1.一種用于在大規(guī)模生物反應(yīng)器中高產(chǎn)量和/或高質(zhì)量產(chǎn)生重組蛋白的方法，所述方法包括
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述真核細(xì)胞是哺乳動物細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述哺乳動物細(xì)胞選自cho、vero、bhk、hek、hela、cos、mdck和雜交瘤細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述哺乳動物細(xì)胞是cho細(xì)胞。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述重組蛋白包括抗體或其抗原結(jié)合部分。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段結(jié)合選自以下的抗原：pd-1、pd-l1、cvtla-4、lag-3、tigit、gitr、cxcr4、cd73、her2、vegf、cd20、cd40、cd11a、組織因子(tf)、psca、il-8、egfr、her3和her4。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的方法，其中所述生物反應(yīng)器是高通量生物反應(yīng)器。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述高通量生物反應(yīng)器是250或15生物反應(yīng)器。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項所述的方法，其中所述生物反應(yīng)器是1l、2l、5l、10l、25l、50l、100l、500l、1000l、2000l、5000l、10,000l或20,000l生物反應(yīng)器。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述的方法，其中所述生物反應(yīng)器是補料分批生產(chǎn)生物反應(yīng)器。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述的方法，其中所述培養(yǎng)是灌注培養(yǎng)。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述灌注通過切向流過濾進(jìn)行。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述切向流過濾是交替切向流過濾(atf)。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中使用repligentmatf2系統(tǒng)進(jìn)行所述灌注。
15.根據(jù)權(quán)利要求1至14中任一項所述的方法，其中將所述細(xì)胞濃縮至以下密度：至少約40x106、至少約50x106、至少約60x106、至少約70x106、至少約80x106、至少約90x106、至少約100x106、至少約110x106、至少約120x106、至少約130x106、至少約140x106、至少約150x106、至少約160x106、至少約170x106、至少約180x106、至少約190x106或至少約200x106個細(xì)胞/ml。
16.根據(jù)權(quán)利要求1至14中任一項所述的方法，其中將所述細(xì)胞濃縮至以下密度：約40x106至約200x106、約60x106至約200x106、約80x106至約200x106、約100x106至約200x106、約120x106至約200x106、約140x106至約200x106、約160x106至約200x106、約180x106至約200x106、約40x106至約180x106、約60x106至約180x106、約80x106至約180x106、約100x106至約180x106、約120x106至約180x106、約140x106至約180x106、約160x106至約180x106、約40x106至約160x106、約60x106至約160x106、約80x106至約160x106、約100x106至約160x106、約120x106至約160x106、約140x106至約160x106、約40x106至約140x106、約60x106至約140x106、約80x106至約140x106、約100x106至約140x106、約120x106至約140x106、約40x106至約120x106、約60x106至約120x106、約80x106至約120x106、約100x106至約120x106、約40x106至約100x106、約60x106至約100x106、約80x106至約100x106個細(xì)胞/ml。
17.根據(jù)權(quán)利要求1至14中任一項所述的方法，其中將所述細(xì)胞濃縮至以下密度：約100x106、約110x106、約120x106、約130x106、約140x106、約150x106、約160x106、約170x106、約180x106、約190x106、約200x106、約210x106、約220x106、約230x106、約240x106或約250x106個細(xì)胞/ml。
18.根據(jù)權(quán)利要求1至14中任一項所述的方法，其中在以下細(xì)胞密度下進(jìn)行電穿孔：約100x106、約110x106、約120x106、約130x106、約140x106、約150x106、約160x106、約170x106、約180x106、約190x106、約200x106、約210x106、約220x106、約230x106、約240x106或約250x106個細(xì)胞/ml。
19.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項所述的方法，其中所述電穿孔是基于流式的電穿孔。
20.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項所述的方法，其中使用maxcytetm轉(zhuǎn)染系統(tǒng)進(jìn)行電穿孔。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)染系統(tǒng)是maxcytetmstx轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。
22.根據(jù)權(quán)利要求1至21中任一項所述的方法，其中在以下dna與細(xì)胞比率下進(jìn)行電穿孔：每1x106個細(xì)胞約1、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9或約2ugdna。
23.根據(jù)權(quán)利要求1至22中任一項所述的方法，其中轉(zhuǎn)染后細(xì)胞培養(yǎng)起始密度在5x106與20x106個細(xì)胞/ml之間。
24.根據(jù)權(quán)利要求1至23中任一項所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)染后細(xì)胞培養(yǎng)的溫度在某個培養(yǎng)期內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)變。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)染后細(xì)胞培養(yǎng)包括在第1天或第2天的溫度轉(zhuǎn)變。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述溫度轉(zhuǎn)變是從約37℃至約32℃。
27.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述溫度轉(zhuǎn)變是從約37℃至約34℃。
28.根據(jù)權(quán)利要求1至27中任一項所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)染后細(xì)胞培養(yǎng)包括添加n,n-二甲基乙酰胺(dma)。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中以約0.125％v/v或約0.250％v/v添加dma。
30.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中以約0.125％v/v至約0.250％v/v之間添加dma。
31.根據(jù)權(quán)利要求1至30中任一項所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)染后細(xì)胞培養(yǎng)包括添加丁酸鈉(nabu)。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中以約1mm與約2mm之間的濃度添加nabu。
33.根據(jù)權(quán)利要求1至32中任一項所述的方法，其中培養(yǎng)7天后，所述方法的蛋白質(zhì)產(chǎn)量是至少約0.1g/l、至少約0.2g/l、至少約0.3g/l、至少約0.4g/l、至少約0.5g/l、至少約0.6g/l、至少約0.7g/l、至少約0.8g/l、至少約0.9g/l、至少約1g/l、至少約2g/l、至少約3g/l、至少約4g/l、至少約5g/l或至少約6g/l。
34.根據(jù)權(quán)利要求1至33中任一項所述的方法，其中培養(yǎng)14天后，所述蛋白質(zhì)產(chǎn)量高達(dá)2g/l。
35.一種用于在生物反應(yīng)器中高產(chǎn)量和/或高質(zhì)量產(chǎn)生重組蛋白的方法，所述方法包括
36.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求35所述的方法，其中轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)包括(i)約15x106個細(xì)胞/ml的細(xì)胞培養(yǎng)起始密度，(ii)約0.125％(v/v)的dma，(iii)約1mm的nabu，以及(iv)在第1天從約36.5℃至約32℃的溫度轉(zhuǎn)變，其中所述生物反應(yīng)器的體積在約250ml與約5l之間。
37.根據(jù)權(quán)利要求1至36中任一項所述的方法，其中通過瞬時轉(zhuǎn)染所述真核細(xì)胞獲得的所述重組蛋白的產(chǎn)品質(zhì)量屬性值在通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染獲得的重組蛋白的產(chǎn)品質(zhì)量屬性值的+/-10％之內(nèi)。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法，其中所述質(zhì)量屬性選自：
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)聚集質(zhì)量屬性選自(i)高分子量物質(zhì)的百分比(hmw％)，(ii)單體物質(zhì)的百分比，以及(iii)其任何組合。
40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的方法，其中使用hplc尺寸排阻色譜法測定所述蛋白質(zhì)聚集質(zhì)量屬性。
41.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述還原和非還原物質(zhì)質(zhì)量屬性選自(i)還原重組蛋白的百分比，(ii)非還原重組蛋白的百分比，以及(iii)其任何組合。
42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中在還原和非還原條件下使用毛細(xì)管電泳(ce-sds)測定所述還原和非還原物質(zhì)質(zhì)量屬性。
43.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述電荷變體質(zhì)量屬性選自(i)堿性變體的百分比，(ii)酸性變體的百分比，(iii)主要物質(zhì)的百分比，以及(iv)其任何組合。
44.根據(jù)權(quán)利要求43所述的方法，其中通過由毛細(xì)管等電聚焦(icief)分析等電分布來測定所述電荷變體質(zhì)量屬性。
45.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述糖基化譜包括一種或多種n-連接的聚糖。
46.根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述n-連接的聚糖包括(甘露糖-3-n-乙酰葡糖胺-4-巖藻糖)(g0f)、甘露糖-3-n-乙酰葡糖胺-4-半乳糖-1-巖藻糖(g1f)、甘露糖-3-n-乙酰葡糖胺-4-半乳糖-2-巖藻糖(g2f)、單唾液酸化的甘露糖-3-n-乙酰葡糖胺-4-半乳糖-1-巖藻糖(s1g1f)、單唾液酸化的甘露糖-3-n-乙酰葡糖胺-4-半乳糖-2-巖藻糖(s1g2f)、單唾液酸化的甘露糖-3-n-乙酰葡糖胺-4-半乳糖-3-巖藻糖(s2g3f)、二唾液酸化的甘露糖-3-n-乙酰葡糖胺-4-半乳糖-2-巖藻糖(s2g2f)或其任何組合。
47.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述糖基化譜質(zhì)量屬性選自(i)g1f的百分比，(ii)g0f的百分比，(iii)g2f的百分比，(iv)總?cè)r藻糖基化蛋白的百分比，以及(v)其任何組合。
48.根據(jù)權(quán)利要求45至47所述的方法，其中使用hplc方法測定所述糖基化譜質(zhì)量屬性。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述hplc方法是具有熒光檢測的超高效液相色譜法(uplc-flr)。
50.根據(jù)權(quán)利要求1至48中任一項所述的方法，其中(i)中的所述培養(yǎng)基包含濃度足以維持高細(xì)胞密度的葡萄糖。
51.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中葡萄糖的所述濃度是至少約0.1g/l、至少約0.5g/l、至少約1.0g/l、至少約1.5g/l、至少約2.0g/l、至少約2.5g/l、至少約3.0g/l、至少約3.5g/l、至少約4.0g/l、至少約4.5g/l或至少約5.0g/l。
52.一種根據(jù)權(quán)利要求1至51中任一項所述的方法獲得的重組蛋白。
53.根據(jù)權(quán)利要求52所述的重組蛋白，其中所述重組蛋白是結(jié)合選自以下的抗原的抗體或抗原結(jié)合片段：pd-1、pd-l1、cvtla-4、lag-3、tigit、gitr、cxcr4、cd73、her2、vegf、cd20、cd40、cd11a、組織因子(tf)、psca、il-8、egfr、her3和her4。
54.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含根據(jù)權(quán)利要求1至51中任一項所述的方法獲得的重組蛋白。
55.一種根據(jù)權(quán)利要求1至51中任一項所述的方法獲得的細(xì)胞或其多個細(xì)胞。
56.根據(jù)權(quán)利要求55所述的細(xì)胞或多個細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是中國倉鼠卵巢(cho)細(xì)胞。
57.一種用于制造根據(jù)權(quán)利要求1至51中任一項所述的方法產(chǎn)生的重組蛋白的生物反應(yīng)器。
58.一種生物反應(yīng)器，所述生物反應(yīng)器包含根據(jù)權(quán)利要求56或57所述的細(xì)胞或多個細(xì)胞。
59.一種用于通過瞬時轉(zhuǎn)染高產(chǎn)量產(chǎn)生重組蛋白的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括：
60.一種用于加速或縮短重組蛋白的開發(fā)時間線的方法，所述方法包括
61.一種用于降低重組蛋白的宿主細(xì)胞毒性的方法，所述方法包括
62.一種用于產(chǎn)生用于個體化治療劑的重組蛋白的方法，所述方法包括