本發(fā)明涉及生物，具體為一種結(jié)直腸癌免疫相關(guān)基因群及其體外診斷產(chǎn)品和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、結(jié)直腸癌是全球第三大常見癌癥，全球發(fā)病率和死亡率不斷上升。結(jié)直腸癌的標準治療方法一直是手術(shù)、化療和放療，這些方法可以聯(lián)合用于治療患者。然而，這些治療方法具有許多副作用，因為它們對任何細胞都具有非特異性和細胞毒性。此外，許多患者即使在一系列治療后仍會復(fù)發(fā)。因此，擁有更多替代和有效的治療方法來治療結(jié)直腸癌患者至關(guān)重要。近年興起的腫瘤免疫治療，包括pd1抑制劑、pdl1抑制劑及ctla4抑制劑，利用患者自身的免疫系統(tǒng)來對抗癌細胞，克服了化療和放療主要存在的特異性問題。一些癌癥免疫療法的療效顯著，但有些依賴于患者自身免疫系統(tǒng)狀態(tài)的治療療效卻不盡人意。整體有效率有待提高。目前，用于指導(dǎo)治療的生物標記物主要包括腫瘤的pdl1表達水平、腫瘤突變負荷(tumor?mutational?burden,tmb)及微衛(wèi)星不穩(wěn)定(microsatellite?instability,msi)，而對于腫瘤微環(huán)境中免疫功能的評估方法并不多。目前臨床研究中常采用腫瘤浸潤淋巴細胞(tumor?infiltrating?lymphocytes,til)人工計數(shù)反映腫瘤組織中的免疫功能。總體來講，til計數(shù)越高，預(yù)后越好，免疫檢查點(pd1)抑制劑效果越好。但是，til僅僅反映腫瘤組織中的免疫細胞數(shù)量，并不能反映出內(nèi)在功能狀態(tài)。常存在tils盡管數(shù)量低，但免疫功能仍然良好，預(yù)后和治療效果好的情況，反之亦然。而來源于腫瘤組織中免疫細胞的免疫基因表達則可反映不同免疫細胞的免疫功能的活躍程度。多項臨床研究顯示，免疫基因的表達水平與腫瘤預(yù)后及輔助或新輔助治療的效果密切相關(guān)，而且檢測結(jié)果更為客觀、穩(wěn)定、可靠。結(jié)合免疫功能評估能夠為臨床治療提供更為精準的治療指導(dǎo)，為此本技術(shù)現(xiàn)提出一種結(jié)直腸癌免疫相關(guān)基因群及其體外診斷產(chǎn)品和應(yīng)用。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、技術(shù)方案

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種結(jié)直腸癌免疫相關(guān)基因群及其體外診斷產(chǎn)品和應(yīng)用，包括分結(jié)直腸癌免疫功能評估相關(guān)基因，其特征在于：所述分結(jié)直腸癌免疫功能評估相關(guān)基因包括：

3、以下趨化因子相關(guān)基因中的一個或多個：cxcl11、cxcl9和ido1；

4、以下i型干擾素信號通路相關(guān)基因中的一個或多個：irf1、lap3和tap1；

5、以下蛋白酶體相關(guān)基因中的一個或多個：psmb8、psmb9和cd38。

6、優(yōu)選的，所述基因群包括9個結(jié)直腸癌免疫功能評估相關(guān)基因，所述免疫功能評估相關(guān)基因包括：

7、3個趨化因子相關(guān)基因：cxcl11、cxcl9和ido1；

8、3個i型干擾素信號通路相關(guān)基因：irf1、lap3和tap1；

9、3個蛋白酶體相關(guān)基因：psmb8、psmb9和cd38。

10、優(yōu)選的，所述基因群，其還包括參考基因，所述參考基因包括以下中的1個、更優(yōu)選3個、最優(yōu)選6個：actb、gapdh、gusb、tfrc、mrpl19、psmc4和sf3a1。

11、優(yōu)選的，所述權(quán)利要求2所述的基因群，其還包括參考基因，所述參考基因包括actb、gapdh、gusb、tfrc、mrpl19、psmc4和sf3a1中的三個；更優(yōu)選地，所述參考基因包括actb、gapdh和gusb；

12、權(quán)利要求2所述的基因群，其還包括參考基因；優(yōu)選地，所述參考基因包括gapdh、gusb、tfrc、mrpl19、psmc4和sf3a1。

13、優(yōu)選的，所述試劑為檢測所述基因的rna轉(zhuǎn)錄物、特別是mrna的量的試劑；或者，其為檢測與mrna互補的cdna的量的試劑，所述試劑為引物、探針其中的一種或兩種組合。

14、優(yōu)選的，所述引物具有如seq?id?no.1-seq?id?no.18或seq?id?no.1-seq?idno.30所示的序列，或者具有如seq?id?no.31-seq?id?no.48或seq?id?no.31-seq?idno.54所示的序列，所述探針為taqman探針，所述探針為具有如seq?id?no.55-seq?idno.63或seq?id?no.55-seq?id?no.66所示序列的taqman探針；

15、所述試劑為引物和探針的組合，其中引物具有如seq?id?no.31-seq?id?no.48或seq?id?no.31-seq?id?no.54所示的序列，所述探針為具有如seq?id?no.55-seq?id?no.63或seq?id?no.55-seq?id?no.66所示序列的taqman探針，引物具有如seq?id?no.31-seq?idno.54所示的序列，所述探針為具有如seq?id?no.55-seq?id?no.66所示序列的taqman探針。

16、優(yōu)選的，所述試劑為檢測所述基因編碼的多肽的量的試劑，所述試劑為抗體、抗體片段或者親和性蛋白，一種對結(jié)直腸癌進行免疫功能評估的產(chǎn)品，其包含權(quán)利要求5-6中任一項所述的試劑。

17、優(yōu)選的，所述產(chǎn)品用于結(jié)直腸癌免疫功能評分。

18、優(yōu)選的，其中所述產(chǎn)品為體外診斷產(chǎn)品，優(yōu)選診斷試劑盒，其中所述產(chǎn)品為二代測序試劑盒、實時熒光定量pcr檢測試劑盒、基因芯片、蛋白芯片、elisa診斷試劑盒或免疫組化(ihc)試劑盒或其組合，其包含具有如seq?id?no.1-seq?id?no.30所示序列的引物，并且任選地包含選自以下的一個或多個：總rna抽提試劑、逆轉(zhuǎn)錄試劑和二代測序試劑，所述產(chǎn)品為實時熒光定量pcr檢測試劑盒，其包含具有如seq?id?no.31-seq?id?no.54所示序列的引物，所述實時熒光定量pcr檢測試劑盒還包含taqman探針，并且任選地包含選自以下的一個或多個：總rna抽提試劑、逆轉(zhuǎn)錄試劑和用于taqman?rt-pcr的試劑，所述實時熒光定量pcr檢測試劑盒包含具有如seq?id?no.31-seq?id?no.54所示序列的引物和具有如seq?idno.55-seq?id?no.66所示序列的taqman探針，所述實時熒光定量pcr檢測試劑盒還包含選自以下的一個或多個：總rna抽提試劑、逆轉(zhuǎn)錄試劑和用于sybr?green?rt-pcr的試劑。

19、優(yōu)選的，所述結(jié)直腸癌免疫功能評分可分為免疫弱組和免疫強組。

20、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一種結(jié)直腸癌免疫相關(guān)基因群及其體外診斷產(chǎn)品和應(yīng)用，具備以下有益效果：

21、1、該結(jié)直腸癌免疫相關(guān)基因群及其體外診斷產(chǎn)品和應(yīng)用，本發(fā)明通過對結(jié)直腸癌患者的基因表達譜及臨床資料大數(shù)據(jù)分析，建立結(jié)直腸癌免疫功能評估模型以及基于二代測序和pcr平臺的檢測方法，為提高結(jié)直腸癌的臨床治療效率提供幫助。

22、2該結(jié)直腸癌免疫相關(guān)基因群及其體外診斷產(chǎn)品和應(yīng)用，根據(jù)本發(fā)明的基因群中基因在結(jié)直腸癌樣本中的表達水平，建立結(jié)直腸癌的免疫評估體系，為屬于不同免疫功能組的結(jié)直腸癌患者提供更有針對性的個體化治療。結(jié)合免疫功能評分可以對于結(jié)直腸癌患者的預(yù)后做出判斷，篩選出不同治療方案的優(yōu)勢人群，并提供潛在的治療途徑，對于免疫強的患者，可以考慮不再做放療化療，減少不良反應(yīng)的發(fā)生和治療的經(jīng)濟負擔(dān)；對于免疫弱的患者，則要及時輔做化療、放療或者生物治療，以期收到最大臨床獲益。對于無法手術(shù)的晚期患者，基于表達譜的分子診斷則可幫助識別一種治療方案可獲益群體，提高治療效率，避免無效治療。

23、3該結(jié)直腸癌免疫相關(guān)基因群及其體外診斷產(chǎn)品和應(yīng)用，與當前結(jié)直腸癌風(fēng)險評估的方法相比，本發(fā)明的優(yōu)勢在于對結(jié)直腸癌內(nèi)癌的免疫功能進行個性化的評估，綜合評價結(jié)直腸癌患者的預(yù)后以及對治療可能的受益，本發(fā)明的另一優(yōu)勢在于，提供了多個可以選擇的基因或基因組合作為補充的實施方案，當將本發(fā)明應(yīng)用于癌癥患者時，如果由于患者的病理狀況或其他原因(例如某個或某些基因的表達異常)導(dǎo)致某個或某些基因的表達水平檢測無效或失靈時，可以采用多個替代方案進行補充，使得基于本發(fā)明的檢測結(jié)果更加穩(wěn)定、可靠。