本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種紅火炬郁金優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法。

背景技術(shù)：
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紅火炬郁金(Curcuma hybrida‘Red Torch’)是華南植物園近年來(lái)從國(guó)外引進(jìn)、馴化并通過(guò)廣東省審定農(nóng)作物新品種。它的花序長(zhǎng)、苞片數(shù)多，花色艷麗、花期長(zhǎng)、觀賞性好，可做盆栽或切花觀賞，也可應(yīng)用于園林綠化，一經(jīng)推出，供不應(yīng)求。紅火炬郁金常用的繁殖方法為分球繁殖，但繁殖數(shù)量有限且易被病菌感染。目前，國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有紅火炬郁金組織培養(yǎng)種苗繁殖的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的是提供一種簡(jiǎn)單實(shí)惠、切實(shí)可行、應(yīng)用價(jià)值高的紅火炬郁金優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法。

一種紅火炬郁金優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)外植體的獲得和不定芽誘導(dǎo)：在生長(zhǎng)季節(jié)，選取生長(zhǎng)旺盛、無(wú)病蟲(chóng)害危害的紅火炬郁金，11月底挖取地下球莖，將球莖洗凈、消毒、晾干后進(jìn)行貯藏，取貯藏2～3個(gè)月的紅火炬郁金球莖埋栽于50％多菌靈可濕性粉劑600～800倍液澆灌的細(xì)沙中，放入人工氣候箱中進(jìn)行休眠芽的誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度25～30℃，暗培養(yǎng)，當(dāng)球莖上長(zhǎng)出的小芽芽高1～2厘米時(shí)，將小芽作為外植體進(jìn)行消毒處理，然后接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24～30℃，光照度1500～2000勒克斯，光照時(shí)間12～16小時(shí)/天，直至外植體基部長(zhǎng)出不定芽；所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤3.0～5.0毫克、激動(dòng)素2.0～4.0毫克、萘乙酸0.1～0.3毫克、蔗糖20～30克、瓊脂6～7克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 5.8-6.0；

2)繼代增殖：將誘導(dǎo)出的不定芽切割后接種至繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖，培養(yǎng)溫度24～30℃，光照度1500～2000勒克斯，光照時(shí)間12～16小時(shí)/天，繼代增殖得到的不定芽能用于生根培養(yǎng)或繼續(xù)繼代增殖；所述的繼代培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤1.0～2.0毫克、激動(dòng)素1.0～3.0毫克、萘乙酸0.1～0.3毫克、蔗糖20～30克、瓊脂6～7克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 5.8-6.0；

3)生根培養(yǎng)：當(dāng)繼代增殖的不定芽芽高2～3厘米時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26～30℃，光照度1800～2500勒克斯，光照時(shí)間12～16小時(shí)/天；所述的生根培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有吲哚丁酸1.0～3.0毫克、活性炭1.0～2.0克、蔗糖15～20克、瓊脂6～7克，其余為1/2MS培養(yǎng)基，pH5.8～6.0；

4)試管苗移栽：當(dāng)生根培養(yǎng)得到的試管苗長(zhǎng)至4～5厘米高時(shí)，在自然光照下煉苗7～10天，然后取出試管苗并洗凈根部的培養(yǎng)基，移栽到泥炭土和珍珠巖按質(zhì)量比2～4:1混合的基質(zhì)中，由此得到紅火炬郁金的種苗。

步驟1)所述的消毒處理具體為：將小芽用體積分?jǐn)?shù)75％酒精浸泡10～30秒后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％升汞溶液消毒5～10分鐘，無(wú)菌水沖洗4～5次。

本發(fā)明的方法是將紅火炬郁金球莖經(jīng)休眠芽誘導(dǎo)得到的小芽作為外植體，經(jīng)不定芽誘導(dǎo)、繼代增殖、生根培養(yǎng)和試管苗移栽各階段，選擇各階段合適的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件，實(shí)現(xiàn)紅火炬郁金種苗的快速繁殖，繁育出優(yōu)質(zhì)的紅火炬郁金種苗以滿足市場(chǎng)的需要。本發(fā)明的方法簡(jiǎn)單實(shí)惠、切實(shí)可行、應(yīng)用價(jià)值高，實(shí)施該發(fā)明只需有簡(jiǎn)單的植物組織培養(yǎng)設(shè)備即可進(jìn)行。

具體實(shí)施方式：

以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制。

實(shí)施例1：

1.外植體的獲得和不定芽的誘導(dǎo)：在生長(zhǎng)季節(jié)，選取生長(zhǎng)旺盛、無(wú)病蟲(chóng)害危害的紅火炬郁金(Curcuma hybrida‘Red Torch’)優(yōu)良株系進(jìn)行標(biāo)記，11月底挖取地下球莖，用自來(lái)水洗干凈后用50％多菌靈可濕性粉劑600倍液浸泡20分鐘，晾干后放入10℃的冷庫(kù)中貯藏2個(gè)月，然后將球莖埋栽于先用自來(lái)水洗凈再用50％多菌靈可濕性粉劑600倍液澆灌的細(xì)沙中，放入人工氣候箱中進(jìn)行休眠芽的誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度25℃，暗培養(yǎng)。紅火炬郁金球莖在培養(yǎng)20天會(huì)長(zhǎng)出1厘米的小芽，以此小芽為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)。小芽先在體積分?jǐn)?shù)75％酒精中浸泡10秒，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％升汞溶液消毒5分鐘，無(wú)菌水沖洗4次，接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度24℃，光照度1500勒克斯(lx)，光照時(shí)間12小時(shí)/天，培養(yǎng)40天時(shí)外植體基部有不定芽長(zhǎng)出，消毒成功率75％。所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤(6-BA)3.0毫克、激動(dòng)素(KT)2.0毫克、萘乙酸(NAA)0.1毫克、蔗糖20克、瓊脂6克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 5.8；其配制方法是將3.0毫克6-芐基嘌呤(6-BA)、2.0毫克激動(dòng)素(KT)、0.1毫克萘乙酸(NAA)、20克蔗糖和6克瓊脂，加到少量MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用MS培養(yǎng)基(液體)補(bǔ)齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

2.不定芽誘導(dǎo)和繼代增殖：將誘導(dǎo)出的不定芽切割后接種至繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖，培養(yǎng)溫度24℃，光照度1500勒克斯(lx)，光照時(shí)間12小時(shí)/天，一般30天為1個(gè)繼代增殖周期，每1個(gè)繼代增殖周期后的增殖倍數(shù)為3倍。繼代增殖得到的不定芽能用于生根培養(yǎng)或繼續(xù)繼代增殖。所述的繼代培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤(6-BA)1.0毫克、激動(dòng)素(KT)1.0毫克、萘乙酸(NAA)0.1毫克、蔗糖20克、瓊脂6克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 5.8；其配制方法是將1.0毫克6-芐基嘌呤(6-BA)、1.0毫克激動(dòng)素(KT)、0.1毫克萘乙酸(NAA)、20克蔗糖和6克瓊脂，加到少量MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用MS培養(yǎng)基(液體)補(bǔ)齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

3.生根培養(yǎng)：將繼代增殖的不定芽芽高2厘米時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26℃，光照度1800勒克斯(lx)，光照時(shí)間12小時(shí)/天，能正常生根，培養(yǎng)30天時(shí)生根率可達(dá)100％，每株苗有根數(shù)4條。所述的生根培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有吲哚丁酸(IBA)1.0毫克、活性炭(AC)1.0克、蔗糖15克、瓊脂6克，其余為1/2MS培養(yǎng)基，pH5.8；其配制方法是將1.0毫克吲哚丁酸(IBA)、1.0克活性炭(AC)、15克蔗糖和6克瓊脂，加到少量1/2MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用1/2MS培養(yǎng)基(液體)補(bǔ)齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

4.試管苗移栽：當(dāng)生根培養(yǎng)得到的試管苗長(zhǎng)至4厘米高時(shí)，在自然光照下煉苗10天。然后打開(kāi)瓶塞，用鑷子把試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入泥炭土和珍珠巖按質(zhì)量比2:1混合的基質(zhì)中，注意澆水、遮蔭、保溫和保濕，由此得到紅火炬郁金的種苗，成活率可達(dá)90％。

實(shí)施例2：

1.外植體的獲得和不定芽的誘導(dǎo)：在生長(zhǎng)季節(jié)，選取生長(zhǎng)旺盛、無(wú)病蟲(chóng)害危害的紅火炬郁金(Curcuma hybrida‘Red Torch’)優(yōu)良株系進(jìn)行標(biāo)記，11月底挖取地下球莖，用自來(lái)水洗干凈后用50％多菌靈可濕性粉劑700倍液浸泡25分鐘，晾干后放入12℃的冷庫(kù)中貯藏2.5個(gè)月，然后將球莖埋栽于先用自來(lái)水洗凈再用50％多菌靈可濕性粉劑700倍液澆灌的細(xì)沙中，放入人工氣候箱中進(jìn)行休眠芽的誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度28℃，暗培養(yǎng)。紅火炬郁金球莖在培養(yǎng)18天會(huì)長(zhǎng)出1.5厘米的小芽，以此小芽為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)。小芽先在體積分?jǐn)?shù)75％酒精中浸泡20秒，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％升汞溶液消毒8分鐘，無(wú)菌水沖洗5次，接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度28℃，光照度1800勒克斯(lx)，光照時(shí)間14小時(shí)/天，培養(yǎng)35天時(shí)外植體基部有不定芽長(zhǎng)出，消毒成功率80％。所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤(6-BA)4.0毫克、激動(dòng)素(KT)3.0毫克、萘乙酸(NAA)0.2毫克、蔗糖25克、瓊脂6.5克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 5.9；其配制方法是將4.0毫克6-芐基嘌呤(6-BA)、3.0毫克激動(dòng)素(KT)、0.2毫克萘乙酸(NAA)、25克蔗糖和6.5克瓊脂，加到少量MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用MS培養(yǎng)基(液體)補(bǔ)齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

2.不定芽誘導(dǎo)和繼代增殖：將誘導(dǎo)出的不定芽切割后接種至繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖，培養(yǎng)溫度28℃，光照度1800勒克斯(lx)，光照時(shí)間14小時(shí)/天，一般30天為1個(gè)繼代增殖周期，每1個(gè)繼代增殖周期后的增殖倍數(shù)為3.5倍。繼代增殖得到的不定芽能用于生根培養(yǎng)或繼續(xù)繼代增殖。所述的繼代培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤(6-BA)1.5毫克、激動(dòng)素(KT)2.0毫克、萘乙酸(NAA)0.2毫克、蔗糖25克、瓊脂6.5克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 5.9；其配制方法是將1.5毫克6-芐基嘌呤(6-BA)、2.0毫克激動(dòng)素(KT)、0.2毫克萘乙酸(NAA)、25克蔗糖和6.5克瓊脂，加到少量MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用MS培養(yǎng)基(液體)補(bǔ)齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

3.生根培養(yǎng)：將繼代增殖的不定芽芽高2.5厘米時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度28℃，光照度2000勒克斯(lx)，光照時(shí)間14小時(shí)/天，能正常生根，培養(yǎng)30天時(shí)生根率可達(dá)100％，每株苗有根數(shù)5條。所述的生根培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有吲哚丁酸(IBA)2.0毫克、活性炭(AC)1.5克、蔗糖18克、瓊脂6.5克，其余為1/2MS培養(yǎng)基，pH5.9；其配制方法是將2.0毫克吲哚丁酸(IBA)、1.5克活性炭(AC)、18克蔗糖和6.5克瓊脂，加到少量1/2MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用1/2MS培養(yǎng)基(液體)補(bǔ)齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

4.試管苗移栽：當(dāng)生根培養(yǎng)得到的試管苗長(zhǎng)至4.5厘米高時(shí)，在自然光照下煉苗8天。然后打開(kāi)瓶塞，用鑷子把試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入泥炭土和珍珠巖按質(zhì)量比3:1混合的基質(zhì)中，注意澆水、遮蔭、保溫和保濕，由此得到紅火炬郁金的種苗，成活率可達(dá)95％。

實(shí)施例3：

1.外植體的獲得和不定芽的誘導(dǎo)：在生長(zhǎng)季節(jié)，選取生長(zhǎng)旺盛、無(wú)病蟲(chóng)害危害的紅火炬郁金(Curcuma hybrida‘Red Torch’)優(yōu)良株系進(jìn)行標(biāo)記，11月底挖取地下球莖，用自來(lái)水洗干凈后用50％多菌靈可濕性粉劑800倍液浸泡30分鐘，晾干后放入15℃的冷庫(kù)中貯藏3個(gè)月，然后將球莖埋栽于先用自來(lái)水洗凈再用50％多菌靈可濕性粉劑800倍液澆灌的細(xì)沙中，放入人工氣候箱中進(jìn)行休眠芽的誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度30℃，暗培養(yǎng)。紅火炬郁金球莖在培養(yǎng)15天會(huì)長(zhǎng)出2厘米的小芽，以此小芽為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)。小芽先在體積分?jǐn)?shù)75％酒精中浸泡30秒，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％升汞溶液消毒10分鐘，無(wú)菌水沖洗5次，接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度30℃，光照度2000勒克斯(lx)，光照時(shí)間16小時(shí)/天，培養(yǎng)30天時(shí)外植體基部有不定芽長(zhǎng)出，消毒成功率85％。所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤(6-BA)5.0毫克、激動(dòng)素(KT)4.0毫克、萘乙酸(NAA)0.3毫克、蔗糖30克、瓊脂7克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 6.0；其配制方法是將5.0毫克6-芐基嘌呤(6-BA)、4.0毫克激動(dòng)素(KT)、0.3毫克萘乙酸(NAA)、30克蔗糖和7克瓊脂，加到少量MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用MS培養(yǎng)基(液體)補(bǔ)齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

2.不定芽誘導(dǎo)和繼代增殖：將誘導(dǎo)出的不定芽切割后接種至繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖，培養(yǎng)溫度30℃，光照度2000勒克斯(lx)，光照時(shí)間16小時(shí)/天，一般30天為1個(gè)繼代增殖周期，每1個(gè)繼代增殖周期后的增殖倍數(shù)為4倍。繼代增殖得到的不定芽能用于生根培養(yǎng)或繼續(xù)繼代增殖。所述的繼代培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤(6-BA)2.0毫克、激動(dòng)素(KT)3.0毫克、萘乙酸(NAA)0.3毫克、蔗糖30克、瓊脂7克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 6.0；其配制方法是將2.0毫克6-芐基嘌呤(6-BA)、3.0毫克激動(dòng)素(KT)、0.3毫克萘乙酸(NAA)、30克蔗糖和7克瓊脂，加到少量MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用MS培養(yǎng)基(液體)補(bǔ)齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

3.生根培養(yǎng)：將繼代增殖的不定芽芽高3厘米時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度30℃，光照度2500勒克斯(lx)，光照時(shí)間16小時(shí)/天，能正常生根，培養(yǎng)30天時(shí)生根率可達(dá)100％，每株苗有根數(shù)6條。所述的生根培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有吲哚丁酸(IBA)3.0毫克、活性炭(AC)2.0克、蔗糖20克、瓊脂7克，其余為1/2MS培養(yǎng)基，pH 6.0；其配制方法是將3.0毫克吲哚丁酸(IBA)、2.0克活性炭(AC)、20克蔗糖和7克瓊脂，加到少量1/2MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用1/2MS培養(yǎng)基(液體)補(bǔ)齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

4.試管苗移栽：當(dāng)生根培養(yǎng)得到的試管苗長(zhǎng)至5厘米高時(shí)，在自然光照下煉苗7天。然后打開(kāi)瓶塞，用鑷子把試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入泥炭土和珍珠巖按質(zhì)量比4:1混合的基質(zhì)中，注意澆水、遮蔭、保溫和保濕，由此得到紅火炬郁金的種苗，成活率可達(dá)100％。