專利名稱：Toll樣受體3拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及Toll樣受體3(TLR;3)抗體拮抗劑、編碼TLR3抗體拮抗劑或其片段的多核苷酸以及制備和使用所述抗體拮抗劑和多核苷酸的方法。
背景技術(shù)：
Toll樣受體(TLR)可調(diào)控天然免疫反應(yīng)的激活并通過引發(fā)響應(yīng)細(xì)菌、病毒、寄生和(在一些情況下)宿主衍生的配體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng)來影響獲得性免疫的發(fā)展 (Lancaster 等人，J. Physiol. 563 :945-955,2005)。位于質(zhì)膜的 TLR(TLR1、TLR2、TLR4 和TLR6)可識(shí)別包括細(xì)菌和真菌的蛋白質(zhì)或類脂組分在內(nèi)的配體。主要的情況是胞內(nèi)的 TLR(TLR3、TLR7和TLR9)分別響應(yīng)dsRNA、ssRNA和未甲基化的CpG DNA。據(jù)信，TLR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的失調(diào)會(huì)引起多種問題，并且治療策略正在向著這個(gè)方向發(fā)展(Hoffman等人，Nat. Rev.Drug Discov. 4 :879-880,2005 ；Rezaei, Int.Immunopharmaco1. 6 :863-869,2006 ； ffickelgren, Science 312 :184-187,2006) 例如，TLR4、TLR7 和 TLR9 的拮抗劑分別在臨床開發(fā)上用于嚴(yán)重的敗血病和狼瘡。(Kanzler等人，Nat. Med. 13 =552-559, 2007)。TLR3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在發(fā)炎或病毒感染期間由壞死細(xì)胞釋放的dsRNA、mRNA或RNA激活。TLR3激活誘導(dǎo)干擾素和促炎性細(xì)胞因子的分泌，并在某些微生物感染期間觸發(fā)具有保護(hù)作用的免疫細(xì)胞活化和細(xì)胞募集。例如，在兒童中顯性負(fù)TLR3等位基因與用HSV-I 初次感染時(shí)對(duì)單純皰疹性腦炎的敏感性增加有關(guān)(Zheng等人，Science 317 :1522-1527 2007)。在小鼠中，TLR3缺乏與柯薩奇病毒攻擊時(shí)存活率降低有關(guān)(Richer等人，PLoS One 4 :e4127，2009)。然而，據(jù)顯示不受控制或失調(diào)的TLR3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在包括西尼羅河病毒、靜脈病毒、牛痘和甲型流感在內(nèi)的某些病毒感染模型中引起發(fā)病和死亡(Wang等人，Nat. Med. 10 :1366-1373,2004 ；Gowen 等人，J. Immunol. 177 :6301-6307,2006 ；Hutchens 等人， J. Immunol. 180 :483-491,2008 ；Le Goffic 等人，PloS Pathog. 2 :E53，2006)。TLR3還表現(xiàn)出可在一系列炎性、免疫介導(dǎo)和自身免疫疾病中驅(qū)動(dòng)致病機(jī)制，包括例如膿毒性休克(Cavassani 等人，J. Exp. Med. 205 =2609-2621,2008)、急性肺損傷(Murray 等人，Am. J. Respir. Crit. Care Med. 178 :1227_1237，2008)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Kim 等人， Immunol. Lett. 124 :9-17,2009 ；Brentano 等人，Arth. Rheum. 52 :2656-2665,2005)、哮喘 (Sugiura 等人，Am. J. Resp. Cell Mol. Biol. 40 :654-662,2009 ；Morishima 等人，Int. Arch-Allergy Immunol. 145 163-174，2008 ；Stowell 等人，Respir. Res. 10 :43,2009)、炎性腸疾病例如克隆氏病和潰瘍性結(jié)腸炎(Zhou等人，J. Immunol. 178 4548-4556，2007 ；Zhou 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 104 :7512-7515,2007),自體免疫性肝臟疾病(Lang 等人，J.Clin. Invest. 116 :2456-2463,2006)和 I 型糖尿病(Dogusan 等人，Diabetes 57 1236-1245，2008 ；Lien 和 Zipris, Curr. Mol. Med. 9 :52-68, 2009)。此外，據(jù)顯示 TLR3 表達(dá)的器官特異性增加與由失調(diào)局部炎性反應(yīng)驅(qū)動(dòng)的多種病理狀態(tài)相關(guān)，例如肝臟組織的原發(fā)性膽汁性肝硬化(Takii等人Lab Invest. 85 =908-920,2005)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Ospelt等人，Arthritis Rheum. 58 :3684-3692,2008)和鼻粘膜的過敏性鼻炎患者(Fransson等人， Respir. Res. 6 :100,2005)。在壞死狀態(tài)下，包括內(nèi)源mRNA在內(nèi)的胞內(nèi)內(nèi)含物的釋放觸發(fā)誘導(dǎo)局部炎癥、有利于死亡細(xì)胞殘留部分清除并修復(fù)損傷的細(xì)胞因子、趨化因子和其他因子的分泌。壞死常常一直存在于炎性過程中，引起慢性或嚴(yán)重炎癥(Bergskiken等人，Nature Reviews 7 99-109,2009)。TLR3在壞死部位活化會(huì)引起這些異常的炎性過程并通過釋放的TLR3配體產(chǎn)生另一促炎性正反饋環(huán)路。從而，TLR3拮抗作用在涉及慢性或嚴(yán)重炎癥和/或壞死的各種疾病中可能是有益的。TLR3活化的下調(diào)還可能代表一種包括腎細(xì)胞癌和頭頸鱗狀細(xì)胞癌在內(nèi)的腫瘤學(xué)癥候的新型治療策略(Morikawa 等人，Cl in. Cancer Res. 13 :5703-5709,2007 ；Pries 等人， Int. J. Mol. Med. 21 =209-215,2008)。此外，編碼具有活性降低的蛋白質(zhì)的TLR3l423F等位基因與對(duì)晚期“干性”老年黃斑退化的保護(hù)有關(guān)(Yang等人，N. Engl. J. Med. 359 1456-1463， 2008)，這表明TLR3拮抗劑在這種疾病中可能是有益的。與炎性疾病及其他病癥有關(guān)的病變，例如與感染有關(guān)的那些病變，具有顯著的健康和經(jīng)濟(jì)影響。然而，盡管在醫(yī)學(xué)的許多領(lǐng)域有進(jìn)步，但可用于這些病癥中的一些病癥的治療選擇和治療方法相對(duì)很少。從而，需要抑制TLR3活性來治療TLR3相關(guān)病癥。


圖1示出了抗人111 3 011111^3)1^13在順-1^8報(bào)告基因分析中的作用。圖2A和圖2B示出了抗huTLR3 mAb在BEAS-2B分析中的作用(％抑制)。圖3A和圖;3B示出了抗huTLR3 mAb在NHBE分析中的作用。圖4示出了抗huTLR3 mAb在PBMC分析中的作用。圖5A和圖5B示出了抗huTLR3 mAb在HASM分析中的作用。圖6A、圖6B和6C示出抗huTLR3 mAb與TLR3突變體的結(jié)合。圖7A示出了疊合在人TLR3 ECD的結(jié)構(gòu)上的mAb 15EVQ (黑色)和C1068 mAb (灰色)(上圖)的表位和mAb 12QVQ/QSV(黑色，下圖)的表位。圖7B示出了與mAb 15EVQ復(fù)合的TLR3 E⑶蛋白的定位H/D交換擾動(dòng)圖。圖8A和圖8B示出了大鼠/小鼠抗小鼠TLR3 mAb mAb 5429 (替代品)在A) NF- κ B 和B) ISRE報(bào)告基因分析中的作用。圖 9 示出了替代品 mAb (mAb 5429、mAb cl811)在 MEF CXCL10/IP-10 分析中的作用。圖10示出了替代品mAb與TLR3結(jié)合的特異性。上面的分圖同種型對(duì)照物；底部的分圖mAb cl811。圖11示出了在AHR模型中替代品mAb對(duì)penH水平的作用。
圖12示出了在AHR模型中替代品mAb對(duì)BAL流體中的總嗜中性粒細(xì)胞數(shù)量的作用。圖13示出了在AHR模型中替代品mAb對(duì)BAL流體中的CXCL10/IP-10水平的作用。圖14示出了在DSS模型中替代品mAb對(duì)組織病理學(xué)評(píng)分的作用。圖15示出了在T細(xì)胞轉(zhuǎn)移模型中替代品mAb對(duì)A)組織病理學(xué)評(píng)分和B)嗜中性粒細(xì)胞流入的作用。圖16示出了在CIA模型中替代品mAb對(duì)臨床評(píng)分的作用。圖17示出了在CIA模型中替代品mAb對(duì)臨床AUC評(píng)分的作用。圖18示出了在鼻內(nèi)施予甲型流感/PR/8/34后替代品mAb對(duì)C57BL/6小鼠存活率的作用。圖19示出了在施予甲型流感/PR/8/34后替代品mAb對(duì)臨床評(píng)分的作用。圖20示出了在施予甲型流感/PR/8/34后替代品mAb在14天內(nèi)對(duì)體重的作用。圖21示出了在葡萄糖攻擊之后替代品mAb對(duì)(A)WT DIO和(B) TLR3K0 DIO動(dòng)物中血糖水平的作用。圖22示出了替代品mAb對(duì)WT DIO動(dòng)物中胰島素水平的作用。圖 23 示出了 mAb 15EVQ 對(duì) NHBE 細(xì)胞中(A) NTHi 禾Π (B)鼻病毒誘導(dǎo) CXCL10/IP-10 和CCL5/RANTES水平的作用。圖M示出了 mAb 15EVQ對(duì)HUVEC細(xì)胞中(A) siCAM-I水平和(B)生存力的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)方面是一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體結(jié)合至少一個(gè) TLR3氨基酸殘基，所述殘基選自SEQ ID NO 2的殘基K467、R488或R489。本發(fā)明的另一個(gè)方面是一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體結(jié)合至少一個(gè)TLR3氨基酸殘基，所述殘基選自SEQ ID NO :2的殘基D116或K145。本發(fā)明的另一方面是一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體，其中抗體具有以下性質(zhì)的至少一種a.以< 1 μ g/ml在體外聚(I C) NF- κ B報(bào)告基因分析中減少人TLR3生物活性> 50% ；b.以<10μg/ml抑制>60%由用<100ng/ml聚(I:C)刺激的BEAS-2B細(xì)胞產(chǎn)生的 IL-6 或 CXCL10/IP-10 ；c.以< 0. 4 μ g/ml 抑制> 50% 由用< 100ng/ml 聚(I:C)刺激的 BEAS-2B 細(xì)胞產(chǎn)生的 IL-6 或 CXCL10/IP-10 ；d.以< 5 μ g/ml抑制> 50%由用62. 5ng/ml聚(I:C)刺激的NHBE細(xì)胞產(chǎn)生的 IL-6 ；e.以< 1μ g/ml抑制> 50%由用62. 5ng/ml聚(I:C)刺激的NHBE細(xì)胞產(chǎn)生的 IL-6 ；f.以< 1 μ g/ml抑制> 20%由PBMC細(xì)胞產(chǎn)生的聚(I:C)誘導(dǎo)IFN-Y、IL-6或 IL-12 ；g.以IC50 < 10μ g/ml在體外NF_kB報(bào)告基因分析中抑制短尾猴TLR3生物活性；或h.以IC50 < 5 μ g/ml在體外ISRE報(bào)告基因分析中抑制短尾猴TLR3生物活性。本發(fā)明的另一方面是一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體，其與單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng) TLR3結(jié)合，其中所述單克隆抗體包含某些重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(OTR) 1、2和3的氨基酸序列、某些輕鏈CDR 1、2和3的氨基酸序列、某些重鏈可變區(qū)(VH)的氨基酸序列或某些輕鏈可變區(qū) (VL)的氨基酸序列。本發(fā)明的另一方面是一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體，其包含重鏈和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中抗體包含重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)l、2和3，以及某些輕鏈⑶R 1、2和3的氨
基酸序列。本發(fā)明的另一方面是一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體，其包含重鏈和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中抗體包含某些重鏈可變區(qū)(VH)的氨基酸序列和某些輕鏈可變區(qū)(VL)的氨基酸序列。本發(fā)明的另一方面是一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體，其包含重鏈和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中抗體包含某些重鏈的氨基酸序列和某些輕鏈的氨基酸序列。本發(fā)明的另一方面是一種分離的抗體重鏈，其包含SEQ ID NO :6、8、10、12、14、16、 18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、124、125、126、127、128、129、159、198、200、
202、164、212、213、214、215或216所示的氨基酸序列。本發(fā)明的另一方面是一種分離的抗體輕鏈，其包含SEQ ID NO :5、7、9、11、13、15、 17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、122、123、197、199、201、163、209、210 或 211
所示的氨基酸序列。本發(fā)明的另一方面是一種分離的抗體重鏈，其包含SEQ ID NO :102、130、131、132、 133、134、135、160、204、206、208、220、166 或 168 所示的氨基酸序列。本發(fā)明的另一方面是一種分離的抗體輕鏈，其包含SEQ ID NO :155、156、157、158、
203、205、207、165或167所示的氨基酸序列。本發(fā)明的另一方面是一種編碼抗體重鏈的分離的多核苷酸，其包含SEQ ID NO :6、 8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、124、125、126、127、128、129、 159、198、200、202、164、212、213、214、215 或 216 所示的氨基酸序列。本發(fā)明的另一方面是一種編碼抗體輕鏈的分離的多核苷酸，其包含SEQ ID NO :5、 7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、122、123、197、199、201、163、 209、210或211所示的氨基酸序列。本發(fā)明的另一方面是一種編碼抗體重鏈的分離的多核苷酸，其包含SEQ ID NO 102、130、131、132、133、134、135、160、204、206、208、220、166 或 168 所示的氨基酸序列。本發(fā)明的另一方面是一種編碼抗體輕鏈的分離的多核苷酸，其包含SEQ ID NO 155、156、157、158、203、205、207、165 或 167 所示的氨基酸序列。本發(fā)明的另一方面是一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的分離的抗體和藥用載體。本發(fā)明的另一方面是一種載體，其包含至少一種本發(fā)明的多核苷酸。本發(fā)明的另一方面是一種宿主細(xì)胞，其包含本發(fā)明的載體。本發(fā)明的另一方面是一種制備可與TLR3反應(yīng)的抗體的方法，其包括培養(yǎng)本發(fā)明的宿主細(xì)胞并回收由宿主細(xì)胞產(chǎn)生的抗體。
本發(fā)明的另一方面是一種治療或預(yù)防炎性疾病的方法，其包括將治療有效量的本發(fā)明的分離的抗體施用給對(duì)其有需要的患者持續(xù)足以治療或預(yù)防炎性疾病的時(shí)間。本發(fā)明的另一方面是一種治療或預(yù)防全身炎性疾病的方法，其包括在將治療有效量的本發(fā)明的分離的抗體施用給對(duì)其有需要的患者持續(xù)足以治療或預(yù)防全身炎性疾病的時(shí)間。本發(fā)明的另一方面是一種治療II型糖尿病的方法，其包括將治療有效量的本發(fā)明的分離的抗體施用給對(duì)其有需要的患者持續(xù)足以治療II型糖尿病的時(shí)間。本發(fā)明的另一方面是一種治療高血糖癥的方法，其包括將治療有效量的本發(fā)明的分離的抗體施用給對(duì)其有需要的患者持續(xù)足以治療高血糖癥的時(shí)間。本發(fā)明的另一方面是一種治療高胰島素血癥的方法，其包括將治療有效量的本發(fā)明的分離的抗體施用給對(duì)其有需要的患者持續(xù)足以治療胰島素抵抗的時(shí)間。本發(fā)明的另一方面是一種治療或預(yù)防病毒感染的方法，其包括將治療有效量的本發(fā)明的分離的抗體施用給對(duì)其有需要的患者持續(xù)足以治療或預(yù)防病毒感染的時(shí)間。
具體實(shí)施例方式本說明書中所引用的所有出版物(包括但不限于專利和專利申請(qǐng))均以引用方式并入本文，如同在本文中完整呈現(xiàn)。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“拮抗劑”意指一種分子，其通過任何機(jī)制部分地或完全抑制另一分子例如受體或胞內(nèi)介質(zhì)的作用。如本文所用，“TRL3抗體拮抗劑”或“可與TLR3反應(yīng)的”抗體描述了一種抗體，其能夠直接或間接顯著對(duì)抗、減少或抑制TLR3生物活性或TLR3受體活化。例如，可與TLR3 反應(yīng)的抗體可直接結(jié)合至TLR3并中和TLR3活性，S卩，阻斷TLR3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以減少細(xì)胞因子和趨化因子釋放或NF- κ B活化。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“抗體”以廣義上表示并包括免疫球蛋白或抗體分子(包括多克隆抗體)、單克隆抗體(包括鼠類、人、人適應(yīng)的(human-adapted)、人化和嵌合單克隆抗體和抗體片段)。通常，抗體是顯示出對(duì)特定抗原結(jié)合特異性的蛋白質(zhì)或肽鏈。完整抗體是由兩條相同輕鏈和兩條相同重鏈構(gòu)成的異四聚化糖蛋白。通常，各輕鏈通過一個(gè)共價(jià)二硫鍵連接到重鏈，而對(duì)于不同免疫球蛋白同種型的重鏈，二硫鍵的數(shù)量有所不同。各重鏈和輕鏈還具有規(guī)則間隔的鏈內(nèi)二硫橋鍵。各重鏈在一端具有一個(gè)可變域(VH)，后面有多個(gè)恒定域。各輕鏈在一端具有可變域(VL)在其另一端具有恒定域；輕鏈的恒定域與重鏈的第一恒定域?qū)R，而輕鏈可變域與重鏈的可變域?qū)R。任何脊椎動(dòng)物物種的抗體輕鏈可基于其恒定域的氨基酸序列被歸為兩種明顯不同類型之一，即κ和入。免疫球蛋白可根據(jù)重鏈恒定域氨基酸序列被歸為五種主要種類，即IgA、IgD、IgE、 IgG 和 IgM。IgA 和 IgG 進(jìn)一步再被分為同種型 IgA” IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 和 Ig(i4。術(shù)語(yǔ)“抗體片段”意指完整抗體的一部分，通常是完整抗體的抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)?？贵w片段的例子包括Fab、Fab，、F(ab，)2和Fv片段、雙體、單鏈抗體分子和由至少兩個(gè)完整抗體形成的多特異性抗體。免疫球蛋白輕鏈或重鏈可變區(qū)由夾雜有三個(gè)“抗原結(jié)合位點(diǎn)”的“框架”區(qū)構(gòu)成。使用以下各種術(shù)語(yǔ)來定義抗原結(jié)合位點(diǎn)(i)術(shù)語(yǔ)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)是基于序列變異性的(Wu和Kabat，J. Exp. Med. 132 :211-250,1970)。通常，抗原結(jié)合位點(diǎn)具有六個(gè)CDR， 三個(gè)在 VH 中(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，三個(gè)在 VL 中(LCDR1、LCDR2、LCDR3) (Kabat 等人， Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版，Public Health Service, National Institutes of Health，Bethesda，Md.，1991)。(ii)術(shù)語(yǔ)“高變區(qū)”、“HVR” 或 “HV”是指在結(jié)構(gòu)上高變的抗體可變域的區(qū)域，如由Chothia和Lesk定義的(Chothia和 Lesk, Mol. Biol. 196 =901-917,1987)。通常，抗原結(jié)合位點(diǎn)具有六個(gè)高變區(qū)，三個(gè)在VH中 (HI、H2、H3)，三個(gè)在VL中(Li、L2、L3)。Chothia和Lesk將結(jié)構(gòu)保守的HV稱為“正則結(jié)構(gòu)，，。(iii)由 Lefranc 提出的 “IMGT-CDR” (Lefranc 等人，Dev. Comparat. Immunol. 27 55-77,2003)是基于T細(xì)胞受體與免疫球蛋白的V域的比較。免疫遺傳學(xué)(IMGT)數(shù)據(jù)庫(kù) (http://www_imgt_org)提供了這些區(qū)域的標(biāo)準(zhǔn)化編號(hào)和定義。CDR、HV和IMGT描述之間的對(duì)應(yīng)性在 Lefranc 等人的 Dev. Comparat. Immunol. 27 :55-77, 2003 中有所描述。(iv)還可根據(jù) Almagro (Almagro，Mol. Recognit. 17 :132_143，2004)，基于“特異性決定殘基的使用(Specificity Determining Residue Usage, SDRU) ”來描述抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中特異性決定殘基(SDR)是指直接與抗原接觸的免疫球蛋白的氨基酸殘基。由Almargo定義的SDRU 是對(duì)不同類型抗原的SDR的數(shù)量和分布的精確測(cè)量，其通過對(duì)抗原抗體復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)的分析來定義。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“復(fù)合物序列”意指一種抗原結(jié)合位點(diǎn)，其被定義成包括Kabat、 Chothia或IMGT單獨(dú)描述的所有氨基酸殘基，或任何其他合適的抗原結(jié)合區(qū)域描述。“框架”或“框架序列”是除了被定義為抗原結(jié)合位點(diǎn)的那些之外的可變區(qū)的剩余序列。因?yàn)榭乖Y(jié)合位可以由上面所述的各種術(shù)語(yǔ)定義，所以框架的精確氨基酸序列取決于如何定義抗原結(jié)合位點(diǎn)。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“抗原”意指具有直接或間接產(chǎn)生抗體能力的任何分子。蛋白質(zhì)編碼核酸包括在“抗原”的定義內(nèi)。術(shù)語(yǔ)“同系物”意指與參考序列具有40%和100%之間序列同一性的蛋白序列。 人TLR3的同系物包括來自與已知人TLR3序列具有40%和100%之間序列同一性的其他物種的多肽。兩條肽鏈之間的同一性百分比可以使用Vector NTI v. 9. 0. O (Invitrogen, Carslbad, CA)的AlignX模塊的默認(rèn)設(shè)置通過配對(duì)比對(duì)來確定?！癟LR3”意指人 TLR3 (huTLR3)及其同系物。全長(zhǎng)huTLR3的核苷酸和氨基酸序列分別以SEQ ID No 1和2 示出。huTLR3胞外結(jié)構(gòu)域(EOT)的核苷酸和氨基酸序列分別以SEQ ID No :3和4示出。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“基本相同”意指相比較的兩個(gè)抗體或抗體片段氨基酸序列是相同的或具有“非實(shí)質(zhì)差異”。非實(shí)質(zhì)差異是抗體或抗體片段氨基酸序列中1、2、3、4、5或 6個(gè)氨基酸的替代。與本文所公開的序列基本相同的氨基酸序列也是本申請(qǐng)的一部分。在一些實(shí)施例中，序列同一性可以是約90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%, 99%或更高。同一性百分比可以如上所述來確定。相比較的示例性肽鏈?zhǔn)侵劓溁蜉p鏈可變區(qū)。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“與...聯(lián)合”意指所述試劑可以同時(shí)作為單一試劑或以任何順序連續(xù)作為單一試劑在混合物中一起施予動(dòng)物。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“炎性疾病”意指部分由細(xì)胞因子、趨化因子或炎性細(xì)胞(如，嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞)的活性介導(dǎo)的對(duì)細(xì)胞損傷的局部反應(yīng)，在大多數(shù)情況下表征為疼痛、發(fā)紅、腫脹和組織功能喪失。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“炎性肺部疾病” 意指影響肺部或與其有關(guān)的炎性疾病。本文所用的術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”(mAb)是指從基本上同源的抗體的群體所獲得的抗體(或抗體片段)。單克隆抗體具有高度特異性，其通常針對(duì)單一抗原決定簇。修飾語(yǔ) “單克隆”表示抗體的基本上同源的性質(zhì)，并不要求用任何特定方法產(chǎn)生抗體。例如，鼠類 mAb可以由Kohler等人的雜交瘤方法(Nature 256 :495_497，1975)來產(chǎn)生?？捎妹绹?guó)專利No. 4，816，567中所公開的方法制備這樣的嵌合單克隆抗體，其包含衍生自供體抗體(通常為鼠類動(dòng)物)的輕鏈和重鏈可變區(qū)和與之相結(jié)合的衍生自受體抗體(通常為另一種哺乳類物種，如人類)的輕鏈和重鏈恒定區(qū)?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)(例如美國(guó)專利No. 5，225，539所公開的技術(shù))來制備具有衍生自非人供體免疫球蛋白(通常是鼠類)的CDR和衍生自一種或多種人免疫球蛋白的分子的剩余免疫球蛋白衍生部分的人適應(yīng) mAb。可用于人適應(yīng)的人框架序列可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員從相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)選擇?？蛇x地，可通過諸如 Queen 等人(Proc. Natl. Acad. Sci. (USA)，86 :10029-10032,1989)和 Hodgson 等人 (Bio/Technology, 9 =421,1991)所公開的技術(shù)，通過結(jié)合改變的框架支持殘基來進(jìn)一步修飾人適應(yīng)mAb以保持親合力。缺乏任何非人序列的完全人單克隆抗體可通過(例如)以下文獻(xiàn)中提及的技術(shù)從人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠制備，Lonberg等人，Nature368 =856-859,1994 ；Fishwild 等人，Nature Biotechnology 14 :845-851，1996 ；禾口 Mendez 等人，Nature Genetics 15: 146-156,1997。人單克隆抗體也可以通過(例如)以下文獻(xiàn)中提及的技術(shù)從噬菌體展示文庫(kù)制備和優(yōu)化，Knappik 等人，J. Mol. Biol. 296 :57-86,2000 和 Krebs 等人，J. Immunol. Meth. 254 :67-84 2001。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“表位”意指抗體特異性結(jié)合的抗原部分。表位通常由諸如氨基酸或多糖側(cè)鏈部分的化學(xué)活性(例如，極性、非極性或疏水性)表面分組構(gòu)成，并可具有特異性三維結(jié)構(gòu)特征以及特異性電荷特征。表位可以是天然線性，或者可以是不連續(xù)表位， 如，構(gòu)象表位，其通過抗原的非鄰接氨基酸之間的空間關(guān)系而非氨基酸的線性排列而形成。 構(gòu)象表位包括由抗原的折疊產(chǎn)生的表位，其中抗原線性序列不同部分的氨基酸在三維空間中非常鄰近。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“特異性結(jié)合”是指抗體以比對(duì)其他抗原或蛋白更大的親和力與預(yù)定抗原結(jié)合。通常，抗體以1(ΓΜ或更小的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合，并且與預(yù)定抗原結(jié)合的 Kd為其與除預(yù)定抗原以外的非特異性抗原(例如BSA、酪蛋白或任何其他特定多肽)結(jié)合的Kd的至少1/2。短語(yǔ)“識(shí)別抗原的抗體”和“對(duì)抗原特異的抗體”在本文中可與術(shù)語(yǔ)“與抗原特異性結(jié)合的抗體”或“抗原特異性抗體”例如TLR3特異性抗體互換使用?？梢允褂孟旅嫠龅臉?biāo)準(zhǔn)步驟來測(cè)量解離常數(shù)。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“TLR3生物活性”或“TLR3活性”是指由于結(jié)合到TLR3的配體而出現(xiàn)的任何活性。TLR3配體包括dsRNA、聚(I: C)和內(nèi)源mRNA，如，由壞死細(xì)胞釋放的內(nèi)源mRNA。一種示例性TLR3活化引起響應(yīng)TLR3配體的NF- κ B的活化。在用聚(I :C)誘導(dǎo)受體時(shí)，NF-κ B活化可以使用受體-基因分析來分析(Alexopoulou等人，Nature 413 732-738,2001 ； HScker 等人，EMBO J. 18 =6973-6982,1999) 另一示例性 TLR3 活化引起響
25應(yīng)TLR3配體的干擾素反應(yīng)因子(IRF-3、IRF-7)的活化。TLR3-介導(dǎo)IRF活化可以使用由 干擾素刺激反應(yīng)元件(ISRE)驅(qū)動(dòng)的報(bào)告基因來分析。另ー示例性TLR3活化引起促炎性細(xì) 胞因子和趨化因子的分泌，例如TNF- a、IL-6、IL_8、IL-12、CXCL5/IP-10和RANTES。從細(xì) 胞、組織釋放或流通中的細(xì)胞因子和趨化因子可以使用公知的免疫測(cè)定法例如ELISA免疫 測(cè)定法來測(cè)量。本文使用如下的常規(guī)一字母和三字母氨基酸代碼
^基酸三字母代碼一字母代碼
丙氨酸AlaA
精氨酸ArgR
天冬酰胺AsnN
天冬氨酸AspD
半胱氨酸CysC
谷氨酸GluE
谷氨酰胺GlnQ
甘氨酸GlyG
組氨酸HISH異亮氨酸化I 亮氨酸LeuL 賴氣酸LysK 甲石底氨酸MetM 笨丙氨酸I^eF 脯氨酸ProP 絲氨酸serS 蘇氨酸t(yī)hrT 色氨政trpW 酪氨政tyrY 纈氨酸valV物質(zhì)的組成本發(fā)明提供能夠抑制TLR3生物活性的抗體拮抗劑以及這類抗體的用途。這類 TLR3拮抗劑可以具有結(jié)合TLR3并抑制TLR活性的特性。示例性機(jī)制(通過該機(jī)制TLR3活 性會(huì)被這類抗體抑制)包括體外、體內(nèi)或原位抑制TLR3結(jié)合到配體、抑制受體ニ聚化、抑制 TLR3定位到內(nèi)體間隔、抑制下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激酶活性或抑制TLR3 mRNA轉(zhuǎn)錄。能夠通 過其他機(jī)制抑制TLR3活性的其他抗體拮抗劑也在本發(fā)明各個(gè)方面及實(shí)施例的范圍內(nèi)。這 些拮抗劑可用作研究試劑、診斷試劑和治療劑。通過使用多胚系基因編碼可變區(qū)和多種體細(xì)胞事件來產(chǎn)生抗體多祥性。體細(xì)胞事 件包括可變(V)基因片段和多祥性(D)及連接(J)基因片段的重組以產(chǎn)生完整VH區(qū)以及 可變和連接基因片段的重組以產(chǎn)生完整VL區(qū)。不太可能獨(dú)立產(chǎn)生具有與本文所公開那些 相同或類似的CDR序列的抗體和組合物。在裝配和體細(xì)胞突變之后抗體基因的序列是高度 變化的，并且估計(jì)這些變化的基因編碼IOltl個(gè)不同抗體分子(Immunoglobulin Genes, 2nd ed. , eds. Jonio et al. , Acaaemic Press, San Diego,しalii. ,1995)。本發(fā)明提供衍生自人免疫球蛋白基因文庫(kù)的新型抗原結(jié)合位點(diǎn)。用于承載抗原結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)通常是抗體重鏈或輕鏈或其一部分，其中抗原結(jié)合位點(diǎn)定位到如上述確定的天然存在的抗原結(jié)合位點(diǎn)。本發(fā)明提供一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或其片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中抗體包含重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)氨基酸序列1、2和 3(HCDR1、HCDR2和HCDR3)以及輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)氨基酸序列1、2和3(LCDR1、LCDR2 和IXDR3)，如表Ia所示。表 la.
權(quán)利要求
1.一種分離的抗體或其片段，其中所述抗體結(jié)合至少一個(gè)toll樣受體3(TLR;3)氨基酸殘基，所述殘基選自SEQ ID NO 2的殘基K467、R488和R489。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體或片段，其中所述TLR3氨基酸殘基選自a.SEQ ID NO 2 的殘基 K467 ；b.SEQ ID NO 2 的殘基 R489 ；c.SEQ ID NO 2 的殘基 K467 和 R489 ；以及d.SEQ ID NO 2 的殘基 K467、R488 和 R489。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體或片段，其中所述抗體還結(jié)合至少一個(gè)TLR3氨基酸殘基，所述殘基選自 SEQ ID NO :2 的殘基 Y465、Y468、N517、D536、Q538、H539、N541、E570 和 K619。
4.一種分離的抗體或其片段，其中所述抗體結(jié)合至少一個(gè)TLR3氨基酸殘基，所述殘基選自SEQ ID NO 2的殘基D116和K145。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離的抗體或片段，其中所述TLR3氨基酸殘基選自a.SEQ ID NO 2 的殘基 Dl 16 ；b.SEQ ID NO 2 的殘基 D116 和 K145。
6.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，其中所述抗體具有以下性質(zhì)中的至少一種a.以<lyg/ml在體外聚(I C) NF-κ B報(bào)告基因分析中減少人TLR3生物活性>50%;b.以<10μ g/ml抑制> 60%由用< 100ng/ml聚(I:C)刺激的BEAS-2B細(xì)胞產(chǎn)生的 IL-6 或 CXCL10/IP-10 ；c.以<0.4μ g/ml抑制>50%由用< 100ng/ml聚(I: C)刺激的BEAS-2B細(xì)胞產(chǎn)生的 IL-6 或 CXCL10/IP-10 ；d.以<5 μ g/ml抑制> 50%由用62. 5ng/ml聚(I:C)刺激的NHBE細(xì)胞產(chǎn)生的IL-6 ；e.以<1 μ g/ml抑制> 50%由用62. 5ng/ml聚(I:C)刺激的NHBE細(xì)胞產(chǎn)生的IL-6 ；f.以<1 μ g/ml 抑制> 20% 由 PBMC 產(chǎn)生的聚(I:C)誘導(dǎo)的 IFNi、IL-6 或 IL-12 ；g.以IC50< 10 μ g/ml在體外NF-kB報(bào)告基因分析中抑制短尾猴TLR3生物活性；或h.以IC50< 5 μ g/ml在體外ISRE報(bào)告基因分析中抑制短尾猴TLR3生物活性。
7.—種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段與單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)TLR3 結(jié)合，所述單克隆抗體包含a.SEQ ID NO :214的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 211的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 214的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO :211的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO :70、77和72所示的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 1、2和3 (HCDR1、HCDR2禾口 HCDR3)氨基酸序列；或e.如SEQID NO :67、68和78所示的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 1、2和3(LCDR1、LCDR2和 LCDR3)氨基酸序列；或f.如SEQID NO :70、77和72所示的重鏈CDR1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO :67、 68和78所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :214的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQ ID NO :211的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
8.—種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體和片段與單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)TLR3 結(jié)合，所述單克隆抗體包含a.SEQ ID NO :216的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 41的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 216的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 41的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 82,86和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :79、80和87所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :82、86和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 79、80和87所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :216的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :41的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
9.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者并且其中所述抗體包含a.如SEQID NO :61、192和60所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 192的HCDR2進(jìn)一步如式(I)所示定義Xaa6-I-Xaa7-Xaa8-R-S-Xaa9-W-Y-N-D-Y-A-V-S-V-K-S,(I) 其中Xaa6可以是Arg或Lys ； Xaa7 可以是 Tyr、His 或 Ser ； Xasi8可以是Met、Arg或Tyr ；并且 Xaa9可以是Lys或Arg ；或b.如SEQID NO: 55、56禾口 191所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 191的IXDR3進(jìn)一步如式(II)所示定義-S-Y-D-一Xaag-XaB^-Xaag-T-V,(II) 其中Xaa1 可以是 Ala、Gin、Gly 或 Ser ； Xaa2 可以是 Gly、Glu 或 Ser ； Xaa3可以是Asp或Asn ； ) 可以是Glu或Ser ；并且 Xaa5可以是Phe、Ala或Leu ；或c.如SEQID NO :61、192和60所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 192的HCDR2進(jìn)一步如式(I)所示定義Xaa6-I-Xaa7-Xaa8-R-S-Xaa9-W-Y-N-D-Y-A-V-S-V-K-S, (I)其中Xaa6可以是Arg或Lys ； Xaa7 可以是 Tyr、His 或 Ser ； Xasi8可以是Met、Arg或Tyr ；并且 Xagi9可以是Lys或Arg ；并且如SEQ ID NO 55、56和191所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO :191 的LCDR3進(jìn)一步如式(II)所示定義-S-Y-D-一Xaag-XaB^-Xaag-T-V,(II) 其中Xaa1 可以是 Ala、Gin、Gly 或 Ser ； Xaa2 可以是 Gly、Glu 或 Ser ； Xaa3可以是Asp或Asn ； ) 可以是Glu或Ser ；并且 Xaa5可以是Phe、Ala或Leu ；或d.如SEQID NO 70、194和72所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 194的HCDR2進(jìn)一步如式(III)所示定義I-I-Q-Xaa15-R-S-K-W-Y-N-Xaa16-Y-A-Xaa17-S-V-K-S,(III) 其中Xaa15 可以是 Lys、Thr 或 Ile ； Xaa16可以是Asn或Asp ；并且 Xaa17可以是Val或Leu ；或e.如SEQID N0:67、68和193所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 193的IXDR3進(jìn)一步如式(IV)所示定義Xbb^q-S-Y-D-XBB^-P-XBB^-(IV) 其中Xaa10可以是Gln或Ser ； Xaa11 可以是 Thr、Glu 或 Asp ； Xaa12可以是Val或Asn ； )(aa13可以是Tyr或Phe ；并且 Xaa14 可以是 Ser、Asn 或 Gln ；或f.如SEQID NO 70、194和72所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 194的HCDR2進(jìn)一步如式(III)所示定義I-I-Q-Xaa15-R-S-K-W-Y-N-Xaa16-Y-A-Xaa17-S-V-K-S,(III)其中Xaa15 可以是 Lys、Thr 或 Ile ；Xaa16可以是Asn或Asp ；并且 Xaa17可以是Val或Leu ；并且如SEQ ID NO :67、68和193所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO :193 的LCDR3進(jìn)一步如式(IV)所示定義 Xbb^q-S-Y-D-XBB^-P-XBB^-(IV) 其中Xaa10可以是Gln或Ser ； Xaa11 可以是 Thr、Glu 或 Asp ； Xaa12可以是Val或Asn ； )(aa13可以是Tyr或Phe ；并且 Xaa14 可以是 Ser、Asn 或 Gln ；g.如SEQID NO :82、196和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 196的HCDR2進(jìn)一步如式(V)所示定義Xaa24-I-D-P-S-D-S-Y-T-N-Y-Xaa25-P-S-F-Q-G,(V) 其中)(aaM可以是Phe或Arg ；并且 X&3-25可以是Ala或^^ ；或h.如SEQID NO: 79、80禾口 195所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 195的IXDR3進(jìn)一步如式(VI)所示定義Q-Q-乂3<3<1§-乂3<3<19-乂3"3"20一乂已3"21-乂3"3"22一乂已3"23一1，(VI) 其中Xaaw 可以是 Tyr、Gly 或 Ala; Xaa19 可以是 Gly、Glu 或 Asn ； Xaa2tl 可以是 Ser 或 Thr ；可以是Val、Ile或Leu;X&3-22可以是Ser或Leu ；并且 Xaa23 可以是 lie、Ser> Pro 或 Tyr ；或i.如SEQID NO :82、196和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 196的HCDR2進(jìn)一步如式(V)所示定義Xaa24-I-D-P-S-D-S-Y-T-N-Y-Xaa25-P-S-F-Q-G,(V)其中)(aaM可以是Phe或Arg ；并且 )(aaM可以是；并且j.如 SEQ ID NO :79、80 和 195 所示的輕鏈 CDR 1、2 和 3，其中 SEQ ID N0:195&LCDR3 進(jìn)一步如式(VI)所示定義Q-Q-乂3<3<1§-乂3<3<19-乂3"3"20一乂已3"21-乂3"3"22一乂已3"23一1，(VI) 其中Xaaw 可以是 Tyr、Gly 或 Ala; Xaa19 可以是 Gly、Glu 或 Asn ； Xaa2tl 可以是 Ser 或 Thr ；可以是Val、Ile或Leu;X&3-22可以是Ser或Leu ；并且 XaaM 可以是 lie、Ser、Pro 或 Tyr0
10.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO 6的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 5的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 6的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 5的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 52,88和M所示的重鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :49、50和51所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :52、88和討所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；以及如SEQ ID NO: 49、50和51所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :7的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :6的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
11.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO 8的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 7的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 8的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 7的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 58,64和60所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :55、56和57所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO 58,64和60所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO 55、56和57所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :8的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :7的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
12.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :10的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 9的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 10的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 9的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 70,77和72所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :67、68和69所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :70、77和72所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO:·67、68和69所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :10的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :9的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
13.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :12的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 11的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 12的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 11的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 82,83和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :79、80和89所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :82、83和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 79、80和89所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :12的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO: 11的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
14.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :14的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 13的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 14的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 13的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 46,47和48所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :43、44和45所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO 46,47和48所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO 43、44和45所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO: 14的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :13的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
15.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :16的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 15的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 16的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 15的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 52,53和M所示的重鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :49、50和51所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :52、53和M所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 49、50和51所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO: 16的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQ ID NO :15的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
16.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :18的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 17的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 18的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 17的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 58,59和60所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :55、56和57所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO 58,59和60所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO 55、56和57所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :18的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :17的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
17.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :20的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 19的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 20的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 19的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 61,62和60所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :55、56和57所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO 61,62和60所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO 55、56和57所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :20的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO: 19的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
18.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :22的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 21的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 22的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 21的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 61,64和60所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :55、56和63所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :61、64和60所示的重鏈CDRl、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO :55、 56和63所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :22的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :21的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
19.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :24的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 23的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 24的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 23的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 61,64和60所示的重鏈可變區(qū)⑶R 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :55、56和65所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO 61,64和60所示的重鏈CDR 1、2禾口 3氨基酸序列和如SEQ ID NO 55、56和65所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :24的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :23的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
20.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :26的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 25的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 26的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 25的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 61,64和60所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :55、56和66所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :61、64和60所示的重鏈CDRl、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO :55、 56和66所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :26的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :25的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
21.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :28的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 27的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 28的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 27的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO :70、71和72所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :67、68和69所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :70、71和72所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 67、68和69所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :28的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :27的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
22.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :30的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 29的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 30的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 29的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 70,73和72所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；e.如SEQID NO :67、68和69所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :70、73和72所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 67、68和69所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :30的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :29的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
23.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :32的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 31的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 32的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 31的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 70,75和72所示的重鏈CDRl、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :67、68和74所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :70、75和72所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 67、68和74所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :32的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :31的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
24.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :34的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 33的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 34的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 33的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 70,77和72所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :67、68和76所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :70、77和72所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 67、68和76所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :34的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :33的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
25.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :36的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 35的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 36的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 35的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 70,77和72所示的重鏈CDRl、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :67、68和78所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :70、77和72所示的重鏈CDR1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO :67、68和78所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :36的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :35的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
26.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :38的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 37的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 38的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 37的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 82,83和84所示的重鏈CDRU2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :79、80和81所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :82、83和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 79、80和81所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :38的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :37的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)。
27.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :40的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 39的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 40的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 39的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 82,86和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :79、80和85所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :82、86和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 79、80和85所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQID NO :40的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的重鏈可變區(qū)；或h.與具有SEQID NO :39的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同一性的輕鏈可變區(qū)；i.SEQ ID NO 102 的重鏈；或 j. SEQ ID NO 155 的輕鏈；或k. SEQ ID NO 102 的重鏈和 SEQ ID NO :155 的輕鏈。
28.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :42的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 41的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 42的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 41的輕鏈可變區(qū)；或d.如SEQID NO 82,86和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或e.如SEQID NO :79、80和87所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或f.如SEQID NO :82、86和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO:(79、80和87所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或g.與具有SEQ ID NO :42的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同-或-性的重鏈可變區(qū)； 性的輕鏈可變區(qū)；h.與具有SEQID NO :41的氨基酸序列的可變區(qū)具有至少95%同-i.SEQ ID NO 102 的重鏈；或 j. SEQ ID NO 156 的輕鏈；或k. SEQ ID NO 102 的重鏈和 SEQ ID NO :156 的輕鏈。
29.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :216的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 41的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 216的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 41的輕鏈可變區(qū)；或d.SEQ ID NO 220 的重鏈；或e.SEQ ID NO :156 的輕鏈；或f.SEQ ID NO 220 的重鏈和 SEQ ID NO :156 的輕鏈。
30.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQIDNO:124的:重鏈可變區(qū)；或b.SEQIDNO:125的:重鏈可變區(qū)；或C.SEQIDNO:126的:重鏈可變區(qū)；或d.SEQIDNO:127的:重鏈可變區(qū)；或e.SEQIDNO:128的:重鏈可變區(qū)；或f.SEQIDNO:129的:重鏈可變區(qū)；或g·SEQIDNO:124的:重鏈可變區(qū)和SEQIDNO41的輕鏈可變區(qū) 或 ，'τΛ h.SEQIDNO:125的:重鏈可變區(qū)和SEQIDNO41的輕鏈可變區(qū) 或 ，'τΛ i.SEQIDNO:126的:重鏈可變區(qū)和SEQIDNO41的輕鏈可變區(qū) 或 ，'τΛ j·SEQIDNO:127的:重鏈可變區(qū)和SEQIDNO41的輕鏈可變區(qū) 或 ，'τΛ k.SEQIDNO:128的:重鏈可變區(qū)和SEQIDNO41的輕鏈可變區(qū) 或 ，'τΛ (1.SEQIDNO:129的:重鏈可變區(qū)和SEQIDNO41的輕鏈可變區(qū) 或 ，'τΛ m.SEQIDNO:122的輕鏈可變區(qū)；或η.SEQIDNO:123的輕鏈可變區(qū)；或(0.SEQIDNO42的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 122的輕鏈可變區(qū) 或 ，'τΛ P-SEQIDNO42的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO 123的輕鏈可變區(qū) 或 ，'τΛ q.如 SEQ r.如 SEQ s.如 SEQ t.如 SEQ u.如 SEQ v.如 SEQID NO ID NO ID NO ID NO ID NO ID NO(111、112和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列 111、114和84所示的重鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列(115、112和84所示的重鏈CDR1、2和3氨基酸序列(116、112和84所示的重鏈CDR1、2和3氨基酸序列 111、117和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列 116、118和84所示的重鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列或或 或或 或或w.如SEQ ID NO :116,112和119所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或 χ.如SEQ ID NO 116、118和119所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或 y.如SEQ ID NO :111、112和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 109、110和113所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或ζ.如SEQ ID NO 111、114和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 109、110和113所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或aa.如SEQ ID NO 115、112和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 109、110和113所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或bb.如SEQ ID NO :116、112和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 109、110和113所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或cc.如SEQ ID NO :111、117和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO: 109、110和113所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或dd.如SEQ ID NO 116、118和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID N0: 109、110和113所示的輕鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；或ee.如SEQ ID NO :116、112和119所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID NO =109,110和113所示的輕鏈CDRU2和3氨基酸序列；或ff.如SEQ ID N0:120、110和113所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或 gg.如SEQ ID N0:121、110和113所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；或 hh.如SEQ ID NO :111、112和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID N0:120、110和113所示的輕鏈⑶R1、2和3氨基酸序列；或ii.如SEQ ID NO :111、112和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列和如SEQ ID N0:121、110和113所示的輕鏈⑶R1、2和3氨基酸序列；或jj·SEQIDNO:130的重鏈；或kk.SEQIDNO:131的重鏈；或11.SEQIDNO:132的重鏈；或mm.SEQIDNO:133的重鏈；或nn.SEQIDNO:134的重鏈；或00.SEQIDNO:135的重鏈；或PP-SEQIDNO:160的重鏈；或qq.SEQIDNO:130的重鏈和SEQIDNO156的輕鏈；或 rr.SEQIDNO:131的重鏈和SEQIDNO156的輕鏈；或 ss.SEQIDNO:132的重鏈和SEQIDNO156的輕鏈；或 tt.SEQIDNO:133的重鏈和SEQIDNO156的輕鏈；或 uu.SEQIDNO:134的重鏈和SEQIDNO156的輕鏈；或 vv.SEQIDNO:135的重鏈和SEQIDNO156的輕鏈；或 WW.SEQIDNO:160的重鏈和SEQIDNO156的輕鏈；或 XX.SEQIDNO:157的輕鏈；或yy·SEQIDNO:158的輕鏈；或zz.SEQIDNO:102的重鏈和SEQIDNO157的輕鏈；或aaa. SEQ ID NO :102 的重鏈和 SEQ ID NO :158 的輕鏈。
31.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的分離的抗體或片段，其中所述抗體是全人的。
32.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的分離的抗體或片段，其中所述抗體或片段是人適應(yīng)的。
33.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的分離的抗體或片段，其中所述抗體綴合至聚乙二醇。
34.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的分離的抗體或片段具有IgG4同種型。
35.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的分離的抗體或片段，其中Fc域包含S2^P、P235A或 L236A突變。
36.一種藥物組合物，所述組合物包含根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的分離的抗體或片段以及藥用載體。
37.一種可與TLR3反應(yīng)的分離的抗體或片段，所述抗體或片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)二者，并且其中所述抗體包含a.SEQ ID NO :164的重鏈可變區(qū)；或b.SEQ ID NO 163的輕鏈可變區(qū)；或c.SEQ ID NO 164的重鏈可變區(qū)，以及d.SEQ ID NO 163的輕鏈可變區(qū)；或e.SEQ ID NO :166 的重鏈；或f.SEQ ID NO 165 的輕鏈；或g.SEQ ID NO 166 的重鏈和 SEQ ID NO :165 的輕鏈；或h.SEQ ID NO 168 的重鏈；或i.SEQ ID NO 167 的輕鏈；或j. SEQ ID NO 168 的重鏈和 SEQ ID NO :167 的輕鏈。
38.一種編碼抗體重鏈的分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含選自以下的CDR氨基酸序列a.如SEQID NO :61、192和60所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 192的HCDR2進(jìn)一步如式(I)所示定義Xaa6-I-Xaa7-Xaa8-R-S-Xaa9-W-Y-N-D-Y-A-V-S-V-K-S 其中Xaa6可以是Arg或Lys ； Xaa7 可以是 Tyr、His 或 Ser ； Xasi8可以是Met、Arg或Tyr ；并且 Xaa9可以是Lys或Arg;b.如SEQID NO 70、194和72所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 194的HCDR2進(jìn)一步如式(III)所示定義I-I-Q-Xaa15-R-S-K-W-Y-N-Xaa16-Y-A-Xaa17-S-V-K-S 其中Xaa15 可以是 Lys、Thr 或 Ile ； Xaa16可以是Asn或Asp ；并且 Xaa17可以是Val或Leu0c.如SEQID NO :82、196和84所示的重鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO:196的HCDR2進(jìn)一步如式(V)所示定義Xaa24-I-D-P-S-D-S-Y-T-N-Y-Xaa25-P-S-F-Q-G 其中)(aaM可以是Phe或Arg ；并且XaaM可以是Ala或^^ ；d.如SEQIDNO:52,88和討所示的重鏈CDR 1、2和3氨基醛!序列；e.如SEQIDNO=58,64和60所示的重鏈CDR 1、2和3氨基醛!序列；f.如SEQIDNOs70、77和72所示的■鏈CDR 1、2和3氨基·脧序列；g·如SEQIDNO:82、83和84所示的重鏈 CDR1、2和3氨基醛!序列；h.如SEQIDNO=46,47和48所示的重鏈 CDR1、2和3氨基醛!序列；i.如SEQIDNO52、53和討所示的重鏈 CDR1、2和3氨基醛!序列；j·如SEQIDNO=58,59和60所示的重鏈 CDR1、2和3氨基醛!序列；k.如SEQIDNO:61、62和60所示的重鏈 CDR1、2和3氨基醛!序列；1.如SEQIDNO=61,64和60所示的重鏈 CDR1、2和3氨基醛!序列；m.如SEQIDNO:70,71和72所示的重鏈 CDR1、2和3氨基醛!序列；η.如SEQIDNO70、73和72所示的重鏈 CDR1、2和3氨基醛!序列；0.如SEQIDNO70、75和72所示的重鏈 CDR1、2和3氨基醛!序列；P-如SEQIDNO70、77和72所示的重鏈 CDR1、2和3氨基醛!序列；q·如SEQIDNO:82、83和84所示的重鏈 CDR1、2和3氨基醛!序列；r.如SEQIDNO=82,86和84所示的重鏈 CDR1、2和3氨基醛!序列；S.如SEQIDNO:111、114和84所示白《重鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；t.如SEQIDNO115、112和84所示白《重鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；U.如SEQIDNO116、112和84所示白《重鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；v.如SEQIDNO:111、117和84所示白《重鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；W.如SEQIDNO116、118和84所示白《重鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；χ.如SEQIDNO:116、112和119所示的重鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列；并且y·如SEQIDNO116、118和119所示的重鏈⑶R 1、2和3氨基酸序列。
39.-種編碼抗體輕鏈的分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含選自以下的CDR氨基序列a.如SEQ ID NO 55、56和191所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 191的IXDR3進(jìn)一步如式(II)所示定義 -S-Y-D-一Xaag-XaB^-Xaag-T-V,(II) 其中Xaa1 可以是 Ala、Gin、Gly 或 Ser ； Xaa2 可以是 Gly、Glu 或 Ser ； Xaa3可以是Asp或Asn ； ) 可以是Glu或Ser ；并且 Xaa5可以是Phe、Ala或Leu ；或b.如SEQID N0:67、68和193所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 193的IXDR3進(jìn)一步如式(IV)所示定義 (IV)其中Xaa10可以是Gln或Ser ； Xaa11 可以是 Thr、Glu 或 Asp ； Xaa12可以是Val或Asn ； )(aa13可以是Tyr或Phe ；并且 Xaa14 可以是 Ser、Asn 或 Gln ；或c.如SEQID NO: 79、80禾口 195所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 193的IXDR3進(jìn)一步如式(VI)所示定義 (VI) 其中Xaaw 可以是 Tyr、Gly 或 Ala; Xaa19 可以是 Gly、Glu 或 Asn ； Xaa2tl 可以是 Ser 或 Thr ；可以是Val、Ile或Leu;X&3-22可以是Ser或Leu ；并且v.如SEQ ID NO :120、110和113所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列；以及 w.如SEQ ID NO :121、110和113所示的輕鏈CDR 1、2和3氨基酸序列。
40.一種編碼抗體重鏈的分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含SEQ ID N0:6、8、10、12、 14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、124、125、126、127、128、129、159、198、 200、202、164、212、213、214、215 或 216 所示的氨基酸序列。
41.一種編碼抗體輕鏈的分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含SEQ ID N0:5、7、9、ll、 13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、122、123、197、199、201、163、209、210 或211所示的氨基酸序列。
42.一種編碼抗體重鏈的分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含SEQ ID NO :102,130, 131、132、133、134、135、160、204、206、208、220、166 或 168 所示的氨基酸序列。
43.一種編碼抗體輕鏈的分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含SEQ ID NO :155,156, 157、158、203、205、207、165或167所示的氨基酸序列。
44.一種分離的抗體重鏈，所述抗體重鏈包含SEQ ID NO :6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、124、125、126、127、128、129、159、198、200、202、164、 212、213、214、215或216所示的氨基酸序列。
45.一種分離的抗體輕鏈，所述抗體輕鏈包含SEQ ID NO :5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、122、123、197、199、201、163、209、210或 211 所示的氨基酸序列。
46.一種分離的抗體重鏈，所述抗體重鏈包含SEQ ID NO :102、130、131、132、133、1；34、 135、160、204、206、208、220、166 或 168 所示的氨基酸序列。
47.一種分離的抗體輕鏈，所述抗體輕鏈包含SEQ ID NO :155、156、157、158、203、205、 207、165或167所示的氨基酸序列。
48.一種治療炎性疾病的方法，所述方法包括將治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的分離的抗體施用給對(duì)其有需要的患者持續(xù)足以治療或預(yù)防所述炎性疾病的時(shí)間。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述炎性疾病影響選自如下的組織呼吸道、 肺、胃腸道、小腸、大腸、結(jié)腸、直腸、心血管系統(tǒng)、心臟組織、血管、關(guān)節(jié)、骨和滑液組織、軟骨、上皮、內(nèi)皮、肝或脂肪組織。
50.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述炎性疾病與增加的TLR3介導(dǎo)的嗜中性粒細(xì)胞侵潤(rùn)進(jìn)所述組織有關(guān)。
51.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述炎性疾病是炎性肺部疾病。
52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述炎性肺部疾病是哮喘或慢性阻塞性肺疾病 (COPD)。
53.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述炎性肺部疾病由不可分型的流感嗜血桿菌誘發(fā)。
54.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述炎性肺部疾病是氣道高反應(yīng)性。
55.根據(jù)權(quán)利要求M所述的方法，其中所述氣道高反應(yīng)性與哮喘、過敏性鼻炎、COPD或囊性纖維變性相關(guān)。
56.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述炎性疾病是炎性腸疾病。
57.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述炎性疾病與胃腸潰瘍相關(guān)。
58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述胃腸潰瘍與傳染性結(jié)腸炎、缺血性結(jié)腸炎、 膠原性或淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎或壞死性小腸結(jié)腸炎相關(guān)。
59.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述炎性疾病是自身免疫性疾病。
60.根據(jù)權(quán)利要求59所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
61.一種治療或預(yù)防全身性炎性疾病的方法，所述方法包括將治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的分離的抗體施用給對(duì)其有需要的患者持續(xù)足以治療或預(yù)防所述全身性炎性疾病的時(shí)間。
62.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，其中所述全身性炎性疾病是細(xì)胞因子風(fēng)暴或高細(xì)胞因子血癥、全身炎性反應(yīng)綜合征(SIRS)、移植物抗宿主病(GVHD)、急性呼吸窘迫綜合征 (ARDS)、嚴(yán)重急性呼吸窘迫綜合征(SARS)、災(zāi)難性抗磷脂抗體綜合征、嚴(yán)重病毒感染、流行性感冒、肺炎、休克或敗血病。
63.一種治療II型糖尿病的方法，所述方法包括將治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求7或8 所述的分離的抗體施用給對(duì)其有需要的患者持續(xù)足以治療II型糖尿病的時(shí)間。
64.一種治療高血糖癥的方法，所述方法包括將治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的分離的抗體施用給對(duì)其有需要的患者持續(xù)足以治療所述高血糖癥的時(shí)間。
65.一種治療高胰島素血癥的方法，所述方法包括將治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求7或8 所述的分離的抗體施用給對(duì)其有需要的患者持續(xù)足以治療胰島素抵抗的時(shí)間。
66.一種治療或預(yù)防病毒感染的方法，其包括將治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的分離的抗體施用給對(duì)其有需要的患者持續(xù)足以治療或預(yù)防病毒感染的時(shí)間。
67.根據(jù)權(quán)利要求66所述的方法，其中所述病毒感染是甲型流感病毒感染。
全文摘要
本發(fā)明公開了Toll樣受體3(TLR3)抗體拮抗劑、編碼TLR3抗體拮抗劑或其片段的多核苷酸以及制備和使用上述抗體拮抗劑和多核苷酸的方法。
文檔編號(hào)C12P21/06GK102300997SQ200980153815
公開日2011年12月28日 申請(qǐng)日期2009年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月31日
發(fā)明者A·特普利亞科夫, F·滕, J·羅, K·赫林加, L·桑馬特奧, M·坎尼安, M·魯茨, R·T·薩里斯基, R·勞亨伯格, R·斯維特, S·吳, Y·馮 申請(qǐng)人:森托科爾奧索生物科技公司