專利名稱：乙型肝炎抗原和梅毒抗體聯(lián)合檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領域：
本實用新型是涉及應用免疫層析技術(shù)同時測定全血、血清或血漿中乙型肝炎抗原和梅毒抗體的聯(lián)合檢測試劑盒，其結(jié)構(gòu)特征和使用方法。
背景技術(shù)：
乙肝表面抗原(HBsAg)陽性是體內(nèi)存在乙肝病毒感染的標志之一。人體感染乙肝病毒后，被感染者血清中最早出現(xiàn)的是HBsAg。一般在乙肝發(fā)病前2-3周即可出現(xiàn)HBsAg陽性，發(fā)病時達到高峰。
梅毒的病原體是一種螺旋體，它可存在于梅毒患者皮膚粘膜硬下疳、皮疹、體液中。當與健康人性交時，螺旋體即可隨分泌物進入健康人體有破損的皮膚粘膜，致使接觸者受到感染。極少數(shù)情況下，梅毒螺旋體亦可通過輸血或直接接觸或母體與胎兒間的循環(huán)交流而傳播。
乙型病毒性肝炎在中國流行十分廣泛，近年來梅毒也出現(xiàn)流行趨勢，因此控制乙肝及梅毒的傳播是一項重要和長期的任務。改善這兩種傳染病的早期診斷和大面積普查及特定人群(如供血者、手術(shù)和內(nèi)腔鏡檢病人等)的篩選，是病原體檢測領域所面臨的一大課題。
本實用新型的內(nèi)容本實用新型的一個目的是提供應用免疫層析技術(shù)同時測定乙肝表面抗原和梅毒抗體的聯(lián)合檢測試劑盒，特征在于硝酸纖維素膜上包括包被抗乙肝表面抗原之抗體(sAb)的乙肝表面抗原檢測線，和包被梅毒螺旋體抗原的梅毒抗體檢測線，以及包被捕獲蛋白的對照線。
根據(jù)本實用新型的一個優(yōu)選實施方案，其中乙肝表面抗原檢測線處包被抗表面抗原的抗體(sAb)，梅毒抗體檢測線處包被梅毒的抗原，對照線處包被捕獲蛋白。
根據(jù)本實用新型的另一個優(yōu)選實施方案，所說的硝酸纖維素膜條的上端和下端分別黏附有用于吸附液體(水)的吸液(水)紙條和兩個并列的載體微粒墊片以及載體微粒墊片下方的加樣墊。并且所說的載體微粒表面分別預包了被有抗HBsAg抗體和梅毒螺旋體抗原。
根據(jù)本實用新型的再一個優(yōu)選實施方案，所說的硝酸纖維素膜條的下端的兩個并列的載體微粒墊片可以合并為一片，即在同一片載體微粒墊片上同時承載分別預包被了抗HBsAg抗體和梅毒螺旋體抗原的兩種載體微粒。
根據(jù)本實用新型的再一個優(yōu)選實施方案，其中對照線、乙肝表面抗原檢測線和梅毒抗體檢測線自上至下可以有多種不同的的排列次序。
根據(jù)本實用新型試劑盒的再一個優(yōu)選實施方案，其包裝形式可以是單純板條式或盒式的。
根據(jù)本實用新型試劑盒的一個優(yōu)選實施方案，其中作為被檢測對象的乙型肝炎表面抗原，也可以代之以乙型肝炎e抗原或乙型肝炎核心抗原。


圖1顯示本實用新型試劑盒之測試條的基本結(jié)構(gòu)示意圖。其中，PVC板1上粘貼硝酸纖維素膜2，在硝酸纖維素膜2的上端粘貼吸液(水)紙條3，下端粘貼吸附有預包被抗HBsAg抗體的載體微粒墊片8和吸附有預包被梅毒抗原的載體微粒墊片9。在硝酸纖維素膜2的中間段排列著對照線5，乙肝表面抗原檢測線6，梅毒抗體檢測線7。在PVC板1的下部粘貼加樣墊10，加樣墊10的前端搭在吸附有預包被梅毒抗原的載體微粒墊片9上。
圖2顯示將圖1所示的測試條裝入塑料盒中所得的檢測試劑盒的(正面)外部觀。其中，塑料卡16上有加樣孔15，和觀察窗口11，在觀察窗口內(nèi)排練的是對照線12，乙肝表面抗原檢測線13，梅毒抗體檢測線14。
具體實施方式
本實用新型的試劑盒主要包括一個表面黏附有硝酸纖維素膜的，通常由高分子(如聚氯乙烯，PVC)材料制成的板狀載體構(gòu)成。硝酸纖維素膜的上端和下端分別黏附有用于吸附液體(水)的吸液(水)紙條和兩個并列的載體微粒墊片。其中一個載體微粒墊片上吸附有預包被的抗HBsAg抗體，另一個則吸附有預包被的梅毒螺旋體抗原。上文所說的硝酸纖維素膜條的下端的兩個并列的載體微粒墊片可以合并成一片，即在同一片載體微粒墊片上同時承載分別預包被了抗HBsAg抗體和梅毒螺旋體抗原的兩種載體微粒。在硝酸纖維素膜的中間段從上至下排列有對照線、乙型肝炎表面抗原檢測線和抗梅毒螺旋體抗體檢測線。另外，在載體板的最下部還粘貼有一個前端附在梅毒螺旋體抗原之載體微粒墊片上的加樣墊。
本實用新型是基于已知的膠體金免疫層析技術(shù)而設計的。其主要特征是，在所說的載體微粒表面上，分別預包被有抗乙肝表面抗原的抗體和梅毒螺旋體抗原。載體微粒在適當條件下干燥并附著在由纖維素材料構(gòu)成的墊片狀材料上。硝酸纖維素膜上對照線處包被可特異性結(jié)合包被在微粒表面上的抗體或抗原的蛋白質(zhì)(即所謂的捕獲蛋白)。乙肝表面抗原檢測線處包被抗表面抗原的抗體，梅毒抗體檢測線處則包被梅毒螺旋體抗原。
根據(jù)本實用新型的試劑盒，特征在于其中所說的硝酸纖維素膜條的一端附有可遇水溶掉的載體微粒，并且所說的載體微粒的表面分別預包被有抗乙型肝炎表面抗原抗體(sAb)和梅毒螺旋體抗原。
構(gòu)成載體微粒本身的材料可以是聚苯乙烯乳膠(Latex)、明膠、磁珠、炭末、含蛋白A的金葡萄球菌、膠體金、膠體硒、化學發(fā)光物質(zhì)、熒光物質(zhì)等形成的可通過物理或化學作用結(jié)合靶分子的微粒。
攜帶載體微粒的墊片其材料可以是玻璃纖維、無防布、和其他由纖維組成的墊狀材料。
以下結(jié)合附圖詳細描述本實用新型試劑盒的結(jié)構(gòu)和使用方法。
圖1顯示條式結(jié)構(gòu)的本實用新型試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。如圖1可以看出，PVC板1上粘貼有硝酸纖維素膜2，該膜的上部粘貼有一個吸液(紙)條3，下部粘貼有預包被了抗HBsAg抗體的載體微粒墊片8和預包被了梅毒抗原的載體微粒墊片9。墊片8和9的前后順序沒有嚴格要求，并且可以是隨機安排的。并列的載體微粒墊片8和9可以合并為一片，即在同一片載體微粒墊片上同時承載分別預包被了抗HBsAg抗體和梅毒螺旋體抗原的兩種載體微粒。硝酸纖維素膜2的中間段從上至下依次排列有對照線5、乙肝表面抗原檢測線6，和梅毒抗體檢測線7。其中，對于對照線5、乙肝表面抗原檢測線6和梅毒抗體檢測線7自上至下的排列順序沒有嚴格要求，并且這些線的排列可以是隨機的。例如，它們自上至下的排列次序包括但不限于1)對照線、乙肝表面抗原檢測線、梅毒抗體檢測線；2)對照線、梅毒抗體檢測線、乙肝表面抗原檢測線；3)梅毒抗體檢測線、對照線、乙肝表面抗原檢測線；4)梅毒抗體檢測線、乙肝表面抗原檢測線、對照線；5)乙肝表面抗原檢測線、對照線、梅毒抗體檢測線；以及6)乙肝表面抗原檢測線、梅毒抗體檢測線、對照線。
PVC板1的最下端粘貼有用于滴加待檢樣品的加樣墊10，加樣墊的前端附在預包被了梅毒抗原的載體微粒墊片9上。該板條式結(jié)構(gòu)代表了本實用新型試劑盒的基本結(jié)構(gòu)。
將圖1所示的條式結(jié)構(gòu)置于一個塑料材料制成的盒內(nèi)，即構(gòu)成(正面)外觀如圖2所示的卡式試劑盒。由圖2可以看出，塑料盒16上有加樣孔15，和觀察窗口11。由觀察窗口11向內(nèi)可以看到自上至下依次排列的對照線12、乙型肝炎表面抗原檢測線13，和梅毒抗體檢測線14。
當使用本實用新型的試劑盒檢測乙型肝炎表面抗原陽性樣本時，取待測樣本全血、血清或血漿兩到三滴約60ul，滴加于加樣墊10，樣本浸濕到載體微粒墊片8，樣本中的乙肝表面抗原與載體微粒吸附的抗乙肝表面抗原抗體特異性結(jié)合，形成復合物。由于吸液紙條的虹吸作用，復合物沿著硝酸纖維素膜2向前(遠端)移動，一直到達硝酸纖維素膜2上部的吸液(紙)條3。當復合物沿硝酸纖維素膜2移動，途經(jīng)乙肝表面抗原檢測線6時，即與檢測線6上預包被的HBsAg抗體結(jié)合形成“載體微粒-抗乙肝表面抗原抗體-乙肝表面抗原-抗乙肝表面抗原抗體”夾心結(jié)合物。由于該載體微粒本身帶有顏色，且聚集在表面抗原檢測線6處，使表面抗原(sAg)檢測線6呈現(xiàn)清晰可辨的有色線條。未結(jié)合的包被抗表面抗原抗體(sAb)的載體微粒與對照線5處包被的捕獲蛋白結(jié)合而富集在對照線處，使對照線5呈現(xiàn)清晰可辨的有色線條。被試的陰性樣品只在對照線5處顯色。
這里應特別指出的是，雖然本說明書中以乙型肝炎表面抗原和其相應抗體為例說明用于同時檢測乙型肝炎抗原和梅毒抗體的試劑盒，但本領域技術(shù)人員可以理解到也可以用乙型肝炎e抗原或乙型肝炎核心抗原及它們的相應抗體代替乙型肝炎表面抗原和其相應抗體，實現(xiàn)上述檢測目的。
檢測梅毒抗體陽性樣本時，取待測樣本全血、血清或血漿兩到三滴約60ul，滴加于加樣墊10，樣本浸濕到載體微粒墊片9，樣本中的梅毒抗體將與載體微粒上吸附的梅毒抗原結(jié)合，形成載體微粒-梅毒抗原-梅毒抗體復合物。由于虹吸作用，致使復合物沿硝酸纖維素膜2向遠端移動，一直到達硝酸纖維素膜2上部的吸液(紙)條3。當經(jīng)過梅毒抗體檢測線7時，便與預包被的梅毒抗原結(jié)合，形成“載體微粒-梅毒抗原-梅毒抗體-梅毒抗原”夾心結(jié)合物。由于該載體微粒本身帶有顏色，且聚集在梅毒抗體檢測線7處，使梅毒檢測線7呈現(xiàn)清晰可辨的有色線條。未結(jié)合的包被梅毒抗原的載體微粒與對照線處5包被的捕獲蛋白結(jié)合而富集在對照線5處，使對照線5呈現(xiàn)清晰可辨的有色線條。被試的陰性樣品只在對照線5處顯色。
如圖2所示，也可以將上述結(jié)構(gòu)的測試條裝入塑料盒中，并通過塑料盒上設置的加樣孔15和觀察窗口11點加待檢樣品并觀察檢驗結(jié)果。這樣的盒式結(jié)構(gòu)可以更便于攜帶和使用，并且可以更大限度地防止污染。本實用新型的盒式結(jié)構(gòu)是指用高分子材料或無機材料制成的，用來裝入如上所述的檢測條的一定形狀的半封閉盒狀包裝物。
本實用新型的試劑盒可同時檢測乙肝表面抗原和梅毒抗體，即一次實驗即可獲得乙型肝炎和梅毒兩種傳染病的實驗室診斷結(jié)果。本實用新型的試劑盒可用于正常人的健康普查、可疑病人的臨床檢驗、疫區(qū)人群和獻血人員的篩選等。由于本試劑盒結(jié)構(gòu)簡單并且使用方便，所以可大大的節(jié)省檢驗所投入的人力和物力，從而有利于這兩種傳染病的防治。
權(quán)利要求1.一種應用免疫層析技術(shù)同時測定全血、血清或血漿中乙型肝炎表面抗原和梅毒抗體的聯(lián)合檢測試劑盒，特征在于聚氯乙烯板(1)上粘貼硝酸纖維素膜(2)，在硝酸纖維素膜(2)的上端粘貼吸液紙條(3)，下端粘貼吸附有預包被了抗HBsAg抗體的載體微粒墊片(8)和吸附有預包被了梅毒抗原的載體微粒墊片(9)，其中在硝酸纖維素膜(2)的中間段排列著對照線(5)，乙肝表面抗原檢測線(6)，以及梅毒抗體檢測線(7)，并且聚氯乙烯板(1)的下部粘貼有與載體微粒墊片(9)搭接的加樣墊(10)。
2.根據(jù)根據(jù)權(quán)利要求1的聯(lián)合檢測試劑盒試劑盒，特征在于其包裝形式可以是單純板條式或盒式的。
專利摘要一種應用免疫層析技術(shù)同時檢測血液樣品中乙型肝炎抗原和梅毒抗體的聯(lián)合檢測試劑盒，特征在于聚氯乙烯板(1)上粘貼硝酸纖維素膜(2)，在硝酸纖維素膜(2)的上端粘貼吸液紙條(3)，下端粘貼吸附有預包被了抗HBsAg抗體的載體微粒墊片(8)和吸附有預包被了梅毒抗原的載體微粒墊片(9)，其中在硝酸纖維素膜(2)的中間段排列著對照線(5)，乙肝表面抗原檢測線(6)和梅毒抗體檢測線(7)，并且聚氯乙烯板(1)的下部粘貼有與載體微粒墊片(9)搭接的加樣墊(10)。本實用新型的聯(lián)合檢測試劑盒試劑盒的包裝形式可以是單純板條式或盒式的。
文檔編號G01N33/571GK2679681SQ03206508
公開日2005年2月16日 申請日期2003年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月28日
發(fā)明者王言帥, 黃欽元 申請人:英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司