本發(fā)明屬于植物快繁方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種繁育考來(lái)木的方法。

背景技術(shù)：

大多數(shù)景觀(guān)植物的花期主要集中在早春到初夏時(shí)期，雖然開(kāi)展了色葉植物的推廣應(yīng)用工程，起到了一定效果，但秋冬季節(jié)植物景觀(guān)仍相對(duì)單調(diào)，廣大市民對(duì)于冬季開(kāi)花植物的需求十分渴望。

考來(lái)木屬蕓香科、考來(lái)木屬常綠小灌木，原產(chǎn)澳大利亞，分布較為廣泛，樹(shù)型不規(guī)則。呈直立或半匍匐生長(zhǎng)；葉片短小，對(duì)生，背面多有絨毛。逆光觀(guān)察時(shí)可見(jiàn)半透明的油滴狀斑點(diǎn)；花多著生于葉腋處，鐘狀、燈籠狀、長(zhǎng)管狀或細(xì)長(zhǎng)管狀，長(zhǎng)約2.5 cm，單株花朵數(shù)量眾多，花瓣頂端多反卷呈星狀，花蕊突出花瓣外?；ㄆ谳^長(zhǎng)，多數(shù)品種從夏末開(kāi)至晚冬、甚至到初春；花色較多，有火紅色、白色、綠色、粉色、橘紅色等。在寒冷的冬日，考來(lái)木以其濃綠的葉片、纖細(xì)可愛(ài)的繁花、五彩繽紛的色彩奪人眼球，宛如冬季里的精靈。

近年來(lái)，從澳大利亞重點(diǎn)引進(jìn)的考來(lái)木經(jīng)過(guò)科技人員近三年的研究最終繁育成功，并通過(guò)扦插、組織培養(yǎng)等無(wú)性繁育方式進(jìn)行了繁育試驗(yàn)，但是現(xiàn)有的考來(lái)木培育技術(shù)無(wú)法實(shí)現(xiàn)規(guī)模化、自動(dòng)化快速繁殖。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)中無(wú)法實(shí)現(xiàn)考來(lái)木規(guī)?；⒆詣?dòng)化快速繁殖的缺陷，提供一種繁育考來(lái)木的方法，其以考來(lái)木的帶腋芽枝條為外植體，通過(guò)外植體消毒、愈傷組織誘導(dǎo)、增殖、叢生芽誘導(dǎo)、生根誘導(dǎo)等過(guò)程實(shí)現(xiàn)考來(lái)木的離體培養(yǎng)。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

本發(fā)明一種繁育考來(lái)木的方法，其包括以下步驟：

S1、外植體消毒處理：選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的考來(lái)木的帶腋芽枝條為外植體，先用0.5 mg/L 的GA3浸泡外植體10～20min，使外植體保持快速分裂的生長(zhǎng)狀態(tài)，降低后序消毒等處理對(duì)細(xì)胞分裂狀態(tài)的影響；然后將外植體用洗衣粉水浸泡10～30min，然后自來(lái)水漂洗干凈，然后置于超凈臺(tái)上，用75%酒精消毒30～60S，無(wú)菌水沖洗4～6遍后再用2.5%次氯酸鈉溶液消毒10～30min，消毒濾紙吸干水分后用；

S2、愈傷組織誘導(dǎo)：將步驟S1消毒處理好的外植體切取0.5cm左右長(zhǎng)度的莖段接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行全黑暗，19～22℃，空氣相對(duì)濕度為50%～60%的條件下培養(yǎng)8～12天，然后再置于普通日光燈為光源、光照強(qiáng)度為 1500-20001x 下，每日光照15小時(shí)，溫度20-25℃、濕度為 50％～60％，培養(yǎng) 2～4 天至愈傷組織形成，然后置于每日光照12～14小時(shí)、光照強(qiáng)度為1000～2000lx、培養(yǎng)溫度為25～28℃、空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率；優(yōu)選的，為了減少愈傷組織的褐化或木栓化，培養(yǎng)愈傷組織時(shí)，可以加入納米活性炭、PVP和檸檬酸中的一種或幾種來(lái)抑制褐變效應(yīng)，更優(yōu)選的可以加入納米活性炭2～4g/L、PVP 0.5～1 g/L和檸檬酸4～6mg/L作為復(fù)合防褐和防木栓化制劑；

S3、增殖培養(yǎng)：將步驟S2誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代，接種后置于每天光照12～14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000～3000lx，置于培養(yǎng)溫度為25～28℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)增殖情況；

S4、叢生芽誘導(dǎo)：將步驟S3繼代得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接至芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，接種后置于每天光照12～14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000～3000lx，置于培養(yǎng)溫度為25～28℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)分化情況；

S5、生根培養(yǎng)：將經(jīng)步驟S4分化培養(yǎng)得到的叢生芽轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根，接種后置于每天光照12～14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000～3000lx，置于培養(yǎng)溫度為25～28℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)生根情況；

S6、煉苗移栽：叢生芽生根20天后，具備發(fā)達(dá)健壯的根時(shí)將組培苗不揭瓶蓋在自然光下煉苗，移栽時(shí)用鑷子取出組培苗，小心洗凈基部殘留的培養(yǎng)基，選擇健壯苗移栽到消過(guò)毒的輕基質(zhì)中，澆足水，遮蔭處理，移栽后經(jīng)常噴水，保持空氣濕度，植株成活后移至珍珠巖、草炭土的混合基質(zhì)中定植。優(yōu)選的所述輕基質(zhì)由以下重量份數(shù)的各組分組成：熟田土40～60份、稻草灰15～30份、樹(shù)皮粉末25～35份、膨化珍珠巖6～10份、

發(fā)酵稻殼15～20份、椰糠10～20份 ；沼渣8～12份、長(zhǎng)效復(fù)合緩釋肥2～5份。

進(jìn)一步地，步驟S1中，所述的外植體為帶腋芽的枝條切取成長(zhǎng)度為0.5～2.5cm，腋芽位于中間的莖段，切去葉片，保留兩片葉柄基部保護(hù)腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)，進(jìn)行消毒處理。

進(jìn)一步地，步驟S2中，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+1.0～3.0mg/L6-BA+0.1～0.5mg/LNAA+0.1～0.5g/LLH+1～2g/LPVP+25～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

進(jìn)一步地，步驟S3中，所述的增殖培養(yǎng)基為：MS+1.0～2.0mg/L6-BA+0.1～0.2mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

進(jìn)一步地，步驟S4中，所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+0.5～1.0mg/LNAA+0.1～0.5mg/L6-BA+20～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

進(jìn)一步地，步驟S5中，所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+1.0～5.0mg/LNAA+20～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

進(jìn)一步地，步驟S6中，將生根試管苗置于自然環(huán)境中6～10 天，取出洗凈根部，用500～600 倍托布津水溶液浸泡數(shù)秒，移栽到草炭土、珍珠巖的混合基質(zhì)中，起始6～10 天內(nèi)保持苗的葉面濕潤(rùn)并適當(dāng)遮陽(yáng)，其后按干透濕透的原則澆水，逐漸加強(qiáng)光照至全光照，進(jìn)行栽種。

本發(fā)明所達(dá)到的有益效果是：

本發(fā)明以考來(lái)木的帶腋芽枝條為外植體，通過(guò)外植體消毒、愈傷組織誘導(dǎo)、增殖、叢生芽誘導(dǎo)、生根誘導(dǎo)等過(guò)程實(shí)現(xiàn)考來(lái)木的離體培養(yǎng)，為考來(lái)木的工廠(chǎng)化生產(chǎn)和推廣應(yīng)用提供了技術(shù)支持。本發(fā)明提供的繁殖方法，極大加快了考來(lái)木的繁殖速度，一旦得到無(wú)菌苗后，可以利用無(wú)菌苗誘導(dǎo)增殖出大量不定芽，不定芽生根和移栽成活后，即再生為完整植株，形成了一個(gè)良好的生產(chǎn)體系，且不受季節(jié)限制，環(huán)境易控，適合全國(guó)各地，解決了考來(lái)木引種費(fèi)用高的問(wèn)題。

具體實(shí)施方式

以下對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說(shuō)明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

一種繁育考來(lái)木的方法，其包括以下步驟：

S1、外植體消毒處理：選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的考來(lái)木的帶腋芽枝條為外植體，先用0.5 mg/L 的GA3浸泡外植體10～30min，然后將外植體用洗衣粉水浸泡10～30min，然后自來(lái)水漂洗干凈，然后置于超凈臺(tái)上，用75%酒精消毒30～60S，無(wú)菌水沖洗4～6遍后再用2.5%次氯酸鈉溶液消毒10～30min，消毒濾紙吸干水分后用；所述的外植體為帶腋芽的枝條切取成長(zhǎng)度為0.5～2.5cm，腋芽位于中間的莖段，切去葉片，保留兩片葉柄基部保護(hù)腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)，進(jìn)行消毒處理；

S2、愈傷組織誘導(dǎo)：將步驟S1消毒處理好的外植體切取0.5cm左右長(zhǎng)度的莖段接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行全黑暗，19～22℃，空氣相對(duì)濕度為50%～60%的條件下培養(yǎng)8～12天，然后再置于普通日光燈為光源、光照強(qiáng)度為 1500-20001x 下，每日光照 15 小時(shí)，溫度20～25℃、濕度為50％～60％，培養(yǎng)2～4天至愈傷組織形成，然后置于每日光照12～14小時(shí)、光照強(qiáng)度為1000～2000lx、培養(yǎng)溫度為25～28℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率；所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+1.0～3.0mg/L6-BA+0.1～0.5mg/LNAA+0.1～0.5g/LLH+1～2g/LPVP+25～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8；誘導(dǎo)培養(yǎng)基中還可以包含納米活性炭2～4g/L、PVP 0.5～1 g/L和檸檬酸4～6mg/L。

S3、增殖培養(yǎng)：將步驟S2誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代，接種后置于每天光照12～14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000～3000lx，置于培養(yǎng)溫度為25～28℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)增殖情況；所述的增殖培養(yǎng)基為：MS+1.0～2.0mg/L6-BA+0.1～0.2mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8；

S4、叢生芽誘導(dǎo)：將步驟S3繼代得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接至芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，接種后置于每天光照12～14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000～3000lx，置于培養(yǎng)溫度為25～28℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)分化情況；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+0.5～1.0mg/LNAA+0.1～0.5mg/L6-BA+20～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8；

S5、生根培養(yǎng)：將經(jīng)步驟S4分化培養(yǎng)得到的叢生芽轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根，接種后置于每天光照12～14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000～3000lx，置于培養(yǎng)溫度為25～28℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)生根情況；所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+1.0～5.0mg/LNAA+20～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8；

S6、煉苗移栽：叢生芽生根20天后，具備發(fā)達(dá)健壯的根時(shí)將組培苗不揭瓶蓋在自然光下煉苗，移栽時(shí)用鑷子取出組培苗，小心洗凈基部殘留的培養(yǎng)基，選擇健壯苗移栽到消過(guò)毒的輕基質(zhì)中，澆足水，遮蔭處理，移栽后經(jīng)常噴水，保持空氣濕度，植株成活后移至珍珠巖、草炭土的混合基質(zhì)中定植；輕基質(zhì)由以下重量份數(shù)的各組分組成：熟田土40～60份、稻草灰15～30份、樹(shù)皮粉末25～35份、膨化珍珠巖6～10份、發(fā)酵稻殼15～20份、椰糠10～20份；沼渣8～12份、長(zhǎng)效復(fù)合緩釋肥2～5份。

將生根試管苗置于自然環(huán)境中6～10 天，取出洗凈根部，用500～600 倍托布津水溶液浸泡數(shù)秒，移栽到草炭土、珍珠巖的混合基質(zhì)中，起始6～10 天內(nèi)保持苗的葉面濕潤(rùn)并適當(dāng)遮陽(yáng)，其后按干透濕透的原則澆水，逐漸加強(qiáng)光照至全光照，進(jìn)行栽種。

本發(fā)明以考來(lái)木的帶腋芽枝條為外植體，通過(guò)外植體消毒、愈傷組織誘導(dǎo)、增殖、叢生芽誘導(dǎo)、生根誘導(dǎo)等過(guò)程實(shí)現(xiàn)考來(lái)木的離體培養(yǎng)，為考來(lái)木的工廠(chǎng)化生產(chǎn)和推廣應(yīng)用提供了技術(shù)支持。本發(fā)明提供的繁殖方法，極大加快了考來(lái)木的繁殖速度，一旦得到無(wú)菌苗后，可以利用無(wú)菌苗誘導(dǎo)增殖出大量不定芽，不定芽生根和移栽成活后，即再生為完整植株，形成了一個(gè)良好的生產(chǎn)體系，且不受季節(jié)限制，環(huán)境易控，適合全國(guó)各地，解決了考來(lái)木引種費(fèi)用高的問(wèn)題。

最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。