專利名稱：：用于藥物蛋白的新型穩(wěn)定劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于穩(wěn)定分子量>10Kda的人血液蛋白或者人血漿蛋白的方法，一種分子量>10Kda的人血液蛋白或者人血漿蛋白的固態(tài)或液態(tài)組合物以及松三糖在穩(wěn)定人血液蛋白或者人血漿蛋白中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：治療蛋白的穩(wěn)定是現(xiàn)今制藥工業(yè)的制劑科學(xué)家的主要挑戰(zhàn)。存在多種引起蛋白可逆和不可逆變化(例如聚集、沉淀或變性)的應(yīng)力。這些困難提出了對(duì)穩(wěn)定這些靈敏蛋白的試劑的需求。制劑(Formulation)開發(fā)是關(guān)鍵步驟,需要對(duì)賦形劑進(jìn)行仔細(xì)的選擇以提供在純化過程和制藥過程中的蛋白活性的高產(chǎn)率并作為終產(chǎn)品。尤其是對(duì)于人血液蛋白或者人血漿蛋白。最廣泛使用的用于蛋白制劑的穩(wěn)定劑之一是碳水化合物，也稱為糖類。碳水化合物由連接的稱為單糖的基礎(chǔ)碳水化合物組分，并能夠具有不同的長(zhǎng)度和能夠具有不同的特性。蔗糖和海藻糖——兩種最普通使用的穩(wěn)定劑——都是二塘，因此由兩個(gè)單糖組成。與最普通使用的碳水化合物穩(wěn)定劑蔗糖和海藻糖(均為二塘)相比，松三糖是三糖。通常指出[Wangff,Lyophilisationanddevelopmentofsolidproteinpharmaceuticals，IntJPharm203，1-60，2000;CarpenterJ.F.,ChangB.S.，Garzon-RodriguezW.，RandolphT.W.，Rationaldesignofstablelyophilizedproteinformulations:Theroyandpractice,chapter5，edCarpenterandManning,KluiwerAcademic/PlenumPublishers,NewYork,2002]，二糖是穩(wěn)定溶液狀態(tài)或者凍干狀態(tài)的蛋白的第一選擇。一些二糖，例如乳糖或者麥芽糖，是還原糖，能夠通過在固態(tài)儲(chǔ)存期間的Malliard反應(yīng)來降解蛋白。文獻(xiàn)表明，如果更大的糖類用作凍干制劑的穩(wěn)定劑，由于蛋白-穩(wěn)定劑相互作用的空間位阻，這些糖類是不太有效的[CarpenterJ.F.，ChangB.S.，Garzon-RodriguezW.，RandolphT.WjRationaldesignofstablelyophilizedproteinformulations:Theroyandpractice,chapter5，edCarpenterandManning,KluiwerAcademic/PlenumPublishers,NewYork，2002]。綜述文獻(xiàn)Wang，W.，InternationalJournalofPharmaceutics，203(2000)1-60，iiLyophilizationanddevelopmentofsolidproteinpharmaceuticals”尤其公開了麥芽糖、葡萄糖和麥芽三糖能夠在Imgml—1提高催化活性的恢復(fù)，但是麥芽五糖、麥芽六糖和麥芽七糖不是那么有效。更大糖類的無效表明糖的蛋白穩(wěn)定可能依賴糖的糖苷側(cè)鏈長(zhǎng)度，其可能干擾在穩(wěn)定化糖和蛋白之間的分子間氫鍵。該綜述文獻(xiàn)推薦二糖為穩(wěn)定劑(P.9/10)。W0-A-2003/086443公開了使用包括水蘇糖、松三糖和各種單糖和二糖在內(nèi)的碳水化合物來制備鼻內(nèi)給藥多肽制劑。糖用于減少在噴射期間的剪切應(yīng)力的作用。W0-A-86/04486尤其公開了因子VIII的色譜純化，其中松三糖用作色譜過程期間的水合作用添加劑。W0-A-91/18091公開了(a)在干燥狀態(tài)和/或(b)在升高的溫度下和/或在輻射下保存靈敏生物物質(zhì)或者有機(jī)化合物的方法，包括在包括所述物質(zhì)或化合物的系統(tǒng)中加入糖或糖衍生物，所述糖或糖衍生物選自(i)選自糖醇和其他直鏈多元醇的多羥化合物的非還原性配糖，或者(ii)選自棉籽糖、水蘇糖和松三糖的非還原性寡糖。Mollmann,S.H.等人在DrugDev.1nd.Pharm.2006Jul;(6):765-78中報(bào)道關(guān)于膜島素在包含松三糖和淀粉的固態(tài)制劑中的穩(wěn)定性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了通過將松三糖加入包含分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白的溶液中來穩(wěn)定分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白的方法。優(yōu)選地,人血液蛋白或者人血楽:蛋白具有分子量>10kDa。更優(yōu)選地,分子量是在IOkDa至300kDa之間。更優(yōu)選地，分子量是在20kDa至200kDa之間。人血液蛋白或者人血漿蛋白的分子量在50kDa至IOOkDa之間或者分子量在IOOkDa至150kDa之間或者分子量在150kDa至200kDa之間可能是有利的。尤其，具有分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白是藥物上或者生物上相關(guān)的蛋白。能夠根據(jù)本發(fā)明穩(wěn)定的藥物上或者生物上相關(guān)的具有分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白可以是重組生產(chǎn)的人血液蛋白或者人血漿蛋白。術(shù)語“蛋白”包括化學(xué)合成的蛋白以及培養(yǎng)細(xì)胞的基因編碼的天然合成的蛋白以及由細(xì)胞分泌的重組蛋白。重組蛋白是由分子生物技術(shù)引入細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因編碼的那些。蛋白可以通過化學(xué)方法或者通過翻譯后過程中的酶進(jìn)行修飾(modify)。根據(jù)本發(fā)明，“蛋白”包括人蛋白尤其是通過細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生的那些，也包括其他來源例如植物、昆蟲等的蛋白，以及突變的、人工的、合成的、融合的或者嵌合的蛋白。術(shù)語“分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白”具體包括人血液凝結(jié)因子，包括纖維蛋白原、纖維蛋白單體、凝血素、凝血酶、FV、FVa,FX、FXa,FIX、FIXa,FVII,FVIIa,FVII1、FX1、FXIa,FXII,FXIIa,FXII1、FXIIIa、血管性假血友病因子(vonWillebrand因子)，ADAMTS13等；轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白例如白蛋白、鐵傳遞蛋白、血楽■銅監(jiān)蛋白、結(jié)合珠蛋白、血色素、血液結(jié)合素等；蛋白酶抑制劑例如β-抗凝血酶、α-抗凝血酶、α2-巨球蛋白、Cl-抑制劑、組織因子途徑抑制劑(TFPI,tissuefactorpathwayinhibitor),月干素輔助因子、蛋白C抑制因子(PA1-3)、蛋白C、蛋白S、蛋白Z等；免疫球蛋白例如聚克隆抗體(IgG)、單克隆抗體、IgGUIgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgAUIgA2、IgM、IgE、IgD、本周蛋白(BenceJonesprotein)等；細(xì)胞相關(guān)血衆(zhòng)蛋白例如纖連蛋白、血小板球蛋白、血小板因子4等；阿樸脂蛋白例如apoA_1、apoA_I1、apoE;補(bǔ)體因子例如因子B、因子D、因子H、因子1、C3b_滅活劑、備解素(properdin)、C4-結(jié)合蛋白等；生長(zhǎng)因子如血小板衍生生長(zhǎng)因子(TOGF)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α0'6-(1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-0(TGF-β)、纖維原細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子；antiangionetic蛋白例如潛在-抗凝血酶和預(yù)潛在抗凝血酶等；高度糖基化的蛋白包括α-l-酸糖蛋白、抗凝乳蛋白酶、內(nèi)-α-胰蛋白酶抑制劑、α-2-HS糖蛋白、C-反應(yīng)蛋白；和其他分子量>10kDa的人血液蛋白或人血漿蛋白，如組氨酸富含的糖蛋白、甘露聚糖結(jié)合凝集素、C4-結(jié)合蛋白、纖連蛋白、GC-球蛋白、血漿酶原、α-1微球蛋白(microglobulin)、C-反應(yīng)蛋白、血液因子例如紅血球生成激素(erythropoeitin)、干擾素、腫瘤因子、tPA、gCSF及其衍生物和突變體。尤其感興趣的是因子IX、因子VII1、G-CSF、vWF、抗凝血酶(AT)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、聚克隆IgG、α-1抗胰島素、因子H、因子1、Cl-酯酶抑制劑、因子VII及其組合。然而，聚肽例如胰島素并不包括在術(shù)語“分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白”的范圍內(nèi)，僅僅因?yàn)橐葝u素的分子量為約5，700Da。術(shù)語“人血液蛋白”和“人血漿蛋白”包括已經(jīng)修飾以具有延長(zhǎng)的半衰期的衍生物特別是分子。針對(duì)半衰期延長(zhǎng)的修飾包括但不限于融合蛋白、由突變形成修飾的蛋白和通過共價(jià)或者非共價(jià)結(jié)合連接到結(jié)合物的蛋白。根據(jù)本發(fā)明，人血漿蛋白或者人血液蛋白可以共價(jià)連接到羥乙基淀粉(HES)分子，尤其是提供具有分子量20至200kDa的分子。當(dāng)提到分子量，指的是化合物的分子量(即包括任何共價(jià)連接到蛋白質(zhì)的化學(xué)上的化合物的分子量)。本發(fā)明尤其提供了將溶液轉(zhuǎn)換成固態(tài)的方法。本發(fā)明涉及用于分子量>10kDa的藥物上的人血液蛋白或者人血漿蛋白的新的穩(wěn)定劑的發(fā)現(xiàn)。令人驚訝的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)松三糖能夠用作用于分子量>10kDa的藥物上的人血液蛋白或者人血漿蛋白的穩(wěn)定劑，例如重組因子VIII(170KDa)、因子IX(55kDa)和HESylatedG-CSF(120kDa)。預(yù)期的是相似分子量的人血液蛋白或者人血漿蛋白會(huì)具有相似的穩(wěn)定需求。例如，因子IX是維生素k依賴的人血漿蛋白并具有與所有其他維生素k依賴的人血漿蛋白具有生物化學(xué)相似性。Gla域是所有這些維生素k依賴蛋白的共同的結(jié)構(gòu)特征并且緊跟在Gla域之后，每個(gè)蛋白質(zhì)(除了凝血素)具有一個(gè)或者更多個(gè)EGF-樣結(jié)構(gòu)域。維生素k依賴蛋白需要Ca2+離子以表達(dá)它們的生理功能并且鈣結(jié)合位點(diǎn)涉及至少Gla域和EGF-樣域。鈣結(jié)合使得這些蛋白結(jié)合到磷脂/細(xì)胞膜并因此表達(dá)它們完全的生物活性。七個(gè)人血漿蛋白對(duì)于其生物合成而言依賴維生素K。它們是凝血素(因子II，72KDa)、因子VII/因子VIIa(50/50KDa)、因子IX(55KDa)或者因子IXa、因子X(59KDa)或者因子Xa、蛋白C(62KDa)、蛋白S(69KDa)和蛋白Z(62KDa)。令人驚訝的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，共價(jià)結(jié)合分子量在20_200kDa范圍的羥乙基淀粉(HES)分子的人血液蛋白或者人血漿蛋白適合于用松三糖穩(wěn)定。松三糖已經(jīng)表現(xiàn)出維持凍干制劑和溶液中的蛋白活性的優(yōu)異的能力。根據(jù)本發(fā)明，將溶液轉(zhuǎn)換為固態(tài)的步驟是在加入松三糖后凍干。松三糖也可以與其他糖例如海藻糖或鹿糖組合使用。松三糖(也拼寫為melicitose),是非還原性三糖，其由吃植物汁液的昆蟲(包括姆蟲例如毛角長(zhǎng)足大姆(Cinarapilicornis))通過酶反應(yīng)產(chǎn)生。IUPAC名稱為(2R,3R,4S,5S,6R)-2-[[(2S,3S,4R,5R)~4~羥基-2，5-二(羥甲基)-3-[[(2R，3R,4S,5S,6R)_3，4，5-三羥基-6-(羥甲基)-2-四氫吡喃]氧]_2_四氫呋喃]氧]-6-(羥甲基)_四氫吡喃_3，4，5-三醇。松三糖具有504，44g/mol的分子量。相關(guān)結(jié)構(gòu)由下式表示代表性地，松三糖以最多約IOOOmM的量存在。下限取決于導(dǎo)致對(duì)感興趣蛋白的充分穩(wěn)定效應(yīng)的松三糖的量。合適的量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用實(shí)施例中的方法學(xué)容易地確定?？尚械姆秶抢珀P(guān)于最終制劑的IOmM至約200mM或從約IOmM至約lOOmM。優(yōu)選地,該量大于20mM或者大于30mM。優(yōu)選地，松三糖的量/人血液蛋白或者人血漿蛋白的量是在重量比重量基礎(chǔ)上計(jì)算的在10:1至5000:1、優(yōu)選在50:1至150:1、或者1000:1至3000:1的范圍內(nèi)，即松三糖的量大于蛋白的量。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，在蛋白的一個(gè)藥學(xué)劑量中包括10至IOOmg松三糖。本發(fā)明主題是包含分子量大于IOkDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白和松三糖的組合物。組合物可以以液態(tài)或固態(tài)存在。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物還包括填充劑、表面活性劑、緩沖劑、另外的穩(wěn)定劑和/或張力改性劑。根據(jù)本發(fā)明的表面活性劑是吸附到表面和界面上的化合物并據(jù)此阻礙由于吸附帶來的蛋白活性損失。這種類型的活性損失可以發(fā)生在整個(gè)制藥過程中以及當(dāng)給藥患者之前或者給藥患者期間處理復(fù)原的(reconstituted)產(chǎn)品的時(shí)候。普通使用的表面活性劑是聚三梨醇酯80、聚三梨醇酯20和泊洛沙姆(poloxamer),尤其是泊洛沙姆188(Poloxamer188)。蛋白諸如白蛋白、尤其是重組白蛋白可以用作表面活性劑。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式還可以使用重組白蛋白。pH緩沖劑指的是在待配制的蛋白的最佳pH范圍內(nèi)具有緩沖能力的化合物。本發(fā)明，當(dāng)合適時(shí)，使用檸檬酸鈉、馬來酸、組氨酸、2-(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪)-乙烷磺酸(HEPES)，3-(N-嗎啉基)丙烷磺酸(MOPS)，2-(N-嗎啉)乙烷磺酸(MES)，哌嗪-N，N'-二(2-乙烷磺酸)(PIPES)，或三(三(羥甲基)氨基甲烷)作為pH緩沖劑。緩沖劑以維持pH在使得蛋白保持功能的范圍內(nèi)的量存在。該量隨蛋白的不同而不同。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道各個(gè)蛋白，尤其是分子量>10kDa的人血液蛋白或人血漿蛋白的優(yōu)選范圍。作為一個(gè)實(shí)例，檸檬酸鈉保持pH范圍在6.5至7.5之間。檸檬酸鈉的合適形式是二水合物形式。一般地，根據(jù)本發(fā)明的組合物可以是凍干形式，但是也可以表現(xiàn)為溶液例如待凍干的溶液和從凍干組合物復(fù)原的溶液。張力改性劑(tonicitymodifier)是指一種在配方中平衡張力的化合物。本發(fā)明，在合適的情況下，包括加入氯化鈉、精氨酸、甘氨酸、氯化鉀、糖或糖醇作為張力改性劑。雖然松三糖表現(xiàn)出低溫和凍干保護(hù)屬性，但是另外的低溫和凍干保護(hù)劑(低溫/冷凍保護(hù)劑)也可能存在。這是一種在配方中用來進(jìn)一步降低或者防止在凍干法的冷凍和干燥步驟期間以及經(jīng)冷凍干燥的產(chǎn)品的后續(xù)儲(chǔ)存期間蛋白活性損失的化合物。本發(fā)明，適當(dāng)?shù)那闆r下，包括非還原性二糖例如蔗糖和海藻糖、以及還原性二糖例如麥芽糖和乳糖，作為另外的低溫/冷凍保護(hù)劑。填充劑是指在配方中存在的賦形劑，用來對(duì)凍干的餅狀物提供機(jī)械支持并增加干重。填充劑既可以是結(jié)晶狀態(tài)，例如氯化鈉，也可以是無定形狀態(tài)，例如精氨酸。填充劑的量最多可以占到最終配方重量的10%。本發(fā)明，在合適的情況下，包括加入氯化鈉、甘氨酸、甘露醇、蔗糖或精氨酸作為填充劑。本發(fā)明的進(jìn)一步的主題是使用松三糖來長(zhǎng)期穩(wěn)定干燥狀態(tài)下的蛋白例如凍干配方至少6個(gè)月、特別是至少12個(gè)月、更特別是至少18個(gè)月、還更特別是24個(gè)月。具體實(shí)施方式本發(fā)明進(jìn)一步描述為以下非限制性的實(shí)例?；钚苑治?因子VIII因子VIII的活性通過色譜分析或者一步分析(onestageassay)來測(cè)量并且因子VIII的單位表示為國(guó)際單位(IU)。色譜分析是在歐洲藥典(EuropeanPharmacopoeia)中規(guī)定的方法。該方法是二步光度測(cè)定方法，其測(cè)定因子VIII的生物學(xué)活性作為輔助因子。因子VIII將因子X激活成因子Xa，其進(jìn)而酶裂解成為分光光度法分析定量的產(chǎn)物。一步凝血分析(one-stepclottingassay)是基于在磷脂存在下包含因子VIII的樣品校正缺乏因子VIII的血漿的凝結(jié)時(shí)間、接觸活化劑和鈣離子的能力。纖維蛋白凝塊的出現(xiàn)時(shí)間以一步測(cè)定。活件分析-因子IX因子IX的生物活性通過一步凝血分析和/或色譜分析來測(cè)量并且因子IX的單位的單位表示為國(guó)際單位(IU),如目前的WHO因子IX濃縮物標(biāo)準(zhǔn)(concentratestandard)所限定的。一步凝血分析(一步凝血試驗(yàn)，one-stepclottingassay)是在歐洲藥典中規(guī)定的方法。該分析的原理是基于在磷脂存在下包含因子IX的樣品校正缺乏因子IX的血漿的凝結(jié)時(shí)間、接觸活化劑和鈣離子的能力。纖維蛋白凝塊的出現(xiàn)時(shí)間以一步測(cè)定。因子IX的活性與凝結(jié)時(shí)間成反比。色譜分析是兩步光度測(cè)定方法。在第一步中，在凝血酶、磷脂和鈣的存在下通過活化因子XI(XIa)來將因子IX活化成因子Ixa。因子Ixa與凝血酶活化因子VIII(Villa)形成酶復(fù)合物，其在磷脂和鈣的存在下將因子X激活成因子Xa。在第二步中，因子Xa水解因子Xa的特異性發(fā)色底物由此釋放發(fā)色基團(tuán)pNA，該發(fā)色基團(tuán)pNA能夠被分光光度法分析定量。因子IX的活性直接與所生成的因子Xa成比例。分析-重組HESylatedG-CSFG-CSF的來源SHPLC分析樣品用洗提液A稀釋至0.lmg/mL。20μg注入ResourceSImL柱(GEHealthcare,Munich,Germany)。洗提液A20mM醋酸鈉，pH4.O洗提液B20mM醋酸鈉，O.5MNaCl,pH4.O流速lmL/min梯度0%-8%1.8-2.Omin8%-52%2.O-13.Omin52%-100%13.O-13.6minHES-G-CSF峰的峰寬被用作質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)因?yàn)樗砻骶奂腍ES-G-CSF具有更大的峰寬。峰寬的增益(gain)被定義為在熱應(yīng)力或剪切應(yīng)力之前和之后HES-G-CSF峰的差別。實(shí)施例重鉬閔子VIII試驗(yàn)使用的因子VIII是一種重組人類B域刪除的因子VIII蛋白，根據(jù)EP_A_1739179(Srhrii山、r等)所記載的方法在人類細(xì)胞系HEK293F中制備。該提純方法由五個(gè)色譜(或?qū)游?步驟并產(chǎn)生具有人類糖基化樣圖案(Sandberg等，PCT/EP2009/060829)的高度純化因子VIII蛋白制劑(Winge等，W0-A-2009/156430)。血漿衍牛閔子IX這些試驗(yàn)中使用的材料源于商用產(chǎn)品、iUKitivfc,其是高純度SD處理的以及納米過濾的因子IX濃縮物。在用于試驗(yàn)之前，該材料已在其中因子IX單體峰用于下一步試驗(yàn)的凝膠過濾柱上進(jìn)一步提純。重組HESylatedG-CSF使用的細(xì)胞系是人胚胎腎細(xì)胞293(HEK293)的衍生物，其適應(yīng)于無血清培養(yǎng)。該寄主即HEK293F用攜帶G-CSF的cDNA編碼序列的表達(dá)盒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。強(qiáng)啟因子用于該表達(dá)盒。該一般方法也記載在EP1739179(Schroder等)中。該純化方法由四個(gè)色譜步驟組成并產(chǎn)生高純度G-CSF蛋白制劑。G-CSF蛋白與具有大約IOOKDa分子量的羥乙基淀粉(HES)衍生物結(jié)合。最終HES-G-CSF通過一個(gè)色譜步驟從未反應(yīng)的HES衍生物和G-CSF中純化，結(jié)果產(chǎn)生具有總分子量大約為120KDa的分子。實(shí)施例1:在溶液中通過松三糖穩(wěn)定rFVIII制備根據(jù)上述試驗(yàn)章節(jié)中的說明制備重組因子VIII(rFVIII)。該試驗(yàn)比較了松三糖對(duì)溶液中rFVIII的穩(wěn)定效果與普遍使用的穩(wěn)定劑海藻糖對(duì)rFVIII的穩(wěn)定效果。rFVIII的濃度是100IU/ml。表I列出了該試驗(yàn)研究的制劑的組成。表1.制劑的組成權(quán)利要求1.通過將松三糖加入包含分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白的溶液中來穩(wěn)定所述分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白的方法。2.權(quán)利要求1所述的方法，其中可選地通過凍干法將所述溶液轉(zhuǎn)換成固態(tài)。3.權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的方法，其中松三糖是以最多l(xiāng)OOOmM、尤其約IOmM至約200mM、特別是約IOmM至約IOOmM的量存在。4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白是藥物上和生物上相關(guān)的人血液蛋白或者人血漿蛋白。5.權(quán)利要求4的方法，其中所述藥物上和生物上相關(guān)的蛋白是重組產(chǎn)生的分子量>IOkDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白。6.權(quán)利要求4或5的方法，其中所述藥物上和生物上相關(guān)的蛋白是人的，或者諸如植物、昆蟲等其他來源的，或者突變的、人工的、合成的、融合的或者嵌合的蛋白或者連接到一個(gè)或者更多化合物的衍生物及其組合。7.權(quán)利要求6的方法，其中所述分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白是血液凝結(jié)因子，包括纖維蛋白原、纖維蛋白單體、凝血素、凝血酶、FV、FVa、FX、FXa、FIX、FIXa、FVI1、FVIIa、FVII1、FX1、FXIa、FXI1、FXIIa、FXII1、FXIIIa、血管性假血友病因子、ADAMTS13及其衍生物和突變體。8.權(quán)利要求6任一項(xiàng)的方法，其中所述分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白是轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白諸如白蛋白、鐵傳遞蛋白、血漿銅藍(lán)蛋白、結(jié)合珠蛋白、血色素、血液結(jié)合素等，蛋白酶抑制劑諸如β-抗凝血酶、α-抗凝血酶、α2-巨球蛋白、Cl-抑制劑、組織因子途徑抑制劑(TFPI)、肝素輔助因子、蛋白C抑制劑(ΡΑΙ-3)、蛋白C、蛋白S、蛋白Z等，免疫球蛋白諸如多克隆抗體(IgG)、單克隆抗體、IgGUIgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgAUIgA2、IgM、IgE、IgD、本周蛋白等，細(xì)胞相關(guān)血漿蛋白諸如纖連蛋白、血小板球蛋白、血小板因子4等，阿樸脂蛋白諸如apoA-1.apoA-11.apoE，補(bǔ)體因子諸如因子B、因子D、因子H、因子1、C3b_滅活劑、備解素、C4-結(jié)合蛋白等，生長(zhǎng)因子如血小板衍生生長(zhǎng)因子(TOGF)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α0'6-(1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-0(TGF-β)、纖維原細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，antiangionetic蛋白例如潛在-抗凝血酶和預(yù)潛在抗凝血酶等，高度糖基化的蛋白包括α-1-酸糖蛋白、抗凝乳蛋白酶、內(nèi)-α-胰蛋白酶抑制劑、α-2-HS糖蛋白、C-反應(yīng)蛋白，以及其他分子量>10kDa的人血液蛋白或人血漿蛋白，諸如組氨酸富含的糖蛋白、甘露聚糖結(jié)合凝集素、GC-球蛋白、血漿酶原、α-1微球蛋白、C-反應(yīng)蛋白、血液因子諸如紅血球生成激素、干擾素、腫瘤因子、tPA、G-CSF及其衍生物和突變體。9.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的方法，其中存在至少一種表面活性劑諸如重組白蛋白、聚三梨醇酯80，聚三梨醇酯20和泊洛沙姆，尤其是泊洛沙姆188。10.權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的方法，其中存在至少一種緩沖劑諸如組氨酸、檸檬酸鈉、HEPES、Tris、MOPS或者PIPES。11.權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的方法，其中存在至少一種另外的穩(wěn)定劑諸如糖、氨基酸、多醇、輔助因子或者其組合，和/或其中存在至少一種張力改性劑諸如氯化鈉、精氨酸、甘氨酸、氯化鉀、糖或糖醇，和/或其中存在至少一種填充劑諸如甘氨酸、甘露醇、氯化鈉、精氨酸或蔗糖。12.—種組合物，包括分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白和松三糖。13.權(quán)利要求12所述的組合物，為液態(tài)或固態(tài)。14.權(quán)利要求12或13所述的組合物，進(jìn)一步包括填充劑、表面活性劑、緩沖劑、另外的穩(wěn)定劑和/或張力改性劑。15.松三糖用于穩(wěn)定分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白的應(yīng)用，尤其在進(jìn)程內(nèi)的穩(wěn)定中、在凍干法中、在溶液中，在純化和尤其是細(xì)胞培養(yǎng)中的生產(chǎn)過程中；或者用于長(zhǎng)期穩(wěn)定以尤其提高貨架期的應(yīng)用，其中所述長(zhǎng)期是至少6個(gè)月、特別是至少12個(gè)月、更特別是至少18個(gè)月，還更特別是24個(gè)月或36個(gè)月。中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述蛋白是因子VIII。中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述蛋白是因子IX。中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述蛋白是HES-G-CSF。16.權(quán)利要求12至1417.權(quán)利要求12至1418.權(quán)利要求12至1全文摘要通過將松三糖加入包含分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白的溶液中來穩(wěn)定分子量>10kDa的人血液蛋白或者人血漿蛋白的方法。文檔編號(hào)C07K14/755GK103003422SQ201180020282公開日2013年3月27日申請(qǐng)日期2011年4月20日優(yōu)先權(quán)日2010年4月20日發(fā)明者埃爾莎·伊瓦爾松,約瑟芬·奧斯特伯格,布里塔·里普納,烏爾里卡·尼爾松,艾琳·阿格奎斯特申請(qǐng)人:奧克塔法馬股份有限公司