背景技術(shù)：
1、異源蛋白質(zhì)和/或核酸分子可以用于在細(xì)胞中引起所希望的應(yīng)答。異源蛋白質(zhì)和/或核酸分子可以調(diào)控感興趣的基因(例如，轉(zhuǎn)基因和/或內(nèi)源基因)以對(duì)細(xì)胞(例如，干細(xì)胞)進(jìn)行編程(例如，分化、去分化)。在一些情況下，已經(jīng)采取基于核酸內(nèi)切酶的技術(shù)(例如，成簇的規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列(crispr)相關(guān)聯(lián)蛋白質(zhì)或“crispr/cas”)用于操縱多核苷酸序列、其表觀遺傳修飾和/或其表達(dá)水平。例如，crispr/cas技術(shù)可以通過其多功能性和易于編程的特性來表征，并且可以用于促進(jìn)跨不同物種的基因組編輯。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本公開提供用于調(diào)控靶基因的表達(dá)或活性的方法和系統(tǒng)。本公開的一些方面提供用于分化和去分化終末分化細(xì)胞的方法和系統(tǒng)。本公開的一些方面提供用于分化和去分化干細(xì)胞的方法和系統(tǒng)。
2、在一方面，本公開提供一種用于將第一細(xì)胞類型的多個(gè)細(xì)胞(第一多個(gè)細(xì)胞)轉(zhuǎn)化為第二細(xì)胞類型的多個(gè)細(xì)胞(第二多個(gè)細(xì)胞)的方法，該方法包括：使第一多個(gè)細(xì)胞與表現(xiàn)出特異性結(jié)合至編碼herv的基因的異源基因調(diào)節(jié)物接觸，以調(diào)控herv的表達(dá)水平或表觀遺傳譜并實(shí)現(xiàn)從第一多個(gè)細(xì)胞至第二多個(gè)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。
3、在另一方面，本公開提供一種用于將第一細(xì)胞類型的多個(gè)細(xì)胞(第一多個(gè)細(xì)胞)轉(zhuǎn)化為第二細(xì)胞類型的多個(gè)細(xì)胞(第二多個(gè)細(xì)胞)的系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括：表現(xiàn)出特異性結(jié)合至編碼herv的基因的異源基因調(diào)節(jié)物，以調(diào)控herv的表達(dá)水平或表觀遺傳譜并實(shí)現(xiàn)從第一多個(gè)細(xì)胞至第二多個(gè)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。
4、在另一方面，本公開提供一種用于將多個(gè)分化細(xì)胞轉(zhuǎn)化為多個(gè)干細(xì)胞的方法，該方法包括：使多個(gè)分化細(xì)胞與包含多個(gè)門單元的異源基因回路接觸，其中異源基因回路是可激活的以誘導(dǎo)多個(gè)門單元以順序方式調(diào)節(jié)多個(gè)不同靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化，并且其中多個(gè)門單元包括：(i)第一門單元，其被預(yù)配置為調(diào)控多個(gè)不同靶內(nèi)源基因中的第一靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜，其中第一靶內(nèi)源基因包括胚胎基因組激活(ega)富集的alu基序(eea)；和ii)第二門單元，其被預(yù)配置為調(diào)控多個(gè)不同靶內(nèi)源基因中的第二靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜，其中第二靶內(nèi)源基因包括選自oct4、sox2、klf4和myc的細(xì)胞去分化因子，其中，在激活異源基因回路時(shí)，多個(gè)門單元操作以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。
5、在另一方面，本公開提供一種用于將多個(gè)分化細(xì)胞轉(zhuǎn)化為多個(gè)干細(xì)胞的系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括：包含多個(gè)門單元的異源基因回路，其中異源基因回路是可激活的以誘導(dǎo)多個(gè)門單元以順序方式調(diào)節(jié)多個(gè)不同靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化，其中多個(gè)門單元包括：(i)第一門單元，其被預(yù)配置為調(diào)控多個(gè)不同靶內(nèi)源基因中的第一靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜，其中第一靶內(nèi)源基因包括胚胎基因組激活(ega)富集的alu基序(eea)；和(ii)第二門單元，其被預(yù)配置為調(diào)控多個(gè)不同靶內(nèi)源基因中的第二靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜，其中第二靶內(nèi)源基因包括選自oct4、sox2、klf4和myc的細(xì)胞去分化因子，其中，在激活異源基因回路時(shí)，多個(gè)門單元操作以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。
6、在另一方面，本公開提供一種用于將多個(gè)分化細(xì)胞轉(zhuǎn)化為多個(gè)干細(xì)胞的方法，該方法包括：使多個(gè)分化細(xì)胞與包含多個(gè)門單元的異源基因回路接觸，其中異源基因回路是可激活的以誘導(dǎo)多個(gè)門單元以順序方式調(diào)節(jié)多個(gè)不同靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜水平以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化，并且其中多個(gè)門單元包括：(i)第一門單元，其被預(yù)配置為調(diào)控多個(gè)不同靶內(nèi)源基因中的第一靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜水平，其中第一靶內(nèi)源基因包括選自oct4、sox2、klf4和myc的細(xì)胞去分化因子；和(ii)第二門單元，其被預(yù)配置為調(diào)控多個(gè)不同靶內(nèi)源基因中的第二靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜水平，其中第二靶內(nèi)源基因包括選自oct4、sox2、klf4和myc的不同的細(xì)胞去分化因子，其中，在激活異源基因回路時(shí)，多個(gè)門單元操作以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。
7、在另一方面，本公開提供一種用于將多個(gè)分化細(xì)胞轉(zhuǎn)化為多個(gè)干細(xì)胞的系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括：包含多個(gè)門單元的異源基因回路，其中異源基因回路是可激活的以誘導(dǎo)多個(gè)門單元以順序方式調(diào)節(jié)多個(gè)不同靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜水平以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化，并且其中多個(gè)門單元包括：(i)第一門單元，其被預(yù)配置為調(diào)控多個(gè)不同靶內(nèi)源基因中的第一靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜水平，其中第一靶內(nèi)源基因包括選自oct4、sox2、klf4和myc的細(xì)胞去分化因子；和(ii)第二門單元，其被預(yù)配置為調(diào)控多個(gè)不同靶內(nèi)源基因中的第二靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜水平，其中第二靶內(nèi)源基因包括選自oct4、sox2、klf4和myc的不同的細(xì)胞去分化因子，其中，在激活異源基因回路時(shí)，多個(gè)門單元操作以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。
8、通過其中僅示出和描述了本公開的說明性實(shí)施方案的以下詳細(xì)描述，本公開的其他方面和優(yōu)點(diǎn)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將變得顯而易見。如將認(rèn)識(shí)到的，本公開能夠具有其他和不同的實(shí)施方案，并且其若干細(xì)節(jié)能夠在各種明顯方面進(jìn)行修改，所有這些都不脫離本公開。因此，附圖和描述本質(zhì)上應(yīng)被視為說明性的，而不是限制性的。
9、援引并入
10、本說明書中提到的所有出版物、專利和專利申請(qǐng)都通過引用并入本文，其并入程度如同每個(gè)單個(gè)的出版物、專利或?qū)＠暾?qǐng)被明確且單個(gè)地指示通過引用并入。就通過引用并入的出版物和專利或?qū)＠暾?qǐng)與本說明書中包含的公開內(nèi)容相矛盾而言，本說明書旨在取代和/或優(yōu)先于任何此類矛盾的材料。
1.一種用于將第一細(xì)胞類型的多個(gè)細(xì)胞(第一多個(gè)細(xì)胞)轉(zhuǎn)化為第二細(xì)胞類型的多個(gè)細(xì)胞(第二多個(gè)細(xì)胞)的方法，所述方法包括：
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中(i)所述第一多個(gè)細(xì)胞包括終末分化細(xì)胞并且(ii)所述第二多個(gè)細(xì)胞包括多能干細(xì)胞。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述接觸增強(qiáng)herv的所述表達(dá)水平。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物表現(xiàn)出特異性結(jié)合至編碼herv-k的基因。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物表現(xiàn)出特異性結(jié)合至編碼ltr5hs的基因。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物表現(xiàn)出特異性結(jié)合至多核苷酸序列，所述多核苷酸序列表現(xiàn)出與選自seq?id?no:1-12及其互補(bǔ)序列的一個(gè)或多個(gè)成員的多肽序列具有至少約80％序列同一性，任選地具有尿嘧啶至胸腺嘧啶的轉(zhuǎn)化。
7.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物表現(xiàn)出特異性結(jié)合至多核苷酸序列，所述多核苷酸序列表現(xiàn)出與選自seq?id?no:1-12及其互補(bǔ)序列的一個(gè)或多個(gè)成員的多肽序列具有至少約90％序列同一性，任選地具有尿嘧啶至胸腺嘧啶的轉(zhuǎn)化。
8.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物包括多核苷酸序列，所述多核苷酸序列表現(xiàn)出與選自seq?id?no:1-12及其互補(bǔ)序列的一個(gè)或多個(gè)成員的多肽序列具有至少約80％序列同一性。
9.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物包括多核苷酸序列，所述多核苷酸序列表現(xiàn)出與選自seq?id?no:1-12及其互補(bǔ)序列的一個(gè)或多個(gè)成員的多肽序列具有至少約90％序列同一性。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述接觸實(shí)現(xiàn)或足以實(shí)現(xiàn)所述轉(zhuǎn)化，而不使用另外的異源基因調(diào)節(jié)物，所述異源基因調(diào)節(jié)物表現(xiàn)出特異性結(jié)合至另外的靶基因，所述另外的靶基因包括選自oct4、sox2、klf4和myc的一種或多種細(xì)胞去分化因子。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述另外的靶基因包括oct4、sox2、klf4和myc。
12.如權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包括使所述第一多個(gè)細(xì)胞與另外的異源基因調(diào)節(jié)物接觸，所述異源基因調(diào)節(jié)物表現(xiàn)出特異性結(jié)合至另外的基因，所述另外的基因包括選自oct4、sox2、klf4和myc的一種或多種細(xì)胞去分化因子，以實(shí)現(xiàn)所述基因和所述另外的基因的順序調(diào)控。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述基因的調(diào)控發(fā)生在所述另外的基因的調(diào)控之前、同時(shí)或之后。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述基因的所述調(diào)控發(fā)生在所述另外的基因的所述調(diào)控之前。
15.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述另外的基因包括oct4。
16.如權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包括使所述第一多個(gè)細(xì)胞與表現(xiàn)出特異性結(jié)合至胚胎基因組激活(ega)富集的alu基序(eea)的另外的異源基因調(diào)節(jié)物接觸，以實(shí)現(xiàn)所述轉(zhuǎn)化。
17.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述接觸包括使所述第一多個(gè)細(xì)胞與包含多個(gè)門單元的異源基因回路接觸，其中所述異源基因回路是可激活的以誘導(dǎo)所述多個(gè)門單元以順序方式調(diào)節(jié)所述基因和不同的基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜以實(shí)現(xiàn)所述轉(zhuǎn)化，并且其中所述多個(gè)門單元包括：
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述異源基因回路被預(yù)配置為在調(diào)控所述不同的基因的表觀遺傳譜的所述表達(dá)水平之前調(diào)控所述基因的表觀遺傳譜的所述表達(dá)水平。
19.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述不同的基因包括選自以下中的一個(gè)或多個(gè)成員：oct3、oct4、sox2、klf4、c-myc、mir-302、mir-307、eea、zscan4、dux4、otx2、abce1、col5a1、gal4nt13、duxa、duxb、argfx、cphx1、cphx2、tprx1、dppa3、nasp、atp2b1、nfat、h1foo和camkii。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中所述不同的基因包括選自以下中的一個(gè)或多個(gè)成員：oct4、sox2、klf4、c-myc、mir-302、mir-307和eea。
21.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物包括用于所述特異性結(jié)合至編碼herv的所述基因的異源核酸內(nèi)切酶。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述異源核酸內(nèi)切酶是cas蛋白。
23.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物進(jìn)一步包括基因激活因子。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述基因激活因子選自vp16、vp64、p65、rta和vp64-p65-rta融合物(vpr)。
25.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述基因激活因子偶聯(lián)至所述異源核酸內(nèi)切酶。
26.一種用于將第一細(xì)胞類型的多個(gè)細(xì)胞(第一多個(gè)細(xì)胞)轉(zhuǎn)化為第二細(xì)胞類型的多個(gè)細(xì)胞(第二多個(gè)細(xì)胞)的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括：
27.如權(quán)利要求26所述的系統(tǒng)，其中(i)所述第一多個(gè)細(xì)胞包括終末分化細(xì)胞并且(ii)所述第二多個(gè)細(xì)胞包括多能干細(xì)胞。
28.如權(quán)利要求26所述的系統(tǒng)，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物的所述特異性結(jié)合至所述基因?qū)崿F(xiàn)增強(qiáng)的herv的表達(dá)水平。
29.如權(quán)利要求26所述的系統(tǒng)，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物表現(xiàn)出特異性結(jié)合至編碼herv-k的基因。
30.如權(quán)利要求26所述的系統(tǒng)，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物表現(xiàn)出特異性結(jié)合至編碼ltr5hs的基因。
31.如權(quán)利要求30所述的系統(tǒng)，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物表現(xiàn)出特異性結(jié)合至多核苷酸序列，所述多核苷酸序列表現(xiàn)出與選自seq?id?no:1-12及其互補(bǔ)序列的一個(gè)或多個(gè)成員的多肽序列具有至少約80％序列同一性，任選地具有尿嘧啶至胸腺嘧啶的轉(zhuǎn)化。
32.如權(quán)利要求30所述的系統(tǒng)，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物表現(xiàn)出特異性結(jié)合至多核苷酸序列，所述多核苷酸序列表現(xiàn)出與選自seq?id?no:1-12及其互補(bǔ)序列的一個(gè)或多個(gè)成員的多肽序列具有至少約90％序列同一性，任選地具有尿嘧啶至胸腺嘧啶的轉(zhuǎn)化。
33.如權(quán)利要求30所述的系統(tǒng)，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物包括多核苷酸序列，所述多核苷酸序列表現(xiàn)出與選自seq?id?no:1-12及其互補(bǔ)序列的一個(gè)或多個(gè)成員的多肽序列具有至少約80％序列同一性。
34.如權(quán)利要求30所述的系統(tǒng)，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物包括多核苷酸序列，所述多核苷酸序列表現(xiàn)出與選自seq?id?no:1-12及其互補(bǔ)序列的一個(gè)或多個(gè)成員的多肽序列具有至少約90％序列同一性。
35.如權(quán)利要求26所述的系統(tǒng)，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物的所述特異性結(jié)合至所述基因被配置為或足以實(shí)現(xiàn)所述轉(zhuǎn)化而不使用另外的異源基因調(diào)節(jié)物，所述另外的異源基因調(diào)節(jié)物表現(xiàn)出特異性結(jié)合至另外的靶基因，所述另外的靶基因包括選自oct4、sox2、klf4和myc的一種或多種細(xì)胞去分化因子。
36.如權(quán)利要求35所述的系統(tǒng)，其中所述另外的靶基因包括oct4、sox2、klf4和myc。
37.如權(quán)利要求26所述的系統(tǒng)，進(jìn)一步包括表現(xiàn)出特異性結(jié)合至另外的基因的另外的異源基因調(diào)節(jié)物，所述另外的基因包括選自oct4、sox2、klf4和myc的一種或多種細(xì)胞去分化因子，以實(shí)現(xiàn)所述基因和所述另外的基因的順序調(diào)控。
38.如權(quán)利要求37所述的系統(tǒng)，其中所述基因的調(diào)控發(fā)生在所述另外的基因的調(diào)控之前、同時(shí)或之后。
39.如權(quán)利要求38所述的系統(tǒng)，其中所述基因的所述調(diào)控發(fā)生在所述另外的基因的所述調(diào)控之前。
40.如權(quán)利要求38所述的系統(tǒng)，其中所述另外的基因包括oct4。
41.如權(quán)利要求26所述的系統(tǒng)，進(jìn)一步包括表現(xiàn)出特異性結(jié)合至胚胎基因組激活(ega)富集的alu基序(eea)的另外的異源基因調(diào)節(jié)物，以實(shí)現(xiàn)所述轉(zhuǎn)化。
42.如權(quán)利要求26所述的系統(tǒng)，其中所述系統(tǒng)包括包含多個(gè)門單元的異源基因回路，其中所述異源基因回路是可激活的以誘導(dǎo)所述多個(gè)門單元以順序方式調(diào)節(jié)所述基因和不同的基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜以實(shí)現(xiàn)所述轉(zhuǎn)化，并且其中所述多個(gè)門單元包括：
43.如權(quán)利要求42所述的系統(tǒng)，其中所述異源基因回路被預(yù)配置為在調(diào)控所述不同的基因的表觀遺傳譜的所述表達(dá)水平之前調(diào)控所述基因的表觀遺傳譜的所述表達(dá)水平。
44.如權(quán)利要求42所述的系統(tǒng)，其中所述不同的基因包括選自以下中的一個(gè)或多個(gè)成員：oct3、oct4、sox2、klf4、c-myc、mir-302、mir-307、eea、zscan4、dux4、otx2、abce1、col5a1、gal4nt13、duxa、duxb、argfx、cphx1、cphx2、tprx1、dppa3、nasp、atp2b1、nfat、h1foo和camkii。
45.如權(quán)利要求44所述的系統(tǒng)，其中所述不同的基因包括選自以下中的一個(gè)或多個(gè)成員：oct4、sox2、klf4、c-myc、mir-302、mir-307和eea。
46.如權(quán)利要求26所述的系統(tǒng)，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物包括用于所述特異性結(jié)合至編碼herv的所述基因的異源核酸內(nèi)切酶。
47.如權(quán)利要求46所述的系統(tǒng)，其中所述異源核酸內(nèi)切酶是cas蛋白。
48.如權(quán)利要求46所述的系統(tǒng)，其中所述異源基因調(diào)節(jié)物進(jìn)一步包括基因激活因子。
49.如權(quán)利要求48所述的系統(tǒng)，其中所述基因激活因子選自vp16、vp64、p65、rta和vp64-p65-rta融合物(vpr)。
50.如權(quán)利要求48所述的系統(tǒng)，其中所述基因激活因子偶聯(lián)至所述異源核酸內(nèi)切酶。
51.一種用于將多個(gè)分化細(xì)胞轉(zhuǎn)化為多個(gè)干細(xì)胞的方法，所述方法包括：
52.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述多個(gè)干細(xì)胞包括多個(gè)多能干細(xì)胞。
53.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述異源基因回路被預(yù)配置使得在激活所述異源基因回路時(shí)，(i)所述第一靶內(nèi)源基因的所述表達(dá)水平或表觀遺傳譜在(ii)所述第二靶內(nèi)源基因的所述表達(dá)水平或表觀遺傳譜之前受到調(diào)控。
54.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述多個(gè)門單元包括第三門單元，所述第三門單元被預(yù)配置為調(diào)控所述多個(gè)不同靶內(nèi)源基因中的第三靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜，其中所述第三靶內(nèi)源基因包括選自oct4、sox2、klf4和myc的不同的細(xì)胞去分化因子，
55.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述第二靶內(nèi)源基因包括oct4。
56.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述第三靶內(nèi)源基因包括sox2。
57.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述多個(gè)門單元包括第三門單元，所述第三門單元被預(yù)配置為調(diào)控所述第二靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜，
58.如權(quán)利要求57所述的方法，其中所述細(xì)胞去分化因子是myc。
59.如權(quán)利要求57所述的方法，其中所述細(xì)胞去分化因子是sox2。
60.一種用于將多個(gè)分化細(xì)胞轉(zhuǎn)化為多個(gè)干細(xì)胞的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括：
61.一種用于將多個(gè)分化細(xì)胞轉(zhuǎn)化為多個(gè)干細(xì)胞的方法，所述方法包括：
62.如權(quán)利要求61所述的方法，其中所述異源基因回路被預(yù)配置使得激活所述第一門單元實(shí)現(xiàn)激活所述第二門單元，使得(i)所述第一靶內(nèi)源基因的所述表達(dá)水平或表觀遺傳譜水平的調(diào)控發(fā)生在(ii)所述第二靶內(nèi)源基因的所述表達(dá)水平或表觀遺傳譜水平的調(diào)控之前。
63.如權(quán)利要求62所述的方法，其中所述第一靶內(nèi)源基因是oct4，使得oct4的所述表達(dá)水平或表觀遺傳譜水平的所述調(diào)控發(fā)生在klf4的表達(dá)水平或表觀遺傳譜水平的調(diào)控之前。
64.如權(quán)利要求61所述的方法，其中所述多個(gè)干細(xì)胞包括多個(gè)多能干細(xì)胞。
65.如權(quán)利要求61所述的方法，其中所述第一靶內(nèi)源基因包括oct4，并且所述第二靶內(nèi)源基因包括選自sox2、klf4和myc的一個(gè)或多個(gè)成員。
66.如權(quán)利要求61所述的方法，其中所述第一靶內(nèi)源基因包括選自oct4、klf4和myc的一個(gè)或多個(gè)成員，并且所述第二靶內(nèi)源基因包括sox2。
67.如權(quán)利要求61所述的方法，其中所述多個(gè)門單元進(jìn)一步包括第三門單元，所述第三門單元被預(yù)配置為調(diào)控所述第一靶內(nèi)源基因或所述第二靶內(nèi)源基因的表達(dá)水平或表觀遺傳譜水平，以分別實(shí)現(xiàn)所述第一靶內(nèi)源基因或所述第二靶內(nèi)源基因的兩個(gè)或更多個(gè)順序調(diào)控。
68.如權(quán)利要求67所述的方法，其中sox2經(jīng)受所述兩個(gè)或更多個(gè)順序調(diào)控。
69.如權(quán)利要求61所述的方法，其中調(diào)節(jié)所述多個(gè)不同靶內(nèi)源基因的所述表達(dá)水平或表觀遺傳譜水平包括增強(qiáng)所述多個(gè)不同靶內(nèi)源基因的所述表達(dá)水平或表觀遺傳譜水平。
70.一種用于將多個(gè)分化細(xì)胞轉(zhuǎn)化為多個(gè)干細(xì)胞的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括：