本發(fā)明涉及化學(xué)化合物，其調(diào)節(jié)蛋白激酶的活性，特別是抑制蛋白激酶TTK(EC 2.7.12.1)的活性。TTK(通常被稱作Mps1)是有絲分裂檢驗(yàn)點(diǎn)的一個(gè)組分，所述有絲分裂限制點(diǎn)是在細(xì)胞分裂過(guò)程中確保姐妹染色單體分離至兩個(gè)子代細(xì)胞的保真度的機(jī)制。有絲分裂限制點(diǎn)的缺陷或抑制會(huì)導(dǎo)致非整倍性。在胚胎發(fā)育過(guò)程中，絕大部分的單個(gè)分離錯(cuò)誤不被耐受(Cohen,J.,Science 296:2164,2002)。相反，非整倍性是實(shí)體人腫瘤中的一種常見(jiàn)遺傳改變(Lengauer,C.等人,Nature 396,643；1998)以及乳腺癌、肺癌、腦癌(Carter,S.L.,等人,Nat.Genet.38:1043；2006；Tannous,B.A.,等人,J.Nat.Canc.Inst.105,1322；2013)和結(jié)直腸癌(Walther,A.等人,Gut 57:941；2008；Sheffer,M.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 106:7131,2009)中的預(yù)后不良的預(yù)測(cè)物。TTK表達(dá)在具有染色體不穩(wěn)定性的乳腺癌中(Yuan,B.等人,Clin.Cancer Res.12:405；2006)和特別是在三重陰性的乳腺癌(乳腺癌的最高侵襲性類型)中(Maire,V.等人,PLoS ONE 8(5)e63712；2013)增加。通過(guò)RNA干擾來(lái)減少TTK表達(dá)會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的染色體錯(cuò)誤分離和細(xì)胞死亡，但是不會(huì)影響正常的(未轉(zhuǎn)化的)細(xì)胞的細(xì)胞生存力(Yuan,B.等人；Maire,V.等人；Janssen,A.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 106:19108；2009)。在不同的腫瘤細(xì)胞系中通過(guò)RNA干擾對(duì)TTK表達(dá)的部分抑制會(huì)造成輕度染色體錯(cuò)誤分離，但是不會(huì)造成死亡(Janssen,A.等人)。但是，這些細(xì)胞對(duì)使用低劑量的抗有絲分裂劑諸如紫杉醇(Janssen,A.等人.)和長(zhǎng)春新堿(Tannous,B.A.,等人.)的治療更敏感。以上資料提供了TTK抑制劑作為選擇性抗癌療法的方案的生物學(xué)基礎(chǔ)。

TTK激酶抑制劑可用于治療多種癌癥，并且可以作為單一藥劑或與其它化學(xué)治療劑聯(lián)合應(yīng)用。

WO 2012/101032A1(Nerviano Medical Sciences SRL)涉及三環(huán)吡咯并衍生物，其調(diào)節(jié)蛋白激酶的活性，且因此可用于治療由失調(diào)的蛋白激酶活性造成的疾病。

Bayer Schering Pharma A.G.在WO2011/063908A1中將三唑并吡啶并在WO2012/080229A1和WO2011/013729A1中將咪唑并-吡嗪公開(kāi)為T(mén)TK的抑制劑。三種代表性抑制劑的表征表明了TTK激酶活性的抑制(具有1-10nM的IC₅₀)和人癌細(xì)胞系的增殖抑制(具有從160nM至>10μM的IC₅₀)(Jemaà,M.等人,Cell Death Different.20:1532；2013)。證實(shí)了所述化合物之一Mps-BAY2b會(huì)抑制小鼠異種移植物模型中的HeLa-Matu宮頸腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)并增加紫杉醇在該模型中的效力(Jemaà,M.等人.)，從而證實(shí)了以前用RNA干擾技術(shù)表明的TTK抑制的化學(xué)療法敏化效應(yīng)(Janssen,A.等人.)。

Nerviano Medical Sciences S.R.L.在WO2009/156315A1中將吡唑并-喹唑啉公開(kāi)為T(mén)TK的抑制劑。在該專利中描述的一種化合物NMS-P715以8-182nM的半數(shù)最大抑制濃度(IC₅₀)抑制TTK激酶活性，取決于在測(cè)定中是否包括預(yù)溫育步驟(Colombo,R.,等人,Cancer Res.70:10255；2010)。NMS-P715也抑制來(lái)自不同腫瘤起源的癌細(xì)胞系的增殖(具有1μM和更高的IC₅₀)，并抑制A375和A2780小鼠異種移植物模型中的腫瘤生長(zhǎng)(Colombo,R.等人.)。

Myriad Pharmaceuticals,Inc.在WO2010/111406A2中將化合物公開(kāi)為T(mén)TK的抑制劑。一種代表性的化合物MPI 4079605以1.8nM的IC₅₀抑制TTK(Tardif,K.D.,等人,Mol.Cancer Res.10:2267；2011)。將癌細(xì)胞系治療72小時(shí)揭示了許多細(xì)胞系幾乎沒(méi)有敏感性(Tardif,K.D.,等人.)。MPI 4079605在結(jié)構(gòu)上類似于reversine和MPS1-IN-1，它們是兩種其它的公開(kāi)的TTK抑制劑(Kwiatkowski,N.,等人,Nat.Chem.Biol.6:359；2010；Santiguida,S.,等人,J.Cell.Biol.190:73；2010)。

顯然需要具有有效激酶抑制活性和抗增殖活性的TTK抑制劑。

我們已經(jīng)合成了一系列(5,6-二氫)嘧啶并[4,5-e]吲嗪，并發(fā)現(xiàn)這些化合物是TTK激酶活性和腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的非常有效的抑制劑。

本發(fā)明提供了(5,6-二氫)嘧啶并[4,5-e]吲嗪衍生物。

更具體地，本發(fā)明提供了根據(jù)式I的(5,6-二氫)嘧啶并[4,5-e]吲嗪衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明提供了抑制TTK活性的化合物，它們作為唯一藥劑或者與其它活性成分組合用于治療過(guò)度增殖性障礙、特別是由染色體不穩(wěn)定性或非整倍性造成或與其有關(guān)的癌癥的用途，以及包含這樣的化合物和藥用載體的藥物組合物。

本發(fā)明的目的是提供(5,6-二氫)嘧啶并[4,5-e]吲嗪、包含這些化合物的藥物組合物和它們?cè)谥委熤械挠猛?。具體地，本發(fā)明涉及(5,6-二氫)嘧啶并[4,5-e]吲嗪在癌癥的治療中的用途。

更具體地，本發(fā)明提供了根據(jù)式I的(5,6-二氫)嘧啶并[4,5-e]吲嗪或其藥學(xué)上可接受的鹽。

其中，

R¹和R²獨(dú)立地選自：

a)(6-10C)芳基，

b)(1-5C)雜芳基，

其中兩個(gè)基團(tuán)任選地可以被取代。

在一個(gè)實(shí)施方案中，R¹選自：

R¹¹是H、鹵素、(1-2C)烷基、(2-3C)烯基、(2-3C)炔基、(1-2C)烷氧基或OC₂H₃，所有烷基和烷氧基任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代；

R¹²是H、鹵素、(1-2C)烷基或(1-2C)烷氧基；

R¹³是R¹³¹CH₂、R¹³²O、R¹³³R¹³⁴N、R¹³⁵C(O)、R¹³⁶S、R¹³⁶S(O)、R¹³⁶S(O)(NH)、R¹³⁷SO₂、(2-7C)雜環(huán)烷基或(1-5C)雜芳基，每個(gè)雜環(huán)烷基或雜芳基任選地被(1-2C)烷基、氟、羥基、氧代、(1-2C)烷氧基、(1-6C)烷基羰基、(1-6C)烷基磺酰基、(1-5C)烷氧基羰基、(1-6C)烷基氨基羰基、(3-6C)環(huán)烷基羰基、(2-7C)雜環(huán)烷基羰基或二[(1-2C)烷基]氨基取代，每個(gè)烷基羰基、烷基磺?；?、烷氧基羰基、烷基氨基羰基、環(huán)烷基羰基或雜環(huán)烷基羰基任選地被(1-2C)烷基、氟、羥基、氰基、氧代或(1-2C)烷氧基取代；

R¹³¹是(1-6C)烷基羰基氨基、(3-6C)環(huán)烷基羰基氨基或(2-7C)雜環(huán)烷基羰基氨基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-2C)烷基、氟、羥基或(1-2C)烷氧基的基團(tuán)取代；

R¹³²是(1-6C)烷基、(3-6C)環(huán)烷基、(2-7C)雜環(huán)烷基、(6-10C)芳基或(1-5C)雜芳基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-2C)烷基、鹵素、羥基、(1-2C)烷氧基、二[(1-2C)烷基]氨基或(2-7C)雜環(huán)烷基的基團(tuán)取代；

R¹³³是(1-6C)烷基、(3-6C)環(huán)烷基、(2-7C)雜環(huán)烷基(1-6C)烷基羰基、(1-5C)烷氧基羰基、(3-6C)環(huán)烷基羰基或(2-7C)雜環(huán)烷基羰基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-2C)烷基、鹵素、羥基或(1-2C)烷氧基、二[(1-2C)烷基]氨基或(2-7C)雜環(huán)烷基的基團(tuán)取代；

R¹³⁴是氫或(1-2C)烷基；

R¹³⁵是(2-7C)雜環(huán)烷基、(1-6C)烷基氨基、二[(1-6C)烷基]氨基、(2-7C)雜環(huán)烷基氨基或(3-6C)環(huán)烷基氨基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-2C)烷基、氟、羥基、(1-2C)烷氧基、二[(1-2C)烷基]氨基、(2-7C)雜環(huán)烷基、氧代、氰基或氨基的基團(tuán)取代；

R¹³⁶是(1-6C)烷基、(3-6C)環(huán)烷基、(2-7C)雜環(huán)烷基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-2C)烷基、氟、羥基或(1-2C)烷氧基的基團(tuán)取代；

R¹³⁷是(1-6C)烷基、(3-6C)環(huán)烷基、(2-7C)雜環(huán)烷基、(1-6C)烷基氨基、二[(1-6C)烷基]氨基、(2-7C)雜環(huán)烷基氨基或(3-6C)環(huán)烷基氨基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-2C)烷基、氟、羥基或(1-2C)烷氧基的基團(tuán)取代；

R¹⁴是H、鹵素、(1-2C)烷基或(1-2C)烷氧基；且

R¹⁵是H、鹵素。

在上式I中，R²選自：

R²¹是H、鹵素、(1-3C)烷基、(1-2C)烷氧基、羥基(1-2C)烷基、(3-4C)環(huán)烷基、(2-3C)烯基或氰基；

R²²是H、鹵素、(1-2C)烷基或(1-2C)烷氧基；

R²³是H、鹵素、(1-2C)烷基、(1-2C)烷氧基、氰基或羥基；

R²⁴是H、鹵素、(1-2C)烷基或(1-2C)烷氧基；

R²⁵是H、鹵素、(1-3C)烷基、(1-2C)烷氧基、羥基(1-2C)烷基、(3-4C)環(huán)烷基、(2-3C)烯基或氰基；

R²⁶是H、(1-6C)烷基、(3-6C)環(huán)烷基、(2-5C)雜環(huán)烷基、(1-2C)烷氧基[(2-4C)烷氧基]_n(1-6C)烷基，其中n代表1、2、3或4的整數(shù)，所有烷基、雜環(huán)烷基和(1-2C)烷氧基[(2-4C)烷氧基]_n(1-6C)烷基任選地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-2C)烷基、(1-2C)烷氧基、羥基、氧代、氨基、(3-6C)環(huán)烷基、二[(1-2C)烷基]氨基或(2-5C)雜環(huán)烷基的基團(tuán)取代。

在一個(gè)有趣的實(shí)施方案中，R²選自：

此外，已經(jīng)證實(shí)了相對(duì)于極體樣激酶1(PLK1)具有優(yōu)良選擇性的非常有效的TTK抑制劑，其中R²是：

作為這種相對(duì)于PLK1的選擇性的推論，滿足該R²定義的化合物經(jīng)常表現(xiàn)出對(duì)Aurora A(AurA)和/或Aurora C(AurC)激酶的高選擇性。

在上式I中，在R²中的R²¹和R²⁵中僅一個(gè)可以是H。

本文中使用的術(shù)語(yǔ)表示以下：

鹵素是指氟、氯、溴或碘，氟、氯或溴是優(yōu)選的鹵素，氟或氯是更優(yōu)選的。

(1-2C)烷基是指具有1-2個(gè)碳原子的烷基，是甲基或乙基。甲基可以指示為Me或CH₃。

(1-3C)烷基是指具有1-3個(gè)碳原子的分支的或未分支的烷基，是甲基、乙基、丙基或異丙基。

(1-4C)烷基是指具有1-4個(gè)碳原子的分支的或未分支的烷基，是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基，(1-3C)烷基是優(yōu)選的。

(1-5C)烷基是指具有1-5個(gè)碳原子的分支的或未分支的烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和異戊基，(1-4C)烷基是優(yōu)選的。

(1-6C)烷基是指具有1-6個(gè)碳原子的分支的或未分支的烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、正戊基和正己基。(1-5C)烷基是優(yōu)選的，(1-4C)烷基是更優(yōu)選的。

(1-2C)烷氧基是指具有1-2個(gè)碳原子的烷氧基，所述烷基部分具有如前面定義的相同含義。

(2-4C)烷氧基是指具有2-4個(gè)碳原子的烷氧基，例如乙氧基、丙氧基、丁氧基、異丙氧基、異丁氧基和叔丁氧基。乙氧基和丙氧基是優(yōu)選的。乙氧基是更優(yōu)選的。

(1-3C)烷氧基是指具有1-3個(gè)碳原子的烷氧基，所述烷基部分具有如前面定義的相同含義。(1-2C)烷氧基是優(yōu)選的。

(1-4C)烷氧基是指具有1-4個(gè)碳原子的烷氧基，所述烷基部分具有如前面定義的相同含義。(1-3C)烷氧基是優(yōu)選的，(1-2C)烷氧基是最優(yōu)選的。

(1-5C)烷氧基是指具有1-5個(gè)碳原子的烷氧基，所述烷基部分具有如前面定義的相同含義。(1-4C)烷氧基是優(yōu)選的，(1-3C)烷氧基是更優(yōu)選的。

(2-3C)烯基是指具有2-3個(gè)碳原子的分支的或未分支的烯基，諸如乙烯基或2-丙烯基。

(2-3C)炔基是指乙炔基或2-丙炔基。

(3-4C)環(huán)烷基是指具有3-4個(gè)碳原子的環(huán)烷基，是環(huán)丙基或環(huán)丁基。

(3-6C)環(huán)烷基是指具有3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。環(huán)丙基和環(huán)丁基是優(yōu)選的。

(2-5C)雜環(huán)烷基是指這樣的雜環(huán)烷基：其具有2-5個(gè)碳原子，優(yōu)選3-5個(gè)碳原子；和一個(gè)或兩個(gè)選自N、O和/或S的雜原子，其可以通過(guò)雜原子(如果可行的話)或碳原子連接。優(yōu)選的雜原子是N或O。優(yōu)選的是氧雜環(huán)丁基(oxetanyl)、氮雜環(huán)丁基(azetidinyl)、哌啶基、嗎啉基、吡咯烷基和哌嗪基。最優(yōu)選的(2-5C)雜環(huán)烷基是氧雜環(huán)丁基和氮雜環(huán)丁基。

(2-7C)雜環(huán)烷基是指這樣的雜環(huán)烷基：其具有2-7個(gè)碳原子，優(yōu)選2-5個(gè)碳原子，和一個(gè)或兩個(gè)選自N、O和/或S的雜原子。優(yōu)選的雜原子是N或O。優(yōu)選的(2-7C)雜環(huán)烷基是氮雜環(huán)丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、高哌啶基、嗎啉基或硫代嗎啉基。所述雜環(huán)烷基可以通過(guò)雜原子(如果可行的話)連接。

(6-10C)芳基是指具有6-10個(gè)碳原子的芳烴基，諸如苯基、萘基、四氫萘基或茚基。優(yōu)選的(6-10C)芳基是苯基。

(1-5C)雜芳基是指被取代的或未被取代的芳族基團(tuán)，其具有1-5個(gè)碳原子和1-4個(gè)選自N、O和/或S的雜原子。(1-5C)雜芳基可以任選地被取代。優(yōu)選的(1-5C)雜芳基是異唑基、吡唑基，吡啶基、嘧啶基、吡嗪基，更優(yōu)選的(1-5C)雜芳基是吡唑基、異唑基、吡啶基和嘧啶基。

(3-6C)環(huán)烷基氨基是指被具有如前面定義的相同含義的含有3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基單取代的氨基。

(1-6C)烷基氨基是指被具有如前面定義的相同含義的含有1-6個(gè)碳原子的烷基單取代的氨基。優(yōu)選的(1-6C)烷基氨基是甲基氨基。

二[(1-2C)烷基]氨基是指被烷基二取代的氨基，所述烷基各自獨(dú)立地含有1-2個(gè)碳原子且具有如前面定義的相同含義。優(yōu)選的二[(1-2C)烷基]氨基是二甲基氨基。

二[(1-6C)烷基]氨基是指被烷基二取代的氨基，所述烷基各自獨(dú)立地含有1-6個(gè)碳原子且具有如前面定義的相同含義。優(yōu)選的二[(1-6C)烷基]氨基是N-甲基丙烷-1-氨基。

(2-7C)雜環(huán)烷基氨基是指被具有如前面定義的相同含義的含有2-7個(gè)碳原子的(2-7)雜環(huán)烷基單取代的氨基。

(1-6C)烷基氨基羰基是指被氨基取代的羰基。所述氨基被具有1-6個(gè)碳原子且具有如前面定義的相同含義的烷基單取代。

(2-7C)雜環(huán)烷基羰基是指被具有2-7個(gè)碳原子且具有如前面定義的相同含義的(2-7C)雜環(huán)烷基取代的羰基。

(1-5C)烷氧基羰基是指被如前面定義的烷氧基取代的羰基，所述烷氧基的烷基部分具有1-6個(gè)碳原子。

(1-6C)烷基磺?；侵副痪哂?-6個(gè)碳原子且具有如前面定義的相同含義的(1-6C)烷基取代的磺?；?。

(1-6C)烷基羰基是指被具有1-6個(gè)碳原子且具有如前面定義的相同含義的(1-6C)烷基取代的羰基。

(3-6C)環(huán)烷基羰基是指被具有3-6個(gè)碳原子且具有如前面定義的相同含義的(3-6C)環(huán)烷基取代的羰基。

(1-6C)烷基氨基羰基是指被氨基取代的羰基。所述氨基被具有1-6個(gè)碳原子且具有如前面定義的相同含義的烷基單取代。

(1-6C)烷基羰基氨基是指被羰基取代的氨基。所述羰基被具有1-6個(gè)碳原子且具有如前面定義的相同含義的烷基單取代。

(3-6C)環(huán)烷基羰基氨基是指被羰基取代的氨基。所述羰基被具有3-6個(gè)碳原子且具有如前面定義的相同含義的環(huán)烷基單取代。

(2-7C)雜環(huán)烷基羰基氨基是指被羰基取代的氨基。所述羰基被具有2-7個(gè)碳原子且具有如前面定義的相同含義的(2-7C)雜環(huán)烷基單取代。

羥基(1-2C)烷基是指被羥基取代的、具有如前面定義的相同含義的、具有1-2個(gè)碳原子的(1-2C)烷基。

(1-2C)烷氧基[(2-4C)烷氧基]_n(1-6C)烷基是指被一個(gè)或多個(gè)(2-4C)烷氧基取代的、具有如前面定義的相同含義的、具有1-6個(gè)碳原子的(1-6C)烷基，其中n代表1、2、3或4的整數(shù)，所述烷氧基彼此直鏈連接。最后一個(gè)(2-4C)烷氧基被(1-2C)烷氧基取代。在(1-2C)烷氧基[(2-4C)烷氧基]_n(1-6C)烷基中，優(yōu)選的(1-2C)烷氧基是甲氧基，優(yōu)選的(2-4C)烷氧基是乙氧基，且優(yōu)選的(1-6C)烷基是乙基，優(yōu)選地n是1、2、3、4，n是1或2是最優(yōu)選的。

在以上具有多官能團(tuán)的定義中，連接點(diǎn)是在最后的基團(tuán)。

當(dāng)在取代基的定義中指示所述取代基的“所有烷基”任選地被取代時(shí)，這也包括烷氧基的烷基部分。

術(shù)語(yǔ)“取代”是指，指定的一個(gè)/多個(gè)原子上的一個(gè)或多個(gè)氫被來(lái)自指定基團(tuán)的選擇替代，前提條件是，未超過(guò)所指定的原子在現(xiàn)有情況下的正常化合價(jià)，并且所述取代產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物。取代基和/或變量的組合只有在該組合產(chǎn)生穩(wěn)定化合物時(shí)才是允許的。

“穩(wěn)定的化合物”或“穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)”被定義為這樣的化合物或結(jié)構(gòu)：其足夠穩(wěn)固以承受從反應(yīng)混合物中分離至有用的純度和配制到有效的治療劑中。

術(shù)語(yǔ)“任選地取代的”是指任選地被特定的基團(tuán)、殘基或部分取代。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式I的化合物，其中R¹³是R¹³²O、R¹³⁵C(O)、(2-7C)雜環(huán)烷基或(1-5C)雜芳基，每個(gè)雜環(huán)烷基或雜芳基任選地被(1-2C)烷基、(1-6C)烷基羰基、(1-6C)烷基磺酰基、(1-5C)烷氧基羰基、(1-6C)烷基氨基羰基、(3-6C)環(huán)烷基羰基或(2-7C)雜環(huán)烷基羰基取代，每個(gè)烷基羰基、烷基磺?；?、烷氧基羰基、烷基氨基羰基、環(huán)烷基羰基或雜環(huán)烷基羰基任選地被(1-2C)烷基、氟、(1-2C)烷氧基取代；R¹³²選自(1-6C)烷基、(3-6C)環(huán)烷基、(2-7C)雜環(huán)烷基、(6-10C)芳基或(1-5C)雜芳基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-2C)烷基、鹵素、羥基、(1-2C)烷氧基、二[(1-2C)烷基]氨基或(2-7C)雜環(huán)烷基的基團(tuán)取代，且R¹³⁵選自(2-7C)雜環(huán)烷基、(1-6C)烷基氨基、二[(1-6C)烷基]氨基、(2-7C)雜環(huán)烷基氨基或(3-6C)環(huán)烷基氨基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-2C)烷基、氟、羥基、(1-2C)烷氧基、二[(1-2C)烷基]氨基、(2-7C)雜環(huán)烷基、氧代、氰基或氨基的基團(tuán)取代。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式I的化合物，其中R¹³是R¹³²O、R¹³⁵C(O)；或R¹³是哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、吡唑基或異唑基(每個(gè)任選地被(1-2C)烷基、(1-6C)烷基羰基、(1-6C)烷基磺?；?、(1-5C)烷氧基羰基、(1-6C)烷基氨基羰基、(3-6C)環(huán)烷基羰基或(2-7C)雜環(huán)烷基羰基取代，每個(gè)烷基羰基、烷基磺?；⑼檠趸驶?、烷基氨基羰基、環(huán)烷基羰基或雜環(huán)烷基羰基任選地被(1-2C)烷基、氟或(1-2C)烷氧基取代。R¹³²選自(1-6C)烷基、哌啶基、吡咯烷基或氮雜環(huán)丁基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-2C)烷基、(1-2C)烷氧基或二[(1-2C)烷基]氨基的基團(tuán)取代，且R¹³⁵選自哌啶基、硫代嗎啉基、嗎啉基、高哌嗪基、(1-6C)烷基氨基、(3-6C)環(huán)烷基氨基或哌啶基氨基、氮雜環(huán)丁基氨基、四氫吡喃基氨基或3-氧雜二環(huán)[3.1.0]己烷-6-氨基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-2C)烷基、氟、羥基或(1-2C)烷氧基、二[(1-2C)烷基]氨基、(2-7C)雜環(huán)烷基、氧代、氰基或氨基的基團(tuán)取代。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式I的化合物，其中R¹選自：

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式I的化合物，其中R¹²和R¹⁵各自是H且R¹⁴是H、氟、氯或(1-2C)烷基。

本發(fā)明也涉及根據(jù)式I的化合物，其中R¹¹是H、(1-2C)烷基或(1-2C)烷氧基，所有烷基和烷氧基任選地被一個(gè)或多個(gè)氟取代。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式I的化合物，其中R²選自：

在一個(gè)特定實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式I的化合物，其中R²是：

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式I的化合物，其中R²³是H或(1-6C)烷基，且R²²和R²⁴各自是H。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式I的化合物，其中R²¹選自H、鹵素、(1-6C)烷基或氰基。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式I的化合物，其中R²³是H或(1-2C)烷基，且R²²和R²⁴各自是H，且R²¹和R²⁵獨(dú)立地選自鹵素、(1-3C)烷基、甲氧基、羥基甲基或氰基。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式I的化合物，其中R²⁶是H、(1-6C)烷基、氧雜環(huán)丁基、氮雜環(huán)丁基或(1-2C)烷氧基[(2-4C)烷氧基]_n(1-6C)烷基，其中n代表1或2的整數(shù)，所有烷基、氧雜環(huán)丁基和氮雜環(huán)丁基任選地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-2C)烷基、(1-2C)烷氧基、羥基、二[(1-2C)烷基]氨基或氧雜環(huán)丁基的基團(tuán)取代。

本發(fā)明也涉及這樣的化合物：其中上文定義的本發(fā)明的各個(gè)方面中的所有具體定義R¹、R²、R^11-15、R^21-26和R^131-137和所有取代基以任意組合發(fā)生在式I的化合物的定義內(nèi)。

在本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明的化合物對(duì)TTK具有抑制效能，具有10μM或更低的IC₅₀。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及式I的化合物，其對(duì)TTK具有抑制效能，具有小于100nM的IC₅₀。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及式I的化合物，其對(duì)TTK具有抑制效能，具有小于10nM的IC₅₀。

術(shù)語(yǔ)IC₅₀是指它的最大體外作用的50％抑制所需的試驗(yàn)化合物的濃度。

使用關(guān)于磷酸化學(xué)物質(zhì)的固定化金屬測(cè)定(Immobilized Metal Assay for Phosphochemicals，IMAP)測(cè)定，可以測(cè)量TTK激酶活性的抑制。IMAP是基于磷酸化的肽底物的親和力捕獲的均勻熒光偏振(FP)測(cè)定。IMAP使用熒光素標(biāo)記的肽底物，其在被蛋白激酶磷酸化后結(jié)合至所謂的IMAP納米顆粒，其被三價(jià)金屬絡(luò)合物衍生化。結(jié)合會(huì)造成肽的分子翻轉(zhuǎn)(molecular tumbling)速率的變化，并導(dǎo)致與底物肽連接的熒光素標(biāo)記的觀察到的FP值的增加(Gaudet,E.A.等人.J.Biomol.Screen 8:164；2003)。

在使用腫瘤細(xì)胞系的增殖測(cè)定中，可以測(cè)量TTK抑制劑的生物活性。還可以在集落形成測(cè)定中，和在動(dòng)物模型的背景下在用人或小鼠細(xì)胞系或腫瘤組織移植的小鼠中，確定所述化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的活性。

式I的化合物可以形成鹽，所述鹽也在本發(fā)明范圍內(nèi)。在本文中對(duì)式I的化合物的提及被理解為包括對(duì)其鹽的提及，除非另外指明。本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹽”表示與無(wú)機(jī)和/或有機(jī)酸形成的酸式鹽，以及與無(wú)機(jī)和/或有機(jī)堿形成的堿式鹽。另外，當(dāng)式I的化合物可以含有堿性部分(例如，但不限于吡啶或咪唑)和酸性部分時(shí)，可以形成兩性離子(“內(nèi)鹽”)，并且包括在本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹽”的范圍之內(nèi)。藥學(xué)上可接受的(即，無(wú)毒的、生理上可接受的)鹽是優(yōu)選的。可以如下形成式I的化合物的鹽：例如，通過(guò)在介質(zhì)(例如，鹽沉淀于其中的介質(zhì))中，或在水性介質(zhì)中，使式I的化合物與一定量(諸如等同量)的酸或堿反應(yīng)，隨后低壓凍干。

示例性的酸加成鹽包括：乙酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、乳酸鹽、馬來(lái)酸鹽、甲磺酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、磷酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽(toluenesulfonates)(也被稱作甲苯磺酸鹽(tosylates))等。另外，通常認(rèn)為適合于由堿性藥學(xué)化合物形成藥學(xué)可使用的鹽的酸在下列文獻(xiàn)中進(jìn)行了討論：例如，P.Stahl等人,Camille G.(編)Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties,Selection and Use.(2002)Zurich:Wiley-VCH；S.Berge等人,J.of Pharm.Sci.(1977)66(1)1-19；P.Gould,Int.J.Pharm.(1986)33 201-21 7；和erson等人,The Practice of Medicinal Chemistry(1996),Academic Press,New York；和The Orange Book(Food&Drug Administration,Washington,D.C.在它們的網(wǎng)站上)。

示例性的堿式鹽包括：銨鹽，堿金屬鹽，例如鈉、鋰和鉀鹽，堿土金屬鹽，例如鈣和鎂鹽，與有機(jī)堿(例如，有機(jī)胺)諸如二環(huán)己胺、叔丁基胺形成的鹽，和與氨基酸諸如精氨酸、賴氨酸等形成的鹽?？梢杂孟铝性噭⒑袎A性氮的基團(tuán)季銨化：例如，低級(jí)烷基鹵化物(例如，甲基、乙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)，硫酸二烷基酯(例如，硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二丁酯)，長(zhǎng)鏈鹵化物(例如，癸基、月桂基和硬脂酰的氯化物、溴化物和碘化物)，芳烷基鹵化物(例如，芐基溴和苯乙基溴)，等。

式I的化合物可以具有以超過(guò)一種形式結(jié)晶的能力(被稱作多態(tài)性的特征)，且應(yīng)當(dāng)理解，這樣的多晶型形式(“多晶型物”)是在式I的范圍內(nèi)。多態(tài)性通?？梢宰鳛閷?duì)溫度或壓力或二者的變化的應(yīng)答而發(fā)生，并且也可以由結(jié)晶過(guò)程中的變化引起。通過(guò)本領(lǐng)域已知的各種物理特征(諸如x-射線衍射圖樣、溶解度和熔點(diǎn))可以區(qū)分多晶型物。

式I的化合物可以含有不對(duì)稱的或手性的中心，并且，因此，以不同的立體異構(gòu)形式存在。預(yù)期式I的化合物的所有立體異構(gòu)形式及其混合物(包括外消旋混合物)形成本發(fā)明的部分。另外，本發(fā)明包括所有幾何和位置異構(gòu)體。例如，如果式I的化合物包含雙鍵或稠合環(huán)，在本發(fā)明范圍內(nèi)包括順式-和反式-形式以及混合物。

基于它們的物理化學(xué)差異，通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法，例如，通過(guò)色譜法和/或分步結(jié)晶，可以將非對(duì)映異構(gòu)體混合物分離成它們的各非對(duì)映異構(gòu)體?？梢匀缦路蛛x對(duì)映異構(gòu)體：通過(guò)與適當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)活性化合物(例如手性助劑諸如手性醇或Mosher氏酰氯)反應(yīng)將對(duì)映異構(gòu)的混合物轉(zhuǎn)化成非對(duì)映異構(gòu)體混合物，分離非對(duì)映異構(gòu)體，并將各非對(duì)映異構(gòu)體轉(zhuǎn)化(例如水解)成對(duì)應(yīng)的純對(duì)映異構(gòu)體。并且，有些式I的化合物可以是阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體(例如被取代的聯(lián)芳基)，并被視作本發(fā)明的部分。還可以通過(guò)使用手性HPLC柱來(lái)分離對(duì)映異構(gòu)體。

式I的化合物還可能以不同的互變異構(gòu)形式存在，并且在本發(fā)明范圍內(nèi)包括所有這樣的形式。并且，例如，本發(fā)明包括所述化合物的所有酮-烯醇和亞胺-烯胺形式。

本發(fā)明化合物的所有立體異構(gòu)體(例如，幾何異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體等)(包括所述化合物的鹽、溶劑化物、酯和前藥的那些，以及所述前藥的鹽、溶劑化物和酯的那些)，例如由于各種取代基上的不對(duì)稱碳而可能存在的那些立體異構(gòu)體，包括對(duì)映異構(gòu)形式(甚至在不存在不對(duì)稱碳的情況下，其也可能存在)、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)形式、阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)形式，在本發(fā)明范圍內(nèi)涵蓋。本發(fā)明的手性中心可以具有如IUPAC 1974Recommendations所定義的S或R構(gòu)型。術(shù)語(yǔ)“鹽”、“溶劑化物”、“酯”、“前藥”等的使用意圖同樣應(yīng)用于根據(jù)本發(fā)明的化合物的對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、位置異構(gòu)體、外消旋體或前藥的鹽、溶劑化物、酯和前藥。

具有式(I)的化合物或藥學(xué)上接受的鹽可以形成水合物或溶劑化物。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，帶電荷的化合物當(dāng)與水一起低壓凍干時(shí)形成水合的物質(zhì)，或當(dāng)在溶液中與適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑一起濃縮時(shí)形成溶劑化的物質(zhì)。本發(fā)明的化合物包括列出的化合物的水合物或溶劑化物。

在式I的化合物中，所述原子可以表現(xiàn)出它們的天然同位素豐度，或者一個(gè)或多個(gè)原子可以人工地富集特定同位素，所述特定同位素具有相同的原子數(shù)，但是其原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同于在自然界中占優(yōu)勢(shì)地存在的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)。本發(fā)明意在包括式I的化合物的所有合適的同位素變體。例如，氫(H)的不同同位素形式包括氕(¹H)和氘(²H)。氕是在自然界中存在的占優(yōu)勢(shì)的氫同位素。

較重同位素諸如氘(即，²H)的取代可以提供某些源自較大代謝穩(wěn)定性的治療優(yōu)點(diǎn)(例如，增加的體內(nèi)半衰期或減小的劑量需求)，且因此在某些情況下可能是優(yōu)選的。通?？梢匀缦轮苽渫凰貥?biāo)記的式I的化合物：按照類似于在路線圖中和/或在下文實(shí)施例中公開(kāi)的那些方法的方法，用適當(dāng)?shù)耐凰貥?biāo)記的試劑替換非同位素標(biāo)記的試劑。

本發(fā)明的化合物可以用于治療中。

在一個(gè)方面，本發(fā)明的化合物可以用于治療TTK介導(dǎo)的疾病或病癥。具體地，式I的化合物或它們的鹽及其藥物組合物可以用于治療由以下因素造成或與以下因素有關(guān)的疾病和病癥：TTK蛋白的過(guò)表達(dá)或過(guò)度活性，和/或TTK活性的任何調(diào)節(jié)劑或有絲分裂限制點(diǎn)的其它調(diào)節(jié)劑(諸如MAD1、MAD2、BUB1、BUBR1、BUB3等)的異常表達(dá)、活性或調(diào)節(jié)(Kops,G.J.P.L.,等人；Nature Rev.Cancer 5:773；2005)。

因而，在本發(fā)明的一個(gè)方面，根據(jù)式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以用于治療由TTK蛋白的過(guò)表達(dá)或過(guò)度活性造成或與其有關(guān)的疾病和病癥。

在另一個(gè)方面，根據(jù)式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以用于治療過(guò)度增殖障礙。

本發(fā)明因而涉及一種調(diào)節(jié)、調(diào)整或抑制TTK以預(yù)防和/或治療過(guò)度增殖障礙的方法。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明的化合物可以用于治療由異常細(xì)胞增殖造成的疾病或病癥、和/或與染色體不穩(wěn)定性、染色體重排和/或非整倍性有關(guān)的疾病。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明的化合物可以用于治療癌癥，尤其是用于治療或預(yù)防由失控的細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞增殖和/或細(xì)胞存活造成或與其有關(guān)的疾病。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明的化合物可以用于治療實(shí)體瘤、血液腫瘤和/或其轉(zhuǎn)移灶，例如，乳房和婦科腫瘤、頭和頸腫瘤、腦腫瘤和腦轉(zhuǎn)移灶、胸腔的腫瘤(包括非小細(xì)胞和小細(xì)胞肺腫瘤)、胃腸腫瘤、內(nèi)分泌腫瘤、泌尿道腫瘤(包括腎、膀胱和前列腺腫瘤)、皮膚腫瘤和肉瘤、白血病和骨髓增生異常綜合征、惡性淋巴瘤和/或其轉(zhuǎn)移灶。

本發(fā)明的另一個(gè)方面在于式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制備藥物和用于治療其中過(guò)度增殖細(xì)胞起顯著作用的障礙的用途，所述藥物要用于治療由TTK蛋白的過(guò)表達(dá)或過(guò)度活性造成或與其有關(guān)的疾病和病癥。

在本文中包括治療方法和/或藥物組合物，其中將至少一種式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與至少一種其它的活性劑聯(lián)合施用。所述其它的活性劑可以是化學(xué)治療劑、抗體或活性多肽。

本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及與一種或多種其它藥物組合的式I的化合物。

本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其包含式I的化合物及其鹽、和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。所述載體、稀釋劑或賦形劑必須是可接受的，其含義是，與制劑的其它成分相容且對(duì)其接受者無(wú)害。

與這樣的藥學(xué)上可接受的輔助劑(例如描述在標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)Gennaro,A.R.等人,Remington:The Science and Practice of Pharmacy(第20版,Lippincott Williams&Wilkins,2000，特別參見(jiàn)第5部分:Pharmaceutical Manufacturing)中)相混合，可以將活性劑壓制成固體劑量單元，諸如丸劑、片劑，或加工成膠囊劑或栓劑。借助于藥學(xué)上可接受的液體，所述活性劑可以作為流體組合物(例如作為注射制劑)以溶液、懸浮液、乳劑的形式或者作為或噴霧劑(例如鼻腔噴霧劑)施用。

本發(fā)明的藥物組合物可以以每個(gè)單元?jiǎng)┝亢蓄A(yù)定量的活性成分的單元?jiǎng)┝啃问匠尸F(xiàn)。這樣的單元可以含有，例如，5μg至1g、優(yōu)選地1mg至700mg、更優(yōu)選地5mg至100mg式I的化合物，取決于正在治療的病癥、施用途徑以及患者的年齡、重量和病癥。這樣的單元?jiǎng)┝恳虼丝梢悦刻焓┯贸^(guò)1次。優(yōu)選的單元?jiǎng)┝拷M合物是含有如上文列出的每日劑量或亞劑量(用于每天施用超過(guò)1次)或其適當(dāng)比例(fraction)的活性成分的那些。此外，這樣的藥物組合物可以通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的方法中的任一種來(lái)制備。

本發(fā)明的藥物組合物可以適合通過(guò)任何適當(dāng)?shù)耐緩絹?lái)施用，例如通過(guò)口服(包括含服或舌下)、直腸、表面(topical)、吸入、鼻、眼、舌下、皮下、局部(local)或胃腸外(包括靜脈內(nèi)和肌肉內(nèi))途徑等，都呈用于施用的單元?jiǎng)┬?。這樣的組合物可以通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域已知的任意方法來(lái)制備，例如通過(guò)使活性成分與載體或賦形劑結(jié)合。劑型包括片劑、糖錠、分散體、懸浮液、溶液、膠囊劑、乳膏劑、軟膏劑、氣霧劑等。

本發(fā)明的化合物也可以作為蛋白-藥物綴合物來(lái)施用。所述化合物可以共價(jià)地結(jié)合(任選地用接頭分子)至肽或蛋白，諸如結(jié)合蛋白例如抗體。使用該方案，可以將綴合物遞送至靶組織。制備這樣的綴合物的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。

應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)將本發(fā)明的化合物與通常通過(guò)吸入、靜脈內(nèi)、口服或鼻內(nèi)途徑施用的其它治療劑聯(lián)合施用時(shí)，得到的藥物組合物可以通過(guò)相同途徑來(lái)施用。

本發(fā)明的化合物的治療有效量取決于許多因素，包括、例如，動(dòng)物的年齡和重量、需要治療的準(zhǔn)確病癥和它的嚴(yán)重程度、具有式I的具體化合物、制劑的性質(zhì)和施用途徑，并且最終由主治醫(yī)師或獸醫(yī)決定。但是，用于治療與不適當(dāng)?shù)腡TK活性有關(guān)的疾病或病癥的式I的化合物的有效量通常是在5μg至100mg/kg接受者(哺乳動(dòng)物)體重/天的范圍內(nèi)，且更通常是在5μg至10mg/kg體重/天的范圍內(nèi)。該量可以以每天單個(gè)劑量施用，或更常見(jiàn)地以每天多個(gè)(諸如2、3、4、5或6)亞劑量施用，使得總的每日劑量是相同的。可以將其鹽或溶劑化物的有效量確定為式I的化合物本身的有效量的比例。

一般而言，胃腸外施用需要比更依賴于吸收的其它施用方法更低的劑量。但是，用于人類的劑量?jī)?yōu)選地含有0.0001-25mg式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽/千克體重。期望的劑量可以呈現(xiàn)為一個(gè)劑量或呈現(xiàn)為在一天中以適當(dāng)間隔施用的多個(gè)亞劑量，或者，在女性接受者的情況下，呈現(xiàn)為要在月經(jīng)周期中以適當(dāng)?shù)娜臻g隔施用的劑量。劑量以及施用方案可以在男性和女性接受者之間不同。

本發(fā)明也涉及藥物組合物，其包含與藥學(xué)上可接受的輔助劑和任選的其它治療劑組合的式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。所述輔助劑必須是“可接受的”，其含義是，與組合物的其它成分相容且對(duì)其接受者無(wú)害。

本發(fā)明還包括藥物組合物，其包含與至少一種其它的治療活性劑組合的至少一種式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

對(duì)于癌癥的治療，可以將式I的化合物與一種或多種抗癌劑組合。這樣的藥劑的例子可以參見(jiàn)，Cancer Principles and Practice of Oncology，V.T.Devita和S.Hellman(編著),第6版(2001年2月15日),Lippincott Williams&Wilkins Publishers。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員基于藥物的特定特征和涉及的癌癥能夠辨別哪種藥劑組合是有用的。

通過(guò)有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域眾所周知的方法，可以制備本發(fā)明的(5,6-二氫)嘧啶并[4,5-e]吲嗪衍生物。參見(jiàn)，例如，J.March,‘Advanced Organic Chemistry’第4版,John Wiley and Sons。在合成順序中，可能必須和/或需要保護(hù)在涉及的任何分子上的敏感或反應(yīng)基團(tuán)。這借助于常規(guī)保護(hù)基(諸如在T.W.Greene和P.G.M.Wutts‘Protective Groups in Organic Synthesis’第3版,John Wiley and Sons,1999中描述的那些)來(lái)實(shí)現(xiàn)。任選地使用本領(lǐng)域眾所周知的方法在方便的后續(xù)階段除去保護(hù)基。

任選地分離和純化反應(yīng)的產(chǎn)物，如果需要的話，使用常規(guī)技術(shù)，包括、但不限于，過(guò)濾、蒸餾、結(jié)晶、色譜法等。任選地使用常規(guī)方式(包括物理常數(shù)和波譜數(shù)據(jù))表征這樣的物質(zhì)。

通過(guò)方案I所示的一般合成途徑，可以制備式I的5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪化合物，其中R¹-R^x具有前面定義的含義。

方案I

使用25％氨水在環(huán)境溫度可以從商業(yè)可得到的5-溴-2,4-二氯-嘧啶制備5-溴-2-氯-嘧啶-4-胺(II)。然后可以使得到的產(chǎn)物在甲醇中在升高的溫度與甲醇鈉反應(yīng)以得到5-溴-2-甲氧基-嘧啶-4-胺(III)。隨后，可以在有合適的鈀催化劑系統(tǒng)(例如乙酸鈀(II))、有機(jī)堿(如三乙胺)或無(wú)機(jī)堿(如碳酸鉀、碳酸銫或磷酸鉀)存在下在合適的溶劑系統(tǒng)(如二烷和水或二甲基甲酰胺的組合)中使用丙烯酸乙酯從化合物III制備化合物IV。雙鍵的還原和隨后環(huán)化可以在有合適的催化劑系統(tǒng)和溶劑(例如炭載鈀在甲醇中)存在下通過(guò)氫化來(lái)完成以提供內(nèi)酰胺V?？梢允褂肹1-(乙氧基羰基)環(huán)丙基]三(苯基)鏻四氟硼酸鹽在THF和合適的堿(諸如氫化鈉)中從內(nèi)酰胺V制備乙基酯VI。VI的氧化可以使用氧化試劑(諸如氧化錳或乙酸鉛(IV))來(lái)完成以提供衍生物VII?？梢匀缦聦⒒衔颲II轉(zhuǎn)化成衍生物IX：在用碘代三甲基硅烷(trimethylsilyliodide)適當(dāng)去保護(hù)以后，隨后在加熱條件下使用磷酰氯(V)轉(zhuǎn)化。R¹NH₂對(duì)2-氯-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯的取代可以在酸性條件下使用三氟乙酸或濃氯化氫溶液和適當(dāng)?shù)娜軇?如正丁醇或異丙醇)在微波輻射下完成?？商鎿Q地，可以在有合適的鈀催化劑系統(tǒng)(例如乙酸鈀(II)或四(三苯基膦)鈀(0))存在下在有無(wú)機(jī)堿(諸如碳酸鉀、碳酸銫或磷酸鉀)存在下在合適的溶劑系統(tǒng)(如二烷和水)中引入R¹NH₂以產(chǎn)生衍生物X。最后，可以如下完成衍生物X向具有式I的化合物的轉(zhuǎn)化：首先，將化合物X中的酯官能團(tuán)皂化，隨后使用本領(lǐng)域眾所周知的方法或通過(guò)酯官能團(tuán)的氨解(使用強(qiáng)堿諸如雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鋰)縮合成酰胺。

通過(guò)方案II中所示的一般合成途徑可以制備式I的嘧啶并[4,5-e]吲嗪化合物，其中R¹-R^x具有前面定義的含義。

方案II

使用氧化試劑(如氧化錳、氧或DDQ)可以執(zhí)行VII的氧化以提供衍生物XI?？梢匀缦聦⒒衔颴I轉(zhuǎn)化成氯化物XIII：在用碘代三甲基硅烷適當(dāng)去保護(hù)以后，隨后使用磷酰氯(V)在加熱條件下轉(zhuǎn)化。R¹NH₂對(duì)2-氯-嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯的取代可以在酸性條件下使用三氟乙酸或濃氯化氫溶液和適當(dāng)?shù)娜軇?如正丁醇或異丙醇)在微波輻射下進(jìn)行?？商鎿Q地，可以在有合適的鈀催化劑系統(tǒng)(例如乙酸鈀(II)或四(三苯基膦)鈀(0))存在下在有無(wú)機(jī)堿(諸如碳酸鉀、碳酸銫或磷酸鉀)存在下在合適的溶劑系統(tǒng)(如二烷和水)中引入R¹NH₂以產(chǎn)生衍生物XIV。最后，可以如下完成衍生物XIV向具有式I的化合物的轉(zhuǎn)化：首先，將化合物XIV中的酯官能團(tuán)皂化，隨后使用本領(lǐng)域眾所周知的方法或通過(guò)酯官能團(tuán)的氨解(使用強(qiáng)堿諸如雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鋰)縮合成酰胺。

下述實(shí)施例例證了本發(fā)明。

實(shí)施例

下述實(shí)施例是本發(fā)明的示例性實(shí)施方案，不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。試劑是商購(gòu)可得的，或根據(jù)文獻(xiàn)中的方法制備。

方法LCMS(A)

方法LCMS(B)

方法LCMS(C)

方法制備型HPLC

貫穿本申請(qǐng)關(guān)于化學(xué)術(shù)語(yǔ)使用下述縮寫(xiě)：

TFA 三氟乙酸

HATU O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽

DMF N,N-二甲基甲酰胺

THF 四氫呋喃

MeOH 甲醇

EtOAc 乙酸乙酯

DCM 二氯甲烷

Na₂SO₄ 硫酸鈉

TMS-Cl 三甲基氯硅烷

DiPEA N,N-二異丙基乙胺

EtOH 乙醇

10％Pd/C 10％炭載鈀

HPLC 高效液相色譜法

LCMS 液相色譜法與質(zhì)譜法檢測(cè)

NaOH 氫氧化鈉

HCl 氯化氫

KOH 氫氧化鉀

NaHCO₃ 碳酸氫鈉

4-DMAP 4-二甲基氨基吡啶

Boc 丁氧基羰基

Cbz 芐氧基羰基

HNO₃ 硝酸

LiHMDS 雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鋰

DDQ 2,3-二氯-5,6-二氰基-對(duì)-苯醌

DBU 1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯

DEAD 偶氮二甲酸二乙酯

使用Accelrys Draw(4.1版)產(chǎn)生實(shí)施例中的終產(chǎn)物的名稱。

中間體1

2-氯-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯

(a)5-溴-2-氯-嘧啶-4-胺

向5-溴-2,4-二氯-嘧啶(150g；658mmol)在THF(445mL)中的溶液中加入氫氧化銨(25％在水中的溶液，250mL)，并將得到的反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?0min。隨后將混合物蒸發(fā)至小體積，并在乙酸乙酯和水之間分配。將有機(jī)相分離，并用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮以得到137.3g(定量收率)5-溴-2-氯-嘧啶-4-胺。

(b)5-溴-2-甲氧基-嘧啶-4-胺

向5-溴-2-氯-嘧啶-4-胺(137.3g,658mmol)在甲醇(1L)中的懸浮液中逐份加入甲醇鈉(83.5g；1.54mol)。將反應(yīng)混合物回流攪拌2h。將反應(yīng)混合物濃縮至小體積(～400mL)并倒入飽和的氯化銨在水中的溶液(1.2L)。將該混合物攪拌15min，此后將水層用乙酸乙酯萃取。將合并的乙酸乙酯層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮以得到5-溴-2-甲氧基嘧啶-4-胺(133.7g,99.4％)。

(c)(E)-3-(4-氨基-2-甲氧基-嘧啶-5-基)丙-2-烯酸乙酯

將乙酸鈀(II)(1.21g,5.5mmol)和三苯基膦(3.40g,13.0mmol)溶解在無(wú)水且無(wú)氧的DMF(53mL)中并在30℃攪拌5min以得到橙色懸浮液。向該懸浮液中加入5-溴-2-甲氧基嘧啶-4-胺(44.1g,216mmol)在DMF(270mL)中的溶液、三乙胺(60.2mL,432mmol)和丙烯酸乙酯(23.5mL,216mmol)在DMF(50mL)中的溶液。將反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障略?00℃攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至小體積。將水(300mL)和鹽水(300mL)加入混合物中，隨后用乙酸乙酯(300mL，2次)萃取。將合并的有機(jī)層用水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中濃縮。將粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱色譜法(乙酸乙酯:庚烷＝2:1v/v％)純化以得到標(biāo)題化合物(38.2g,77％)。

(d)2-甲氧基-6,8-二氫-5H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮

向(E)-3-(4-氨基-2-甲氧基-嘧啶-5-基)丙-2-烯酸乙酯(12.52g,56.1mmol)在甲醇(250mL)中的攪拌溶液中加入10％炭載鈀(1.19g)在甲醇/乙醇＝3/1v/v％(30mL)中的懸浮液。將反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障略谑覝財(cái)嚢?5min。然后，加入甲酸銨(35.3g,561mmol)并將得到的反應(yīng)混合物回流過(guò)夜。冷卻反應(yīng)混合物以后，加入甲酸銨的新鮮部分(20g,317mmol)，并繼續(xù)回流攪拌另外一夜。將反應(yīng)混合物經(jīng)過(guò)濾，并將殘余物用二氯甲烷/甲醇＝8/2v/v％洗滌，并在真空中濃縮濾液。將殘余物溶解在二氯甲烷中，并用水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮以得到9.4g(94％)2-甲氧基-6,8-二氫-5H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮。

(e)2-甲氧基-5,6,8,9-四氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯

在配有機(jī)械攪拌器、溫度計(jì)和回流冷凝器的三頸燒瓶(500mL)中，將2-甲氧基-6,8-二氫-5H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮(4.79g,26.8mmol)懸浮于THF(200mL)中。將混合物冷卻至0℃，并分兩批加入氫化鈉(60％在油中的分散體，1.18g,29.4mmol)。將混合物在0℃攪拌30min。加入(1-乙氧基羰基環(huán)丙基)三苯基鏻四氟硼酸鹽(13.6g,29.4mmol)，并將得到的懸浮液加熱至回流和在回流溫度保持3天。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并倒入鹽水/水/EtOAc的1/1/1混合物(450mL)中。將水層用乙酸乙酯(2×)萃取。將合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮以得到18.05g橙色油。將粗產(chǎn)物不經(jīng)純化直接用在下一步中。

(f)2-甲氧基-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯

向2-甲氧基-5,6,8,9-四氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(18.05g,26.2mmol)在二氯甲烷(100mL)中的攪拌溶液中加入乙酸(3.15g,3mL)和乙酸鉛(IV)(13.9g,31.4mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?h，然后在PE過(guò)濾器上過(guò)濾以除去Pb-鹽，并將Pb-殘余物用2×30mL DCM洗滌。在真空中濃縮濾液，并將得到的殘余物溶解在乙酸乙酯(300mL)中。加入碳酸氫鈉的溶液(5％)直到pH～8.5。將有機(jī)層和水層在上過(guò)濾以除去任何剩余的鹽。隨后將水層用EtOAc(2×50mL)萃取。將合并的有機(jī)層用5％碳酸氫鈉溶液(100mL)、水(100mL)、鹽水(50mL)洗滌，干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并在真空中濃縮。將粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠上的柱色譜法(庚烷:乙酸乙酯＝1/0至1/1v/v％)純化以得到標(biāo)題化合物(4.74g,66％經(jīng)兩個(gè)步驟)。

(g)2-羥基-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯

將碘化鈉(7.83g,52.2mmol)加入2-甲氧基-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(4.74g,17.3mmol)在乙腈(150mL)中的攪拌溶液中。將溶解在乙腈(30mL)中的三甲基氯硅烷(5.64g,6.59mL)逐滴加入反應(yīng)混合物，并將混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。加入NaI(1當(dāng)量)，并逐滴加入另外的TMS-Cl(0.94g,1.1mmol)在乙腈(6mL)中的溶液，并將反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?天。將混合物濃縮，并將殘余物懸浮于200mL DCM/MeOH(4/1)中，并用硫代硫酸鈉飽和溶液(200mL)和水(200mL)的混合物萃取。將水層用3×150mL DCM/MeOH(4/1)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑，以得到黃色固體。將殘余物在40℃在真空下干燥18h以得到3.89g 2-羥基-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(86％)。

(h)2-氯-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(中間體1)

將N,N-二甲基苯胺(182mg,191uL,1.50mmol)加入2-羥基-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(3.89g,15.0mmol)在乙腈(100mL)中的溶液中。將磷酰氯(V)(11.5g,7.00mL,75.0mmol)在乙腈(15mL)中的溶液逐滴加入反應(yīng)混合物中。將黃色懸浮液加熱4小時(shí)至65℃，在這期間懸浮液變成澄清溶液。冷卻后，將混合物緩慢地倒入攪拌的25％氨水溶液(200mL,86.7當(dāng)量)和冰水(250mL)的混合物中，在10℃以下的溫度保持15-20分鐘。攪拌另外15分鐘以后，將固體過(guò)濾。將固體溶解在200mL EtOAc中，并用鹽水(20mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，并在真空中濃縮以得到灰白色固體。將粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠上的柱色譜法(庚烷/乙酸乙酯＝1/0至1/1v/v％)純化以得到標(biāo)題化合物(3.05g,73％)。

中間體A

4-氨基-N-(2-羥基-2-甲基-丙基)-3-甲氧基-苯甲酰胺

(a)N-(2-羥基-2-甲基-丙基)-3-甲氧基-4-硝基-苯甲酰胺

將3-甲氧基-4-硝基苯甲酸(1g,5.07mmol)、HATU(2.31g,6.1mmol)和1-氨基-2-甲基-丙烷-2-醇(1.13g,12.7mmol)在二氯甲烷(20mL)中的混合物在冰冷的水浴上攪拌，并加入DiPEA(2.2mL,12.7mmol)。10min以后，將混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?h。將混合物用乙酸乙酯(100mL)稀釋并隨后用5％碳酸氫鈉溶液(3×75mL)、水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中濃縮以得到1.47g粗制的N-(2-羥基-2-甲基-丙基)-3-甲氧基-4-硝基-苯甲酰胺(定量)。

(b)4-氨基-N-(2-羥基-2-甲基-丙基)-3-甲氧基-苯甲酰胺(中間體A)

使用H-Cube連續(xù)流反應(yīng)器，10％Pd/C，在30℃，1巴，完全H₂方式，1mL/min，將N-(2-羥基-2-甲基-丙基)-3-甲氧基-4-硝基-苯甲酰胺(1.46g,5.44mmol)在EtOH(70mL)中的溶液氫化。將得到的溶液在真空中濃縮，并將粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠上的柱色譜法(DCM/MeOH/25％NH₃＝10/0/0-9/1/0-9/0.9/0.1v/v％)純化以得到標(biāo)題化合物(775mg,60％)。

中間體B

2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺

(a)1-甲基-4-(3-甲基-4-硝基-苯基)哌嗪

將N-甲基哌嗪(752μL,6.79mmol)加入4-氟-2-甲基-1-硝基-苯(527mg,3.39mmol)中，并將得到的混合物在室溫?cái)嚢?8h。將水加入反應(yīng)混合物，并用乙酸乙酯執(zhí)行萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中濃縮。將粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱色譜法(DCM/MeOH＝1/0-9/1v/v％)純化以得到標(biāo)題化合物(786mg,98％)。

(b)2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(中間體B)

向1-甲基-4-(3-甲基-4-硝基-苯基)哌嗪(393mg,1.67mmol)在乙醇(10mL)中的攪拌溶液中加入10％炭載鈀(35mg)在乙醇(6mL)中的懸浮液。將反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障略谑覝財(cái)嚢?5min。然后，加入甲酸銨(1.05g；16.7mmol)，并將反應(yīng)混合物加熱至回流溫度保持15min。將反應(yīng)混合物冷卻，在上過(guò)濾，并在真空中濃縮。將殘余物溶解在二氯甲烷中，并用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮以得到268mg(78％)2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺。

中間體2

2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-碳酰氯(carbonyl chloride)

(a)2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯

向2-氯-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(中間體1,381mg,1.37mmol)在正丁醇(11mL)中的懸浮液中加入2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(中間體B,268mg,1.3mmol)和三氟乙酸(200μL；2.6mmol)。將反應(yīng)混合物在微波輻射下在120℃加熱12小時(shí)。將反應(yīng)混合物在真空中濃縮，并將殘余物溶解在乙酸乙酯中。將有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)制備型HPLC純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分收集并蒸發(fā)以得到2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(211mg,34％收率)。

(b)2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-碳酰氯(中間體2)

向2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(211mg,0.47mmol)在8mL無(wú)水乙醇中的溶液中加入2M NaOH-溶液(591μL(2.5當(dāng)量).1.18mmol)。將反應(yīng)混合物在65℃加熱過(guò)夜。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥并在高真空下干燥。將得到的殘余物溶解在水中，在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜并低壓凍干以得到粗制的標(biāo)題化合物。

將亞硫酰氯(682μL,9.4mmol)加入冷的(0℃)粗制2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸鈉(242mg,0.47mmol理論值)在二氯甲烷(10mL)中的懸浮液中。將得到的漿料在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將反應(yīng)混合物在真空中濃縮，并將殘余物與甲苯(2×10mL)共蒸發(fā)以得到作為黃色/棕色粉末的2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-碳酰氯(354mg，定量粗制物收率)。

中間體C

2-甲氧基-4-嗎啉代-苯胺

從嗎啉和4-氟-2-甲氧基-1-硝基-苯開(kāi)始，以與在中間體B-a中描述的類似的方式制備該化合物(1.3g,95％)。將如此得到的4-(3-甲氧基-4-硝基-苯基)嗎啉(1.3g,5.46mmol)溶解在THF(45mL)中并加入乙酸(5mL)。將混合物冷卻至0℃，并加入分成小份的鋅(7.09g,109mmol)以保持溫度低于20℃。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。TLC分析指示起始原料的完全轉(zhuǎn)化以后，將混合物在上過(guò)濾，并將殘余物用EtOAc(20mL)洗滌。將合并的濾液用1N NaOH-溶液(25mL)洗滌，隨后用水(25mL)和鹽水(25mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并在真空中濃縮以得到2-甲氧基-4-嗎啉代-苯胺(1.05g,92％)。

中間體D

2-甲基-6-嗎啉代-吡啶-3-胺

從嗎啉和6-氯-3-硝基-2-甲基吡啶開(kāi)始，以關(guān)于中間體B描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(156.9mg,82％)。

中間體E

2-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺

(a)N-(4-溴-2-氯-苯基)-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯

向4-溴-2-氯苯胺(3.0g,14.52mmol)和碳酸鉀(6g,43.6mmol)在DMF(100mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(1.8g,28.3mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?8h，此后將混合物倒入水/鹽水中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(3×50mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜法(EtOAc/庚烷＝1/9v/v％)純化以得到作為黃色/橙色油的(4-溴-2-氯-苯基)-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(2.5g,42.3％)。

(b)N-叔丁氧基羰基-N-[2-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯

將N-(4-溴-2-氯-苯基)-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(500mg,1.23mmol)、1-甲基哌嗪(166μL,1.48mmol)、乙酸鈀(II)(27.6mg,0.12mmol)、(±)-2,2'-雙(二苯基膦基)-1,1'-二萘基(119mg,0.20mmol)和碳酸銫(1.2g,3.69mmol)在甲苯(20mL)中的混合物在氮?dú)夥障略?00℃加熱16小時(shí)。冷卻至環(huán)境溫度以后，將混合物濃縮，并將殘余物用二氯甲烷稀釋，用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜法(二氯甲烷/甲醇＝100/0至95/5v/v％)純化以得到N-叔丁氧基羰基-N-[2-氯-4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯(480mg,91.6％)。

(c)2-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(中間體E)

將N-叔丁氧基羰基-N-[2-氯-4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯(260mg；0.61mmol)溶解在DCM(4mL)中。加入TFA(4mL)，并將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將混合物濃縮，并將殘余物溶解在DCM(10mL)中，并倒入5％碳酸氫鈉溶液(10mL)中。將水層用DCM(2×10mL)萃取。將合并的有機(jī)層在PE-過(guò)濾器上過(guò)濾并在真空中濃縮以得到棕色油(105mg,76％)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地使用。

中間體F

2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺

從N-甲基哌嗪和2-甲氧基-4-氟硝基苯開(kāi)始，以關(guān)于中間體B描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(1.38g,94％)。

中間體G

2-乙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺

(a)2-乙氧基-4-氟-1-硝基-苯

向冷(0℃)的乙醇(0.735mL,12.6mmol)在THF(15mL)中的混合物中加入氫化鈉(60％的在礦物油中的分散體,553mg,13.83mmol)。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌15min，此后逐滴加入2,4-二氟-1-硝基苯(1.38mL,12.6mmol)在THF(25mL)中的溶液。在室溫?cái)嚢枇硗?0min以后，將反應(yīng)物用水猝滅，將混合物用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜法(庚烷/乙酸乙酯＝100/0至85/15v/v％)純化以得到2-乙氧基-4-氟-1-硝基-苯(2.15g,92％)。

(b)1-(3-乙氧基-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪

將N-甲基哌嗪(603μL,5.44mmol)加入2-乙氧基-4-氟-1-硝基-苯(500mg,2.7mmol)中，并將得到的混合物在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。將水加入反應(yīng)混合物中，并隨后用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中濃縮。將粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠上的柱色譜法(DCM/MeOH＝10/0-9/1v/v％)純化以得到標(biāo)題化合物(646mg,90％)。

(c)2-乙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(中間體G)

向1-(3-乙氧基-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(265mg,1.0mmol)在乙醇(5mL)中的攪拌溶液中加入10％炭載鈀(22mg)在乙醇(6mL)中的懸浮液。將反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障略谑覝財(cái)嚢?5min。加入甲酸銨(630mg；10.0mmol)，并將得到的反應(yīng)混合物在回流溫度加熱15min。將反應(yīng)混合物冷卻并在上過(guò)濾。在真空中濃縮濾液，并隨后將殘余物溶解在二氯甲烷中，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮以得到231mg(98％)2-乙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺。

中間體H

4-(4-氨基-3-甲氧基-苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯

從哌嗪-1-甲酸叔丁酯和2-甲氧基-4-氟硝基苯開(kāi)始，以與在中間體B中描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(245mg,91％)。

中間體I

4-(4-氨基-3-甲基-苯基)哌嗪-1-甲酸芐酯

從哌嗪-1-甲酸芐酯和4-氟-2-甲基-1-硝基-苯開(kāi)始，以關(guān)于中間體C描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(327mg,定量)。

中間體J

2-(二氟甲氧基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺

向5-氟-2-硝基-苯酚(500mg,3.18mmol)在DMF(6ml)中的溶液中加入2-氯-2,2-二氟-乙酸鈉(970mg,6.36mmol)和碳酸鈉(405mg,3.82mmol)。將反應(yīng)混合物在100℃攪拌3.5小時(shí)，隨后在室溫?cái)嚢?天。加入4M HCl-溶液直到得到澄清溶液，并將混合物在室溫?cái)嚢?h。將反應(yīng)混合物用水稀釋，并用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)層用1M NaOH-溶液、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜法(庚烷/乙酸乙酯＝10/0至8/2v/v％)純化以得到2-(二氟甲氧基)-4-氟-1-硝基-苯(493mg,75％)。

從N-甲基哌嗪和2-(二氟甲氧基)-4-氟-1-硝基-苯開(kāi)始，以關(guān)于中間體B描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到180mg(80％)。

中間體K

4-甲基-6-嗎啉代-吡啶-3-胺

從嗎啉和2-氯-5-硝基-4-甲基吡啶開(kāi)始，以關(guān)于中間體B描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(122.9mg,81.5％)。

中間體L

4-氨基-3-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺

從4-氨基-1-甲基哌啶和3-甲氧基-4-硝基苯甲酸開(kāi)始，以關(guān)于中間體A描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(980mg,82％)。

中間體M

4-氨基-3-甲基-N-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺

從4-氨基-1-甲基哌啶和4-氨基-3-甲基苯甲酸開(kāi)始，以關(guān)于中間體A-a描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(700mg,70％)。

中間體N

4-氨基-3-氯-N-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺

從4-氨基-1-甲基哌啶和4-氨基-3-氯苯甲酸開(kāi)始，以關(guān)于中間體A-a描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(1.64g,定量)。

中間體O

4-氨基-3-氟-N-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺

從4-氨基-1-甲基哌啶和4-氨基-3-氟苯甲酸開(kāi)始，以關(guān)于中間體A-a描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(170mg,16％)。

中間體P

4-氨基-3-乙氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺

(a)3-乙氧基-4-硝基-苯甲酸

在室溫在乙醇(25mL)中攪拌3-氟-4-硝基苯甲酸(1.50g,8.11mmol)和氫氧化鉀(1.05g,18.6mmol)。將得到的懸浮液緩慢地加熱至回流(10分鐘)，在此期間反應(yīng)混合物變成深紅色溶液。在回流下且在劇烈攪拌下加熱10分鐘以后，沉淀出濃固體。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并加入水(10mL)。接著，加入2M HCl-溶液(9.3mL)直到pH<2。將得到的沉淀物劇烈攪拌，過(guò)濾，并將殘余物用水(2×10mL)洗滌。將殘余物在40℃在真空下干燥以得到1.53g 3-乙氧基-4-硝基-苯甲酸(89％)。

(b)4-氨基-3-乙氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺(中間體P)

從4-氨基-1-甲基哌啶和3-乙氧基-4-硝基苯甲酸開(kāi)始，以關(guān)于中間體A描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到190mg 4-氨基-3-乙氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺(70％)。

中間體Q

4-氨基-3-(二氟甲氧基)-N-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺

從4-氨基-1-甲基哌啶和4-氨基-3-(二氟甲氧基)苯甲酸酯開(kāi)始，以關(guān)于中間體A-a描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(130mg,29.5％)。

中間體R

2-甲氧基-4-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)苯胺

(a)N-[2-甲氧基-4-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯

在密閉試管中將N-(4-溴-2-甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯(150mg,0.5mmol)、1,3,5-三甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷(dioxaborolan)-2-基)吡唑(118mg,0.5mmol)、四(三-苯基膦)鈀(0)(58mg,0.05mmol)和碳酸鉀(207mg,1.5mmol)在二烷(4mL)中的混合物在微波輻射下在100℃加熱20分鐘。冷卻至環(huán)境溫度以后，將混合物濃縮，并將殘余物用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜法(庚烷/乙酸乙酯＝100/0至25/75v/v％)純化，以得到N-[2-甲氧基-4-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯(126.8mg,77％)。

(b)2-甲氧基-4-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)苯胺(中間體R)

將N-[2-甲氧基-4-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯(127mg,0.38mmol)溶解在DCM(2mL)中。加入TFA(3mL)，并將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將混合物在真空中濃縮以得到棕色油(313mg)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地使用。

中間體S

2-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺

(a)4-(3-甲氧基-4-硝基-苯氧基)-1-甲基-哌啶

向4-氟-2-甲氧基-1-硝基-苯(750mg,4.38mmol)在甲苯(10mL)中的溶液中加入10mL 25％KOH-溶液、4-羥基-N-甲基哌啶(1009mg,8.76mmol)和四正丁基溴化銨(282mg,0.876mmol)。將混合物在60℃加熱過(guò)夜。然后將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋，并將水層用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。將殘余物通過(guò)硅膠上的快速色譜法(二氯甲烷/甲醇＝99/1至9/1v/v％)純化以得到標(biāo)題化合物(650mg,55.7％)。

(b)2-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺(中間體S)

將10％Pd/C(20mg)作為在乙醇中的懸浮液加入4-(3-甲氧基-4-硝基-苯氧基)-1-甲基-哌啶(200mg,0.75mmol)在乙醇(5mL)中的溶液中。將得到的混合物在室溫?cái)嚢?5min。加入甲酸銨(473mg,7.5mmol)，并將反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障禄亓鲾嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并在上過(guò)濾。在真空中濃縮濾液，此后加入二氯甲烷，并將有機(jī)相用5％NaHCO₃溶液洗滌。將有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮以得到2-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺(169.5mg,95.6％)。

中間體T

2-甲基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺

從1-甲基哌啶-4-醇和4-氟-2-甲基-1-硝基-苯開(kāi)始，以關(guān)于中間體S描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(151.7mg,81％)。

中間體U

4-(2-二甲基氨基乙氧基)-2-甲氧基-苯胺

(a)2-(3-甲氧基-4-硝基-苯氧基)-N,N-二甲基-乙胺

向冷(0℃)的N,N-二甲基乙醇胺(651μL,6.43mmol)在THF(5mL)中的溶液中逐份加入NaH(60％的在礦物油中的分散體,385mg)。將懸浮液攪拌另外30min，然后逐滴加入4-氟-2-甲氧基1-硝基-苯(1g,5.84mmol)在5mL無(wú)水THF中的溶液。將溶液回流過(guò)夜。在真空下除去溶劑，并將殘余物在乙酸乙酯和水(各50mL)之間分配。將有機(jī)層收集，并隨后將水層用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用1M HCl-溶液、水、5％-碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。將殘余物通過(guò)硅膠上的快速色譜法在(庚烷/乙酸乙酯＝9/1至1/1v/v％)作為洗脫液中純化以得到標(biāo)題化合物。(720mg,51.3％)

(b)4-(2-二甲基氨基乙氧基)-2-甲氧基-苯胺(中間體U)

以關(guān)于中間體Sb描述的類似的方式制備該化合物以得到標(biāo)題化合物(144.8mg,68.9％)。

中間體V

4-氨基-N-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺

從4-氨基-1-甲基哌啶和4-氨基-苯甲酸開(kāi)始，以關(guān)于中間體A-a描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(170mg,16％)。

中間體W

2-甲基-4-嗎啉代-苯胺

從嗎啉和5-氟-2-硝基甲苯開(kāi)始，以關(guān)于中間體C描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(8.77g,92％)。

中間體X

2-異丙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺

從1-甲基哌嗪和4-氟-2-異丙氧基-1-硝基-苯開(kāi)始，以關(guān)于中間體G描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到2-異丙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(337mg,50％)。

中間體Y

2-甲氧基-4-(1-甲基吡咯烷-3-基)氧基-苯胺

從1-甲基吡咯烷-3-醇和4-氟-2-甲氧基-1-硝基-苯開(kāi)始，以關(guān)于中間體U描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(199mg,84％)。

中間體Z

3-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸芐酯

(a)3-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸叔丁酯

向冷(0℃)的N-Boc-3-羥基-氮雜環(huán)丁烷(1.84g,10.6mmol)在THF(10mL)中的溶液中逐份加入NaH(60％的在礦物油中的分散體,382mg)。將懸浮液攪拌另外30min，然后逐滴加入2-硝基-5-氟甲苯(1.5g,9.79mmol)在10mL無(wú)水THF中的溶液。將溶液在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。在真空下除去溶劑，并將殘余物在乙酸乙酯和水(各50mL)之間分配。將有機(jī)層收集，并隨后將水層用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用1M HCl-溶液、水、5％-碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜法(庚烷/乙酸乙酯＝9/1至1/1v/v％)純化以得到2.24g(75.1％)標(biāo)題化合物。

(b)3-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸芐酯

向3-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.24g,7.3mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入4N的HCl在二烷中的溶液(9.1mL)，并將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?h。將混合物在真空中濃縮，并將殘余物與乙醇共蒸發(fā)2次以得到去保護(hù)的化合物(1.7g,95％)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地使用。向粗制的3-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)氮雜環(huán)丁烷鹽酸鹽(1.7g,7.97mmol)在DCM(25mL)中的攪拌懸浮液中加入三乙胺(2.8mL,20mmol)。將N-(芐氧基碳酰氧基)-琥珀酰亞胺(2.19g；8.77mmol)加入反應(yīng)混合物中，并將混合物在室溫?cái)嚢?0min。將5％碳酸氫鈉溶液加入反應(yīng)混合物中。將有機(jī)相收集并將水相用二氯甲烷萃取。將合并的有機(jī)層干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并蒸發(fā)溶劑。將殘余物通過(guò)柱色譜法(庚烷/乙酸乙酯＝100/0至50/50v/v％)純化以得到2.17g(80％)3-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸芐酯。

(c)3-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸芐酯(中間體Z)

從3-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸芐酯開(kāi)始，以關(guān)于中間體C描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(145.3mg,39％)。

中間體ZA

4-(3,5-二甲基異唑-4-基)-2-甲氧基-苯胺

從N-(4-溴-2-甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯和3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)異唑開(kāi)始，以關(guān)于中間體R描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(96mg)。

中間體ZB

3-(4-氨基-3-甲氧基-苯氧基)氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸芐酯

從4-氟-2-甲氧基-1-硝基-苯和N-Boc-3-羥基-氮雜環(huán)丁烷開(kāi)始，以關(guān)于中間體Z描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(215.1mg,55％)。

中間體ZC

4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(三氘基甲氧基(trideuteriomethoxy))苯胺

(a)4-氟-1-硝基-2-(三氘基甲氧基)苯

在室溫向5-氟-2-硝基苯酚(1.5g,9.55mmol)在丙酮(20mL)中的溶液中加入K₂CO₃(2.31g,16.7mmol)。向得到的懸浮液中加入氘化的碘甲烷(0.71mL,11.46mmol)，并將反應(yīng)混合物回流攪拌過(guò)夜。濃縮反應(yīng)混合物以后，將殘余物在水和乙酸乙酯之間分配。將乙酸乙酯層用水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中蒸發(fā)以得到4-氟-1-硝基-2-(三氘基甲氧基)苯(1.67g,100％)。

(b)1-甲基-4-[4-硝基-3-(三氘基甲氧基)苯基]哌嗪

將4-氟-1-硝基-2-(三氘基甲氧基)苯(1.67g,9.55mmol)和N-甲基哌嗪(2.12mL,19.1mmol)在THF(1mL)中組合并在室溫?cái)嚢?8h。將加入水以后形成的黃色沉淀物過(guò)濾，用水洗滌并在真空中干燥以得到1-甲基-4-[4-硝基-3-(三氘基甲氧基)苯基]哌嗪(1.67g,80.7％)。

(c)4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(三氘基甲氧基)苯胺(中間體ZC)

從1-甲基-4-[4-硝基-3-(三氘基甲氧基)苯基]哌嗪開(kāi)始，以關(guān)于中間體B步驟b描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(177.8mg)。

中間體ZD

2-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-胺

從N-甲基哌嗪和6-氯-3-硝基-2-甲基吡啶開(kāi)始，以關(guān)于中間體B描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(188.9mg,92％)。

中間體ZE

4-(4-氨基-3-甲氧基-苯基)哌嗪-1-甲酸芐酯

從哌嗪-1-甲酸芐酯和2-甲氧基-4-氟硝基苯開(kāi)始，以關(guān)于中間體B-a描述的類似的方式制備該化合物。使用關(guān)于中間體C描述的方法還原以后，得到標(biāo)題化合物(1.2g,95％)。

中間體ZF

4-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-胺

(a)2-氯-4-甲氧基-5-硝基-嘧啶

在-10℃向2,4-二氯-5-硝基-嘧啶(1.00g；5.2mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中逐滴加入甲醇鈉(278mg,5.2mmol)在甲醇(5mL)中的溶液。將反應(yīng)混合物在-10℃攪拌10分鐘。加入乙酸(5mL)，并將混合物溫?zé)嶂潦覝?。蒸發(fā)混合物以后，將殘余物在5％NaHCO₃-溶液和乙酸乙酯之間分配。將乙酸乙酯層用水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中蒸發(fā)。將殘余物通過(guò)柱色譜法(庚烷/乙酸乙酯＝4/1v/v％)純化以得到281.9mg(29％)2-氯-4-甲氧基-5-硝基-嘧啶。

(b)4-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-胺(中間體ZF)

從2-氯-4-甲氧基-5-硝基-嘧啶和N-甲基哌嗪開(kāi)始，以關(guān)于中間體B步驟b描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(212.8mg,89％)。

中間體ZG

2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺

從N-甲基哌嗪和5-氟-4-甲基-2-硝基茴香醚開(kāi)始，以關(guān)于中間體B描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(94.4mg,定量)。

中間體ZH

4-(4-氨基-3-甲氧基-苯基)-2-甲基-哌嗪-1-甲酸芐酯

從2-甲基哌嗪-1-甲酸芐酯和2-甲氧基-4-氟硝基苯開(kāi)始，以關(guān)于中間體B-a描述的類似的方式制備該化合物。使用關(guān)于中間體C描述的方法還原以后，得到標(biāo)題化合物(295.4mg,97％)。

中間體ZI

N4-[3-(二甲基氨基)丙基]-2-甲氧基-N4-甲基-苯-1,4-二胺

從N,N',N'-三甲基丙烷-1,3-二胺和4-氟-2-甲氧基-1-硝基-苯開(kāi)始，以關(guān)于中間體B描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(148.8mg,94％)。

中間體ZJ

2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺

從2-甲氧基乙醇和4-氟-2-甲氧基-1-硝基-苯開(kāi)始，以關(guān)于中間體S描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(113.4mg,定量)。

中間體Aa

1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-胺

(a)1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-4-硝基-吡唑

向3,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑(2.5g,17.7mmol)和碳酸銫(6.06g,18.6mmol)在DMF(50mL)中的溶液中加入2-溴乙基甲基醚(2.59g,1.75mL,18.6mmol)。將混合物在100℃加熱3.5h。冷卻至室溫以后，將混合物倒入水中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(50mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜法(EtOAc/庚烷類＝1/4v/v％)純化以得到作為白色結(jié)晶固體的1-(2-甲氧基乙基)3,5-二甲基-4-硝基-吡唑(2.66g,75.4％)。

(b)1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-胺

將1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-4-硝基-吡唑(245mg,1.22mmol)溶解在甲醇(25mL)中。使用H-Cube連續(xù)流氫化反應(yīng)器，10％Pd/C，在30℃，8-10巴，1mL/min，完全H₂方式，將得到的溶液氫化。將得到的溶液在真空中濃縮以得到208mg(定量收率)作為淺棕色油的標(biāo)題化合物。

中間體Ab

3,5-二甲基-1H-吡唑-4-胺

從3,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑開(kāi)始，以關(guān)于中間體Aa-b描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到110mg 3,5-二甲基-1H-吡唑-4-胺(定量)。

中間體Ac

3,5-二乙基-1H-吡唑-4-胺

(a)3,5-二乙基-1H-吡唑

向3,5-庚烷二酮(2g,15.6mmol)和水合肼(0.77g,15.8mmol)在水(10mL)中的溶液中加入乙酸(1滴)，并將反應(yīng)混合物加熱至回流保持1h。然后將反應(yīng)混合物冷卻，并在減壓下濃縮以提供1.8g標(biāo)題化合物。該化合物不經(jīng)純化直接用在下一步中。

(b)3,5-二乙基-4-硝基-1H-吡唑

在劇烈攪拌下，向冷(0℃)的3,5-二乙基-1H-吡唑(1.8g,14.5mmol)和濃硫酸(1.5ml)的混合物中緩慢地加入發(fā)煙HNO₃(4.35ml)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌過(guò)夜。隨后將混合物冷卻至室溫，然后小心地加入冰冷的飽和碳酸氫鈉溶液中并攪拌15min。然后將混合物用EtOAc萃取3次，并將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過(guò)濾并在真空中蒸發(fā)以得到：2.52g 3,5-二乙基-4-硝基-1H-吡唑。

(c)3,5-二乙基-1H-吡唑-4-胺(中間體Ac)

從3,5-二乙基-4-硝基-1H-吡唑開(kāi)始，以關(guān)于中間體Aa-b描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到3,5-二乙基-1H-吡唑-4-胺(174mg,71％)。

中間體Ad

5-氯-1,3-二甲基-吡唑-4-胺

(a)5-氯-1,3-二甲基-4-硝基-吡唑

在劇烈攪拌下，向冷(0℃)的5-氯-1,3-二甲基-吡唑(1g,7.66mmol)和濃硫酸(750μl)的混合物中緩慢地加入發(fā)煙HNO₃(2.1mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌過(guò)夜。隨后將混合物冷卻至室溫，然后小心地加入冰冷的飽和碳酸氫鈉溶液中并攪拌15min。然后將混合物用EtOAc萃取3次并將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過(guò)濾并在真空中蒸發(fā)以得到5-氯-1,3-二甲基-4-硝基-吡唑(1.1g,82％)。

(b)5-氯-1,3-二甲基-吡唑-4-胺(中間體Ad)

向5-氯-1,3-二甲基-4-硝基-吡唑(146mg,1mmol)在THF(5mL)中的攪拌溶液中加入乙酸(1.1mL,16mmol)。將混合物冷卻至0℃，并加入分成小份的鋅(1.31g,20mmol)，保持溫度在20℃以下。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。TLC分析指示起始原料的完全轉(zhuǎn)化以后，將混合物在上過(guò)濾，并將殘余物用DCM/MeOH 9:1洗滌。將合并的濾液用5％NaHCO₃-溶液洗滌，隨后用水和鹽水洗滌。將有機(jī)層干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并在真空中濃縮以得到標(biāo)題化合物(78mg,53％)。

中間體Ae

3,5-二乙基-1-(2-甲氧基乙基)吡唑-4-胺

從2-溴乙基甲基醚和3,5-二乙基-4-硝基-1H-吡唑開(kāi)始，以關(guān)于中間體Aa描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到3,5-二乙基-1H-吡唑-4-胺(143mg,36％)。

中間體Af

1-(4-氨基-3,5-二甲基-吡唑-1-基)-2-甲基-丙烷-2-醇

(a)1-(3,5-二甲基-4-硝基-吡唑-1-基)-2-甲基-丙烷-2-醇

向3,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑(706mg,5mmol)和DBU(1.49mL,10mmol)在乙腈(10mL)中的溶液中加入異丁烯-氧化物(669μL,7.5mmol)。將混合物在65℃加熱72h。冷卻至室溫以后，將混合物倒入水中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。將合并的有機(jī)層用1M HCl-溶液、水和鹽水(50mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜法(庚烷/EtOAc＝100/0-60/40v/v％)純化以得到1-(3,5-二甲基-4-硝基-吡唑-1-基)-2-甲基-丙烷-2-醇(799mg,75％)。

(b)1-(4-氨基-3,5-二甲基-吡唑-1-基)-2-甲基-丙烷-2-醇(中間體Af)

從1-(3,5-二甲基-4-硝基-吡唑-1-基)-2-甲基-丙烷-2-醇開(kāi)始，以關(guān)于中間體B步驟b描述的類似的方式制備該化合物，以得到標(biāo)題化合物(229mg,39％)。

中間體Ag

3-乙基-5-甲基-異唑-4-胺

(a)N-(3-乙基-5-甲基-異唑-4-基)氨基甲酸叔丁酯

將疊氮化磷酸二苯酯(2.51mL,11.6mmol)加入3-乙基-5-甲基-異唑-4-甲酸(1.5g,9.67mmol)、三乙胺(2.7mL,19.3mmol)和叔丁醇(0.92mL,9.67mmol)在甲苯(50mL)中的溶液中，并在100℃攪拌4h。通過(guò)蒸發(fā)除去溶劑，并將殘余物溶解于EtOAc(50mL)中。將有機(jī)層用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠上的快速色譜法在作為洗脫液的庚烷/乙酸乙酯＝10/0至7/3v/v％中純化。將含有標(biāo)題化合物的級(jí)分合并和蒸發(fā)以得到標(biāo)題化合物(1.67g,76.3％)。

(b)3-乙基-5-甲基-異唑-4-胺(中間體Ag)

將N-(3-乙基-5-甲基-異唑-4-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg,2.2mmol)溶解在TFA/二氯甲烷＝1/1v/v％(5mL)中，并在室溫?cái)嚢?h。將得到的混合物蒸發(fā)并將殘余物溶解在甲醇中，然后在SCX-2柱上過(guò)濾。將柱用甲醇沖洗以后，將期望的產(chǎn)物用0.7N氨/甲醇溶液洗脫。將得到的洗脫液在真空中濃縮以得到標(biāo)題化合物(302.7mg,92％)。

中間體Ah

1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-胺

(a)1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]-3,5-二甲基-4-硝基-吡唑

向冷(0℃)的3,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑(250mg,1.77mmol)、三甘醇單甲基醚(482μL,3.01mmol)和三苯基膦(789mg,3.01mmol)在THF(10mL)中的溶液中逐滴加入40％DEAD在甲苯中的溶液(1.31mL,3.01mmol)。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，并攪?h。加入乙酸乙酯，并用10％NaCl-溶液洗滌。將有機(jī)層干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜法(DCM/MeOH＝99/1-95/5v/v％)純化以得到1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]-3,5-二甲基-4-硝基-吡唑(1.7g,粗制物)，將其直接用在下一步中。

(b)1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-胺(中間體Ah)

將1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]-3,5-二甲基-4-硝基-吡唑(1.5g,1.77mmol理論值)溶解在THF(15mL)中，并加入乙酸(1.6mL)。將混合物冷卻至0℃，并加入分成小份的鋅(2.3g,35.4mmol)，保持溫度低于20℃。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。TLC分析指示起始原料的完全轉(zhuǎn)化以后，將混合物在上過(guò)濾，并將殘余物用乙酸乙酯洗滌。將合并的濾液用1N NaOH-溶液洗滌，隨后用水和鹽水洗滌。將有機(jī)層干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并在真空中濃縮。將殘余物溶解在甲醇中，然后在SCX-2柱上過(guò)濾。將柱用甲醇沖洗以后，將期望的產(chǎn)物用0.7N氨/甲醇溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物(340.1mg,74.7％)。

中間體Ai

3-(4-氨基-3,5-二甲基-吡唑-1-基)氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸叔丁酯

從3,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑和1-Boc-3-羥基氮雜環(huán)丁烷開(kāi)始，以關(guān)于中間體Ah描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到261.1mg3-(4-氨基-3,5-二甲基-吡唑-1-基)氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸叔丁酯(定量)。

中間體Aj

3,5-二甲基-1-(氧雜環(huán)丁烷-2-基甲基)吡唑-4-胺

從3,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑和2-羥基甲基氧雜環(huán)丁烷開(kāi)始，以關(guān)于中間體Ah描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到116mg 3,5-二甲基-1-(氧雜環(huán)丁烷-2-基甲基)吡唑-4-胺(36.2％)。

中間體Ak

3,5-二乙基-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]吡唑-4-胺

從3,5-二乙基-4-硝基-1H-吡唑(中間體Ac-b)和1-溴-2-(2-甲氧基乙氧基)-乙烷開(kāi)始，以關(guān)于中間體Aa描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到290mg 3,5-二乙基-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]吡唑-4-胺(72.2％)。

中間體Al

3,5-二乙基-1-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)吡唑-4-胺

從3,5-二乙基-4-硝基-1H-吡唑(中間體Ac-b)和甲苯-4-磺酸氧雜環(huán)丁烷-3-基酯開(kāi)始，以關(guān)于中間體Aa描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到165mg 3,5-二乙基-1-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)吡唑-4-胺(47.7％)。

中間體Am

1-(2-二甲基氨基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-胺

從3,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑和N,N-二甲基乙醇胺開(kāi)始，以關(guān)于中間體Ah描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到380.4mg 1-(2-二甲基氨基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-胺(定量)。

實(shí)施例1

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[4-[(2-羥基-2-甲基-丙基)氨甲酰基]-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

(a)2-[4-[(2-羥基-2-甲基-丙基)氨甲?；鵠-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯

將2-氯-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(中間體1,200mg,0.72mmol)、4-氨基-N-(2-羥基-2-甲基-丙基)-3-甲氧基-苯甲酰胺(中間體A,172mg,0.72mmol)和碳酸銫(937mg；2.89mmol)懸浮于二烷(20mL)中。用氮?dú)庠诨旌衔镏性?0℃鼓泡5分鐘，隨后加入9,9-雙-二甲基-4,5-雙(二苯基膦基)呫噸(41.7mg,72μmol)和三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(33.0mg,36μmol)。將反應(yīng)混合物在氮?dú)饬飨略?0℃攪拌20小時(shí)。將乙酸乙酯/水/鹽水＝1/1/1v/v％(50mL)加入反應(yīng)混合物并繼續(xù)攪拌15min。在上過(guò)濾以后，將水層分離，并用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。隨后將合并的有機(jī)層用水(40mL)、鹽水(20mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮。將粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠上的柱色譜法(DCM/MeOH＝10/0-9/1v/v％)純化以得到標(biāo)題化合物(190mg,55.3％)。

(b)N-(2,6-二甲基苯基)-2-[4-[(2-羥基-2-甲基-丙基)氨甲酰基]-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

將LiHDMS(1M在THF/乙基苯中的溶液，0.61mL,0.61mmol)加入冷(0℃)的2,6-二甲基苯胺(38.5μL,0.31mmol)在THF(1mL)中的溶液。在0℃攪拌15分鐘以后，將2-[4-[(2-羥基-2-甲基-丙基)氨甲?；鵠-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(50mg,0.10mmol)在THF(3mL)中的溶液逐滴加入反應(yīng)混合物中并繼續(xù)在0℃攪拌90min。在室溫逐滴加入另外的LiHMDS(100μL)，并繼續(xù)在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物用20mL飽和氯化銨溶液猝滅，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。將殘余物通過(guò)制備型HPLC純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分收集并低壓凍干以得到N-(2,6-二甲基苯基)-2-[4-[(2-羥基-2-甲基-丙基)氨甲?；鵠-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺(10mg,18％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:14.432min；m/z 555.3(M+H)⁺。

實(shí)施例2

N-(2-氯-6-甲基-苯基)-2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

向2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-碳酰氯(中間體2,52mg,0.07mmol理論值)在乙腈(2mL)中的懸浮液中加入2-氯-6-甲基苯胺(15μL,0.12mmol)和催化量的4-DMAP。將反應(yīng)混合物在50℃攪拌過(guò)夜。蒸發(fā)溶劑后，將粗產(chǎn)物通過(guò)制備型HPLC純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分收集并在真空中濃縮。將殘余物在二氯甲烷和5％NaHCO₃-溶液之間分配。將有機(jī)相在PE-過(guò)濾器上分離并蒸發(fā)以得到28mg標(biāo)題化合物(74％收率)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.852min；m/z 542.2/544.2(M+H)⁺(氯化物-模式)。

實(shí)施例3

N-(2-溴-6-甲基-苯基)-2-(2-甲氧基-4-嗎啉代-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體C作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-溴-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(6.8mg,17％)。數(shù)據(jù)：LCMS(A)R_t:8.031min；m/z 587,1/589,1(M+H)⁺(溴化物-模式)。

實(shí)施例4

N-(2-乙基-6-甲基-苯基)-2-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用商購(gòu)可得的4-(4-甲基哌嗪子基(piperazino))苯胺作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c6-乙基-鄰甲苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(18mg,58％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.456min；m/z 522.3(M+H)⁺。

實(shí)施例5

N-(2-氯-6-甲基-苯基)-2-[(2-甲基-6-嗎啉代-3-吡啶基)氨基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體D作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-氯-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(18mg,58％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.991min；m/z 530.2/532.2(M+H)⁺(氯化物-模式)。

實(shí)施例6

N-(2-氯-6-甲基-苯基)-2-[2-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體E作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-氯-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(4mg,11％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.886min；m/z 562.2(M+H)⁺。

實(shí)施例7

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-氟-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨甲?；鵠苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例1-a和中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體O作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(4mg,20％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)Rt:10.469min；m/z 568.3(M+H)⁺。

實(shí)施例8

2-[2-氯-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨甲?；鵠苯胺基]-N-(2,6-二乙基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體N作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(4.7mg,10％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.222min；m/z 612.2/614.3(M+H)⁺。

實(shí)施例9

N-(3,5-二乙基-1H-吡唑-4-基)-2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

以關(guān)于中間體2描述的類似的方式，使用中間體B，制備2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸。

將2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸(26mg,0.06mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(1.5ml)中。隨后加入HATU(25mg,0.066mmol)和三乙胺(25μL,0.178mmol)，并將混合物在室溫?cái)嚢?0min。加入3,5-二乙基-1H-吡唑-4-胺(7mg,0.07mmol)，并將混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將混合物倒入乙酸乙酯/水/鹽水1/1/1的混合物中并攪拌15min。將有機(jī)層分離，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過(guò)濾并在真空中濃縮。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(14.0mg,43％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:7.530min；m/z 540.3(M+H)⁺。

實(shí)施例10

N-(2-甲氧基-6-甲基-苯基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-甲氧基-6-甲基-苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(16.1mg,29.1％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.925min；m/z 554.3(M+H)⁺。

實(shí)施例11

N-(2,6-二異丙基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二異丙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(15.9mg,35.7％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.686min；m/z 594.4(M+H)⁺。

實(shí)施例12

N-(3,5-二甲基異唑-4-基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與3,5-二甲基異唑-4-胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(24.4mg,46.1％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.408min；m/z 529.3(M+H)⁺。

實(shí)施例13

N-[3,5-二乙基-1-(2-甲氧基乙基)吡唑-4-基]-2-[2-甲基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體T作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ae反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(14mg,27％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.531min；m/z613.3(M+H)⁺。

實(shí)施例14

2-[2-乙氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨甲?；鵠苯胺基]-N-(2-乙基-6-甲基-苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例1-a和中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體P作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c6-乙基-鄰甲苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(5.3mg,14％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.313min；m/z 608.3(M+H)⁺。

實(shí)施例15

N-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體S作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ab反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(14.1mg,37％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:7.902min；m/z 543.2(M+H)⁺。

實(shí)施例16

N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例9描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體H作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)羧酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體Aa反應(yīng)。將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(5.2mg,28％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.140min；m/z 572.3(M+H)⁺。

實(shí)施例17

N-(2,6-二甲基苯基)-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例9描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體H作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)羧酸酯制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例1描述的類似的方式使所述羧酸酯與2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(16mg,52％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.268min；m/z 524.3(M+H)⁺。

實(shí)施例18

N-(3,5-二乙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例9描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體H作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)羧酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體Ac反應(yīng)。將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(7mg,32％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.065min；m/z 542.3(M+H)⁺。

實(shí)施例19

N-[3,5-二乙基-1-(2-甲氧基乙基)吡唑-4-基]-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例9描述的相同的反應(yīng)順序并使用中間體H作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)羧酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體Ae反應(yīng)。將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(4mg,32％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.146min；m/z 600.3(M+H)⁺。

實(shí)施例20

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例1描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例1中描述的方法使所述酯與2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(13.5mg,23.2％)。數(shù)據(jù)：LCMS(C)R_t:12.686min；m/z 566.4(M+H)⁺。

實(shí)施例21

N-(3,5-二乙基-1H-吡唑-4-基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ac反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(22mg,36％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.319min；m/z 557.3(M+H)⁺。

實(shí)施例22

2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-N-(2,4,6-三甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,4,6-三甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(16mg,26％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.240min；m/z 552.3(M+H)⁺。

實(shí)施例23

N-[2-(羥基甲基)-6-甲基-苯基]-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c(2-氨基-3-甲基-苯基)甲醇反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(6mg,10％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.876min；m/z 554.3(M+H)⁺。

實(shí)施例24

N-(2-氟-6-甲基-苯基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-氟-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(21.4mg,39.6％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.878min；m/z 542.3(M+H)⁺。

實(shí)施例25

N-(2-氯-4-甲基-3-吡啶基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c3-氨基-2-氯-4-甲基吡啶反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(11.9mg,28.4％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.790min；m/z 559.2/561.2(M+H)⁺(氯化物-模式)。

實(shí)施例26

N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Aa反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(25.0mg,42.7％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.128min；m/z 586.3(M+H)⁺。

實(shí)施例27

N-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ab反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(14.0mg,26.5％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:7.146min；m/z 528.3(M+H)⁺。

實(shí)施例28

N-(5-氯-1,3-二甲基-吡唑-4-基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與中間體Ad反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(18mg,29％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.563min；m/z 562.2/564.2(M+H)⁺(氯化物-模式)。

實(shí)施例29

N-(2-乙基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(14mg,26％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.708min；m/z 538.3(M+H)⁺。

實(shí)施例30

N-(2,6-二氟苯基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二氟苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(20.5mg,37.5％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.607min；m/z 546.2(M+H)⁺。

實(shí)施例31

N-(3,5-二乙基-1H-吡唑-4-基)-2-[2-乙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體G作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與中間體Ac反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(10mg,37％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.939min；m/z 570.3(M+H)⁺。

實(shí)施例32

2-[2-乙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-N-(2-乙基-6-甲基-苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體G作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c6-乙基-鄰甲苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(5mg,9％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.636min；m/z 566.3(M+H)⁺。

實(shí)施例33

N-(3,5-二乙基-1H-吡唑-4-基)-2-[2-(二氟甲氧基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體J作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)羧酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體Ac反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(9.6mg,23％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.864min；m/z 592.3(M+H)⁺。

實(shí)施例34

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[(4-甲基-6-嗎啉代-3-吡啶基)氨基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體K作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(6.2mg,17.4％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.575min；m/z 510.3(M+H)⁺。

實(shí)施例35

N-(2-氯-6-甲基-苯基)-2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨甲酰基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例1-a和中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體L作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2-氯-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(9.8mg,21％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.000min；m/z 600.2/602.2(M+H)⁺(氯化物-模式)。

實(shí)施例36

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[2-甲基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨甲?；鵠苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例1-a和中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體M作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(2.5mg,11％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.332min；m/z 592.3(M+H)⁺。

實(shí)施例37

2-[2-(二氟甲氧基)-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨甲?；鵠苯胺基]-N-(2,6-二甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例1-a和中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體Q作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(4mg,12％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.282min；m/z 616.3(M+H)⁺。

實(shí)施例38

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(1-甲基吡唑-4-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

(a)2-(4-溴-2-甲氧基-苯胺基)-N-(2,6-二乙基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用商購(gòu)可得的4-溴-2-甲氧基苯胺作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(50mg)。

(b)N-(2,6-二乙基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(1-甲基吡唑-4-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

在密閉試管中將2-(4-溴-2-甲氧基-苯胺基)-N-(2,6-二乙基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺(22.6mg,0.041mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑(17.2mg,0.083mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵氯化鈀(II)與二氯甲烷的復(fù)合物(complex with dichloromethane)(3.4mg)和碳酸鉀(28.3mg,0.205mmol)在二烷/水(1.5mL/0.3mL)中的混合物在微波中在140℃加熱60分鐘。冷卻至環(huán)境溫度以后，將混合物在真空中濃縮。將得到的殘余物用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(15.2mg,38％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:17.769min；m/z 548.3(M+H)⁺。

實(shí)施例39

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體S作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(13.8mg,37.7％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.129min；m/z 553.3(M+H)⁺。

實(shí)施例40

N-(2-乙基-6-甲基-苯基)-2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體S作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c6-乙基-鄰甲苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(8.7mg,21.9％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.778min；m/z 567.3(M+H)⁺。

實(shí)施例41

N-(2-氯-6-甲基-苯基)-2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體S作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-氯-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(11.4mg,28.4％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.395min；m/z 573.2/575.2(M+H)⁺(氯化物模式)。

實(shí)施例42

N-(2-溴-6-甲基-苯基)-2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體S作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2-溴-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(11.8mg,27.3％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.527min；m/z 617.2/619.2(M+H)⁺(溴化物模式)。

實(shí)施例43

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體S作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(13.6mg,33.6％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.578min；m/z 581.3(M+H)⁺。

實(shí)施例44

N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體S作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與中間體Aa反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(16.9mg,40.1％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.940min；m/z 601.3(M+H)⁺。

實(shí)施例45

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體T作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(14.2mg,40％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.765min；m/z 537.3(M+H)⁺。

實(shí)施例46

N-(2-氯-6-甲基-苯基)-2-[2-甲基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體T作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-氯-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(10.5mg,26％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.077min；m/z 557.2/559.2(M+H)⁺(氯化物模式)。

實(shí)施例47

N-(3,5-二乙基-1H-吡唑-4-基)-2-[2-甲基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體T作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ac反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(7.6mg,19％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.307min；m/z 555.3(M+H)⁺。

實(shí)施例48

2-[4-(2-二甲基氨基乙氧基)-2-甲氧基-苯胺基]-N-(2,6-二甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體U作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(16.7mg,52.9％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.556min；m/z 527.3(M+H)⁺。

實(shí)施例49

N-(2-氯-6-甲基-苯基)-2-[4-(2-二甲基氨基乙氧基)-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體U作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-氯-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(15.6mg,52.9％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.566min；m/z 547.2/549.2(M+H)⁺(氯化物-模式)。

實(shí)施例50

2-[4-(2-二甲基氨基乙氧基)-2-甲氧基-苯胺基]-N-(2-乙基-6-甲基-苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體U作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c6-乙基-鄰甲苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(17.2mg,53.1％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.075min；m/z 541.3(M+H)⁺。

實(shí)施例51

N-(2-溴-6-甲基-苯基)-2-[4-(2-二甲基氨基乙氧基)-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體U作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-溴-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(9.38mg,26.4％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.760min；m/z 590.2/592.2(M+H)⁺(溴化物-模式)。

實(shí)施例52

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[4-(2-二甲基氨基乙氧基)-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體U作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(5.54mg,16.6％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.832min；m/z 555.3(M+H)⁺。

實(shí)施例53

N-(3,5-二乙基-1H-吡唑-4-基)-2-[4-(2-二甲基氨基乙氧基)-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體U作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ac反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(13.4mg,41.0％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.189min；m/z 545.3(M+H)⁺。

實(shí)施例54

2-[4-(2-二甲基氨基乙氧基)-2-甲氧基-苯胺基]-N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體U作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Aa反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(18.3mg,53.2％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.234min；m/z 575.3(M+H)⁺。

實(shí)施例55

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨甲?；鵠苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例1-a和中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體V作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(3.7mg,17％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.254min；m/z 578.3(M+H)⁺。

實(shí)施例56

N-(2,6-二甲基苯基)-2-(2-甲基-4-嗎啉代-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例2a描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體W，從它的對(duì)應(yīng)乙基酯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例1b中描述的方法使所述酯與2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(5.5mg,22％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:13.950min；m/z 509.3(M+H)⁺。

實(shí)施例57

N-(2-乙基-6-甲基-苯基)-2-[2-異丙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體X作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c6-乙基-鄰甲苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(13mg,28％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.031min；m/z 580.3(M+H)⁺。

實(shí)施例58

N-(2,6-二甲基苯基)-2-(2-甲基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體I作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(20mg,64％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.706min；m/z 508.3(M+H)⁺。

實(shí)施例59

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(1-甲基吡咯烷-3-基)氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體Y作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(8.1mg,25％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.158min；m/z 567.3(M+H)⁺。

實(shí)施例60

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-3-哌啶基)氨甲酰基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

(a)4-[(7-乙氧基羰基-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-2-基)氨基]-3-甲氧基-苯甲酸

以關(guān)于中間體1a描述的類似的方式，使用4-氨基-3-甲氧基苯甲酸作為起始原料，制備該化合物。收率：160mg(43.5％)

(b)2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-3-哌啶基)氨甲?；鵠苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯

向4-[(7-乙氧基羰基-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-2-基)氨基]-3-甲氧基-苯甲酸(80mg,0.20mmol)和3-氨基-1-甲基哌啶二鹽酸鹽(36.6mg,0.20mmol)在DMF(2mL)中的攪拌懸浮液中加入DiPEA(139μL,0.84mmol)。將得到的溶液冷卻至0℃并加入HATU(83.6mg,0.22mmol)。除去冷卻，并將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將混合物逐滴加入劇烈攪拌的EtOAc/水/鹽水1/1/1的混合物(30mL)中。隨后將水層用EtOAc(2×10mL)萃取。將合并的有機(jī)層用水(20mL)、鹽水(20mL)洗滌，經(jīng)Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮以得到標(biāo)題化合物(70mg,70％)。

(c)N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-3-哌啶基)氨甲?；鵠苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

將粗制的2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-3-哌啶基)氨甲酰基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯皂化，隨后如關(guān)于中間體2b所述與亞硫酰氯反應(yīng)，得到對(duì)應(yīng)的?；?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(8.4mg,19％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.406min；m/z 580.3(M+H)⁺。

實(shí)施例61

N-(2,6-二氯苯基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二氯苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(9mg,20.7％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.404min；m/z 578.2(M+H)⁺(氯化物-模式)。

中間體3

2-氯嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯

(a)2-甲氧基嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯

將DDQ(1.53g,6.76mmol)加入2-甲氧基-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(1.54g,5.63mmol)在DCM(50mL)中的攪拌溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?天。加入另外量的200mg DDQ，并將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢枇硗?天。將混合物過(guò)濾并在真空中濃縮至小體積。將粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠上的柱色譜法(庚烷/乙酸乙酯＝1/0至1/1v/v％)純化以得到標(biāo)題化合物(750mg,50％)。

(b)2-羥基嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯

將碘化鈉(1.24g,8.29mmol)加入2-甲氧基-嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(750mg,2.76mmol)在乙腈(19mL)中的攪拌溶液中。將三甲基氯硅烷(896mg,1.05mL)在乙腈(3mL)中的溶液逐滴加入反應(yīng)混合物中。將混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將另外的碘化鈉(3.33g)、TMS-Cl(2.4g,2.8mL)在乙腈(6mL)中的溶液逐滴加入，并將反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?天。將混合物在減壓下濃縮。將殘余物懸浮于200mL DCM/MeOH(4/1)中，并用飽和硫代硫酸鈉溶液(50mL)和水(100mL)的混合物萃取。將水層用DCM/MeOH(4/1,2×150mL)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑，以得到固體。將固體在沸騰的乙酸乙酯(50mL)中研磨。冷卻后，將固體在室溫?cái)嚢?h并過(guò)濾。將殘余物在真空下在40℃干燥以得到1.0g粗制的2-羥基-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(定量收率)。

(c)2-氯嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(中間體3)

將N,N-二甲基苯胺(47mg,50μL,1.50mmol)加入2-羥基嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酸乙酯(1.0g,3.89mmol)在乙腈(30mL)中的溶液中。將磷酰氯(V)(2.99g,1.81mL,19.5mmol)在乙腈(4mL)中的溶液逐滴加入反應(yīng)混合物中。將棕色/紅色懸浮液加熱至65℃保持4小時(shí)。冷卻后，將混合物緩慢地倒入攪拌的25％氨水溶液(50mL)和冰水(100mL)的混合物中，保持溫度低于10℃。攪拌另外15分鐘以后，乙基(ethyl)將混合物用乙酸乙酯萃取。隨后，將合并的有機(jī)層用水(50mL)、0.2N HCl(50mL)、鹽水(25mL)洗滌，干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并在真空中濃縮。將粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠上的柱色譜法(庚烷/乙酸乙酯＝1/0至1/1v/v％)純化以得到200mg標(biāo)題化合物。

實(shí)施例62

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺基]嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，從中間體3和中間體S作為起始原料開(kāi)始，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(30mg,45％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.491min；m/z 551.3(M+H)⁺。

實(shí)施例63

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體B作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(17mg,47％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.602min；m/z 522.3(M+H)⁺。

實(shí)施例64

N-(2-乙基-6-甲基-苯基)-2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體B作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-乙基-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(14mg,65％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.303min；m/z 536.3(M+H)⁺。

實(shí)施例65

N-(2-溴-6-甲基-苯基)-2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體B作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-溴-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(30mg,73％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.914min；m/z 586.2/588.2(M+H)⁺(溴化物模式)。

實(shí)施例66

N-(2,6-二氯苯基)-2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體B作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二氯苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(10mg,36％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.770min；m/z 562.2(M+H)⁺(氯化物-模式)。

實(shí)施例67

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體B作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(13mg,34％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.954min；m/z 550.3(M+H)⁺。

實(shí)施例68

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[(2-甲基-6-嗎啉代-3-吡啶基)氨基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體D作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(9.6mg,27％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.844min；m/z 510.2(M+H)⁺。

實(shí)施例69

N-(2-乙基-6-甲基-苯基)-2-[(2-甲基-6-嗎啉代-3-吡啶基)氨基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體D作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-乙基-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(11.2mg,30.4％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.599min；m/z 524.3(M+H)⁺。

實(shí)施例70

N-(2-溴-6-甲基-苯基)-2-[(2-甲基-6-嗎啉代-3-吡啶基)氨基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體D作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2-溴-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(12mg,30％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.151min；m/z 574.2/576.2(M+H)⁺(溴化物模式)。

實(shí)施例71

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，從中間體3和中間體F作為起始原料開(kāi)始，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(0.7mg)。數(shù)據(jù)：LCMS(A)R_t:6.446min；m/z 564.3(M+H)⁺。

實(shí)施例72

N-(2-乙基-6-甲基-苯基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-乙基-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(17.8mg,32.2％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.836min；m/z 552.3(M+H)⁺。

實(shí)施例73

N-(2-溴-6-甲基-苯基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2-溴-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(18.1mg,30％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.427min；m/z 602.2/604.2(M+H)⁺(溴化物模式)。

實(shí)施例74

N-(2,6-二甲基苯基)-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例1描述的相同的反應(yīng)順序，從中間體3和中間體H作為起始原料開(kāi)始，從它的對(duì)應(yīng)乙基酯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例1中描述的方法使乙基酯與2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用50％TFA/二氯甲烷將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(1.4mg,5％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.283min；m/z 524.3(M+H)⁺。

實(shí)施例75

N-(2-氯-6-甲基-苯基)-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例1描述的相同的反應(yīng)順序，從中間體1和中間體H作為起始原料開(kāi)始，從它的對(duì)應(yīng)乙基酯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例1中描述的方法使乙基酯與2-氯-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用50％TFA/二氯甲烷將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(0.9mg,4％)。數(shù)據(jù)：LCMS(A)R_t:5.794min；m/z 544.2/546.2(M+H)⁺(氯化物模式)。

實(shí)施例76

N-(2,6-二乙基苯基)-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例1描述的相同的反應(yīng)順序，從中間體1和中間體H作為起始原料開(kāi)始，從它的對(duì)應(yīng)乙基酯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例1中描述的方法使乙基酯與2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用50％TFA/二氯甲烷將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(20.7mg,72％)。數(shù)據(jù)：LCMS(A)R_t:6.213min；m/z 552.3(M+H)⁺。

實(shí)施例77

N-(2,6-二乙基苯基)-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

在實(shí)施例76的制備型HPLC純化過(guò)程中，將該化合物分離為副產(chǎn)物，以得到標(biāo)題化合物(2mg,7％)。數(shù)據(jù)：LCMS(A)R_t:6.512min；m/z 550.3(M+H)⁺。

實(shí)施例78

N-(2-氯-6-甲基-苯基)-2-(2-甲基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體I作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-氯-6-甲基苯胺反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(24mg,81％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.831min；m/z 528.2/530.2(M+H)⁺(氯化物模式)。

實(shí)施例79

N-(2,6-二氯苯基)-2-(2-甲基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體I作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二氯苯胺反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(27mg,96％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.853min；m/z 548.2(M+H)⁺(氯化物-模式)。

實(shí)施例80

N-(2,6-二乙基苯基)-2-(2-甲基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體I作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(18mg,40％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.916min；m/z 536.3(M+H)⁺。

實(shí)施例81

N-(2-溴-6-甲基-苯基)-2-(2-甲基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體I作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-溴-6-甲基苯胺反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(16mg,51％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.922min；m/z 572.2/574.2(M+H)⁺(溴化物模式)。

實(shí)施例82

N-(2-乙基-6-甲基-苯基)-2-(2-甲基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體I作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2-乙基-6-甲基苯胺反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(22mg,77％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.361min；m/z 522.3(M+H)⁺。

實(shí)施例83

N-(2,6-二乙基苯基)-2-(2-甲基-4-嗎啉代-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2a描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體W，從它的對(duì)應(yīng)乙基酯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例1b中描述的方法使所述酯與2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(4.2mg,13％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:15.695min；m/z 537.3(M+H)⁺。

實(shí)施例84

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(1-甲基吡咯烷-3-基)氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體Y作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(4mg,12％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.832min；m/z 539.2(M+H)⁺。

實(shí)施例85

N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[4-(1-甲基-4-哌啶基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用商購(gòu)可得的4-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯胺作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與中間體Aa反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(18.3mg,44％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.405min；m/z 555.3(M+H)⁺。

實(shí)施例86

N-(2-氯-6-甲基-苯基)-2-[2-(二氟甲氧基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體J作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2-氯-6-甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(17.2mg,41％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.569min；m/z 594.2/596.2(M+H)⁺(氯化物-模式)。

實(shí)施例87

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[2-乙基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例38-a描述的相同的反應(yīng)順序，使用4-溴-2-乙基苯胺作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)溴化物制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例38-b中描述的方法使溴化物與N-甲基哌嗪反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(6.5mg,15％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.136min；m/z 564.4(M+H)⁺。

實(shí)施例88

N-[3,5-二乙基-1-(2-甲氧基乙基)吡唑-4-基]-2-[4-[3-(二甲基氨基)丙基-甲基-氨甲?；鵠-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于實(shí)施例60描述的相同的反應(yīng)順序，使用N,N,N'-三甲基-1,3-丙烷二胺作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ae反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(13.8mg,20％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.220min；m/z 658.4(M+H)⁺。

實(shí)施例89

2-[4-(氮雜環(huán)丁烷-3-基氧基)-2-甲基-苯胺基]-N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體Z作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Aa反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(6.6mg,17％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:7.975min；m/z 543.3(M+H)⁺。

實(shí)施例90

2-[4-(3,5-二甲基異唑-4-基)-2-甲氧基-苯胺基]-N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZA作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Aa反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(16.2mg,46％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:14.477min；m/z 583.3(M+H)⁺。

實(shí)施例91

2-[4-(氮雜環(huán)丁烷-3-基氧基)-2-甲氧基-苯胺基]-N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZB作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Aa反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(12.8mg,25％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.441min；m/z 559.3(M+H)⁺。

實(shí)施例92

2-[4-(氮雜環(huán)丁烷-3-基氧基)-2-甲氧基-苯胺基]-N-(3,5-二乙基-1H-吡唑-4-基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZB作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ac反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(8.9mg,19％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.324min；m/z 529.3(M+H)⁺。

實(shí)施例93

2-[4-(氮雜環(huán)丁烷-3-基氧基)-2-甲氧基-苯胺基]-N-[3,5-二乙基-1-(2-甲氧基乙基)吡唑-4-基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZB作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ae反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(14.9mg,34％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.618min；m/z 587.4(M+H)⁺。

實(shí)施例94

N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體R作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與中間體Aa反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(8.7mg,21％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.704min；m/z 596.3(M+H)⁺。

實(shí)施例95

N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氧基]苯胺基]嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，從中間體3和中間體S作為起始原料開(kāi)始，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Aa反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(23mg,32％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.796min；m/z 599.3(M+H)⁺。

實(shí)施例96

N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，從中間體3和中間體ZE作為起始原料開(kāi)始，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Aa反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(14mg,61％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.058min；m/z 570.3(M+H)⁺。

實(shí)施例97

N-(3,5-二乙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，從中間體3和中間體ZE作為起始原料開(kāi)始，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ac反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(10.6mg,39％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.908min；m/z 540.3(M+H)⁺。

實(shí)施例98

N-[1-(2-羥基-2-甲基-丙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZE作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與中間體Af反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(11.4mg,28％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:7.882min；m/z 586.3(M+H)⁺。

實(shí)施例99

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(三氘基甲氧基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZC作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(14.6mg,23％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.878min；m/z 569.4(M+H)⁺。

實(shí)施例100

N-[3,5-二乙基-1-(2-甲氧基乙基)吡唑-4-基]-2-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(三氘基甲氧基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZC作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與中間體Ae反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(17.2mg,25％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.443min；m/z617.4(M+H)⁺。

實(shí)施例101

N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[[2-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-吡啶基]氨基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZD作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Aa反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(13.8mg,27％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:7.187min；m/z 571.4(M+H)⁺。

實(shí)施例102

2-[5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-N-(2,6-二乙基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用制備型HPLC從在實(shí)施例20中描述的化合物，將該化合物分離為副產(chǎn)物，以得到標(biāo)題化合物(9.1mg)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:14.555min；m/z 601.3/603.3(M+H)⁺(氯化物-模式)。

實(shí)施例103

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(四氫吡喃-4-基氨甲酰基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

(a)2-(4-溴-2-甲氧基-苯胺基)-N-(2,6-二甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用商購(gòu)可得的4-溴-2-甲氧基苯胺作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二甲基苯胺反應(yīng)，以得到標(biāo)題化合物(1.35g,84％)。

(b)2-(4-氰基-2-甲氧基-苯胺基)-N-(2,6-二甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

向2-(4-溴-2-甲氧基-苯胺基)-N-(2,6-二甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺(1.35g,2.6mmol)和氰化鋅(321mg,2.73mmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入四(三苯基膦)鈀(0)(300mg,0.26mmol)。將反應(yīng)混合物在微波輻射下在170℃加熱30分鐘。冷卻至環(huán)境溫度以后，將混合物濃縮，并將殘余物用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮以得到粗制的標(biāo)題化合物(1.05g,87％)。

(c)4-[[7-[(2,6-二甲基苯基)氨甲?；鵠-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-2-基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酸

向2-(4-氰基-2-甲氧基-苯胺基)-N-(2,6-二甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺(750mg,1.61mmol)在MeOH(25mL)中的攪拌懸浮液中加入氫氧化鉀(453mg,8.07mmol)在水(12.5mL)中的溶液。將反應(yīng)混合物在微波輻射下在120℃加熱2小時(shí)。蒸發(fā)甲醇級(jí)分以后，通過(guò)加入2N HCl-溶液直到pH～2，將得到的水層酸化。用二氯甲烷萃取以后，將合并的有機(jī)層在PE-過(guò)濾器上過(guò)濾以得到330mg標(biāo)題化合物(收率：42％)。

(d)N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(四氫吡喃-4-基氨甲?；?苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和4-氨基四氫吡喃鹽酸鹽制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(5mg,18％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:14.407min；m/z 567.3(M+H)⁺。

實(shí)施例104

2-[4-(氮雜環(huán)丁烷-3-基氨甲?；?-2-甲氧基-苯胺基]-N-(2,6-二甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和3-氨基-1-N-Boc-氮雜環(huán)丁烷制備該化合物。將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(6.8mg,20％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.597min；m/z 538.3(M+H)⁺。

實(shí)施例105

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-[4-(2-甲氧基乙?；?哌嗪-1-基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)胺(實(shí)施例17)和甲氧基乙酸制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(10mg,49％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.973min；m/z596.3(M+H)⁺。

實(shí)施例106

N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[[4-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]氨基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZF作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Aa反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(5.9mg,20％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:7.658min；m/z 588.4(M+H)⁺。

實(shí)施例107

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[[4-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]氨基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZF作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(3.1mg,11％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.119min；m/z 568.4(M+H)⁺。

實(shí)施例108

N-(3-乙基-5-甲基-異唑-4-基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)羧酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體Ag反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(11.3mg,45％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.102min；m/z 543.3(M+H)⁺。

實(shí)施例109

N-[3,5-二乙基-1-(2-甲氧基乙基)吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)羧酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體Ae反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(21.5mg,76％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.108min；m/z 614.4(M+H)⁺。

實(shí)施例110

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[4-[4-(3-氟環(huán)丁烷羰基)哌嗪-1-基]-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)胺(實(shí)施例17)和3-氟環(huán)丁烷甲酸制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(26mg,99％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:15.532min；m/z 624.3(M+H)⁺。

實(shí)施例111

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-[4-(3-甲基氧雜環(huán)丁烷-3-羰基)哌嗪-1-基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)胺(實(shí)施例17)和3-甲基-氧雜環(huán)丁烷-3-甲酸制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(4mg,17％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:13.824min；m/z 622.3(M+H)⁺。

實(shí)施例112

2-[4-[4-(環(huán)丙烷羰基)哌嗪-1-基]-2-甲氧基-苯胺基]-N-(2,6-二甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)胺(實(shí)施例17)和環(huán)丙烷-甲酸制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(11mg,49％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:14.744min；m/z 592.3(M+H)⁺。

實(shí)施例113

2-[4-(4-丁基磺?；哙?1-基)-2-甲氧基-苯胺基]-N-(2,6-二甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

向N-(2,6-二甲基苯基)-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺(實(shí)施例17,20mg,0.038mmol)在DCM(2mL)中的攪拌溶液中加入三乙胺(18μL,0.13mmol)和丁烷-1-磺酰氯(5μL,0.042mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將混合物濃縮，并將殘余物使用制備型HPLC純化以得到標(biāo)題化合物(3mg,13％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:17.533min；m/z 644.3(M+H)⁺。

實(shí)施例114

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[4-[4-(乙基氨甲?；?哌嗪-1-基]-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

向N-(2,6-二甲基苯基)-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺(實(shí)施例17,20mg,0.038mmol)在DCM(2ml)中的攪拌溶液中加入異氰酰乙烷(4μL,0.042mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將混合物濃縮，并將殘余物使用制備型HPLC純化以得到標(biāo)題化合物(24mg,99％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:13.414min；m/z 595.3(M+H)⁺。

實(shí)施例115

N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZG作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Aa反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(19.2mg,29％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.296min；m/z 600.4(M+H)⁺。

實(shí)施例116

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(3-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZH作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(12.2mg,17％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.915min；m/z 566.4(M+H)⁺。

實(shí)施例117

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-[[(3S,4R)-3-甲氧基-4-哌啶基]氨甲酰基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和(3S,4R)-4-氨基-1-Boc-3-甲氧基-哌啶制備該化合物。將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(2.7mg,7％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.799min；m/z 596.4(M+H)⁺。

實(shí)施例118

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[4-[[(3S,4R)-3-氟-4-哌啶基]氨甲?；鵠-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和(3S,4R)-4-氨基-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯制備該化合物。將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(2.2mg,5％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.671min；m/z 584.3(M+H)⁺。

實(shí)施例119

2-[4-[(4-順式-氨基環(huán)己基)氨甲?；鵠-2-甲氧基-苯胺基]-N-(2,6-二甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和1-N-Boc-順式-1,4-環(huán)己基二胺鹽酸鹽制備該化合物。將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(4.6mg,15％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.581min；m/z 580.3(M+H)⁺。

實(shí)施例120

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[4-(異丙基氨甲?；?-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和異丙胺鹽酸鹽制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(2.9mg,8％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:15.663min；m/z 525.3(M+H)⁺。

實(shí)施例121

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-[[(1R,5S)-3-氧雜二環(huán)[3.1.0]己烷-6-基]氨甲酰基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和(1R,5S)-3-氧雜二環(huán)[3.1.0]己烷-6-胺鹽酸鹽制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(6.5mg,15％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:14.186min；m/z 565.2(M+H)⁺。

實(shí)施例122

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(嗎啉-4-羰基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和嗎啉制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(8.7mg,15％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:14.262min；m/z 553.3(M+H)⁺。

實(shí)施例123

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[4-(1,1-二氧代-1,4-噻嗪烷-4-羰基)-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和硫代嗎啉1,1-二氧化物制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(10.5mg,14％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:13.936min；m/z 601.2(M+H)⁺。

實(shí)施例124

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[4-(4-乙基-1,4-二氮雜環(huán)庚烷-1-羰基)-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和1-乙基-1,4-二氮雜環(huán)庚烷二鹽酸鹽制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(4.4mg,7％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.510min；m/z 594.4(M+H)⁺。

實(shí)施例125

2-[4-[(3,3-二氟環(huán)丁基)氨甲?；鵠-2-甲氧基-苯胺基]-N-(2,6-二甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和3,3-二氟環(huán)丁胺鹽酸鹽制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(4.1mg,7％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:16.415min；m/z 573.3(M+H)⁺。

實(shí)施例126

2-[4-(環(huán)丙基氨甲?；?-2-甲氧基-苯胺基]-N-(2,6-二甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和環(huán)丙胺制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(5.7mg,10％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:14.833min；m/z 523.3(M+H)⁺。

實(shí)施例127

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙基氨甲?；?苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和2-甲氧基乙胺制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(4.9mg,8％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:14.283min；m/z 541.3(M+H)⁺。

實(shí)施例128

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-[2-(1-哌啶基)乙基氨甲?；鵠苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和2-(1-哌啶基)乙胺制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(4.2mg,5％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.340min；m/z 594.3(M+H)⁺。

實(shí)施例129

2-[4-(4-氰基-4-甲基-哌啶-1-羰基)-2-甲氧基-苯胺基]-N-(2,6-二甲基苯基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)羧酸(實(shí)施例103-c)和4-甲基哌啶-4-甲腈鹽酸鹽制備該化合物。通過(guò)硅膠上的快速色譜法(二氯甲烷/甲醇＝99/1至9/1v/v％)執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(3.9mg,5％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:15.853min；m/z 590.3(M+H)⁺。

實(shí)施例130

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[2-甲氧基-4-[4-(3-甲基氮雜環(huán)丁烷-3-羰基)哌嗪-1-基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)胺(實(shí)施例17)和1-叔丁氧基羰基-3-甲基-氮雜環(huán)丁烷-3-甲酸制備該化合物。將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(10mg,39％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.186min；m/z 621.4(M+H)⁺。

實(shí)施例131

2-[4-(4-乙?；哙?1-基)-2-甲氧基-苯胺基]-N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)胺(實(shí)施例16)和乙酸制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(17mg,45％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.096min；m/z 614.3(M+H)⁺。

實(shí)施例132

2-[4-[4-(3-氟環(huán)丁烷羰基)哌嗪-1-基]-2-甲氧基-苯胺基]-N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)胺(實(shí)施例16)和3-氟環(huán)丁烷甲酸制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(8mg,20％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.238min；m/z 672.3(M+H)⁺。

實(shí)施例133

N-(2-氰基-6-甲基-苯基)-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2-氨基-3-甲基芐腈反應(yīng)。通過(guò)硅膠上的快速色譜法(二氯甲烷/甲醇＝99/1至9/1v/v％)執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(8.3mg,10％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.090min；m/z 549.3(M+H)⁺。

實(shí)施例134

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[4-[3-(二甲基氨基)丙基-甲基-氨基]-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZI作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酰基氯制備該化合物。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(6.6mg,14％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.601min；m/z 582.4(M+H)⁺。

實(shí)施例135

2-[4-[3-(二甲基氨基)丙基-甲基-氨基]-2-甲氧基-苯胺基]-N-[1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZI作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ah反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(5.7mg,11％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.660min；m/z 690.4(M+H)⁺。

實(shí)施例136

N-(2,6-二乙基苯基)-2-[2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZJ作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與2,6-二乙基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(13.4mg,30％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:17.314min；m/z 542.3(M+H)⁺。

實(shí)施例137

N-[1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZJ作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ah反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(6.7mg,13％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:12.186min；m/z650.3(M+H)⁺。

實(shí)施例138

N-[1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ah反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(11.6mg,28.6％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:6.985min；m/z674.3(M+H)⁺。

實(shí)施例139

N-[1-(氮雜環(huán)丁烷-3-基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與中間體Ai反應(yīng)。將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(6.9mg,19.7％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:4.784min；m/z 583.3(M+H)⁺。

實(shí)施例140

N-[3,5-二甲基-1-(氧雜環(huán)丁烷-2-基甲基)吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Aj反應(yīng)。通過(guò)硅膠上的快速色譜法(二氯甲烷/甲醇＝99/1至9/1v/v％)執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(22.1mg,61.6％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:6.495min；m/z 598.3(M+H)⁺。

實(shí)施例141

N-[3,5-二乙基-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Ak反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(22mg,54.4％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:7.845min；m/z 658.3(M+H)⁺。

實(shí)施例142

N-[3,5-二乙基-1-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c中間體Al反應(yīng)。通過(guò)硅膠上的快速色譜法(二氯甲烷/甲醇＝99/1至9/1v/v％)執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(23.8mg,64.8％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:7.412min；m/z 612.3(M+H)⁺。

實(shí)施例143

N-[1-(2-二甲基氨基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔铩ｋS后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使酰基氯與中間體Am反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(11.5mg,32.0％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:4.944min；m/z 599.3(M+H)⁺。

實(shí)施例144

N-(2,6-二甲基-苯基)-2-[2-(二氟甲氧基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體J作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)?；戎苽湓摶衔?。隨后根據(jù)在實(shí)施例2中描述的方法使?；扰c2,6-二甲基苯胺反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(11mg,27％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:11.461min；m/z 574.3(M+H)⁺。

實(shí)施例145

N-(2,6-二甲基苯基)-2-[4-[4-(異丙基氨甲?；?哌嗪-1-基]-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

向N-(2,6-二甲基苯基)-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺(實(shí)施例17,37mg,0.063mmol)在DCM(2ml)中的攪拌溶液中加入2-異氰酰丙烷(8μL,0.07mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將混合物濃縮，并將殘余物使用制備型HPLC純化以得到標(biāo)題化合物(6mg,16％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:14.299min；m/z 609.4(M+H)⁺。

實(shí)施例146

生化激酶測(cè)定

為了確定化合物對(duì)TTK酶活性的抑制活性，使用了測(cè)定(Molecular Devices)。將化合物在二甲基亞砜(DMSO)中系列稀釋，隨后在4％的DMSO在IMAP反應(yīng)緩沖液中的溶液中稀釋，所述IMAP反應(yīng)緩沖液由10mM Tris-HCl(pH 7.5)、10mM MgCl₂、0.01％吐溫-20、0.1％NaN₃和1mM新鮮制備的二硫蘇糖醇(DTT)組成。將化合物溶液與等體積的在IMAP反應(yīng)緩沖液中的全長(zhǎng)TTK酶(Life Technologies,目錄號(hào)PV 3792)混合。在室溫在暗處預(yù)溫育1小時(shí)以后，加入熒光素標(biāo)記的MBP-衍生的底物肽(Molecular Devices,目錄號(hào)RP 7123)，隨后加入ATP以開(kāi)始反應(yīng)。最終酶濃度是3.9nM，最終底物濃度50nM，且最終ATP濃度是5μM。使反應(yīng)在室溫在暗處進(jìn)行2小時(shí)。根據(jù)生產(chǎn)商(Molecular Devices)的方案，通過(guò)用IMAP漸進(jìn)性結(jié)合溶液猝滅，停止反應(yīng)。在Envision多模式讀數(shù)器(Perkin Elmer,Waltham,MA,U.S.A.)上測(cè)量熒光素極化。使用XLfit^TM5軟件(ID Business Solutions,Ltd.,Surrey,U.K.)計(jì)算IC₅₀。發(fā)現(xiàn)所有示例的(exemplified)化合物的IC₅₀值小于100nM。

實(shí)施例147

細(xì)胞增殖測(cè)定

MOLT-4癌細(xì)胞系購(gòu)自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC,Manassas,VA,U.S.A.)，并在補(bǔ)充了10％小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基(LifeTechnologies,Bleiswijk,The Netherlands)中培養(yǎng)。將化合物在100％DMSO中以3.16倍階梯系列稀釋，隨后在水性緩沖液中進(jìn)一步稀釋。將培養(yǎng)基中的細(xì)胞以45μL/孔接種在384-孔板的孔中，并在5％CO₂的受控濕氣氛下在37℃溫育24小時(shí)。加入5μL化合物溶液，并將平板溫育另外72小時(shí)，此后將25μL ATPlite 1Step^TM(PerkinElmer,Groningen,The Netherlands)溶液加入每個(gè)孔。在Envision多模式讀數(shù)器上記錄發(fā)光。單獨(dú)地記錄在溫育開(kāi)始時(shí)的細(xì)胞信號(hào)，以便區(qū)分細(xì)胞群體生長(zhǎng)和細(xì)胞死亡。另外，通過(guò)在有0.4％DMSO存在下在沒(méi)有化合物存在下溫育副本(duplicate)來(lái)確定最大生長(zhǎng)。使用生長(zhǎng)百分比作為主要y-軸信號(hào)。使用IDBS XLfit^TM5，使用4-參數(shù)邏輯曲線，通過(guò)非線性回歸來(lái)擬合IC₅₀，從而產(chǎn)生最大信號(hào)、最小信號(hào)、hill-參數(shù)和IC₅₀。

發(fā)現(xiàn)所有示例的化合物的IC₅₀值小于300nM。實(shí)施例3、6、7、10、11、14-16、20、23-29、31、32、34、36、38、44、52、53、77、88、90-92、98、102、104、128、131、132、136、140和142的化合物表現(xiàn)出≥50nM至<150nM的IC₅₀值，且實(shí)施例1、2、4、5、9、13、17-19、21、22、33、35、37、39-43、45-51、56、58-61、62-76、78-84、86、93-97、99、100、103、105、107、109-114、116-124、126、127、129、130、133-135、137、138、141、144和145的化合物表現(xiàn)出<50nM的IC₅₀。

中間體An

1-[2-(2-乙氧基乙氧基)乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-胺

(a)4-甲基苯磺酸-2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯

在劇烈攪拌下，向在0℃冷卻的二(乙二醇)乙基醚(4.92ml,36.2mmol)在15mL THF中的溶液中，加入溶解在15mL水中的氫氧化鈉(2.46g,61.5mmol)。在0℃在10min的時(shí)段內(nèi)向該混合物中逐滴加入甲苯磺酰氯(8.28g,43.4mmol)在15mL THF中的溶液。隨后除去冷卻，并將反應(yīng)混合物在氮?dú)庀聰嚢?h。TLC分析指示起始原料的完全轉(zhuǎn)化以后，將混合物用乙醚(2×50mL)萃取2次，并將有機(jī)層用1N NaOH-溶液(25mL)和水(25mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑以得到作為無(wú)色液體的粗制4-甲基苯磺酸-2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯，收率10g(95.8％)。

(b)1-[2-(2-乙氧基乙氧基)乙基]-3,5-二甲基-4-硝基-吡唑

向3,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑(1g,7.08mmol)和碳酸銫(2.31g,7.08mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入4-甲基苯磺酸-2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯(2.04g,7.08mmol)。將混合物在100℃加熱1h。將混合物冷卻至室溫并倒入水/鹽水中，并用乙酸乙酯(100mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(50mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮以得到1.69g標(biāo)題化合物(92.8％)

(c)1-[2-(2-乙氧基乙氧基)乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-胺

向1-[2-(2-乙氧基乙氧基)乙基]-3,5-二甲基-4-硝基-吡唑(1.69g,6.57mmol)在甲醇(25mL)中的攪拌溶液中加入10％炭載鈀(200mg)在乙醇(1mL)中的懸浮液。將反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障略谑覝財(cái)嚢?5min。然后，加入甲酸銨(4.14g,65.7mmol)，并將反應(yīng)混合物加熱至回流溫度保持15min。將反應(yīng)混合物冷卻，在上過(guò)濾并在真空中濃縮。將殘余物溶解在甲醇中，然后在SCX-2柱上過(guò)濾。將柱用甲醇沖洗以后，將期望的產(chǎn)物用0.7N氨/甲醇溶液洗脫。將得到的洗脫液在真空中濃縮以得到標(biāo)題化合物(520mg,34.8％)。

中間體Ao

1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-胺

從二乙二醇甲基醚和3,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑開(kāi)始，以關(guān)于中間體An描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到500mg 1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-胺(34.8％)。

中間體Ap

1-[2-(2-乙氧基乙氧基)乙基]-3,5-二乙基-吡唑-4-胺

從3,5-二乙基-4-硝基-1H-吡唑(中間體Ac-b)和二(乙二醇)乙基醚開(kāi)始，以關(guān)于中間體An描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到550mg 1-[2-(2-乙氧基乙氧基)乙基]-3,5-二乙基-吡唑-4-胺(79.8％)。

中間體Aq

3,5-二乙基-1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]吡唑-4-胺

從3,5-二乙基-4-硝基-1H-吡唑(中間體Ac-b)和三甘醇單甲基醚開(kāi)始，以關(guān)于中間體An描述的類似的方式制備標(biāo)題化合物，以得到660mg 3,5-二乙基-1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]吡唑-4-胺(41.7％)。

實(shí)施例148

N-[1-[2-(2-乙氧基乙氧基)乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體An反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(32.3mg,53.9％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:7.432min；m/z 644.6(M+H)⁺。

實(shí)施例149

N-[1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體Ao反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(31.5mg,53.7％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:6.806min；m/z 630.7(M+H)⁺。

實(shí)施例150

N-[1-[2-(2-乙氧基乙氧基)乙基]-3,5-二乙基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體F作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體Ap反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(34.2mg,54.8％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.430min；m/z 672.7(M+H)⁺。

實(shí)施例151

N-[1-[2-(2-乙氧基乙氧基)乙基]-3,5-二乙基-吡唑-4-基]-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZE作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體Ap反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(147.4mg,93.4％)。數(shù)據(jù)：LCMS(A)R_t:4.376min；m/z 658.7(M+H)⁺。

實(shí)施例152

N-[1-[2-(2-乙氧基乙氧基)乙基]-3,5-二乙基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-[4-(2-甲氧基乙?；?哌嗪-1-基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)胺(實(shí)施例151)和甲氧基乙酸制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(17.0mg,61.4％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.554min；m/z 730.7(M+H)⁺。

實(shí)施例153

N-[1-[2-(2-乙氧基乙氧基)乙基]-3,5-二乙基-吡唑-4-基]-2-[4-[4-[2-(乙基氨基)乙?；鵠哌嗪-1-基]-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)胺(實(shí)施例151)和Boc-N-乙基-甘氨酸制備該化合物。將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(15.0mg,53.1％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.619min；m/z 743.8(M+H)⁺。

實(shí)施例154

N-[3,5-二乙基-1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-[4-(2-甲氧基乙酰基)哌嗪-1-基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，使用中間體2、中間體ZE和中間體Aq和甲氧基乙酸，以關(guān)于實(shí)施例151描述的類似的方式從它的對(duì)應(yīng)胺制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(17.8mg,57.1％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.908min；m/z 760.8(M+H)⁺。

實(shí)施例155

N-[1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-[4-(1-甲基氮雜環(huán)丁烷-3-羰基)哌嗪-1-基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)胺(實(shí)施例16)和1-甲基-3-氮雜環(huán)丁烷甲酸制備該化合物。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(0.5mg,1％)。數(shù)據(jù)：LCMS(A)R_t:3.892min；m/z 669.7(M+H)⁺。

實(shí)施例156

N-[1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-(2-甲氧基-4-哌嗪-1-基-苯胺基)-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZE作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體Ah反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(189.4mg,95.7％)。數(shù)據(jù)：LCMS(A)R_t:3.811min；m/z 660.7(M+H)⁺。

實(shí)施例157

2-[4-[4-[2-(乙基氨基)乙?；鵠哌嗪-1-基]-2-甲氧基-苯胺基]-N-[1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法，從它的對(duì)應(yīng)胺(實(shí)施例156)和Boc-N-乙基-甘氨酸制備該化合物。將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(18.9mg,61.8％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:7.255min；m/z 745.8(M+H)⁺。

實(shí)施例158

N-[3,5-二乙基-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]吡唑-4-基]-2-[4-[4-[2-(乙基氨基)乙?；鵠哌嗪-1-基]-2-甲氧基-苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZE作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體Ak反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法引入Boc-N-乙基-甘氨酸。將Boc-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(15.8mg,54.2％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:8.002min；m/z 729.8(M+H)⁺。

實(shí)施例159

N-[3,5-二乙基-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-[4-(2-甲氧基乙?；?哌嗪-1-基]苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體ZE作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體Ak反應(yīng)。將Cbz-基團(tuán)去保護(hù)以后，使用在實(shí)施例9中描述的標(biāo)準(zhǔn)HATU-偶聯(lián)方法引入甲氧基乙酸。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(17.3mg,60.4％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:9.848min；m/z 716.7(M+H)⁺。

實(shí)施例160

N-[1-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基]-3,5-二甲基-吡唑-4-基]-2-[2-甲氧基-4-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)苯胺基]-5,6-二氫嘧啶并[4,5-e]吲嗪-7-甲酰胺

使用與關(guān)于中間體2描述的相同的反應(yīng)順序，使用中間體R作為起始原料，從它的對(duì)應(yīng)酸制備該化合物。隨后以關(guān)于實(shí)施例9描述的類似的方式使所述羧酸與中間體Ah反應(yīng)。使用制備型HPLC執(zhí)行純化以得到標(biāo)題化合物(19.5mg,42.6％)。數(shù)據(jù)：LCMS(B)R_t:10.946min；m/z 684.7(M+H)⁺。

實(shí)施例148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159和160的化合物在TTK生化測(cè)定中表現(xiàn)出<50nM的IC₅₀值。

實(shí)施例148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159和160的化合物在TTK細(xì)胞測(cè)定中表現(xiàn)出<50nM的IC₅₀值。

實(shí)施例161

生化Aurora A激酶測(cè)定

為了確定化合物對(duì)Aurora A的抑制活性，使用了Ultra TR-FRET測(cè)定(Perkin Elmer)。將化合物在二甲基亞砜(DMSO)中系列稀釋，并隨后在4％的DMSO在激酶緩沖液中的溶液中系列稀釋，所述激酶緩沖液由50mM Hepes(pH 7.5)、10mM MgCl₂、1mM EGTA、0.01％吐溫-20和2mM二硫蘇糖醇(DTT)組成。將2.5μl化合物溶液與等體積的全長(zhǎng)Aurora A酶(Carna Biosciences,目錄號(hào)05-101)在激酶緩沖液中混合。在室溫在暗處預(yù)溫育1小時(shí)以后，加入U(xiǎn)Light^TM-標(biāo)記的PLK(Ser137)底物肽(Perkin Elmer,目錄號(hào)TRF-0110)和ATP，以開(kāi)始反應(yīng)。最終酶濃度是2.5nM；最終底物濃度是25nM；最終ATP濃度是2μM；每個(gè)孔中的最終DMSO濃度是1％。2小時(shí)以后，通過(guò)加入5μl 100mM EDTA來(lái)停止反應(yīng)。在室溫溫育5min以后，加入5μl銪標(biāo)記的抗-磷酸-PLK(Ser137)底物抗體(Perkin Elmer,目錄號(hào)TRF-0203)，并繼續(xù)在暗處在室溫溫育1小時(shí)。在Envision多標(biāo)記讀數(shù)器(Perkin Elmer,Waltham,MA,USA)上測(cè)量時(shí)間分辨熒光。使用XLfit^TM5軟件(ID Business Solutions,Ltd.,Surrey,U.K.)計(jì)算IC₅₀。實(shí)施例33、138、141、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159和160的化合物表現(xiàn)出≥100nM的IC₅₀值。

實(shí)施例162

生化Aurora C激酶測(cè)定

為了確定化合物對(duì)Aurora C的抑制活性，使用了Ultra TR-FRET測(cè)定(Perkin Elmer)。將化合物在二甲基亞砜(DMSO)中系列稀釋，并隨后在4％的DMSO在激酶緩沖液中的溶液中系列稀釋，所述激酶緩沖液由50mM Hepes(pH 7.5)、10mM MgCl₂、1mM EGTA、0.01％吐溫-20和2mM二硫蘇糖醇(DTT)組成。將2.5μl化合物溶液與等體積的全長(zhǎng)Aurora C酶(Carna,目錄號(hào)05-103)在激酶緩沖液中混合。在室溫在暗處預(yù)溫育1小時(shí)以后，加入U(xiǎn)Light^TM-標(biāo)記的PLK(Ser137)底物肽(Perkin Elmer,目錄號(hào)TRF-0110)和ATP，以開(kāi)始反應(yīng)。最終酶濃度是10nM；最終底物濃度是25nM；最終ATP濃度是5μM；每個(gè)孔中的最終DMSO濃度是1％。3小時(shí)以后，通過(guò)加入5μl 100mM EDTA來(lái)停止反應(yīng)。在室溫溫育5min以后，加入5μl銪標(biāo)記的抗-磷酸-PLK(Ser137)底物抗體(Perkin Elmer,目錄號(hào)TRF-0203)，并繼續(xù)在暗處在室溫溫育1小時(shí)。在Envision多標(biāo)記讀數(shù)器(Perkin Elmer,Waltham,MA,USA)上測(cè)量時(shí)間分辨熒光。使用XLfit^TM5軟件(ID Business Solutions,Ltd.,Surrey,U.K.)計(jì)算IC₅₀。

實(shí)施例33、138、141、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159和160的化合物表現(xiàn)出≥250nM的IC₅₀值。

實(shí)施例163

生化極體樣(Biochemical Polo-like)激酶1激酶測(cè)定

為了確定化合物對(duì)極體樣激酶1(PLK1)的抑制活性，使用了Ultra TR-FRET測(cè)定(Perkin Elmer)。將化合物在二甲基亞砜(DMSO)中系列稀釋，并隨后在4％的DMSO在激酶緩沖液中的溶液中系列稀釋，所述激酶緩沖液由50mM Hepes(pH 7.5)、10mM MgCl₂、1mM EGTA、0.01％吐溫-20和2mM二硫蘇糖醇(DTT)組成。將2.5μl化合物溶液與等體積的全長(zhǎng)PLK1酶(Carna,目錄號(hào)05-157)在激酶緩沖液中混合。在室溫在暗處預(yù)溫育1小時(shí)以后，加入U(xiǎn)Light^TM-標(biāo)記的p70S6K(Thr389)底物肽(Perkin Elmer,目錄號(hào)TRF-0126)和ATP，以開(kāi)始反應(yīng)。最終酶濃度是7.5nM；最終底物濃度是50nM；最終ATP濃度是5μM；每個(gè)孔中的最終DMSO濃度是1％。4小時(shí)以后，通過(guò)加入5μl 100mM EDTA來(lái)停止反應(yīng)。在室溫溫育5min以后，加入5μl銪標(biāo)記的抗-磷酸-p70S6(Thr389)底物抗體(Perkin Elmer,目錄號(hào)TRF-0214)，并繼續(xù)在暗處在室溫溫育1小時(shí)。在Envision多標(biāo)記讀數(shù)器(Perkin Elmer,Waltham,MA,USA)上測(cè)量時(shí)間分辨熒光。使用XLfit^TM5軟件(ID Business Solutions,Ltd.,Surrey,U.K.)計(jì)算IC₅₀。

實(shí)施例33、138、141、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159和160的化合物表現(xiàn)出≥250nM的IC₅₀值。

^a AurA選擇性是指IC₅₀AurA/IC₅₀TTK(生化測(cè)定)

^b AurC選擇性是指IC₅₀AurC/IC₅₀TTK(生化測(cè)定)

^c PLK1選擇性是指IC₅₀PLK1/IC₅₀TTK(生化測(cè)定)