本發(fā)明涉及醫(yī)學檢測和生物技術領域，尤其涉及基于一種基于多株相互配對單克隆抗體的膠乳增強免疫比濁檢測方法。本發(fā)明可應用于超靈敏抗原檢測，為抗原檢測手段提供一種可供選擇的方法。

背景技術：

膠乳增強免疫比濁法是抗原抗體結合動態(tài)測定方法。其基本原理是當抗原與抗體在特殊稀釋系統(tǒng)中反應而且比例合適時，形成的可溶性免疫復合物在稀釋系統(tǒng)中的促凝劑的作用下，自液相析出，形成微粒使反應液出現(xiàn)濁度，從而計算出待檢樣品中抗原的含量。這種方法可用儀器檢測，自動化程度高，提高了檢測的速度、靈敏度和易操作性，適合大量樣本的臨床檢測。傳統(tǒng)的膠乳增強免疫比濁方法是用膠乳微球標記多克隆抗體，但是多克隆抗體能與多種抗原表位結合，因此多克隆抗體的特異性較差。單一的單克隆抗體只識別某一特定抗原表位，因此單克隆抗體的特異性較高，但是這種超高的特異性會使敏感性降低，所以我們設計了利用多株單克隆抗體進行檢測的方法，這種方法即克服了多克隆抗體特異性低的缺點，又克服了單一的單克隆抗體敏感性低的缺點，而且利用兩兩相互配對的單克隆抗體，針對抗原的結合位點更多，抗體與抗體之間不會形成結合位置的競爭，因而更加的提高了檢測的靈敏度。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明設計了多株單克隆抗體同時包被微球的方法。該方法與傳統(tǒng)的多克隆抗體標記膠乳增強免疫比濁方法的優(yōu)點在于，單克隆抗體的特異性較高。單一的單克隆抗體只識別某一特定抗原表位，這種超高的特異性會使敏感性降低，所以我們設計了利用多株單克隆抗體進行檢測的方法，這種方法即克服了多克隆抗體特異性低的缺點，又克服了單一的單克隆抗體敏感性低的缺點。

篩選了兩兩相互配對的多株單克隆抗體。針對抗原的結合位點更多，抗體與抗體之間不會形成結合位置的競爭，因而可以提高檢測靈敏度。

所述多株單克隆抗體，主要特征為：包括但不限于三株或者三株以上的單克隆抗體。

所述確定兩兩配對的實驗可以是但不限于ELISA和涉及到雙抗體夾心實驗篩選出的成對單克隆抗體等。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有以下特點：

傳統(tǒng)的膠乳增強免疫比濁方法是用膠乳微球標記多克隆抗體，但是多克隆抗體能與多種抗原表位結合，因此多克隆抗體的特異性較差。單一的單克隆抗體只識別某一特定抗原表位，因此單克隆抗體的特異性較高，但是這種超高的特異性會使敏感性降低，所以我們設計了利用多株單克隆抗體進行檢測的方法，這種方法即克服了多克隆抗體特異性低的缺點，又克服了單一的單克隆抗體敏感性低的缺點，而且我們利用可以相互兩兩配對的單克隆抗體更加增加了檢測的敏感性。

附圖說明

以下結合附圖及實施例對本發(fā)明作進一步描述。

圖1為一種基于多株相互配對單克隆抗體的膠乳增強免疫比濁檢測方法流程示意圖。

圖2為膠乳微球包被三株單克隆抗體、膠乳微球包被多克隆抗體和ELISA三種方法檢測血清中GP73含量的ROC曲線。

具體實施方式

以下結合實例對本發(fā)明作進一步描述：

本發(fā)明公布了一種基于多株相互兩兩配對單克隆抗體的膠乳增強免疫比濁檢測方法，以多株可以相互兩兩配對的單克隆抗體修飾膠乳微球，進行膠乳增強免疫比濁方法檢測對應抗原，即可獲得樣本中抗原含量信息。在本發(fā)明的一個較佳的實例中，以羧基化的膠乳微球包被三株兩兩配對的單克隆抗體，在全自動生化分析儀上進行信號的檢測。

實施例：以肝癌腫瘤標志物GP73蛋白為對象進行檢測。

1.在膠乳微球上包被單克隆抗體。將107nm的膠乳微球(100μL with 5％wt/vol)分散于50mM的HEPES溶液(pH 7.0)中，加入三株單克隆抗體(0.5mg/mL)在搖床上孵育30min。加入0.5mg/mL的NHS(N-hydroxysulfosuccinimide)和EDC(1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl carbodiimide hydrochloride)孵育30min后用1％的封閉液BSA(Bovine Serum Albumin)封閉30min。膠乳微球包被的抗體分散在含有1％BSA的Tris-HCl(1.0Mm，pH 6.8)中，超聲至溶液透光。試劑保存在4℃待用。

2.樣本檢測。樣本檢測在自動生化分析儀中進行，10μL的樣本和240μL的試劑1(10mM Tris-HCl(pH 7.0),150mM NaCl,0.01％Tween-20and PEG-6000)加入到反應盤中，孵育5min后，加入試劑2(膠乳微球包被的單克隆抗體)啟動免疫比濁反應。反應5min后記錄570nm波長處第5min和第10min處吸光度的變化。

3.免疫比濁檢測結果如圖2所示。膠乳微球包被三株單克隆抗體的反應體系檢測肝癌血清樣本中GP73的敏感性和特異性(96.7％和93.3％)均高于膠乳微球包被多克隆抗體(94.6％和72.4％)和ELISA(70.0％和83.3％)。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術人員，在不脫離本發(fā)明技術方案范圍內，依據(jù)本發(fā)明的技術實質，對以上實施例所作的任何簡單的修改、等同替換與改進等，均仍屬于本發(fā)明技術方案的保護范圍之內。