一種金絲李的組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于組織培養(yǎng)生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明涉及一種金絲李的組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 金絲李為常綠喬木，樹高達(dá)30米，胸徑可達(dá)1.5米以上;樹皮灰褐色。圳對(duì)生，革質(zhì)， 長(zhǎng)橢圓形，長(zhǎng)6-18厘米，寬2-6厘米，全緣，先端突尖或短漸尖，鈍頭，基部寬楔形，側(cè)脈5-8 對(duì)，在下面明顯凸起;葉柄長(zhǎng)6-15毫米。花雜性同株;雄花成腋生和頂生的聚傘花序，萼片4， 近圓形，花瓣4,卵形，雄蕊多數(shù)，花絲短，合生成4裂的環(huán)，花藥2室，縱裂，退化雌蕊近四棱 形，柱頭盾狀凸起;雌花通常單生于葉腋，比雄花大，柱頭盾狀，中間隆起，子房圓球形，直徑 約2.5毫米，具1枚基生胚珠，退化雄蕊的花絲合成4束，短于子房，每束具退化花藥6-8。漿果 橢圓形或卵狀橢圓形，長(zhǎng)3.5-5厘米，直徑1-2.5厘米，頂端具宿存的半球形柱頭，柄長(zhǎng)5-8毫 米。主要分布于我國(guó)廣西西南部，中心分布區(qū)為左、右江流域的龍州、憑祥、寧明、天等、崇 左、大新、靖西、那坡田陽(yáng)等北熱帶地區(qū)，向東北可延伸至桂中峰叢石山區(qū)東緣的忻城，向北 可延伸至南亞熱帶范圍的河池、東蘭、鳳山、田林、西林、巴馬、都安、馬山等縣，不超過北煒 25° ;云南東南部麻栗坡一帶也有分布。垂直分布多在海拔600米以下，最高可達(dá)海拔900米。 越南北部也有分布。金絲李漸危種，是國(guó)家二極保護(hù)植物。其分布區(qū)狹窄，零星生長(zhǎng)，由于過 度采伐，大樹已不多見。因生于石灰?guī)r山上，種子不易發(fā)芽，天然更新不良，已逐漸陷入瀕危 狀態(tài)。金絲李是產(chǎn)區(qū)石灰?guī)r山地的珍貴樹種資源，經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高。木材條紋金黃色，紋理通 直，結(jié)構(gòu)密致，材質(zhì)堅(jiān)重，容重為0.96g/cm，干燥后有端裂，不變形，耐腐、耐磨、耐水濕性特 強(qiáng)且不受蟲蛀，古建筑經(jīng)歷百年不朽，為廣西著名的四大鐵木之一，古代多用于建筑廟宇、 橋梁、艦船等，現(xiàn)代多為高級(jí)家具、室內(nèi)裝修、模具、器械用材等。根系發(fā)達(dá)，保持水土的效益 高，為石山區(qū)的重要造林樹種。幼葉鮮紅，也可做風(fēng)景樹。通常用種子繁殖，結(jié)實(shí)大小年現(xiàn)象 明顯，間隔期為1~2年，開花結(jié)實(shí)期，各年不很定勢(shì)，熱量較高的地區(qū)，開花結(jié)實(shí)較多，結(jié)實(shí) 期也較長(zhǎng)，通常一年開花結(jié)實(shí)2次，一次為5~8月開花，翌年4~7月果實(shí)成熟，另一次為3~4 月開花，當(dāng)年9~11月果實(shí)成熟，以6~7月為主要果熟期。果實(shí)成熟后，易遭猴、貍等摘食，需 及時(shí)采集，但采收的果實(shí)，要求充分成熟，否則不易去掉果皮果肉，且發(fā)芽遲緩，甚至不能發(fā) 芽。采下的果實(shí)，可集中對(duì)慪，該草保濕，約經(jīng)半月，果肉變軟或變爛，裝入框中置水搓擦沖 洗，漂淘去果皮等雜質(zhì)，勿傷種皮。種子忌失水，防止日曬或裸露存放，已處理的種子，立刻 婚濕潤(rùn)沙貯藏。種子約有7~8個(gè)月的休眠期，少數(shù)種子的休眠期可達(dá)1年，不宜隨采隨播，6 ~7月采集的種子，沙藏至翌年3~4月播種。種子千粒重為4500g，含水量須保持30%~ 40%，用條播或點(diǎn)播法。經(jīng)沙藏催芽的種子，一般播后半月左右發(fā)芽，發(fā)芽率約65%，另有少 數(shù)種粒，遲后陸續(xù)發(fā)芽。種子發(fā)芽現(xiàn)象較奇特，胚芽和胚根分別從子葉的兩端抽搐，幼苗成 長(zhǎng)后，子葉不腐爛脫落，變?yōu)槊缒镜幕炕蛑鱾?cè)根的基部。幼苗生長(zhǎng)較緩慢，忌日灼霜凍，需 搭棚防護(hù)。一般需要培育2年生苗后，方宜出圃混交終止。用于風(fēng)景綠化，需培育4~5年生大 苗，帶土團(tuán)出圃，一般10年生左右，生長(zhǎng)較快速。
[0003] 由此可見金絲李通過直接使用種子播種的方法來繁殖后代，缺點(diǎn)是對(duì)種子的保藏 要求高，處理要求也很高，繁殖時(shí)間長(zhǎng)，出苗率低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明針對(duì)上述存在的問題，提供一種金絲李的組培快繁方法，能降低繁殖的成 本，生長(zhǎng)周期短、繁殖率高、方便管理、利于工業(yè)化生產(chǎn)和自動(dòng)化監(jiān)控大大的節(jié)約了人力、物 力和田間作物的土地。
[0005] 本發(fā)明的方案是通過這樣實(shí)現(xiàn)的：
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0007] -種金絲李的組培快繁方法，包括如下步驟：
[0008] (1)外植體的消毒:采摘6-7月份的金絲李葉，使用20-40%樂果乳劑稀釋400-600 倍液浸泡5-10min，取出后放入超凈工作臺(tái)使用4%維生素 C水溶液浸泡30min后再3%的次 氯酸進(jìn)行消毒5-10min，然后用無菌水沖洗3-5次，最后使用滅菌濾紙吸干金絲李葉表面的 無菌水；
[0009] (2)愈傷組織培養(yǎng):使用解剖刀沿著金絲李葉的莖干位置橫切出長(zhǎng)15-18cm，寬10-15cm的葉條片，將葉條片放入已經(jīng)裝入愈傷組織培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕壓葉條片，在29-31 °C下暗培養(yǎng)8-15天，而后轉(zhuǎn)入26-28Γ下進(jìn)行8-15天的暗培養(yǎng)，獲得金絲李愈傷組織；
[0010] (3)愈傷組織分化芽:將上述得到的愈傷組織移置芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，其中，芽誘導(dǎo) 培養(yǎng)基的配方為MS+6-8g/L瓊脂+25-29g/L蔗糖+0 · 3-0 · 8mg/L 6-芐基嘌呤+0 · 8-1 · 5mg/L萘 乙酸，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值為6.0-7.5，于25-28°C條件下，光暗培養(yǎng)30-45天后愈傷組織分化 出芽；
[0011] (4)芽生根:待步驟(3)中芽長(zhǎng)至5-6cm時(shí)，將芽移置根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，其中，根誘導(dǎo) 培養(yǎng)基的配方為MS+6-8g/L瓊脂+25-29g/L蔗糖+0 · 8-2 · 5mg/L吲哚乙酸+0 · 5-1 · 5mg/L激動(dòng) 素+0 · 8-1 · 5mg/L活性炭+0 · 1-0 · 5mg/L瑞毒霜+0 · 5-1 · 5mg/L復(fù)硝酸鈉+0 · 3-0 · 8mg/L維生素 D2+0.15-0.35mg/L微囊藻素，于25-28°C條件下，光暗培養(yǎng)20-30天，培養(yǎng)出幼苗，組培結(jié)束。
[0012] 在本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說明，所述每個(gè)培養(yǎng)皿放入3-5片的葉條片。
[0013]在本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說明，所述愈傷組織培養(yǎng)基的配方為MS+6-8g/L瓊脂+25-29g/L蔗糖+0·3-0·8mg/L 6-芐基嘌呤+0·8-1 ·5mg/L萘乙酸，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值為6·5-7·0; 將培養(yǎng)基放入高溫滅菌鍋，在121-130°(：、1.1-1.51^/〇112條件下進(jìn)行滅菌30-501^11，然后取 出冷卻至45°C后迅速在超凈工作臺(tái)中傾倒分裝到已經(jīng)經(jīng)過高溫滅菌鍋滅菌的培養(yǎng)皿中。 [0014]在本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說明，所述培養(yǎng)皿的規(guī)格為90 X 15mm;所述裝入培養(yǎng)皿中 的培養(yǎng)基為培養(yǎng)皿體積的1 /3-1 /2。
[0015] 在本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說明，所述步驟(3)和步驟(4)中的光暗培養(yǎng)周期為光培 養(yǎng)12h，暗培養(yǎng)4h。
[0016] 在本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說明，所述光培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為1500-1700勒克斯。
[0017] 在本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說明，所述金絲李葉為顏色嫩綠、完整、無病蟲害;金絲李 葉的采摘時(shí)間為晚上1 _2點(diǎn)。
[0018] 綜上所述，由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果是：
[0019] 1.本發(fā)明通過在金絲李生根階段添加了組合配方提供金絲李生根壯苗所需的因 子，能夠提供金絲李的良好生根條件，經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)采用本發(fā)明的生根配方，能夠快速促進(jìn) 金絲李種子細(xì)胞的分裂，加快出芽時(shí)間，且能保證芽苗健康成長(zhǎng)，無病害，顏色油綠，芽肉厚 度飽滿，出芽率達(dá)到100%。其中分裂素需要在生長(zhǎng)素存在的情況下才嫩給發(fā)揮作用，復(fù)配 上的為激動(dòng)素分裂素、吲哚乙酸為生長(zhǎng)素相互作用，保證激動(dòng)素在有生長(zhǎng)素的情況下充分 發(fā)揮其作用，吲哚乙酸能夠調(diào)控植物維管組織的分化、育性，還可以與其他激素相互作用； 微囊藻素中富含有活性氧，植物中低濃度的活性氧作為第二信使能在植物細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途 徑中介導(dǎo)多種應(yīng)答反應(yīng)，但是高濃度的活性氧則引起生物大分子的氧化損傷甚至細(xì)胞死 亡，經(jīng)過試驗(yàn)研究在配方中添加微囊藻素0.15-0.35mg/L，保證能夠提供給植物低濃度的活 性氧，不會(huì)損傷細(xì)胞，起到第二信使的作用，促進(jìn)赤霉素流向植物系統(tǒng)，促進(jìn)生長(zhǎng)素流向植 物系統(tǒng)，使得根向地性更好，促進(jìn)直根系生長(zhǎng);復(fù)配上的維生素 D2具有能夠，能誘導(dǎo)形成不 定根，調(diào)節(jié)生長(zhǎng)、促進(jìn)生根，但是其的滲透力較差，需要借助外力將其帶動(dòng)流向植物全身，使 其能夠快速發(fā)揮作用；復(fù)硝酚鈉能夠與植物接觸后能迅速滲透到植物體內(nèi)，促進(jìn)細(xì)胞的原 生質(zhì)流動(dòng)，提高細(xì)胞活力，維生素 D2在復(fù)硝酚鈉的帶動(dòng)下也能迅速的滲透至植物體內(nèi)；在組 培過程中往往會(huì)出現(xiàn)黃化現(xiàn)象，一般兩個(gè)原因，細(xì)胞活性不足死亡和病菌感染死亡，瑞毒霜 的復(fù)配添加能夠有效的抑制病原真菌菌絲體的正常生長(zhǎng)或直接殺死病菌，又能促進(jìn)植物生 長(zhǎng);并具有促進(jìn)作物根系生長(zhǎng)發(fā)育、生根壯苗，提且其滲透率極高，兩個(gè)小時(shí)就能移動(dòng)到莖 部，保證了金絲李在第一時(shí)間上擁有健康的培養(yǎng)環(huán)境，提高金絲李的成活率。
[0020] 2.本發(fā)明利用深夜的金絲李葉進(jìn)行組培，為金絲李葉進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)提供良好 的條件，能夠快速使金絲李葉形成金絲李葉愈傷組織，進(jìn)而減少了組培的時(shí)間。
[0021] 3.本發(fā)明形成金絲李葉愈傷組織后發(fā)芽、生根都進(jìn)行光暗培養(yǎng)，不僅僅通過光培 養(yǎng)促進(jìn)金絲李葉愈傷組織形成葉綠素，進(jìn)行光合作用合成能源提供生長(zhǎng)所需能量，而且通 過暗培養(yǎng)促進(jìn)其進(jìn)行呼吸作用，物質(zhì)轉(zhuǎn)換，促進(jìn)生長(zhǎng)。
[0022] 4.本發(fā)明光培養(yǎng)使用的是較弱的光照強(qiáng)度，不僅提高了金絲李組培的增殖倍數(shù)， 縮短周期培養(yǎng)的時(shí)間，且采用弱光的光培養(yǎng)能夠減少日光燈補(bǔ)光時(shí)產(chǎn)生的電耗和產(chǎn)生的熱 量，減少降溫所需的費(fèi)用，因此采用此方法可提高生產(chǎn)效率，降低生產(chǎn)成本，有利產(chǎn)業(yè)的發(fā) 展，通過本發(fā)明的方法金絲李的發(fā)芽率達(dá)到70 %以上。
[0023] 5.本發(fā)明的方法有利于工業(yè)化生產(chǎn)和自動(dòng)化監(jiān)控，大大的節(jié)約了人力、物力和田 間作物的土地;在金絲李苗栽培生產(chǎn)領(lǐng)域中具有極大的推廣價(jià)值。 【【具體實(shí)施方式】】
[0024] 實(shí)施例1:
[0025] -種金絲李的組培快繁方法，包括如下步驟：
[0026] (1)外植體的消毒:在6月份晚上1點(diǎn)采摘顏色嫩綠、完整、無病蟲害的金絲李葉，使 用20 %樂果乳劑稀釋400倍液浸泡5min，取出后放入超凈工作臺(tái)使用4 %維生素 C水溶液浸 泡30min后再3%的次氯酸進(jìn)行消毒5min，然后用無菌水沖洗3次，最后使用滅菌濾紙吸干金 絲李葉表面的無菌水；
[0027] (2)愈傷組織培養(yǎng):使用解剖刀沿著金絲李葉的莖干位置橫切出長(zhǎng)15cm，寬IOcm的 葉條片，將3片葉條片放入已經(jīng)裝入是培養(yǎng)皿1/3體積的愈傷組織培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕壓 葉條片，在29 °C下暗培養(yǎng)8天，而后轉(zhuǎn)入26 °C下進(jìn)行8天的暗培養(yǎng)，獲得金絲李愈傷組織；其 中，愈傷組織培養(yǎng)基的配方為MS+6g/L瓊脂+25g/L蔗糖+0 · 3mg/L 6-芐基嘌呤+0 · 8mg/L萘乙 酸，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值為6.5;將培養(yǎng)基放入高溫滅菌鍋，在121°C、I. lkg/cm2條件下進(jìn)行滅 菌30min，然后取出冷卻至45°C后迅速在超凈工作臺(tái)中傾倒分裝到已經(jīng)經(jīng)過高溫滅菌鍋滅 菌的培養(yǎng)皿中；