一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，屬于中藥有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域。包括以下步驟：將干燥的蛇床子粉碎，過(guò)篩，用質(zhì)量濃度75?90%乙醇加熱回流提取，過(guò)濾，濃縮至稠膏；稠膏中加入蛇床子重量3～5倍的水，冷藏靜置12～24h，離心得上清液；上清液以每克大孔吸附樹(shù)脂加入1.5～2.5ml上清液的比例，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂交換柱，先用蒸餾水洗滌，再用質(zhì)量濃度50～70%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得蛇床子總香豆素。本發(fā)明使用乙醇有機(jī)溶劑，對(duì)環(huán)境和人員安全，具有獲得產(chǎn)品純度高，無(wú)有機(jī)溶劑存留，分離步驟少、操作條件溫和，操作簡(jiǎn)單，環(huán)境友好，易于工藝放大和連續(xù)操作等特點(diǎn)，是一種綠色環(huán)保的方法。
【專利說(shuō)明】
一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于中藥有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種從中藥蛇床子中提取總香 豆素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥蛇床子為傘形科蛇床屬植物蛇床Cnidiummmoier(L) Cusson的干燥成熟果 實(shí)，具有燥濕祛風(fēng)、殺蟲(chóng)止癢、溫腎壯陽(yáng)之功效，臨床用于陰癢帶下，濕疹瘙癢，濕痹腰痛，腎 虛陽(yáng)痿，宮冷不孕等病癥。蛇床子的有效成分可分為香豆素類(lèi)和揮發(fā)油，其中香豆素類(lèi)成分 是蛇床子顯示生理活性的主要成分，目前從蛇床子香豆素中已分離得到的單體化合物主要 有六種，包括蛇床子素、歐芹屬素乙、佛手柑內(nèi)酯、異虎耳草素、花椒毒酚、花椒毒素等?，F(xiàn)代 藥理實(shí)驗(yàn)表明：蛇床子總香豆素具有抗炎、抗氧化、抗突變、抗腫瘤、抗菌等多種生物活性， 因而蛇床子總香豆素在臨床上有著廣泛的應(yīng)用前景。
[0003] 目前蛇床子香豆素的提取方法有:溶劑提取法、堿溶酸沉法、水蒸氣蒸餾法、超臨 界萃取法、膜分離和雙水相萃取法等。分離方法多采用柱層析、不同比例有機(jī)溶劑洗脫、收 集洗脫液、回收溶劑等步驟。這些方法不同程度地存在有機(jī)溶劑用量大，處理時(shí)間長(zhǎng)，環(huán)境 污染嚴(yán)重的等缺點(diǎn)，而超臨界萃取和膜分離等方法需要特殊或較為昂貴的設(shè)備才能進(jìn)行， 成本較高，工業(yè)放大生產(chǎn)受到一定限制。因此研究綠色環(huán)保、簡(jiǎn)單方便的中藥成分提取分離 方法已成為當(dāng)今生物醫(yī)藥的熱門(mén)課題之一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，該方法 運(yùn)用提取、濃縮、冷藏后通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂富集純化后可得到蛇床子總香豆素，該方法使用 的乙醇有機(jī)溶劑，對(duì)環(huán)境和人員安全，具有獲得產(chǎn)品純度高、無(wú)有機(jī)溶劑殘留，分離步驟少、 操作條件溫和，操作簡(jiǎn)單，環(huán)境友好，易于工藝放大和連續(xù)操作等特點(diǎn)，克服現(xiàn)有技術(shù)的不 足，是一種綠色環(huán)保的方法。
[0005] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：一種從中藥蛇床子中提取總 香豆素的方法，該方法包括以下步驟： a) 將干燥的蛇床子粉碎，過(guò)20~40目篩，用質(zhì)量百分比濃度為75-90%的乙醇加熱回流 提取，過(guò)濾，濾液濃縮至稠膏； b) 在上述稠膏中加入干燥的蛇床子重量3~5倍的水，攪勻，冷藏靜置12~24h，離心，得 上清液； c) 將制得的上清液，以每克大孔吸附樹(shù)脂加入1.5~2.5ml上清液的比例，通過(guò)大孔吸 附樹(shù)脂交換柱，先用蒸餾水洗滌，再用質(zhì)量百分比濃度為50~70%的乙醇洗脫，收集洗脫液， 將洗脫液濃縮，得濃縮液。
[0006] d)干燥濃縮液，得蛇床子總香豆素提取物。
[0007] 大孔吸附樹(shù)脂優(yōu)選為AB-8、DM130或DlOl型;干燥濃縮液方式為噴霧干燥或真空干 燥。
[0008] 步驟a)中回流提取的次數(shù)可為1-3次，每次提取時(shí)間為1-2小時(shí)，每次乙醇用量為 蛇床子干重的6~12倍。優(yōu)選回流提取3次，每次提取時(shí)間為1 -2小時(shí)，三次乙醇用量范圍分 別為蛇床子干重的10~12倍(第一次），8~10倍(第二次），6~8倍(第三次）。提取后濃縮得 到的稠膏在70°C時(shí)相對(duì)密度為1.05~1.15。步驟b)中冷藏靜置的溫度為4-6°C。
[0009] 關(guān)鍵工藝參數(shù)的主要篩選過(guò)程如下： 試驗(yàn)、考察了不同類(lèi)型大孔吸附樹(shù)脂富集純化銀杏葉提取物的效果。
[0010]取7份Ikg的干燥蛇床子，分別粉碎過(guò)20~40目篩，用質(zhì)量百分比濃度為85%的乙醇 加熱回流提取三次，每次時(shí)間分別均是1.5小時(shí)，三次乙醇用量范圍是：分別為蛇床子干重 的12倍，10倍，8倍，提取液合并，濾過(guò)，減壓濃縮至70°C時(shí)相對(duì)密度為1.05~1.15的稠膏后， 加干燥蛇床子重量3倍的水，充分?jǐn)嚬矗?°C冷庫(kù)冷藏靜置24小時(shí)后，尚心，上清液分別過(guò)不 同的大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水洗脫4個(gè)柱體積，再分別用5倍柱體積質(zhì)量百分比濃度為 50%的乙醇和8倍柱體積70%的乙醇按25ml/min速度洗脫，合并洗脫液，洗脫液濃縮，噴霧干 燥，即得。含量測(cè)定采用高效液相色譜儀分析，以蛇床子素，歐前胡素和花椒毒素為檢測(cè)指 標(biāo)，采用外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定總香豆素的含量。
[0011] 結(jié)果如表1所示：
通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)不同的大孔吸附樹(shù)脂對(duì)總香豆素的純化效果存在差異，以D101、 八8-8和01130效果最好。
[0012] 本發(fā)明的一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，該方法運(yùn)用提取、濃縮、冷藏 后通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂富集純化后可得到蛇床子總香豆素，獲得純化的蛇床子總香豆素含 量〉90%。
[0013] 采用上述技術(shù)方案所產(chǎn)生的有益效果在于： 1. 本發(fā)明提供的蛇床子總香豆素樹(shù)脂純化方法操作簡(jiǎn)便、快捷； 2. 所選的大孔吸附樹(shù)脂具有吸附量大、解析率大的特點(diǎn)； 3. 以乙醇為溶劑，無(wú)毒無(wú)污染； 4. 用本發(fā)明方法提取純化蛇床子，提取物總香豆素含量可達(dá)90%以上，且重現(xiàn)性好，樹(shù) 脂可重復(fù)使用。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但并不局限于下列實(shí)施方式。
[0015] 實(shí)施例1: 干燥蛇床子Ikg，粉碎，過(guò)20目篩，用質(zhì)量百分比為80%乙醇回流提取三次，第一次加干 燥蛇床子重量12倍量醇，提取2小時(shí)，第二、三次分別10、8倍量，均提取1.5小時(shí)，合并提取 液，濾過(guò)，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏(70 °C時(shí)相對(duì)密度1.10 )。加入3L水，充分?jǐn)噭?，? °C冷 庫(kù)冷藏靜置24時(shí)，離心，得上清液。以每克大孔吸附樹(shù)脂加入2ml上清液的比例，通過(guò)已經(jīng)處 理好的DM130型大孔樹(shù)脂，裝柱徑高比為1:6。先用蒸餾水洗滌3個(gè)柱體積，再分別用5倍柱體 積質(zhì)量百分比濃度為50%的乙醇和6倍柱體積質(zhì)量百分比濃度為65%的乙醇按15ml/min速度 洗脫，合并洗脫液，減壓回收乙醇，得濃縮液。濃縮液于60°C以下真空干燥，得約41g蛇床子 總香豆素提取物，提取物干粉得率為4.1%。按照《中國(guó)藥典》(2015版)高效液相測(cè)定方法，以 蛇床子素，歐前胡素和花椒毒素為檢測(cè)指標(biāo)，采用外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定總香豆素的含量。測(cè)得總 香豆素含量為:91.6%。
[0016] 實(shí)施例2: 干燥蛇床子3kg，粉碎，過(guò)40目篩，用質(zhì)量百分比為90%乙醇回流提取三次，第一次加干 燥蛇床子重量12倍量醇，提取1.5小時(shí)，第二、三次分別10、8倍量，均提取1小時(shí)，合并提取 液，濾過(guò)，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏(70 °C時(shí)相對(duì)密度1.05)。加入IOL水，充分?jǐn)噭颍?°C 冷庫(kù)冷藏靜置20小時(shí)，離心，得上清液。以每克大孔吸附樹(shù)脂加入2.5ml上清液的比例，通過(guò) 已經(jīng)處理好的DlOl型大孔樹(shù)脂，裝柱徑高比為1:5。先用蒸餾水洗滌4個(gè)柱體積，再分別用6 倍柱體積質(zhì)量百分比濃度為50%的乙醇和5倍柱體積質(zhì)量百分比濃度為65%的乙醇按20ml/ min速度洗脫，合并洗脫液，減壓回收乙醇，得濃縮液。濃縮液噴霧干燥，得約116g蛇床子總 香?素提取物，提取物干粉得率為3.8%。按照《中國(guó)藥典》(2015版）尚效液相測(cè)定方法，以蛇 床子素，歐前胡素和花椒毒素為檢測(cè)指標(biāo)，采用外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定總香豆素的含量。測(cè)得總香 ?素含量為:91 · 1%。
[0017] 實(shí)施例3: 干燥蛇床子5kg，粉碎，過(guò)30目篩，用質(zhì)量百分比為75%乙醇回流提取三次，第一次加干 燥蛇床子重量12倍量醇，提取1.5小時(shí)，第二、三次分別10、8倍量，均提取1.5小時(shí)，合并提取 液，濾過(guò)，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏(70 °C時(shí)相對(duì)密度1.15)。加入25L水，充分?jǐn)噭?，? °C 冷庫(kù)冷藏靜置12時(shí)，離心，得上清液。以每克大孔吸附樹(shù)脂加入1.5ml上清液的比例，通過(guò)已 經(jīng)處理好的AB-8型大孔樹(shù)脂，裝柱徑高比為1:6。先用蒸餾水洗滌3個(gè)柱體積，再分別用5倍 柱體積質(zhì)量百分比濃度為50%的乙醇和5倍柱體積質(zhì)量百分比濃度為70%的乙醇按20ml/min 速度洗脫，合并洗脫液，減壓回收乙醇，得濃縮液。濃縮液噴霧干燥，得約211g蛇床子總香豆 素提取物，提取物干粉得率為4.2%。按照《中國(guó)藥典》(2015版)高效液相測(cè)定方法，以蛇床子 素，歐前胡素和花椒毒素為檢測(cè)指標(biāo)，采用外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定總香豆素的含量。測(cè)得總香豆素 含量為:90.5%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，其特征在于該方法包括以下步驟： a) 將干燥的蛇床子粉碎，過(guò)20~40目篩，用質(zhì)量百分比濃度為75-90%的乙醇加熱回流 提取，過(guò)濾，濾液濃縮至稠膏； b) 在上述稠膏中加入干燥的蛇床子重量3~5倍的水，攪勻，冷藏靜置12~24h，離心，得 上清液； c) 將制得的上清液，以每克大孔吸附樹(shù)脂加入1.5~2.5ml上清液的比例，通過(guò)大孔吸 附樹(shù)脂交換柱，先用蒸餾水洗滌，再用質(zhì)量百分比濃度為50~70%的乙醇洗脫，收集洗脫液， 將洗脫液濃縮，得濃縮液； d) 干燥濃縮液，得蛇床子總香豆素提取物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，其特征在于:步驟 a) 中所述的稠膏在70°C時(shí)相對(duì)密度為1.05~1.15。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，其特征在于:步驟 b) 中所述的冷藏靜置的溫度為4-6°C。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，其特征在于:步驟 c) 中大孔吸附樹(shù)脂為DM130、AB-8或DlOl型。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，其特征在于:步驟 d) 中所述的干燥為噴霧干燥或真空干燥。
【文檔編號(hào)】A61K36/234GK105943575SQ201610367094
【公開(kāi)日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年5月30日
【發(fā)明人】裴林, 段緒紅, 王麗麗, 邵奇, 劉曉冉
【申請(qǐng)人】河北省中醫(yī)藥科學(xué)院