一種毛枝柳組培快繁的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物組培領(lǐng)域，公開了一種毛枝柳組培快繁的方法。主要步驟包括：春季采取毛枝柳當(dāng)年生莖段為外植體，依次進(jìn)行1)外植體在升汞中消毒，2)轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基DKW+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L中培養(yǎng)，3)后換入增殖培養(yǎng)基DKW+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L中培養(yǎng)，4)換入生根培養(yǎng)基2/3DKW+IBA0.2mg/L中培養(yǎng)，5)煉苗移栽，得到毛枝柳組培苗。本發(fā)明提供的一種毛枝柳組培快繁方法，可以在最短時(shí)間內(nèi)達(dá)到繁殖系數(shù)的最大化，有利于經(jīng)濟(jì)木本植物的快速育苗，縮短苗期和生長(zhǎng)周期，達(dá)到繁殖速度快、節(jié)約生產(chǎn)成本并適用于規(guī)模育苗的目的。使用的植物材料極少，生長(zhǎng)快，周期短，重復(fù)性強(qiáng)，可周年試驗(yàn)或生產(chǎn)。
【專利說明】一種毛枝柳組培快繁的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于屬于農(nóng)業(yè)生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及的是一種毛枝柳的組培快繁方法。

【背景技術(shù)】
[0002]毛枝柳(Salix dasyclados)為灌木或小喬木，高5?8m。葉片大，呈卵圓形，屬春季觀芽的銀芽柳類型。產(chǎn)自我國(guó)東北三省和西北部等省份。花序先葉開放，較大。雄花序較長(zhǎng)，長(zhǎng)達(dá)2.5?4cm,粗約1.8cm ;花藥黃色,雌花序較長(zhǎng)，粗圓柱形，長(zhǎng)4?5.5cm,粗1.2cm?；ㄆ?月，果期5月。冬季一年生枝條紅色。
[0003]毛枝柳花序于春季展葉前開放，如同枯枝生花，是很好的春季觀花樹種；喜耐水濕，可作為河岸的綠化樹種；枝條柔韌性好，可做編織用材。隨著能源利用技術(shù)的發(fā)展，毛枝柳以其優(yōu)良的表現(xiàn)，成為世界公認(rèn)的能源樹種。
[0004]毛枝柳為瑞典重要的一種發(fā)電用的能源林樹種。柳樹幼年生長(zhǎng)量明顯高于楊樹等其它常見能源樹種，適合于做超短期輪伐矮林作業(yè)系統(tǒng)樹種，給生物質(zhì)發(fā)電提供生產(chǎn)原材料。短的輪伐期容易保證生產(chǎn)原材料供應(yīng)的頻率，從而提高生物質(zhì)發(fā)電設(shè)備的利用率。其栽植密度為每公頃1.5?2萬株，輪伐期為3?5年，可達(dá)到最高產(chǎn)量。有研究普遍認(rèn)為，柳樹能源林造林，為了機(jī)械采伐的方便可采用雙行栽植，株距為0.75m，行距為0.9m，雙行間距為1.5m。
[0005]目前文獻(xiàn)中尚無關(guān)于毛枝柳的組培快繁的報(bào)道。該方法為毛枝柳的快速繁殖提供了一種新的方法，為毛枝柳作為能源林和觀賞柳的產(chǎn)業(yè)化提供了一種繁殖的新方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了改變目前毛枝柳繁殖、栽培不良的狀況，本發(fā)明的目的在于加快毛枝柳的栽培和開發(fā)力度，提高毛枝柳的繁殖效率，加快毛枝柳種苗的規(guī)?；庇?，有利于毛枝柳作為能源木本植物和觀賞銀芽柳系列的生產(chǎn)和開發(fā)。本發(fā)明方法特別適用于春季生產(chǎn)初期采集嫩枝進(jìn)行誘導(dǎo)叢生芽。
[0007]本發(fā)明提供一種毛枝柳組培快繁的方法，包括如下步驟:
[0008]采集毛枝柳當(dāng)年生嫩莖，依次進(jìn)行1)外植體消毒、2)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、3)叢生芽增殖培養(yǎng)、4)叢生芽生根培養(yǎng)、5)煉苗移栽，得到毛枝柳組培苗。
[0009]所述采集毛枝柳當(dāng)年生嫩枝，是在春天采集毛枝柳芽萌發(fā)形成的未封頂?shù)闹l，要求枝條木質(zhì)化程度低，要求每個(gè)莖段都長(zhǎng)有1?2個(gè)腋芽。
[0010]所述1)外植體消毒，是流水沖洗嫩莖2?3h，在超凈臺(tái)上用75%酒精處理30?40s,無菌水漂洗3?4次，再用0.3%升萊(二氯化萊，Mercury chloride)中消毒7min,之后無菌水漂洗3?4次，并用無菌濾紙吸去多余水分。
[0011]所述2)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng):將毛枝柳當(dāng)年生嫩枝去掉葉片，剪成3cm莖段，每個(gè)莖段留1?2個(gè)芽，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，萌發(fā)新的叢生芽，培養(yǎng)42d后，葉片展開；
[0012]所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以DKW為基本培養(yǎng)基，含有1.0mg/L(終濃度，下同)的 6_BA(6_ 節(jié)基氛基嘿呤，benzylaminmopurine) >0.lmg/L 的 NAA(蔡乙酸，1-Naphthaleneacetic acid)、5g/L 瓊脂、20g/L 葡萄糖的培養(yǎng)基，即 DKW+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L+ 葡萄糖 20g/L+ 瓊脂粉 5g/L。
[0013]所述萌發(fā)新的叢生芽，時(shí)間為接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上18d后。
[0014]所述葉片展開，時(shí)間為接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上42d后。
[0015]所述2)叢生芽增殖繼代:將叢生芽接入?yún)采吭鲋忱^代培養(yǎng)基上，置于溫度25± 1°C的培養(yǎng)室內(nèi)，每30?40d繼代轉(zhuǎn)瓶一次，繼代3次生成生長(zhǎng)健壯的組培苗；
[0016]所述的叢生芽增殖繼代培養(yǎng)基是以DKW為基本培養(yǎng)基，含有2.0mg/L的6-BA、0.lmg/L的NAA、4.5g/L的瓊脂、20g/L葡萄糖的培養(yǎng)基，即2/3DKW+IBA0.2mg/L+葡萄糖20g/L+ 瓊脂粉 5g/L。
[0017]所述3)壯苗生根:將繼代后大量形成的叢生芽，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根誘導(dǎo)，促進(jìn)生根，38d后長(zhǎng)成帶根的幼苗；
[0018]所述長(zhǎng)成帶根的幼苗，時(shí)間為接種到生根培養(yǎng)基上38天后。
[0019]所述生根培養(yǎng)基是以2/3DKW為基本培養(yǎng)基，含有0.2mg/L的IBA、4.5g/L瓊脂、20g/L葡萄糖的培養(yǎng)基，即2/3DKW+IBA 0.2mg/L。
[0020]所述4)煉苗移栽:將帶根的毛枝柳幼苗進(jìn)行煉苗，移栽入基質(zhì)，即培養(yǎng)成毛枝柳組培苗。
[0021]所述基質(zhì)為草炭土:珍珠巖按體積比3: I混合所得的基質(zhì)。
[0022]所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、叢生芽增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基的pH值優(yōu)選為5.80。
[0023]所述的培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為每天光照1h?12h，溫度為25°C ±2°C、光照12h/d、光照強(qiáng)度2000?3000Ix。
[0024]本發(fā)明的創(chuàng)新之處是公開了毛枝柳生芽誘導(dǎo)、增殖、生根的配方及其組培快繁的種苗規(guī)?；庇囊环N方法。目前國(guó)內(nèi)外未見同類報(bào)道。
[0025]本發(fā)明有利于加快作為優(yōu)良能源柳和觀賞柳的毛枝柳的繁殖，加快其種苗基數(shù)，有益于后期能源柳建設(shè)和觀賞柳的園林普及和生產(chǎn)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026]圖1:本發(fā)明所述毛枝柳組培及煉苗情況
[0027]其中:a:叢生芽誘導(dǎo)，b:叢生芽增殖，c:毛枝柳生根，d:毛枝柳出瓶煉苗后定植的組培苗

【具體實(shí)施方式】
[0028]一種毛枝柳組培快繁方法，該方法包括以下步驟:(下面實(shí)施例用于對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。)
[0029]實(shí)施例1:以本發(fā)明的方法篩選毛枝柳誘導(dǎo)培養(yǎng)基
[0030]I)選取外植體:選取當(dāng)年生生長(zhǎng)健壯無病蟲害的毛枝柳枝條嫩莖為外植體，剪成3cm莖段，每個(gè)莖段留I?2個(gè)芽,用洗滌劑清洗lOmin，然后用用自來水沖洗3h，最后晾干材料表面水分備用；
[0031]2)嫩莖誘導(dǎo)培養(yǎng):將處理好的毛枝柳莖段，在超凈工作臺(tái)上用質(zhì)量濃度為75%酒精浸泡30s，再用質(zhì)量濃度為0.3%升汞消毒7min，最后用無菌水沖洗3次，再將嫩莖置于無菌濾紙上吸干表面多余水分，接種在莖段誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將接種的外植體置于溫度22土 1 °C、光照12h/d、光照強(qiáng)度1500?20001x的培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)20d后芽萌發(fā)，待第42d葉片展開，將芽取下，轉(zhuǎn)接到叢生芽增殖培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)室內(nèi)，40d后愈傷組織上分化叢生芽(通過40d培養(yǎng)誘導(dǎo)單芽平均誘導(dǎo)叢生芽增殖系數(shù)達(dá)到2.6)，毛枝柳組培苗開始形成。
[0032]實(shí)施例2:以本發(fā)明的方法進(jìn)行毛枝柳叢生芽增殖繼代
[0033]將叢生芽接入?yún)采吭鲋忱^代培養(yǎng)基上，置于溫度25±2°C、光照12h/d、光照強(qiáng)度2000?30001x的培養(yǎng)室內(nèi)，每30?40d繼代一次，繼代3次生成生長(zhǎng)健壯的組培苗(在繼代第3次時(shí)其叢生芽增殖系數(shù)平均達(dá)到5.3)；
[0034]3)壯苗生根:將生長(zhǎng)健壯的試管苗采用2/3DKW培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，30d后長(zhǎng)成帶根的毛枝柳幼苗；
[0035]4)煉苗移栽:將帶根的毛枝柳幼苗進(jìn)行煉苗移栽，即培養(yǎng)成毛枝柳組培苗。
[0036]該發(fā)明方法誘導(dǎo)叢生芽分化達(dá)到快速增殖，進(jìn)而誘導(dǎo)叢生芽生根，本發(fā)明可以使繁殖效率可達(dá)到9.0，生根率達(dá)到97%，煉苗成活率95 %。每株毛枝柳在規(guī)?；挠鐥l件下，一年能繁育幾十萬株苗木，大大提高毛枝柳的苗木繁育效率。
[0037]以上所述實(shí)施舉例僅是本發(fā)明之優(yōu)選實(shí)施方式，是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。同時(shí)指出，對(duì)于本專業(yè)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離該發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視作本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種毛枝柳組培快繁方法，包括如下幾個(gè)步驟: 采毛枝柳嫩莖為外植體，依次進(jìn)行1)嫩莖消毒、2)嫩莖誘導(dǎo)培養(yǎng)、3)叢生芽增殖培養(yǎng)、4)叢生芽生根培養(yǎng)、5)煉苗移栽，組培苗出瓶上盆。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述毛枝柳的組培快繁方法，其特征在于:所述1)嫩莖消毒，為剪取毛枝柳植株的當(dāng)年生嫩莖，流水沖洗2?3匕在超凈臺(tái)上用75%酒精處理30?408，無菌水漂洗3?4次，再用0.3%升萊(二氯化萊，161-0111-7 0^101-1(16)中消毒7111111，之后無菌水漂洗3?4次，并用無菌濾紙吸去多余水分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述毛枝柳組培快繁方法，其特征在于:所述2)叢生芽誘導(dǎo)的方法是:在無菌條件下將獲得的嫩莖接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在25±21，光照14?16匕邱值為5.8?6.0，光強(qiáng)3000匕條件下培養(yǎng)，接種20(1后新芽開始萌發(fā)，20?30山獲得叢生芽:42(1后葉片展開。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的毛枝柳莖段組培快繁的方法，其特征在于，所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以0X1培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有的6-8八(6-芐基氨基嘌呤，1111^/1 白勺 X八八(蔡乙酸，161168061: 10 801(1) 瓊月旨、208/1葡萄糖的培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述毛枝柳組培快繁方法，其特征在于:^^3)叢生芽增殖培養(yǎng)，為將經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)萌發(fā)的叢生芽，接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，擴(kuò)大叢生芽數(shù)量，并使叢生芽繼續(xù)生長(zhǎng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的毛枝柳莖段組培快繁的方法，其特征在于，所述叢生芽增殖培養(yǎng)基是以0鼎培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有0.5111^/1的6-8八、0.1^/1的嫩八、4.5^/1瓊脂、208/1葡萄糖的培養(yǎng)基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述毛枝柳組培快繁方法，其特征在于:所述4)叢生芽生根培養(yǎng)基，為將經(jīng)過充分繼代的無根叢生芽接種到生根培養(yǎng)基上，使叢生芽長(zhǎng)出不定根，并使苗繼續(xù)生長(zhǎng)。培養(yǎng)10(1后，基部產(chǎn)生白色根系、培養(yǎng)30(1毛根明顯，根系發(fā)達(dá)，形成完整植株。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的毛枝柳莖段生根組培快繁的方法，其特征在于:所述叢生芽生根培養(yǎng)基是以2/30X1培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有0.2111^/1的184(吲哚丁酸，111(1016-3-0111:7^^10 ￡101(1) 5^/1 瓊脂、208凡葡萄糖的培養(yǎng)基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述毛枝柳組培快繁方法，其特征在于:所述5)煉苗移栽，為將形成完整根系的組培苗連瓶放入溫室中煉苗2?4山增加光照，后出瓶洗凈放入干凈基質(zhì)中栽培，保持較高濕度。
10.權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的毛枝柳莖段組培快繁的方法在毛枝柳繁殖中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104396760SQ201410768029
【公開日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年12月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月15日
【發(fā)明者】孫振元, 李振堅(jiān), 季萍倩, 韓蕾, 錢永強(qiáng), 劉俊祥 申請(qǐng)人:中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所