一種用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法，特別適應(yīng)于食物中毒樣品中未知毒物的提取，本方案的內(nèi)容包括：首先用含酸的乙腈和乙二胺四乙酸二鈉(Na2EDTA)對(duì)勻漿或者混勻后的樣品進(jìn)行萃取，得萃取液；在所述萃取液中加入氯化鈉(NaCl)和無水硫酸鈉(Na2SO4)，混勻，得混合液；將所述混合液超聲離心后，所得上清液經(jīng)C18和無水硫酸鈉凈化，得提取液，然后對(duì)提取液進(jìn)行檢測(cè)分析；本發(fā)明同時(shí)適應(yīng)于多種不同基質(zhì)：豬肉、豬肝、牛奶、雞蛋、水果、蔬菜、胃液、血液、尿液，回收率高，測(cè)試快速、可靠，用于實(shí)際中毒樣品的快速篩查，有利于中毒人員的及時(shí)治療和刑偵工作等。
【專利說明】—種用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種樣品前處理方法及其應(yīng)用，具體為一種用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法，特別適應(yīng)于食物中毒樣品中未知毒物的提取，實(shí)現(xiàn)食物中毒的快速篩查。
【背景技術(shù)】
[0002]QuEChERS (Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged and Safe 的簡(jiǎn)稱)方法是近幾年發(fā)展起來的快速前處理法，可以方便、經(jīng)濟(jì)、快速地從食品基質(zhì)中將目標(biāo)化合物提取出來。最原始的QuEChERS方法沒有緩沖鹽，只有MgS04和NaCl，目前國際上推薦使用的QuEChERS方法有:歐盟EN15662方法和AOAC中的用法，EN15662和AOAC官方2007.01方法改進(jìn)了最原始的方法，在萃取步驟中加了緩沖鹽，這可以擴(kuò)大目標(biāo)化合物范圍，這兩個(gè)方法主要針對(duì)的基質(zhì)是水果蔬菜，測(cè)定的目標(biāo)化合物主要為農(nóng)藥，其中QuEChERS方法表述為:萃取管的填料為4g MgS04, Ig NaCl, Ig檸檬酸鈉,0.5g檸檬酸氫二鈉(ENl5662),6gMgS04,1.5g醋酸鈉(A0AC2007.01方法)，凈化管的填料根據(jù)基質(zhì)的含脂肪量和色素的多少選擇性的加入:150mg PSA或者C18，或者石墨化碳，和900mg MgS04。
[0003]QuEChERS方法一般包括兩步:一是有機(jī)溶劑萃取，二是凈化上清液。QuEChERS常用乙腈為提取溶液，雖然脂肪在乙腈中的溶解度不高，但是提取液中仍有相當(dāng)數(shù)量的脂肪共提物存在，這就需要改進(jìn)QuEChERS的凈化方法以適應(yīng)高脂肪含量基質(zhì)。常用的凈化吸附劑包括:N_ 丙基乙二胺 填料(primary secondary amine, PSA)、石墨化炭黑(graphitisedcarbon black, GCB)和C18,三種填料可適應(yīng)不同基質(zhì)凈化需求,可單獨(dú)使用，也可配合使用。此外，QuEChERS緩沖鹽水溶液也是提取的很好選擇，它可以兼顧不同化合物的pH值，尤其對(duì)PH敏感化合物的提取效果良好。可以說，QuEChERS方法的提取凈化步驟雖然簡(jiǎn)單，卻需要研究者依據(jù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)程不斷做出調(diào)整。
[0004]目前該方法主要用于果蔬中農(nóng)藥殘留的分析，同時(shí)也有少部分應(yīng)用于牛奶、肌肉、雞蛋、肝臟等動(dòng)物性食品基質(zhì)中喹諾酮類、磺胺類、苯并咪唑類、阿維菌素類抗生素的獸藥殘留檢測(cè)，但是由于獸藥種類多樣，性質(zhì)各異，給多項(xiàng)殘留分析檢測(cè)工作帶來一定挑戰(zhàn)。提取液方面，Lombardo-Agui 等(Journal of Chromatography A, 2011,1218 (30):4966-4971)基于EN15662方法，使用pH7.0的NaH2P04緩沖溶液和含5 %甲酸的乙腈作為萃取劑，分析牛奶中的喹諾酮類藥物。張毅等(色譜，2011，29 (6) =523-534)人使用酸化乙酸乙酯作為提取溶劑分析飼料中的激素類藥物。吸附劑的選擇方面，Stubbings (Journal ofChromatography A, 2008,1205 (I):10-16)等人利用NH2吸附劑凈化雞肉和雞肝樣品。董靜等(中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2008，18 (I):26-28)則選擇C18、PSA和氧化鋁作為凈化劑。另外，一些創(chuàng)新性的QuEChERS方法逐步被開發(fā)出來，Vidal等(Analytical and BioanalyticalChemistry, 2010,397(7):2777-2790)分析牛奶樣品時(shí)，僅用QuEChERS中的萃取步驟，提取后直接通過LC-MS / MS分析,獲得理想的結(jié)果；Karageorgou等(Journal of SeparationScience, 2011, 34(15):1893-1901)在分析牛奶中青霉素時(shí)，創(chuàng)新性地將親水親脂固相萃取填料Strata-X與MgS04、PSA、C18吸附劑結(jié)合，通過一步分散固相萃取完成前處理過程。
[0005]現(xiàn)階段，QuEChERS方法主要集中在單一基質(zhì)中少量化合物的提取凈化方法，由于其快速便捷的前處理過程和出色的提取效率，研究者通過對(duì)QuEChERS方法進(jìn)行改進(jìn)來適應(yīng)不同基質(zhì)中多組分的同時(shí)檢測(cè)需要，設(shè)計(jì)并開發(fā)出一種能夠從動(dòng)物性食品基質(zhì)和生物基質(zhì)中快速提取不同極性化合物的前處理方法并應(yīng)用于快速篩查檢測(cè)是十分必要的。
[0006]食物中毒的有毒物質(zhì)通常包括:大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類、磺胺類、阿維菌素類、苯并吡唑類、頭孢類、阻斷劑、鎮(zhèn)靜劑、四環(huán)素類、腎上腺素類、人用藥、殺鼠劑、有機(jī)磷農(nóng)藥、除草齊U、殺螨殺菌劑、殺蟲劑和獸藥類等，本發(fā)明的方法可提取常見的食物中毒物質(zhì)，對(duì)基質(zhì)沒有特別限制，不僅適應(yīng)于水果蔬菜基質(zhì)，還包括豬肉、豬肝、雞蛋、牛奶等高蛋白的基質(zhì)，同時(shí)也適合生物樣品基質(zhì)，如血清、尿液、胃液等，是一種食物中毒快速篩查的前處理方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供一種快速、簡(jiǎn)便、通用的前處理方法，可以進(jìn)行多種有毒物質(zhì)的快速提取，同時(shí)適應(yīng)于多種不同基質(zhì):豬肉、豬肝、牛奶、雞蛋、水果、蔬菜、胃液、血液、尿液。
[0008]本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法，首先用含酸的乙腈和乙二胺四乙酸二鈉(Na2EDTA)對(duì)勻漿或者混勻后的樣品進(jìn)行萃取，得萃取液；在所述萃取液中加入氯化鈉(NaCl)和無水硫酸鈉(Na2S04)，混勻，得混合液；將所述混合液超聲離心后，所得上清液經(jīng)C18和無水硫酸鈉凈化，得提取液，然后對(duì)提取液進(jìn)行檢測(cè)分析，其中加入乙二胺四乙酸二鈉的目的是保證抗生素類等物質(zhì)的提取效率，加入氯化鈉的目的是更有利于水層和乙腈層分開，加入無水硫酸鈉的目的是用于吸水，檢測(cè)分析是采用液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)分析。
[0009]用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法的具體步驟包括:(I)用9?IlmL含
1.0% (V / V)甲酸的乙腈和0.08?0.12g乙二胺四乙酸二鈉對(duì)2.0g均漿樣品或2.0ml混勻液體樣品進(jìn)行萃取，得萃取液；(2)在所述萃取液中加入0.8?1.2g氯化鈉和3.5?
4.5g無水硫酸鈉，混勻，得混合液；(3)將所述混合液超聲離心后，取所得上清液6ml，加入140?160mg C18和850?950mg無水硫酸鈉進(jìn)行凈化，得提取液，然后對(duì)提取液進(jìn)行檢測(cè)分析。
[0010]特別優(yōu)選的是，用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法具體步驟包括:稱取2.0g均漿樣品或2.0ml混勻液體樣品，置于離心管內(nèi)，在離心管內(nèi)加入IOmL含1.0% (v / V)甲酸的乙腈溶液和0.lgNa2EDTA,震蕩Imin,再加入1.0g氯化鈉和4.0g無水硫酸鈉，渦旋混勻15s,超聲15min,以9000r / min離心5min,取上清液備用；另取015mL離心管,力口入900mg無水硫酸鈉，150mg Discovery? DSC-18吸附劑，移入前述上清液6mL，震蕩lmin，9000r / min離心5min,取上清液ImL用于檢測(cè)分析。
[0011]本發(fā)明還提供一種用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法的應(yīng)用，其主要用于食物中毒的快速篩查。
[0012]將本發(fā)明的方法對(duì)豬肉、豬肝、牛奶、雞蛋、水果、蔬菜、胃液、血液、尿液這9種基質(zhì)中的300余種代表性有毒化合物進(jìn)行了樣品處理，并采用液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行分析，回收率高，主要集中在70% -120%，其中有毒化合物主要包括大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類、磺胺類、阿維菌素類、苯并吡唑類、頭孢類、阻斷劑、鎮(zhèn)靜劑、四環(huán)素類、腎上腺素類、人用藥、殺鼠劑、有機(jī)憐農(nóng)藥、除草劑、殺蝴殺菌劑、殺蟲劑和獸藥類及大多數(shù)食物中毒基質(zhì)。
[0013]通過本發(fā)明建立的簡(jiǎn)單、快速、通用型的前處理方法，針對(duì)食物中毒事件，能快速進(jìn)行處理檢測(cè)，以便得到可靠結(jié)果，特別用于實(shí)際中毒樣品的快速篩查，有利于中毒人員的及時(shí)治療和刑偵工作等。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1示出五種不同有毒物質(zhì)在九種基質(zhì)中的回收率統(tǒng)計(jì)圖【具體實(shí)施方式】
[0015]實(shí)驗(yàn)所用儀器和試劑:超高效液相色譜-四級(jí)桿/飛行時(shí)間質(zhì)譜儀系統(tǒng)(美國，Waters公司)；分析天平:感量0.01g ;漩渦混合器；超聲波清洗器；高速冷凍離心機(jī)；50mL和15mL離心管；10mL棕色容量瓶；PSA、C18、GCB、無水硫酸鈉；Na2EDTA ;甲醇、水、乙腈、丙酮、氯仿、二氯甲烷、甲酸、氨水、二甲基甲酰胺、吡啶等有機(jī)溶劑，校正液亮氨酸腦啡肽，甲酸鈉。
[0016]通常引起食物中毒的化合物很多，本發(fā)明確定了常見的有毒化合物并對(duì)其進(jìn)行了提取，檢測(cè)，具體化合物名稱見下表1所示:
[0017]表1有毒化合物種類及其名稱
[0018]
[0019]`
【權(quán)利要求】
1.一種用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法，其特征在于，包括:(1)用含酸的乙腈和乙二胺四乙酸二鈉對(duì)勻漿或者混勻后的樣品進(jìn)行萃取，得萃取液；(2)在所述萃取液中加入氯化鈉和無水硫酸鈉，混勻，得混合液；(3)將所述混合液超聲離心后，所得上清液經(jīng)C18和無水硫酸鈉凈化，得提取液，然后對(duì)提取液進(jìn)行檢測(cè)分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法，其特征在于，含酸的乙腈是含I%甲酸的乙腈。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法，其特征在于，方法包括:(I)用9?IlmL含1.0% (v / V)甲酸的乙腈和0.08?0.12g乙二胺四乙酸二鈉對(duì)2.0g均漿樣品或2.0ml混勻液體樣品進(jìn)行萃取，得萃取液；(2)在所述萃取液中加入0.8?1.2g氯化鈉和大于4g的無水硫酸鈉，其中無水硫酸鈉加入量為使溶液至無結(jié)塊現(xiàn)象出現(xiàn)，混勻，得混合液；(3)將所述混合液超聲離心后，取所得上清液6ml，加入140?160mgC18和850?950mg無水硫酸鈉進(jìn)行凈化，得提取液，然后對(duì)提取液進(jìn)行檢測(cè)分析。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法，其特征在于，稱取2.0g均漿樣品或2.0ml混勻液體樣品，置于離心管內(nèi)，在離心管內(nèi)加入IOmL含1.0%(V / V)甲酸的乙腈溶液和0.1g Na2EDTA,震蕩Imin,再加入1.0g氯化鈉和大于4.0g的無水硫酸鈉，潤(rùn)旋混勻15s,超聲15min,以9000r / min離心5min,取上清液備用；另取一15mL離心管,加入900mg無水硫酸鈉，150mg Discovery? DSC-18吸附劑,移入所述上清液6mL,震蕩lmin,9000r / min離心5min,取上清液ImL用于檢測(cè)分析。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一所述的一種用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法，其特征在于，樣品為豬肉、豬肝、牛奶、雞蛋、水果、蔬菜、胃液、血液、尿液中的任一種。
6.一種用于有毒物質(zhì)提取的QuEChERS提取方法在食物中毒篩查中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N1/28GK103822814SQ201410093300
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年3月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月14日
【發(fā)明者】邵兵, 郭巧珍, 高馥蝶, 張晶, 李敏 申請(qǐng)人:北京市疾病預(yù)防控制中心