鹽酸溴己新葡萄糖注射液的中間體或成品的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了鹽酸溴己新葡萄糖注射液中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法。本發(fā)明有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法經(jīng)由大量試驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，本產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)按原國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（標(biāo)準(zhǔn)號(hào)YBH10902004）中流動(dòng)相試驗(yàn)檢出的雜質(zhì)峰有2個(gè)，而按本方法可檢出4個(gè)明顯的雜質(zhì)峰，更能真切的反映內(nèi)在有關(guān)物質(zhì)的真實(shí)水平，確保產(chǎn)品有更為優(yōu)異的質(zhì)量。
【專利說明】鹽酸溴己新葡萄糖注射液的中間體或成品的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及鹽酸溴己新葡萄糖注射液的中間體或成品的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鹽酸溴己新葡萄糖注射液適用于慢性支氣管炎及其他呼吸道疾病如哮喘、支氣管擴(kuò)張、矽肺等有粘痰而不易咳出者、膿性痰患者需加用抗生素控制感染，術(shù)后肺部并發(fā)癥的預(yù)防治療，術(shù)前呼吸道的廓清、早產(chǎn)兒、新生兒及嬰兒呼吸窘迫綜合癥(IRDS)的治療，目前已廣泛應(yīng)用于臨床，通過這幾年來的生產(chǎn)和質(zhì)檢，發(fā)現(xiàn)由于原料藥質(zhì)量、技術(shù)要求、人員素質(zhì)的波動(dòng)等因素的影響，容易造成產(chǎn)品批次間的差異(超警戒限、超法定限、數(shù)據(jù)偏差大等因素)，難以保證鹽酸溴己新葡萄糖注射液的質(zhì)量穩(wěn)定在最佳狀態(tài)，因此，建立一套高質(zhì)量的產(chǎn)品質(zhì)量控制方法，對(duì)保證該產(chǎn)品的優(yōu)化升級(jí)顯得尤為必要。
[0003]然而，本產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)按原國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(標(biāo)準(zhǔn)號(hào)YBH10902004)中流動(dòng)相試驗(yàn)檢出的雜質(zhì)峰僅有2個(gè)，不利于對(duì)產(chǎn)品中有關(guān)物質(zhì)量的控制。另外，據(jù)國(guó)家新版GMP相關(guān)技術(shù)要求，藥液從配制完成到開灌時(shí)間不得超過2個(gè)小時(shí)。這就要求在2小時(shí)內(nèi)完成半成品質(zhì)量的檢驗(yàn)，合格后才可開灌并生產(chǎn)。目前中間體含量控制采用高效液相色譜法檢測(cè)中間體鹽酸溴己新含量，存在以下問題:1、主峰保留時(shí)間約12min，正常情況下按一批時(shí)間算，對(duì)照品六針樣品四針總共完成要耗時(shí)約2h，如需再復(fù)測(cè)含量時(shí)間就沒有，不利于保證在線中間體質(zhì)量控制，日產(chǎn)按8批算要IOh以上，這與新制定的該產(chǎn)品生產(chǎn)工藝規(guī)程(SMP)有背離。并且儀器基本上是24h連續(xù)運(yùn)行，晚班另外安排分析員2人輪流加班到第二天白班，夜以繼日上機(jī)；2、鹽酸溴已新葡萄糖注射液由于產(chǎn)量較大(每月均要生產(chǎn)15天左右，日計(jì)劃生產(chǎn)7?8批次，3.5萬瓶/批)，測(cè)試方法中流動(dòng)相為消耗大，以lml/min的流速運(yùn)行，按每周生產(chǎn)需要配制流動(dòng)相15000ml計(jì)算需要消耗4200ml的色譜乙腈,按市價(jià)60元/瓶(500ml)計(jì)算為504元，生產(chǎn)二周需要耗資1008元；3、由于檢驗(yàn)用到HPLC儀器檢測(cè)占用時(shí)間長(zhǎng)，不利于其他四條生產(chǎn)線品種相應(yīng)的檢測(cè)，容易影響正常生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種鹽酸溴己新葡萄糖注射液中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法。本發(fā)明的另一目的在于提供一種鹽酸溴己新葡萄糖注射液中間體或成品的檢測(cè)方法。
[0005]本發(fā)明提供了鹽酸溴己新葡萄糖注射液中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，它是采用HPLC進(jìn)行檢測(cè)的，包括如下操作步驟:
[0006](I)取待測(cè)酸溴己新葡萄糖注射液，溶解或/和稀釋，制備供試品溶液；
[0007](2)取供試品溶液注入高效液相色譜儀中，在下述色譜條件下檢測(cè)；
[0008]色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；
[0009]檢測(cè)波長(zhǎng):249nm；
[0010]流動(dòng)相:乙腈:磷酸鹽緩沖液=28:72，所述磷酸鹽緩沖液由如下方法制備:0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液，加0.1 % v/v三乙胺溶液，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH為3.3 ;
[0011](3)根據(jù)步驟(2)的檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量即可。
[0012]進(jìn)一步地，步驟(I)中，溶解或/和稀釋所用溶劑為步驟(2)的流動(dòng)相。
[0013]進(jìn)一步地，所述色譜柱的尺寸為250X4.60mm，5 μ m。
[0014]優(yōu)選地，所述色譜柱選自AIItima?C18, 250 X 4.60mm5 μ m。
[0015]進(jìn)一步地，柱溫為30°C，流動(dòng)相流速為1.0ml/min。
[0016]本發(fā)明有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法經(jīng)由大量試驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，本產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)按原國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(標(biāo)準(zhǔn)號(hào)YBH10902004)中流動(dòng)相試驗(yàn)檢出的雜質(zhì)峰有2個(gè)，而按本方法可檢出4個(gè)明顯的雜質(zhì)峰，更能真切的反映內(nèi)在有關(guān)物質(zhì)的真實(shí)水平，確保產(chǎn)品有更為優(yōu)異的質(zhì)量。
[0017]本發(fā)明還提供了鹽酸溴己新葡萄糖注射液中間體和成品的檢測(cè)方法，其中，所述中間體采用紫外分光光度法進(jìn)行檢測(cè)，它包括如下操作步驟:
[0018]A、取待測(cè)鹽酸溴己新葡萄糖注射液中間體，以葡萄糖溶液稀釋，制備得到中間體供試品溶液；
[0019]B、取鹽酸溴己新對(duì)照品，加入95% (v/v)乙醇溶解后，再用葡萄糖溶液稀釋，制備得到對(duì)照品溶液；
[0020]C、以葡萄糖溶液為空白對(duì)照，分別取中間體供試品溶液、對(duì)照品溶液，在294nm下進(jìn)行檢測(cè)，采用外標(biāo)法計(jì)算中間體供試品溶液中鹽酸溴己新含量即可；
[0021]所述成品采用HPLC進(jìn)行檢測(cè)，包括如下操作步驟:
[0022](I)取待測(cè)酸溴己新葡萄糖注射液成品，溶解或/和稀釋，制備成品供試品溶液；
[0023](2)取成品供試品溶液注入高效液相色譜儀中，在下述色譜條件下檢測(cè)即可；
[0024]色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；
[0025]檢測(cè)波長(zhǎng):249nm；
[0026]流動(dòng)相:乙腈:磷酸鹽緩沖液=28:72，所述磷酸鹽緩沖液由如下方法制備:
0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液，加0.1% (v/v)三乙胺溶液，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH為3.3。
[0027]本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，在紫外分光光度法檢測(cè)中，使用95%乙醇溶解對(duì)照品后再用5%葡萄糖溶液稀釋操作，其檢測(cè)數(shù)據(jù)穩(wěn)定，結(jié)果理想。
[0028]進(jìn)一步地，步驟A?C中，所述葡萄糖溶液濃度均為5% (g/ml)。
[0029]進(jìn)一步地，步驟B中，鹽酸溴己新對(duì)照品與95% (v/v)乙醇用量比例為0.02g:
1.5ml。
[0030]進(jìn)一步地，步驟(I)中，溶解或/和稀釋所用溶劑為步驟(2)的流動(dòng)相。
[0031]進(jìn)一步地,所述色譜柱的尺寸為250 X 4.60mm, 5 μ m。
[0032]優(yōu)選地，所述色譜柱選自AIItima?C18，250X4.60mm5 μ m。
[0033]進(jìn)一步地，柱溫為30°C，流動(dòng)相流速為1.0ml/min。
[0034]本發(fā)明提供的中間體和成品檢測(cè)方法中，采用紫外分光光度法用于鹽酸溴己新葡萄糖注射液半成品含量控制，能快速準(zhǔn)確的檢測(cè)出按配制工藝配制好的中間體鹽酸溴己新含量，為下道工序流水作業(yè)取得生產(chǎn)完成時(shí)間保證，同時(shí)為配液工序半成品保證在規(guī)定的時(shí)間開灌；采用HPLC對(duì)成品進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，具有良好的專屬性，可以更好地將主成分與有關(guān)物質(zhì)分離，其含量測(cè)定更準(zhǔn)確可靠，分離度、拖尾因子、不對(duì)稱度均符合中國(guó)藥典求，檢測(cè)結(jié)果良好，能夠有效用于鹽酸溴己新葡萄糖注射液成品含量項(xiàng)目的檢驗(yàn)控制?！緦＠綀D】

【附圖說明】
[0035]圖1 :原部頒標(biāo)準(zhǔn)測(cè)YBH10902004檢測(cè)成品A130412A有關(guān)物質(zhì)
[0036]圖2 :原部頒標(biāo)準(zhǔn)測(cè)YBH10902004檢測(cè)成品A130412B有關(guān)物質(zhì)
[0037]圖3 :原部頒標(biāo)準(zhǔn)測(cè)YBH10902004檢測(cè)成品A130412C有關(guān)物質(zhì)
[0038]圖4:研究使用的方法檢測(cè)成品A130412A有關(guān)物質(zhì)
[0039]圖5 :研究使用的方法檢測(cè)成品A130412B有關(guān)物質(zhì)
[0040]圖6 :研究使用的方法檢測(cè)成品A130412C有關(guān)物質(zhì) [0041 ]圖7 :空白峰（5%葡萄糖溶液色譜圖峰）
【具體實(shí)施方式】
[0042]實(shí)施例1本發(fā)明有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法
[0043](1)取待測(cè)酸溴己新葡萄糖注射液，加入流動(dòng)相溶解、稀釋，制備供試品溶液；
[0044](2)取供試品溶液注入高效液相色譜儀中，在下述色譜條件下檢測(cè)；
[0045]色譜柱：AIItima?C18,250 X 4. 60mm5 u m ；
[0046]檢測(cè)波長(zhǎng)：249nm；
[0047]流動(dòng)相：乙腈：磷酸鹽緩沖液=28:72，所述磷酸鹽緩沖液由如下方法制備： 0. 02mol/L磷酸二氫鉀溶液，加0. 1% (v/v)三乙胺溶液，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH為3. 3 ;
[0048](3)根據(jù)步驟（2)的檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量即可。
[0049]本發(fā)明中采用自身對(duì)照法計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量，但不排除其他計(jì)算方法。
[0050]采用上述方法測(cè)定3批供試品溶液的有關(guān)物質(zhì)限量，結(jié)果見下表1、圖1-6 ：
[0051]表1三批成品有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)分析比較表
[0052]批號(hào)A130412AA130412BA130412C原部頒標(biāo)準(zhǔn)方法0. 87%0. 76%0. 83%研究使用的方法1. 15%1. 04%1. 10%結(jié)論符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定
[0053]從上表中結(jié)果看出，本品制劑有關(guān)物質(zhì)含量均小于2%，質(zhì)量符合要求。
[0054]從以上表中結(jié)果看出，本品制劑采用2種方法檢測(cè)均符合規(guī)定，但原方法結(jié)果比 現(xiàn)研究的方法結(jié)果偏小，且有關(guān)物質(zhì)分離不完全，未能真實(shí)顯現(xiàn)內(nèi)在的有關(guān)物質(zhì)變化；而本 發(fā)明方法分離出的有關(guān)物質(zhì)色譜峰較多，各方面試驗(yàn)較穩(wěn)定，其測(cè)值能夠更為真實(shí)地反映 有關(guān)物質(zhì)的變化。
[0055]實(shí)施例2色譜條件的考察
[0056]以AIItima?C185 y (250X4. 60mm5micron)為色譜柱，柱溫為 30°C,流速為 1. OmL/ min,進(jìn)樣量為20 u L，對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)和流動(dòng)相作考察。
[0057]1檢測(cè)波長(zhǎng)選擇取用含量項(xiàng)下的對(duì)照液和供試液在紫外光區(qū)200?400nm波長(zhǎng)段 掃描，結(jié)果顯示,鹽酸溴已新有三個(gè)最大吸收,分別為205nm、249nm、309nm,而205nm為末端 吸收，平衡時(shí)間長(zhǎng)，基線出現(xiàn)漂移，不穩(wěn)定；309nm處吸收度太小，都不利于產(chǎn)品中微量的有 關(guān)物質(zhì)檢查；249nm出峰多，分離度好，因此選擇249nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。
[0058]2流動(dòng)相的選擇在249nm下，分別考察了 5種流動(dòng)相對(duì)鹽酸溴己新葡萄糖注射液中的有效成分及雜質(zhì)的洗脫分離效果。
[0059]以(I) 1%冰醋酸水溶液:甲醇(50:50)為流動(dòng)相試驗(yàn)時(shí)，出峰時(shí)間較合適，含量檢測(cè)較好，理論塔板數(shù)在2000以上。但有關(guān)雜質(zhì)峰面積較小，而且只檢測(cè)到一個(gè)雜質(zhì)峰。
[0060]以(2) 1%冰醋酸水溶液:乙腈(50:50)為流動(dòng)相試驗(yàn)時(shí)，出峰時(shí)間提前，含量檢測(cè)較好，理論塔板數(shù)在3000以上，分離度也較好，但有關(guān)雜質(zhì)峰不出峰，后調(diào)整流速為0.8ml/min重新試驗(yàn),結(jié)果仍未檢出相應(yīng)的雜質(zhì)峰。
[0061]以(3)甲醇:磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液，加0.1%三乙胺溶液，用冰醋酸調(diào)節(jié)PH為3.3)(體積比28: 72)為流動(dòng)相試驗(yàn)時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果是含量檢測(cè)較好，理論塔板數(shù)在4000以上，有關(guān)物質(zhì)只檢出有一個(gè)峰。
[0062]以(4)乙腈:磷酸鹽緩沖液(0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液，加0.1 %三乙胺溶液，用冰醋酸調(diào)節(jié)PH為3.3)(體積比28: 72)為流動(dòng)相時(shí)，鹽酸溴己新的峰形好，理論塔板數(shù)在6000以上，輔料也不干擾其測(cè)定，有關(guān)物質(zhì)能檢測(cè)出4個(gè)峰，分離效果較好。
[0063]綜上，本發(fā)明采用(4)號(hào)流動(dòng)相條件為試驗(yàn)條件進(jìn)行以下試驗(yàn)。
[0064]實(shí)施例3鹽酸溴己新葡萄糖注射液中間體和成品的檢測(cè)方法
[0065](一)鹽酸溴己新葡萄糖注射液中間體的檢測(cè)
[0066]1-1色譜條件:采用日本島津儀器雙光束校正紫外分光光度計(jì)(SHIMADZUUV-2450), UV-VISIBLESPECTROPHOTOMETER UVProbe 軟件工作站；
[0067]1-2檢測(cè)波長(zhǎng)的確定:精密吸取鹽酸溴己新葡萄糖注射液IOml至20ml容量瓶中，用5%葡萄糖溶液稀釋刻度，搖勻，為測(cè)試液。取5%葡萄糖溶液為空白溶液作為基線背景校零，而后取測(cè)試液進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果，在249nm波長(zhǎng)處有最大吸收；
[0068]1-3對(duì)照品溶劑篩選方案:對(duì)照品分別采用a、注射用水溶解；b、95%乙醇(生產(chǎn)工藝上起助溶作用)溶解；c、PH6.8的磷酸鹽緩沖液溶解；d、1.5ml95%乙醇溶解后再用5%葡萄糖溶液溶解。
[0069]試驗(yàn)結(jié)果見下表:
[0070]表2
[0071]
【權(quán)利要求】
1.鹽酸溴己新葡萄糖注射液中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，其特征在于:它是采用HPLC進(jìn)行檢測(cè)的，包括如下操作步驟: (1)取待測(cè)鹽酸溴己新葡萄糖注射液，溶解或稀釋，制備供試品溶液； (2)取供試品溶液注入高效液相色譜儀中，在下述色譜條件下檢測(cè)； 色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料； 檢測(cè)波長(zhǎng):249nm ； 流動(dòng)相:乙腈:磷酸鹽緩沖液=28:72，所述磷酸鹽緩沖液由如下方法制備:0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液，加0.1 % (v/v)三乙胺溶液，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH為3.3; (3)根據(jù)步驟(2)的檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(I)中，溶解或/和稀釋所用溶劑為步驟(2)的流動(dòng)相。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于:所述色譜柱的尺寸為250X4.60mm,5 μ m0
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于:所述色譜柱選自AIItima?C18。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于:柱溫為30°C，流動(dòng)相流速為1.0ml/mirio
6.鹽酸溴己新葡萄糖注射液中間體和成品的檢測(cè)方法，其特征在于:所述中間體采用紫外分光光度法進(jìn)行檢測(cè)，它包括如下操作步驟: A、取待測(cè)鹽酸溴己新葡萄糖注射液中間體，以葡萄糖溶液稀釋，制備得到中間體供試品溶液； B、取鹽酸溴己新對(duì)照品，加入95%(v/v)乙醇溶解后，再用葡萄糖溶液稀釋，制備得到對(duì)照品溶液； C、以葡萄糖溶液為空白對(duì)照，分別取中間體供試品溶液、對(duì)照品溶液，在294nm下進(jìn)行檢測(cè)，采用外標(biāo)法計(jì)算中間體供試品溶液中鹽酸溴己新含量即可； 所述成品采用HPLC進(jìn)行檢測(cè)，包括如下操作步驟: (1)取待測(cè)酸溴己新葡萄糖注射液成品，溶解或/和稀釋，制備成品供試品溶液； (2)取成品供試品溶液注入高效液相色譜儀中，在下述色譜條件下檢測(cè)即可； 色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料； 檢測(cè)波長(zhǎng):249nm ； 流動(dòng)相:乙腈:磷酸鹽緩沖液=28:72，所述磷酸鹽緩沖液由如下方法制備:0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液，加0.1% (v/v)三乙胺溶液，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH為3.3。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其特征在于:步驟A?C中，所述葡萄糖溶液濃度均為 5% (g/ml)。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其特征在于:步驟B中，鹽酸溴己新對(duì)照品與95%(v/v)乙醇用量比例為0.02g:1.5ml。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103499647SQ201310414886
【公開日】2014年1月8日 申請(qǐng)日期:2013年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月12日
【發(fā)明者】艾建高, 張從俊, 謝國(guó)龍, 饒高堂, 周群娥, 丁勇 申請(qǐng)人:江西科倫藥業(yè)有限公司