專利名稱：：二氫查耳酮分子印跡固相萃取柱填充材料的制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種分子印跡固相萃取柱填充材料的制備方法，特別是一種二氫查耳酮分子印跡固相萃取柱填充材料的制備方法。技術背景二氫査耳酮(dihydrochalcone,DHC)是一類具有苯并色原酮母核結構的化合物，可以看作是二氫黃酮在堿性條件下C環(huán)開環(huán)的產(chǎn)物，目前己從百合科、菊科、薔薇科、杜昌l花科等植物中分離得到。二氫査耳酮是一類非常重要的藥用活性成分，具有抗氧化、抗腫瘤、抗糖尿病、抗菌以及抗癲癇作用。楊崇仁等人(楊崇仁，王錦亮，李興從等.云南血竭的化學成分及抗真菌活性.云游潛激,究，1995，17(3):336—340.)從云南血竭中分離到了一種二氫査耳酮一龍血素A(loureirinA)，即4，-羥基-2，4-二甲氧基二氫查耳酮，并證明其對枝孢嗜果倉霉、禾谷鐮刀菌龍血樹變種、未谷鐮刀菌云南變種和出芽短梗霉等真菌具有抑制作用。龍血素B(LoureirinB)也是一種重要的二氫查耳酮，它的化學結構為4'-羥基-2,4,6-三甲氧基二氫査耳酮，它是中藥龍血竭質(zhì)量標準中重要指標物質(zhì)，也是護傷安酊、降龍搽劑、黃松油等搽劑的主要有效成分，具有活血化瘀、定痛止血、斂瘡生肌的作用。劉向明等人(劉向明，陳素，尹世金.血竭及其成分龍血素B對背根神經(jīng)節(jié)細胞河豚毒素敏感型鈉通道電流的影響.^房^^^C資，2004，34(1):80—87.)的研究表明龍血素B對背根神經(jīng)節(jié)細胞河豚毒素敏感型納通道電流具有抑制峰值、抑制離子通道電導和加速失活等作用，起到鎮(zhèn)痛的效果。由于二氫査耳酮在天然產(chǎn)物中的含量很低，并且天然產(chǎn)物中成分十分復雜，用傳統(tǒng)的有機溶劑萃取，普通填料的柱層析等分離方法耗時、費力、選擇性差，很難滿足現(xiàn)在的分離要求，因此研究高效的分離技術成為天然產(chǎn)物研究與開發(fā)的重點和難點。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明在于提供一種二氫査耳酮分子印跡固相萃取柱填充材料的制備方法。為達到上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案一種二氫査耳酮分子印跡固相萃取柱填充材料的制備方法，其特征在于該方法的具體步驟為a.二氫查耳酮分子印跡聚合物的制備將反應原料模板分子二氫查耳酮、丙烯酰胺、交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯按l:(18):(848)的摩爾比加到致孔劑乙腈或氯仿中，模板分子二氫査耳酮與致孔劑的摩爾比為1:(11.5)，混合均勻后，再按模板分子二氫査耳酮與引發(fā)劑偶氮二異丁腈的摩爾比l:(0.61.2)，加入偶氮二異丁腈，經(jīng)脫氣、充氮氣后，密封，在408(TC溫度下反應2048h，得粗的分子印跡聚合物；b.將上述的分子印跡聚合物研磨到粒度1580pm，用甲醇和乙酸的混合溶劑進行索氏抽提，甲醇和乙酸的體積比為(6595):(355)，提取時間2472h,再用丙酮沉降，以除去細小的顆粒，得到二氫査耳酮分子印跡固相萃取柱填充材料；上述的二氫査耳酮分子印跡固相萃取柱填充材料的制備方法，其特征在于所述的反應原料模板分子二氫査耳酮有龍血素B、龍血素A或劍葉龍血素A。由于二氫査耳酮分子印跡聚合物是一種具有特定空間結構和有效功能基團的交聯(lián)聚合物，它對二氫查耳酮分子的立體結構具有"記憶"功能，用此分子印跡聚合物材料裝填于聚丙烯柱體內(nèi)，制得二氫査耳酮分子印跡固相萃取柱，對天然產(chǎn)物中的二氫查耳酮分子具有高選擇性的分離、富集和純化作用。二氫査耳酮分子印跡固相萃取柱層析法較普通溶劑萃取法、普通填料柱層析法簡便、高效。選擇聚丙烯的柱體有利于最后獲得的二氫查耳酮分子印跡固相萃取柱可用于強酸、強堿環(huán)境操作。具體實施方式現(xiàn)將本發(fā)明的具體實施例敘述于后。實施例l:龍血素B分子印跡固相萃取柱填充材料的制備，具體原料及用量見表l。表l反應原料及用量反應原料_分子量(g/mo1)_反應用量龍血素B316.3563.2mg丙烯酰胺71.0885.3mg乙二醇二甲基丙烯酸酯198.221.1g偶氮二異丁腈164.2130mg致孔劑(乙腈)41.054mL1.將反應原料模板分子龍血素B(LoureirinB)、功能單體丙烯酰胺、交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯和致孔劑乙腈，按表l的用量依次加到磨口的三口瓶中，超聲混合30min，混合均勻后，再加入偶氮二異丁腈30mg，超聲脫氣10miri，通氮氣20min后，密封，在6(TC水浴中反應24h，得粗的龍血素B分子印跡聚合物；2.將上述的龍血素B分子印跡聚合物研磨到75tnn左右，放入索氏提取器，用混合溶劑V(甲醇):V(乙酸)二80:20反復抽提，提取時間36h,再用丙酮沉降，除去細小的顆粒；得到龍血素B分子印跡固相萃取柱填充材料稱量上述的龍血素B分子印跡固相萃取柱填充材料0.4g均勻填充在聚丙烯柱體內(nèi)，得到龍血素B分子印跡固相萃取柱；將上述的龍血素B分子印跡固相萃取柱應用于天然產(chǎn)物中的龍血素B分子的高選擇性分離富集，具體步驟為a.龍血素B分子印跡固相萃取柱用25mL乙腈沖洗；b.加入樣品溶液6mL;c.淋洗溶液用甲醇、水的混合溶液，V(甲醇):V(水"8:1，淋洗4個柱體積；d.洗脫溶液用甲醇、乙酸的混合溶液，V(甲醇):V(乙酸)二85:15，洗脫3個柱體積。采用本發(fā)明的龍血素B分子印跡固相萃取柱可以直接從天然產(chǎn)物中分離得到龍血素B，龍血素B的純度大于92%。而采用普通柱層析方法，要經(jīng)過一次硅膠柱分離、一次聚酰胺柱分離和一次LH-20凝膠柱分離才能得到龍血素B，龍血素B的純度為7580%。實施例2:龍血素A分子印跡固相萃取柱填充材料的制備，具體原料及用量見表2。表2反應原料及用量<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>1.將反應原料龍血素A(LourdrinA)、功能單體丙烯酰胺、交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯和致孔劑乙腈，按表2的用量依次加到磨口的三口瓶中，超聲混合20min，混合均勻后，再加入偶氮二異丁腈20mg，超聲脫氣15min，通氮氣20min后，密封，在6(TC水浴中反應36h，得龍血素A分子印跡聚合物；2.將上述的龍血素A分子印跡聚合物研磨到75pm左右，放入索氏提取器，用混合溶劑V(甲醇)V(乙酸)-90:10反復抽提，提取時間48h，再用丙酮沉降，除去細小的顆粒；稱量上述的龍血素A分子印跡固相萃取柱填充材料0.2g均勻填充在聚丙烯柱體內(nèi)，得到龍血素A分子印跡固相萃取柱；將上述的龍血素A分子印跡固相萃取柱應用于天然產(chǎn)物中的龍血素A分子的高選擇性分離富集，具體步驟為a.先將龍血素A分子印跡固相萃取柱用10mL乙腈沖洗；b.加入樣品溶液4mL;c.淋洗溶液用甲醇、水的混合溶液，V(甲醇)V(水)二7:1，淋洗2個柱體積；d.洗脫溶液用甲醇、乙酸的混合溶液，V(甲醇)V(乙酸)二85:15，洗脫3個柱體積。釆用本發(fā)明的龍血素A分子印跡固相萃取柱可以直接從天然產(chǎn)物中分離得到龍血素A，龍血素A的純度大于95W。而采用普通柱層析方法，要經(jīng)過兩次硅膠柱分離和兩次LH-20凝膠柱分離才能得到龍血素A，龍血素A的純度為8085%。實施例3:劍葉龍血素A分子印跡固相萃取柱填充材料的制備，其反應原料及用量見表3。表3反應原料及用量<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>1.將反應原料劍葉龍血素A(cochinchineninA)、功能單體丙烯酰胺、交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯和致孔劑氯仿，按表3的用量依次加到磨口的三口瓶中，超聲混合40min，混合均勻后，再加入偶氮二異丁腈30mg，超聲脫氣10min，通氮氣20min后，密封，在55。C水浴中反應36h，得粗的劍葉龍血素A分子印跡聚合物；2.將上述的劍葉龍血素A分子印跡聚合物研磨到75pm左右，放入索氏提取器，用混合溶劑V(甲醇)V(乙酸)二80:20反復抽提，提取時間36h,再用丙酮沉降，除去細小的顆粒；得到劍葉龍血素A分子印跡固相萃取柱填充材料稱量上述的劍葉龍血素A分子印跡固相萃取柱填充材料0.2g均勻填充在聚丙烯柱體內(nèi)，得到劍葉龍血素A分子印跡固相萃取柱。將上述的劍葉龍血素A分子印跡固相萃取柱應用于天然產(chǎn)物中的劍葉龍血素A分子的高選擇性分離富集，具體步驟為a.先將劍葉龍血素A分子印跡固相萃取柱用lOmL乙腈沖洗；b.加入樣品溶液6mL;c.淋洗溶液用甲醇、水的混合溶液，V(甲醇)V(水)二8:1，淋洗3個柱體積；d.洗脫溶液用甲醇、乙酸的混合溶液，V(甲醇)V(乙酸)二90:10，洗脫2個柱體積。采用本發(fā)明的劍葉龍血素A分子印跡固相萃取柱可以直接從天然產(chǎn)物中分離得到劍葉龍血素A,劍葉龍血素A的純度大于95%。而采用普通柱層析方法，要經(jīng)過兩次硅膠柱分離和兩次LH-20凝膠柱分離才能得到劍葉龍血素A，劍葉龍血素A的純度為7580%。權利要求1.二氫查耳酮分子印跡固相萃取柱填充材料的制備方法，其特征在于該方法的具體步驟為a.二氫查耳酮分子印跡聚合物的制備將反應原料模板分子二氫查耳酮、丙烯酰胺、交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯按1∶(1～8)∶(8～48)的摩爾比加到致孔劑乙腈或氯仿中，模板分子二氫查耳酮與致孔劑的摩爾比為1∶(1～1.5)，混合均勻后，再按模板分子二氫查耳酮與引發(fā)劑偶氮二異丁腈的摩爾比1∶(0.6～1.2)的比例，加入偶氮二異丁腈，經(jīng)脫氣、充氮氣后，密封，在40～80℃溫度下反應20～48h，得粗的分子印跡聚合物；b.將上述粗的分子印跡聚合物研磨到粒度15～80μm，用甲醇和乙酸的混合溶劑進行索氏抽提，甲醇和乙酸的體積比為(65～95)∶(35～5)，提取時間24～72h，再用丙酮沉降，以除去細小的顆粒，得到二氫查耳酮分子印跡固相萃取柱填充材料。2.根據(jù)權利要求l所述的二氫査耳酮分子印跡固相萃取柱填充材料的制備方法，其特征在于所述的反應原料模板分子二氫查耳酮有龍血素B、龍血素A或劍葉龍血素A。全文摘要本發(fā)明涉及一種二氫查耳酮分子印跡固相萃取柱填充材料的制備方法。該方法具體為將反應原料模板分子二氫查耳酮、丙烯酰胺、交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯加到致孔劑乙腈或氯仿中，混合均勻后，再加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈，經(jīng)脫氣、充氮氣后，密封，在40～80℃溫度下反應20～48h，得粗的分子印跡聚合物；將粗的分子印跡聚合物研磨到粒度15～80μm，用甲醇和乙酸的混合溶劑進行索氏抽提，再用丙酮沉降，以除去細小的顆粒，得到二氫查耳酮分子印跡聚合物；將該聚合物均勻填充在聚丙烯柱體內(nèi)，得到二氫查耳酮分子印跡固相萃取柱，能簡便、高效地從天然產(chǎn)物中分離富集二氫查耳酮。文檔編號B01J20/30GK101274273SQ20081003762公開日2008年10月1日申請日期2008年5月20日優(yōu)先權日2008年5月20日發(fā)明者呂敬慈,王玉芹,旭陳,雍克嵐,霍世欣申請人:上海大學