26] 圖7為突變蛋白的電泳圖，其中，泳道1為S-L突變蛋白，泳道2為脯氨酸節(jié)缺 失突變蛋白，泳道3為S-R突變蛋白，泳道4為S-P突變蛋白，泳道5為P-S突變蛋 白，M表示分子量標記。箭頭指向目的蛋白條帶。
[0027] 圖8為包含突變蛋白的人造油體的穩(wěn)定性測試結(jié)果。在對脯氨酸結(jié)進行定點突 變后，制備人造油體，通過其分層情況，來測試人造油體的穩(wěn)定性。從這幅圖中可以看出， S-P突變的花生油體蛋白穩(wěn)定性效果最好，其他組都為對比組。位點突變S-P以后，具有 比其他對照組更穩(wěn)定、持久的乳化體系。
【具體實施方式】
[0028] 如上所述，人造油體具有諸多用途，例如其可用于開發(fā)、合成及純化外源蛋白質(zhì)， 如醫(yī)藥、保健、營養(yǎng)所需的蛋白質(zhì)等。為了更好地提高人造油體的利用率，減少蛋白浪費，需 要提高油體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。為此，本申請涉及以下發(fā)明或?qū)嵤┓绞健?br>[0029] 在第一方面，提供了一種突變油體蛋白，其脯氨酸結(jié)第7位的絲氨酸（S)替換或 突變?yōu)楦彼幔≒)。在一個實施方案中，所述替換后的脯氨酸結(jié)為PX￡P(guān)X3P，其中X表示 氨基酸，下標數(shù)值表示該氨基酸的個數(shù)。在一些實施方案中，所述突變的脯氨酸結(jié)例如為 PVFIFFSPVIVP。
[0030] 通常，油體蛋白的脯氨酸結(jié)位于油體蛋白三個基本結(jié)構(gòu)域中間約50個氨基酸組 成的高度疏水區(qū)域，其由3個脯氨酸（P)和1個絲氨酸（S)組成(例如PX5SPX3P)。脯氨酸結(jié) 在不同來源的油體蛋白中高度保守，維持其特殊的拓撲結(jié)構(gòu)，對油體蛋白靶向形成油體有 重要意義，尤其是，高度保守的上述脯氨酸結(jié)中的PSPP四個氨基酸的這種氨基酸的排列對 脯氨酸結(jié)穩(wěn)定整個油體的結(jié)構(gòu)功能起到關(guān)鍵作用。
[0031] 本申請發(fā)明人令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，將油體蛋白脯氨酸結(jié)中PSPP四個氨基酸中的絲 氨酸（S)突變?yōu)楦彼幔≒)后，即形成PPPP的排列形式，能夠增強脯氨酸結(jié)穩(wěn)定整個油體結(jié) 構(gòu)的功能。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以想到，因脯氨酸結(jié)在油體蛋白中高度保守，而且在任意油體 蛋白中發(fā)揮作用的機制均相同，因此，上述PSPP至PPPP的突變將對任意的油體蛋白起到相 同或類似的穩(wěn)定促進作用。
[0032] 在一些實施方案中，所述的突變的油體蛋白指突變的植物油體蛋白，例如其可以 但不限于選自突變的花生油體蛋白、大豆油體蛋白、菜籽油體蛋白、芝麻油體蛋白、葵花籽 油體蛋白、橄欖油體蛋白、棕櫚油體蛋白、茶樹籽油體蛋白或上述的任意混合物。
[0033] 在一個實施方案中，提供了一種突變的花生油體蛋白，其序列為SEQIDN0:5。
[0034] 第二方面，提供了一種人造油體，其包含第一方面的突變油體蛋白。
[0035] 在一些實施方案中，所述人造油體還包含油脂和任選的磷脂。在一些實施方案中， 所述油脂可以是任何來源的植物油脂，例如但不限于來源于花生油、橄欖油、芝麻油、菜籽 油、棕櫚油、大豆油、葵籽油或茶樹籽油。
[0036] 在一個實施方案中，對于人造油體，油體蛋白和油脂為相同植物來源。例如，當所 述人造油體中的油體蛋白是突變的花生油體蛋白時，所述油脂為花生油，以此類推至突變 的橄欖、芝麻、菜籽、棕櫚、大豆、葵籽和茶樹籽油體蛋白及其油脂。
[0037] 在一些實施方案中，所述油體蛋白占所述人造油體總摩爾比的2_58%、2. 5-50%、 3-13%、或 4. 53-12. 41%。
[0038] 在一些實施方案中，所述油脂占所述人造油體總摩爾比的22-97. 9%、37. 7-95%、 86-92%、或 87. 27-91. 01%。
[0039] 在一些實施方案中，所述磷脂占所述人造油體總摩爾比的0. 1_20%、0. 1-12. 3%、 0? 2-1% 或 0? 31-0. 32%。
[0040] 在一些實施方案中，所述油體蛋白占所述人造油體總摩爾比的2-58%、所述油脂占 所述人造油體總摩爾比的22-97. 9%、所述磷脂占所述人造油體總摩爾比的0. 1-20%。
[0041] 在一些實施方案中，所述油體蛋白占所述人造油體總摩爾比的2-58%、所述油脂 占所述人造油體總摩爾比的37. 7-95%、所述磷脂占所述人造油體總摩爾比的0. 1-20%、或 0. 1-12. 3%〇
[0042] 在一些實施方案中，所述油體蛋白占所述人造油體總摩爾比的2. 5-50%、所述油脂 占所述人造油體總摩爾比的37. 7-95%、所述磷脂占所述人造油體總摩爾比的0. 1-20%、或 0. 1-12. 3%〇
[0043] 在一些實施方案中，所述油體蛋白占所述人造油體總摩爾比的3-13%、所述油 脂占所述人造油體總摩爾比的86-92%、所述磷脂占所述人造油體總摩爾比的0. 1-20%、 0? 1-12. 3%、或 0? 2-1%。
[0044] 在一些實施方案中，所述油體蛋白占所述人造油體總摩爾比的4. 53-12. 41%、所述 油脂占所述人造油體總摩爾比的86-92%、所述磷脂占所述人造油體總摩爾比的0. 1-20%、 或 0? 1-12. 3%。
[0045] 在一些實施方案中，所述油體蛋白占所述人造油體總摩爾比的4. 53-12. 41%、所 述油脂占所述人造油體總摩爾比的87. 27-91. 01%、所述磷脂占所述人造油體總摩爾比的 0?l-20%、0. 1-12. 3%、0. 2-1% 或 0? 31-0. 32%。
[0046] 在一些實施方案中，在所述人造油體中，所述油體蛋白、油脂、磷脂的摩爾比 例為：（2-58) : (22-97. 9) : (0? 1-20)，優(yōu)選為（2. 5-50) : (37. 7-95) : (0? 1-12. 3)，優(yōu)選為 (3-13) : (86-92) : (0? 2-1)，更優(yōu)選為（4. 53-12. 41) : (87. 27-91. 01) : (0? 31-0. 32)。
[0047] 在一些實施方案中，所述磷脂可以為磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷 脂酰絲氨酸等化合物中的一種或多種，也可以為包含上述磷脂的組合物，如復(fù)合磷脂(包括 但不限于大豆磷脂)，或卵磷脂。
[0048] 第三方面，提供了一種控制人造油體的粒徑的方法，包括將油體蛋白、油脂以及磷 月旨混合。
[0049] 在一些實施方案中，所述油體蛋白可以為任何來源的油體蛋白，例如可以但不限 于選自花生油體蛋白、大豆油體蛋白、菜籽油體蛋白、芝麻油體蛋白、葵花籽油體蛋白、橄欖 油體蛋白、棕櫚油體蛋白、茶樹籽油體蛋白或上述的任意混合物，以及本申請公開的突變的 花生油體蛋白、突變的大豆油體蛋白、突變的菜籽油體蛋白、突變的芝麻油體蛋白、突變的 葵花籽油體蛋白、突變的橄欖油體蛋白、突變的棕櫚油體蛋白、突變的茶樹籽油體蛋白或上 述的任意混合物。
[0050] 在一些實施方案中，所述油脂可以為任何植物來源的油脂，例如但不限于來源于 花生油、橄欖油、芝麻油、菜籽油、棕櫚油、大豆油、葵籽油或茶樹籽油。
[0051] 在一些實施方案中，所述油體蛋白和油脂為相同植物來源。例如，當所述人造油體 中的油體蛋白是花生油體蛋白或突變的花生油體蛋白時，所述油脂為花生油，以此類推至 橄欖、芝麻、菜籽、棕櫚、大豆、葵籽和茶樹籽油體蛋白及其油脂。
[0052] 在一些實施方案中，所述磷脂可以為磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷 脂酰絲氨酸等化合物中的一種或多種，也可以為包含上述磷脂的組合物，如復(fù)合磷脂(包括 但不限于大豆磷脂)，或卵磷脂。
[0053] 在所述方法的一些實施方案中，所述油體蛋白占油體蛋白、油脂以及磷脂混合物 的總摩爾比的 2%-58%、2. 5%-50%、3%-13%、或 4. 53-12. 41%。
[0054] 在所述方法的一些實施方案中，所述油脂占所述油體蛋白、油脂以及磷脂混合物 的總摩爾比的 22%-97. 9%，37. 7-95%，86-92%，或 87. 27-91. 01%。
[0055] 在所述方法的一些實施方案中，所述磷脂占所述油體蛋白、油脂以及磷脂混合物 的總摩爾比的 〇?l%-20%、0. 1%-12. 3%、0. 2%-1% 或 0? 31-0. 32%。
[0056] 在所述方法的一些實施方案中，所述油體蛋白、油脂、磷脂的摩爾比例為： (2-58) : (22-97. 9) : (0? 1-20)，優(yōu)選為（2. 5-50) : (37. 7-95) : (0? 1-12. 3)，優(yōu)選為 (3-13) : (86-92) : (0? 2-1)，更優(yōu)選為（4. 53-12. 41) : (87. 27-91