本發(fā)明屬一種簡單高效生產(chǎn)半夏胚狀體和組培苗的方法。
背景技術(shù)：
半夏為天南星科多年生草本植物，《中國藥典》收載的半夏為Pinellia ternata(Thunb)Briet，是一種重要的傳統(tǒng)中藥材和出口物資，其塊莖炮制后具有燥濕化痰、降逆止嘔，消痞散結(jié)之功效，生用外治癰腫。由于半夏以地下塊莖入藥，隨市場需求不斷增加，濫采亂挖十分嚴(yán)重，使得野生資源岌岌可危。為解決資源保護(hù)與市場需求的矛盾，近些年對半夏組培快繁技術(shù)的研究與應(yīng)用在國內(nèi)迅速展開。綜合多途徑檢索的結(jié)果表明，目前各單位無論用球莖、葉片、葉柄或珠芽，何種材料作外植體，都要選用兩種或兩種以上的生長調(diào)節(jié)劑(有時(shí)被泛稱“激素”)，主要有細(xì)胞分裂素(CTK)中的N6-芐基腺嘌呤(BA)或激動(dòng)素(KT)，生長素(Auxin)中的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、或吲哚丁酸(IBA)等，再按不同濃度與配比復(fù)配成幾種成分各不相同的培養(yǎng)基，分別用于“外植體啟動(dòng)”、“愈傷組織誘導(dǎo)”、“胚狀體誘導(dǎo)”、“成苗誘導(dǎo)”、“增殖擴(kuò)繁”和“生根”等不同的生產(chǎn)環(huán)節(jié)。整個(gè)生產(chǎn)程序比較繁雜，而且胚狀體的誘導(dǎo)率一般只有40-50％，30d為一個(gè)周期，組培苗的繁殖倍數(shù)也只有5-10，效率偏低。
靈發(fā)素(Lingfasu，LFS；代號PGR-08)是一種新型生長調(diào)節(jié)劑，它同時(shí)具有CTK和Auxin兩類激素的生物活性，用它配制成的單一培養(yǎng)基，已經(jīng)成功建立了三七(見《中國中藥雜志》，2007年32卷6期，PP.481-483.)、羅漢果(見《種子》，2006年25卷8期，PP.4-6)和翅子羅漢果(見《種子》，2008年27卷12期，PP.12-14)，等名貴中藥材組培苗簡單高效的生產(chǎn)方法。但是，尚未檢索到用于半夏胚狀體和組培苗生產(chǎn)的資料。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種簡單高效生產(chǎn)半夏胚狀體和組培苗的方法。
本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題：
申請人利用靈發(fā)素(Lingfasu，LFS；代號PGR-08)同時(shí)具有CTK和Auxin兩類激素生物活性的特點(diǎn)，經(jīng)過對其使用濃度的反復(fù)篩選，將LFS 0.3mg·L-1(0.05-2.0均為有效濃度)添加到常規(guī)MS固體培養(yǎng)基中，以半夏葉柄切段(或其它離體器官)為繼代擴(kuò)繁材料，進(jìn)行常規(guī)組織培養(yǎng)。由于只用MS+LFS 0.3mg·L-1這種單一培養(yǎng)基就能取代常規(guī)要用兩種或兩種以上生長調(diào)節(jié)劑配制成的多種培養(yǎng)基，一次性完成“外植體啟動(dòng)”、“愈傷組織誘導(dǎo)”、“胚狀體誘導(dǎo)”、“成苗誘導(dǎo)”、“增殖擴(kuò)繁”和“生根”等多個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)，特別是能誘導(dǎo)葉柄切段(一端或兩端)形成胚性愈傷組織并直接分化出大量胚狀體，誘導(dǎo)率達(dá)80-100％，既能為半夏人工種子的研制提供人工胚，又能繼續(xù)促其萌發(fā)建成組培苗(若葉柄切段已有珠芽原基，還可使珠芽提前萌發(fā)成苗)，組培苗繁殖倍數(shù)達(dá)10-20，或者更高。從而實(shí)現(xiàn)簡單高效地生產(chǎn)半夏胚狀體和組培苗。
具體實(shí)施方式
以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例
申請人利用LFS同時(shí)具有CTK和Auxin兩類激素生物活性的特點(diǎn)，經(jīng)過對適宜濃度的反復(fù)篩選及與常規(guī)方法的比較研究發(fā)現(xiàn)：用MS+LFS 0.3mg·L-1這種單一培養(yǎng)基，以半夏球莖為外植體，按照常規(guī)培養(yǎng)獲得無菌苗后，取其葉柄切段(或葉片等其它離體器官)為繼代擴(kuò)繁材料，仍用這種單一培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)，能誘導(dǎo)葉柄切段一端或兩端迅速形成胚性愈傷組織并分化出胚狀體，誘導(dǎo)率達(dá)80-100％；胚狀體可用于制備人工種子，亦能繼續(xù)萌發(fā)生長成為組培苗。一次繼代培養(yǎng)，組培苗(未萌發(fā)的胚狀體及苗高≤2cm者不計(jì))增殖倍數(shù)可達(dá)10-20，或更高。若葉柄切段已有珠芽原基，珠芽亦可萌發(fā)成苗。
因此，以MS+LFS 0.3mg·L-1這種單一培養(yǎng)基取代常規(guī)使用的幾種不同的培養(yǎng)基可以簡單高效地生產(chǎn)半夏胚狀體與組培苗。
雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。