一種細柱五加藥材的質(zhì)量控制方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種細柱五加藥材的質(zhì)量控制方法，有效解決五加皮規(guī)范化質(zhì)量控制的需要，其步驟包括：a.紫丁香苷的測定，b.總黃酮的測定，c.總?cè)频臏y定，d.確定藥材中總黃酮含量與紫丁香苷含量的比及總?cè)坪颗c紫丁香苷含量的比。采用組分結(jié)構(gòu)來控制細柱五加藥材的質(zhì)量，體現(xiàn)中醫(yī)藥中配伍配比特色，避免了因測定一、二個化學(xué)成分而判斷藥材整體質(zhì)量的片面性，為完整、準確評價細柱五加藥材的質(zhì)量提供了新的控制方法。這種方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、易于掌握。
【專利說明】一種細柱五加藥材的質(zhì)量控制方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥材的質(zhì)量控制方法，特別是涉及細柱五加藥材的質(zhì)量控制方 法，屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 五加始載于本草學(xué)著作《神農(nóng)本草經(jīng)》，稱之為"五加皮"，列為上品。"氣味辛，溫。 主心腹疝氣腹痛，益氣療甓，小兒不能行，疽瘡陰蝕。"此后在《名醫(yī)別錄》、《東華真人煮石 經(jīng)》等歷代醫(yī)藥著作中均有五加的記載和描述。但是由于古代文獻對五加原植物的描述不 甚詳細，而且五加屬植物形態(tài)較為相似，經(jīng)前人考證，五加皮來源于五加科（Araliaceae) 五加屬（Acanthopanax Miq.)植物。
[0003] 經(jīng)中國藥典確定細柱五加 （Acanthopanax gracilistylus W. W. Smith)的干燥根 皮是中國藥典中"五加皮"的唯一正品來源。五加皮為一味名貴滋補強壯藥，具祛風(fēng)濕，補 肝腎，強筋骨的特異功效。近三十年，國內(nèi)外對細柱五加植物進行了較多的化學(xué)成分和藥理 的研究。在化學(xué)成分方面，細柱五加含有五加屬植物共有的木脂素類成分紫丁香甙，還含有 揮發(fā)油，豆留醇、β-谷留醇、異貝殼杉烯酸、羽扇豆烷型三萜等萜類以及多種微量元素、氨 基酸。此外還從根中分離出生物堿、多糖、強心苷。目前雖有文獻針對細柱五加果實、葉等 部位中某一成分的測定方法，但未有對其真正藥用部位（根皮）質(zhì)量控制方法，各版藥典也 未有對"五加皮"中成分測定方法，這嚴重制約了"五加皮"的規(guī)范化研究，因此，制定細柱 五加質(zhì)量控制方法勢在必行。
[0004] 中藥質(zhì)量評價的現(xiàn)行標準是利用光譜或色譜手段鑒別和測定某一種或幾種有效 成分、活性或指標成分，以及藥典規(guī)定的常規(guī)檢查項目。如中國藥典2010年版[一部]共 收載2165種藥材及成藥品種，均為一般檢查項目，大部分為薄層色譜鑒別，其余為含量測 定（容量法、光譜法、液相色譜法、氣相色譜法及薄層色譜掃描法）。顯然，這些質(zhì)量標準的 設(shè)置是模仿了化學(xué)藥品的模式，其他國家如英國、印度、美國草藥典，日本藥局方中的漢藥 及德國Commission Ε編輯的德國草藥專論等也采用了基本相同的內(nèi)容。對于化學(xué)藥品而 言，其藥效成分為結(jié)構(gòu)清晰的單一化合物，結(jié)構(gòu)關(guān)系明確，其含量和純度直接表達其有效及 安全性。然而，中醫(yī)用藥的特點是配伍，同樣越來越多的研究顯示，道地藥材中的化學(xué)成分 并不含有某一特有成分，亦不是某一成分含量越高越好，而是在組分與組分之間、組分內(nèi)各 成分之間具有穩(wěn)定有序的整體特征，即配伍配比，這一研究并未體現(xiàn)在細柱五加藥材質(zhì)量 控制中。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對以上情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種細柱五加質(zhì) 量控制方法，可有效解決五加皮規(guī)范化質(zhì)量控制的需要，以保證五加皮臨床用藥的安全有 效和在醫(yī)藥領(lǐng)域其他方面的合理應(yīng)用問題。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下，該種細柱五加質(zhì)量控制方法的主要特點是：
[0007] a)細柱五加藥材中紫丁香苷的測定：
[0008] ①對照品溶液制備：精密稱取紫丁香苷對照品適量，加甲醇使溶解，0. 45 μ m微孔 濾膜濾過；
[0009] ②供試品溶液制備：精密稱取樣品粉末，加入甲醇溶液，超聲處理，0. 45 μ m微孔 濾膜濾過；
[0010] ③測定：吸取上述供試品及對照品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進 行測定，得到色譜圖，按峰面積換算成藥材中紫丁香苷含量，色譜條件：色譜柱以十八烷基 硅烷鍵合硅膠為填料；流動相為乙腈水溶液，檢測波長265nm。
[0011] b)細柱五加藥材中總黃酮的測定：
[0012] ①對照品溶液制備：精密稱取蘆丁對照品適量，加一定體積分數(shù)的甲醇溶液使溶 解；
[0013] ②供試品溶液制備：精密稱取樣品粉末，加入甲醇溶液，超聲處理，過濾后取一定 量續(xù)濾液揮干后用一定體積分數(shù)的甲醇溶解后，加一定質(zhì)量分數(shù)的A1C1 3溶液，用一定體積 分數(shù)的甲醇定容；
[0014] ③測定：上述供試品及對照品溶液于273nm處測定吸收度，按吸收度換算成藥材 中總黃酮含量。
[0015] c)細柱五加藥材中總?cè)频臏y定：
[0016] ①對照品溶液制備：精密稱取齊墩果酸對照品適量，加無水乙醇使溶解；
[0017] ②供試品溶液制備：精密稱取樣品粉末，加入90 %乙醇溶液，超聲處理，過濾后取 一定量續(xù)濾液待用；
[0018] ③測定：取一定量上述對照品溶液及一定量供試品溶液，水浴揮干溶劑后，準確 加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0. 2mL、高氯酸0. 8mL，振搖；在60°C的水浴中加熱 15min，取出，流水冷卻至室溫；再準確加入4mL冰醋酸，振搖，于547nm處測定吸收度，按吸 收度換算成藥材中總?cè)坪俊?br> [0019] d)藥材中總黃酮含量與紫丁香苷含量的比為10?100 : 1，總?cè)坪颗c紫丁香 苷含量的比為200?900 : 1。
[0020] 所述的細柱五加質(zhì)量控制方法的延伸技術(shù)方案包括：步驟a中的流動相的流速 0.500?1.500ml/min，流動相為乙腈-水（20 : 80)，柱溫20?40°C。
[0021] 所述的細柱五加質(zhì)量控制方法的延伸技術(shù)方案包括：步驟a中供試品溶液制備 為精密稱取樣品粉末約1. 〇g，精密加入甲醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h后，超聲處理 (250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，0. 45 μ m微孔濾膜濾過。
[0022] 所述的細柱五加質(zhì)量控制方法的延伸技術(shù)方案包括：步驟b中一定體積分數(shù)的甲 醇為體積分數(shù)30%的甲醇，一定質(zhì)量分數(shù)的A1C1 3溶液為質(zhì)量分數(shù)0. 8%的A1C13溶液。
[0023] 所述的細柱五加質(zhì)量控制方法的延伸技術(shù)方案包括：步驟b中供試品溶液制備 為精密稱取樣品粉末約1. 〇g，精密加入甲醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h后，超聲處理 (250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾后取續(xù)濾液0. 5mL揮干后用體積分數(shù) 30 %的甲醇lmL溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加質(zhì)量分數(shù)0. 8 %的A1C13溶液0. 5mL，用體積 分數(shù)30%的甲醇定容。
[0024] 所述的細柱五加質(zhì)量控制方法的延伸技術(shù)方案包括：步驟c中供試品溶液制備為 精密稱取樣品粉末約0. lg，精密加入90%乙醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h后，超聲處理 (250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾后取續(xù)濾液0. 5mL備用。
[0025] 所述的細柱五加質(zhì)量控制方法的延伸技術(shù)方案包括：步驟d中總黃酮含量與紫丁 香苷含量的比為15?40 : 1，總?cè)坪颗c紫丁香苷含量的比為200?900 : 1。
[0026] 本發(fā)明把細柱五加藥材中的紫丁香苷含量、總黃酮含量、總?cè)坪孔鳛橐粋€整 體看待，注重三個指標的相互關(guān)系，避免了因測定一、二個化學(xué)成分而判斷藥材整體質(zhì)量的 片面性，為完整、準確評價細柱五加藥材的質(zhì)量提供了新的控制方法。
[0027] 本發(fā)明具有方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、易于掌握的特點。
[0028] 以下便結(jié)合實施例并附圖，對本發(fā)明的【具體實施方式】作進一步的詳述。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0029] 圖1紫丁香苷標準品265nm色譜圖
[0030] 圖2細柱五加樣品265nm色譜圖

【具體實施方式】
[0031] 下面結(jié)合細柱五加質(zhì)量控制方法的實例說明本發(fā)明的【具體實施方式】。
[0032] 實施例1紫丁香苷測定方法的建立
[0033] 1材料及儀器
[0034] Agilent 1100 Series 高效液相色譜儀（G1311A Quaternary Pump，G1379A Degasser,G1313A Autosampler,G1314A photodiode array Detector) ；HP ChemSation工 作站（美國 Agilent 公司）；Kromasil C18(5ym，4.6X250nm)色譜柱；KQ-250DE 型醫(yī)用數(shù) 控超聲波清洗器（昆山超聲波儀器有限公司）jartorius電子分析天平（北京賽多利斯儀 器系統(tǒng)有限公司）；乙腈（色譜純，南京化學(xué)試劑有限公司）；甲醇（色譜純，山東禹王實業(yè) 有限公司禹城化工廠）；其余試劑均為化學(xué)純。紫丁香苷（111574-200201)購自中國藥品 生物制品檢定所。
[0035] 2測定方法的確立及樣品的測定
[0036] 2. 1對照品溶液制備
[0037] 精密稱取紫丁香苷對照品1.60mg，置10mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度， 制成0. 16mg/mL紫丁香苷對照品溶液。
[0038] 2. 2供試品溶液制備
[0039] 精密稱取樣品粉末約1. 0g，精密加入甲醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h后，超聲處 理（250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾后取續(xù)濾液備用。
[0040] 2. 3色譜條件
[0041] 色譜柱：0DS_C18 (4. 6mm X250mm，5 μ m);流動相：乙腈-水（20 : 80);體積流量： lmL/min ;柱溫：室溫；檢測波長：265nm ;靈敏度：0. 5AUFS ;按紫丁香苷峰計算，理論塔板數(shù) 在1500以上。
[0042] 2. 4方法學(xué)考察
[0043] 2. 4. 1線性關(guān)系考察
[0044] 取紫丁香苷對照品溶液（0· 16mg/mL)。分別進樣1，5,10,15, 20 μ L。按上述色譜 條件測定峰面積。以紫丁香苷進樣量X為橫坐標，峰面積Y為縱坐標繪制標準曲線，計算得 回歸方程為Υ= 1204. 6Χ-0. 06, R = 0. 9994。結(jié)果表明紫丁香苷在0. 16yg?3. 2yg與 峰面積具有良好的線性關(guān)系。
[0045] 2. 4. 2精密度試驗
[0046] 精密吸取紫丁香苷對照品溶液（0. 16mg/mL) 10 μ L，重復(fù)進樣5次，測定紫丁香苷 峰面積，得其RSD為1.07%。
[0047] 2. 4. 3重復(fù)性試驗
[0048] 取同一樣品，平行5次取樣，制備供試品溶液，進樣測定，結(jié)果紫丁香苷峰面積的 RSD 為 1. 91%。
[0049] 2.4.4回收率試驗
[0050] 采取加樣回收法。取已知質(zhì)量分數(shù)（含紫丁香苷為0. 096mg/g)樣品約1. 0g，精密 加入紫丁香苷對照品溶液（〇. 16mg/mL)0. 6mL，制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計算 回收率，結(jié)果平均回收率為98. 75%，RSD為1.98% (η = 5)。
[0051] 2.5樣品測定
[0052] 在上述色譜條件下，分別進樣測定不同樣品中紫丁香苷的含量。
[0053] 實施例2總黃酮測定方法的建立
[0054] 1 材料
[0055] KQ-250DE型醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲波儀器有限公司）Jartorius電 子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；UV-2501PC紫外分光光度計（SHIMADZU); 甲醇（色譜純，山東禹王實業(yè)有限公司禹城化工廠）；其余試劑均為化學(xué)純。蘆丁 (100080-200707)購自中國藥品生物制品檢定所。
[0056] 2對照品溶液制備
[0057] 稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24h的蘆丁對照品約1. Omg，精密稱定，置于20mL量瓶 中，加入體積分數(shù)30%的甲醇溶解并稀釋至刻度，作為測定總黃酮的對照儲備液。
[0058] 3供試品溶液制備
[0059] 精密稱取樣品粉末約1. 0g，精密加入甲醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h后，超聲處 理（250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾后取續(xù)濾液0. 5mL揮干后用體積分數(shù) 30 %的甲醇lmL溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加質(zhì)量分數(shù)0. 8 %的A1C13溶液0. 5mL，用體積 分數(shù)30%的甲醇定容，即為測定總黃酮用供試反應(yīng)液。
[0060] 4線性關(guān)系考察
[0061] 精密量取蘆丁對照儲備液0,0. 5,1. 0, 2. 0, 3. 0,4. OmL，分別置于5mL量瓶中，加質(zhì) 量分數(shù)0. 8 %的A1C13溶液0. 5mL，用體積分數(shù)30 %的甲醇定容，搖勻，即為各質(zhì)量濃度蘆丁 對照反應(yīng)液。各濃度反應(yīng)液于273nm處測定吸收度，以蘆丁濃度X為橫坐標，273nm處吸收 度Y為縱坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程為Y = 38. 44X-0. 0002, R = 0. 9998。結(jié)果表 明總黃酮含量在〇mg?0. 2mg與吸收度具有良好的線性關(guān)系。
[0062] 5樣品測定
[0063] 各樣品的供試反應(yīng)液于273nm處測定吸收度，按吸收度換算成藥材中總黃酮含 量。
[0064] 實施例3總?cè)茰y定方法的建立
[0065] 1 材料
[0066] KQ-250DE型醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲波儀器有限公司）；Sartorius電 子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；UV-2501PC紫外分光光度計（SHIMADZU); 甲醇（色譜純，山東禹王實業(yè)有限公司禹城化工廠）；其余試劑均為化學(xué)純。齊墩果酸 (110709-200304)購自中國藥品生物制品檢定所。
[0067] 2對照品溶液制備
[0068] 稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24h的齊墩果酸對照品約1. 6mg，精密稱定，置于20mL 量瓶中，加入無水乙醇溶解并稀釋至刻度，作為測定總?cè)频膶φ諆湟骸?br> [0069] 3供試品溶液制備
[0070] 精密稱取樣品粉末約0. lg，精密加入90%乙醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h后，超 聲處理（250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾后取續(xù)濾液0. 5mL，水浴揮干溶 劑后，準確加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0. 2mL、高氯酸0. 8mL，振搖；在60°C的水 浴中加熱15min，取出，流水冷卻至室溫；再準確加入4mL冰醋酸，振搖，即為測定總?cè)朴?供試反應(yīng)液。
[0071] 4線性關(guān)系考察
[0072] 精密量取齊墩果酸對照儲備液0,0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. OmL，水浴揮干后，準確加入 新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0. 2mL、高氯酸0. 8mL，振搖；在60°C的水浴中加熱15min， 取出，流水冷卻至室溫；再準確加入4mL冰醋酸，振搖，即為各質(zhì)量濃度齊墩果酸對照反應(yīng) 液。各濃度反應(yīng)液于547nm處測定吸收度，以齊墩果酸濃度X為橫坐標，547nm處吸收度Y 為縱坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程為Y = 37. 33X+0. 0785, R = 0. 9991。結(jié)果表明總 三萜含量在〇mg?0. 08mg與吸收度具有良好的線性關(guān)系。
[0073] 5樣品測定
[0074] 各樣品的供試反應(yīng)液于547nm處測定吸收度，按吸收度換算成藥材中總?cè)坪?量。
[0075] 實施例4細柱五加含量測定
[0076] 取不同產(chǎn)地產(chǎn)地細柱五加藥材按實施例1、實施例2、實施例3的方法分別測定紫 丁香苷、總黃酮、總?cè)坪?，結(jié)果如下表所示：
[0077]

【權(quán)利要求】
1. 一種細柱五加藥材的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括如下步驟： a) 細柱五加藥材中紫丁香苷的測定： ① 對照品溶液制備：精密稱取紫丁香苷對照品適量，加甲醇使溶解，〇. 45 μ m微孔濾膜 濾過； ② 供試品溶液制備：精密稱取樣品粉末，加入甲醇溶液，超聲處理，〇. 45 μ m微孔濾膜 濾過； ③ 測定：吸取上述供試品及對照品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測 定，得到色譜圖，按峰面積換算成藥材中紫丁香苷含量，色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷 鍵合硅膠為填料；流動相為乙腈水溶液，檢測波長265nm。 b) 細柱五加藥材中總黃酮的測定： ① 對照品溶液制備：精密稱取蘆丁對照品適量，加一定體積分數(shù)的甲醇溶液使溶解； ② 供試品溶液制備：精密稱取樣品粉末，加入甲醇溶液，超聲處理，過濾后取一定量續(xù) 濾液揮干后用一定體積分數(shù)的甲醇溶解后，加一定質(zhì)量分數(shù)的A1C1 3溶液，用一定體積分數(shù) 的甲醇定容； ③ 測定：上述供試品及對照品溶液于273nm處測定吸收度，按吸收度換算成藥材中總 黃酮含量。 c) 細柱五加藥材中總?cè)频臏y定： ① 對照品溶液制備：精密稱取齊墩果酸對照品適量，加無水乙醇使溶解； ② 供試品溶液制備：精密稱取樣品粉末，加入90%乙醇溶液，超聲處理，過濾后取一定 量續(xù)濾液待用； ③ 測定：取一定量上述對照品溶液及一定量供試品溶液，水浴揮干溶劑后，準確加入新 配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0. 2mL、高氯酸0. 8mL，振搖；在60°C的水浴中加熱15min， 取出，流水冷卻至室溫；再準確加入4mL冰醋酸，振搖，于547nm處測定吸收度，按吸收度換 算成藥材中總?cè)坪俊? d) 藥材中總黃酮含量與紫丁香苷含量的比為10?100 : 1，總?cè)坪颗c紫丁香苷含 量的比為200?900 : 1。
2. 如權(quán)利要求1所述的細柱五加的質(zhì)量控制方法，其特征在于步驟a中的流動相的流 速0. 500?1.500ml/min，流動相為乙腈-水（20 : 80)，柱溫20?40°C。
3. 如權(quán)利要求1所述的細柱五加的質(zhì)量控制方法，其特征在于步驟a中供試品溶液制 備為精密稱取樣品粉末約1. 〇g，精密加入甲醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h后，超聲處理 (250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，0. 45 μ m微孔濾膜濾過。
4. 如權(quán)利要求1所述的細柱五加的質(zhì)量控制方法，其特征在于步驟b中一定體積分數(shù) 的甲醇為體積分數(shù)30 %的甲醇，一定質(zhì)量分數(shù)的A1C13溶液為質(zhì)量分數(shù)0. 8%的A1C13溶 液。
5. 如權(quán)利要求1所述的細柱五加的質(zhì)量控制方法，其特征在于步驟b中供試品溶液 制備為精密稱取樣品粉末約1. 〇g，精密加入甲醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h后，超聲處 理（250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾后取續(xù)濾液0. 5mL揮干后用體積分數(shù) 30 %的甲醇lmL溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加質(zhì)量分數(shù)0. 8 %的A1C13溶液0. 5mL，用體積 分數(shù)30%的甲醇定容。
6. 如權(quán)利要求1所述的細柱五加的質(zhì)量控制方法，其特征在于步驟c中供試品溶液制 備為精密稱取樣品粉末約〇. lg，精密加入90%乙醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h后，超聲處 理（250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾后取續(xù)濾液0. 5mL備用。
7. 如權(quán)利要求1所述的細柱五加的質(zhì)量控制方法，其特征在于步驟d中總黃酮含量與 紫丁香苷含量的比為15?40 : 1，總?cè)坪颗c紫丁香苷含量的比為200?900 : 1。
【文檔編號】G01N30/06GK104090046SQ201410352833
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月22日
【發(fā)明者】韋敏, 鄭生智, 呂曄, 張貴君 申請人:江蘇省中國科學(xué)院植物研究所