本發(fā)明屬于微生物學(xué)和植物病害生防，具體涉及一株促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和防控青枯病的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、番茄（ solanum?lycopersicum）是世界上消費(fèi)量最大的蔬菜類水果之一。番茄青枯病是一種由細(xì)菌病原菌勞爾氏菌（ ralstonia?solanacearum；rs）引發(fā)的土傳番茄維管束病害，該病害發(fā)生后難以控制，往往對(duì)番茄生產(chǎn)造成重大損失，嚴(yán)重制約了全球的番茄生產(chǎn)。番茄青枯病多發(fā)生在高溫高濕條件下，植株從頂端開(kāi)始顯現(xiàn)枯萎癥狀，但依然保持青綠色。青枯番茄植株莖部剖面可觀察到壞死發(fā)褐現(xiàn)象，擠壓莖部會(huì)出現(xiàn)白色粘液。青枯病致病菌勞爾氏菌通常通過(guò)番茄根部的生物孔口或機(jī)械損傷進(jìn)入植物體內(nèi)，而后隨水分傳輸轉(zhuǎn)移，在木質(zhì)部導(dǎo)管中大量增殖，阻礙水分在番茄植株體內(nèi)的運(yùn)輸，同時(shí)通過(guò)釋放胞外酶、蛋白酶和胞外多糖等毒性因子，引發(fā)莖部導(dǎo)管損傷，最終導(dǎo)致番茄植株枯萎和死亡。

2、針對(duì)番茄青枯病，傳統(tǒng)的防治手段主要包括選育抗性品種、化學(xué)防治、作物輪作等。選育抗病品種被認(rèn)為是最經(jīng)濟(jì)、最環(huán)保、最有效的番茄青枯病防治手段，但番茄對(duì)青枯病的抗性通常與且番茄的產(chǎn)量和品質(zhì)呈負(fù)相關(guān)。此外，青枯病抗性依賴多種植物基因的協(xié)作，增加了抗病品種選育的難度。盡管化學(xué)防治對(duì)番茄青枯病展現(xiàn)了不錯(cuò)的防控效果，但是化學(xué)農(nóng)藥的不正確和過(guò)量使用往往會(huì)造成藥物殘留，導(dǎo)致嚴(yán)重的環(huán)境污染，帶來(lái)了極大的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)同時(shí)，也威脅了人類健康，且長(zhǎng)期使用化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行青枯病防控會(huì)造成諸如土壤肥力降低、土壤酸化、土壤板結(jié)等土壤問(wèn)題。使用作物輪作、水旱輪作等農(nóng)藝措施在番茄青枯病防治上也取得了一定成效，但這類措施通常依賴于對(duì)當(dāng)?shù)貧夂?、土壤條件、適宜栽種作物等的充分認(rèn)知，以及科學(xué)系統(tǒng)的種植規(guī)劃，這極大的限制了這類農(nóng)藝措施在番茄青枯病防治上的利用。

3、生物防治指的是利用有益微生物及其代謝產(chǎn)物抵御作物病害，是一種安全、可持續(xù)的植物病害防治方法，同樣也是當(dāng)前防控番茄青枯病的熱點(diǎn)領(lǐng)域。微生物生防菌是一種自然生長(zhǎng)的土壤有益微生物，這類微生物可以通過(guò)營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)或者拮抗競(jìng)爭(zhēng)等方法，直接控制土壤中植物病原菌如青枯菌的數(shù)量；亦或者通過(guò)誘導(dǎo)植物的系統(tǒng)抗性，增強(qiáng)植物對(duì)病原菌的免疫能力，防進(jìn)而控植物病害。已有研究發(fā)現(xiàn)，利用木霉、芽孢桿菌和假單胞菌等有益真菌、細(xì)菌可以對(duì)番茄青枯病進(jìn)行綠色防治。但是目前對(duì)微利用生物生防菌防控番茄青枯病的研究局限在土壤細(xì)菌、真菌類群，對(duì)其他土壤微生物如土壤原生生物的研究較少。

4、原生生物（protist）是除植物、真菌和動(dòng)物外的真核生物微生物。按照其在食物網(wǎng)中的生態(tài)系統(tǒng)功能，原生生物被分為自養(yǎng)型、腐生型、共生型和吞噬型四大類。其中吞噬型原生生物，即原生動(dòng)物（protozoa），是土壤微生物的主要消費(fèi)者之一。這類微生物可以通過(guò)直接捕食病原菌如勞爾氏菌，降低病原菌的數(shù)量。此外，原生動(dòng)物也可通過(guò)捕食行為調(diào)控土壤中細(xì)菌、真菌區(qū)系的物種組成并最終改變微生物區(qū)系的功能如對(duì)病原菌的拮抗，間接降低病原菌的數(shù)量。目前的尚未見(jiàn)原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)能夠促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和防控土傳青枯病。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供了一株促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和防控土傳青枯病的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1。

2、本發(fā)明的另一目的是提供該原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1的培養(yǎng)物。

3、本發(fā)明的又一目的是提供該原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1的應(yīng)用。

4、本發(fā)明的目的可通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

5、一株促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和防控番茄青枯病的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1（ colpoda? inflata?njau-y1），其保藏編號(hào)為：cctcc?no：c2024241，保藏日期為2024年7月26日。

6、本發(fā)明所涉及的原生動(dòng)物njau-y1是從江蘇省南京市六合區(qū)的番茄青枯病發(fā)病田塊中采集健康植株的根際土壤分離、篩選得到的一株對(duì)青枯菌具有捕食能力的腎形蟲(chóng)。根據(jù)原生動(dòng)物njau-y1的包囊和活體形態(tài)特征、18s?rdna基因序列分析，原生動(dòng)物njau-y1被鑒定為 colpoda?inflata，并將其于2024年保藏至中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（地址：湖北省武漢市武昌區(qū)武漢大學(xué)保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no：c2024241）。

7、本發(fā)明還提供含有上述的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1的培養(yǎng)物。

8、本發(fā)明還提供的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1的培養(yǎng)物的制備方法，將所述原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1接種于pas（page's?amoeba?saline）液體培養(yǎng)液中，添加滅活的大腸桿菌（od=0.04），置于20℃的培養(yǎng)箱中，靜置48?h。

9、所述的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1在促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和/或防治番茄青枯病中的應(yīng)用。

10、所述的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1在制備促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和/或防治番茄青枯病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

11、所述的培養(yǎng)物在促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和/或防治番茄青枯病中的應(yīng)用。

12、所述的培養(yǎng)物在制備促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和/或防治番茄青枯病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

13、有益效果

14、本發(fā)明從番茄發(fā)病土壤的健康作物根際分離出一株原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1 。細(xì)菌病原菌共培養(yǎng)試驗(yàn)表明，原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1對(duì)番茄青枯病具有顯著的防治作用。此外，原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1接種在番茄植株根際能顯著促進(jìn)番茄的生長(zhǎng)。因此，本發(fā)明的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1對(duì)番茄植株促生以及土傳病害的防治具有重要意義。

技術(shù)特征：

1.一株促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和防控青枯病的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1（colpoda?inflata?njau-y1），保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2024年7月26日，其保藏編號(hào)為cctcc?no：c2024241。

2.權(quán)利要求1所述的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1的培養(yǎng)物。

3.權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)物的制備方法，其特征在于，將保藏編號(hào)為cctcc?no：c2024241的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1接種于pas液體培養(yǎng)液中，添加滅活的微生物作為食物，置于20℃的培養(yǎng)箱中，靜置48h。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述pas液體培養(yǎng)液的配制方法為：首先配制溶液1與溶液2：溶液1的成分為0.142?g磷酸一氫鈉，0.136?g磷酸二氫鉀，加水定容至500?ml；溶液2的成分為4.0?mg七水合硫酸鎂，4.0?mg二水合氯化鈣，0.120?g氯化鈉，加水定容至500?ml；溶液1和溶液?2均在121?℃下滅菌20?min，待室溫冷卻后，將溶液1與溶液2按照體積比1：1進(jìn)行混合。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述的滅活的微生物為滅活的大腸桿菌（escherichia?coli）。

6.權(quán)利要求1所述的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1在促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和/或防治番茄青枯病中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1所述的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)njau-y1在制備促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和/或防治番茄青枯病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)物在促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和/或防治番茄青枯病中的應(yīng)用。

9.權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)物在制備促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和/或防治番茄青枯病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一株促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和防控青枯病的原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)及應(yīng)用。原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)Colpoda?inflata?NJAU?Y1，其保藏編號(hào)為CCTCC?NO：C2024241。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明涉及的腎形蟲(chóng)NJAU?Y1展現(xiàn)出了對(duì)番茄顯著的促生效果。同時(shí)，腎形蟲(chóng)NJAU?Y1能直接抑制番茄青枯菌Ralstonia?solanacearum的生長(zhǎng)，對(duì)番茄青枯病具有較好的防控效果。本發(fā)明表明腎形蟲(chóng)NJAU?Y1在促進(jìn)番茄生長(zhǎng)和番茄青枯病生物防治方面具有巨大的應(yīng)用潛力，原生動(dòng)物腎形蟲(chóng)相關(guān)產(chǎn)品的應(yīng)用是一種高效可持續(xù)防控土傳病害促進(jìn)作物健康生長(zhǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)綠色發(fā)展的重要農(nóng)業(yè)措施。

技術(shù)研發(fā)人員：熊武,桂穎,朱成瑩,袁瑩,劉宸,沈其榮
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)三亞研究院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/28