本發(fā)明提供了一種瑞加德松的純化方法。

背景技術(shù)：

瑞加德松，英文通用名Regadenoson，化學(xué)名1-(6-氨基-9-β-D-呋喃核糖基-9H-嘌呤-2-基)-N-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺，分子式C₁₅H₁₈N₈O₅，分子量390.35，CAS登記號(hào)875148-45-1，是由美國(guó)CV Therapeutics和Astellas Pharma公司共同研發(fā)的腺苷A_2A受體激動(dòng)劑，通過(guò)激活腺苷A_2A受體而使冠狀動(dòng)脈血管擴(kuò)張，增加冠狀動(dòng)脈血流量以輔助診斷冠狀動(dòng)脈疾病，于2008年4月在美國(guó)上市，用于放射性核素心肌灌注顯像，其結(jié)構(gòu)如下所示：

專(zhuān)利CN102260311A報(bào)道了瑞加德松的合成方法為：以2-氯腺苷2為起始原料，經(jīng)水合肼取代制得2-肼基腺苷3，然后與2-甲?；?-氧代丙酸乙酯縮合閉環(huán)得化合物4，化合物4經(jīng)甲胺水溶液胺解得瑞加德松1，具體合成路線如下所示：

該專(zhuān)利中還公開(kāi)了一種瑞加德松的純化方法，具體為：將瑞加德松粗品溶解于二甲亞砜中，向該溶液中加入純水，過(guò)濾由此形成的漿狀物，然后先后用水與乙醇洗滌濾餅，最后干燥得瑞加德松產(chǎn)品。

專(zhuān)利CN101668768A中公開(kāi)了一種瑞加德松的制備方法和純化方法，其粗品的制備方法的合成路線見(jiàn)上述反應(yīng)方程式，該專(zhuān)利中還公開(kāi)了一種瑞加德松的純化方法，具體為：先將瑞加德松粗品溶解于二甲亞砜中，得一溶液，維持溫度為78～88℃，向純水中加入該溶液，由此形成漿料，過(guò)濾漿狀物，然后先后用水與乙醇洗滌濾餅，最后干燥得瑞加德松產(chǎn)品。

然而，本申請(qǐng)發(fā)明人重復(fù)了上述CN102260311A和CN101668768A合成方法以及純化方法，發(fā)現(xiàn)制得的瑞加德松粗品中都含有一個(gè)雜質(zhì)，其含量>0.1％，使最后制得的瑞加德松產(chǎn)品不符合ICH Q3a的雜質(zhì)限量標(biāo)準(zhǔn)(注：該標(biāo)準(zhǔn)要求藥物的單個(gè)雜質(zhì)含量低于0.1％)，不能滿(mǎn)足藥物質(zhì)量要求。因此，本領(lǐng)域亟需一種瑞加德松的純化方法，以解決上述技術(shù)難題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是為了克服現(xiàn)有的主要雜質(zhì)為雜質(zhì)A的瑞加德松粗品的純化方法得到的瑞加德松產(chǎn)品雜質(zhì)A含量高，質(zhì)量差，無(wú)法獲得雜質(zhì)A含量<0.1％，符合藥物質(zhì)量要求的瑞加德松產(chǎn)品等缺陷，而提供了 一種瑞加德松的純化方法。本發(fā)明的純化方法能夠高效除去瑞加德松粗品中的雜質(zhì)A，得到的瑞加德松產(chǎn)品中雜質(zhì)A含量在0.10％以下，最低含量在0.04％以下，進(jìn)一步提高瑞加德松產(chǎn)品的HPLC純度，使最后得到的瑞加德松產(chǎn)品的HPLC純度在99.80％以上；產(chǎn)品質(zhì)量好，完全符合ICH Q3a的雜質(zhì)限量標(biāo)準(zhǔn)。

發(fā)明人對(duì)上述CN102260311A和CN101668768A專(zhuān)利公開(kāi)的方法中制得的瑞加德松產(chǎn)品中的雜質(zhì)進(jìn)行分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定，確認(rèn)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)式如下所示，命名為雜質(zhì)A：

經(jīng)過(guò)發(fā)明人深入研究和分析，該雜質(zhì)A產(chǎn)生的原因主要在于：在上述兩種制備瑞加德松的方法中，化合物4在甲胺水溶液中胺解的同時(shí)發(fā)生了水解的副反應(yīng)，從而產(chǎn)生了性質(zhì)與瑞加德松產(chǎn)品性質(zhì)極為相近的雜質(zhì)A。

發(fā)明人按照上述兩種合成路線制備得到瑞加德松粗品HPLC純度99.58％，雜質(zhì)A含量0.35％；重復(fù)上述兩種純化方法，得到的瑞加德松產(chǎn)品的HPLC純度為99.60％，雜質(zhì)A含量0.33％；可見(jiàn)，以上兩種純化方法難以將雜質(zhì)A除去。并且，上述兩種合成方法制得的瑞加德松產(chǎn)品中的主要雜質(zhì)為雜質(zhì)A，而該雜質(zhì)A的存在對(duì)瑞加德松產(chǎn)品的質(zhì)量影響很大，故有效的控制和除去該雜質(zhì)是得到符合藥品質(zhì)量要求的瑞加德松產(chǎn)品的關(guān)鍵。此外，該雜質(zhì)的存在還可能引起嚴(yán)重副反應(yīng)，因而，本領(lǐng)域迫切需要一種有效除去瑞加德松產(chǎn)品中的雜質(zhì)A的方法，以解決上述技術(shù)難題。

本發(fā)明主要是通過(guò)以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)難題的。

本發(fā)明提供了一種瑞加德松的純化方法，其包括下列步驟：在堿水溶液 的作用下，將含雜質(zhì)A的瑞加德松粗品與極性有機(jī)溶劑混合，析晶，即可；其中，所述的瑞加德松粗品中雜質(zhì)A的含量為0.1％～1.0％。

所述的純化方法中，所述的瑞加德松粗品的HPLC純度可不作具體限定，只要所述的瑞加德松粗品中的主要雜質(zhì)為雜質(zhì)A，即可，較佳地所述的瑞加德松粗品的HPLC純度為98.0％～99.8％，更佳地為99.0％～99.8％，最佳地為99.5％～99.7％。所述的雜質(zhì)A的含量較佳地為0.1％～0.5％。

所述的純化方法，較佳地，其為下列任一方式：

方式一：將所述的瑞加德松粗品與極性有機(jī)溶劑混合后，在50℃～80℃(優(yōu)選65℃～80℃)的溫度下，加入堿水溶液，析晶，即可；

方式二：在50～80℃(優(yōu)選65℃～80℃)的溫度下，將所述的瑞加德松粗品與溶劑混合，析晶，即可；所述的溶劑為極性有機(jī)溶劑與堿水溶液的混合溶液。

本發(fā)明中，所述的極性有機(jī)溶劑較佳地包括質(zhì)子性極性有機(jī)溶劑和/或非質(zhì)子性極性有機(jī)溶劑。所述的質(zhì)子性極性有機(jī)溶劑可為本領(lǐng)域常規(guī)的質(zhì)子性極性有機(jī)溶劑，較佳地為C₁～C₄的醇類(lèi)溶劑。所述的C₁～C₄的醇類(lèi)溶劑較佳地為甲醇、乙醇、異丙醇和正丁醇中的一種或多種，更佳地為甲醇、乙醇和異丙醇中的一種或多種。當(dāng)所述的C₁～C₄的醇類(lèi)溶劑為正丁醇時(shí)，一般需要與本發(fā)明其他質(zhì)子性極性有機(jī)溶劑和/或所述的非質(zhì)子性極性有機(jī)溶劑混合使用。所述的其他質(zhì)子性極性有機(jī)溶劑較佳地為甲醇、乙醇和異丙醇中的一種或多種。所述的非質(zhì)子性極性有機(jī)溶劑可為本領(lǐng)域常規(guī)的非質(zhì)子性極性有機(jī)溶劑，較佳地為酮類(lèi)溶劑、亞砜類(lèi)溶劑和酰胺類(lèi)溶劑中的一種或多種。所述的酮類(lèi)溶劑較佳地為丙酮。所述的亞砜類(lèi)溶劑較佳地為二甲亞砜。所述的酰胺類(lèi)溶劑較佳地為N,N-二甲基甲酰胺和/或N,N-二甲基乙酰胺。

本發(fā)明中，所述的堿水溶液中的堿較佳地為無(wú)機(jī)堿和/或有機(jī)堿。所述的無(wú)機(jī)堿可為本領(lǐng)域常規(guī)的無(wú)機(jī)堿，較佳地為堿金屬氫氧化物、堿土金屬氫氧化物和堿金屬的碳酸鹽中的一種或多種，更佳地為堿金屬氫氧化物和/或堿金屬的碳酸鹽。所述的堿金屬氫氧化物較佳地為氫氧化鈉和/或氫氧化鉀。所述 的堿土金屬氫氧化物較佳地為氫氧化鈣。所述的堿金屬的碳酸鹽較佳地為碳酸鈉和/或碳酸鉀。所述的有機(jī)堿可為本領(lǐng)域常規(guī)的有機(jī)堿，較佳地為C₁～C₆的烷基胺。所述的C₁～C₆的烷基胺較佳地為甲胺、二甲胺、二乙胺和三乙胺中的一種或多種。所述的堿水溶液的摩爾濃度較佳地為0.01mol/L～1mol/L。

方式一中，所述的極性有機(jī)溶劑與所述的瑞加德松粗品的體積質(zhì)量比較佳地為3～20mL/g，更佳地為6～10mL/g。所述的摩爾濃度為0.01mol/L～1mol/L的堿水溶液與所述的瑞加德松的體積質(zhì)量比較佳地為3～20mL/g，更佳地為3～15mL/g。所述的加入的方式較佳地為滴加。所述的滴加的速度較佳地控制反應(yīng)體系溫度在50～80℃(優(yōu)選65℃～80℃)之間，一般為1mL/min～10mL/min。

方式二中，所述的溶劑為極性有機(jī)溶劑與堿水溶液的混合溶液，其中，所述的極性有機(jī)溶劑與堿水溶液的體積比較佳地為1:1～10:1，更佳地為1:1～3:1。所述的溶劑與所述的瑞加德松粗品的體積質(zhì)量比較佳地為40mL/g～80mL/g。

方式一或方式二中，所述的析晶的方法較佳地為攪拌析晶。所述的析晶的時(shí)間較佳地為1～3h。所述的析晶的溫度較佳地為室溫(10～30℃)。

方式一或方式二中，所述的析晶結(jié)束后，較佳地還可進(jìn)一步包括下列步驟：將析晶結(jié)束后的體系，過(guò)濾，依次用水和C₁～C₄的醇類(lèi)溶劑洗滌濾餅，干燥，即得瑞加德松產(chǎn)品。其中，所述的C₁～C₄的醇類(lèi)溶劑較佳地為甲醇和/或乙醇。所述的水或所述的C₁～C₄的醇類(lèi)溶劑，與瑞加德松粗品的體積質(zhì)量比較佳地為5mL/g～10mL/g。所述的干燥的方法可為本領(lǐng)域常規(guī)的方法，較佳地為真空干燥。所述的真空干燥的溫度較佳地為45～55℃。

本發(fā)明中，所述的瑞加德松粗品可按照本領(lǐng)域常規(guī)的瑞加德松粗品的制備方法制得，較佳地，按照專(zhuān)利CN102260311或者專(zhuān)利CN101668768實(shí)施例2～4記載的方法制備得到，其HPLC純度一般在98％～99.8％之間；雜質(zhì)A的含量一般在0.1％～1.0％之間。

在不違背本領(lǐng)域常識(shí)的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí)例。

本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。

本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：

本發(fā)明的純化方法能夠高效除去瑞加德松粗品中的雜質(zhì)A，得到的瑞加德松產(chǎn)品中雜質(zhì)A含量在0.10％以下，最低含量在0.04％以下，進(jìn)一步提高瑞加德松產(chǎn)品的HPLC純度，使最后得到的瑞加德松產(chǎn)品的HPLC純度在99.80％以上；產(chǎn)品質(zhì)量好，完全符合ICH Q3a的雜質(zhì)限量標(biāo)準(zhǔn)。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1中瑞加德松粗品的HPLC圖譜。

圖2為實(shí)施例1純化后的瑞加德松產(chǎn)品HPLC圖譜。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例的方式進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說(shuō)明書(shū)選擇。

下述實(shí)施例中的瑞加德松粗品，按照專(zhuān)利CN102260311或者專(zhuān)利CN101668768實(shí)施例2～4記載的方法制備得到，其HPLC純度98％～99.8％；雜質(zhì)A的含量為0.1％～1.0％。

下述實(shí)施例中瑞加德松粗品和瑞加德松產(chǎn)品的HPLC測(cè)試的具體條件如下：

采用Thermo UltiMate 3000高效液相色譜儀；色譜柱Waters X-BridgeC18柱(4.6mm×150mm，3.5μm)；流動(dòng)相20mmol/L磷酸二氫鉀溶液(pH 6.8)(A)，乙腈(B)；梯度洗脫(0→5min，A 95％；5→20min，A 95％→85％；20→30min，A 85％→40％；30→38min，A 40％；38→38.1min，A 40％→95％；38.1→45min，A 95％)；檢測(cè)波長(zhǎng)245nm；流速1.0ml/min；柱溫25℃

實(shí)施例1

取瑞加德松粗品(HPLC純度99.58％，雜質(zhì)A含量0.35％)1g，加6mL DMSO溶解，加熱至約80℃，滴加濃度為0.1mol/L的氫氧化鈉水溶液9mL，滴加過(guò)程逐漸析出白色固體，滴加完畢自然冷卻至室溫，再攪拌2h，過(guò)濾，依次用純水10mL和乙醇10mL洗滌濾餅，50℃真空干燥得瑞加德松產(chǎn)品0.97g。HPLC結(jié)果顯示，瑞加德松含量為99.89％，雜質(zhì)A含量為0.05％。

實(shí)施例2

取瑞加德松粗品(HPLC純度98.0％，雜質(zhì)A含量1.0％)1g，加20mLDMSO溶解，加熱至約70℃，滴加濃度為0.5mol/L的碳酸鉀水溶液3mL，滴加過(guò)程逐漸析出固體，滴加完畢自然冷卻至室溫，再攪拌3h，過(guò)濾，依次用純水10mL和乙醇10mL洗滌濾餅，55℃真空干燥得瑞加德松產(chǎn)品0.85g。HPLC結(jié)果顯示，瑞加德松含量為99.87％，雜質(zhì)A含量為0.03％。

實(shí)施例3

取瑞加德松粗品(HPLC純度99.50％，雜質(zhì)A含量0.45％)1g，加10mLDMF溶解，加熱至約70℃，滴加濃度為0.1mol/L的碳酸鈉水溶液6mL，滴加過(guò)程逐漸析出固體，滴加完畢自然冷卻至室溫，再攪拌2h，過(guò)濾，依次用純水10mL和乙醇10mL洗滌濾餅，50℃真空干燥得瑞加德松產(chǎn)品0.95g。HPLC結(jié)果顯示，瑞加德松含量為99.89％，雜質(zhì)A含量為0.04％。

實(shí)施例4

取瑞加德松粗品(HPLC純度99.58％，雜質(zhì)A含量0.35％)2g，加0.01mol/L的氫氧化鉀水溶液/甲醇混合溶劑80mL(體積比為10/1)，加熱至約75℃固體完全溶解后自然冷卻至室溫，再攪拌1h，過(guò)濾，依次用純水10mL和乙醇10mL洗滌濾餅，50℃真空干燥得瑞加德松產(chǎn)品1.86g。HPLC結(jié)果顯示，瑞加德松含量為99.88％，雜質(zhì)A含量為0.05％。

實(shí)施例5

取瑞加德松粗品(HPLC純度98.0％，雜質(zhì)A含量1.0％)2g，加1mol/L的二甲胺水溶液/正丁醇混合溶劑80mL(體積比為1/1)，加熱至約50℃固體完全溶解后自然冷卻至室溫，再攪拌2h，過(guò)濾，用純水10mL和乙醇10mL洗滌濾餅，45℃真空干燥得瑞加德松產(chǎn)品1.81g。HPLC結(jié)果顯示，瑞加德 松含量為99.82％，雜質(zhì)A含量為0.09％。

實(shí)施例6

取瑞加德松粗品(HPLC純度99.80％，雜質(zhì)A含量0.16％)0.8g，加1mol/L的三乙胺水溶液/丙酮混合溶劑64mL(體積比為1/10)，加熱至約68℃固體完全溶解后自然冷卻至室溫，再攪拌1h，過(guò)濾，用純水8mL和乙醇8mL洗滌濾餅，50℃真空干燥得瑞加德松產(chǎn)品0.65g。HPLC結(jié)果顯示，瑞加德松含量為99.91％，雜質(zhì)A含量為0.06％。

實(shí)施例7

取瑞加德松粗品(HPLC純度98.0％，雜質(zhì)A含量1.0％)1g，加3mL N,N-二甲基乙酰胺，加熱至約68℃，滴加濃度為0.01mol/L的氫氧化鈣水溶液15mL，滴加過(guò)程逐漸析出固體，滴加完畢自然冷卻至室溫，再攪拌3h，過(guò)濾，依次用純水10mL和乙醇10mL洗滌濾餅，50℃真空干燥得瑞加德松產(chǎn)品0.85g。HPLC結(jié)果顯示，瑞加德松含量為99.87％，雜質(zhì)A含量為0.04％。

圖1和表1所表示的為按照專(zhuān)利CN102260311A實(shí)施例2記載的方法制備得到的瑞加德松粗品的HPLC圖譜及其保留時(shí)間、峰高、峰面積、相對(duì)面積等信息。其中1、2和3對(duì)應(yīng)瑞加德松產(chǎn)品中各組分的保留時(shí)間、峰高、峰面積、相對(duì)面積等信息。1表示雜質(zhì)A，2表示瑞加德松，3表示其他雜質(zhì)。

圖2和表2所表示的為實(shí)施例1制得的瑞加德松產(chǎn)品的HPLC譜圖的保留時(shí)間、峰高、峰面積、相對(duì)面積等信息。其中，1、2和3對(duì)應(yīng)瑞加德松產(chǎn)品中各組分的保留時(shí)間、峰高、峰面積、相對(duì)面積等信息。1表示雜質(zhì)A，2表示瑞加德松，3表示其他雜質(zhì)。

表1

表2

對(duì)比實(shí)施例1

取瑞加德松粗品(HPLC純度99.58％，雜質(zhì)A含量0.35％)1g，加6mLDMSO溶解，加熱至約80℃，滴加純水9mL，滴加過(guò)程逐漸析出白色固體，滴加完畢自然冷卻至室溫，再攪拌2h，過(guò)濾，依次用純水10mL和乙醇10mL洗滌濾餅，50℃真空干燥得瑞加德松產(chǎn)品0.97g。HPLC結(jié)果顯示，瑞加德松含量為99.62％，雜質(zhì)A含量為0.33％。