專利名稱：一種膽木藥材中間體及注射液的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中草藥提取物制劑的質(zhì)量控制方法，特別是一種膽木注射液的質(zhì)量控制方法；本發(fā)明還涉及一種膽木藥材的質(zhì)量控制方法；本發(fā)明還涉及一種膽木中間的質(zhì)量控制方法。

背景技術(shù)：
膽木注射液為已有國家標(biāo)準(zhǔn)的上市藥品，但其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較為簡(jiǎn)單，只有一些薄層鑒別方法，不能真實(shí)的反映該品種的有效成分和組分的群體特征，難以有效的保證該品種的安全有效性。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種膽木藥材的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明還提供了一種膽木中間體的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明還提供了一種膽木注射液的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種膽木注射液的質(zhì)量控制方法，其特點(diǎn)是，該方法中含有以下含量測(cè)定方法， a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；30∶70∶0.1的乙腈-水-磷酸為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為226nm；理論塔板數(shù)按異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺計(jì)算應(yīng)不低于5000； b、對(duì)照品溶液的制備取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺適量，精密稱定，加甲醇使溶解，并配制成含對(duì)照品100μg/ml和20μg/ml的溶液； c、供試品溶液的制備精密量取注射液1.0ml，置10ml量瓶中，以蒸餾水定容即得； d、測(cè)定法精密吸取兩種濃度的對(duì)照品溶液和注射液供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算含量。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明是一種膽木注射液的質(zhì)量控制方法，其特點(diǎn)是，結(jié)合高效液相色譜法與指紋圖譜進(jìn)行檢測(cè)，步驟如下， (1)建立膽木注射液的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜， a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)Agilent 1100系列HPLC色譜儀，含二元高壓泵、自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)、在線脫氣、柱溫箱、DAD檢測(cè)器等單元；色譜柱Lichrospher C18，5μm，4.6×250mm；流動(dòng)相A為0.1％磷酸溶液，B為0.1％磷酸乙腈溶液，從1％B開始以線性梯度方式經(jīng)70min達(dá)到35％B，再經(jīng)5min達(dá)到95％B，流速1ml/min；柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)226nm；記錄時(shí)間72min； 理論板數(shù)按異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺峰C26H30N2O8計(jì)算，應(yīng)不低于5000； b、對(duì)照品溶液的制備取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成每ml含1mg的對(duì)照品溶液； c、供試品溶液的制備精密量取膽木注射液1.0ml置10ml量瓶中，加蒸餾水至刻度，用0.45μm的水系微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得； d、測(cè)定法精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，得膽木注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜； (2)以上述相同的方法測(cè)定待測(cè)膽木注射液樣品的指紋圖譜，然后將其與上述膽木注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度不得低于0.85。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。以上所述的一種膽木注射液的質(zhì)量控制方法，其特點(diǎn)是，在建立膽木注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜時(shí)，至少取10批膽木注射液，分別按所供試品溶液的制備方法制得供試溶液，所述的乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水，根據(jù)檢測(cè)所得的至少10批膽木注射液的檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立膽木注射液HPLC標(biāo)準(zhǔn)圖譜，主要確立峰保留時(shí)間和峰面積值，然后將檢測(cè)數(shù)據(jù)導(dǎo)入計(jì)算機(jī)軟件中，計(jì)算各對(duì)應(yīng)峰相對(duì)保留時(shí)間的平均值和相對(duì)峰面積的平均值，分別與參照峰的平均保留時(shí)間和平均峰面積相乘，作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的峰保留時(shí)間和峰面積值，導(dǎo)出計(jì)算結(jié)果；膽木注射液HPLC的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù)如下，膽木注射液HPLC的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù) 注25S為參照峰。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明是一種膽木藥材的質(zhì)量控制方法，其特點(diǎn)是，該方法中含有以下含量測(cè)定方法， (1)色譜條件色譜柱Lichrospher C18，5μm，4.6mm×250mm；流動(dòng)相乙腈-水-磷酸(30∶70∶0.1)；速1ml/min；測(cè)定波長(zhǎng)226nm作為測(cè)定波長(zhǎng)；柱溫30℃； (2)藥材供試品溶液的制備取膽木藥材粗粉0.5g，精密稱定，加70％甲醇40ml回流提取70min，濾過，洗滌，洗液濾入同一量瓶中，放冷，定容至50ml；精密量取1ml置5ml量瓶中，加70％甲醇定容，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得； (3)含量測(cè)定按上述色譜條件，取藥材供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)2點(diǎn)法計(jì)算異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的含量。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明是一種膽木藥材的質(zhì)量控制方法，其特征在于，結(jié)合高效液相色譜法與指紋圖譜進(jìn)行檢測(cè)，步驟如下 (1)建立膽木注射液的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜， a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)同權(quán)利要求2之色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)； b、對(duì)照品溶液的制備同權(quán)利要求2之對(duì)照品溶液的制備； c、供試品溶液的制備取膽木藥材粗粉5g，加50ml水回流提取1hr，抽濾，置50ml量瓶中，放冷，加蒸餾水至刻度，以孔徑為0.45μm的水系微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液即得； d、測(cè)定法精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，得膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜； (2)以上述相同的方法測(cè)定待測(cè)膽木藥材樣品的指紋圖譜，然后將其與上述膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度不得低于0.85。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。以上所述的一種膽木藥材的質(zhì)量控制方法，其特征在于，在建立膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜時(shí)，取至少10批不同產(chǎn)地的膽木藥材，分別按所述供試品溶液制備方法制備供試品，根據(jù)至少10批膽木藥材的檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立膽木藥材HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，主要是峰保留時(shí)間和峰面積值的確立，分別把膽木藥材的檢測(cè)數(shù)據(jù)導(dǎo)入計(jì)算軟件中，計(jì)算各對(duì)應(yīng)峰相對(duì)保留時(shí)間的平均值和相對(duì)峰面積的平均值，分別與參照峰的平均保留時(shí)間和平均峰面積相乘，作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的峰保留時(shí)間和峰面積值，導(dǎo)出計(jì)算結(jié)果；膽木藥材的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)如下， 膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù) 注22S為參照峰。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明是一種膽木中間體的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方法中含有以下含量測(cè)定方法， (1)色譜條件色譜柱Lichrospher C18，5μm，4.6mm×250mm；流動(dòng)相乙腈-水-磷酸30∶70∶0.1；流速1ml/min；測(cè)定波長(zhǎng)226nm作為測(cè)定波長(zhǎng)；柱溫30℃； (2)中間體供試品溶液的制備直接以蒸餾水稀釋中間體水溶液，精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，以蒸餾水定容，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得； (3)含量測(cè)定按上述色譜條件，取中間體供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)2點(diǎn)法計(jì)算異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的含量。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明是一種膽木中間體的質(zhì)量控制方法，其特征在于，結(jié)合高效液相色譜法與指紋圖譜進(jìn)行檢測(cè)，步驟如下， (1)建立膽木中間體的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜， a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)同權(quán)利要求2之色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)； b、對(duì)照品溶液的制備同權(quán)利要求2之對(duì)照品溶液的制備； c、供試品溶液的制備精密量取膽木中間體1.0ml置25ml量瓶中，加蒸餾水至刻度，用0.45μm的水系微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得； d、測(cè)定法精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，得膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜； (2)以上述相同的方法測(cè)定待測(cè)膽木中間體樣品的指紋圖譜，然后將其與上述膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度不得低于0.85。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。以上所述的一種膽木中間體的質(zhì)量控制方法，其特征在于，在建立膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜時(shí)，取至少10批膽木中間體，分別按所述供試品溶液制備方法制備供試品，根據(jù)10批膽木中間體的檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立膽木中間體HPLC指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)，主要是峰保留時(shí)間和峰面積值的確立，分別把10批膽木中間體的檢測(cè)數(shù)據(jù)導(dǎo)入計(jì)算軟件中，計(jì)算各對(duì)應(yīng)峰相對(duì)保留時(shí)間的平均值和相對(duì)峰面積的平均值，分別與參照峰的平均保留時(shí)間和平均峰面積相乘，作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的峰保留時(shí)間和峰面積值，導(dǎo)出計(jì)算結(jié)果；膽木中間體的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)如下， 膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù) 注26S為參照峰。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明公開了一種新的有效成分異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的含量測(cè)定方法，提供該品種原藥材、中間體及制劑的指紋圖譜的測(cè)定方法，并提供該品種原藥材、中間體及制劑標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的分析方法，通過本發(fā)明，獲得的是中藥不同個(gè)體的化學(xué)成分信息，用圖形或圖案方式表達(dá)，進(jìn)行比對(duì)和分析，可實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥未知物質(zhì)群整體的質(zhì)量控制，是實(shí)現(xiàn)多種成分整體相關(guān)質(zhì)量評(píng)價(jià)的關(guān)鍵技術(shù)，也是中藥創(chuàng)新、研究開發(fā)、質(zhì)量鑒別、鑒定的必要技術(shù)手段。本發(fā)明可以準(zhǔn)確反應(yīng)該品種組分群體的特征圖譜，能全面反映中藥所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，進(jìn)而反映中藥材及其產(chǎn)品的質(zhì)量。



圖1異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖2空白實(shí)驗(yàn)圖譜。圖3 Isovincoside lactone(Strictosamide)UV掃描圖譜。圖4 Isovincoside lactone(Strictosamide)Tof-MS圖譜。圖5 Isovincoside lactone(Strictosamide)HPLC圖譜及歸一化法所得純度。圖6～10蒸餾水、吐溫-80(輔料)水溶液與中間體和注射液的圖譜比較(210、280、226、242、320nm)。圖11 210nm和226nm圖譜比較。圖12對(duì)照品與藥材、中間體、制劑的圖譜比較。圖13制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)疊加圖譜。圖14膽木注射液精密度試驗(yàn)疊加圖譜。圖15膽木注射液指紋圖譜重復(fù)性試驗(yàn)HPLC疊加圖譜。圖16系統(tǒng)梯度滯后時(shí)間圖譜。圖17 10批膽木注射液指紋圖譜的對(duì)比圖。圖18膽木注射液HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。圖19 10批膽木藥材的HPLC指紋圖譜比較。圖20膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。圖21 10批膽木中間體的HPLC指紋圖譜比較。圖22膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。圖23膽木藥材、中間體和制劑的相關(guān)性圖譜比較。
具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1。一種膽木注射液的質(zhì)量控制方法，該方法中含有以下含量測(cè)定方法， a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；30∶70∶0.1的乙腈-水-磷酸為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為226nm；理論塔板數(shù)按異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺計(jì)算應(yīng)不低于5000； b、對(duì)照品溶液的制備取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺適量，精密稱定，加甲醇使溶解，并配制成含對(duì)照品100μg/ml和20μg/ml的溶液； c、供試品溶液的制備精密量取注射液1.0ml，置10ml量瓶中，以蒸餾水定容即得； d、測(cè)定法精密吸取兩種濃度的對(duì)照品溶液和注射液供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算含量。
實(shí)施例2。一種膽木注射液的質(zhì)量控制方法，結(jié)合高效液相色譜法與指紋圖譜進(jìn)行檢測(cè)，步驟如下， (1)建立膽木注射液的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜， a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)Agilent 1100系列HPLC色譜儀，含二元高壓泵、自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)、在線脫氣、柱溫箱、DAD檢測(cè)器等單元；色譜柱Lichrospher C18，5μm，4.6×250mm；流動(dòng)相A為0.1％磷酸溶液，B為0.1％磷酸乙腈溶液，從1％B開始以線性梯度方式經(jīng)70min達(dá)到35％B，再經(jīng)5min達(dá)到95％B，流速1ml/min；柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)226nm；記錄時(shí)間72min； 理論板數(shù)按異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺峰C26H30N2O8計(jì)算，應(yīng)不低于5000； b、對(duì)照品溶液的制備取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成每ml含1mg的對(duì)照品溶液； c、供試品溶液的制備精密量取膽木注射液1.0ml置10ml量瓶中，加蒸餾水至刻度，用0.45μm的水系微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得； d、測(cè)定法精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，得膽木注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜； (2)以上述相同的方法測(cè)定待測(cè)膽木注射液樣品的指紋圖譜，然后將其與上述膽木注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度不得低于0.85。
實(shí)施例3。實(shí)施例2的膽木注射液的質(zhì)量控制方法，在建立膽木注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜時(shí)，至少取10批膽木注射液，分別按所供試品溶液的制備方法制得供試溶液，所述的乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水，根據(jù)檢測(cè)所得的至少10批膽木注射液的檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立膽木注射液HPLC標(biāo)準(zhǔn)圖譜，主要確立峰保留時(shí)間和峰面積值，然后將檢測(cè)數(shù)據(jù)導(dǎo)入Excel中，計(jì)算各對(duì)應(yīng)峰相對(duì)保留時(shí)間的平均值和相對(duì)峰面積的平均值，分別與參照峰的平均保留時(shí)間和平均峰面積相乘，作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的峰保留時(shí)間和峰面積值，導(dǎo)出計(jì)算結(jié)果；膽木注射液HPLC的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù)見表19。
實(shí)施例4。一種膽木藥材的質(zhì)量控制方法，該方法中含有以下含量測(cè)定方法， (1)色譜條件色譜柱Lichrospher C18，5μm，4.6mm×250mm；流動(dòng)相乙腈-水-磷酸(30∶70∶0.1)；速1ml/min；測(cè)定波長(zhǎng)226nm作為測(cè)定波長(zhǎng)；柱溫30℃； (2)藥材供試品溶液的制備取膽木藥材粗粉0.5g，精密稱定，加70％甲醇40ml回流提取70min，濾過，洗滌，洗液濾入同一量瓶中，放冷，定容至50ml；精密量取1ml置5ml量瓶中，加70％甲醇定容，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得； (3)含量測(cè)定按上述色譜條件，取藥材供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)2點(diǎn)法計(jì)算異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的含量。
實(shí)施例5。一種膽木藥材的質(zhì)量控制方法，結(jié)合高效液相色譜法與指紋圖譜進(jìn)行檢測(cè)，步驟如下，(1)建立膽木注射液的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜， a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)同實(shí)施例2之色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)； b、對(duì)照品溶液的制備同施例2之對(duì)照品溶液的制備； c、供試品溶液的制備取膽木藥材粗粉5g，加50ml水回流提取1hr，抽濾，置50ml量瓶中，放冷，加蒸餾水至刻度，以孔徑為0.45μm的水系微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液即得； d、測(cè)定法精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，得膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜； (2)以上述相同的方法測(cè)定待測(cè)膽木藥材樣品的指紋圖譜，然后將其與上述膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度不得低于0.85。
實(shí)施例6。實(shí)施例5中的膽木藥材的質(zhì)量控制方法，在建立膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜時(shí)，取至少10批不同產(chǎn)地的膽木藥材，分別按所述供試品溶液制備方法制備供試品，根據(jù)至少10批膽木藥材的檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立膽木藥材HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，主要是峰保留時(shí)間和峰面積值的確立，分別把膽木藥材的檢測(cè)數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件》中，計(jì)算各對(duì)應(yīng)峰相對(duì)保留時(shí)間的平均值和相對(duì)峰面積的平均值，分別與參照峰的平均保留時(shí)間和平均峰面積相乘，作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的峰保留時(shí)間和峰面積值，導(dǎo)出計(jì)算結(jié)果；膽木藥材的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)見表23。
實(shí)施例7。一種膽木中間體的質(zhì)量控制方法，該方法中含有以下含量測(cè)定方法， (1)色譜條件色譜柱Lichrospher C18，5μm，4.6mm×250mm；流動(dòng)相乙腈-水-磷酸30∶70∶0.1；流速1ml/min；測(cè)定波長(zhǎng)226nm作為測(cè)定波長(zhǎng)；柱溫30℃； (2)中間體供試品溶液的制備直接以蒸餾水稀釋中間體水溶液，精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，以蒸餾水定容，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得； (3)含量測(cè)定按上述色譜條件，取中間體供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)2點(diǎn)法計(jì)算異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的含量。
實(shí)施例8。一種膽木中間體的質(zhì)量控制方法，結(jié)合高效液相色譜法與指紋圖譜進(jìn)行檢測(cè)，步驟如下， (1)建立膽木中間體的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜， a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)同施例2之色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)； b、對(duì)照品溶液的制備同施例2之對(duì)照品溶液的制備； c、供試品溶液的制備精密量取膽木中間體1.0ml置25ml量瓶中，加蒸餾水至刻度，用0.45μm的水系微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得； d、測(cè)定法精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，得膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜； (2)以上述相同的方法測(cè)定待測(cè)膽木中間體樣品的指紋圖譜，然后將其與上述膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度不得低于0.85。
實(shí)施例9。實(shí)施例8所述的膽木中間體的質(zhì)量控制方法，在建立膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜時(shí)，取至少10批膽木中間體，分別按所述供試品溶液制備方法制備供試品，根據(jù)10批膽木中間體的檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立膽木中間體HPLC指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)，主要是峰保留時(shí)間和峰面積值的確立，分別把10批膽木中間體的檢測(cè)數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件》中，計(jì)算各對(duì)應(yīng)峰相對(duì)保留時(shí)間的平均值和相對(duì)峰面積的平均值，分別與參照峰的平均保留時(shí)間和平均峰面積相乘，作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的峰保留時(shí)間和峰面積值，導(dǎo)出計(jì)算結(jié)果；膽木中間體的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)見表27。
實(shí)施例10。膽木注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
名稱膽木注射液；漢語拼音Danmu Zhusheye 處方膽木提取物溶液適量(含生物堿以異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺計(jì)不少于0.2g)聚山梨酯-80 2ml，制成1000ml 制法取膽木提取物溶液適量，加聚山梨酯-802ml和活性炭2g，攪勻，加熱煮沸10分鐘，過濾脫炭，濾液加氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至7.5～8.0，加注射用水至規(guī)定量，攪勻，過濾，灌封，滅菌，即得。
性狀本品為棕黃色澄明液體。
鑒別取本品2ml，加水8ml與濃氨試液0.25ml，搖勻，用氯仿振搖提取3次，每次10ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。另取膽木對(duì)照藥材6g，加水煎煮30min，濾過，濾液濃縮至20ml，加濃氨試液0.5ml，搖勻，用氯仿振搖提取3次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國2000年版一部附錄VI B)實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(8∶1∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
檢查pH值應(yīng)為5.0～7.0(中國2000年版一部附錄VII G)。
其他應(yīng)符合注射劑及注射劑有關(guān)物質(zhì)檢查法項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(中國2000年版一部附錄I U及IX S) 含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國藥典2000版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水-磷酸(30∶70∶0.1)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為226nm。理論塔板數(shù)按異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺計(jì)算應(yīng)不低于5000。
對(duì)照品溶液的制備取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺適量，精密稱定，加甲醇使溶解，并配制成含對(duì)照品100μg/ml和20μg/ml的溶液。
供試品溶液的制備精密量取本品1.0ml，置10ml量瓶中，以蒸餾水定容即得。
測(cè)定法精密吸取兩種濃度的對(duì)照品溶液和制劑供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算含量。本品1ml含異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺(C26H30N2O8)不得少于0.2mg。
功能與主治清熱解毒。用于急性扁桃體炎，急性咽喉炎，急性結(jié)膜炎及上呼吸道感染。用法與用量肌注，一次2ml，一日2次。規(guī)格每支裝2ml。貯藏密閉，避光。
實(shí)施例11。膽木注射液的質(zhì)量控制方法。
1、鑒別。同原標(biāo)準(zhǔn)。2、檢查。同原標(biāo)準(zhǔn)。
3、含量測(cè)定。膽木注射液具有清熱解毒的作用，有效成分為生物堿及其苷類，異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺(isovinciside lactone，C26H30N2O8)是膽木注射液中所含的一種生物堿苷，含量較高，且具有抗癌活性，故選擇其作為含量測(cè)定的指標(biāo)成分。
3.1、儀器和試劑。Agilent高效液相色譜儀，含四元泵，柱溫箱，VWD檢測(cè)器；MettlerAE 240電子天平(十萬分之一)。乙腈為色譜純，水是高純水，其他試劑為分析純。
3.2、對(duì)照品來源及純度。異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺，自制，純度98.56％。
3.3、色譜條件。色譜柱Lichrospher C18(5μm，4.6mm×250mm)，江蘇淮陰漢邦科技公司。流動(dòng)相經(jīng)比較不同體系流動(dòng)相的色譜行為，結(jié)果表明，以乙腈-水-磷酸(30∶70∶0.1)分離效果為佳。流速1ml/min。測(cè)定波長(zhǎng)根據(jù)對(duì)照品的紫外掃描光譜圖選擇226nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。柱溫30℃。在上述條件下，異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺和樣品中其它組分色譜峰可達(dá)到基線分離，異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺與其它相鄰組分色譜峰的分離度大于1.5。按異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺峰計(jì)算，理論板數(shù)應(yīng)不低于5000。
3.4、供試品溶液的制備。因注射液本身為水溶液，故可直接以蒸餾水稀釋。精密量取本品1.0ml，置10ml量瓶中，以蒸餾水定容，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。
3.5、線性關(guān)系考察。精密稱取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺約10mg加甲醇制成每1ml含異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺0.9960mg的溶液，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ml置10ml量瓶?jī)?nèi)，分別加流動(dòng)相制成濃度為19.92、39.84、59.76、79.68、99.60μg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)液。吸取上述溶液各10μl進(jìn)樣，測(cè)定，以峰面積為橫坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺在19.92～99.6μg/ml(0.1992μg～0.996μg)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(見表1、圖1)。表1 線性關(guān)系考察 3.6、空白實(shí)驗(yàn)。原制劑配方中去掉膽木提取物，按制劑工藝進(jìn)行制備，得空白樣品，依含量測(cè)定法處理樣品并進(jìn)行分析，空白樣品色譜在與異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺相應(yīng)保留時(shí)間上沒有干擾峰(見圖2)。
3.7、精密度實(shí)驗(yàn)。取供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺峰面積值，結(jié)果表明儀器精密度良好(見表2)。
表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 3.8、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。同一份供試品溶液，分別在0、1、2、4、8、14、26hr測(cè)定異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺峰面積值，結(jié)果表明供試品在26hr內(nèi)穩(wěn)定性良好(見表3)。 表3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 3.9、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。取同一批膽木注射液(批號(hào)為20030910)，照3.4項(xiàng)“供試品制備方法”平行制備6份供試品溶液，分別測(cè)定其中異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的峰面積值，結(jié)果表明，擬訂測(cè)定方法重復(fù)性良好(見表4)。表4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 3.10、加樣回收實(shí)驗(yàn)。取已知異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺含量的同一批膽木注射液(批號(hào)為20030910)，按照3.4項(xiàng)“供試品制備方法”制備供試品溶液，精密加入一定量的異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺，以3.3項(xiàng)“色譜條件”進(jìn)行測(cè)定，用外標(biāo)2點(diǎn)法計(jì)算異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的含量和加樣回收率，結(jié)果表明本法具有良好的回收率(見表5)。
表5 樣品回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 注*
3.11、樣品測(cè)定和含量限度。按上述方法測(cè)定10批膽木注射液，用外標(biāo)2點(diǎn)法計(jì)算樣品含量(見表6)。
根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果，考慮到膽木的原料來源、貯藏、制劑生產(chǎn)過程等因素，應(yīng)積累多批樣品數(shù)據(jù)后最終制訂限度，暫定本品每ml含異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺(C26H30N2O8)不得低于0.2mg(即每支含量不低于0.4mg)。
表6 膽木注射液中異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺含量測(cè)定結(jié)果 實(shí)施例12。膽木藥材的含量測(cè)定。
1、藥材。膽木，本品為茜草科植物烏檀Nauclea officinalis Pierre.ex Pitard的干燥莖干及根。本品應(yīng)符合《中國藥典》1977年版一部第424頁膽木項(xiàng)下有關(guān)要求。
2、含量測(cè)定 2.1、藥材供試品的制備方法考察 2.1.1、提取溶劑的考察。擬用回流法考察膽木藥材的提取溶劑，實(shí)驗(yàn)方法平行精密稱取膽木藥材粗粉5份，每份1.0g，分別用水、30％、50％、70％、100％甲醇40ml回流提取0.5hr，濾過，用少量溶劑洗滌容器和藥渣3次，洗液濾入同一量瓶中，放冷，定容至50ml。按膽木注射液的質(zhì)量控制方法(標(biāo)準(zhǔn))中含量測(cè)定方法測(cè)定其含量(見表7)。
表7 不同溶劑提取的比較(回流法) 結(jié)果表明70％的甲醇提取效果較好。
2.1.2提、取方法的考察 平行精密稱取膽木藥材粗粉2份，每份1.0g，分別用70％甲醇40ml超聲和回流0.5hr，濾過，洗滌，洗液濾入同一量瓶中，放冷，定容至50ml，進(jìn)樣測(cè)定其含量(見表8)。
表8 不同提取方法的比較(70％甲醇) 結(jié)果表明回流法的提取效果比超聲法好。
2.1.3、提取時(shí)間的考察 精密稱取膽木藥材粗粉0.5g 3份，分別用70％甲醇40ml回流30、50、70min，過濾，洗滌，洗滌液濾入同一量瓶中，放冷，定容至50ml，進(jìn)樣測(cè)定其含量(見表9)。
表9 提取時(shí)間的比較 結(jié)果表明隨提取時(shí)間延長(zhǎng)，提取率稍有增加，但增加的趨勢(shì)平緩，因此確定提取時(shí)間為 0min。
2.2、藥材供試品溶液的制備取膽木藥材粗粉0.5g，精密稱定，加70％甲醇40ml回流提取70min，濾過，洗滌，洗液濾入同一量瓶中，放冷，定容至50ml；精密量取1ml置5ml量瓶中，加70％甲醇定容，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。
2.3、含量測(cè)定按“注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)”中3.3項(xiàng)色譜條件，取藥材供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)2點(diǎn)法計(jì)算異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的含量(見表10)。 表10 藥材含量測(cè)定結(jié)果 根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果，考慮到膽木的原料來源和貯藏等因素，應(yīng)積累多批樣品數(shù)據(jù)后最終制訂限度，故暫定本品中異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺(C26H30N2O8)的含量不低于0.8％。
實(shí)施例13。膽木中間體的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
1、鑒別。同注射液的“鑒別”。2、含量測(cè)定。
2.1、中間體供試品的制備 因中間體本身即水溶液，故可直接以蒸餾水稀釋。精密量取本品1.0ml，置100ml量瓶中，以蒸餾水定容，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。
2.2、含量測(cè)定。按“注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)”中3.3項(xiàng)色譜條件，取中間體供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)2點(diǎn)法計(jì)算異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的含量(見表11)。
表11 膽木中間體中異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的含量測(cè)定 注*批號(hào)同注射液 根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果，暫定中間體中異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺(C26H30N2O8)的含量不低于0.4mg/ml(內(nèi)控指標(biāo))。
實(shí)施例14。異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的有關(guān)研究。
由于含量測(cè)定用的對(duì)照品在藥典中未收載，因此我們對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了理化鑒定。
中文名異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺。英文名Isovincoside lactone；Strictosamide 結(jié)構(gòu)式

分子式及分子量C26H30N2O8；498.20 制備方法取膽木中間體用氨水調(diào)pH至9，氯仿萃取，棄去氯仿層，將水液調(diào)中性，水浴除去氯仿，經(jīng)聚酰胺柱層析，先以水洗脫，棄去水洗脫液，再以30％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮蒸干，硅膠拌樣，通過硅膠柱層析分離，以氯仿-甲醇梯度洗脫，TLC跟蹤檢測(cè)。將氯仿-甲醇90∶10洗脫部分以氯仿-甲醇重結(jié)晶，得到對(duì)照品針狀結(jié)晶。
理化特性本品為淡黃色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)196～198℃。本品在甲醇中易溶，能溶于氯仿，在水中微溶。碘化鉍鉀反應(yīng)陰性，遇三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑顯藍(lán)色。
結(jié)構(gòu)確證
UVλmaxMeOHnm202，226.5，282sh，290sh。
并參照?qǐng)D3。
1HNMR(DMSO-D6，TMS，AV-500)δppm顯示有30個(gè)氫的峰，歸屬見表12，圖11。
13CNMR(DMSO-D6，TMS，AV-500)δppm顯示有26個(gè)碳的峰，歸屬見表12，圖12。
表12 13CNMR、1HNMR數(shù)據(jù) Tof-MS m/z499.2080(M+H+)，分子式為C26H30N2O8。
并參照?qǐng)D4。
以上UV、1HNMR、13CNMR、MS數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)記載基本一致，證實(shí)了該化合物的結(jié)構(gòu)與Isovincoside lactone(Strictosamide)相同。
HPLC色譜柱Lichrospher C18(5μm，4.6mm×250mm)，江蘇淮陰漢邦科技公司。
流動(dòng)相0.1％磷酸-30％乙腈-70％水。流速1ml/min。
測(cè)定波長(zhǎng)226nm。柱溫30℃。理論板數(shù)按對(duì)照品峰計(jì)算，應(yīng)不低于5000。
并參照?qǐng)D5。
實(shí)施例15。膽木注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)。
參照高效液相色譜法(中華人民共和國2000年版一部附錄VID)，結(jié)合指紋圖譜的要求檢測(cè)。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)Agilent 1100系列HPLC色譜儀，含二元高壓泵、自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)、在線脫氣、柱溫箱、DAD檢測(cè)器等單元。
色譜柱Lichrospher C18，5μm，4.6×250mm；流動(dòng)相A為0.1％磷酸溶液，B為0.1％磷酸乙腈溶液，從1％B開始以線性梯度方式經(jīng)70min達(dá)到35％B，再經(jīng)5min達(dá)到95％B，流速1ml/min；柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)226nm；記錄時(shí)間72min。
理論板數(shù)按異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺峰(C26H30N2O8)計(jì)算，應(yīng)不低于5000。
對(duì)照品溶液的制備取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成每ml含1mg的對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備精密量取膽木注射液1.0ml置10ml量瓶中，加蒸餾水至刻度，用0.45μm的水系微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。
測(cè)定法精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，所得供試品指紋圖譜與膽木注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的指紋圖譜比較，相似度不得低于0.85。
實(shí)施例16。膽木藥材指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)。
參照高效液相色譜法(中華人民共和國2000年版一部附錄VI D)，結(jié)合指紋圖譜的要求檢測(cè)。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)同實(shí)施例15。對(duì)照品溶液的制備同實(shí)施例15。
供試品溶液的制備取膽木藥材粗粉5g，加50ml水回流提取1hr，抽濾，置50ml量瓶中，放冷，加蒸餾水至刻度，以孔徑為0.45μm的水系微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液即得。
測(cè)定法精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，所得供試品指紋圖譜與膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的指紋圖譜比較，相似度不得低于0.85。
實(shí)施例17。膽木中間體指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)。
參照高效液相色譜法(中華人民共和國2000年版一部附錄VI D)，結(jié)合指紋圖譜的要求檢測(cè)。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)同實(shí)施例15。對(duì)照品溶液的制備同實(shí)施例15。
供試品溶液的制備精密量取膽木中間體1.0ml置25ml量瓶中，加蒸餾水至刻度，用0.45μm的水系微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。
測(cè)定法精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，所得供試品指紋圖譜與膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的指紋圖譜比較，相似度不得低于0.85。
實(shí)施例18。膽木注射液的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的建立。
1、名稱、漢語拼音名稱膽木注射液；漢語拼音Danmu Zhusheye。
2、供試品來源由海南制藥廠提供。
3、供試品溶液的制備因制劑本身為水溶液，可以直接以蒸餾水稀釋。精密量取膽木注射液1.0ml置10ml量瓶中，加蒸餾水至刻度，用0.45μm的水系微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。
4、對(duì)照品溶液的制備取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成每ml含1mg的對(duì)照品溶液。
5、檢測(cè)方法及驗(yàn)證 5.1、儀器、試劑、色譜條件Agilent 1100系列HPLC色譜儀，含二元高壓泵、自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)、在線脫氣、柱溫箱、DAD檢測(cè)器等單元。
乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水。
色譜柱Linchrospher C18，5μm，4.6×250mm；流動(dòng)相A為0.1％磷酸溶液，B為0.1％磷酸乙腈溶液，從1％B開始以線性梯度方式經(jīng)70min達(dá)到35％B，再經(jīng)5min達(dá)到95％B；流速1ml/min；柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)226nm；記錄時(shí)間72min。
異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺自制，其結(jié)構(gòu)鑒定和純度檢查詳見實(shí)施例5。
5.2、方法驗(yàn)證 5.2.1、專屬性試驗(yàn)。按照“5.1、儀器、試劑、色譜條件”項(xiàng)下方法，進(jìn)樣蒸餾水、吐溫-80(輔料)水溶液、對(duì)照品溶液與中間體和注射液的供試品比較，結(jié)果見圖6～12，其中圖6～10為210、280、226、242、320nm 5個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)的圖譜比較。在5個(gè)波長(zhǎng)下蒸餾水和吐溫-80(輔料)水溶液在各時(shí)刻都沒有干擾，證明本方法專屬性較強(qiáng)。280、、320nm的圖譜峰面積小，242nm出峰較少，210nm和226nm較好。但226nm是對(duì)照品的最大吸收波長(zhǎng)，而且在此波長(zhǎng)下出峰較多，峰面積適中，且210nm的圖譜基線不太平，所以選擇226nm作為指紋圖譜的檢測(cè)波長(zhǎng)(見圖11)。
5.2.2、供試品穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。取批號(hào)為20030910的膽木注射液，按“3、供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0、1.5、3、6、9、12、18、24、36hr考察穩(wěn)定性(見圖13、表13)，結(jié)果表明供試品溶液在36小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
表13 制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 *與“表19膽木注射液HPLC指紋圖譜的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)”中峰號(hào)一致，25S為參照峰 5.2.3、儀器精密度試驗(yàn)。取“5.2.2、供試品穩(wěn)定性試驗(yàn)”項(xiàng)下的供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5針(見圖14、表14)，檢測(cè)結(jié)果表明儀器精密度符合要求。 表14 膽木注射液精密度試驗(yàn)結(jié)果 *與“表19膽木注射液HPLC指紋圖譜的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)”中峰號(hào)一致，S為參照峰5.2.4、方法重復(fù)性試驗(yàn)。取批號(hào)為20030910的膽木注射液，按“3、供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法平行制備5份供試品溶液，分別進(jìn)行檢測(cè)(見圖15、表15)，結(jié)果表明本試驗(yàn)方法的重復(fù)性符合要求。 表15 膽木注射液重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 注*與“表19膽木注射液HPLC指紋圖譜的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)”中峰號(hào)一致，S為參照峰 5.2.5、系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。不同的儀器，由于梯度曲線質(zhì)量和滯后時(shí)間的不同，可能影響方法的重現(xiàn)性及選擇性，通常可通過調(diào)整進(jìn)樣和梯度起始時(shí)間減少這種影響，必要時(shí)可調(diào)整梯度程序。所以我們測(cè)定了系統(tǒng)梯度滯后時(shí)間，檢測(cè)結(jié)果為1min，見圖16。
6、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù) 表16 10批膽木注射液HPLC指紋圖譜的檢測(cè)結(jié)果(相對(duì)峰面積比值)
注*與“表19膽木注射液HPLC指紋圖譜的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)”中峰號(hào)一致，25S為參照峰 表17 10批膽木注射液HPLC指紋圖譜的檢測(cè)結(jié)果(相對(duì)保留時(shí)間比值)
注*與“表19膽木注射液HPLC指紋圖譜的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)”中峰號(hào)一致，25S為參照峰 6.1、10批膽木注射液樣品的測(cè)定。10批膽木注射液，分別按“3、供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備供試溶液，按照“5.1、儀器、試劑、色譜條件”項(xiàng)下方法檢測(cè)，結(jié)果見圖17和表16、17。膽木注射液的標(biāo)準(zhǔn)圖譜為10批膽木注射液指紋圖譜的共有模式(模板，詳見“6.3、膽木注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)的建立”)。
6.2、計(jì)算方法 6.2.1、峰匹配，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Excel表中，手工進(jìn)行峰匹配。
6.2.2、模板確定。有兩種方法，第一種是選其中一組有代表性的譜峰數(shù)據(jù)作為模板，第二種是取所有對(duì)應(yīng)峰的峰面積平均值作為模板，一般建議采用第二種方法。本文采用第二種方法(詳見“6.3、膽木注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)的建立”)。
6.2.3、相似度計(jì)算。有兩種方法夾角余弦法、相關(guān)系數(shù)法，其中相關(guān)系數(shù)法靈敏度較高。本文同時(shí)采用這兩種方法，結(jié)果詳見表18。根據(jù)結(jié)果確定以相關(guān)系數(shù)法計(jì)算相對(duì)峰面積比值的相似度，十批注射液的相似度大于0.85。
6.3、膽木注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)的建立 根據(jù)10批膽木注射液的檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立膽木注射液HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，主要是峰保留時(shí)間和峰面積值的確立。分別把10批膽木注射液的檢測(cè)數(shù)據(jù)導(dǎo)入Excel中，計(jì)算各對(duì)應(yīng)峰相對(duì)保留時(shí)間的平均值和相對(duì)峰面積的平均值，分別與參照峰的平均保留時(shí)間和平均峰面積相乘，作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的峰保留時(shí)間和峰面積值，導(dǎo)出計(jì)算結(jié)果。膽木注射液的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)見圖18和表19。表19 膽木注射液HPLC的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù) 注25S為參照峰 7、結(jié)果與討論 7.1、10批膽木注射液的相似度均超過0.85，說明膽木注射液的生產(chǎn)工藝較穩(wěn)定。
7.2、在指紋圖譜相似度計(jì)算中使用的是相對(duì)峰面積比值，相似性代表的是圖譜中對(duì)應(yīng)峰比例的一致性，基本不受整體濃度的影響，因此評(píng)價(jià)藥材、中間體和制劑的質(zhì)量是否合格，還應(yīng)該參考質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的含量測(cè)定項(xiàng)。
7.3、在指紋圖譜的檢測(cè)中，為避免實(shí)驗(yàn)室條件不同對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生的影響，可采用對(duì)照提取物作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，本品對(duì)照提取物可用以上十批注射液等量勾兌而成。
實(shí)施例19。藥材的指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)的建立。
1、名稱、漢語拼音，名稱膽木漢語拼音Danmu。
2、來源。本品為茜草科植物烏檀Nauclea officinalis Pierre.ex Pitard的干燥莖干和根，全年均可采收，砍成塊片，曬干。由海南制藥廠提供，產(chǎn)地白沙黎族自治縣白沙鎮(zhèn)，五指山市番陽鎮(zhèn)、南圣鎮(zhèn)，保亭黎族苗族自治縣毛感鎮(zhèn)、什嶺鎮(zhèn)、響水鎮(zhèn)，瓊中黎族苗族自治縣紅毛鎮(zhèn)、烏石鎮(zhèn)、長(zhǎng)征鎮(zhèn)、和平鎮(zhèn)。
3、供試品溶液的制備，因膽木制劑的提取方法為水提，且制劑為注射液水針，所以選擇水提的方法制備藥材供試品更能體現(xiàn)制劑的質(zhì)量。取膽木藥材粗粉5g，加50ml水回流提取1hr，抽濾，置50ml量瓶中，放冷，加蒸餾水至刻度，以孔徑為0.45μm的水系微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液即得。
4、對(duì)照品溶液的制備。取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成每ml含1mg的對(duì)照品溶液。
5、檢測(cè)方法及驗(yàn)證。因膽木注射液為單味藥材提取制成的制劑，所以藥材、中間體和制劑選用的檢測(cè)方法均與注射液的指紋圖譜相同。方法驗(yàn)證等詳見注射液的指紋圖譜。
6、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù) 6.1、10批膽木藥材樣品的測(cè)定。取不同產(chǎn)地的膽木藥材10批，按注射液指紋圖譜中供試品溶液制備分別制備供試品，按注射液指紋圖譜中“5.1、儀器、試劑、色譜條件”進(jìn)行HPLC檢測(cè)，結(jié)果見圖19和表20、21。
6.2、計(jì)算方法。同“注射液指紋圖譜”。結(jié)果見表22。表22 10批膽木藥材指紋圖譜相似度計(jì)算結(jié)果 表20 10批膽木藥材的指紋圖譜數(shù)據(jù)(相對(duì)峰面積比值)
注*與“表23膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù)”中峰號(hào)一致，22S為參照峰 表21 10批膽木藥材的指紋圖譜數(shù)據(jù)(相對(duì)保留時(shí)間比值)
注*與“表23膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù)”中峰號(hào)一致，22S為參照峰 根據(jù)結(jié)果確定以相關(guān)系數(shù)法計(jì)算相對(duì)峰面積比值的相似度，十批藥材的相似度大于0.85。
6.3、膽木藥材指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)的建立 根據(jù)10批膽木藥材的檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立膽木藥材HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，主要是峰保留時(shí)間和峰面積值的確立。分別把10批膽木藥材的檢測(cè)數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件》中，計(jì)算各對(duì)應(yīng)峰相對(duì)保留時(shí)間的平均值和相對(duì)峰面積的平均值，分別與參照峰的平均保留時(shí)間和平均峰面積相乘，作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的峰保留時(shí)間和峰面積值，導(dǎo)出計(jì)算結(jié)果。膽木藥材的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)見圖20和表23。本品的對(duì)照提取物可用以上十批藥材等量均勻混合提取，以減少或避免實(shí)驗(yàn)室條件不同對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生的影響。 表23 膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù) 注22S為參照峰 實(shí)施例20。中間體的指紋圖譜的建立。
1、名稱、漢語拼音名稱膽木注射液中間體；漢語拼音Danmu Zhusheye Zhongjianti 2、來源。由海南制藥廠提供。
3、供試品溶液的制備。因中間體本身即水溶液，可以用蒸餾水稀釋后直接進(jìn)樣。精密量取膽木中間體1.0ml置25ml量瓶中，加蒸餾水至刻度，用0.45μm的水系微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。
4、對(duì)照品溶液的制備。取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成每ml含1mg的對(duì)照品溶液。
5、檢測(cè)方法及驗(yàn)證。因膽木注射液為單味藥材提取制成的制劑，所以選用的檢測(cè)方法均與“注射液的指紋圖譜”項(xiàng)相同。方法驗(yàn)證等詳見“注射液的指紋圖譜”。
6、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù) 6.1、10批膽木中間體樣品的測(cè)定。取10批膽木中間體，按“注射液指紋圖譜”中“3、供試品溶液制備”項(xiàng)分別制備供試品，按“注射液指紋圖譜”中按“5、儀器、時(shí)間、色譜條件”進(jìn)行HPLC檢測(cè)，結(jié)果見圖21和表24。6.2、計(jì)算方法。同“注射液指紋圖譜”。結(jié)果見表26。根據(jù)結(jié)果確定以相關(guān)系數(shù)法計(jì)算相對(duì)峰面積比值的相似度，十批中間體的相似度大于0.85。
6.3、膽木中間體指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)的建立。根據(jù)10批膽木中間體的檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立膽木中間體HPLC指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)，主要是峰保留時(shí)間和峰面積值的確立。分別把10批膽木中間體的檢測(cè)數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件》中，計(jì)算各對(duì)應(yīng)峰相對(duì)保留時(shí)間的平均值和相對(duì)峰面積的平均值，分別與參照峰的平均保留時(shí)間和平均峰面積相乘，作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的峰保留時(shí)間和峰面積值，導(dǎo)出計(jì)算結(jié)果。膽木中間體的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)見圖22和表25。本品的對(duì)照提取物可用以上十批中間體等量勾兌，以減少或避免實(shí)驗(yàn)室條件不同對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生的影響。表27 膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù) 表24 10批膽木中間體指紋圖譜數(shù)據(jù)(相對(duì)峰面積比值)
注*與“表27膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù)”中峰號(hào)一致，26S為參照峰 表25 10批膽木中間體指紋圖譜數(shù)據(jù)(相對(duì)保留時(shí)間比值)
注*與“表27膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù)”中峰號(hào)一致，26S為參照峰表26 10批膽木中間體指紋圖譜相似度表18 10批膽木注射液的相似度計(jì)算結(jié)果 注26S為參照峰 實(shí)施例21。藥材、中間體和制劑指紋圖譜之間的相關(guān)性。
膽木藥材按注射液制備工藝制備樣品和供試液，按注射液HPLC指紋圖譜方法操作，與中間體和注射液的指紋圖譜進(jìn)行比較，計(jì)算相似度，見圖23和表28，結(jié)果表明注射液和中間體的指紋圖譜中特征峰和主要色譜峰可以在藥材的指紋圖譜中追溯，且三者的指紋圖譜具有相似性；但藥材和制劑、中間體的圖譜還存在著一些差別，經(jīng)過我們的初步考察，發(fā)現(xiàn)在膽木注射液的制備工藝中，“加熟石膏攪拌、干燥”一步對(duì)此影響較大，因此生產(chǎn)中應(yīng)該注意這一步的操作。表28 膽木藥材、中間體和制劑相似度
權(quán)利要求
1、一種膽木注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方法中含有以下含量測(cè)定方法，
a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；30∶70∶0.1的乙腈-水-磷酸為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為226nm；理論塔板數(shù)按異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺計(jì)算應(yīng)不低于5000；
b、對(duì)照品溶液的制備取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺適量，精密稱定，加甲醇使溶解，并配制成含對(duì)照品100μg/ml和20μg/ml的溶液；
c、供試品溶液的制備精密量取注射液1.0ml，置10ml量瓶中，以蒸餾水定容即得；
d、測(cè)定法精密吸取兩種濃度的對(duì)照品溶液和注射液供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算含量。
2、一種膽木注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于
(1)建立膽木注射液的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，
a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)Agilent 1100系列HPLC色譜儀，含二元高壓泵、自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)、在線脫氣、柱溫箱、DAD檢測(cè)器等單元；色譜柱Lichrospher C18，5μm，4.6×250mm；流動(dòng)相A為0.1％磷酸溶液，B為0.1％磷酸乙腈溶液，從1％B開始以線性梯度方式經(jīng)70min達(dá)到35％B，再經(jīng)5min達(dá)到95％B，流速1ml/min；柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)226nm；記錄時(shí)間72min；
理論板數(shù)按異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺峰C26H30N2O8計(jì)算，應(yīng)不低于5000；
b、對(duì)照品溶液的制備取異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成每ml含1mg的對(duì)照品溶液；
c、供試品溶液的制備精密量取膽木注射液1.0ml置10ml量瓶中，加蒸餾水至刻度，用0.45μm的水系微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得；
d、測(cè)定法精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，得膽木注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
(2)以上述相同的方法測(cè)定待測(cè)膽木注射液樣品的指紋圖譜，然后將其與上述膽木注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度不得低于0.85。
3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種膽木注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于，在建立膽木注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜時(shí)，至少取10批膽木注射液，分別按所供試品溶液的制備方法制得供試溶液，所述的乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水，根據(jù)檢測(cè)所得的至少10批膽木注射液的檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立膽木注射液HPLC標(biāo)準(zhǔn)圖譜，主要確立峰保留時(shí)間和峰面積值，然后將檢測(cè)數(shù)據(jù)導(dǎo)入計(jì)算軟件中，計(jì)算各對(duì)應(yīng)峰相對(duì)保留時(shí)間的平均值和相對(duì)峰面積的平均值，分別與參照峰的平均保留時(shí)間和平均峰面積相乘，作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的峰保留時(shí)間和峰面積值，導(dǎo)出計(jì)算結(jié)果；膽木注射液HPLC的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù)如下，
膽木注射液HPLC的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù)
注25S為參照峰。
4、一種膽木藥材的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方法中含有以下含量測(cè)定方法，
(1)色譜條件
色譜柱Lichrospher C18，5μm，4.6mm×250mm；
流動(dòng)相乙腈-水-磷酸(30∶70∶0.1)；速1ml/min；
測(cè)定波長(zhǎng)226nm作為測(cè)定波長(zhǎng)；柱溫30℃；
(2)藥材供試品溶液的制備取膽木藥材粗粉0.5g，精密稱定，加70％甲醇40ml回流提取70min，濾過，洗滌，洗液濾入同一量瓶中，放冷，定容至50ml；精密量取1ml置5ml量瓶中，加70％甲醇定容，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得；
(3)含量測(cè)定按上述色譜條件，取藥材供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)2點(diǎn)法計(jì)算異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的含量。
5、一種膽木藥材的質(zhì)量控制方法，其特征在于
(1)建立膽木藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，
a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)同權(quán)利要求2之色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)；
b、對(duì)照品溶液的制備同權(quán)利要求2之對(duì)照品溶液的制備；
c、供試品溶液的制備取膽木藥材粗粉5g，加50ml水回流提取1hr，抽濾，置50ml量瓶中，放冷，加蒸餾水至刻度，以孔徑為0.45μm的水系微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液即得；
d、測(cè)定法精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，得膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
(2)以上述相同的方法測(cè)定待測(cè)膽木藥材樣品的指紋圖譜，然后將其與上述膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度不得低于0.85。
6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種膽木藥材的質(zhì)量控制方法，其特征在于，在建立膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜時(shí)，取至少10批不同產(chǎn)地的膽木藥材，分別按所述供試品溶液制備方法制備供試品，根據(jù)至少10批膽木藥材的檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立膽木藥材HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，主要是峰保留時(shí)間和峰面積值的確立，分別把膽木藥材的檢測(cè)數(shù)據(jù)導(dǎo)入計(jì)算軟件中，計(jì)算各對(duì)應(yīng)峰相對(duì)保留時(shí)間的平均值和相對(duì)峰面積的平均值，分別與參照峰的平均保留時(shí)間和平均峰面積相乘，作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的峰保留時(shí)間和峰面積值，導(dǎo)出計(jì)算結(jié)果；膽木藥材的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)如下，
膽木藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù)
注22S為參照峰。
7、一種膽木中間體的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方法中含有以下含量測(cè)定方法，
(1)色譜條件
色譜柱Lichrospher C18，5μm，4.6mm×250mm；
流動(dòng)相乙腈-水-磷酸30∶70∶0.1；流速1ml/min；
測(cè)定波長(zhǎng)226nm作為測(cè)定波長(zhǎng)；柱溫30℃；
(2)中間體供試品溶液的制備直接以蒸餾水稀釋中間體水溶液，精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，以蒸餾水定容，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得；
(3)含量測(cè)定按上述色譜條件，取中間體供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)2點(diǎn)法計(jì)算異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺的含量。
8、一種膽木中間體的質(zhì)量控制方法，其特征在于，結(jié)合高效液相色譜法與指紋圖譜進(jìn)行檢測(cè)，步驟如下，
(1)建立膽木中間體的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，
a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)同權(quán)利要求2之色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)；
b、對(duì)照品溶液的制備同權(quán)利要求2之對(duì)照品溶液的制備；
c、供試品溶液的制備精密量取膽木中間體1.0ml置25ml量瓶中，加蒸餾水至刻度，用0.45μm的水系微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得；
d、測(cè)定法精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，得膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
(2)以上述相同的方法測(cè)定待測(cè)膽木中間體樣品的指紋圖譜，然后將其與上述膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜或其對(duì)照提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度不得低于0.85。
9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種膽木中間體的質(zhì)量控制方法，其特征在于，在建立膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜時(shí)，取至少10批膽木中間體，分別按所述供試品溶液制備方法制備供試品，根據(jù)10批膽木中間體的檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立膽木中間體HPLC指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)，主要是峰保留時(shí)間和峰面積值的確立，分別把10批膽木中間體的檢測(cè)數(shù)據(jù)導(dǎo)入計(jì)算軟件中，計(jì)算各對(duì)應(yīng)峰相對(duì)保留時(shí)間的平均值和相對(duì)峰面積的平均值，分別與參照峰的平均保留時(shí)間和平均峰面積相乘，作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的峰保留時(shí)間和峰面積值，導(dǎo)出計(jì)算結(jié)果；膽木中間體的標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)如下，
膽木中間體標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜數(shù)據(jù)
注26S為參照峰。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種膽木注射液的質(zhì)量控制方法，以及膽木藥材及中間體的質(zhì)量控制方法。通過本發(fā)明獲得的是中藥不同個(gè)體的化學(xué)成分信息，用圖形或圖案方式表達(dá)，進(jìn)行比對(duì)和分析，可實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥未知物質(zhì)群整體的質(zhì)量控制，是實(shí)現(xiàn)多種成分整體相關(guān)質(zhì)量評(píng)價(jià)的關(guān)鍵技術(shù)。本發(fā)明可以準(zhǔn)確反應(yīng)該品種組分群體的特征圖譜，能全面反映中藥所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，進(jìn)而反映中藥材及其產(chǎn)品的質(zhì)量。
文檔編號(hào)G01N33/15GK1958002SQ20051009524
公開日2007年5月9日 申請(qǐng)日期2005年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月31日
發(fā)明者竇智, 丁崗, 雷彩霞, 李明慧, 劉文林, 沈鳴 申請(qǐng)人:海南制藥廠有限公司, 江蘇中康藥物科技有限公司