專利名稱：半定量化檢測黃曲霉毒素b1的多檢測線免疫層析試紙條及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線 免疫層析試紙條及其制備方法。
背景技術(shù)：
黃曲霉毒素主要是由黃曲霉和寄生曲霉分泌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，是一種能引起 人畜各種損害的天然有毒化合物。在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的黃曲霉毒素中黃曲霉毒素BKaflatoxin Bi，簡稱AFB1)是毒性最強的黃曲霉毒素，其毒性、致癌性和污染頻率均居生物毒素的首 位。黃曲霉毒素污染食品及飼料后，會直接或間接進入人類食品鏈，威脅人類的健康 和生命安全，其危害程度與黃曲霉毒素的攝入量成正比。黃曲霉毒素Bl廣泛存在于大米、 玉米、花生、芝麻、大豆、菜籽等農(nóng)產(chǎn)品和魚肉等食品中，為此世界各國都規(guī)定了食品及飼料 中黃曲霉毒素Bl的最大允許含量并將其作為強制性標準，因此加強對食品及飼料中黃曲 霉毒素尤其是黃曲霉毒素Bl的檢測、特別是速測，以便及時了解和掌握食品及飼料的衛(wèi)生 信息，對保障我國食品消費安全具有重要意義?，F(xiàn)有技術(shù)中常用的黃曲霉毒素Bl檢測技術(shù)主要有薄層層析法、精密儀器分析法、 免疫學分析法。近年來發(fā)展的免疫學分析法克服了前兩者的缺點，具有特異性強、靈敏度 高、樣品前處理簡單、成本低、對實驗人員和環(huán)境的污染危害小、適于現(xiàn)場批量檢測等優(yōu)點。 其中基于納米金的免疫層析快速檢測技術(shù)具有簡便、快速、靈敏、適于現(xiàn)場檢測的優(yōu)點，具 有極大的應(yīng)用價值和應(yīng)用前景。但是，傳統(tǒng)的黃曲霉毒素Bl免疫層析檢測試紙條僅有一條 檢測線，只能對樣品中的黃曲霉毒素Bl進行定性檢測，且靈敏度較低。所以研究建立針對 黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析快速檢測試紙條，從而實現(xiàn)對樣品中的黃曲霉毒素Bl 高、中、低三個濃度含量的半定量檢測，對監(jiān)控食品和農(nóng)產(chǎn)品中的黃曲霉毒素Bl具有重要 的意義和很高的應(yīng)用價值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線 免疫層析試紙條及其制備方法。該半定量化檢測黃曲霉毒素的多檢測線免疫層析試紙條用 于半定量化檢測黃曲霉毒素Bl，具有檢測快速，操作簡單，靈敏度高的特點。為解決本發(fā)明提出的技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條(見圖1)，包括紙板，紙 板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊、樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接， 所述檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設(shè)置橫向質(zhì)控線、檢測線I、 檢測線II和檢測線III，所述質(zhì)控線包被有兔抗鼠多克隆抗體，所述檢測線I、檢測線II和 檢測線III分別包被有黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物(AFBl-BSA)；所述金標墊橫向噴涂有納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體。按上述方案，所述的吸水墊長16-18_，寬2-4mm ；檢測墊長25_30mm，寬2_4mm ；金 標墊長6-9mm，寬2_4mm ；樣品墊長12_18mm，寬2_4mm，相鄰各墊的交疊長度為l_3mm。按上述方案，所述的吸水墊為吸水紙。按上述方案，所述檢測墊上檢測線I、檢測線II和檢測線III距硝酸纖維素膜上沿 的距離分別為11 17mm、13 19mm、15 21mm，且每相鄰兩條檢測線的間距最小為2mm ； 所述質(zhì)控線與檢測線I的距離為5 11mm。按上述方案，所述檢測墊上每厘米檢測線I、檢測線II和檢測線III上所需黃曲 霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物(AFBl-BSA)的包被量分別為120 600ng，40 200ng和 20 IOOng ；每厘米質(zhì)控線上所需兔抗鼠多克隆抗體的包被量為200 500ng。按上述方案，所述金標墊中所用的納米金的粒徑為15 20nm。按上述方案，所述金標墊上每厘米噴涂長度所需納米金標記的黃曲霉毒素Bl單 克隆抗體的用量為60 216ng。半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的高靈敏度免疫層析試紙條的制備方法，包括以下 步驟(1)吸水墊的制備將吸水紙剪裁即得吸水墊；(2)檢測墊的制備檢測線的包被將市售黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物(AFBl-BSA)配制成0. 1 0. 5mg/mL 的包被液A ；于距硝酸纖維素膜上沿11 17mm、13 19mm、15 21mm的位置，用點噴方式 將包被液A依次橫向包被于硝酸纖維素膜上，得到檢測線I、檢測線II和檢測線III，且每 條檢測線之間的間距至少為2mm，每厘米檢測線I、檢測線II和檢測線III所需的黃曲霉毒 素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物(AFBl-BSA)的包被量分別為120 600ng，40 200ng和20 IOOng,再于37 40°C條件下干燥8 20分鐘；質(zhì)控線的包被將兔抗鼠多克隆抗體配制成0. 4 0. 6mg/mL的包被液B ；于距硝酸纖維素膜上檢 測線I的距離為5 11mm，用點噴方式將包被液B橫向包被于硝酸纖維素膜上，得到質(zhì)控 線，每厘米質(zhì)控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為200 500ng，然后于37 40°C條 件下干燥8 20分鐘；(3)樣品墊的制備將玻璃纖維膜放入封閉液A中浸濕，取出，于37 40°C條件下干燥10 16小時， 得樣品墊，然后置于干燥器中室溫保存；(4)金標墊的制備用點噴方式將納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體溶液橫向噴涂于樣品墊 上，每厘米噴涂長度所需納米金標記的抗黃曲霉毒素Bl單克隆抗體的量為60 216ng，真 空冷凍干燥2 6h，即得金標墊，然后置于干燥器中室溫保存；(5)半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條的組裝在紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，交疊長度為1 3mm，即得半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析 試紙條(見圖1和圖2)。按上述方案，所述的包被液A為10 50mg市售黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶 聯(lián)物(AFBl-BSA)，1 2g牛血清白蛋白，1 2g蔗糖，0. 02 0. 05g疊氮化鈉，0. 8g氯化 鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，0. 02g磷酸二氫鉀，加水定容至IOOmL所得；所述的包被液B為50mg兔抗鼠多克隆抗體，0. 02 0. 05g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉， 0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，0. 02g磷酸二氫鉀，加水定容至IOOmL所得。按上述方案，所述的封閉液A為1 2g牛血清白蛋白，0. 1 0. 2mL曲拉通X-100， 0. 3g聚乙烯吡咯烷酮，2 5g蔗糖，0. 02 0. 05g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷 酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，0. 02g磷酸二氫鉀，加水定容至IOOmL所得。按上述方案，所述的納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體溶液的制備方法為 量取50. OmL市售質(zhì)量濃度為0. 01%納米金溶液，調(diào)節(jié)納米金溶液的pH值為5. 5 ；在攪拌 的狀態(tài)下緩慢加入2mL的0. lmg/mL黃曲霉毒素Bl單克隆抗體水溶液，繼續(xù)攪拌30min ；加 入質(zhì)量濃度為10%的牛血清白蛋白水溶液至牛血清白蛋白的終質(zhì)量濃度為1%，繼續(xù)攪拌 30min ；在4°C條件下放置2h后，1500r/min離心15min，吸出上清，棄沉淀；將吸出的上清液 12000r/min離心30min，棄上清液，加入50mL標記洗滌保存液，再12000r/min離心30min， 棄上清液，將得到的沉淀用標記洗滌保存液重懸，得到5. OmL濃縮物，置于4°C保存?zhèn)溆?，?中納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體溶液的質(zhì)量濃度為0. 04mg/mL ；所述的標記洗滌保存液為2. Og聚乙二醇-20000，0. 2g疊氮化鈉，0. 1235克硼酸， 加水定容至IOOOmL, 0. 22 μ m濾膜過濾所得。如上所述的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl多檢測線免疫層析試紙條的應(yīng)用稱取 已磨細的待測樣品，加入體積濃度為60 80%的甲醇水溶液，待測樣品和甲醇水溶液的質(zhì) 量體積比為2g/mL，混勻，在50 60°C水浴下超聲提取5 10分鐘，靜置5 10分鐘，將 上層清液即提取液用水稀釋2. 5倍，使稀釋液中甲醇的終濃度為24 32%，再取100 μ L稀 釋好的樣品溶液做為檢測液逐滴加入半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試 紙條的樣品墊，其作為檢測試紙條，同時取100 μ L水做為陰性對照液，逐滴加入另一半定 量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條的樣品墊，其作為對照試紙條，15分鐘 后讀取結(jié)果。結(jié)果評估(1)陽性待測樣品檢測試紙條的質(zhì)控線顯示出紅色線條，而若三條檢 測線中的檢測線I顏色比對照試紙條稍淺，檢測線II、檢測線III顏色與對照試紙條基本 相同，則樣品中的黃曲霉毒素Bl含量在0. 625 1. 25ng/g之間；若三條檢測線中檢測線I 不顯色，檢測線II、檢測線III顏色與對照試紙條基本相同，則樣品中的黃曲霉毒素Bl含量 為1. 25ng/g ；若三條檢測線中檢測線I不顯色，檢測線II顏色比對照試紙條淺，檢測線III 顏色與對照試紙條基本相同，則樣品中的黃曲霉毒素Bl含量在1. 25 2. 5ng/g之間；若試 紙條三條檢測線的檢測線I、檢測線II不顯色，檢測線III顏色與對照試紙條基本相同，則 樣品中的黃曲霉毒素Bl含量為2. 5ng/g ；若三條檢測線中檢測線I、II不顯色，檢測線III 顏色比對照試紙條稍淺，則樣品中的黃曲霉毒素Bl含量在2.5 lOng/g之間；若三條檢 測線均不顯色，則樣品中的黃曲霉毒素Bl含量不低于lOng/g。(2)陰性待測樣品檢測試 紙條的質(zhì)控線顯示出紅色線條，三條檢測線的顏色與對照試紙條的相應(yīng)檢測線的顏色均接近，為陰性結(jié)果，表明待測樣品中的曲霉毒素Bl含量低于0.625ng/g。(3)無效無論待測 樣品檢測試紙條的檢測線顯示或不顯示出紅色線條，只要質(zhì)控線不顯示出紅色線條，該試 紙條判為無效。該試紙條的工作原理為當樣品溶液加入到試紙條下端的樣品墊上后，樣品溶液 通過毛細管作用沿試紙條向吸水墊方向移動，其移動至金標墊時，納米金標記的黃曲霉毒 素Bl單克隆抗體被溶解。當樣品中含有黃曲霉毒素Bl時，黃曲霉毒素Bl將和金標墊上的 納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體結(jié)合并一同向上泳動，其到達固定著抗原的三條 檢測線時，抗原將和黃曲霉毒素Bl競爭結(jié)合納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體上有 限的抗原結(jié)合位點，樣品中黃曲霉毒素Bl含量越高，檢測線上的抗原能夠結(jié)合的納米金標 記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體將越少，形成的顯色帶越少、顏色越淺。當抗原所結(jié)合的納 米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體少于一定的數(shù)量時，檢測線處將不會有紅色線條出 現(xiàn)。無論樣品中是否含有黃曲霉毒素Bi，未被檢測線截獲的納米金標記的黃曲霉毒素Bl 單克隆抗體或納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體與黃曲霉毒素Bl的結(jié)合物將繼續(xù)移 動到質(zhì)控線并與上面的第二抗體結(jié)合并被富集顯色，所以不管樣品中是否含有黃曲霉毒素 Bi，質(zhì)控線都將顯色。當樣品中不含黃曲霉毒素Bl即為陰性時，試紙條出現(xiàn)四條紅色條帶， 即質(zhì)控線和三條檢測線均為紅色；當樣品中含有一定量黃曲霉毒素Bl即為陽性時，檢測后 的試紙條上可能觀察到以下6種情況(1)檢測線I為淺紅色，檢測線II、檢測線III均為 紅色，質(zhì)控線為紅色；⑵檢測線I不顯色，檢測線II、檢測線III均為紅色，質(zhì)控線為紅色； (3)檢測線I不顯色，檢測線II為淺紅色，檢測線III為紅色，質(zhì)控線為紅色；(4)檢測線 I、檢測線II均不顯色，檢測線III為紅色，質(zhì)控線為紅色；(5)檢測線I、檢測線II均不顯 色，檢測線III為淺紅色，質(zhì)控線為紅色；(6)檢測線I、檢測線II和檢測線III均不顯色， 質(zhì)控線為紅色；而質(zhì)控線沒有色帶出現(xiàn)則表明該試紙條失效。本發(fā)明的有益效果(1)半定量化檢測黃曲霉毒素Bi。本發(fā)明提供的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的 多檢測線免疫層析試紙條含有三條檢測線，可對黃曲霉毒素Bl進行高、中、低三個濃度的 半定量化檢測，實際應(yīng)用價值大。(2)樣品前處理方法簡單。樣品前處理 需要將磨細的待測樣品加入甲醇超聲提 取，靜置，然后取上清液稀釋后即可進行檢測，整個樣品前處理過程簡單、快速。(3)操作簡單。用該半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙進行檢 測時只需將樣品提取液逐滴加到試紙條的樣品墊上即可，為一步式操作，不需要專業(yè)人員， 操作簡單、方便。(4)檢測過程不需要黃曲霉毒素Bl標準溶液做為陽性對照。本發(fā)明提供的試紙條 檢測樣品時不需要加黃曲霉毒素Bl標準溶液做為陽性對照，而只需用水做為陰性對照即 可，避免了黃曲霉毒素Bl的二次污染。(5)靈敏度高。本發(fā)明提供的半定量化多檢測線免疫層析試紙條對樣品中黃曲霉 毒素Bl的最低檢測限為0. 625ng/g，其檢測限值低于歐盟對食品中黃曲霉毒素Bl的最低限 量值要求。


圖1為本發(fā)明提供的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條的 示意圖。圖中1紙板；2吸水墊；3檢測墊；4金標墊；5樣品墊；6質(zhì)控線；7檢測線I ；8檢 測線II ；9檢測線III。圖2為本發(fā)明提供的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條的 側(cè)視結(jié)構(gòu)示意圖。圖中1紙板；2吸水墊；3檢測墊；4金標墊；5樣品墊。圖3為實施例1的結(jié)果判定示意圖。其中1對照試紙條；2檢測試紙條；3質(zhì)控 線；4檢測線I ；5檢測線II ；6檢測線III。圖4為實施例2的結(jié)果判定示意圖。其中1對照試紙條；2檢測試紙條；3質(zhì)控 線；4檢測線I ；5檢測線II ；6檢測線III。圖5為實施例3的結(jié)果判定示意圖。其中1對照試紙條；2檢測試紙條；3質(zhì)控 線；4檢測線I ；5檢測線II ；6檢測線III。
具體實施例方式實施例1-3 半定量化檢測黃曲霉毒素的高靈敏度免疫層析試紙的制備及應(yīng)用下述實施例1-3中采用市售的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體A9555，但并不局限于下述實 施例中使用的抗體。其他黃曲霉毒素Bl抗體同樣適用，只是其檢測靈敏度可能會存在差異。實施例1 半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的高靈敏度免疫層析試紙條的制備方法，包括以下 步驟(1)吸水墊的制備將吸水紙剪裁成長16mm寬3mm的規(guī)格，得吸水墊；(2)檢測墊的制備檢測線的包被將市售黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物AFBl-BSA配制成0. lmg/mL的包被液 A，于距硝酸纖維素膜上沿13mm、15mm、17mm的位置，用點噴方式將包被液A依次橫向包被于 硝酸纖維素膜上，得到檢測線I、檢測線II和檢測線III，每厘米檢測線I、檢測線II和檢 測線III上黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物AFBl-BSA的包被量分別為120ng、40ng和 20ng,再于37°C條件下干燥8分鐘；所述的包被液A為IOmg市售黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物AFBl_BSA，2g 牛血清白蛋白，2g蔗糖，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化 鉀，磷酸二氫鉀0. 02g，加水定容至IOOmL所得。質(zhì)控線的包被將兔抗鼠多克隆抗體配制成0. 4mg/mL的包被液B，于距檢測線I的距離為5mm的 位置，用點噴方式將包被液B橫向包被于硝酸纖維素膜上，得質(zhì)控線，每厘米質(zhì)控線所需的 兔抗鼠多克隆抗體的包被量為200ng，然后于37°C條件下干燥8分鐘；所述的包被液B為50mg兔抗鼠多克隆抗體，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g 十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，磷酸二氫鉀0. 02g，加水定容至IOOmL所得。所述的硝酸纖維素膜長25mm，寬3mm。
(3)樣品墊的制備將玻璃纖維膜剪裁成長15mm寬3mm的規(guī)格，放入封閉液A中浸濕，于37°C條件下 干燥10小時，得樣品墊，然后置于干燥器中室溫保存；所述的封閉液A為2g牛血清白蛋白，0. ImL曲拉通X_100，0. 3g聚乙烯吡咯烷酮， 2. 5g蔗糖，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，磷酸二氫 鉀0. 02g，加水定容至IOOmL所得。(4)金標墊的制備將樣品墊剪裁成長8mm寬3mm的規(guī)格，用點噴方式將納米金標記的黃曲霉毒素Bl 單克隆抗體溶液橫向噴涂于該樣品墊上，每厘米噴涂長度所需納米金標記的黃曲霉毒素Bl 單克隆抗體的量為192ng，真空冷凍干燥6h即得金標墊，然后置于干燥器中室溫保存；所述質(zhì)量濃度為0. 04mg/mL的納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體溶液的制 備方法為量取50. OmL市售質(zhì)量濃度為0. 01%的納米金溶液，用0. lmol/L碳酸鉀水溶液 調(diào)節(jié)納米金溶液的PH值為5. 5 ；在攪拌的狀態(tài)下緩慢加入2mL的0. lmg/mL黃曲霉毒素Bl 單克隆抗體水溶液，繼續(xù)攪拌30min;加入10%牛血清白蛋白水溶液至牛血清白蛋白的終 濃度為1 %，繼續(xù)攪拌30min ；在4°C條件下放置2h后，1500r/min離心15min，吸出上清， 棄沉淀；將吸出的上清液12000r/min離心30min，棄上清液，加入50mL標記洗滌保存液， 再12000r/min離心30min，棄上清液，將得到的沉淀用標記洗滌保存液重懸，得到5. OmL濃 縮物，置于4°C保存?zhèn)溆?，其中納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體溶液的質(zhì)量濃度為 0. 04mg/mL ；所述納米金溶液中納米金的粒徑為15nm ；所述的0. lmol/L碳酸鉀溶液為13. 8g碳酸鉀溶于純水定容至IOOOmL, 0. 22 μ m 濾膜過濾所得；所述的0. lmg/mL黃曲霉毒素Bl單克隆抗體水溶液為Img市售黃曲霉毒 素Bl單克隆抗體加水定容至IOmL所得；所述的10%牛血清白蛋白水溶液為10g牛血清 白蛋白加水定容至100mL，0. 22 μ m濾膜過濾所得；所述的標記洗滌保存液為2. Og聚乙二 醇-20000，0. 2g疊氮化鈉，0. 1235g硼酸，加水定容至IOOOmL, 0. 22 μ m濾膜過濾所得。(5)半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條的組裝在紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊，相鄰各墊在連 接處交疊連接，交疊長度為1mm，即得黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條(見圖1和 圖2)。上述制備得到的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl多檢測線免疫層析快速檢測試紙條 的應(yīng)用，方法如下稱取已磨細的1#至6#的待測樣品，分別加入體積濃度為60 80%的 甲醇水溶液，待測樣品和甲醇水溶液的質(zhì)量體積比為2g/mL，混勻，在50°C水浴下超聲提取 8分鐘，靜置10分鐘，將提取液即上層清液用水稀釋2. 5倍，使稀釋液中甲醇的終濃度為 32%，再取100 μ L稀釋好的樣品溶液做為檢測液逐滴加入半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的 多檢測線免疫層析試紙條(作檢測試紙條)的樣品墊，同時取100 μ L水做為陰性對照液， 逐滴加入另一半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條(作對照試紙條) 的樣品墊，15分鐘后讀取結(jié)果。結(jié)果評估1#待測樣品檢測試紙條的質(zhì)控線顯示出紅色線條，而試紙條三條檢測 線中的檢測線I顏色比對照試紙條稍淺，檢測線II、檢測線III顏色與對照試紙條基本相同，則為陽性結(jié)果，表明樣品中的黃曲霉毒素Bl含量在0. 625 1. 25ng/g之間，見圖3_1 ；2#待測樣品檢測試紙條的質(zhì)控線顯示出紅色線條，而試紙條三條檢測線中檢測線 I不顯色，檢測線Π、ΙΙΙ顏色與對照試紙條基本相同，則為陽性結(jié)果，表明樣品中的黃曲霉 毒素Bl含量為1. 25ng/g，見圖3-2 ；3#待測樣品檢測試紙條的質(zhì)控線顯示出紅色線條，而試紙條三條檢測線中檢測線 I不顯色，檢測線II顏色比對照試紙條淺，檢測線III顏色與對照試紙條基本相同，則為陽 性結(jié)果，表明樣品中的黃曲霉毒素Bl含量在1. 25 2. 5ng/g之間，見圖3_3 ；4#待測樣品檢測試紙條的質(zhì)控線顯示出紅色線條，而試紙條三條檢測線的檢測線 I、檢測線II不顯色，檢測線III顏色與對照試紙條基本相同，則為陽性結(jié)果，表明樣品中的 黃曲霉毒素Bl含量為2. 5ng/g，見圖3-4 ；5#待測樣品檢測試紙條的質(zhì)控線顯示出紅色線條，而試紙條三條檢測線中檢測線 I、II不顯色，檢測線III顏色比對照試紙條稍淺，則為陽性結(jié)果，表明樣品中的黃曲霉毒素 Bl含量在2. 5 10ng/g之間，見圖3-5 ；6#待測樣品檢測試紙條的質(zhì)控線顯示出紅色線條，而試紙條三條檢測線均不顯 色，則為陽性結(jié)果，表明樣品中的黃曲霉毒素Bl含量不低于lOng/g，見圖3-6。實施例2 半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的高靈敏度免疫層析試紙條的制備方法，包括以下 步驟(1)吸水墊的制備 將吸水紙剪裁成長17mm寬2mm的規(guī)格，得吸水墊；(2)檢測墊的制備檢測線的包被將市售黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物AFBl-BSA配制成0. 25mg/mL的包被 液A，于距硝酸纖維素膜上沿15mm、17mm、19mm的位置，用點噴方式將包被液A依次橫向包被 于硝酸纖維素膜上，即得檢測線I、檢測線II和檢測線III，每厘米檢測線I、檢測線II和檢 測線III所需黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物的包被量分別為300ng、100ng和50ng， 再于38°C條件下干燥10分鐘；所述的包被液A為25mg市售黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物AFB1-BSA，Ig 牛血清白蛋白，2g蔗糖，0. 03g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化 鉀，磷酸二氫鉀0. 02g，加水定容至IOOmL所得；質(zhì)控線的包被將兔抗鼠多克隆抗體配制成0. 5mg/mL的包被液B，于距檢測線I的距離為7mm的 位置，用點噴方式將包被液B橫向包被于硝酸纖維素膜上，得到質(zhì)控線，每厘米質(zhì)控線所需 兔抗鼠多克隆抗體的包被量為300ng，，然后于38°C條件下干燥15分鐘；所述的包被液B為50mg兔抗鼠多克隆抗體，0. 03g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g 十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，磷酸二氫鉀0. 02g，加水定容至IOOmL所得；硝酸纖維素膜長28mm，寬2mm。(3)樣品墊的制備將玻璃纖維膜剪裁成長16mm寬2mm的規(guī)格，放入封閉液A中浸濕，取出，于38°C條件下干燥12小時，得樣品墊，然后置于干燥器中室溫保存；所述的封閉液A為1 2g牛血清白蛋白，0. 1 0. 2mL曲拉通X_100，0. 3g聚乙 烯吡咯烷酮，2 5g蔗糖，0. 02 0. 05g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉， 0. 02g氯化鉀，磷酸二氫鉀0. 02g，加水定容至IOOmL所得；(4)金標墊的制備將樣品墊剪裁成長6mm寬2mm的規(guī)格，用點噴方式將納米金標記的黃曲霉毒素Bl 單克隆抗體溶液橫向噴涂于樣品墊上，每厘米噴涂長度所需納米金標記的黃曲霉毒素Bl 單克隆抗體的量為120ng，真空冷凍干燥5h，即得金標墊，然后置于干燥器中室溫保存；所述的納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體溶液的制備方法為量取50. OmL 市售質(zhì)量濃度為0. 01%的納米金溶液，用0. lmol/L碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)納米金溶液的pH值 為5. 5 ；在攪拌的狀態(tài)下緩慢加入2mL的0. lmg/mL黃曲霉毒素Bl單克隆抗體水溶液，繼 續(xù)攪拌30min ；加入10 %牛血清白蛋白水溶液至牛血清白蛋白的終濃度為1 %，繼續(xù)攪拌 30min ；在4°C條件下放置2h后，1500r/min離心15min，吸出上清，棄沉淀；將吸出的上清液 12000r/min離心30min，棄上清液，加入50mL標記洗滌保存液，再12000r/min離心30min， 棄上清液，將得到的沉淀用標記洗滌保存液重懸，得到5. OmL濃縮物，置于4°C保存?zhèn)溆?，?中納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體溶液；所述納米金溶液中納米金的粒徑為18nm ；所述的0. lmol/L碳酸鉀水溶液為13. 8g碳酸鉀溶于純水定容至IOOOmL, 0. 22 μ m 濾膜過濾所得；所述的0. lmg/mL黃曲霉毒素Bl單克隆抗體水溶液為lmg市售黃曲霉毒 素Bl單克隆抗體加水定容至IOmL所得；所述的10%牛血清白蛋白水溶液為10g牛血清 白蛋白加水定容至100mL，0. 22 μ m濾膜過濾所得；所述的標記洗滌保存液為2. Og聚乙二 醇-20000，0. 2g疊氮化鈉，0. 1235克硼酸，加水定容至1000mL，0. 22 μ m濾膜過濾所得。(5)半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條的組裝在紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊，相鄰各墊在連 接處交疊連接，交疊長度為2mm，即得半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試 紙條(見圖1和圖2)。半定量化檢測黃曲霉毒素Bl多檢測線免疫層析快速檢測試紙條的應(yīng)用，方法如 下稱取已磨細待測樣品，加入體積濃度為60 80%的甲醇水溶液，待測樣品和甲醇水溶 液的質(zhì)量體積比為2g/mL，混勻，在50°C水浴下超聲提取5分鐘，靜置5分鐘，將上層清液即 提取液用水稀釋2. 5倍，使稀釋液中甲醇的終濃度為28%，再取100 μ L稀釋好的樣品溶液 做為檢測液逐滴加入半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條(作檢測試 紙條)的樣品墊，同時取IOOyL水做為陰性對照液，逐滴加入另一半定量化檢測黃曲霉毒 素Bl的多檢測線免疫層析試紙條(作對照試紙條)的樣品墊，15分鐘后讀取結(jié)果。結(jié)果評估待測樣品檢測試紙條的質(zhì)控線顯示出紅色線條，三條檢測線的顏色與 對照試紙條的相應(yīng)檢測線的顏色均接近，據(jù)此判定此為陰性結(jié)果，見圖4，這表明待測樣品 中的曲霉毒素Bl含量低于0. 625ng/g。實施例3:半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的高靈敏度免疫層析試紙條的制備方法，包括以下 步驟
(1)吸水墊的制備將吸水紙剪裁成長18mm，寬4mm的規(guī)格，得吸水墊；(2)檢測墊的制備檢測線的包被將黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物AFBl-BSA配制成0. 5mg/mL的包被液A，于 距硝酸纖維素膜上沿17mm、19mm、21mm的位置，用點噴方式將包被液A依次橫向包被得到檢 測線I、檢測線II和檢測線III，每厘米檢測線I、檢測線II和檢測線III所需的黃曲霉毒 素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物的包被量分別為600ng、200ng和lOOng，再于39°C條件下干燥 10分鐘；所述的包被液A為50mg市售黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物AFB1-BSA，1. 5g 牛血清白蛋白，1. 5g蔗糖，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯 化鉀，磷酸二氫鉀0. 02g，加水定容至IOOmL所得；質(zhì)控線的包被將兔抗鼠多克隆抗體配制成0. 6mg/mL的包被液B，于距檢測線I的距離為9mm的 位置，用點噴方式將包被液B橫向包被于硝酸纖維素膜上，得到質(zhì)控線，每厘米質(zhì)控線所需 的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為500ng，然后于39°C條件下干燥10分鐘；所述的包被液B為50mg兔抗鼠多克隆抗體，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g 十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，磷酸二氫鉀0. 02g，加水定容至IOOmL所得；所述的硝酸纖維素膜長30mm，寬4mm(3)樣品墊的制備將玻璃纖維膜剪裁成長17mm，寬4mm的規(guī)格，放入封閉液A中浸濕，于39°C條件下 干燥10小時，得樣品墊，然后置于干燥器中室溫保存；所述的封閉液A為1.5g牛血清白蛋白，0. 15mL曲拉通X_100，0. 3g聚乙烯吡咯烷 酮，4g蔗糖，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，磷酸二 氫鉀0. 02g，加水定容至IOOmL所得；(4)金標墊的制備將樣品墊剪裁成長6mm，寬4mm的規(guī)格，用點噴方式將納米金標記的黃曲霉毒素Bl 單克隆抗體溶液橫向噴于該樣品墊上，每厘米噴涂長度所需納米金標記的黃曲霉毒素Bl 單克隆抗體的量為72ng，真空冷凍干燥2h，即得金標墊，然后置于干燥器中室溫保存；所述納米金溶液中納米金的粒徑為20nm ；所述的納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體溶液的制備方法為量取50. OmL 市售0. 01%納米金溶液，用0. lmol/L碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)納米金溶液的PH值為5. 5 ；在攪拌 的狀態(tài)下緩慢加入2mL的0. lmg/mL黃曲霉毒素Bl單克隆抗體水溶液，繼續(xù)攪拌30min ；加 入10 %牛血清白蛋白水溶液至牛血清白蛋白的終濃度為1 %，繼續(xù)攪拌30min ；在4°C條件 下放置2h后，1500r/min離心15min，吸出上清，棄沉淀；將吸出的上清液12，OOOr/min離心 30min,棄上清液，加入50mL標記洗滌保存液，再12，000r/min離心30min，棄上清液，將得到 的沉淀用標記洗滌保存液重懸，得到5. OmL濃縮物，置于4°C保存?zhèn)溆?，其中納米金標記的 黃曲霉毒素Bl單克隆抗體溶液；所述的0. lmol/L碳酸鉀水溶液為13. 8g碳酸鉀溶于純水定容至IOOOmL, 0. 22 μ m濾膜過濾所得；所述的0. lmg/mL黃曲霉毒素Bl單克隆抗體水溶液為Img市售黃曲霉毒 素Bl單克隆抗體加水定容至IOmL所得；所述的10%牛血清白蛋白水溶液為10g牛血清 白蛋白加水定容至100mL，0. 22 μ m濾膜過濾所得；所述的標記洗滌保存液為2. Og聚乙二 醇-20000,0. 2g疊氮化鈉，0. 1235g硼酸，加水定容至IOOOmL, 0. 22 μ m濾膜過濾所得；(5)半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條的組裝在紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊，相鄰各墊在連 接處交疊連接，交疊長度為2mm，即得半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試 紙條(見圖2)。半定量化檢測黃曲霉毒素Bl多檢測線免疫層析快速檢測試紙條的應(yīng)用，方法如 下稱取已磨細1#和2#待測樣品，分別加入體積濃度為60 80%的甲醇水溶液，待測樣 品和甲醇水溶液的質(zhì)量體積比為2g/mL，混勻，在60°C水浴下超聲提取8分鐘，靜置8分鐘， 將提取液即上層清液用水稀釋2. 5倍，使稀釋液中甲醇的終濃度為24%，再取100 μ L稀釋 好的樣品溶液做為檢測液逐滴加入半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙 條(作檢測試紙條)的樣品墊，同時取IOOyL水做為陰性對照液，逐滴加入另一半定量化 檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條(作對照試紙條)的樣品墊，15分鐘后讀取 結(jié)果。結(jié)果評估1#待測樣品檢測試紙條的檢測線顯示紅色線條，而質(zhì)控線不顯示紅色 線條，則據(jù)此判定該檢測試紙條的結(jié)果無效，見圖5-1 ;2#待測樣品檢測試紙條的檢測線 不顯示紅色線條，而質(zhì)控線亦不顯示紅色線條，則據(jù)此判定該檢測試紙條的結(jié)果無效，見圖 5-2。
權(quán)利要求
半定量化檢測黃曲霉毒素B1的多檢測線免疫層析試紙條，其特征在于包括紙板，紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊、樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，所述檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設(shè)置橫向質(zhì)控線、檢測線I、檢測線II和檢測線III，所述質(zhì)控線包被有兔抗鼠多克隆抗體，所述檢測線I、檢測線II和檢測線III分別包被有黃曲霉毒素B1 牛血清白蛋白偶聯(lián)物；所述金標墊橫向噴涂有納米金標記的黃曲霉毒素B1單克隆抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條， 其特征在于所述的吸水墊長16 18mm，寬2 4mm ；檢測墊長25 30mm，寬2 4mm ；金 標墊長6 9mm，寬2 4mm ；樣品墊長12 18mm，寬2 4mm，相鄰各墊的交疊長度為1 3mm ο
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙 條，其特征在于所述檢測墊上檢測線I、檢測線II和檢測線III距硝酸纖維素膜上沿的距 離分別為11 17mm、13 19mm、15 21mm，且每相鄰兩條檢測線的間距最小為2mm ；所述 質(zhì)控線與檢測線I的距離為5 11mm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙 條，其特征在于所述檢測墊上每厘米檢測線I、檢測線II和檢測線III上所需黃曲霉毒素 Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物的包被量分別為120 600ng，40 200ng和20 IOOng ；每厘米 質(zhì)控線上所需兔抗鼠多克隆抗體的包被量為200 500ng。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙 條，其特征在于所述金標墊中所用的納米金的粒徑為15 20nm ；所述金標墊上每厘米噴 涂長度所需納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體的用量為60 216ng。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的高靈敏度免疫層析試紙 條的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)吸水墊的制備將吸水紙剪裁即得吸水墊；(2)檢測墊的制備檢測線的包被將市售黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶聯(lián)物配制成0. 1 0. 5mg/mL的包被液A ；于距 硝酸纖維素膜上沿11 17mm、13 19mm、15 21mm的位置，用點噴方式將包被液A依次 橫向包被于硝酸纖維素膜上，得到檢測線I、檢測線II和檢測線III，且每條檢測線之間的 間距至少為2mm，每厘米檢測線I、檢測線II和檢測線III所需的黃曲霉毒素Bl-牛血清 白蛋白偶聯(lián)物(AFBl-BSA)的包被量分別為120 600ng，40 200ng和20 lOOng，再于 37 40°C條件下干燥8 20分鐘；質(zhì)控線的包被將兔抗鼠多克隆抗體配制成0. 4 0. 6mg/mL的包被液B ；于距硝酸纖維素膜上檢測線 I的距離為5 11mm，用點噴方式將包被液B橫向包被于硝酸纖維素膜上，得到質(zhì)控線，每 厘米質(zhì)控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為200 500ng，然后于37 40°C條件下干 燥8 20分鐘；(3)樣品墊的制備將玻璃纖維膜放入封閉液A中浸濕，取出，于37 40°C條件下干燥10 16小時，得樣 品墊，然后置于干燥器中室溫保存；(4)金標墊的制備用點噴方式將納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體溶液橫向噴涂于樣品墊上，每 厘米噴涂長度所需納米金標記的抗黃曲霉毒素Bl單克隆抗體的量為60 216ng，真空冷凍 干燥2 6h，即得金標墊，然后置于干燥器中室溫保存；(5)半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條的組裝在紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處 交疊連接，交疊長度為1 3mm，即得半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙^^ ο
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的高靈敏度免疫層析試紙條的 制備方法，其特征在于所述的包被液A為10 50mg市售黃曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶 聯(lián)物(AFB1-BSA)，1 2g牛血清白蛋白，1 2g蔗糖，0. 02 0. 05g疊氮化鈉，0. 8g氯化 鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，0. 02g磷酸二氫鉀，加水定容至IOOmL所得；所述的包被液B為50mg兔抗鼠多克隆抗體，0. 02 0. 05g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉， 0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，0. 02g磷酸二氫鉀，加水定容至IOOmL所得。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的高靈敏度免疫層析試紙條 的制備方法，其特征在于所述的封閉液A為1 2g牛血清白蛋白，0. 1 0. 2mL曲拉通 X-100,0. 3g聚乙烯吡咯烷酮，2 5g蔗糖，0. 02 0. 05g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二 水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，0. 02g磷酸二氫鉀，加水定容至IOOmL所得。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的高靈敏度免疫層析試紙條 的制備方法，其特征在于所述的納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體溶液的制備方法 為量取50. OmL市售質(zhì)量濃度為0. 01%納米金溶液，調(diào)節(jié)納米金溶液的pH值為5. 5 ；在攪 拌的狀態(tài)下緩慢加入2mL的0. lmg/mL黃曲霉毒素Bl單克隆抗體水溶液，繼續(xù)攪拌30min ； 加入質(zhì)量濃度為10%的牛血清白蛋白水溶液至牛血清白蛋白的終質(zhì)量濃度為1%，繼續(xù)攪 拌30min ；在4°C條件下放置2h后，1500r/min離心15min，吸出上清，棄沉淀；將吸出的上 清液12000r/min離心30min，棄上清液，加入50mL標記洗滌保存液，再12000r/min離心 30min，棄上清液，將得到的沉淀用標記洗滌保存液重懸，得到5. OmL濃縮物，置于4°C保存 備用，其中納米金標記的黃曲霉毒素Bl單克隆抗體溶液的質(zhì)量濃度為0. 04mg/mL ；所述的標記洗滌保存液為2. Og聚乙二醇-20000，0. 2g疊氮化鈉，0. 1235克硼酸，加水 定容至IOOOmL, 0. 22 μ m濾膜過濾所得。
10.一種根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的高靈敏度免疫層 析試紙條的應(yīng)用，其特征在于稱取已磨細的待測樣品，加入體積濃度為60 80%的甲醇 水溶液，待測樣品和甲醇水溶液的質(zhì)量體積比為2g/mL，混勻，在50 60°C水浴下超聲提取 5 10分鐘，靜置5 10分鐘，將上層清液即提取液用水稀釋2. 5倍，使稀釋液中甲醇的終 濃度為24 32%，再取100 μ L稀釋好的樣品溶液做為檢測液逐滴加入半定量化檢測黃曲 霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條的樣品墊，其作為檢測試紙條，同時取100μ L水做為 陰性對照液，逐滴加入另一半定量化檢測黃曲霉毒素Bl的多檢測線免疫層析試紙條的樣 品墊，其作為對照試紙條，15分鐘后讀取結(jié)果；結(jié)果評估(1)陽性待測樣品檢測試紙條的質(zhì)控線顯示出紅色線條，而若三條檢測線 中的檢測線I顏色比對照試紙條稍淺，檢測線II、檢測線III顏色與對照試紙條基本相同， 則樣品中的黃曲霉毒素Bl含量在0. 625 1. 25ng/g之間；若三條檢測線中檢測線I不顯 色，檢測線II、檢測線III顏色與對照試紙條基本相同，則樣品中的黃曲霉毒素Bl含量為 1. 25ng/g ；若三條檢測線中檢測線I不顯色，檢測線II顏色比對照試紙條淺，檢測線III顏 色與對照試紙條基本相同，則樣品中的黃曲霉毒素Bl含量在1. 25 2. 5ng/g之間；若試 紙條三條檢測線的檢測線I、檢測線II不顯色，檢測線III顏色與對照試紙條基本相同，則 樣品中的黃曲霉毒素Bl含量為2. 5ng/g ；若三條檢測線中檢測線I、II不顯色，檢測線III 顏色比對照試紙條稍淺，則樣品中的黃曲霉毒素Bl含量在2.5 lOng/g之間；若三條檢 測線均不顯色，則樣品中的黃曲霉毒素Bl含量不低于lOng/g。(2)陰性待測樣品檢測試 紙條的質(zhì)控線顯示出紅色線條，三條檢測線的顏色與對照試紙條的相應(yīng)檢測線的顏色均接 近，為陰性結(jié)果，表明待測樣品中的曲霉毒素Bl含量低于0.625ng/g。(3)無效無論待測 樣品檢測試紙條的檢測線顯示或不顯示出紅色線條，只要質(zhì)控線不顯示出紅色線條，該試 紙條判為無效。
全文摘要
本發(fā)明屬生物檢測領(lǐng)域。半定量化檢測黃曲霉毒素B1的多檢測線免疫層析試紙條，包括紙板，紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊、樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，所述檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設(shè)置橫向質(zhì)控線、檢測線I、檢測線II和檢測線III，所述質(zhì)控線包被有兔抗鼠多克隆抗體，所述檢測線I、檢測線II和檢測線III分別包被有黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯(lián)物(AFB1-BSA)；所述金標墊橫向噴涂有納米金標記的黃曲霉毒素B1單克隆抗體。該試紙條用于半定量化檢測黃曲霉毒素B1，具有檢測快速，操作簡單，靈敏度高的特點。
文檔編號G01N33/558GK101900728SQ20101024509
公開日2010年12月1日 申請日期2010年8月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月5日
發(fā)明者丁小霞, 姜俊, 張奇, 張文, 張道宏, 李培武, 陳小媚 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院油料作物研究所