背景技術(shù)：

1、載脂蛋白c3(apoc3)是由apoc3基因編碼的蛋白質(zhì)。apoc3可以由肝臟以及小腸分泌，并且可以在抑制肝臟對富含甘油三酯的顆粒的攝取中起重要作用。因此，高血漿apoc3與高甘油三酯和發(fā)展心血管疾病的風險增加有關(guān)。因此，需要開發(fā)一種有效的、無細胞毒性的apoc3抑制劑。本文所述的多核酸分子、其綴合物和方法滿足了這一需求并提供相關(guān)優(yōu)勢。

2、援引并入

3、本說明書中提及的所有出版物、專利和專利申請均以引用的方式并入本文，如同每一份單獨的出版物、專利或?qū)＠暾埦幻鞔_且單獨地指明以引用的方式并入本文。如果通過引用并入的出版物、專利或?qū)＠暾埮c說明書中含有的公開內(nèi)容相矛盾，則說明書旨在取代和/或優(yōu)先于任何此類矛盾材料。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為滿足對于更有效的apoc3抑制劑的需求，本發(fā)明一方面提供了一種用于調(diào)節(jié)載脂蛋白c3(apoc3)基因的表達的多核酸分子，其包含有義鏈和反義鏈，其中反義鏈包含與選自seq?id?no:1-108、433-456、529-534和553-563的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％相同的核酸序列。在一些情況下，反義鏈包含核酸序列，該核酸序列包含至少14、15、16、17、18、19、20、21或22個選自seq?id?no:1-108、433-456、529-534和553-563的核酸序列的連續(xù)序列，具有不超過1、2、3或4個錯配。在一些情況下，有義鏈包含與選自seqid?no:217-324、481-504、541-546和575-585的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％相同的核酸序列。在一些情況下，有義鏈包含核酸序列，該核酸序列包含至少14、15、16、17、18、19或20個選自seq?id?no:217-324、481-504、541-546和575-585的核酸序列的連續(xù)序列，具有不超過1、2、3或4個錯配。

2、在一些情況下，有義鏈包含seq?id?no:217-324、481-504、541-546和575-585的核酸序列，并且反義鏈包含選自seq?id?no:1-108、433-456、529-534和553-563的核酸序列。

3、在一些情況下，多核酸分子包含(1)2’-氟修飾的核苷酸；(2)2’-o-甲基修飾的核苷酸；(3)2’-脫氧修飾的核苷酸，或(4)經(jīng)修飾的核苷酸間鍵聯(lián)。在一些情況下，多核酸分子在5’端處或3’端處包含至少兩個連續(xù)的經(jīng)修飾的核苷酸間鍵聯(lián)。

4、在一些情況下，反義鏈包含5’-nnfnnnnfnnfnfnnnnnfnnfnnnnnnn-3’、5’-nnfnnnnfnnnnnnnnfnnfnnnnnnn-3’?、?5’-nnfnnnnnfnnnnnfnnfnnnnnnnnn-3’?、?5’-nnfnnnnnfnnnnnfnnfnnfnnnnnnn-3’?或?5’-nnfnnnnnnnnnnfnnfnnfnnnnnnn-3’，其中“nf”代表2’-氟修飾的核苷酸，并且其中“n”代表2’-o-甲基修飾的核苷酸。在一些情況下，有義鏈包含5’-nnnnnnnfnnfnnfnnnnnnnnnn-3’、5’-nnnnnnnfnnfnfnfnnnnnnnnnn-3’或5’-nnnnnnnnnfnfnfnnnnnnnnnn-3’，其中“nf”代表2’-氟修飾的核苷酸，并且其中“n”代表2’-o-甲基修飾的核苷酸。在一些情況下，多核酸分子的有義鏈包含5’-nfnnfnnfnnfnnfnfnfnnfnnfnnfnnfnnf-3’，多核酸分子的反義鏈包含5’-nnfnnfnnfnnfnnfnnnnfnnfnnfnnfnnn-3’；多核酸分子的有義鏈包含5’-nnnnnnnfnnfnfnfnnnnnnnnnn-3’，多核酸分子的反義鏈包含5’-nnfnnnnfnnfnfnnnnnfnnfnnnnnnn-3’；多核酸分子的有義鏈包含5’-nnnnnnnnnfnnfnnnnnnnnnn-3’，其中多核酸分子的反義鏈包含5’-nnfnnnnnnnnnnfnnfnnnnnnnnn-3’；多核酸分子的有義鏈包含5’-nnnnnnnfnnfnnfnnnnnnnnnn-3’，多核酸分子的反義鏈包含5’-nnfnnnnnnnnnnfnnfnnfnnnnnnn-3’；或者，多核酸分子的有義鏈包含5’-nnnnnnnfnnfnnfnnnnnnnnnn-3’，多核酸分子的反義鏈包含5’-nnfnnnnnfnnnnnfnnfnnfnnnnnnn-3’，其中“nf”代表2’-氟修飾的核苷酸，并且其中“n”代表2’-o-甲基修飾的核苷酸。

5、在一些情況下，經(jīng)修飾的核苷酸間鍵聯(lián)是硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯(lián)。在一些情況下，經(jīng)修飾的核苷酸間鍵聯(lián)包含立體化學上富集的硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯(lián)。

6、在一些情況下，有義鏈包含與選自no:325-432、505-528、547-552和586-596的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％相同的核酸序列。在一些情況下，反義鏈包含與選自seq?id?no:109-216、457-480、535-540和564-574的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％相同的核酸序列。在一些情況下，有義鏈包含選自seq?id?no:325-432、505-528、547-552和586-596的核酸序列，并且反義鏈包含選自seq?id?no:109-216、457-480、535-540和564-574的核酸序列。

7、在另一方面，本文提供了用于調(diào)節(jié)載脂蛋白c3(apoc3)基因的表達的多核酸分子，其中多核酸分子包含：(a)包含uuucagggaacugaagccaucgg(seq?id?no:529)的核苷酸序列的反義鏈和包含gauggcuucaguucccugaaa(seq?id?no:541)的核苷酸序列的有義鏈；(b)包含ugaauacugucccuuuuaagcaa(seq?id?no:530)的核苷酸序列的反義鏈和包含gcuuaaaagggacaguauuca(seq?id?no:542)的核苷酸序列的有義鏈；(c)包含uagaauacugucccuuuuaagca(seq?id?no:531)的核苷酸序列的反義鏈和包含cuuaaaagggacaguauucua(seq?id?no:543)的核苷酸序列的有義鏈；(d)包含uugagaauacugucccuuuuaag(seq?id?no:532)的核苷酸序列的反義鏈和包含uaaaagggacaguauucucaa(seq?id?no:544)的核苷酸序列的有義鏈；(e)包含ucugagaauacugucccuuuuaa(seq?id?no:533)的核苷酸序列的反義鏈和包含aaaagggacaguauucucaga(seq?id?no:545)的核苷酸序列的有義鏈；(f)包含ucacugagaauacugucccuuuu(seq?id?no:534)的核苷酸序列的反義鏈和包含aagggacaguauucucaguga(seq?id?no:546)的核苷酸序列的有義鏈；(g)包含ucugagaauacugucccuuuuaa(seq?id?no:554)的核苷酸序列的反義鏈和包含aaaagggacaguauucucaga(seq?id?no:576)的核苷酸序列的有義鏈；(h)包含ucugagaauacugucccuuucaa(seq?id?no:555)的核苷酸序列的反義鏈和包含gaaagggacaguauucucaga(seq?id?no:577)的核苷酸序列的有義鏈；(i)包含ucugagaauacugucccuuugaa(seq?id?no:556)的核苷酸序列的反義鏈和包含caaagggacaguauucucaga(seq?id?no:578)的核苷酸序列的有義鏈；(j)包含ucugagaauacugucccuugcaa(seq?id?no:557)的核苷酸序列的反義鏈和包含gcaagggacaguauucucaga(seq?id?no:579)的核苷酸序列的有義鏈；(k)包含ucugagaauacugucccuucgaa(seq?id?no:558)的核苷酸序列的反義鏈和包含cgaagggacaguauucucaga(seq?id?no:580)的核苷酸序列的有義鏈；(l)包含ucugagaauacugucccuuuuaa(seq?id?no:559)的核苷酸序列的反義鏈和包含aaaagggacaguauucucaga(seq?id?no:581)的核苷酸序列的有義鏈；(m)包含ucugagaauacugucccuuugaa(seq?id?no:560)的核苷酸序列的反義鏈和包含caaagggacaguauucucaga(seq?id?no:582)的核苷酸序列的有義鏈；(n)包含ucugagaauacugucccuuuuaa(seq?id?no:561)的核苷酸序列的反義鏈和包含aaaagggacaguauucucaga(seq?id?no:583)的核苷酸序列的有義鏈；(o)包含ucugagaauacugucccuuuuaa(seq?id?no:562)的核苷酸序列的反義鏈和包含aaaagggacaguauucucaga(seq?id?no:584)的核苷酸序列的有義鏈；或(p)包含ucugagaauacugucccuuuuaa(seq?id?no:563)的核苷酸序列的反義鏈和包含aaaagggacaguauucucaga(seq?id?no:585)的核苷酸序列的有義鏈。

8、在另一方面，本文提供了用于調(diào)節(jié)載脂蛋白c3(apoc3)基因的表達的多核酸分子，其中多核酸分子包含：(a)包含usufsucaggfgaacufgafagfccaucsgsg(seq?id?no:535)的核苷酸序列的反義鏈和包含gsasuggcufucfagfuucccugaaa(seq?id?no:547)的核苷酸序列的有義鏈；(b)包含usgfsaauacfuguccfcufuufuaagcsasa(seq?id?no:536)的核苷酸序列的反義鏈和包含gscsuuaaafagfggfacaguauuca(seq?id?no:548)的核苷酸序列的有義鏈；(c)包含usafsgaauafcugucfccfuufuuaagscsa(seq?id?no:537)的核苷酸序列的反義鏈和包含csusuaaaafggfgafcaguauucua(seq?id?no:549)的核苷酸序列的有義鏈；(d)包含usufsgagaafuacugfucfccfuuuuasasg(seq?id?no:538)的核苷酸序列的反義鏈和包含usasaaaggfgafcafguauucucaa(seq?id?no:550)的核苷酸序列的有義鏈；(e)包含uscfsugagafauacufgufccfcuuuusasa(seq?id?no:539)的核苷酸序列的反義鏈和包含asasaagggfacfagfuauucucaga(seq?id?no:551)的核苷酸序列的有義鏈；(f)包含uscfsacugafgaauafcufgufcccuususu(seq?id?no:540)的核苷酸序列的反義鏈和包含asasgggacfagfuafuucucaguga(seq?id?no:552)的核苷酸序列的有義鏈；(g)包含vpuscfsugagafauacufgufccfcuuuusasa(seq?id?no:565)的核苷酸序列的反義鏈和包含asasaagggfacfagfuauucucaga(seq?id?no:587)的核苷酸序列的有義鏈；(h)包含uscfsugagafauacufgufccfcuuucsasa(seq?id?no:566)的核苷酸序列的反義鏈和包含gsasaagggfacfagfuauucucaga(seq?id?no:588)的核苷酸序列的有義鏈；(i)包含uscfsugagafauacufgufccfcuuugsasa(seq?id?no:567)的核苷酸序列的反義鏈和包含csasaagggfacfagfuauucucaga(seq?id?no:589)的核苷酸序列的有義鏈；(j)包含uscfsugagafauacufgufccfcuugcsasa(seq?id?no:568)的核苷酸序列的反義鏈和包含gscsaagggfacfagfuauucucaga(seq?id?no:590)的核苷酸序列的有義鏈；(k)包含uscfsugagafauacufgufccfcuucgsasa(seq?id?no:569)的核苷酸序列的反義鏈和包含csgsaagggfacfagfuauucucaga(seq?id?no:591)的核苷酸序列的有義鏈；(l)包含uscfsugagafauacufgufccfcuuuusasa(seq?id?no:570)的核苷酸序列的反義鏈和包含(invab)asasaagggfacfagfuauucucaga(seq?id?no:592)的核苷酸序列的有義鏈；(m)包含uscfsugagafauacufgufccfcuuugsasa(seq?id?no:571)的核苷酸序列的反義鏈和包含(invab)csasaagggfacfagfuauucucaga(seq?id?no:593)的核苷酸序列的有義鏈；(n)包含uscfsugdagdaauacufgufccfcuuuusasa(seq?id?no:572)的核苷酸序列的反義鏈和包含asasaagggfacfagfuauucucaga(seq?id?no:594)的核苷酸序列的有義鏈；(o)包含uscfsugagafauacufgufsccfcuuuusasa(seq?id?no:573)的核苷酸序列的反義鏈和包含asasaagggfacfagfuauucucaga(seq?id?no:595)的核苷酸序列的有義鏈；或(p)包含uscfsugagafauacufgufccfcsuuuusasa(seq?id?no:574)的核苷酸序列的反義鏈和包含asasaagggfacfagfuauucucaga(seq?id?no:596)的核苷酸序列的有義鏈，其中“a”是指腺苷-3’-磷酸；“a”是指2’-o-甲基腺苷-3’-磷酸；“af”是指2’-氟腺苷-3’-磷酸；“da”是指2’-脫氧腺苷-3-磷酸；“c”是指胞苷-3’-磷酸；“c”是指2’-o-甲基胞苷-3’-磷酸；“cf”是指2’-氟胞苷-3’-磷酸；“dc”是指2’-脫氧胞苷-3’-磷酸；“g”是指鳥苷-3’-磷酸；“g”是指2’-o-甲基鳥苷-3’-磷酸；“gf”是指2’-氟鳥苷-3’-磷酸；“dg”是指2’-脫氧鳥苷-3’-磷酸；“u”是指尿苷-3’-磷酸；“u”是指2’-o-甲基尿苷-3’-磷酸；“uf”是指2’-氟尿苷-3’-磷酸；“t”是指5-甲基尿苷-3’-磷酸；“t”是指2’-o-甲基-5-甲基尿苷-3’-磷酸；“tf”是指2’-氟-5-甲基尿苷-3’-磷酸；“dt”是指2’-脫氧胸苷-3’-磷酸；“s”是指3’-硫代磷酸酯，“(invab)”是指反向脫堿基脫氧核糖核苷酸，并且“vp”是指5’-乙烯基膦酸酯修飾的核苷酸。

9、在另一方面，本文提供了一種用于調(diào)節(jié)載脂蛋白c3(apoc3)基因的表達的多核酸分子綴合物，其中該多核酸分子綴合物包含本文所述的多核酸分子和脫唾液酸糖蛋白受體靶向部分。在一些情況下，脫唾液酸糖蛋白受體靶向部分包含n-乙酰半乳糖胺(galnac)或半乳糖。

10、在一些情況下，多核酸分子和脫唾液酸糖蛋白受體靶向部分經(jīng)由接頭偶聯(lián)。在一些情況下，接頭包含下式(iv)，其中y1和y2中的至少一個是多核酸分子中的核苷酸。在一些情況下，y1是多核酸分子的有義鏈的3’末端上的最后一個核苷酸，或者y1和y2是多核酸分子中的兩個連續(xù)核苷酸。在一些情況下，接頭和帶有多核酸分子的有義鏈的3’末端上的最后一個核苷酸的脫唾液酸糖蛋白受體靶向部分示于式(v’)中：

11、

12、其中式(v’)中的z是-h、-oh、-o-甲基、-f或-o-甲氧基乙基，并且式(v’)中的r是腺嘌呤、尿嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、脫堿基或其它。

13、在一些情況下，接頭和帶有多核酸分子的有義鏈的3’末端上的最后一個核苷酸的脫唾液酸糖蛋白受體靶向部分示于式(v””)中：

14、

15、其中式(v””)中的z是對應于本文所述的糖修飾之一的部分(例如，-h、-oh、-o-甲基、-f或-o-甲氧基乙基)，并且式(v””)中的r是腺嘌呤、尿嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、脫堿基或其它。

16、在一些情況下，接頭和帶有多核酸分子的有義鏈的3’末端上的最后一個核苷酸的脫唾液酸糖蛋白受體靶向部分示于式(v””’)中：

17、

18、其中式(v””’)中的z是對應于本文所述的糖修飾之一的部分(例如，-h、-oh、-o-甲基、-f或-o-甲氧基乙基)，并且式(v””’)中的r是腺嘌呤、尿嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、脫堿基或其它。

19、在一些情況下，接頭和帶有多核酸分子的有義鏈的3’末端上的最后一個核苷酸的脫唾液酸糖蛋白受體靶向部分示于式(v”””)中：

20、

21、其中式(v”””)中的z是對應于本文所述的糖修飾之一的部分(例如，-h、-oh、-o-甲基、-f或-o-甲氧基乙基)，并且式(v”””)中的r是腺嘌呤、尿嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、脫堿基或其它。

22、在另一方面，本文提供了一種藥物組合物，其包含本文所述的多核酸分子或本文所述的多核酸分子綴合物，以及藥學上可接受的賦形劑。

23、在一些情況下，藥物組合物被配制為納米顆粒制劑。在一些情況下，藥物組合物被配制用于腸胃外、口服、鼻內(nèi)、頰、直腸、透皮、靜脈內(nèi)、皮下或鞘內(nèi)施用。

24、在另一方面，本文提供了一種調(diào)節(jié)對象的載脂蛋白c3(apoc3)基因的表達的方法，其包括：向?qū)ο笫┯帽疚乃龅亩嗪怂岱肿踊虮疚乃龅亩嗪怂岱肿泳Y合物、或本文所述的藥物組合物，從而調(diào)節(jié)對象中apoc3基因的表達。在一些情況下，有需要的對象被診斷為心血管疾病或高甘油三酯血癥、患有心血管疾病或高甘油三酯血癥或具有心血管疾病或高甘油三酯血癥的癥狀。

25、在另一方面，本文提供了一種調(diào)節(jié)有需要的對象的甘油三酯水平的方法，其包括：向?qū)ο笫┯帽疚乃龅亩嗪怂岱肿踊虮疚乃龅亩嗪怂岱肿泳Y合物、或本文所述的藥物組合物，從而調(diào)節(jié)對象的甘油三酯水平。在一些情況下，有需要的對象被診斷為心血管疾病或高甘油三酯血癥、患有心血管疾病或高甘油三酯血癥或具有心血管疾病或高甘油三酯血癥的癥狀。