本發(fā)明涉及某些雜芳基酰胺衍生物、包含上述物質(zhì)的藥物組合物及其使用方法，所述方法包括防止、反轉(zhuǎn)、延緩或抑制蛋白質(zhì)聚集的方法和治療蛋白質(zhì)聚集相關(guān)疾病的方法，所述疾病包括神經(jīng)變性疾病(如帕金森病、阿爾茨海默病、路易體病、帕金森病癡呆、額顳癡呆、亨廷頓病、肌萎縮側(cè)索硬化、和多系統(tǒng)萎縮癥、以及癌癥)。序列表申請人在此提交了符合PCT規(guī)則13ter.1(a)至(d)和行政指令，部分208和附錄C的標(biāo)準(zhǔn)的序列表(通過EFS-WEB電子提交)。申請人聲明以ASCII.txt格式的計(jì)算機(jī)可讀形式記錄并在此提交的信息并不包括超過提交的國際申請的公開內(nèi)容的內(nèi)容。申請人要求考慮進(jìn)入在此通過EFS-WEB提交的按照Rule5.2(a)作為本申請部分的序列表。txt文件標(biāo)記為699462000840SeqList。在2015年1月27日產(chǎn)生國際申請的序列表格式部分并且含有645個字節(jié)。背景老齡化群體的神經(jīng)變性疾病(如阿爾茨海默病(AD)、帕金森病(PD)和額顳癡呆(FTD))僅在美國和歐盟就影響了超過2000萬人并成為老年人死亡的主要原因之一。這些神經(jīng)變性疾病之間的共同特點(diǎn)是蛋白質(zhì)長期積累成神經(jīng)毒性聚集體。各疾病的特征是受影響的特定神經(jīng)元群體、涉及的特定蛋白質(zhì)聚集體和神經(jīng)元變性所導(dǎo)致的臨床特征。研究表明，蛋白質(zhì)聚集的初始階段涉及靶蛋白的突變或翻譯后修飾(如亞硝化、氧化)，其繼而生成異常構(gòu)象，促進(jìn)與類似錯誤折疊的蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用。異常蛋白隨后聚集以形成二聚體、三聚體和更高級的多聚體(也稱作“可溶性低聚體”)，其可能破壞突觸功能。此外，隨后聚集體會固定在細(xì)胞膜中并形成球形低聚體(其進(jìn)而會在膜中形成孔)和/或原纖維或纖維。這些較大的不溶性纖維可能用作生物活性低聚體的儲器。多種證據(jù)支持以下見解：蛋白質(zhì)聚集體的累進(jìn)積聚與神經(jīng)變性疾病的發(fā)病有因果關(guān)系。多種其他蛋白質(zhì)可在神經(jīng)變性疾病的患者腦部積聚，如α-突觸核蛋白、Aβ蛋白、Tau和TDP43。這些患者的認(rèn)知障礙與新皮層和邊緣系統(tǒng)突觸損失緊密相關(guān)并且增加的蛋白質(zhì)聚積水平可能導(dǎo)致這些突觸損失。許多研究聚焦于通過α-突觸核蛋白聚積的詳細(xì)機(jī)制并且其他淀粉樣前體蛋白(APP)代謝物導(dǎo)致突觸損傷和神經(jīng)變性。許多研究支持了所有聚集體，也稱為低聚體的形成在神經(jīng)毒性中起主要作用的假設(shè)。這些肽低聚體可組織成二聚體、三聚體、四聚體、五聚體和其他更高級的陣列，其可形成環(huán)形結(jié)構(gòu)。高水平的這類低聚體預(yù)示著患者癡呆和突觸損失。因?yàn)樽C據(jù)表明低聚體而非較小的前體纖維是毒性物質(zhì)，以特異性方式靶向這些早期聚積過程的化合物可用作PD、AD和相關(guān)病癥的潛在新療法。各種神經(jīng)變性疾病包括基于神經(jīng)毒性蛋白質(zhì)聚集體的累積。在特發(fā)性帕金森病(IPD)、路易體癡呆(LBD)、帕金森病癡呆(PDD)、和多系統(tǒng)萎縮癥(MSA)中，神經(jīng)毒性聚集體由α-突觸核蛋白(SYN)組成，其是正常條件下處于胞內(nèi)的突觸蛋白。在FTD和肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)中，神經(jīng)毒性聚集體源自其他胞內(nèi)蛋白(如tau、TDP-43或SOD1)。對于特定疾病(如AD)，SYN與主要蛋白質(zhì)聚集(例如，Aβ蛋白)。在亨廷頓氏病中，聚集體從Htt蛋白的切割產(chǎn)物形成。癌癥中，尤其是黑素瘤癌細(xì)胞中也涉及α-突觸核蛋白的累積。Pan等，PLoSOne2012，7(9)，e45183。因此，抑制這類累積的化合物可用于治療各種癌癥，包括黑素瘤。這些蛋白質(zhì)累積過程中顯示兩種機(jī)制。在第一種機(jī)制中，錯誤折疊和/或聚集的蛋白質(zhì)固定至多種細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)。錯誤折疊或聚集的分子與質(zhì)膜或細(xì)胞器(如線粒體或溶酶體)膜的結(jié)合會干擾蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄、自體吞噬、線粒體功能和孔形成。例如，神經(jīng)毒性SYN通過突觸核蛋白C端區(qū)域的特定部分聚集并與細(xì)胞膜中的脂質(zhì)相互作用。結(jié)合至該區(qū)域的化合物可抑制蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-脂質(zhì)相互作用并因此用于阻礙SYN或其他蛋白質(zhì)的神經(jīng)毒性低聚化及其與膜相互作用。在第二過程中，聚集的蛋白質(zhì)從固定的亞基中釋放并傳播至相鄰細(xì)胞。隨后，這種毒性蛋白聚集體的細(xì)胞至細(xì)胞的傳播可能是神經(jīng)變性的解剖學(xué)進(jìn)展和癥狀惡化的原因。與靶蛋白相互作用的小分子藥物可限制釋放和/或傳播，從而減少聚集蛋白質(zhì)的神經(jīng)毒性作用。蛋白質(zhì)聚積的抑制劑的化合物描述于PCT公開號WO2011/084642、WO2013/148365、WO2013/134371和PCT申請?zhí)朠CT/US2013/050719。仍然需要具有所需藥物特性的蛋白質(zhì)聚集抑制劑。本發(fā)明中，已發(fā)現(xiàn)某些雜芳基酰胺化合物具有蛋白質(zhì)聚集調(diào)節(jié)活性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：在一個方面，本發(fā)明涉及下式(I)的化學(xué)實(shí)體：其中，R1是H、鹵素、C1-4烷基或CF3；R2是H、-CF3、或未取代的或者被鹵素或-CF3取代的C1-4烷基；A是5元雜芳基環(huán)；Y不存在或者是C1-4亞烷基；R3和R4連同與其相連的氮一起形成未取代的或被C1-4烷基取代的單環(huán)雜環(huán)烷基環(huán)；或者其中Y是C1-4亞烷基，R3和Y連同與R3相連的氮一起形成單環(huán)雜環(huán)烷基環(huán)，并且R4是H或C1-4烷基；或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方式中，式(I)的化合物是選自下文詳述中所描述或列舉的種類的化合物。在另一個方面，本發(fā)明涉及一種藥物組合物，所述藥物組合物包括至少一種式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明所述的藥物組合物還可包含藥學(xué)上可接受的賦形劑。本發(fā)明還涉及用作藥物的式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在另一個方面，本發(fā)明涉及治療與蛋白或肽聚集相關(guān)的神經(jīng)變性疾病或病癥的方法，所述方法包括向需要這類治療的對象給予有效量的至少一種式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在另一個方面，本發(fā)明涉及治療與蛋白或肽聚集相關(guān)的疾病或醫(yī)學(xué)病癥的方法，所述方法包括向需要這類治療的對象給予有效量的至少一種式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明還涉及式(I)的化合物在制備用于治療這類疾病和醫(yī)學(xué)病癥的藥物中的用途，以及這類化合物和鹽用于治療這類疾病和醫(yī)學(xué)病癥的用途。在另一個方面，本發(fā)明涉及干擾細(xì)胞中蛋白質(zhì)或肽聚集的累積或防止、延緩、反轉(zhuǎn)或抑制細(xì)胞中蛋白質(zhì)或肽聚集體的方法，所述方法包括將細(xì)胞與有效量的至少一種式(I)的化合物或其鹽和/或與至少一種本發(fā)明的藥物組合物接觸，其中所述接觸是體外、離體或體內(nèi)接觸。從下面的詳述和本發(fā)明的實(shí)踐中可以很容易地了解本發(fā)明的其他實(shí)施方式、特征和優(yōu)點(diǎn)。為簡便起見，該說明書中引用的出版物的內(nèi)容(包括專利)通過引用納入本文。附圖的簡要說明圖1顯示了生物實(shí)施例3的結(jié)果。在圖1A中，Y軸(I/Io)是在脂膜存在(I)或不存在(Io)的情況下ASYN的(平均殘留3-23)異核單量子相干(HSQC)光譜信號強(qiáng)度的比率。在圖1B中，ASYN殘基3-23的平均I/Io比率以添加的實(shí)施例1的濃度的函數(shù)作圖。圖2顯示了如生物實(shí)施例4所述，在存在和不存在實(shí)施例1的情況下，ASYN低聚體的電子顯微圖像定量。圖3顯示了實(shí)施例1對表達(dá)GFP-標(biāo)記的人ASYN的B103成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞中ASYN的累積，如生物實(shí)施例5所述。圖4顯示了生物實(shí)施例6A的結(jié)果，以及圓點(diǎn)束任務(wù)模型中1mg/kg和5mg/kg劑量的實(shí)施例1對轉(zhuǎn)基因小鼠的影響。圖5顯示了使用A11抗體對大腦和海馬區(qū)腦部勻漿物的生物實(shí)施例6A點(diǎn)印跡分析的結(jié)果。圖6顯示了生物實(shí)施例6B的結(jié)果和實(shí)施例1對種系61ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠中皮質(zhì)神經(jīng)氈和神經(jīng)細(xì)胞體中ASYN免疫標(biāo)記的影響。圖6A反映了ASYN神經(jīng)氈臂，并且圖6B反映了研究的神經(jīng)細(xì)胞體臂。圖7顯示了生物實(shí)施例6B的結(jié)果以及實(shí)施例1對包括酪氨酸羥化酶(圖7A)、NeuN(圖7B)、和膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白(GFAP；圖7C)的腎病變性相關(guān)標(biāo)志物的免疫標(biāo)記的影響。圖8顯示了生物實(shí)施例6的結(jié)果以及使用圓點(diǎn)束表現(xiàn)測試的實(shí)施例1對種系61ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠感覺運(yùn)動損傷的影響。圖9顯示了生物實(shí)施例7A的結(jié)果以及實(shí)施例1對種系61ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠的糞便勃利(fecalboli)計(jì)數(shù)的影響。圖10顯示了生物實(shí)施例7B的結(jié)果以及實(shí)施例1對種系61ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠中ASYN的心臟水平的影響。圖11顯示了生物實(shí)施例7C的結(jié)果以及實(shí)施例1對PDNG78轉(zhuǎn)基因小鼠視網(wǎng)膜中含ASYN-GFP的圖像面積百分比的影響。圖12顯示了生物實(shí)施例7C的結(jié)果以及實(shí)施例1對PDNG78轉(zhuǎn)基因小鼠中血管周圍和神經(jīng)末端GFP標(biāo)記的影響。發(fā)明詳述在進(jìn)一步描述本發(fā)明之前，應(yīng)理解，本發(fā)明不限于所述的具體實(shí)施方式，因?yàn)樗鼈儺?dāng)然可能變化。還應(yīng)理解，本文所用術(shù)語的目的僅是描述具體實(shí)施方式，不用來構(gòu)成限制，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍僅受所附權(quán)利要求書的限制。除非另有說明，本文所用的所有科技術(shù)語與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的通常含義相同。本文中引用的所有專利、申請、公開申請和其他出版物都全文參考結(jié)合于本文。如果該部分中的定義與引用納入本文的專利、申請和其他出版物中所列的定義相反或不一致，該部分中的定義將壓倒引用納入本文的定義。本文和所附權(quán)利要求書所用的單數(shù)形式“一個”、“一種”和“所述”包括復(fù)數(shù)指示物，除非上下文另有明確說明。還應(yīng)注意到，權(quán)利要求書可撰寫成排除任何任選要素。同樣，這種說明應(yīng)用作引用權(quán)利要求元素相關(guān)地使用這類排除性術(shù)語，如“只有”、“僅僅”等，或使用“負(fù)”限制的前提基礎(chǔ)。本文所用術(shù)語“包含”、“含有”和“包括”以其開放、非限定的含義使用。為提供更簡明的描述，本文中的一些定量表達(dá)前不使用術(shù)語“約”。應(yīng)理解無論是否明確地使用術(shù)語“約”，本文中的每個含量均表示實(shí)際給定的數(shù)值，且其還表示基于本領(lǐng)域普通技術(shù)所能合理推斷的給定數(shù)值的近似值，包括由于實(shí)驗(yàn)和/或測量條件產(chǎn)生的這類給定數(shù)值的等同值和近似值。無論何時以百分比表示產(chǎn)率時，這類產(chǎn)率表示在特定的化學(xué)計(jì)量比條件下用于計(jì)算產(chǎn)率的實(shí)體質(zhì)量與同一實(shí)體所能獲得的最大量的比值。百分比形式的濃度表示質(zhì)量比率，除非另有說明。除非另有說明，本文所用的所有科技術(shù)語與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的通常含義相同。雖然也可采用與本文所述類似或等同的任何方法和材料實(shí)施或測試本發(fā)明，但以下描述優(yōu)選的方法和材料。本文提及的所有出版物均通過引用納入本文，與所引用出版物相關(guān)聯(lián)來公開和描述這些方法和/或材料。除非另有說明，本發(fā)明實(shí)施方式的方法和技術(shù)一般遵循本領(lǐng)域熟知的傳統(tǒng)方法進(jìn)行并如若干一般的或更特定的參考文獻(xiàn)中所述，所述參考文獻(xiàn)貫穿本說明書引用和討論。參見，例如，Loudon，OrganicChemistry(《有機(jī)化學(xué)》)，第四版；紐約：牛津大學(xué)出版社(OxfordUniversityPress)，2002，第360-361、1084-1085頁；Smith和March，March′sAdvancedOrganicChemistry：Reactions，Mechanisms，andStructure(《麻尺高級有機(jī)化學(xué)：反應(yīng)、機(jī)制和結(jié)構(gòu)》)，第五版，韋利科學(xué)公司(Wiley-Interscience)，2001。本文用于命名主題化合物的命名法在本文的實(shí)施例中說明。該命名法一般采用市售可得的AutoNom軟件(加利福尼亞州圣里安德魯?shù)腗DL公司)，版本12.0.2獲得。應(yīng)理解，為清楚起見，在單獨(dú)的各實(shí)施方式的內(nèi)容中描述的本發(fā)明的一些特征還可以合并在單個的實(shí)施方式中提供。反之，在單個實(shí)施方式的內(nèi)容中簡短描述的本發(fā)明的各特征也可以單獨(dú)提供或以任何合適的子組合的形式提供。與由可變形式代表的化學(xué)基團(tuán)相關(guān)的實(shí)施方式的所有組合均特定包含在本發(fā)明范圍內(nèi)并由本文公開，形同本文單獨(dú)且明確地公開每個和各個組合以至此類組合包含自身為穩(wěn)定化合物的化合物(即，可分離、表征和檢測生物學(xué)活性的化合物)。此外，描述此類可變形式的實(shí)施方式中所列的化學(xué)基團(tuán)的所有子組合也具體包含在本發(fā)明范圍內(nèi)并由本文公開，形同本文單獨(dú)且明確地公開化學(xué)基團(tuán)的每個和各個此類子組合。代表性實(shí)施方式在式(I)的一些實(shí)施方式中，R1是H、氟、氯、溴、甲基、以及、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、或叔丁基。在其它實(shí)施方式中，R1是H或氟。在其它實(shí)施方式中，R1是H。在其它實(shí)施方式中，R1是氟。在一些實(shí)施方式中，R2是H、-CF3，或者是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、或叔丁基，其各自是未取代的或被氟、氯、溴或-CF3取代。在其它實(shí)施方式中，R2是H。在其他實(shí)施方式中，R2是-CF3或者是被鹵素或-CF3任選取代的C1-4烷基。在其他實(shí)施方式中，R2是未取代的或被氟或-CF3取代的C3-4烷基。在其它實(shí)施方式中，R2是丁基。在其他實(shí)施方式中，R2是被-CF3取代的丙基。在一些實(shí)施方式中，R2處于“R”立體化學(xué)構(gòu)型。在其他實(shí)施方式中，R2處于“S”立體化學(xué)構(gòu)型。在其他實(shí)施方式中，式(I)的化合物是在R2位置處的立體化學(xué)混合物。在其他實(shí)施方式中，R2基本是“R”或基本是“S”立體化學(xué)構(gòu)型。在一些實(shí)施方式中，A是具有2個或3個雜原子環(huán)原子的5-元雜芳基環(huán)。在其他實(shí)施方式中，A是具有2個不相鄰雜原子環(huán)原子的5-元雜芳基環(huán)。在其他實(shí)施方式中，A是噻唑、噻二唑、噁唑、咪唑或三唑。在其他實(shí)施方式中，A是噻唑或噻二唑。在其他實(shí)施方式中，A是噻唑。在一些實(shí)施方式中，Y不存在。在其他實(shí)施方式中，Y是-CH2-、-CH2CH2-、-CH(CH3)-、-(CH2)3-、-C(CH3)2-、-(CH2)4-、-CH((CH2)2CH3)-、-CH(CH(CH3)2)-、-CH(CH2CH3)CH2-、-CH(CH3)CH(CH3)-、-CH(CH3)(CH2)2-、或-CH2CH(CH3)CH2-。在其他實(shí)施方式中，Y是-CH2-、-CH2CH2-或-CH(CH3)-。在其他實(shí)施方式中，Y是-CH2CH2-。在一些實(shí)施方式中，R3和R4連同與其相連的氮一起形成單環(huán)雜環(huán)烷基環(huán)，其是未取代的或被C1-4烷基取代。在其他實(shí)施方式中，R3和R4連同與其相連的氮一起形成氮雜環(huán)丁烷、吡咯烷、哌啶、氮雜哌嗪、嗎啉、硫代嗎啉、或1，1-二氧代-硫代嗎啉，各自是未取代的或被C1-4烷基取代。在其它實(shí)施方式中，R3和R4連同與其相連的氮一起形成哌嗪、嗎啉、或吡咯烷，各自是未取代的或被C1-4烷基取代。在其它實(shí)施方式中，R3和R4連同與其相連的氮一起形成哌嗪或嗎啉，各自是未取代的或被C1-4烷基取代。在其它實(shí)施方式中，R3和R4連同與其相連的氮一起形成哌嗪，其是未取代的或被C1-4烷基取代。在其它實(shí)施方式中，R3和R4連同與其相連的氮一起形成哌嗪或4-甲基-哌嗪。在其中Y是C1-4亞烷基的其他實(shí)施方式中，R3和Y連同與R3相連的氮一起形成單環(huán)雜環(huán)烷基環(huán)，并且R4是H或C1-4烷基。在其他實(shí)施方式中，Y和R3連同與R3相連的氮一起形成吡咯烷或哌嗪。在其它實(shí)施方式中，R4是H或甲基。在一些實(shí)施方式中，R1是H，R2是H或C1-4烷基(或者是H，或者是C3-4烷基)，A是噻唑，Y不存在或者是亞乙基(或者不存在，或者是亞乙基)，并且R3和R4連同與它們相連的氮一起形成N-甲基哌嗪。在其他實(shí)施方式中，式(I)化合物選自：及其藥學(xué)上可接受的鹽。在其他實(shí)施方式中，式(I)化合物選自：及其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施方式中，式(I)的化合物選自實(shí)施例1-11，及其藥學(xué)上可接受的鹽。在其他實(shí)施方式中，化合物是鹽酸鹽形式。在其他實(shí)施方式中，化合物是實(shí)施例27或28，或其藥學(xué)上可接受的鹽。在其他實(shí)施方式中，式(I)的R2處于(S)立體化學(xué)構(gòu)型。在其他實(shí)施方式中，式(I)的R2處于(R)立體化學(xué)構(gòu)型?；瘜W(xué)定義術(shù)語“烷基”表示主鏈上具有1至12個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團(tuán)。烷基基團(tuán)的示例包括甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基(tBu)、戊基、異戊基、叔戊基、己基、異己基以及本領(lǐng)域普通技術(shù)中的基團(tuán)，且本文提供的教導(dǎo)被認(rèn)為相當(dāng)于任一前述實(shí)施例。術(shù)語“雜芳基”表示單環(huán)、稠合雙環(huán)或稠合多環(huán)的芳族雜環(huán)(環(huán)結(jié)構(gòu)含有選自碳原子和至多四個雜原子(選自氮、氧和硫)的環(huán)原子)，每個雜環(huán)含有3至12個環(huán)原子。雜芳基基團(tuán)的示范性示例包括以下實(shí)體(以適當(dāng)連接部分的形式)：術(shù)語“鹵素”指氯、氟、溴或碘。術(shù)語“鹵代”指氯、氟、溴或碘。術(shù)語“氧代”代表羰基氧。例如，被氧代取代的環(huán)戊基是環(huán)戊酮。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識到上文所列或所示的種類不是窮舉性的，也可選擇這些定義的術(shù)語范圍內(nèi)的其他種類。術(shù)語“取代的”表示特定基團(tuán)或部分帶有一個或多個取代基。術(shù)語“未取代的”表示特定基團(tuán)不帶有取代基。術(shù)語“任選取代的”表示特定基團(tuán)是未取代的或被一個或多個取代基取代。在使用術(shù)語“取代的”描述結(jié)構(gòu)系統(tǒng)時，取代可發(fā)生在系統(tǒng)上任意價態(tài)允許的位置上。本文所述的任何式旨在表示該結(jié)構(gòu)式的化合物及某些變體或形式。例如，本文的式指代包括外消旋形式，或者一種或多種對映體、非對映異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、或其混合物。另外，本文的任何式也指代水合物、溶劑合物、或該化合物的所晶型物，或其混合物。本文給出的任何化學(xué)式也旨在代表化合物的未標(biāo)記的形式以及同位素標(biāo)記形式。同位素標(biāo)記的化合物具有本文給定化學(xué)式所描述的結(jié)構(gòu)，不同之處在于一個或多個原子被具有選擇的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子代替。可摻入本發(fā)明化合物的同位素的示例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，分別例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F、36Cl和125I。這類同位素標(biāo)記的化合物可用于代謝研究(優(yōu)選使用14C)、反應(yīng)動力學(xué)研究(使用例如2H或3H)、包括檢測或成像技術(shù)(如正電子發(fā)射斷層成像術(shù)(PET)或單光子發(fā)射計(jì)算體層成像術(shù)(SPECT))的藥物或底物組織分布試驗(yàn)、或?qū)颊叩姆派湫灾委熤?。具體而言，18F或11C標(biāo)記的化合物對于PET或SPECT研究是特別優(yōu)選的?？扇鏐rooks，D.J.，“ositronEmissionTomographyandSingle-PhotonEmissionComputedTomographyinCentralNervousSystemDrugDevelopment(中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物開發(fā)中的正電子發(fā)射斷層成像術(shù)和單光子發(fā)射計(jì)算體層成像術(shù))”NeuroRx2005，2(2)，226-236和本文所引用的參考文獻(xiàn)所述進(jìn)行PET和SPECT研究。另外，用重同位素如氘(即2H)取代能提供因代謝穩(wěn)定性較高(例如體內(nèi)半衰期延長或劑量要求降低)而產(chǎn)生的某些治療優(yōu)勢。本發(fā)明的同位素標(biāo)記化合物及其前藥通?？赏ㄟ^進(jìn)行下面方案或?qū)嵤├椭苽渲泄_的方法來制備，所述方法是用易于獲得的同位素標(biāo)記試劑取代非同位素標(biāo)記試劑。在本文中對一類取代基使用時，命名法“Ci-j”(其中i＞i)表示獨(dú)立地實(shí)現(xiàn)從i至i(包括i和i)的每一個碳原子數(shù)目的本發(fā)明實(shí)施方式。例如，術(shù)語C1-3獨(dú)立地表示含有一個碳原子(C1)的實(shí)施方式、含有兩個碳原子(C2)的實(shí)施方式和含有三個碳原子(C3)的實(shí)施方式。本文所提到的任意雙取代基包括多種連接可能性，其中允許多于一種的該可能性。例如，雙取代基-A-B-(其中A≠B)在本文中表示A連接至第一取代原子且B連接至第二取代原子的雙取代基，也表示A連接至第二取代原子且B連接至第一取代原子的雙取代基。本發(fā)明還包括式(I)所代表化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，優(yōu)選上文所述的那些以及本文所示的特定化合物，以及包括該鹽的藥學(xué)組合物，以及使用該鹽的方法?！八帉W(xué)上可接受的鹽”旨在表示本文所示化合物的游離酸或堿的鹽，其沒有毒性、生物學(xué)上可以容忍或者生物學(xué)上適于向?qū)ο蠼o藥。通常參見，S.M.Berge等，“PharmaceuticalSalts(《藥用鹽》)”J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19。優(yōu)選的藥學(xué)上可接受的鹽是藥學(xué)上有效并且適于接觸對象組織而沒有過多的毒性、刺激、或過敏反應(yīng)的那些。本文所述的化合物可具有足夠酸性的基團(tuán)、足夠堿性的基團(tuán)、兩種類型的官能團(tuán)、或超過一種各類型，并且因此與多種無機(jī)或有機(jī)堿，以及無機(jī)和有機(jī)酸反應(yīng)以形成藥學(xué)上可接受的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽的示例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、1，4-丁炔二酸鹽、1，6-己炔二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、甲基磺酸鹽、丙基磺酸鹽、苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽和扁桃酸鹽。其它合適的藥學(xué)上可接受的鹽的列表可見于Remington′sPharmaceuticalSciences(《雷明頓藥物科學(xué)》)，第17版，賓夕法尼亞州伊斯頓的馬克出版公司(MackPublishingCompany)，1985。對于含有堿性氮的式(I)的化合物，可通過本領(lǐng)域中可采用的任意適當(dāng)方法制備藥學(xué)上可接受的鹽，例如使用酸處理游離堿，例如使用無機(jī)酸(如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、硼酸、磷酸等)或者使用有機(jī)酸(如乙酸、苯乙酸、丙酸、硬脂酸、乳酸、抗壞血酸、馬來酸、羥基馬來酸、羥乙磺酸、琥珀酸、戊酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、油酸、棕櫚酸、月桂酸、吡喃糖苷酸(如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羥基酸(如扁桃酸、檸檬酸或酒石酸)、氨基酸(如天冬氨酸或谷氨酸)、芳族酸(如苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、萘甲酸或肉桂酸)、磺酸(如十二烷基磺酸、對甲苯磺酸、甲磺酸或乙磺酸))或任意相容的酸混合物(如本文實(shí)施例中所述)以及任意本領(lǐng)域普通技術(shù)中視為等同物或可接受的取代物的其他酸及其混合物。本發(fā)明還涉及式(I)的化合物的藥學(xué)上可接受的前藥，以及使用該藥學(xué)上可接受的前藥的治療方法。術(shù)語“前藥”表示指定的化合物的前體，在向?qū)ο蠼o藥后其在體內(nèi)通過化學(xué)或生理過程(如溶劑分解或酶切)或者在生理?xiàng)l件下生成化合物(例如將前藥置于生理pH下使其轉(zhuǎn)化為式(I)的化合物)?！八帉W(xué)上可接受的前藥”指沒有毒性、生物學(xué)上可以容忍且生物學(xué)上適于向?qū)ο蠼o藥的前藥。選擇和制備適當(dāng)前藥衍生物的示范性步驟描述于例如“DesignofProdrugs(《前藥設(shè)計(jì)》)”，H.Bundgaard編，埃爾斯威爾出版社(Elsevier)，1985。本發(fā)明還涉及式(I)的化合物的藥物活性代謝物，以及該代謝物在本發(fā)明方法中的用法。“藥物活性代謝物”表示式(I)的化合物及其鹽在體內(nèi)的藥物活性代謝產(chǎn)物?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知或可采用的常規(guī)技術(shù)確定化合物的前藥和活性代謝物。參見例如Bertolini等，J.Med.Chem.1997，40，2011-2016；Shan等，J.Pharm.Sci.1997，86(7)，765-767；Bagshawe，DrugDev.Res.1995，34，220-230；Bodor，Adv.DrugRes.1984，13，255-331；Bundgaard，DesignofProdrugs(《前藥設(shè)計(jì)》)(埃爾斯威爾出版社(ElsevierPress)，1985)；以及Larsen，DesignandApplicationofProdrugs(《前藥設(shè)計(jì)與應(yīng)用》)、DrugDesignandDevelopment(《藥物設(shè)計(jì)與開發(fā)》)(Krogsgaard-Larsen等編，哈伍德學(xué)術(shù)出版公司(HarwoodAcademicPublishers)，1991)。藥物組合物為治療目的，包括本文所述化合物的藥物組合物還可包括一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。藥學(xué)上可接受的賦形劑指沒有毒性且生物學(xué)上適于向?qū)ο蠼o藥的物質(zhì)。這類賦形劑促進(jìn)本文所述化合物的給藥過程且與活性成分相容。藥學(xué)上可接受的賦形劑的示例包括穩(wěn)定劑、潤滑劑、表面活性劑、稀釋劑、抗氧化劑、粘結(jié)劑、著色劑、膨脹劑、乳化劑或調(diào)味劑。在優(yōu)選實(shí)施方式中，該發(fā)明的藥物組合物是無菌組合物。可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知或可以使用的復(fù)合技術(shù)制備藥物組合物。本發(fā)明也涉及無菌組合物，包括符合決定該組合物的國家和當(dāng)?shù)匾?guī)定的組合物。根據(jù)本領(lǐng)域中用于多種劑型制備的常規(guī)方法，本文所述藥物組合物和化合物可配制為適當(dāng)藥物溶劑或載劑中的溶液劑、乳劑、混懸劑或分散劑，或者丸劑、片劑、錠劑、栓劑、囊劑、糖衣劑、顆粒劑、粉末劑、用于重建的粉末劑或連同固態(tài)載劑的膠囊劑。本發(fā)明的藥物組合物可以通過適當(dāng)?shù)倪f送途徑給予，如口服、胃腸外、直腸、經(jīng)鼻、局部或經(jīng)眼途徑，或通過吸入。優(yōu)選地，該組合物配制為用于靜脈內(nèi)或口服給藥。對于口服給藥，本發(fā)明的化合物可以固體形式(如片劑或膠囊劑)或溶液劑、乳劑或混懸劑的形式提供。為制備口服組合物，可配制本發(fā)明的化合物以形成例如每天約0.01至約50mg/kg、或每天約0.05至約20mg/kg、或每天約0.1至約10mg/kg的劑量。其他劑量包括每天約0.1mg至1g，每天約1mg至約10mg，每天約10mg至約50mg，每天約50mg至約250mg、或每天約250mg至1g。口服片劑可包括與相容的藥學(xué)上可接受的賦形劑(如稀釋劑、崩解劑、粘結(jié)劑、潤滑劑、甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑)混合的活性成分。合適的惰性填料包括碳酸鈉和碳酸鈣、磷酸鈉和磷酸鈣、乳糖、淀粉、糖、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、甘露醇、山梨糖醇等。示例性液體口服賦形劑包括乙醇、甘油、水等。淀粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、淀粉乙醇酸鈉、微晶纖維素和海藻酸是示例性崩解劑。結(jié)合劑可包括淀粉和明膠。如果存在，潤滑劑可以是硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。如果需要，可以使用某種材料(如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯)包被片劑以延緩胃腸道中的吸收，或者使用腸溶衣包被。用于口服給藥的膠囊包括硬和軟明膠膠囊。為制備硬明膠膠囊，可將活性成分與固體、半固體或液體稀釋劑混合。軟明膠膠囊可以通過將活性成分與水、油(如花生油或橄欖油)、液體石蠟、短鏈脂肪酸的單和二甘油酯的混合物、聚乙二醇400或丙二醇混合的方式制備。用于口服給藥的液體可以是混懸劑、溶液劑、乳劑或糖漿劑的形式，或者可以是臨用前用水或其他合適載劑重建的干燥產(chǎn)品。這類液體組合物可選包含：藥學(xué)上可接受的賦形劑，如助懸劑(例如山梨糖醇、甲基纖維素、藻酸鈉、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠等)；非水性載劑，例如油(例如杏仁油或分級椰子油)、丙二醇、乙醇或水；防腐劑(例如對羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸)；潤濕劑(如卵磷脂)；以及(如果需要)調(diào)味劑或著色劑。本發(fā)明的組合物可配制為栓劑用于直腸給藥。對于胃腸外使用(包括靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)或皮下途徑)，本發(fā)明的試劑可以無菌水性溶液劑或混懸劑，緩沖至合適pH和等滲性或者以胃腸道外可接受的油的形式提供。合適的水性載劑包括林格氏溶液和等滲氯化鈉。這類形式可以是單位劑量形式(如安瓿或一次性注射設(shè)備)、多劑量形式(如可以從中取出合適劑量的藥瓶)或固體形式或可用于制備可注射制劑的預(yù)濃縮液。在數(shù)分鐘至數(shù)天的時間內(nèi)，示范性輸注劑量的范圍是約1至1000μg/kg/分鐘的與藥物運(yùn)載體混合的試劑。對于經(jīng)鼻、吸入或口服給藥，可使用例如也包含合適運(yùn)載體的噴霧制劑給予本發(fā)明的藥物組合物。對于局部使用，優(yōu)選將本發(fā)明的化合物配制為乳膏或軟膏或適用于局部給藥的類似載劑。對于局部給藥，可將本發(fā)明的化合物與藥物運(yùn)載體混合，濃度為藥物占載劑的約0.1％至約10％。另一個給予本發(fā)明的試劑的模式是利用貼片制劑以達(dá)到透皮遞送的效果。本文所用術(shù)語“治療”或“處理”包括“預(yù)防性”和“治療性”治療?！邦A(yù)防性”治療指推遲疾病、疾病癥狀或醫(yī)學(xué)病癥的發(fā)展、抑制可能出現(xiàn)的癥狀或降低疾病或癥狀發(fā)展或復(fù)發(fā)的風(fēng)險?！爸委熜浴敝委煱ń档鸵延屑膊?、癥狀或病癥的嚴(yán)重程度或抑制其惡化。因此，治療包括改善或防止已有疾病癥狀的惡化、防止出現(xiàn)其他癥狀、改善或防止癥狀的根本性系統(tǒng)原因、抑制失調(diào)或疾病，例如阻止失調(diào)或疾病的發(fā)展、減輕失調(diào)或疾病、促使失調(diào)或疾病退行、減輕疾病或失調(diào)引起的病癥或停止疾病或失調(diào)的癥狀。術(shù)語“對象”指需要該治療的哺乳動物患者，例如人。示例性的特征為蛋白質(zhì)聚積的神經(jīng)變性疾病包括阿爾茨海默病、帕金森病、額顳癡呆、路易體癡呆(路易體病)、帕金森病癡呆、多系統(tǒng)萎縮癥、肌萎縮側(cè)索硬化、和亨廷頓病，以及癌癥和炎性疾病。在一個方面，本發(fā)明的化合物和藥物組合物特異性靶向α-突觸核蛋白、β-淀粉樣蛋白和/或tau蛋白聚集體。因此，這些化合物和藥物組合物可用于防止、反轉(zhuǎn)、延緩或抑制α-突觸核蛋白、β-淀粉樣蛋白和/或tau蛋白的聚集，并用于本發(fā)明的方法中以治療聚集(如α-突觸核蛋白、β-淀粉樣蛋白和/或tau蛋白的聚集)相關(guān)或引起的神經(jīng)變性疾病。優(yōu)選地，本發(fā)明的方法靶向與α-突觸核蛋白、β-淀粉樣蛋白和/或tau蛋白的聚集相關(guān)的神經(jīng)變性疾病。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，治療方法靶向帕金森病、阿爾茨海默病、路易體病、或多系統(tǒng)萎縮癥。在其他實(shí)施方式中，方法靶向癌癥或黑色素瘤。本發(fā)明的化合物、組合物和方法還可用于減輕蛋白質(zhì)聚集繼發(fā)的有害作用，如神經(jīng)元細(xì)胞死亡。在一些方面中，本發(fā)明的化合物、組合物和方法用于靶向α-突觸核蛋白(SYN)聚集。在另一個的方面，本發(fā)明的化合物、組合物和方法用于靶向Aβ聚集。在本發(fā)明的抑制性方法中，“有效量”指足以減少、延緩或反轉(zhuǎn)蛋白質(zhì)或肽聚集的量?？赏ㄟ^如下文所述的常規(guī)分析方法對聚集的量進(jìn)行測量。這類修飾可用于多種環(huán)境，包括體外試驗(yàn)。在該方法中，所述細(xì)胞優(yōu)選是神經(jīng)細(xì)胞。在根據(jù)本發(fā)明的治療方法中，“有效量”指足以使需要這類治療的對象獲得所需治療益處的量或劑量。本發(fā)明的化合物的有效量或劑量可通過常規(guī)方法(如建模、劑量遞增或臨床試驗(yàn))確定，其中考慮常規(guī)因素，例如給藥或藥物遞送的模式或途徑、試劑的藥代動力學(xué)、感染的嚴(yán)重程度和過程、對象的健康狀態(tài)、病情和體重以及主治醫(yī)生的判斷。示例性劑量的范圍為每天每千克對象體重約1ug至2mg活性試劑，優(yōu)選約0.05至100mg/kg/天、或約1至35mg/kg/天、或約0.1至10mg/kg/天。在其他實(shí)施方式中，示例性劑量的范圍是約1mg至約1g/天，或約1-500、1-250、1-100、1-50、50-500、或250-500mg/天。總劑量可以單個或分開的劑量單元(例如BID、TID、QID)給予。一旦患者的疾病出現(xiàn)改善，即可調(diào)節(jié)劑量用于預(yù)防性或維持治療。例如，給藥的劑量或頻率或兩者可以隨著癥狀變化降至保持所需治療或預(yù)防效果的水平。當(dāng)然，如果癥狀已減輕至合適水平，可以停止治療。但任何癥狀復(fù)發(fā)時，患者可以要求長期基礎(chǔ)上的間歇治療?；颊呖赡苓€需要長時程基礎(chǔ)上的長期治療。藥物組合本發(fā)明的化合物可與一種或多種神經(jīng)退行性疾病的治療中的其他活性成分聯(lián)用，用于藥物組合物或方法。用于癌癥應(yīng)用的其他活性成分包括減輕癌癥化療劑的不良影響的其他癌癥治療藥或試劑。這類組合可用于增加效力、改善其他疾病癥狀、減少一種或多種副作用或減少所需的本發(fā)明化合物劑量。其他活性成分可以獨(dú)立于本發(fā)明的化合物的藥物組合物形式給予，或者可與本發(fā)明的化合物一起包含在單個藥物組合物中。其他活性成分可以與本發(fā)明的化合物同時給予、在其之前給予或在其之后給予。包含其他活性成分的組合試劑是那些已知或被發(fā)現(xiàn)能夠有效治療神經(jīng)變性疾病的成分，包括對疾病相關(guān)的另一個靶標(biāo)有活性的那些，諸如但不限于：a)解決蛋白質(zhì)錯誤折疊的化合物(如減少這些蛋白質(zhì)生成、提高其清除或改變其聚集和/或傳播的藥物)；b)治療該疾病癥狀的化合物(例如多巴胺替代療法)；以及c)通過互補(bǔ)機(jī)制作為神經(jīng)保護(hù)劑的藥物(例如靶向自體吞噬的那些藥物，抗氧化的那些藥物以及通過其他機(jī)制作用的那些藥物(如腺嘌呤A2A拮抗劑))。例如，本發(fā)明的組合物和制劑以及治療方法還可包括其他藥物或藥品，例如用于治療或緩解蛋白質(zhì)聚集(例如突觸核蛋白、β-淀粉樣蛋白和/或tau蛋白的聚集)相關(guān)或引起的神經(jīng)變性疾病(例如帕金森病、阿爾茨海默病(AD)、路易體病(LBD)和多系統(tǒng)萎縮癥(MSA)或相關(guān)癥狀或病癥)的其他活性劑。例如，本發(fā)明的藥物組合物還可包括一種或多種該活性劑，且治療方法還可包括給予有效量的一種或多種該活性劑。在某些實(shí)施方式中，其他活性劑可以是抗生素(例如抗菌或抑菌肽或蛋白質(zhì)，例如有效對抗革蘭氏陽性或陰性細(xì)菌的那些)、流體、細(xì)胞因子、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎劑、補(bǔ)體活化劑(如包括膠原樣結(jié)構(gòu)域或血纖蛋白原樣結(jié)構(gòu)域(如纖維凝膠蛋白(ficolin))、碳水化合物結(jié)合結(jié)構(gòu)域等的肽或蛋白質(zhì))及其組合。其他活性劑包括用于該組合物和方法的那些，包括多巴胺療法藥物、鄰苯二酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)抑制劑、單胺氧化酶抑制劑、認(rèn)知增強(qiáng)劑(如乙酰膽堿酯酶抑制劑或美金剛胺)、腺嘌呤2A受體拮抗劑、β-分泌酶抑制劑或γ-分泌酶抑制劑。在特定實(shí)施方式中，本發(fā)明的至少一種化合物可在藥物組合物或治療方法中與一種或多種藥物聯(lián)用，所述藥物選自：他克林(Cognex)、多奈哌齊(Aricept)、利凡斯的明(Exelon)、加蘭他敏(Reminyl)、毒扁豆堿、新斯的明、艾考哌齊(Icopezil)(CP-118954，5，7-二氫-3-[2-[1-(苯基甲基)-4-哌啶基]乙基]-6H-吡咯并-[4，5-f-]-1，2-苯并異唑-6-酮馬來酸鹽)、ER-127528(4-[(5，6-二甲氧基-2-氟-1-茚酮)-2-基]甲基-1-(3-氟芐基)哌啶鹽酸鹽)、扎那普齊(zanapezil)(TAK-147；3-[1-(苯基甲基)哌啶-4-基]-1-(2，3，4，5-四氫-1H-1-苯并氮雜-8-基)-1-丙烷富馬酸鹽)、美曲磷酯(Metrifonate)(T-588；(-)-R-.α.-[[2-(二甲基氨基)乙氧基]甲基]苯并[b]噻吩-5-甲醇鹽酸鹽)、FK-960(N-(4-乙酰-1-哌嗪基)-對氟苯甲酰胺水合物)、TCH-346(N-甲基-N-2-丙酰聯(lián)苯并[b，f]氧雜-10-甲胺)、SDZ-220-581((S)-.α.-氨基-5-(膦酰基甲基)-[1，1′-聯(lián)苯基]-3-丙酸)、美金剛胺(Namenda/Exiba)和1，3，3，5，5-五甲基環(huán)己烷-1-胺(Neramexane)、氟比洛芬(tarenfiurbil)(Flurizan)、3-氨基丙烷磺酸(tramiprosate)(Alzhemed)、氯碘喹啉(clioquinol)、PBT-2(8-羥基喹諾酮衍生物)、1-(2-(2-萘基)乙基)-4-(3-三氟甲基苯基)-1，2，3，6-四氫吡啶、石杉堿A、泊替瑞林(posatirelin)、亮丙瑞林(leuprolide)或其衍生物、異丙克蘭(ispronicline)、(3-氨基丙基)(正丁基)次膦酸(SGS-742)、N-甲基-5-(3-(5-異丙氧基吡啶基))-4-戊-2-胺(ispronicline)、1-癸基銨(1-decanaminium)、N-(2-羥基-3-磺丙基)-N-甲基-N-辛基-、內(nèi)鹽(zt-1)、水楊酸酯、阿司匹林、阿莫比林、貝諾酯、膽堿水楊酸鎂、二氟尼柳、法西阿明、水楊酸甲酯、水楊酸鎂、雙水楊酯、雙氯芬酸、醋氯芬酸、阿西美辛、溴芬酸、依托度酸、吲哚美辛、萘丁美酮、舒林酸、托美汀、布洛芬、卡洛芬、芬布芬、非諾洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、酮咯酸、洛索洛芬、萘普生、噻洛芬酸、舒洛芬、甲芬那酸、甲氯滅酸、苯基丁氮酮、阿扎丙宗、安乃近、羥布宗、磺吡酮、吡羅昔康、氯諾昔康、美洛昔康、替諾昔康、塞來昔布、依他昔布、羅美考昔布、帕瑞昔布、羅非昔布、伐地昔布、尼美舒利、芳基烷酸、2-芳基丙酸(profens)、N-芳基鄰氨基苯甲酸(滅酸)、吡唑烷衍生物、昔康類、COX-2抑制劑、磺酰苯胺(sulphonanilides)、必需脂肪酸和米諾扎(Minozac)(2-(4-(4-甲基-6-苯基噠嗪-3-基)哌嗪-1-基)嘧啶二鹽酸水合物)或其組合物。用于癌癥療法的潛在組合試劑可包括，例如，蛋白質(zhì)和脂質(zhì)激酶抑制劑(例如，PI3K、B-raf、BCR/ABL)、放療增強(qiáng)劑、微管結(jié)合劑(例如，紫杉醇、長春堿)、細(xì)胞代謝抑制劑、DNA嵌入劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(例如，多柔比星)、和DNA烷基化試劑。測定本文所述的化合物可用于研究應(yīng)用，包括體外、體內(nèi)或離體實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)性系統(tǒng)可包括，但不限于，細(xì)胞樣品、組織樣品、細(xì)胞組分或細(xì)胞組分混合物、完整或部分器官、或生物體。研究應(yīng)用包括，但不限于，用作測定試劑、生物化學(xué)通路解析、或其他試劑對實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的解析，在一種或多種本文所述的化合物存在或缺失下。本文所述的化合物也可用于生物化學(xué)試驗(yàn)。在一些實(shí)施方式中，本文所述的化合物可與來自對象的組織或細(xì)胞孵育以評價對象對化合物給予的潛在響應(yīng)，或確定本文所述的哪種化合物在特定對象或?qū)ο蠼M中闡述有關(guān)最優(yōu)效果。一種這類試驗(yàn)包括(a)從對象獲取細(xì)胞樣品或組織樣品，其中可測試一種或多種生物標(biāo)志物的調(diào)節(jié)，(b)向細(xì)胞樣品或組織樣品給予一種或多種本文所述的化合物；和(c)與給予化合物前的生物標(biāo)志物的狀態(tài)相比，確定給予化合物后一種或多種生物標(biāo)志物的調(diào)節(jié)量。任選地，在步驟(c)后，試驗(yàn)將包括基于步驟(c)中確定的調(diào)節(jié)量選擇用于治療與蛋白質(zhì)聚集相關(guān)的疾病或醫(yī)學(xué)病癥的化合物的額外步驟(d)。化學(xué)合成現(xiàn)在，通過參考用于本文中通用制備方法的示意性合成方案和之后的具體實(shí)施例來描述本發(fā)明的方法中有用的示例性化學(xué)實(shí)體。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識到，為獲得本文中的多種化合物，可對起始材料進(jìn)行適當(dāng)選擇，從而通過適當(dāng)?shù)貛в谢虿粠в斜Ｗo(hù)的反應(yīng)方案使用最終所需的取代基以生成所需的產(chǎn)物?；蛘撸赡苄枰蛳胍谧罱K所需的取代基位置上采用可通過反應(yīng)方案攜帶并在適當(dāng)時可被所需取代基替代的合適基團(tuán)。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識到，以下方案中顯示的轉(zhuǎn)化可以任意與特定側(cè)基功能相容的順序進(jìn)行。通用方案中描述的各反應(yīng)均優(yōu)選在約0℃至所用有機(jī)溶劑的回流溫度下進(jìn)行。除非另有說明，變量如上文所定義，可參考式(I)。本文所述同位素標(biāo)記的化合物根據(jù)下文所述方法制備，使用適當(dāng)標(biāo)記的起始材料。這類材料通常可從放射標(biāo)記的化學(xué)試劑的市場供應(yīng)商處購得。方案A如方案A所示制備式(I)的化合物。氨基-乙基吲哚衍生物A1市售可得或按照方案B制備。在標(biāo)準(zhǔn)酰胺形成條件下，化合物A1與活化的?；衔顰2偶聯(lián)，其中X是例如-OH或-C1，以產(chǎn)生式(I)的化合物。方案B如方案B所示，通過酰基化，之后還原性胺化從甲基-吲哚B1制備取代的吲哚A1。方案C按照方案C制備雜環(huán)化合物C4。某些化合物A、C1、A-CO2R(其中R是H或C1-4烷基)、和C2市售可得。在一些實(shí)施方式中，雜環(huán)A經(jīng)鹵化以形成鹵代化合物C1，并且然后?；孕纬呻p官能化的化合物C2。在其他實(shí)施方式中，化合物A-CO2R經(jīng)鹵化以形成化合物C2。在標(biāo)準(zhǔn)酰胺偶聯(lián)條件下與胺HNR3R4偶聯(lián)形成化合物C3。酯C3的水解產(chǎn)生氨基酸C4，其可用于方案A中所示的偶聯(lián)反應(yīng)。方案D如方案D所示，用例如多聚甲醛同系化甲基-雜環(huán)化合物D1以產(chǎn)生羥乙基化合物D2。羥基活化成例如鹵素或甲苯磺酸基，并被HNR3R4替換，產(chǎn)生氨基化合物D3。雜環(huán)的?；a(chǎn)生酯D4，并且水解生成氨基酸D5。實(shí)施例以下實(shí)施例用于說明但非限制本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到可通過選擇合適的起始材料和試劑來修飾以下合成反應(yīng)和方案以獲得式(I)的其他化合物。實(shí)施例1：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑-5-羧酰胺.步驟1.在0℃下向干1，2-二氯乙烷(80mL)中化合物1A(6g，45.8mmol)的溶液中加入AlCl3(18.3g，137.4mmol)。混合物升溫至25℃并且攪拌30分鐘。混合物冷卻至0℃并且滴加化合物1B(6.2g，51.3mmol)。將混合物在25℃下攪拌48小時。將反應(yīng)混合物緩慢倒入冰水中并用二氯甲烷(DCM，三次(3x))萃取。用鹽水洗滌有機(jī)層(3x)，在Na2SO4上干燥并濃縮。通過柱(20∶1石油醚/EtOAc)純化殘留物以得到黃色固體的化合物1C(4.8g，49％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.16(brs，1H)，7.39(d，J＝8.0Hz，1H)，7.37(d，J＝8.0Hz，1H)，7.23(t，J＝7.2Hz，1H)，7.15(t，J＝7.2Hz，1H)，7.15(s，1H)，3.83(s，2H)，2.50(t，J＝8.8Hz，2H)，1.54-1.63(m，2H)，1.24-1.29(m，2H)，0.86(t，J＝7.6Hz，3H).步驟2.向MeOH(150mL)中化合物1C(4.8g，22.3mmol)的混合物中加入AcONH4(3.35g，44.6mmol)和NaBH3CN(2.8g，44.6mmol)?；旌衔锘亓?4小時?；旌衔餄饪s，并且殘留物溶于DCM(150mL)中，用鹽水洗滌(3x)，在Na2SO4上干燥，并濃多以得到黃色固體的粗化合物1D(2.4g，50％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.09(s，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H)，7.29(d，J＝8.0Hz，1H)，7.03-7.18(m，2H)，6.98(s，1H)，3.01-3.03(m，1H)，2.89(dd，J＝14.0，4.0Hz，1H)，2.52(dd，J＝14.0，8.8Hz，1H)，1.18-1.50(m，8H)，0.85(t，J＝7.2Hz，3H).步驟3.將內(nèi)含化合物1E(2.2g，10.0mmol)、N-甲基哌嗪(1.1g，11.0mmol)和K2CO3(3.4g，24.9mmol)的乙腈(70mL)混合物在80℃下攪拌24小時?；旌衔锝?jīng)濃縮并用H2O稀釋并用EtOAc萃取(3x)。對合并的有機(jī)層進(jìn)行干燥并濃縮以獲得淡棕色固體狀的化合物1G(2.5g，＞100％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.85(s，1H)，4.28(q，J＝7.2Hz，2H)，3.58(t，J＝5.6Hz，4H)，2.50(t，J＝5.6Hz，4H)，2.33(s，3H)，1.32(t，J＝7.2Hz，3H).步驟4.向內(nèi)含化合物1G(2.0g，8.3mmol)的THF(20mL)混合物添加內(nèi)含NaOH(1.33g，33.2mmol)的H2O(40mL)溶液。將混合物在80℃下攪拌24小時。混合物經(jīng)濃縮以去除THF并用n-BuOH萃取。有機(jī)層經(jīng)干燥并濃縮以獲得白色固體的化合物1H(1.38g，66.7％)。1HNMR(400MHz，MeOD)δ7.55(s，1H)，3.49-3.52(m，4H)，2.53-2.56(m，4H)，2.36(s，3H).步驟5.向內(nèi)含化合物1H(1.1g，5.1mmol)的CH2Cl2(50mL)和THF(5mL)的混合物中加入化合物1D(2g，8.09mmol)，之后加入苯并三唑-1-基-氧三吡咯烷基六氟磷酸鏻(PyBOP，3.18g，6.12mmol)和DIPEA(2.6g，20.4mmol)。在25℃下N2下24小時后，用H2O(40mL)稀釋混合物并用DCM萃取(3x)。合并的有機(jī)層在Na2SO4上干燥，濃縮并且通過制備型-HPLC(ShimadzuLC-8A制備型HPLC，Luna(2)C18柱，在20分鐘內(nèi)以80mL/分鐘NH4OAc中26％-56％乙腈)純化殘留物以得到白色固體的實(shí)施例1(576mg，27％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.23(s，1H)，7.39(1H，s)，7.38(d，J＝7.2Hz，1H)，7.22(d，J＝7.2Hz，1H)，7.07-7.21(m，2H)，7.06(s，1H)，5.50(d，J＝8.4Hz，1H)，4.40-4.46(m，1H)，3.56(t，J＝5.2Hz，4H)，3.0-3.1(m，2H)，2.52(t，J＝4.8Hz，4H)，2.36(s，3H)，1.26-1.60(m，6H)，0.88(t，J＝7.2Hz，3H)LCMS：100％(M+1+)：426.2.替代合成向內(nèi)含化合物3A(400g，0.98mol，如下所示)和K2CO3(340g，2.5mol)的CH3CN(3L)的混合物中加入化合物1F(197g，1.97mol)。將混合物在80℃下在N2氣氛下攪拌12小時。用水(4L)稀釋該混合物并用DCM萃取(4Lx3)。用Na2SO4干燥合并的有機(jī)層，然后濃縮。用1∶1石油醚/乙酸乙酯洗滌殘留物以得到白色固體的實(shí)施例1(200g，44％)。向含實(shí)施例1(200g，0.47mol)的DCM(2L)溶液中加入含4MHCl的乙酸乙酯(235mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，濃縮溶劑，并且從甲基叔丁基醚(1L)中重結(jié)晶殘留物。通過過濾收集殘留固體并且在50℃下減壓干燥以得到實(shí)施例1的HCl鹽(210g，92％)。實(shí)施例2：N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑-5-羧酰胺.步驟1.在0℃下，向含化合物2A(20g，84.7mmol)的四氫呋喃(THF，100mL)溶液中滴加含NaOH(4.1g，102mmol)的H2O(100mL)溶液。將混合物在10℃下攪拌1小時?；旌衔镉肏Cl(6M)中和并用EtOAc萃取(3x)。對有機(jī)層使用鹽水洗滌、使用Na2SO4干燥并濃縮以獲得黃色固體的化合物2B(17.7g，100％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.21(s，1H).步驟2.向含化合物2B(2.6g，12.5mmol)的THF(16mL)的混合物中加入1，1-羰基-二咪唑(2.06g，12.75mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，然后用三乙胺(TEA，2.53g，25mmol)和化合物2C(2g，12.5mmol)處理。所得混合物在室溫下攪拌12小時。混合物用EtOAc稀釋，用1MHCl(2x)和鹽水洗滌，然后在Na2SO4上干燥，并濃縮以得到黃色固體的化合物2D(4.41g，＞100％)。步驟3.向內(nèi)含化合物2D(1g，5.7mmol)和K2CO3(1.0g，7.2mmol)的CH3CN(6mL)的混合物中加入N-甲基哌嗪(0.6g，5.7mmol)。將混合物在80℃下在N2氣氛下攪拌12小時。加入水并且所述混合物用DCM(5x)萃取。合并的有機(jī)層在Na2SO4上干燥并濃縮以得到黃色固體(0.8g)，其用甲基叔丁基醚(5mL)洗滌以得到白色固體的實(shí)施例2(0.3g，29％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.37(m，1H)，7.78(s，1H)，7.56(d，J＝7.6Hz，1H)，7.40(d，J＝8.4Hz，1H)，7.38-7.35(m，2H)，7.16(s，1H)，7.07(t，J＝7.4Hz，1H)，6.98(t，J＝7.4Hz，1H)，3.48-3.44(m，6H)，2.90(t，J＝7.2Hz，2H)，2.42-2.39(m，2H)，2.22(s，3H).MS：(M+H+)：370.實(shí)施例3：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(哌嗪-1-基)噻唑-5-羧酰胺.步驟1.向含化合物2B(5.19g，24.96mmol)的THF(40mL)的混合物中加入1，1-羰基-二咪唑(4.04g，24.96mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，然后用TEA(7.56g，74.88mmol)和化合物1D(5.4g，24.96mmol)處理。在室溫下12小時后，混合物用EtOAc稀釋，并用1MHCl(2x)和鹽水連續(xù)洗滌，在Na2SO4上干燥，并濃縮以得到黃色固體的化合物3A(7.74g，76％)。1HNMR(400MHz，MeOD-d4)δ8.36(d，1H，J＝8.4Hz)，7.97(s，1H)，7.56(d，J＝8Hz，1H)，7.30(d，J＝8Hz，1H)，7.06(t，J＝7.2Hz，1H)，7.05(s，1H)，6.95(t，J＝7.2Hz，1H)，4.31-4.28(m，1H)，3.0-2.97(m，1H)，1.75-1.50(m，2H)，1.45-1.25(m，4H)，2.22(t，J＝6.8Hz，3H).MS：(M+H+)：406，408.步驟2.向內(nèi)含化合物3A(2g，5.7mmol)和K2CO3(1.77g，12.8mmol)的CH3CN(12mL)的混合物中加入化合物3B(0.92g，4.9mmol)。在80℃下N2下12小時后，加入水(30mL)并用EtOAc萃取混合物(3x)。合并的有機(jī)層在Na2SO4上干燥、濃縮、并且通過柱層析(10至67％EtOAc/石油醚)純化以得到黃色固體的化合物3C(2g，79％)。該化合物無需表征即可直接用于下一步驟。步驟3.用HCl(10mL，4M，甲醇中)處理含化合物3C(1g，2.0mmol)的甲醇(10mL)溶液。在室溫下攪拌3小時后，去除溶劑并且將殘留物倒入冰水中(20mL)，用NaHCO3將pH調(diào)整到9，并用EtOAc萃取(2x)。合并的有機(jī)層在Na2SO4上干燥并濃縮以得到黃色固體(0.45g)。通過柱色譜(石油醚/DCM/MeOH50/50/0至0/90/10)純化得到白色固體的實(shí)施例3(0.32g，39％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.16(s，1H)，7.64(d，J＝7.6Hz，1H)，7.39-7.36(m，2H)，7.18(t，J＝7.6Hz，1H)，7.13(t，J＝7.6Hz，1H)，7.05(s，1H)，5.53(d，J＝8.8Hz，1H)，4.46-4.38(m，1H)，3.58-3.49(m，4H)，3.06-2.96(m，6H)，2.05(s，1H)，1.65-1.60(m，1H)，1.48-1.32(m，5H)，0.90-0.86(m，3H).MS：(M+H+)：412.實(shí)施例4：N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)噻唑-5-羧酰胺.步驟1.將在密封管中的化合物4A(50g，0.5mol)和多聚甲醛(50g)的混合物在140℃下攪拌3小時。通過柱色譜(50％DCM/EtOAc)純化反應(yīng)混合物以得到淡黃色油狀的化合物4B(27g，41％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.62(s，1H)，7.16(s，1H)，3.91-3.98(m，2H)，3.23-3.28(m，2H).步驟2.在0℃下向內(nèi)含化合物4B(27g，0.2mmol)的THF(100mL)溶液中添加內(nèi)含NaOH(16.7g，0.4mol)的水(100mL)溶液。在攪拌10分鐘后，分步添加4-甲基苯-1-磺酰氯(59.5g，0.3mol)?；旌衔锷郎刂潦覝夭⒖偣矓嚢?小時。用EtOAc(3x)提取混合物。有機(jī)相用鹽水洗滌，在Na2SO4上干燥，濃縮，并通過柱色譜(己烷/EtOAc＝2∶1)純化以得到無色油狀的化合物4C(32g，54％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.75(2H，d，J＝8Hz，2H)，7.65(1H，d，J＝4Hz，1H)，7.32(d，J＝8Hz，2H)，7.22(d，J＝4Hz，1H)，4.40(t，J＝8Hz，2H)，3.80(t，J＝8Hz，2H)，2.45(s，3H).步驟3.向含化合物4C(32g，0.11mol)的乙腈(300mL)溶液中加入N-甲基哌嗪(16.9g，0.16mol)和Cs2CO3(55g，0.16mol)?；旌衔镌?0℃下攪拌過夜，然后過濾混合物并濃縮濾液，通過柱色譜(DCM/MeOH＝10∶1)純化殘留物以得到淡黃色油狀的化合物4D(14g，47％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.67(d，J＝3.2Hz，1H)，7.19(d，J＝2.4Hz，1H)，3.21(t，J＝8.0Hz，2H)，2.79(t，J＝8.0Hz，2H)，2.59(s，4H)，2.50(s，4H)，2.31(s，3H).步驟4.在-78℃下向含化合物4D(14g，66mmol)的無水THF(70mL)溶液中滴加正丁基鋰(32mL，80mmol)?；旌衔镌谠摐囟认聰嚢?0分鐘，然后在相同溫度下向溶液中滴加氯甲酸甲酯(7.52g，80mmol)?；旌衔飻嚢?小時，在期間升溫至室溫?；旌衔镉蔑柡退訬H4Cl(50mL)稀釋，用EtOAc萃取，用鹽水洗滌，在Na2SO4上干燥，并濃縮以得到化合物4E(14g，78％)。該粗產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可直接用于下一步驟。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.26(s，1H)，3.89(s，3H)，3.19(t，J＝8.0Hz，2H)，2.77(t，J＝8.0Hz，2H)，2.58(s，4H)，2.49(s，4H)，2.17(s，3H).步驟5.向內(nèi)含化合物4E(14g，52mmol)的MeOH(100mL)溶液中添加內(nèi)含NaOH(3.12mL，78mmol)的水(39mL)溶液。在室溫下3小時后，混合物濃縮并且用EtOAc(30mL)洗滌。用1NHCl將水相調(diào)整到pH＝5-6并且用EtOAc(3x)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，在Na2SO4上干燥，并濃縮以得到橙色固體的化合物4F(12g，92％)。該粗產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可直接用于下一步驟。步驟6.內(nèi)含化合物4F(0.8g，3.1mmol)的DCM(2mL)和THF(10mL)溶液用碘化2-氯-1-甲基-吡啶鎓(Mukaiyama試劑，1.0g，3.8mmol)和N，N-二異丙基乙胺(DIPEA，1.5g，16mmol)處理，然后攪拌10分鐘。然后用2-(1H-吲哚-3-基)乙胺(0.5g，3.1mmol)處理混合物并且混合物在50℃下攪拌3小時。濾去所得沉淀并真空濃縮濾液。殘留物溶于乙酸乙酯中，用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，用Na2SO4干燥，并濃縮。通過制備型HPLC(ShimadzuLC-8A，GeminiC-18，0.04％水性NH4OH中12-42％CH3CN，在20分鐘內(nèi)，以80mL/分鐘)純化殘留物以得到淡黃色固體的實(shí)施例4(200mg，16％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.10(s，1H)，7.81(1H，s，1H)，7.65(d，J＝8Hz，1H)，7.40(d，J＝8Hz，1H)，7.21(t，J＝8Hz，1H)，7.08(s，1H)，5.99(brs，1H)，3.77(q，J＝6.2Hz，2H)，3.16(t，J＝7.1Hz，3H)，3.10(t，J＝6.6Hz，2H)，2.75(t，J＝6.8Hz，2H)，2.58(brs，4H)，2.49(brs，4H)，2.32(s，3H).實(shí)施例5：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)噻唑-5-羧酰胺.內(nèi)含化合物4F(1.2g，5mmol)的DCM(2mL)和THF(10mL)溶液用Mukaiyama試劑(1.65g，6.5mmol)和DIPEA(1.9g，20mmol)處理，然后攪拌10分鐘。混合物然后用化合物1D(1.2g，5mmol)處理并在50℃下攪拌3小時。濾去所得沉淀并真空濃縮濾液。殘留物溶于乙酸乙酯(30mL)中，用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，用Na2SO4干燥，并濃縮。通過制備型HPLC(ShimadzuLC-8A，GeminiC-18，0.04％水性NH4OH中25-55％CH3CN，在20分鐘內(nèi)，以80mL/分鐘)純化以得到白色固體的實(shí)施例5(250mg，14％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.10(s，1H)，7.75(s，1H)，7.64(d，J＝8Hz，1H)，7.38(d，J＝8Hz，1H)，7.19-7.21(m，1H)，7.13-7.14(m，1H)，5.13(brs，1H)，4.41-4.45(m，1H)，3.13-3.18(m，1H)，3.05-3.09(m，1H)，2.74-2.77(m，1H)，2.58(brs，4H)，2.49(brs，4H)，2.32(s，3H)，1.63-1.70(m，1H)，1.49-1.54(m，1H)，1.34-1.39(m，4H)，0.89(t，J＝4Hz，3H).實(shí)施例6：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噁唑-5-羧酰胺.步驟1.在-60℃下向含化合物6A(15.0g，106mmol)的THF(150mL)溶液中滴加雙三甲基硅基氨基鋰(lithiumhexamethyldisilazide)(178mL，170mmol)。將溶液在-50℃下攪拌1小時。然后向溶液中加入六氯乙烷(37.8g，160mmol)。將溶液在室溫下攪拌12小時。通過加入飽和水性NH4Cl溶液(50mL)終止該反應(yīng)并用EtOAc(50mL)萃取。有機(jī)層分離，在Na2SO4上干燥，真空濃縮，并且用柱層析純化殘留物以得到無色油狀的化合物6B(10g，56％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.71(s，1H)，3.39(q，J＝7.2Hz，2H)，1.38(t，J＝7.2Hz，3H).步驟2.將內(nèi)含化合物6B(5.5g，31.3mmol)、N-甲基哌嗪(9.4g，94mmol)和K2CO3(17.3g，125.2mmol)的乙腈(80mL)混合物在80℃下回流加熱2小時?；旌衔镉肏2O稀釋并用EtOAc萃取。分離有機(jī)層，使用Na2SO4干燥，并真空濃縮以獲得棕色油狀的化合物6C(7g，94％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.52(s，1H)，4.32(q，J＝7.2Hz，2H)，3.66(t，J＝4.8Hz，4H)，2.48(q，J＝4.8Hz，4H)，2.34(s，3H)，1.34(t，J＝7.2Hz，3H).步驟3.內(nèi)含化合物6C(2.0g，8.4mmol)和NaOH(0.33g，8.4mmol)的THF(10mL)和H2O(10mL)混合物在室溫下攪拌2小時。真空濃縮混合物以得到黃色固體的化合物6D(3.0g，粗)。1HNMR(400MHz，D2O)δ7.26(s，1H)，3.51(s，4H)，2.49(s，4H)，2.23(s，3H).步驟4.內(nèi)含化合物6D(2.0g，9.5mmol)、化合物1D(1.64g，7.6mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC，3.63g，19mmol)、1-羥基-苯并三唑(HOBt，2.57g，19mmol)、和TEA(1.92g，19mmol)的DMF(30mL)的混合物在室溫下攪拌12小時。用水稀釋該混合物并用EtOAc萃取。分離有機(jī)層，用水(3x)、鹽水洗滌，在Na2SO4上干燥并真空濃縮。用柱色譜(2至10％MeOH/DCM)純化殘留物以得到白色固體的實(shí)施例6(220mg，6％)。1HNMR(400MHzCDCl3)δ8.16(s，1H)，7.63(d，J＝8.0Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.39(t，J＝8.0Hz，1H)，7.18(d，J＝8.0Hz，1H)，7.10(t，J＝8.0Hz，1H)，7.08(s，1H)，5.69(d，J＝8.8Hz，1H)，4.47(t，J＝8.4Hz，1H)，3.47(d，J＝2.0Hz，4H)，3.08-2.98(m，2H)，2.49(t，J＝4.4Hz，4H)，2.36(s，3H)，1.66-1.51(m，1H)，1.51-1.49(m，1H)，1.39-1.27(m，4H)，0.90(d，J＝7.2Hz，3H).實(shí)施例7：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1，3，4-噻二唑-2-羧酰胺.步驟1.內(nèi)含化合物7A(60g，0.313mol)、K2CO3(130g，0.94mol)、和甲基哌嗪的DMF(300mL)溶液在40℃下攪拌3小時。將反應(yīng)混合物倒入水中，用CH2Cl2萃取。對有機(jī)層使用水洗滌、使用Na2SO4干燥并濃縮以獲得黃色固體的化合物7B(58.5g，73％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.37-4.47(m，2H)，3.60-3.71(m，4H)，2.47-2.60(m，4H)，2.34(s，3H)，1.35-1.47(m，3H).步驟2.在室溫下向內(nèi)含化合物7B(5.0g，19.53mmol)的THF(30mL)的溶液中加入1N水性NaOH(30mL)并且混合物攪拌3小時?；旌衔锝?jīng)濃縮以去除THF，用1N水性HCl調(diào)整至pH8，然后凍干以得到黃色固體的粗制酸7C(5.25g，100％)(包含NaCl)，其無須任何純化可用于下一步驟。1HNMR(400MHz，MeOD)δ3.68(m，4H)，2.91(m，4H)，2.57(s，3H).步驟3.在0℃下，向內(nèi)含化合物7C(450mg，2mmol)的DMF(15mL)和DCM(5mL)溶液中加入EDC(400mg，2mmol)和HOBt(310mg，2mol)。在0℃攪拌該混合物30分鐘。在0℃下添加化合物1D(500mg，2mmol)。將混合物在40℃下攪拌過夜?；旌衔镉肏2O稀釋并用EtOAc萃取。有機(jī)層在Na2SO4上干燥并濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過柱色譜(石油醚/DCM/MeOH50/50/0至0/10/1)純化和重結(jié)晶(MeOH)以得到暗黃色固體的實(shí)施例7(230g，15％，2批)。1HNMR：(400MHz，DMSO-d6).10.74(s，1H)，8.61(d，J＝8.0Hz，1H)，7.56(d，J＝8.0Hz，1H)，7.30(d，J＝8.0Hz，1H)，7.09(s，1H)，7.05-7.02(m，1H)，6.96-6.93(m，1H)，4.14(s，1H)，3.50(s，4H)，2.99-2.84(m，2H)，2.42(s，4H)，2.21(s，3H)，1.57(s，2H)，1.25-1.21(m，4H)，0.80(s，3H).實(shí)施例8：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-4H-1，2，4-三唑-3-羧酰胺.步驟1.在0℃下向內(nèi)含化合物8A(4.5g，35mmol)的1M硫酸(70mL，70mmol)的攪拌混合物中加入硝酸鈉(2.41g，52.5mmol)的水(20mL)溶液，之后加入額外的水(35mL)。25分鐘后，加入內(nèi)含KBr(8.33g，70mmol)和溴化亞銅(4.51g，10.5mmol)的水(35mL)溶液。在20℃下攪拌所得的混合物3小時，并用乙酸乙酯萃取混合物(3x)并且合并的萃取物用鹽水(30mL)洗滌、在Na2SO4上干燥，并濃縮至干以得到白色固體的化合物8B(2.9g，43％)。實(shí)際ES-API：191.9，189.9步驟2.向內(nèi)含化合物8B(2.9g，15mmol)的DCM(5mL)和THF(15mL)混合物的溶液中加入Mukaiyama試劑(5g，19.5mmol)和DIPEA(5.8mL)。在攪拌10分鐘后，向混合物中加入1-(1H-吲哚-3-基)己-2-胺1D(3.3g，15mmol)。將混合物在50℃下攪拌3小時。用DCM稀釋混合物，用水洗滌。有機(jī)相在Na2SO4上干燥并濃縮，并且通過在硅膠(20∶1DCM/MeOH)上的柱色譜純化殘留物以得到淡黃色固體的化合物8C(2.7g，47％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.96(brs，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H)，7.23(d，J＝8.0Hz，1H)，7.07-7.11(m，2H)，7.01-7.04(m，1H)，6.96(brs，1H)，4.38(d，J＝4Hz，1H)，2.95(d，J＝4Hz，1H)，1.61(brs，1H)，1.39-1.46(m，1H)，1.19-1.28(m，4H)，0.78(s，3H).步驟3.在120℃下，化合物8C(778mg，2mmol)和N-甲基哌嗪(1g，10mmol)的混合物在密封管中過夜攪拌。加入乙酸乙酯(20mL)并濾去沉淀的固體。用水和鹽水洗滌濾液。溶液在Na2SO4上干燥，濃縮，并通過制備型TLC(10：1DCM/MeOH)純化以得到黃色固體的實(shí)施例8(184mg，18％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.43(brs，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H)，7.26(d，J＝8.0Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.05(t，J＝8.0Hz，1H)，6.96-7.00(m，3H)，4.32(d，J＝4Hz，1H)，3.42(s，4H)，2.28-2.29(m，2H)，2.50(s，4H)，2.28(s，3H)，1.56-1.62(m，1H)，1.41-1.46(m，1H)，1.22-1.33(m，4H)，0.79(t，J＝8.0Hz，3H).實(shí)施例9：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-咪唑-5-羧酰胺.步驟1.在0℃下向內(nèi)含咪唑9A(20g，294mmol)的THF(200mL)和TEA(40g，400mmol)溶液中緩慢加入二甲基氨基磺酰氯(55g，383mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物傾倒入300mL水中，用乙酸乙酯萃取(3x)。溶液用水和鹽水洗滌，在Na2SO4上干燥，然后濃縮至干以得到無色油狀的化合物9B(42g，89％)，其在置于室溫下1小時后固化。該固體物質(zhì)無需進(jìn)一步純化即可直接用于下一步驟。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.86(s，1H)，7.23(s，1H)，7.11(s，1H)，2.82(s，6H).步驟2.在-78℃下向含化合物9B(10g，57mmol)的無水THF(100mL)溶液中滴加正丁基鋰(27.3mL，68mmol)。溶液在該溫度下攪拌30分鐘。然后在-78℃下加入溴甲烷(20.5g，62.7mmol)并且允許混合物在3小時的時間段內(nèi)升溫置室溫，之后在室溫(25℃)下過夜連續(xù)攪拌。混合物用飽和水性NH4Cl(50mL)稀釋并用DCM(3x)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，在Na2SO4上干燥并濃縮，并且通過MPLC(己烷/DCM1∶1)純化以得到輕油狀的化合物9C(8.4g，57％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.41(s，1H)，7.00(s，1H)，3.01(s，6H).步驟3.向內(nèi)含化合物9C(10g，39mmol)和N-甲基哌嗪(12g，118mmol)的二噁烷(100mL)混合物在90℃下過夜攪拌。將該溶液傾倒入水中，用DCM萃取(3x)。合并的有機(jī)層在Na2SO4上干燥并濃縮，并且通過柱色譜(10∶1DCM/MeOH10∶1)純化殘留物以得到棕色固體的化合物9D(3.6g，34％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.27(s，1H)，6.84(s，1H)，3.43(m，8H)，2.97(s，3H)，2.91(s，6H).步驟4.在-78℃下向含化合物9D(3.6g，13mmol)的無水THF(40mL)溶液中滴加正丁基鋰(6.3mL，16mmol)。溶液在該溫度下攪拌30分鐘，然后加入氯甲酸甲酯(1.48g，16mmol)。在-78℃下攪拌該混合物3小時，然后升溫至室溫。混合物用飽和水性NH4Cl(50mL)稀釋并用DCM(3x)萃取。合并的有機(jī)層在Na2SO4上干燥并濃縮，并且通過柱色譜(60∶1DCM/MeOH)純化殘留物以得到棕色粘稠油狀的化合物9E(1.5g，54％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.29(s，1H)，3.76(s，3H)，3.50(m，4H)，2.77(s，6H)，2.51(m，4H)，2.28(s，3H).步驟5.將化合物9E(1.5g，4.5mmol)和濃HCl(7.5mL)的混合物在60℃下攪拌過夜?；旌衔镎婵諠饪s并且用MeOH處理殘留物(10mL)。通過過濾收集沉淀的白色固體并且真空干燥以得到鹽酸鹽形式的化合物9F(800mg，84％)。1HNMR(400MHz，D2O)δ7.53(s，1H)，4.09(d，J＝14Hz，2H)，3.67(t，J＝12.4Hz，2H)，3.59(d，J＝12.4Hz，2H)，3.31(t，J＝12.4Hz，2H)，2.97(s，3H).步驟6.向內(nèi)含化合物9F(1.05g，5mmol)的DCM(2mL)和THF(10mL)溶液中加入Mukaiyama試劑(1.65g，6.5mmol)和DIPEA(1.9g，20mmol)。在攪拌10分鐘后，向混合物中加入1-(1H-吲哚-3-基)己-2-胺1D(1.1g，5mmol)并且混合物在50℃下攪拌3小時。真空下去除溶劑并且用乙酸抑制稀釋殘留物并用水和鹽水洗滌，在Na2SO4上干燥，并濃縮。殘留物通過制備型TLC(10∶1DCM/MeOH)純化2次以得到淡黃色固體的實(shí)施例9(200mg，8.3％)。1HNMR(400MHz，MeOD-d4)δ7.59(d，J＝8Hz，1H)，7.30(d，J＝8Hz，1H)，7.29(s，1H)，7.08-7.04(m，1H)，7.07(s，1H)，6.98-6.94(m，1H)，4.33-4.26(m，1H)，3.40-3.35(m，4H)，2.99-2.97(m，2H)，2.70-2.68(m，4H)，2.44(s，3H)，1.68-1.60(m，1H)，1.55-1.45(m，1H)1.38-1.28(m，4H)，0.86(t，J＝7Hz，3H).實(shí)施例10：N-(1-(5-氟-1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(2-嗎啉代乙基)噻唑-5-羧酰胺.步驟1.內(nèi)含化合物4C(12.7g，44.8mmol)的乙腈(127mL)溶液用嗎啉(5.6g，65mmol)和Cs2CO3(21.3g，65mmol)處理并在50℃下過夜攪拌。過濾混合物，濃縮濾液，并且通過柱層析(CH2Cl2/MeOH＝10∶1)純化殘留物以得到淡黃色油狀的化合物10A(5.6g，63％)。1HNMR(400MHz，MeOD)δ7.66(d，J＝3.2Hz，1H)，7.19(d，J＝3.6Hz，1H)，3.72(m，4H)，3.22(m，2H)，2.77(m，2H)，2.52(m，4H).步驟2.在-78℃下向含化合物10A(5.6g，28mmol)的無水THF(56mL)溶液中滴加正丁基鋰(13.6mL，17mmol)?；旌衔镌谠摐囟认聰嚢?0分鐘，然后在-78℃下向溶液中滴加氯甲酸甲酯(3.2g，17mmol)。將混合物攪拌3小時。在此期間，溫度升溫至室溫(25℃)。加入飽和NH4Cl水溶液(50mL)以猝滅反應(yīng)?；旌衔镉肊tOAc萃取，用鹽水洗滌，在硫酸鈉上干燥并濃縮以得到化合物10B(4.0g，60％)。該粗物質(zhì)無需進(jìn)一步純化即可直接用于下一步驟。1HNMR(400MHz，CDCl3)8.27(s，1H)，3.90(s，3H)，3.72-3.76(m，4H)，3.21(t，J＝8.0Hz，2H)，2.77(t，J＝8.0Hz，2H)，2.54(s，4H).步驟3.向內(nèi)含化合物10B(3g，11.7mmol)的MeOH(30mL)溶液中添加內(nèi)含NaOH(0.7g，17mmol)的水(9mL)溶液。將混合物在25℃下攪拌3小時。真空去除MeOH并且用EtOAc(30mL)洗滌溶液。用1NHCl將水相調(diào)整到pH＝5-6并且用EtOAc萃取(50mLx3)。有機(jī)相用鹽水洗滌，在硫酸鈉上干燥并濃縮至干以得到橙色固體的化合物10C(3g，100％)。該粗物質(zhì)無需進(jìn)一步純化即可直接用于下一步驟。步驟4.向含化合物10D(3.5g，18mmol)的CH2Cl2(35mL)溶液中加入CDI(3.52g，21.8mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，然后向混合物中加入N，O-二甲基鹽酸羥胺(2.3g，26mmol)。將混合物在室溫下攪拌4小時?；旌衔镉盟?30mL)稀釋，并用EtOAc(50mLx2)萃取。有機(jī)相用鹽水洗滌，在硫酸鈉上干燥，濃縮以得到棕色油狀的化合物10E(4.5g，100％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)8.33(s，1H)，7.15-7.30(m，3H)，6.90-6.92(m，1H)，3.87(s，2H)，3.73(s，3H)，3.28(s，3H).步驟5.在-78℃下向含化合物10E(15mmol，57mmol)的無水THF(72mL)溶液中滴加正丁基鋰(46mL，91mmol)?；旌衔镌谠摐囟认聰嚢?0分鐘。加入水性HCl(1M，30mL)以猝滅反應(yīng)?；旌衔镉肊tOAc萃取，用鹽水洗滌，在硫酸鈉上干燥并濃縮以得到化合物10F(3.5g，70％)。該粗物質(zhì)無需進(jìn)一步純化即可直接用于下一步驟。步驟6.向含AcONH4(46g，0.6mol)和NaBH3CN(9.5g，0.15mol)的MeOH(140mL)和THF(30mL)溶液中加入化合物10F(3.5g，15mmol)。將混合物在室溫下攪拌20小時。真空去除MeOH和THF并且向殘留物中加入飽和NaHCO3。使用EtOAc萃取溶液(100mLx2)。有機(jī)相用鹽水洗滌，在硫酸鈉上干燥，并濃縮以得到棕色油狀的化合物10G(4.0g，100％)。該粗物質(zhì)無需進(jìn)一步純化即可直接用于下一步驟。步驟7.向內(nèi)含化合物10C(1.6g，6.6mmol)的二氯甲烷(6.4mL)和THF(16mL)溶液中加入Mukaiyama試劑(2.2g，8.6mmo1)和DIPEA(1.6g，6.6mmol)。將所得混合物攪拌10分鐘。加入化合物10G(1.6g，6.8mmol)并且混合物在40℃攪拌2小時。濾去所得沉淀并真空濃縮濾液。殘留物溶于乙酸乙酯(30mL)中，用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，并濃縮。通過制備型HPLC(ShimadzuLC-8A制備型HPLC，Luna(2)C18柱，10mM水性NH4OH中25％-55％CH3CN，在20分鐘內(nèi)，以80mL/分鐘)純化殘留物以得到白色固體的實(shí)施例10(300mg，9.8％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)8.38(s，1H)，7.74(s，1H)，7.16(t，J＝4.4Hz，1H)，7.01(s，1H)，6.81-6.86(m，1H)，5.80(d，J＝8.8Hz，1H)，4.33(d，J＝5.2Hz，1H)，3.63(s，4H)，3.05(t，J＝6.4Hz，2H)，2.89-2.94(m，2H)，2.64-2.66(m，2H)，2.43(s，4H)，1.55-1.58(m，1H)，1.42-1.44(m，1H)，1.22-1.31(m，4H)，0.80(t，J＝6.8Hz，3H).實(shí)施例11：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-嗎啉代噻唑-5-羧酰胺.向內(nèi)含化合物3A(200mg，0.49mmol)和DIPEA(171μL，0.98mmol)的THF(2mL)混合物中加入嗎啉(42μL，0.49mmol)。反應(yīng)混合物在170℃下在密封的Q-管壓力反應(yīng)器中攪拌1.5小時。加入額外的嗎啉(42μL，0.49mmol)并且混合物在170℃下在密封的Q-管壓力反應(yīng)器中加熱0.5小時?；旌衔锝?jīng)濃縮并且通過柱層析(0-5％MeOH/DCM)純化殘留物以得到化合物實(shí)施例11(148mg，73％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.08(brs，1H)，7.64(d，J＝7.5Hz，1H)，7.39(s，1H)，7.37(d，J＝8Hz，1H)，7.19(dd，J＝7.5Hz，1H)，7.12(dd，J＝7.5Hz，1H)，7.05(d，J＝2Hz，1H)，5.57(d，J＝8Hz，1H)，4.39-4.42(m，1H)，3.80(t，J＝4.5Hz，4H)，3.51(t，J＝4.5Hz，4H)，3.06(dd，J＝14.5，5.5Hz，1H)，3.01(dd，J＝14.5，5.5Hz，1H)，1.26-1.64(m，6H)，0.87(t，J＝7Hz，3H).ESMS+：413.6[M+1].可按照上述方法制備實(shí)施例12-26。實(shí)施例27：(S)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑-5-羧酰胺，和實(shí)施例28：(R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑-5-羧酰胺.使用ChiralpakAD-H柱(250x30mm；5μM同上)在THAR80制備型SFC上分離對映異構(gòu)體。對映異構(gòu)體溶于甲醇(50mg/mL)中并且每次注射加載45mg的對映異構(gòu)體。使用70g/流速的CO2中40％2-丙醇(添加劑：0.05％NH3H2O)的流動相和100巴的系統(tǒng)背壓來實(shí)現(xiàn)分離。柱溫度保持在40℃下并且在220nm處檢測峰。總循環(huán)時間是6分鐘。實(shí)施例27：((S)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑-5-羧酰胺)：LCMS(XtimateC18，2.1X30mm，3μM同上)：峰1RT：2.036(100％)MS：426.2；任選旋轉(zhuǎn)(DichromPolaraizer，589nM)-0.143(sd＝0.0004)；手性純度檢驗(yàn)(OJ-H，40％MeOH(0.05％DEA))峰1RT：3.61(99.87％)，峰2RT：5.3(0.13％)。實(shí)施例28：((R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑-5-羧酰胺)：LCMS(XtimateC18，2.1X30mm，3μM同上)：峰1RT：2.035(98.77％)MS：426.2.峰2RT：2.373(1.23％)MS：427.2；任選旋轉(zhuǎn)(DichromPolaraizer，589nM)+0.160(sd＝0.0003)；手性純度檢驗(yàn)(OJ-H，40％MeOH(0.05％DEA))峰1RT：3.6(0.18％)，峰2RT：5.23(99.82％)。生物實(shí)施例1：用α-突觸核蛋白肽片段(4F)的體外熒光偏振試驗(yàn)。熒光偏振試驗(yàn)測試了化合物抑制α-突觸核蛋白肽片段的自聚集的能力。在測試化合物存在或不存在的情況下(化合物濃度為33.3至0.3μM)，肽在室溫下孵育60分鐘。使用485nm處的激發(fā)和520nm處的發(fā)射，在熒光偏振模式下的BMGPherastar酶標(biāo)儀上讀取樣品。使用四參數(shù)邏輯擬合來分析數(shù)據(jù)(XLFit，IDBS軟件)。由美國肽公司(AmericanPeptide)制備肽4F(CTGFVKKDQLGK(SEQIDNO：1))。新鮮肽樣品以5mM在純化水中重建并且稀釋到含50mMNaCl的pH7.4的50mMHEPES中至100nM的終濃度。固體化合物溶于DMSO(10mM)中，然后在緩沖劑中稀釋。測試的化合物的數(shù)據(jù)示于表1。也測試了比較化合物A和B。比較物A：比較物B：表1.實(shí)施例IC50(μM)＊比較物A＞30§比較物B6.3513.33±1.9￥23.5530.2745.951.360.3970.3780.7798.5270.4±0.3§280.7±0.4§*n＝1除非另外說明§n＝2￥n＝3±SEM生物實(shí)施例2：體內(nèi)藥代動力學(xué)試驗(yàn)本文所述化合物的藥代動力學(xué)和腦部分布在單次靜脈內(nèi)或口服給藥后的雄性C57BL/6小鼠中確定。一組54只雄性小鼠被分成兩組27只小鼠。以10mg/kg(i.v.)或2mg/kg(p.o.)的測試化合物給予組1(i.v.)和組2(p.o.)中的動物。在給藥前和給藥后0.08、0.25、0.5、1、2、4、8、和24小時(i.v.)，以及給藥前和給藥后0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小時(p.o.)收集血液樣品。在各時間點(diǎn)從三只小鼠的組中收集血液到含K2EDTA作為抗凝劑的標(biāo)記的微量離心管中。通過全血離心分離血漿樣品并且在-70℃以下儲存直至生物分析。在收集血液樣品之后，通過CO2窒息法人道地處死小鼠并且同時收集腦部。收集后，腦部樣品在冰冷的磷酸鹽緩沖鹽水(pH7.4)中洗滌，在濾紙上溫和干燥，稱重并置于聚丙烯管中。使用磷酸鹽緩沖鹽水pH7.4勻化其他腦部樣品并且總的勻漿體積是腦部重量的三倍。樣品然后儲存在-70℃以下至生物分析。所有樣品經(jīng)處理用于通過使用乙腈的蛋白質(zhì)沉淀分析，并且用量身定做的LC/MS/MS方法分析(LLOQ：1.01ng/mL針對血漿和腦部)。使用PhoenixWinNonlin(版本6.3)的非房室分析工具來計(jì)算藥代動力學(xué)參數(shù)。從該試驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù)示于表2。表2.*10mg/kg下**2mg/kg下NC＝?jīng)]有檢測到化合物(低于檢測限)ND＝未測定生物實(shí)施例3：測試化合物對α-突觸核蛋白與脂膜相互作用的影響的NMR試驗(yàn)為了檢測脂膜存在下測試化合物與全長ASYN的相互作用，進(jìn)行了NMR試驗(yàn)。在Varian直接驅(qū)動600MHz和VarianInova800MHz光譜儀上在20mM磷酸鹽，pH＝7.4，100mMNaCl中進(jìn)行NMR測量，使用10％D2O作為鎖定溶劑。使用NMRPipe處理光譜(參見，F(xiàn).Delaglio，S.Grzesiek，G.W.Vuister，G.Zhu，J.Pfeifer，A.Bax，JBiomolNMR1995，6，277-293)。α-突觸核蛋白以0.12mM的濃度使用，同時在存在時以0.8mg/ml加入1-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸甘油(POPG)-脂質(zhì)體。用SOFAST脈沖序列來劑量所有1H-15N相關(guān)光譜(參見P.Schanda，E.Kupce，B.Brutscher，JBiomolNMR2005，33，199-211)。易于從之前的出版物中獲得靠近生理?xiàng)l件處的譜峰歸屬(BMRBID16300；參見J.N.Rao，Y.E.Kim，L.S.Park，T.S.Ulmer，JMolBiol2009，390，516-529)。為了配體滴定，向脂質(zhì)體/ASYN混合物中逐步加入實(shí)施例1。記錄各步驟的15N-1H相關(guān)光譜并且信號強(qiáng)度參照游離形式的ASYN，同時考慮稀釋影響。為了減少獲得的數(shù)據(jù)的噪音，ASYN的多個酰胺位置的強(qiáng)度比相對于對應(yīng)之前觀察到的SL1和SL2結(jié)合模式選擇的2個區(qū)域取平均(參見C.R.Bodner，A.S.Maltsev，C.M.Dobson，A.Bax，Biochemistry2010，49，862-871)。如圖1所示，當(dāng)ASYN包埋在脂膜中時，ASYN的異核單量子相干(HSQC)光譜信號強(qiáng)度衰減。HSQC信號的脂質(zhì)誘導(dǎo)的衰減被實(shí)施例1逆轉(zhuǎn)，因此證明了測試化合物破壞ASYH與脂膜結(jié)合的能力。圖1A顯示在POPG脂質(zhì)體存在下隨著ASYN殘基變化的信號衰減。Y軸(I/Io)是在脂膜存在(I)或不存在(Io)下ASYN的HSQC光譜信號強(qiáng)度的比率。在圖1B中，ASYN殘基3-23的平均I/Io比率以添加的實(shí)施例1的濃度的函數(shù)作圖。該曲線顯示實(shí)施例1以濃度依賴性方式逆轉(zhuǎn)了ASYN與1-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸甘油(POPG)(0.8mg/mL)脂質(zhì)體的相互作用。當(dāng)分析ASYN殘基66-76時獲得類似結(jié)果。生物實(shí)施例4：測試化合物對脂膜中環(huán)形低聚物的影響使用電子顯微鏡來直接觀察測試化合物對脂膜中ASYN低聚物形成的影響。用50％ETOH中的飽和乙酸鈾酰溶液對帶脂膜的福爾瓦網(wǎng)格復(fù)染25分鐘。網(wǎng)格然后在2％堿式硝酸鉍的液滴上漂浮10分鐘，并再次用雙蒸水小心淋洗，并使其完全干燥。使用ZeissEM10透射電子顯微鏡來對網(wǎng)格進(jìn)行成像。對于各網(wǎng)格，獲得了10000倍放大的5-10個電子顯微圖和40000倍放大的5-10個圖像。掃描最好的底片并用ImageJ1.43程序分析來估計(jì)每個高倍視野(100x100nm)中環(huán)形低聚物的數(shù)量(Rasband，W.S.，ImageJ，美國馬里蘭州貝塞斯達(dá)的國立衛(wèi)生研究院(U.S.NationalInstitutesofHealth，Bethesda，Maryland，USA)，http：//imagej.nih.gov/ij/，1997-2014)。在該研究中，發(fā)現(xiàn)實(shí)施例1顯著降低了脂膜中ASYN的環(huán)形，環(huán)狀，低聚形式的積累，同時仍然觀察到小的非環(huán)形聚集體。圖2A顯示在實(shí)施例1存在或不存在的情況下，在脂質(zhì)包被的福爾瓦網(wǎng)格上形成的ASYN低聚物的電子顯微圖像。圖2B是反應(yīng)電子顯微圖像定量的照片。實(shí)施例1將福爾瓦網(wǎng)格上檢測到的環(huán)形ASYN低聚物的數(shù)量降低至10nM的濃度(20次測量的平均值±SEM)。實(shí)施例1在相對于ASYN低于化學(xué)計(jì)量濃度下實(shí)現(xiàn)這些效果。這些發(fā)現(xiàn)與顯示實(shí)施例1使ASYN構(gòu)象穩(wěn)定化不太可能在脂膜中形成環(huán)狀低聚物的分子動力學(xué)建模相一致。這些結(jié)果表明實(shí)施例1以降低ASYN低聚物對脂膜的親和性的方式與ASYN的低聚和脂質(zhì)結(jié)合形式相互作用。實(shí)施例1能夠干擾ASYN低聚化、ASYN與脂膜的結(jié)合、以及在這些膜中形成環(huán)形環(huán)狀低聚物(“孔”)。這些結(jié)果表明實(shí)施例1改變了ASYN的聚集并且防止被認(rèn)為導(dǎo)致帕金森病中錯誤折疊、低聚化的ASYN的神經(jīng)毒性的特定低聚結(jié)構(gòu)的形成。生物實(shí)施例5：測試化合物對細(xì)胞中α-突觸核蛋白的影響研究了實(shí)施例1對過表達(dá)人ASYN的B103神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中ASYN積累的影響。使用慢病毒表達(dá)系統(tǒng)來在這些細(xì)胞中表達(dá)GFP-標(biāo)記的ASYN。在表達(dá)開始后48小時，加入載劑或?qū)嵤├?(0.1或1.0μM)持續(xù)另外24小時。然后觀察累積的GFP-ASYN的量。如圖3所示，實(shí)施例1在1.0μM下降低了這些細(xì)胞中GFP熒光的強(qiáng)度(對比載劑對照組*p＜0.05)。因此，發(fā)現(xiàn)實(shí)施例1降低了ASYN-過表達(dá)細(xì)胞中ASYN-GFP的濃度。生物實(shí)施例6：體內(nèi)功效研究帕金森病(PD)的特征在于α-突觸核蛋白(ASYN)的低聚形式的異常累積。假設(shè)ASYN的這些毒性形式部分通過在細(xì)胞膜中形成孔狀結(jié)構(gòu)導(dǎo)致PD和共核蛋白病中觀察到的神經(jīng)功能障礙和細(xì)胞死亡。本文所述的化合物設(shè)計(jì)為通過阻斷這些ASYN毒性物質(zhì)的形成和累積緩解PD-相關(guān)癥狀和致病性。A)帕金森病的轉(zhuǎn)基因小鼠模型在Thy-1啟動子下過表達(dá)人野生型ASYN的PD轉(zhuǎn)基因小鼠(也稱為種系61ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠)模型中評價實(shí)施例1，通過以每天一次給予0、1、或5mg/kg(i.p.)的實(shí)施例1(每周五天)持續(xù)3個月，然后評價PD-相關(guān)的感覺運(yùn)動性能、生物化學(xué)改變、以及ASYN和相關(guān)蛋白質(zhì)的神經(jīng)病理變化。使用圓點(diǎn)束任務(wù)來評價感覺運(yùn)動損傷，使用滑跌(slip)的數(shù)量作為主要結(jié)果測量(圖4)。為了確認(rèn)轉(zhuǎn)基因小鼠模型的活力，測試了ASYN轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因小鼠，并且載劑處理的轉(zhuǎn)基因?qū)ο蟮幕臄?shù)量在統(tǒng)計(jì)學(xué)上明顯高于載劑處理的非轉(zhuǎn)基因?qū)φ战M(****p＜0.0001)。在兩個測試劑量下用實(shí)施例1處理的轉(zhuǎn)基因小鼠在滑跌上相比載劑處理的轉(zhuǎn)基因小鼠在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著下降(對比載劑處理的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠，#p＜0.05和##p＜0.01)。對大腦皮質(zhì)和海馬區(qū)腦部勻漿的Western印跡分析顯示在轉(zhuǎn)基因ASYN蛋白水平上統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著降低。進(jìn)行了在皮質(zhì)勻漿中使用A11抗體點(diǎn)印跡方法對低聚蛋白質(zhì)(包括SAYN)的生物化學(xué)評價。驗(yàn)證了轉(zhuǎn)基因小鼠模型，因?yàn)閷ζべ|(zhì)勻漿中低聚物的A11抗體點(diǎn)印跡評價顯示相對于載劑處理的非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈?，載劑處理的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠中額葉皮質(zhì)的胞質(zhì)部分在A11免疫染色中的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著增加(圖5；*p＜0.05)。用實(shí)施例1(5mg/kg)處理相對于載劑處理的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠在來自小鼠的額葉皮質(zhì)區(qū)的胞質(zhì)部分中產(chǎn)生了低聚物的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著降低(圖5；###p＜0.001)。B)種系61ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠模型Masliah及同事之前的免疫標(biāo)記研究已經(jīng)證明在種系61ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠中的皮質(zhì)神經(jīng)氈中ASYN免疫標(biāo)記的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著增加(MasliahE.等，Science，2000，287(5456)：1265-9)。這些神經(jīng)病理發(fā)現(xiàn)在使用Masliah和同事所述的方法的現(xiàn)有研究中被再次確認(rèn)。實(shí)施例1給藥(1和5mg/kg劑量)在ASYN水平上產(chǎn)生了統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的減少，如對ASYN免疫標(biāo)記的影響所確定(圖6和7)。相對于非轉(zhuǎn)基因/載劑對照，在ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠的皮質(zhì)神經(jīng)氈(****p＜0.0001)(圖6A)和神經(jīng)細(xì)胞體(**p＜0.01)(圖6B)中用密理博抗-α-突觸核蛋白抗體的ASYN免疫標(biāo)記在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著增加。實(shí)施例1(1和5mg/kg)給藥在皮質(zhì)神經(jīng)氈中的α-突觸核蛋白免疫標(biāo)記中產(chǎn)生了統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著降低(圖6A)(對于載劑處理的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠####p＜0.0001)，以及在5mg/kg下在ASYN免疫標(biāo)記的神經(jīng)元細(xì)胞體數(shù)量的非統(tǒng)計(jì)上顯著降低(圖6B)。此外，觀察到包括酪氨酸羥化酶、NeuN、和GFAP的神經(jīng)變性相關(guān)標(biāo)志物的中和。如圖8所示，使用上述的圓點(diǎn)束表現(xiàn)試驗(yàn)研究了0.5mg/kg和1mg/kg的實(shí)施例1對種系61ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠中感覺運(yùn)動損傷的影響。與載劑處理的非轉(zhuǎn)基因?qū)φ諏ο笙啾?，在載劑處理的ASYN轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈笾杏^察到滑跌數(shù)量的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著增加(****p＜0.0001)。相對于載劑處理的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠，在ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠中，在1mg/kg下，實(shí)施例1處理產(chǎn)生了統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的改善(減少的滑跌)(##p＜0.01)。在0.5mg/kg下，實(shí)施例1產(chǎn)生了滑跌的非統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著減少?？傊@些結(jié)果證明實(shí)施例1在轉(zhuǎn)基因小鼠模型中顯著改善了感覺運(yùn)動性、生物化學(xué)、和神經(jīng)病理學(xué)結(jié)果。這些發(fā)現(xiàn)確認(rèn)給予實(shí)施例1在帕金森病/路易體癡呆(PD/DLB)的轉(zhuǎn)基因小鼠小鼠模型中產(chǎn)生的行為、生物化學(xué)、和神經(jīng)病理學(xué)測量的改善。生物實(shí)施例7：生物標(biāo)志物的開發(fā)A)糞便勃利計(jì)數(shù)在開發(fā)可轉(zhuǎn)化功能性和生物化學(xué)生物標(biāo)志物的努力中，進(jìn)行了其他評價，包括評價在新環(huán)境中產(chǎn)生的糞便勃利計(jì)數(shù)和ASYN的死后心臟水平。帕金森患者的慢性便秘患病率為50-80％，并且可能在診斷之前出現(xiàn)20年以上(Awad，R.A.WorldJ.Gastroenterol.2011，17(46)，5035-5048；Kim，J.S.等，J.Neurol.Sci.2011，310(1-2)，144-151)。相關(guān)的癥狀包括降低的通便次數(shù)和EMG異常(括約肌，直腸肛門抑制反射)，并且伴隨著關(guān)鍵的病理學(xué)發(fā)現(xiàn)，包括副交感神經(jīng)和神經(jīng)中的路易體，和降低的多巴胺能神經(jīng)元。這種帶有降低的活性水平的腸功能異常改變了飲食(食物和水)，以及帕金森藥物的效果。較早出版的研究包括種系61ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠有降低的結(jié)腸運(yùn)動、糞便排除、和體重的報(bào)告(Wang，L.等，Neurogastroenterol.Motil.2012，24(9)，e425-436)。對于本發(fā)明的研究而言，糞便勃利計(jì)數(shù)的評價與自發(fā)運(yùn)動活性測試期間聯(lián)用。在5分鐘測試期間結(jié)束時，實(shí)驗(yàn)人員對測試室中存在的糞便勃利數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)，并且結(jié)果示于圖9。相對于載劑處理的非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈螅d劑處理的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠在新環(huán)境中產(chǎn)生的糞便勃利在統(tǒng)計(jì)學(xué)上明顯減少(*p＜0.05)。實(shí)施例1對非轉(zhuǎn)基因小鼠中產(chǎn)生的勃利數(shù)量沒有影響，但是在0.5mg/kg(#p＜0.05對比載劑處理的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠)和1mg/kg(###p＜0.001對比載劑處理的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠)下在ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠中恢復(fù)了功能。B)心臟功能向腸功能障礙那樣，心臟生物化學(xué)和功能的變化可能出現(xiàn)在帕金森診斷前20年或更早。PD患者中充分表征的功能改變包括改變的心律差異和體位性低血壓(Kaufmann，H.等，HandbookClin.Neurol.2013，117，259-278；Jain，S.等，Neurobiol.Dis.2012，46(3)，572-580；Senard，J.M.等，Rev.Neurol.(Paris)2010，166(10)，779-784；Post，K.K.等，ParkinsonismRelat.Disord.2008，14(7)，524-531)。這些功能變化伴隨著心肌去甲腎上腺素能神經(jīng)丟失的病理學(xué)發(fā)現(xiàn)和在心臟自主神經(jīng)中存在ASYN聚集(Jellinger，K.A.，J.Neurol.Sci.2011，310(1-2)，107-111)。在種系61ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠中之前的心臟功能和生物化學(xué)表征已經(jīng)證明位于去甲腎上腺素能神經(jīng)內(nèi)的心臟的心室和心房壁中存在hASYN(Fleming，S.M.，J.ParkinsonsDis.2011，1(4)，321-327)。對于目前的研究，通過Western印跡分析進(jìn)行對心臟ASYN的死后Western印跡評價以確認(rèn)在ASYN轉(zhuǎn)基因心臟組織中的存在并且在ASYN的轉(zhuǎn)基因心臟水平上評價實(shí)施例1的影響(圖10)。相對于載劑處理的非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈?，在載劑處理的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠中在檢測的ASYN心臟水平上有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著增加(***p＜0.001)。相對于載劑處理的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠，用0.5或1mg/kg的實(shí)施例1處理的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠中ASYN水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的正常化(####p＜0.0001)。C)視網(wǎng)膜成像已經(jīng)假設(shè)神經(jīng)蛋白α-突觸核蛋白(ASYN)的異常聚集是帕金森病(PD)和路易體癡呆(DLB)中神經(jīng)細(xì)胞死亡和突觸功能失調(diào)的原因。已經(jīng)開發(fā)了選擇性干擾α-突觸核蛋白折疊動力學(xué)并防止轉(zhuǎn)播二聚體形成的化合物并在動物模型中進(jìn)一步評價。在一些帕金森患者中存在視覺功能改變(Botha，H.等，ParkinsonismRelat.Disord.2012，18(6)，742-747；Bodis-Wollner，I.等，Behav.Neurosci.2013，127(2)，139-150；Bodis-Wollner，I.，ParkinsonismRelat.Disord.2013，19(1)，1-14；Javaid，M.A.等，ParkinsonismRelat.Disord.2012，18(補(bǔ)充1)，S100-3)并且最近的報(bào)告已經(jīng)表明PD視網(wǎng)膜中的潛在病理學(xué)變化。光學(xué)相干斷層成像術(shù)(OCT)研究已經(jīng)證明帕金森患者中視網(wǎng)膜神經(jīng)氈層減少(Yu，J.G.等，PLoSOne2014，9(1)，e85718)。死后評價已經(jīng)顯示PD視網(wǎng)膜中ASYN沉積(Bodis-Wollner，I.等，Ann.Neurol.2014，75(6)，964-6)。之前證明了在DLB/PD的PDNG78轉(zhuǎn)基因小鼠模型中e-GFP-ASYN的報(bào)告縱向視網(wǎng)膜成像評價作為評價和跟蹤帕金森病的動物模型中神經(jīng)變性變化進(jìn)展的方法的可行性(Rockenstein等，“PD/DLB的轉(zhuǎn)基因小鼠模型中α-突觸核蛋白-eGFP的視網(wǎng)膜掃描評價(Retinalscanningevaluationsofalpha-synuclein-eGFPdepositioninatransgenicmousemodelofPD/DLB)，”神經(jīng)科學(xué)協(xié)會(SocietyforNeurosciences)，年會，2013，摘要329.06)。PDNG78視網(wǎng)膜中進(jìn)行性病理學(xué)特征顯示反映CNS病理學(xué)，從而提供了非侵入性和重復(fù)評價PD/DLB的轉(zhuǎn)基因小鼠模型中潛在治療介入的手段。在帕金森病/路易提癡呆(PD/DLB)的轉(zhuǎn)基因小鼠模型中的縱向視網(wǎng)膜成像研究中，進(jìn)行該研究以確定實(shí)施例1(3個月，0和5mg/kg下i.p.給藥)對α-突觸核蛋白(ASYN)視網(wǎng)膜病理學(xué)的存在和進(jìn)展的影響。轉(zhuǎn)基因小鼠對象過表達(dá)PDGF-β啟動子下的融合α-突觸核蛋白-GFP(綠色熒光蛋白)并且通常稱為PDNG78轉(zhuǎn)基因小鼠(Rockenstein，E.等，J.Neurosci.Res.2005，80，247-259)。PDNG78轉(zhuǎn)基因小鼠以比非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈蟾?-5倍的水平表達(dá)融合的ASYN-GFP。ASYN的CNS表達(dá)水平在包括新皮層和海馬區(qū)的PDNG78轉(zhuǎn)基因小鼠的邊緣系統(tǒng)中最高。ASYN-GFP的細(xì)胞分布反映了共核蛋白病相關(guān)的特征，包括神經(jīng)細(xì)胞體中的積累、神經(jīng)氈的彌漫染色、突觸點(diǎn)狀染色、和血管周圍沉積。進(jìn)行了總共四個成像期間，包括在開始處理之前的基線，和以大約1個月間隔的3次后續(xù)成像期間。對視網(wǎng)膜圖像中含ASYN-GFP的圖像的百分比的分析(圖11)顯示在開始處理之前，在基線處的轉(zhuǎn)基因小鼠的視網(wǎng)膜中含ASYN-GFP的圖像面積百分比(**p＜0.01對比載劑處理的非轉(zhuǎn)基因小鼠)和對于各后簇掃描(*p＜0.05和***p＜0.001對比載劑處理的非轉(zhuǎn)基因小鼠)。在處理約60天后，在用實(shí)施例1處理(5mg/kg)的轉(zhuǎn)基因小鼠中ASYN-GFP陽性面積百分比降低，并且持續(xù)至90天成像時間點(diǎn)(###p＜0.001對比載劑處理的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠)。對ASYN-GFP陽性顆粒計(jì)數(shù)的分析(圖12)顯示在轉(zhuǎn)基因小鼠中增加和持續(xù)的血管周圍和神經(jīng)末端綠色熒光蛋白(GFP)標(biāo)記，但在非轉(zhuǎn)基因小鼠中沒有顯示。在開始處理前的基線處(*p＜0.05對比載劑處理的非轉(zhuǎn)基因小鼠)和在處理約60天時開始的掃描(**p＜0.01對比載劑處理的非轉(zhuǎn)基因小鼠)，轉(zhuǎn)基因小鼠的視網(wǎng)膜中的總ASYN-GFP顆粒計(jì)數(shù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著增加。在處理約60天后，在用實(shí)施例1處理(5mg/kg)的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠中ASYN-GFP陽性顆粒數(shù)量降低，并且持續(xù)至90天成像時間點(diǎn)(##p＜0.07對比載劑處理的ASYN轉(zhuǎn)基因小鼠)。來自該研究的發(fā)現(xiàn)證明給予實(shí)施例1(每天5mg/kg；持續(xù)3個月)在作為PD/DLB模型的過表達(dá)ASYN的轉(zhuǎn)基因小鼠的ASYN視網(wǎng)膜病理學(xué)中產(chǎn)生了有益的變化。這些數(shù)據(jù)也通過潛在可轉(zhuǎn)化的成像方法提供了對實(shí)施例1的有益影響的其他證據(jù)測量。當(dāng)前第1頁1 2 3