一種同時(shí)檢測咖啡中多種糖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種同時(shí)檢測咖啡中多種糖的方法,屬于離子色譜檢測領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]鑒于咖啡制品的飲用對象的不同以及咖啡制品的質(zhì)量監(jiān)督,咖啡制品中糖的含量需要進(jìn)行嚴(yán)格的檢測。目前咖啡制品中糖的測定方法主要為采用安培檢測器的離子色譜法和采用光檢測器的高效液相色譜法,電化學(xué)檢測器對各種小分子寡糖均具有響應(yīng),糖類分子在紫外檢測器等條件下的吸收波長相同,兩大類檢測器均不具有特異性,而小分子寡糖之間的相互分離存在很大的困難。目前AOAC標(biāo)準(zhǔn)中咖啡制品中糖的分析就存在木糖與甘露糖之間相互干擾的問題。本研宄方法利用離子色譜對糖進(jìn)行初步分離,然后利用質(zhì)譜檢測器對糖進(jìn)行檢測,利用質(zhì)譜自身具有的分離能力對未分離開的糖分別檢測,可以充分解決含碳量不同的糖之間的相互干擾,方法準(zhǔn)確性高。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:提供一種同時(shí)檢測咖啡中多種糖的方法。
[0004]為解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
本發(fā)明提供的同時(shí)檢測咖啡中多種糖的方法,包括下列步驟:
(I)樣品前處理
取咖啡樣品,固體樣品在粉碎機(jī)上進(jìn)行粉碎,液體樣品直接取樣。取粉碎后的固體樣品或未處理的液體樣品0.5g,加入49.5g去離子水,30攝氏度條件下震蕩搖勻30min,5000r/min離心5min,取上層清夜過0.22um的微孔濾膜過濾,過濾后的溶液稀釋10倍進(jìn)樣分析。
[0005](2)進(jìn)樣分析
使用離子色譜儀對樣品進(jìn)行分離,流動(dòng)相為5mM NaOH溶液,色譜柱為D1nexCarboPac? PA20色譜柱(3*150mm,Thermo),配有D1nex CarboPac? PA20保護(hù)柱(3*30mm,Thermo)。
[0006](3)定性定量分析
將各種糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液按照上述步驟進(jìn)樣分析,得到各自的保留時(shí)間,通過與樣品中的出峰時(shí)間對比,進(jìn)行定性分析。
[0007]所述的流動(dòng)相流速為0.38mL/min,AERS 4mm抑制器,抑制器需要回流水,回流水流速為 0.40mL/min ;抑制器電流為 6mA,使用 AB Sciex 的 4000 Q-Trap LC/MS/MS System進(jìn)行檢測,離子化溫度為550攝氏度,離子化電壓為4500eV,離子源Gasl為20psi,離子源Gas2 為 50psi ο
[0008]所述的流動(dòng)相的制備方法是:400.0g NaOH固體(色譜純)加300.0g去離子水溶解,靜止,待溫度降至室溫后,得到室溫下NaOH過飽和溶液,濃度為19.lmol/L ;使用時(shí)取5.25mL NaOH 過飽和溶液稀釋至 10mL 得到 1.0mol/L NaOH 溶液,取 5.0mL 1.0mol/L NaOH溶液稀釋至100mL得到5.0mM NaOH溶液,5.0mM NaOH溶液作為流動(dòng)相使用。
[0009]本發(fā)明的方法可以同時(shí)檢測咖啡中的糖是葡萄糖、果糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、蔗糖。
[0010]對葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為203.200Da,Dp電壓60.0OOeV,保留時(shí)間為11.28min ;對果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為203.200Da,Dp電壓60.0OOeV,保留時(shí)間為15.58min ;對甘露糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為203.200Da,Dp電壓60.0OOeV,保留時(shí)間為14.03min ;對木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為173.200Da,Dp電壓70.0OOeV,保留時(shí)間為13.24min ;對阿拉伯糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為173.200Da,Dp電壓70.0OOeV,保留時(shí)間為8.08min ;對蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為 365.200Da,Dp 電壓 110.000eV,保留時(shí)間為 11.08min。
[0011]本發(fā)明的有益效果:
本發(fā)明的方法可以同時(shí)檢測咖啡中多種糖,操作簡單,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。本方法可以充分避免五碳糖與六碳糖、十二碳糖之間的干擾,徹底解決了含碳不同的糖組分之間的假陽性冋題。
【附圖說明】
[0012]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0013]圖1是對葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析的色譜圖。
[0014]圖2是對果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析的色譜圖。
[0015]圖3是對甘露糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析的色譜圖。
[0016]圖4是對木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析的色譜圖。
[0017]圖5是對阿拉伯糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析的色譜圖。
[0018]圖6是對蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析的色譜圖。
[0019]圖7是對混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析的色譜圖。
[0020]圖8是實(shí)施例2中咖啡樣品的色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021]實(shí)施例1
本發(fā)明提供的同時(shí)檢測咖啡中多種糖的方法,包括下列步驟:
(I)樣品前處理
取咖啡豆樣品,在粉碎機(jī)上粉碎,取粉碎后的樣品0.5g,加入49.5g去離子水,30攝氏度條件下震蕩搖勾30min, 5000r/min離心5min,取上層清夜過0.22um的微孔濾膜過濾,過濾后的溶液進(jìn)樣分析;
(2)進(jìn)樣分析
使用離子色譜儀對樣品進(jìn)行分離,流動(dòng)相為5mM NaOH溶液,色譜柱為D1nexCarboPac? PA20色譜柱(3*150mm,Thermo),配有D1nex CarboPac? PA20保護(hù)柱(3*30mm,Thermo);
(3)定性定量分析
將各種糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液按照上述步驟進(jìn)樣分析,得到各自的保留時(shí)間,通過與樣品中的出峰時(shí)間對比,進(jìn)行定性分析。
[0022]所述的流動(dòng)相流速為0.38mL/min,AERS 4mm抑制器,抑制器需要回流水,回流水流速為 0.40mL/min ;抑制器電流為 6mA,使用 AB Sciex 的 4000 Q-Trap LC/MS/MS System進(jìn)行檢測,離子化溫度為550攝氏度,離子化電壓為4500eV,離子源Gasl為20psi,離子源Gas2 為 50psi ο
[0023]所述的流動(dòng)相的制備方法是:400.0g NaOH固體(色譜純)加300.0g去離子水溶解,靜止,待溫度降至室溫后,得到室溫下NaOH過飽和溶液,濃度為19.lmol/L ;使用時(shí)取5.25mL NaOH 過飽和溶液稀釋至 10mL 得到 1.0mol/L NaOH 溶液,取 5.0mL 1.0mol/L NaOH溶液稀釋至100mL得到5.0mM NaOH溶液,5.0mM NaOH溶液作為流動(dòng)相使用。
[0024]本發(fā)明的方法可以同時(shí)檢測咖啡中的糖是葡萄糖、果糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、蔗糖。
[0025]圖1-7所示,對上述各種糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液及其混合溶液進(jìn)行分析,得出其保留時(shí)間。
[0026]對葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為203.200Da,Dp電壓60.0OOeV,保留時(shí)間為11.28min ;對果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為203.200Da,Dp電壓60.0OOeV,保留時(shí)間為15.58min ;對甘露糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為203.200Da,Dp電壓60.0OOeV,保留時(shí)間為14.03min ;對木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為173.200Da,Dp電壓70.0OOeV,保留時(shí)間為13.24min ;對阿拉伯糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為173.200Da,Dp電壓70.0OOeV,保留時(shí)間為8.08min ;對蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為 365.200Da,Dp 電壓 110.000eV,保留時(shí)間為 11.08min。
[0027]實(shí)施例2應(yīng)用實(shí)例
對市場上購買的KMBO ESPRESSO ITALIAND咖啡樣品進(jìn)行分析測定,測試其中包括哪幾種糖。
[0028](I)樣品前處理
取咖啡樣品100g,在粉碎機(jī)上再次粉碎,取粉碎后的樣品0.5g,加入49.5g溫度為80攝氏度的去離子水,震蕩搖勾30min,冷卻后于5000r/min離心5min,取上層清夜過0.22um的微孔濾膜過濾,過濾后的溶液進(jìn)樣分析。
[0029](2)進(jìn)樣分析
使用離子色譜儀對樣品進(jìn)行分離,流動(dòng)相為5mM NaOH溶液,色譜柱為D1nexCarboPac? PA20色譜柱(3*150mm,Thermo),配有D1nex CarboPac? PA20保護(hù)柱(3*30mm,Thermo);
(3)定性定量分析
將各種糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液按照上述步驟進(jìn)樣分析,得到各自的保留時(shí)間,通過與樣品中的出峰時(shí)間對比,進(jìn)行定性分析。
[0030]其中檢測分子量203.200Da,Dp電壓60.0OOeV:保留時(shí)間11.28min為葡萄糖,保留時(shí)間14.03min為甘露糖,保留時(shí)間15.58min為果糖;檢測分子量173.200Da,Dp電壓70.0OOeV:保留時(shí)間8.08min為阿拉伯糖,保留時(shí)間13.24min為木糖;檢測分子量365.200Da,Dp電壓110.000eV,保留時(shí)間11.08min為蔗糖。精密稱取樣品1.0g,定容至100mL,混合均勻后取適量溶液過0.22 μ m水相微孔濾膜,過濾后的溶液直接經(jīng)過離子色譜分離,并利用質(zhì)譜進(jìn)行檢測。
[0031]由圖8可以看出,8min阿拉伯糖、10_12min為蔗糖和葡萄糖,14min為甘露糖、15min為果糖,即KMBO ESPRESSO ITALIAND咖啡中包括阿拉伯糖、蔗糖、葡萄糖、果糖等幾種糖。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種同時(shí)檢測咖啡中多種糖的方法,其特征在于,包括下列步驟: (I)樣品前處理 取咖啡樣品,在粉碎機(jī)上粉碎,取粉碎后的樣品0.5g,加入49.5g去離子水,30攝氏度條件下震蕩搖勾30min, 5000r/min離心5min,取上層清夜過0.22um的微孔濾膜過濾,過濾后的溶液進(jìn)樣分析; (2)進(jìn)樣分析 使用離子色譜儀對樣品進(jìn)行分離,流動(dòng)相為5mM NaOH溶液,色譜柱為D1nexCarboPac? PA20色譜柱(3*150mm,Thermo),配有D1nex CarboPac? PA20保護(hù)柱(3*30mm,Thermo); (3)定性定量分析 將各種糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液按照上述步驟進(jìn)樣分析,得到各自的保留時(shí)間,通過與樣品中的出峰時(shí)間對比,進(jìn)行定性分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,離子色譜儀的各項(xiàng)參數(shù)是:流動(dòng)相流速為0.38mL/min,AERS 4mm抑制器,抑制器需要回流水,回流水流速為0.40mL/min ;抑制器抑制電流為6mA,使用AB Sciex的4000 Q-Trap LC/MS/MS System進(jìn)行檢測,選擇ESI離子源,其中離子源的離子化溫度為550攝氏度,離子化電壓為4500eV,離子源Gasl為20psi,離子源 Gas2 為 50psi。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,流動(dòng)相的制備方法是:400.0g NaOH固體(色譜純)加300.0g去離子水溶解,靜止,待溫度降至室溫后,得到室溫下NaOH過飽和溶液,濃度為19.lmol/L ;使用時(shí)取5.25mL NaOH過飽和溶液稀釋至10mL得到1.0moI/L NaOH溶液,取 5.0mL 1.0mol/L NaOH 溶液稀釋至 100mL 得到 5.0mM NaOH 溶液,5.0mM NaOH 溶液作為流動(dòng)相使用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述糖是葡萄糖、果糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、蔗糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,對葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為203.200Da,Dp電壓60.000eV,保留時(shí)間為11.28min ;對果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為203.200Da,Dp電壓60.000eV,保留時(shí)間為15.58min ;對甘露糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為203.200Da,Dp電壓60.000eV,保留時(shí)間為14.03min ;對木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為173.200Da,Dp電壓70.000eV,保留時(shí)間為13.24min ;對阿拉伯糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為173.200Da,Dp電壓70.0OOeV,保留時(shí)間為8.08min ;對蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,檢測分子量為365.200Da,Dp電壓110.000eV,保留時(shí)間為11.08min。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種同時(shí)檢測咖啡中多種糖的方法,包括下列步驟:(1)樣品前處理;(2)進(jìn)樣分析;(3)定性定量分析。本發(fā)明的方法可以同時(shí)檢測咖啡中多種糖,操作簡單,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號(hào)】CN104713958
【申請?zhí)枴緾N201510092423
【發(fā)明人】崔鶴, 馬甲民, 張輝珍, 彭云霞, 劉靜靜, 張文皓
【申請人】青島檢驗(yàn)檢疫技術(shù)發(fā)展中心
【公開日】2015年6月17日
【申請日】2015年3月2日