I次，得到中國被毛孢菌絲體微波提取液;將提取液減壓濃縮，上DlOl型大孔吸附樹脂，靜態(tài)吸附24h，依次用水、30%(v/v)和90%(v/v)乙醇洗脫，收集90%( v/v)乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到中國被毛孢菌絲體提取物。
[0017](2)中國被毛孢菌絲體提取物的檢測
DPPH乙醇溶液配制:精確稱取2.5mg DPPH，避光充分溶解于50mL無水乙醇中，DPPH溶液濃度為0.05 mg/mL，備用；
樣品溶液的配制:待測物配制成100mg/mL儲備液，準(zhǔn)確量取IyL儲備液加入含199yL無水乙醇的EP管中，得到濃度為0.500mg/mL的最大濃度待測溶液，等比稀釋分別得到濃度為0.250、0.100、0.050 和 0.025mg/mL 待測溶液；
試驗(yàn)步驟:先在96孔板中分別加入各受試樣品10yL，空白孔加入等量無水乙醇，每個樣品濃度3孔重復(fù)，分組標(biāo)記，用多道移液器每孔加入200yLDPPH乙醇溶液，室溫避光反應(yīng)30min，在波長517nm處測定各孔吸光度值，抗氧化能力以對自由基DPPH的清除率表示，計算待測物的IC50。
[0018]測定結(jié)果顯示，中國被毛孢菌絲體提取物I的清除自由基IC5Q為0.074 mg/mL，維生素 C( ICso=0.005mg/mL)為其 15 倍，蘆丁( IC5q=0.015mg/mL)為其 5 倍。
[0019]實(shí)施例2
中國被毛孢菌絲體提取物的制備及檢測 (I)中國被毛孢菌絲體提取物的制備
中國被毛孢菌絲體干燥，粉碎，過60目篩，得到中國被毛孢菌粉;將中國被毛孢菌粉和提取溶劑70%(v/v)乙醇溶液混合均勻，置于微波萃取儀中，微波功率600W，固液比1:40g/mL，提取時間15min，萃取溫度40°C的條件下，提取3次，得到中國被毛孢菌絲體微波提取液；將提取液減壓濃縮，上D1I型大孔吸附樹脂，靜態(tài)吸附12h，依次用水、50%(v/v)和80%( v/v)乙醇洗脫，收集80%(v/v)乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到中國被毛孢菌絲體提取物。
[0020](2)中國被毛孢菌絲體提取物的檢測
DPPH乙醇溶液配制:精確稱取2.5mg DPPH，避光充分溶解于50mL無水乙醇中，DPPH溶液濃度為0.05 mg/mL，備用；
樣品溶液的配制:待測物配制成100mg/mL儲備液，準(zhǔn)確量取IyL儲備液加入含199yL無水乙醇的EP管中，得到濃度為0.500mg/mL的最大濃度待測溶液，等比稀釋分別得到濃度為0.250、0.100、0.050和0.025 mg/mL待測溶液；
試驗(yàn)步驟:先在96孔板中分別加入各受試樣品10yL，空白孔加入等量無水乙醇，每個樣品濃度3孔重復(fù)，分組標(biāo)記，用多道移液器每孔加入200yL DPPH乙醇溶液，室溫避光反應(yīng)30min，在波長517nm處測定各孔吸光度值，抗氧化能力以對自由基DPPH的清除率表示，計算待測物的IC50。
[0021 ]測定結(jié)果顯示，中國被毛孢菌絲體提取物I的清除自由基IC5Q為0.054mg/mL，維生素C( ICso=0.005mg/mL)為其 11倍，蘆丁( IC5q=0.015mg/mL)為其4倍。
[0022]實(shí)施例3
中國被毛孢菌絲體提取物的制備及檢測 (I)中國被毛孢菌絲體提取物的制備
中國被毛孢菌絲體干燥，粉碎，過60目篩，得到中國被毛孢菌粉;將中國被毛孢菌粉和提取溶劑60%(v/v)乙醇溶液混合均勻，置于微波萃取儀中，微波功率550W，固液比1: 30g/mL，提取時間30min，萃取溫度50°C的條件下，提取2次，得到中國被毛孢菌絲體微波提取液；將提取液減壓濃縮，上D1I型大孔吸附樹脂，靜態(tài)吸附18h，依次用水、40%(v/v)和85%( v/v)乙醇洗脫，收集85%(v/v)乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到中國被毛孢菌絲體提取物。
[0023](2)中國被毛孢菌絲體提取物的檢測
DPPH乙醇溶液配制:精確稱取2.5mg DPPH，避光充分溶解于50mL無水乙醇中，DPPH溶液濃度為0.05 mg/mL，備用；
樣品溶液的配制:待測物配制成100mg/mL儲備液，準(zhǔn)確量取IyL儲備液加入含199yL無水乙醇的EP管中，得到濃度為0.500mg/mL的最大濃度待測溶液，等比稀釋分別得到濃度為0.250、0.100、0.050和0.025 mg/mL待測溶液；
試驗(yàn)步驟:先在96孔板中分別加入各受試樣品10yL，空白孔加入等量無水乙醇，每個樣品濃度3孔重復(fù)，分組標(biāo)記，用多道移液器每孔加入200yL DPPH乙醇溶液，室溫避光反應(yīng)30min，在波長517nm處測定各孔吸光度值，抗氧化能力以對自由基DPPH的清除率表示，計算待測物的IC50。
[0024]測定結(jié)果顯示，中國被毛孢菌絲體提取物I的清除自由基IC5Q為0.068mg/mL，維生素 C( ICso=0.005mg/mL)為其 14 倍，蘆丁( IC50=0.015mg/mL)為其 4.5 倍。
[0025]從上述結(jié)果可以表明，中國被毛孢菌絲體提取物具有較強(qiáng)的抗氧化活性，且所需劑量也很低。
[0026]實(shí)施例4
中國被毛孢菌絲體提取物片劑及檢測
(I)中國被毛孢菌絲體提取物片劑的制備:
取實(shí)施例2中制得的中國被毛孢提取物，干燥，粉碎，過100目篩，備用;干燥粉碎后的中國被毛孢提取物，麥芽糊精，微晶纖維素，硬脂酸鎂按5:3:2:0.1的比例混合，制粒、壓片，得到中國被毛孢提取物片劑。
[0027](2)中國被毛孢菌絲體提取物片劑的檢測:
DPPH乙醇溶液配制:精確稱取2.5mg DPPH，避光充分溶解于50mL無水乙醇中，DPPH溶液濃度為0.05 mg/mL，備用；
樣品溶液的配制:中國被毛孢菌絲體提取物片劑配制成100mg/mL儲備液，準(zhǔn)確量取IyL儲備液加入含199yL無水乙醇的EP管中，得到濃度為0.500mg/mL的最大濃度待測溶液，等比稀釋分別得到濃度為0.250,0.100,0.050和0.025 mg/mL待測溶液；
試驗(yàn)步驟:先在96孔板中分別加入各受試樣品10yL，空白孔加入等量無水乙醇，每個樣品濃度3孔重復(fù)，分組標(biāo)記，用多道移液器每孔加入200yL DPPH乙醇溶液，室溫避光反應(yīng)30min，在波長517nm處測定各孔吸光度值，抗氧化能力以對自由基DPPH的清除率表示，計算待測物的IC50。
[0028]測定結(jié)果顯示，中國被毛孢菌絲體提取物片劑的清除自由基IC5Q為0.132mg/mL，說明具有抗氧化活性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種中國被毛孢菌絲體提取物的制備方法，包含以下步驟: 中國被毛孢菌絲體干燥，粉碎，取60目篩粉，得到中國被毛孢菌粉； 將中國被毛孢菌粉和提取溶劑乙醇混合均勻，微波提取I?3次，得到中國被毛孢菌絲體提取液； 提取液減壓濃縮，大孔樹脂靜態(tài)吸附12?24h后，分別用水、30?50%(v/v)乙醇和80?90%(v/v)乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮、干燥，得到中國被毛孢菌絲體提取物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中國被毛孢菌絲體提取物的制備方法，其特征在于:所述的提取溶劑乙醇的濃度為50%?70%( v/v)。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中國被毛孢菌絲體提取物的制備方法，其特征在于:所述的提取溶劑的用量與中國被毛孢菌粉的比例為20:1?40:1 mL/go4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中國被毛孢菌絲體提取物的制備方法，其特征在于:所述的微波提取的條件為微波功率500?600W，溫度40?60 °C，提取時間15?45min。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中國被毛孢菌絲體提取物的制備方法，其特征在于:所述的大孔樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中國被毛孢菌絲體提取物的制備方法，其特征在于:所述的乙醇洗脫液為80?90%( v/v)的乙醇洗脫液。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中國被毛孢菌絲體提取物的應(yīng)用，其特征在于:中國被毛孢菌絲體提取物在抗氧化藥物、保健食品和食品中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K36/068GK105878297SQ201610314218
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年5月13日
【發(fā)明人】王洪倫, 韓發(fā), 劉鑫年, 鄧?yán)?
【申請人】中國科學(xué)院西北高原生物研究所湖州高原生物資源產(chǎn)業(yè)化創(chuàng)新中心