本公開涉及基因工程植物和其他生物體的領(lǐng)域，并且更具體地涉及用于產(chǎn)生表現(xiàn)出羅漢果苷化合物，特別是羅漢果苷v的產(chǎn)量增加的植物和其他生物體的方法和組合物。本公開還涉及此類植物和其他生物體在生產(chǎn)用于食品和飲料的新成分(例如含有羅漢果苷的植物提取物、純化和部分純化組分)中的用途，以及由此產(chǎn)生的新食品和飲料(以及其他物質(zhì)組合物)。

背景技術(shù)：

1、除了其它工業(yè)之外，低卡路里或無卡路里甜味劑，特別是天然低卡路里或無卡路里甜味劑作為傳統(tǒng)高卡路里甜味劑和人工甜味劑的替代物對于食品和飲料工業(yè)變得越來越重要。這些替代甜味劑用作人工甜味劑或包含蔗糖、果糖和葡萄糖的高卡路里甜味劑的替代物。與一些人工甜味劑一樣，這些替代甜味劑中的一些提供了比相當(dāng)量的卡路里甜味劑更高的甜味效果，因此需要較少量的這些替代甜味劑來實現(xiàn)與糖相當(dāng)?shù)奶鸲取Ｈ欢?，一些低卡路里甜味劑生產(chǎn)起來可能是昂貴的和/或具有不利的味道特征和/或異味，包括但不限于甜味逗留、延遲甜味出現(xiàn)、負(fù)面口感和苦味、金屬味、清涼味、澀味和甘草樣味道。

2、一些天然植物產(chǎn)生低卡路里或無卡路里的甜味劑。例如，羅漢果苷，一類重要的天然甜味劑，在化學(xué)上是一類由羅漢果(也稱為luohan?guo；學(xué)名：siraitia?grosvenorii)天然產(chǎn)生的三萜糖苷或羅漢果醇糖苷。羅漢果苷含有“零”卡路里(每8盎司份小于5卡路里)，并且比蔗糖甜100-400倍。還報道了羅漢果苷具有多種重要的藥理學(xué)作用。然而，盡管像羅漢果的植物制造羅漢果苷，但是由于這些植物有限的天然或農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，從這些植物生產(chǎn)羅漢果苷是受限且昂貴的。此外，羅漢果更傾向于在亞熱帶山區(qū)生長并需要費(fèi)力的授粉來結(jié)果。此外，已經(jīng)嘗試在體外或在微生物中產(chǎn)生羅漢果苷，但是由于大量加工和其它問題，還沒有證明經(jīng)濟(jì)上可行。

3、因此，需要有效生產(chǎn)羅漢果苷的新組合物和方法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

0、發(fā)明概述

1、本公開通過提供用于在植物和其他生物體中有效且成本效益地生產(chǎn)羅漢果苷，特別是甜羅漢果苷，例如在分子中包含多于三個葡萄糖殘基的那些，包括但不限于羅漢果苷v、異羅漢果苷v、賽門苷i、α賽門苷i、羅漢果苷iv、羅漢果苷iva、羅漢果苷iii、羅漢果苷iiie、羅漢果苷iiia1和11-氧代-羅漢果苷v的新組合物和方法解決了本領(lǐng)域中的這些和其他問題。

2、本公開提供了轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子，其包含：a)第一多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:2具有至少91％序列同一性或與seq?id?no:86具有至少95％序列同一性的細(xì)胞色素p450多肽；b)第二多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:5具有至少90％序列同一性的葫蘆二烯醇合酶多肽；c)第三多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:7、seq?id?no:25、seqid?no:27、seq?id?no:29、seq?idno:31或seq?id?no:33具有至少90％序列同一性的細(xì)胞色素p450多肽；d)第四多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:9具有至少90％序列同一性的尿苷磷酸化酶依賴性糖基轉(zhuǎn)移酶多肽；e)第五多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:11具有至少90％序列同一性的尿苷磷酸化酶依賴性糖基轉(zhuǎn)移酶多肽；f)第六多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:13具有至少90％序列同一性的角鯊烯環(huán)氧酶多肽；g)第七多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:15具有至少90％序列同一性的環(huán)氧水解酶多肽；或h)第八多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:17、seq?id?no:274、seq?id?no:276或seq?id?no:278具有至少90％序列同一性的截短的3-羥基-3-甲基戊二酰-coa還原酶多肽；其中所述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八多核苷酸序列與異源啟動子可操作地連接，并且其中所述轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子產(chǎn)生至少第一羅漢果苷化合物。在一些實施方案中，所述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八多核苷酸序列與不同的異源啟動子可操作地連接。在一些實施方案中，所述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八多核苷酸序列中的至少兩個與單個異源啟動子可操作地連接。在其它實施方案中，所述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八多核苷酸序列中的一個或多個以多拷貝存在，并且與相同或不同的內(nèi)源或異源啟動子可操作地連接。

3、在各種實施方案中，植物是葫蘆科、茄科或菊科植物。在一些實施方案中，植物是南瓜屬、西瓜屬、黃瓜屬、苦瓜屬、茄屬或生菜屬植物。在進(jìn)一步的實施方案中，所述植物是西瓜、哈密瓜(cantaloupe)、蜜瓜、冬瓜、卡薩巴甜瓜、波斯瓜、香櫞瓜、甜瓜、白蘭瓜、克倫肖瓜(crenshaw?melon)、圣誕瓜、精靈瓜、卡維爾瓜(caravelle?melon)、哈密瓜(hamimelon)、巖瓜、金蘭卡威瓜(golden?langkawi?melon)、韓國瓜、薩提科伊瓜(saticoymelon)、加利亞瓜、玉露瓜、金獎瓜、十美瓜(ten?me?melon)、新世紀(jì)瓜、香蕉瓜、夕張王瓜(yubari?king?melon)、糖瓜、虎紋瓜、攀緣瓜、角瓜、拇指西瓜(cucamelon)、卡薩巴那瓜(casabanana?melon)、人參果、菠蘿瓜、迷彩瓜、金絲瓜、苦瓜、夏朗德瓜(charentaismelon)、鶴瓜、天箭瓜、蜜球瓜、紅毛丹瓜、秋甜瓜、快瓜、生菜、菠菜、水稻、燕麥、玉米、高粱、苦蘋果(藥西瓜(citrullus?colocynthis))、南瓜、甜菜、煙草、芒草、番茄、黃瓜、土豆、莧菜或本氏煙草(nicotiana?benthamiana)植物。在特定的實施方案中，所述植物是西瓜、番茄、生菜或黃瓜植物，或其它多葉大型生物質(zhì)綠色植物或其它可用作加工食品的基礎(chǔ)成分的糧食作物植物。在某些實施方案中，植物是單子葉植物或雙子葉植物。在一些實施方案中，植物部分是果實、葉、根、花、枝、細(xì)胞、胚乳、胚珠或花粉。在其它實施方案中，植物是可用于生產(chǎn)用于加工成食品的羅漢果苷的物種，其中羅漢果苷可以代替或部分代替對添加糖的需要。

4、在某些實施方案中，異源啟動子是可誘導(dǎo)的、植物的、細(xì)菌的、病毒的、合成的、組成型的、組織特異性的、發(fā)育調(diào)控的、細(xì)胞周期調(diào)控的、時間調(diào)控的、空間調(diào)控的和/或時空調(diào)控的啟動子。在其它實施方案中，異源啟動子是fsgt/pflt(seq?id?no:62)、fmvsgt(seqid?no:69)、csvmv(seq?id?no:68)、dmmv(seq?id?no:63)、hlvh12(seq?id?no:60)、nos(seqid?no:66)、scbv(seq?id?no:67)、dcmv(seq?id?no:61)、cmylcv(seq?id?no:64)、fs1_1(seq?id?no:70)、fe_3(seq?id?no:71)、e35s(seq?id?no:65)、atubq10(seq?id?no:259)、pclsv(seq?id?no:260)、fs4(seq?id?no:261)、atact2(seq?id?no:262)、增強(qiáng)的atef-1a(seq?id?no:263)、fuasfscp(seq?id?no:264)、fe4(seq?id?no:269)、黃瓜素(seq?id?no:270)或sgcds(seq?id?no:271)啟動子。在進(jìn)一步的實施方案中，所述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八多核苷酸序列與異源終止子可操作地連接。在更進(jìn)一步的實施方案中，所述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八異源終止子序列是gmaxmyb2(seq?id?no:74)、35s_t(seq?id?no:)、athsp18.2(seq?id?no:77)、atrbcs2b(seq?id?no:75)、atubq3(seq?id?no:73)、豌豆e9(seq?id?no:76)、豌豆3a(seq?id?no:72)、馬鈴薯ubi3(seq?id?no:78)、attubb9(seq?id?no:79)、atfad2(seq?id?no:265)、atndufa8(seq?idno:266)、cshsp17.3(seq?id?no:267)或cshsp22(seq?id?no:268)終止子序列。在另外的實施方案中，轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子進(jìn)一步包含選擇性標(biāo)記序列。在一些實施方案中，選擇性標(biāo)記序列是β葡糖醛酸糖苷酶、綠色熒光蛋白或抗生素抗性序列。在特定的實施方案中，選擇性標(biāo)記序列是潮霉素b磷酸轉(zhuǎn)移酶(hygr)或新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶ii(nptii)選擇性標(biāo)記序列。

5、在一些實施方案中，轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或細(xì)胞進(jìn)一步包含i)第九多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:19具有至少90％序列同一性的nadph:細(xì)胞色素p450還原酶多肽；或j)第十多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:21、seq?id?no:23、seq?id?no:120或seq?idno:126具有至少90％序列同一性的尿苷磷酸化酶依賴性糖基轉(zhuǎn)移酶多肽；k)第十一多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:227具有至少90％序列同一性的3-羥基-3-甲基戊二酰-coa合酶多肽；或l)第十二多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:256具有至少90％序列同一性的牻牛兒基二磷酸合酶多肽；其中第九、第十、第十一或第十二多核苷酸序列與異源啟動子可操作地連接。在其它實施方案中，轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或細(xì)胞進(jìn)一步包含2a接頭、絕緣子、選擇性標(biāo)記或填充序列。

6、在某些實施方案中，至少第一羅漢果苷化合物是非天然羅漢果醇前體、羅漢果醇、羅漢果苷或其代謝物或衍生物。在各種實施方案中，羅漢果苷是羅漢果苷ii?a、羅漢果苷iia1、羅漢果苷ii?a2、羅漢果苷ii?e、11-氧代-羅漢果苷ii、羅漢果苷iii、羅漢果苷iii?a1、羅漢果苷iii?a2、羅漢果苷iii?e、11-氧代-羅漢果苷iii、羅漢果苷iv、羅漢果苷iv?a、11-氧代-羅漢果苷iv、賽門苷i、羅漢果苷v、11-氧代-羅漢果苷v或羅漢果苷vi，或其異構(gòu)體。在另外的實施方案中，轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子產(chǎn)生至少10ng/g至30mg/g干重的至少第一羅漢果苷化合物。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子產(chǎn)生至少10ng/g、至少25ng/g、至少50ng/g、至少75ng/g、至少100ng/g、至少250ng/g、至少500ng/g、至少750ng/g、至少1mg/g、至少2.5mg/g、至少5mg/g、至少7.5mg/g、至少10mg/g、至少12.5mg/g、至少15mg/g、至少17.5mg/g、至少20mg/g、至少22.5mg/g、至少25mg/g、至少27.5mg/g或至少30mg/g的至少第一羅漢果苷化合物。在進(jìn)一步的實施方案中，至少第一羅漢果苷化合物的量高于相同物種的非轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子中的水平。在其它實施方案中，單個羅漢果苷化合物的比例不同于天然植物組織或果實或其它產(chǎn)生羅漢果苷化合物的植物或生物體中羅漢果苷化合物的比例。例如，由本公開的植物或生物體產(chǎn)生的羅漢果苷化合物與由天然植物組織或果實或其他植物或生物體產(chǎn)生的羅漢果苷化合物的比例可以是1.1:1、1.2:1、1.3:1、1.4:1、1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2:1、2.5:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、7.5:1、8:1、9:1、10:1、12.5:1、15:1、20:1、25:1、30:1、40:1、50:1、60:1、70:1、75:1、80:1、90:1、100:1、250:1、500:1、750:1、1000:1或更多，或1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.5、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:7.5、1:8、1:9、1:10、1:12.5、1:15、1:20、1:25、1:30、1:40、1:50、1:60、1:70、1:75、1:80、1:90、1:100、1:250、1:500、1:750、1:1000或更低。這些比例可適用于一種或多種以下羅漢果苷化合物：羅漢果苷ii?a、羅漢果苷ii?a1、羅漢果苷ii?a2、羅漢果苷ii?e、11-氧代-羅漢果苷ii、羅漢果苷iii、羅漢果苷iii?a1、羅漢果苷iii?a2、羅漢果苷iii?e、11-氧代-羅漢果苷iii、羅漢果苷iv、羅漢果苷iv?a、11-氧代-羅漢果苷iv、賽門苷i、羅漢果苷v、11-氧代-羅漢果苷v或羅漢果苷vi，或其異構(gòu)體。通常使用甜羅漢果苷化合物(例如分子中包含多于三個葡萄糖殘基的那些，包括但不限于羅漢果苷v、異羅漢果苷v、賽門苷i、α賽門苷i、羅漢果苷iv、羅漢果苷iva、羅漢果苷iii、羅漢果苷iii?e、羅漢果苷iii?a1和11-氧代-羅漢果苷v)與其它羅漢果苷化合物的較高比例。換句話說，這適用于一種或多種羅漢果苷化合物(例如羅漢果苷v)與一種或多種其它羅漢果苷化合物的比例。

7、本公開還提供了重組宿主細(xì)胞，其包含：a)第一多核苷酸序列，其編碼與seq?idno:2具有至少91％序列同一性或與seq?id?no:86具有至少95％序列同一性的細(xì)胞色素p450多肽；b)第二多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:5具有至少90％序列同一性的葫蘆二烯醇合酶多肽；c)第三多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:7、seq?id?no:25、seq?id?no:27、seq?id?no:29、seq?id?no:31或seq?id?no:33具有至少90％序列同一性的細(xì)胞色素p450多肽；d)第四多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:9具有至少90％序列同一性的尿苷磷酸化酶依賴性糖基轉(zhuǎn)移酶多肽；e)第五多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:11具有至少90％序列同一性的尿苷磷酸化酶依賴性糖基轉(zhuǎn)移酶多肽；f)第六多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:13具有至少90％序列同一性的角鯊烯環(huán)氧酶多肽；g)第七多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:15具有至少90％序列同一性的環(huán)氧水解酶多肽；或h)第八多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:17、seq?id?no:274、seq?id?no:276或seq?id?no:278具有至少90％序列同一性的截短的3-羥基-3-甲基戊二酰-coa還原酶多肽；其中所述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八多核苷酸序列與異源啟動子可操作地連接。在某些實施方案中，重組宿主細(xì)胞產(chǎn)生至少第一羅漢果苷化合物。

8、本公開還提供了由轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子產(chǎn)生的經(jīng)加工低卡路里食品或飲料產(chǎn)品，所述轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子包含：a)第一多核苷酸序列，其編碼與seq?idno:2具有至少91％序列同一性或與seq?id?no:86具有至少95％序列同一性的細(xì)胞色素p450多肽；b)第二多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:5具有至少90％序列同一性的葫蘆二烯醇合酶多肽；c)第三多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:7、seq?id?no:25、seq?id?no:27、seq?id?no:29、seq?id?no:31或seq?id?no:33具有至少90％序列同一性的細(xì)胞色素p450多肽；d)第四多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:9具有至少90％序列同一性的尿苷磷酸化酶依賴性糖基轉(zhuǎn)移酶多肽；e)第五多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:11具有至少90％序列同一性的尿苷磷酸化酶依賴性糖基轉(zhuǎn)移酶多肽；f)第六多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:13具有至少90％序列同一性的角鯊烯環(huán)氧酶多肽；g)第七多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:15具有至少90％序列同一性的環(huán)氧水解酶多肽；或h)第八多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:17、seq?id?no:274、seq?id?no:276或seq?id?no:278具有至少90％序列同一性的截短的3-羥基-3-甲基戊二酰-coa還原酶多肽；其中所述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八多核苷酸序列與異源啟動子可操作地連接，并且其中所述轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子產(chǎn)生至少第一羅漢果苷化合物。在某些實施方案中，所述產(chǎn)品由轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子的果實、蔬菜、豆類、塊莖或谷物的汁、提取物、粉末、果實或皮產(chǎn)生。

9、本公開另外提供由轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子產(chǎn)生的汁、粉末或提取物，所述轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子包含：a)第一多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:2具有至少91％序列同一性或與seq?id?no:86具有至少95％序列同一性的細(xì)胞色素p450多肽；b)第二多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:5具有至少90％序列同一性的葫蘆二烯醇合酶多肽；c)第三多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:7、seq?id?no:25、seq?id?no:27、seq?id?no:29、seq?id?no:31或seq?id?no:33具有至少90％序列同一性的細(xì)胞色素p450多肽；d)第四多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:9具有至少90％序列同一性的尿苷磷酸化酶依賴性糖基轉(zhuǎn)移酶多肽；e)第五多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:11具有至少90％序列同一性的尿苷磷酸化酶依賴性糖基轉(zhuǎn)移酶多肽；f)第六多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:13具有至少90％序列同一性的角鯊烯環(huán)氧酶多肽；g)第七多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:15具有至少90％序列同一性的環(huán)氧水解酶多肽；或h)第八多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:17、seq?id?no:274、seq?id?no:276或seq?id?no:278具有至少90％序列同一性的截短的3-羥基-3-甲基戊二酰-coa還原酶多肽；其中所述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八多核苷酸序列與異源啟動子可操作地連接，并且其中所述轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子產(chǎn)生至少第一羅漢果苷化合物。

10、本公開還提供了重組dna分子，其包含：a)第一多核苷酸序列，其編碼與seq?idno:2具有至少91％序列同一性或與seq?id?no:86具有至少95％序列同一性的細(xì)胞色素p450多肽；b)第二多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:5具有至少90％序列同一性的葫蘆二烯醇合酶多肽；c)第三多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:7、seq?id?no:25、seq?id?no:27、seq?id?no:29、seq?id?no:31或seq?id?no:33具有至少90％序列同一性的細(xì)胞色素p450多肽；d)第四多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:9具有至少90％序列同一性的尿苷磷酸化酶依賴性糖基轉(zhuǎn)移酶多肽；e)第五多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:11具有至少90％序列同一性的尿苷磷酸化酶依賴性糖基轉(zhuǎn)移酶多肽；f)第六多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:13具有至少90％序列同一性的角鯊烯環(huán)氧酶多肽；g)第七多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:15具有至少90％序列同一性的環(huán)氧水解酶多肽；或h)第八多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:17、seq?id?no:274、seq?id?no:276或seq?id?no:278具有至少90％序列同一性的截短的3-羥基-3-甲基戊二酰-coa還原酶多肽，其中所述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八多核苷酸序列與異源啟動子可操作地連接。在某些實施方案中，所述述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八多核苷酸序列與不同的異源啟動子可操作地連接。在其它實施方案中，所述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八多核苷酸序列中的至少兩個與單個異源啟動子可操作地連接。在一些實施方案中，所述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八多核苷酸序列中的一個或多個以多拷貝存在，并且與相同或不同的內(nèi)源或異源啟動子可操作地連接。

11、本公開還提供了包含dna分子，其包含編碼與seq?id?no:2具有至少91％序列同一性或與seq?id?no:86具有至少95％序列同一性的細(xì)胞色素p450多肽的多核苷酸序列。在某些實施方案中，dna分子與異源啟動子可操作地連接。本公開還提供了表現(xiàn)出基因調(diào)控功能活性的dna分子，其包含選自以下的多核苷酸序列：a)與seq?id?no:70或71具有至少90％或95％序列同一性并表現(xiàn)出啟動子活性的序列；b)包含seq?id?no:70或71的序列；和c)seqid?no:70或71的片段，其中所述片段表現(xiàn)出啟動子活性；其中所述dna分子與異源可轉(zhuǎn)錄多核苷酸分子可操作地連接。在某些實施方案中，seq?id?no:70和seq?id?no:71可導(dǎo)致植物果實中增加的表達(dá)。

12、本公開還提供了產(chǎn)生至少第一羅漢果苷化合物的方法，其包括培育轉(zhuǎn)基因植物或生物體，所述轉(zhuǎn)基因植物或生物體包含：a)第一多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:2具有至少91％序列同一性或與seq?id?no:86具有至少95％序列同一性的細(xì)胞色素p450多肽；b)第二多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:5具有至少90％序列同一性的葫蘆二烯醇合酶多肽；c)第三多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:7、seq?id?no:25、seq?id?no:27、seq?idno:29、seq?id?no:31或seq?id?no:33具有至少90％序列同一性的細(xì)胞色素p450多肽；d)第四多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:9具有至少90％序列同一性的尿苷磷酸化酶依賴性糖基轉(zhuǎn)移酶多肽；e)第五多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:11具有至少90％序列同一性的尿苷磷酸化酶依賴性糖基轉(zhuǎn)移酶多肽；f)第六多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:13具有至少90％序列同一性的角鯊烯環(huán)氧酶多肽；g)第七多核苷酸序列，其編碼與seq?id?no:15具有至少90％序列同一性的環(huán)氧水解酶多肽；或h)第八多核苷酸序列，其編碼與seq?idno:17、seq?id?no:274、seq?id?no:276或seq?id?no:278具有至少90％序列同一性的截短的3-羥基-3-甲基戊二酰-coa還原酶多肽，其中所述第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八多核苷酸序列與異源啟動子可操作地連接，并且其中所述轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子產(chǎn)生至少第一羅漢果苷化合物。在某些實施方案中，轉(zhuǎn)基因植物在植物的植物部分或種子中產(chǎn)生至少第一羅漢果苷化合物。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)基因植物在植物的果實或葉中產(chǎn)生至少第一羅漢果苷化合物。在另外的實施方案中，所述方法還包括從轉(zhuǎn)基因植物分離至少第一羅漢果苷化合物的步驟。在其它實施方案中，至少第一羅漢果苷化合物從轉(zhuǎn)基因植物的植物部分或種子分離、純化或部分純化。在其它實施方案中，至少第一羅漢果苷化合物分離自轉(zhuǎn)基因植物的果實、葉、蔬菜、豆類、塊莖或谷物。在進(jìn)一步的實施方案中，從轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或種子中純化或部分純化羅漢果苷化合物的組合。

13、本公開還提供了一種組合物，其包含：a)約80％羅漢果苷v、約15％11-氧代-羅漢果苷v和約5％羅漢果苷iii-a1；或b)約40％賽門苷i、約40％羅漢果苷v和約20％11-氧代-羅漢果苷v。在某些實施方案中，所述組合物包含約75％、約76％、約77％、約78％、約79％、約80％、約81％、約82％、約83％、約84％或約85％的羅漢果苷v，約10％，約11％，約12％，約13％，約14％，約15％，約16％，約17％，約18％，約19％或約20％的11-氧代-羅漢果苷v和約1％、約2％、約3％、約4％、約5％、約6％、約7％、約8％、約9％或約10％的羅漢果苷iii?a1。在一些實施方案中，所述組合物包含約35％、約36％、約37％、約38％、約39％、約40％、約41％、約42％、約43％、約44％或約45％的賽門苷i，約35％、約36％、約37％、約38％、約39％、約40％、約41％、約42％、約43％、約44％或約45％的羅漢果苷v和約15％、約16％、約17％、約18％、約19％、約20％、約21％、約22％、約23％、約24％或約25％的11-氧代-羅漢果苷v。在其它實施方案中，組合物是液體。在其它實施方案中，組合物是干粉。