專利名稱：一種白腐真菌的原生質(zhì)體制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程中微生物育種的方法，特別涉及一種白腐真菌的原生質(zhì)體制
備方法。
背景技術(shù)：
木質(zhì)素是植物細(xì)胞壁主要成分，畜禽消化道內(nèi)幾乎沒有降解木質(zhì)素的酶，食草動(dòng)物靠消化道寄生的微生物能夠部分降解木質(zhì)素，但單胃動(dòng)物不具有這種能力。木質(zhì)素是動(dòng)物消化植物性飼料的最大障礙，微生物發(fā)酵是克服這一難題的最理想方法。選育木質(zhì)素降解率高，且在飼料上易于發(fā)酵的微生物菌株，是養(yǎng)殖業(yè)實(shí)現(xiàn)〃 節(jié)糧〃 的關(guān)鍵技術(shù)。白腐真菌是降解木質(zhì)素最有效的微生物，也是經(jīng)常用于木質(zhì)素降解研究的模式菌株。但在自然狀態(tài)下，由于白腐真菌的定植緩慢，很難形成優(yōu)勢種群，其要求的發(fā)酵條件較嚴(yán)格，為了選育出更高木質(zhì)素降解力的變異菌株，加強(qiáng)木質(zhì)素的降解，需對(duì)它的原生質(zhì)體的制備方法進(jìn)行研

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種白腐真菌的原生質(zhì)體的制備方法，使其原生質(zhì)體的制備率達(dá)到5-8 X 106個(gè)/mL。
本發(fā)明的技術(shù)方案是 —種白腐真菌的原生質(zhì)體的制備方法，其特征在于接PDA固體培養(yǎng)基上健壯菌絲體于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)240-290h，用0. 1%-0.3% P-巰基乙醇預(yù)處理菌絲體，采用溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶的混合酶在26-32t:酶解l-4h，酶液pH4-7，用0. 6mol/L MgS04做滲透壓穩(wěn)定劑時(shí)，原生質(zhì)體數(shù)量達(dá)到5-8 X 106個(gè)/mL。
所述的白腐真菌的原生質(zhì)體的制備方法，最佳工藝參數(shù)是 接PDA固體培養(yǎng)基上健壯菌絲體于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)264h，用0. 1 % P _巰基乙
醇預(yù)處理菌絲體，采用混合酶-溶菌酶纖維素酶蝸牛酶的最佳濃度比為2 : 2 : i，酶
液pH5，在3(TC酶解3h ;用0. 6mol/L MgS04做滲透壓穩(wěn)定劑時(shí)，原生質(zhì)體數(shù)量達(dá)到8X 106個(gè)/mL。 本發(fā)明效果是 本白腐真菌的原生質(zhì)體制備方法， 1.制備工藝簡單，易操作。 2.原生質(zhì)體的制備率達(dá)到5-8 X 106個(gè)/mL。
具體實(shí)施例方式
—種白腐真菌的原生質(zhì)體制備方法提供了適合制備高白腐真菌原生質(zhì)體數(shù)量的方法。 實(shí)例一
接PDA固體培養(yǎng)基上健壯菌絲體于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)240h，用0. 1% P-巰基乙
醇預(yù)處理菌絲體，采用混合酶(溶菌酶纖維素酶蝸牛酶的最佳濃度比為2 : 2 : i ;酶
液pH4)在28t:酶解3h ;用0. 6mol/L MgS04做滲透壓穩(wěn)定劑時(shí)，原生質(zhì)體數(shù)量達(dá)到6X 106個(gè)/mL。 實(shí)例二 接PDA固體培養(yǎng)基上健壯菌絲體于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)288h，用0. 3% P-巰基乙
醇預(yù)處理菌絲體，采用混合酶(溶菌酶纖維素酶蝸牛酶的最佳濃度比為2:2:i;
酶液pH5，)；在32t:酶解3h ;用0. /L MgS04做滲透壓穩(wěn)定劑時(shí)，原生質(zhì)體數(shù)量達(dá)到7. 2Xl。6個(gè)/mL。
實(shí)例三 接PDA固體培養(yǎng)基上健壯菌絲體于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)264h，用0. 1% P-巰基乙
醇預(yù)處理菌絲體，采用混合酶(溶菌酶纖維素酶蝸牛酶的最佳濃度比為2 : 2 : i ;酶
液P朋)；在3(TC酶解3h ;用0. 6mol/L MgS04做滲透壓穩(wěn)定劑時(shí)，原生質(zhì)體數(shù)量達(dá)到8 X 106個(gè)/mL。
權(quán)利要求
一種白腐真菌的原生質(zhì)體的制備方法，其特征在于接PDA固體培養(yǎng)基上健壯菌絲體于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)240-290h，用0.1％-0.3％β-巰基乙醇預(yù)處理菌絲體，采用溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶的混合酶，酶液pH4-7，在26-32℃酶解1-4h，用0.6mol/L MgSO4做滲透壓穩(wěn)定劑時(shí)，原生質(zhì)體數(shù)量達(dá)到5-8×106個(gè)/mL。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的白腐真菌的原生質(zhì)體的制備方法，其特征在于接PDA固體培養(yǎng)基上健壯菌絲體于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)264h，用0. 1% 13 -巰基乙醇預(yù)處理菌絲體，采用混合酶-溶菌酶纖維素酶蝸牛酶的濃度比為2 : 2 : l;酶液pH4-7;在3(TC酶解3h ;用0. 6mol/L MgS04做滲透壓穩(wěn)定劑時(shí)，原生質(zhì)體數(shù)量達(dá)到8 X 106個(gè)/mL。
全文摘要
一種白腐真菌的原生質(zhì)體的制備方法，接PDA固體培養(yǎng)基上健壯菌絲體于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)240-290h，用0.1％-0.3％β-巰基乙醇預(yù)處理菌絲體，采用溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶的混合酶酶液pH4-7，在26-32℃酶解1-4h，用0.6mol/L MgSO4做滲透壓穩(wěn)定劑時(shí)，原生質(zhì)體數(shù)量達(dá)到5-8×106個(gè)/mL。本發(fā)明效果是本白腐真菌的原生質(zhì)體制備方法，制備工藝簡單，易操作。原生質(zhì)體的制備率達(dá)到5-8×106個(gè)/mL。
文檔編號(hào)C12R1/645GK101712932SQ20091022848
公開日2010年5月26日 申請(qǐng)日期2009年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月18日
發(fā)明者廖偉, 范寰 申請(qǐng)人:天津市畜牧獸醫(yī)研究所