一種川百合組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說(shuō)，涉及一種川百合組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002]百合作為“球根花卉之王”，是世界重要的商品花卉。在中國(guó)傳統(tǒng)文化中，百合被視為“百年好合、幸福祥和”的象征，是國(guó)人最受歡迎的花卉之一。
[0003]我國(guó)百合屬植物種質(zhì)資源十分豐富，是百合的起源中心和自然分布中心，原產(chǎn)我國(guó)的百合屬植物約有55個(gè)種和18個(gè)變種,分布遍及全國(guó)各地,其中西南和華中是百合屬植物的集中分布地區(qū)。廣闊的地域分布和各異的自然環(huán)境產(chǎn)生了豐富的百合自然變種和生態(tài)類(lèi)型。雖然我國(guó)百合屬植物種類(lèi)繁多，很多具有很高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，但目前我國(guó)的野生百合利用率還較小，大多數(shù)并未得到應(yīng)有的關(guān)注和保護(hù)，仍有很多優(yōu)良的野生百合種質(zhì)資源有待發(fā)掘。
[0004]川百合(Zi7iw? t/arit/ii)是原產(chǎn)于我國(guó)的特有野生種，是百合屬中兼具優(yōu)良觀賞價(jià)值和較高食用價(jià)值的花卉，且川百合抗病性強(qiáng)，是較好的抗性育種材料，廣泛分布在云南、四川、甘肅、河南、陜西、湖北等海拔山坡草地、林下潮濕處或林緣。近年來(lái)我國(guó)百合生產(chǎn)和消費(fèi)量呈現(xiàn)急劇上升的趨勢(shì)，市場(chǎng)上百合種球需求量巨大。但是目前我國(guó)百合生產(chǎn)中的商品種球85%以上是從荷蘭和日本等國(guó)家引進(jìn)，使生產(chǎn)成本一直居高不下，嚴(yán)重制約了我國(guó)百合產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。長(zhǎng)期以來(lái)，川百合的引種馴化并未得到重視，其珍貴的種質(zhì)資源未得到有效利用。因此，本發(fā)明以川百合鱗莖為外植體，通過(guò)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等過(guò)程成功獲得了川百合離體再植株，建立川百合組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，不但可以保護(hù)這些珍貴的野生花卉資源，而且也為后期的育種工作特別是百合屬植物的矮化及抗性育種提供基礎(chǔ)材料。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供出一種川百合組培快繁方法，本發(fā)明以川百合鱗莖為外植體，通過(guò)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等過(guò)程成功獲得了川百合離體再植株，建立)I丨百合組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0006]本發(fā)明的一種川百合組培快繁方法，包括以下的步驟:
(I)外植體消毒:選取健康、無(wú)病害川百合鱗蓮，將鱗片剝下大致分為外層麟片、中層鱗片和內(nèi)層鱗片，分別用水洗去外部泥土，洗衣粉浸泡10?30min，然后置于自來(lái)水下沖洗30?60min,晾干，最后轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)上以70%?80%乙醇溶液浸泡20s?60s,無(wú)菌水沖洗4?6次,再用0.1%?0.2%升萊溶液消毒5?15min,然后用無(wú)菌水沖洗外植體至無(wú)泡沫為止。消毒期間注意振蕩搖晃，使鱗片與消毒液、無(wú)菌水充分接觸，最后將滅好菌的鱗片置于無(wú)菌的濾紙上吸干表面水分備用。
[0007](2)不定芽誘導(dǎo):將已經(jīng)滅菌的鱗片切成1.0cmXl.0cm左右的小塊，小塊四周均有切口，以鱗片的近軸面朝上的方式接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后置于每天光照12?14小時(shí)，光照強(qiáng)度為1000?20001x，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C，空氣相對(duì)濕度為75%?80%的條件下培養(yǎng)15天后統(tǒng)計(jì)污染率，45天后統(tǒng)率誘導(dǎo)率。
[0008](3)增殖培養(yǎng):將誘導(dǎo)所得到的不定芽切分成單芽接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)。接種后置于每天光照12?14小時(shí)，光照強(qiáng)度為1000?20001x，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C，空氣相對(duì)濕度為75%?80%的條件下培養(yǎng)40天后統(tǒng)計(jì)增殖情況。
[0009](4)生根培養(yǎng):從基部切取步驟(3)增殖培養(yǎng)中獲的小鱗莖并接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根。接種后置于每天光照12?14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000?30001χ，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C，空氣相對(duì)濕度為75%?80%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)生根情況。
[0010](5)煉苗移栽:挑選生長(zhǎng)良好且根系較為發(fā)達(dá)的組培苗，進(jìn)行煉苗。首先，將所選組培苗的瓶蓋揭開(kāi)，在組培室里煉苗I?3天，煉苗過(guò)程中，注意噴水保持濕度。然后將這些組培苗搬至煉苗室，煉苗2?5天。之后將小苗取出，洗凈培養(yǎng)基，注意防止根系損傷，栽植到由園土:泥炭土:腐殖質(zhì)=2:1:1混合成的基質(zhì)中，移栽30天后統(tǒng)計(jì)成活率。
[0011]上述步驟(2)所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+0.1?1.0mg/LTDZ+1.0?3.0mg/L6-BA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0012]上述步驟(3)所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+1.0?3.0mg/L 6-BA+0.5?1.5mg/LNAA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0013]上述步驟(4)所述的生根培養(yǎng)基為:MS+0.1?1.0mg/LIBA+15?30g/L蔗糖+3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0014]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的有益效果是:本發(fā)明以川百合鱗莖為外植體，通過(guò)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等過(guò)程成功獲得了川百合離體再植株，建立川百合組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，不但可以保護(hù)這些珍貴的野生花卉資源，而且也為后期的育種工作特別是百合屬植物的矮化及抗性育種提供基礎(chǔ)材料。
【具體實(shí)施方式】
[0015]以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0016]實(shí)施例1
(I)外植體消毒:選取健康、無(wú)病害川百合鱗蓮，將鱗片剝下大致分為外層麟片、中層鱗片和內(nèi)層鱗片，分別用水洗去外部泥土，洗衣粉浸泡lOmin，然后置于自來(lái)水下沖洗30min,晾干，最后轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)上以70%乙醇溶液浸泡50s，無(wú)菌水沖洗4次，再用0.1%升汞溶液消毒lOmin，然后用無(wú)菌水沖洗外植體至無(wú)泡沫為止。消毒期間注意振蕩搖晃，使鱗片與消毒液、無(wú)菌水充分接觸，最后將滅好菌的鱗片置于無(wú)菌的濾紙上吸干表面水分備用。
[0017](2)不定芽誘導(dǎo):將已經(jīng)滅菌的鱗片切成1.0cmXl.0cm左右的小塊，小塊四周均有切口，以鱗片的近軸面朝上的方式接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后置于每天光照13小時(shí)，光照強(qiáng)度為20001x，置于培養(yǎng)溫度為25°C，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)15天后污染率為5.27%，培養(yǎng)45天后誘導(dǎo)率為92%，平均出芽數(shù)為4.5。所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+0.5mg/LTDZ+l.5mg/L 6_BA+18g/L 蔗糖 +4.8g/L 瓊脂，pH 為 5.5。
[0018](3)增殖培養(yǎng):將誘導(dǎo)所得到的不定芽切分成單芽接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)。接種后置于每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度為ΙΟΟΟΙχ，置于培養(yǎng)溫度為25°C，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)40天后小鱗莖增殖系數(shù)為4.95。所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+1.8mg/L 6-BA+l.2mg/LNAA+25g/L 蔗糖 +4.8g/L 瓊脂，pH 為 5.5。
[0019](4)生根培養(yǎng):從基部切取步驟(3)增殖