一種葡萄的組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)種植技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種葡萄的組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002]葡萄是一種應(yīng)用廣泛，經(jīng)濟(jì)價(jià)值極高的作物。在栽培方式上，呈現(xiàn)出由傳統(tǒng)自根苗向嫁接苗逐漸過(guò)渡的發(fā)展趨勢(shì)。常規(guī)繁殖多采用嫁接和扦插，但這兩種繁殖方式易造成病毒積累，同時(shí)繁殖時(shí)間受季節(jié)限制。組織培養(yǎng)在葡萄快速繁殖中應(yīng)用較為廣泛，其優(yōu)點(diǎn)不僅可以加快繁殖速度，而且還可以熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)，有效地消除病毒，獲得無(wú)毒苗木。葡萄的組培快繁可有效解決葡萄繁殖的技術(shù)難題。
[0003]然而，要想達(dá)到快速繁殖的目的，必須考慮葡萄外植體、培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)光照強(qiáng)度等內(nèi)外因素，其中培養(yǎng)基的選擇占據(jù)重要位置。凝固劑(支持劑)一一瓊脂也具有較大的影響，若瓊脂濃度過(guò)大，則會(huì)對(duì)根的伸長(zhǎng)和生長(zhǎng)產(chǎn)生阻礙作用；若瓊脂濃度過(guò)低，則會(huì)出現(xiàn)無(wú)菌苗倒伏等不利因素。因此，有必要針對(duì)不同葡萄品種篩選適合組培快繁的培養(yǎng)條件，找到最佳的培養(yǎng)環(huán)境，加快苗木的快速繁殖。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的發(fā)明目的在于:針對(duì)上述存在的問(wèn)題，提供一種葡萄的組培快繁方法，通過(guò)篩選組培過(guò)程中的外植體、培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)光照等條件，達(dá)到提高生根率和成活率的目的。
[0005]本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
[0006]一種葡萄的組培快繁方法，包括下述過(guò)程:選取旺盛生長(zhǎng)的葡萄新蔓，剪取半木質(zhì)化莖段作為外植體材料，分別進(jìn)行外植體消毒、啟動(dòng)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和馴化移栽；所述啟動(dòng)培養(yǎng)的方法為:將消毒后的外植體放到培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度控制在25±2°C，光照時(shí)間12h.cf1，光照強(qiáng)度20001x，培養(yǎng)20_24d得到葡萄小芽；其中所述培養(yǎng)基 A 是在 NLN 培養(yǎng)基加入 ΙΒΑ0.2-0.4mg.L_1+6-BAl.0-1.2mg.L_1+KT0.5-0.8mg.Γ1+ 蔗糖30-35g.L-1+ 瓊脂 6.5-7.8g.?Λ pH 為 5.5-5.8。
[0007]所述外植體消毒的方法為先用70%酒精將外植體打濕，用0.1 %的升汞消毒6-10min，用無(wú)菌水反復(fù)沖洗5次，每次沖洗10_15min。
[0008]所述增殖培養(yǎng)的方法為:單芽萌發(fā)生長(zhǎng)至長(zhǎng)度為5-6cm時(shí)，剪切萌發(fā)的新梢，去除大葉片后剪成長(zhǎng)5-15mm的單芽莖段，接種到培養(yǎng)基B上，培養(yǎng)溫度控制在25±2°C，光照時(shí)間 12h.cf1，光照強(qiáng)度 20001x，培養(yǎng) 28-32d ;所述培養(yǎng)基 B 為 MS+IBA 0.3-0.5mg.L_1+KT0.5-0.8mg.L-1+ 蔗糖 30-35g.L-1+ 瓊脂 6.5-7.6g.?Λ pH 為 5.5-5.8。
[0009]所述生根培養(yǎng)的方法為:選用增殖培養(yǎng)過(guò)程中生長(zhǎng)健壯的組培苗，剪切長(zhǎng)度在2.5-3.0cm并含有頂端生長(zhǎng)點(diǎn)的新梢，接種在培養(yǎng)基C上，培養(yǎng)基C為1/2MS+6-BA0.5-0.8mg.L kKT0.5-0.8mg.L ^IBA0.2-0.4mg.L1+ 鹿糖 30_35g.L1+ 瓊脂 6.5-7.6g *L S pH 為5.5~5.80
[0010]所述馴化移栽包括煉苗和移栽，所述煉苗是指將生根培養(yǎng)所得組培苗移至有自然光照的室溫條件下，置放于散射光下煉苗5-7d后，移至直射光照射的地方繼續(xù)煉苗5-7d，待組培苗的葉片顏色變濃綠、富有光澤時(shí)揭開(kāi)封口膜，繼續(xù)煉苗3-5d，并及時(shí)噴水防止葉片萎蔫。
[0011]綜上所述，由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明以葡萄的半木質(zhì)化莖段為外植體，在啟動(dòng)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)等步驟中采用了適于葡萄各個(gè)成長(zhǎng)階段的組培培養(yǎng)基，使得葡萄生芽健壯、再生苗生長(zhǎng)速度快、生根數(shù)量多、生根健壯，是一種葡萄快速繁殖的技術(shù)。本發(fā)明中育苗基質(zhì)所用的原材料來(lái)源廣泛，應(yīng)用成本低；有利于葡萄苗工廠化、規(guī)模化、集約化生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0012]本發(fā)明以葡萄的半木質(zhì)化莖段為外植體，消毒后進(jìn)行啟動(dòng)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的技術(shù)，以下通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述。
[0013]實(shí)施例1
[0014]選取旺盛生長(zhǎng)的葡萄新蔓，剪取半木質(zhì)化莖段作為外植體材料，分別進(jìn)行外植體消毒、啟動(dòng)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和馴化移栽。
[0015]外植體消毒的方法為先用70%酒精將外植體打濕，用0.1%的升汞消毒6min，用無(wú)菌水反復(fù)沖洗5次，每次沖洗lOmin。
[0016]啟動(dòng)培養(yǎng)的方法為:將消毒后的外植體放到培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度控制在25±2°C，光照時(shí)間12h.cf1，光照強(qiáng)度20001x的條件下，培養(yǎng)20d得到葡萄小芽；其中，本實(shí)施例所用培養(yǎng)基A是在NLN培養(yǎng)基加入IBA0.2mg.Γ'+Θ-ΒΑΙ.0mg.Γ'+ΚΤΟ.5mg.Γ1+鹿糖 30g.I71+ 瓊脂 6.5g.L—1，pH 為 5.5。
[0017]增殖培養(yǎng)的方法為:單芽萌發(fā)生長(zhǎng)至長(zhǎng)度為5-6cm時(shí)，剪切萌發(fā)的新梢，去除大葉片后剪成長(zhǎng)5-15mm的單芽莖段，接種到培養(yǎng)基B上，培養(yǎng)溫度控制在25±2°C，光照時(shí)間 12h.cf1，光照強(qiáng)度 20001x，培養(yǎng) 28d ;培養(yǎng)基 B 為 MS+IBA0.5mg.L-1+KT 0.5mg.Γ1+ 蔗糖 35g.I71+ 瓊脂 7.6g.L—1，pH 為 5.5。
[0018]生根培養(yǎng)的方法為:選用增殖培養(yǎng)過(guò)程中生長(zhǎng)健壯的組培苗，剪切長(zhǎng)度在
2.5-3.0cm并含有頂端生長(zhǎng)點(diǎn)的新梢，接種在培養(yǎng)基C上，培養(yǎng)基C為1/2MS+6-BA0.5mg -Li+KT0.5mg.L klBA0.2mg.L1+ 鹿糖 30g.L1+ 瓊脂 6.5g.L \ pH 為 5.5。
[0019]馴化移栽包括煉苗和移栽，其中煉苗是將生根培養(yǎng)所得組培苗移至有自然光照的室溫條件下，置放于散射光下煉苗5d后，移至直射光照射的地方繼續(xù)煉苗7d，待組培苗的葉片顏色變濃綠、富有光澤時(shí)揭開(kāi)封口膜，繼續(xù)煉苗5d，并及時(shí)噴水防止葉片萎蔫。
[0020]實(shí)施例2
[0021]選取旺盛生長(zhǎng)的葡萄新蔓，剪取半木質(zhì)化莖段作為外植體材料，分別進(jìn)行外植體消毒、啟動(dòng)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和馴化移栽。
[0022]外植體消毒的方法為先用70%酒精將外植體打濕，用0.1 %的升汞消毒6-10min，用無(wú)菌水反復(fù)沖洗5次，每次沖洗15min。
[0023]啟動(dòng)培養(yǎng)的方法為:將消毒后的外植體放到培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度控制在25±2°C，光照時(shí)間12h.cf1，光照強(qiáng)度20001x的條件下，培養(yǎng)24d得到葡萄小芽；其中，本實(shí)施例所用培養(yǎng)基A是在NLN培養(yǎng)基加入IBA0.4mg.Γ'+Θ-ΒΑΙ.2mg.L_1+KT0.8mg.Γ1+鹿糖 35g.I71+ 瓊脂 7