一種櫟松口蘑子實(shí)體分離純化的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及食用菌培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種櫟松口蘑子實(shí)體分離純化的方法，在培養(yǎng)皿外用Parafilm封口膜封口，以實(shí)現(xiàn)在培養(yǎng)皿中櫟松口蘑菌種長(zhǎng)期培養(yǎng)，減少菌種培養(yǎng)過(guò)程中的污染，方便觀察和測(cè)量櫟松口蘑菌絲的生長(zhǎng)。本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)單，容易獲得純菌種，且操作成本低，又不易帶入雜菌。
【專利說(shuō)明】
一種櫟松口蘑子實(shí)體分離純化的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及食用菌培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種櫟松口蘑子實(shí)體分離純化的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 櫟松口蘑又稱傻松茸、櫟松茸、傻松口蘑、青紅松茸或青閃菌等，是珍稀食用真菌， 典型的營(yíng)養(yǎng)共生型外生菌根菌。由于難以合成代替活樹(shù)根系的營(yíng)養(yǎng)和生境，馴化栽培十分 艱難，菌種的分離和培養(yǎng)也是難題之一。松口蘑的菌絲體在人工條件下生長(zhǎng)很緩慢，而且培 養(yǎng)基容易干燥且菌種易污染，因此尋找合適的培養(yǎng)方法尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是在于提供一種櫟松口蘑子實(shí)體分離 純化的方法，在培養(yǎng)皿外用Parafi lm封口膜封口，實(shí)現(xiàn)在培養(yǎng)皿中櫟松口蘑菌種長(zhǎng)期培養(yǎng)， 減少菌種培養(yǎng)過(guò)程中的污染，方便觀察和測(cè)量櫟松口蘑菌絲的生長(zhǎng)。
[0004] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。
[0005] -種櫟松口蘑子實(shí)體分尚純化的方法，其過(guò)程為：
[0006] (1)選取新鮮松口蘑子實(shí)體，在無(wú)菌室內(nèi)無(wú)菌條件下將松口蘑子實(shí)體用70 %酒精 擦洗；
[0007] (2)將表面消毒過(guò)的子實(shí)體放在無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，用解剖刀把子實(shí)體縱向切開(kāi)，從菌 肉、菌褶和菌柄處分別挑取黃豆粒大小的組織塊，接種到母種培養(yǎng)基上，每個(gè)部位10個(gè)重 復(fù)，共30個(gè)培養(yǎng)皿，隨后將培養(yǎng)皿用Parafi lm封口膜密封，最后將培養(yǎng)皿放置于20-25 °C的 恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)避光培養(yǎng)20-60d，定期觀察并做好記錄；
[0008] (3)待菌落直徑長(zhǎng)到80-100mm，轉(zhuǎn)皿進(jìn)一步純化。
[0009] 進(jìn)一步地，所述母種培養(yǎng)基是將1000mL PDA培養(yǎng)基在121°C滅菌20min后加入 VBi〇 · 5mg 和煙酸 0 · 5mg。
[0010] 進(jìn)一步地，所述PDA培養(yǎng)基包含葡萄糖20.0g、馬鈴薯200.0g、瓊脂15.0g、自來(lái)水 1000 .OmL，pH值自然。
[0011] 進(jìn)一步地，所述VBi使用前采用細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾除菌。
[0012] 進(jìn)一步地，所述煙酸使用前采用細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾除菌。
[0013] 本發(fā)明中采用的Parafi lm封口膜是一種無(wú)色無(wú)味、半透明的熱塑性塑料，具有良 好的柔軟性、可塑性、自動(dòng)密封性，容易切割，可以快速有效地密封實(shí)驗(yàn)器皿，具有防水防濕 的性能，能夠有效阻止樣品發(fā)揮和污染，適用于許多重要實(shí)驗(yàn)和技術(shù)方面的理想工具。
[0014] 本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)單，容易獲得純菌種，且操作成本低，又不易帶入雜菌。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 以下結(jié)合附圖與【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
[0016] 圖1為實(shí)施例中櫟松口蘑母種在固體平板上的分離情況，其中A是菌肉分離物，B是 菌褶分離物。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。
[0018] 實(shí)施例
[0019] (1)母種培養(yǎng)基的制作：將200g馬鈴薯去皮洗凈，切成小塊，加水煮沸30min后，紗 布過(guò)濾，取其濾液，補(bǔ)足水分至l〇〇〇mL，趁熱加入20g葡萄糖和15g瓊脂使之溶化，pH自然， 121°C滅菌20min后加入VB!和煙酸(VB!和煙酸采用細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾除菌）。
[0020] (2)櫟松口蘑子實(shí)體組織分離純化:在超凈工作臺(tái)內(nèi)無(wú)菌條件下將松口蘑子實(shí)體 用70%酒精擦洗，將表面消毒過(guò)的子實(shí)體放在無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，用解剖刀把子實(shí)體縱向切開(kāi)， 從菌肉、菌褶和菌柄處分別挑取黃豆粒大小的組織塊，接種到上述分離培養(yǎng)基上，10個(gè)重 復(fù)，隨后將培養(yǎng)皿用Parafi lm封口膜密封，最后將培養(yǎng)皿放置于20-25 °C的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)避 光培養(yǎng)20-60d，定期觀察并做好記錄;待菌落直徑長(zhǎng)到80-100mm，轉(zhuǎn)皿進(jìn)一步純化。
[0021] 對(duì)林芝市櫟松口蘑子實(shí)體的菌肉、菌褶和菌柄進(jìn)行組織分離，其萌發(fā)狀況參照表 1。參照?qǐng)D1，菌褶組織塊在培養(yǎng)25d后，開(kāi)始萌發(fā)，長(zhǎng)出白色菌絲，平均萌發(fā)率為50.0%，而菌 肉組織塊在培養(yǎng)30d后開(kāi)始萌發(fā)，長(zhǎng)出白色菌絲，平均萌發(fā)率為10.0%，菌柄組織沒(méi)有萌發(fā)。 [0022]表1櫟松口蘑組織的萌發(fā)狀況
[0023]
[0024]
[0025] 以上所述，僅是本發(fā)明的較佳案例，并不對(duì)本發(fā)明做出任何限制，凡是針對(duì)本發(fā)明 技術(shù)內(nèi)容對(duì)以上實(shí)施案例所做的任何簡(jiǎn)單修改、變更、模仿均屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù) 范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種櫟松口蘑子實(shí)體分離純化的方法，其特征在于，其過(guò)程為： (1) 選取新鮮櫟松口蘑子實(shí)體，在無(wú)菌室內(nèi)無(wú)菌條件下將櫟松口蘑子實(shí)體用70 %酒精 擦洗； (2) 將表面消毒過(guò)的子實(shí)體放在無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，用解剖刀把子實(shí)體縱向切開(kāi)，從菌肉、 菌褶和菌柄處分別挑取黃豆粒大小的組織塊，接種到母種培養(yǎng)基上，菌肉、菌褶、菌柄各做 10個(gè)培養(yǎng)皿，共30個(gè)培養(yǎng)皿；隨后將培養(yǎng)皿用Parafilm封口膜密封;最后將培養(yǎng)皿放置于 20-25 °C的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)避光培養(yǎng)20-60d，定期觀察并做好記錄； (3) 待菌落直徑長(zhǎng)到80-100mm，轉(zhuǎn)皿進(jìn)一步純化。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的櫟松口蘑子實(shí)體分離純化的方法，其特征在于，所述母種培養(yǎng) 基是將l〇〇〇mL PDA培養(yǎng)基在121°C滅菌20min后加入VBiO. 5mg和煙酸0.5mg。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的櫟松口蘑子實(shí)體分離純化的方法，其特征在于，所述PDA培養(yǎng) 基包含葡萄糖20.0g、馬鈴薯200.0g、瓊脂15.0g、自來(lái)水1000.0 mL，pH值自然。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的櫟松口蘑子實(shí)體分離純化的方法，其特征在于，所述VBi使用前 采用細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾除菌。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的櫟松口蘑子實(shí)體分離純化的方法，其特征在于，所述煙酸使用 前采用細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾除菌。
【文檔編號(hào)】A01G1/04GK106069193SQ201610475226
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月24日
【發(fā)明人】何建清
【申請(qǐng)人】何建清