專利名稱：有協(xié)同治療作用的眼用藥物緩釋載體的制作方法
有協(xié)同治療作用的目,藥物緩M體獄領(lǐng)域本發(fā)明涉及一種長效目艮內(nèi)SA藥物緩職體，特別涉及至ij一種有協(xié)同治療作用的眼 用藥物緩職體。 背景絲目前常用的眼用HA載懶n膠原、殼聚糖(幾丁質(zhì))、PGA(聚f遂乙膨、PLA(聚乳 膨、EVA凍乙烯醋酸乙酸酯)及其共聚物PLGA (P逮乙酸與乳酸的共聚物)、PGLC (乙 交酯一丙交酯一己內(nèi)IBH元^^見共聚物)等，本身僅為一種載體而已，沒有治療作用。近 年來，卿生物^^材料為載體制備糊師緩釋藥物制劑，使目前眼科一^ 隹治賺的防治成為可能，所以受至恪國學(xué)者的高m視。如制頓一種新型載體，這種載杯僅起到緩漫釋放藥物的作用，同時(shí)，載體本身具有對(duì)受損組織的微作用、防治腫瘤、抗 氧化、抑制新ttt^臨床需要的活性，對(duì)所載藥物具有一定的協(xié)同治療作用，顯然可 超鵬的治療效果。另外，己有白犮(Bletilla striata)為蘭科植物白芨的^^燥i^，商品化白 系從白芨中提取的一種粘多糖類物質(zhì)，^fS^質(zhì)多、舒量分布廣，僅P艮于口服或歡卜用。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的^MI—種有協(xié)同治療作用柳艮用藥物緩職體，以^l艮現(xiàn)有技術(shù)的 戰(zhàn)不足。研^a現(xiàn)，白繊具有抑制亂新她管的作用，包括角膜、樂燃膜和視網(wǎng)麟她管在內(nèi)的目繊^rftL管，作用機(jī)制為白 ±要成^ ￡甘露聚糖育,影響血管生長因子與其受體的結(jié)合，抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長，Sffl新^L管的作用。因it諾以白^m作為載體，貝U辦載體作用的同時(shí)賦予了載體治療M的功能。白賺為載體石攤iJ目睏才IA劑， 禾,白 體內(nèi)生物,，緩廈釋放出活性藥物，可使藥tr離長時(shí)間f親M為穩(wěn)定 的治療水平，^1>了藥物的用量、用藥 M^和毒副作用，對(duì)于藥物吸收困難的部位，也 會(huì)站到很好的用藥 媒。itW卜，白芨提取物本身也具有抑制新她管、鄉(xiāng)中瘤割乍用， ^{頓可使1^劑 、協(xié)同的治療作用，可取得更好的抑防治$媒。財(cái)卜，白 芨提取物,IIA劑，還可開拓中藥駄劑的研究前景，為研究眼禾鵬的防治麟新 思路、 徑，在更深層7^Lt拓衝專統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)在現(xiàn)代眼自治療學(xué)中的地位和作用。 本發(fā)明的的藥物緩M體是白皿，且該白^ltt要成分為由甘l^^葡^^糖以i:4聚合而成的鰂甘露聚糖，平均針量在65000 150000，雌平均舒量誦00， 白，以，甘露聚^i十， 〉85%。Jd述的白，中可加入起固化作用的交職lJ，將載體之間或藥物與載體之間進(jìn)行交 職禺合，更增加載體的載藥量，^!>突釋，增強(qiáng)藥物緩釋 媒，白^K和交職啲質(zhì)量 比為100: 0.01 20。戰(zhàn)的交職偽甲醛、戊二醛、乙二醇鵬7jC甘油醚、丙二醇鵬水甘油醚或丁二 醇 水甘油醚。戰(zhàn)白賺中還可加入白蛋白、明臓阿拉伯膠，其中加入量以白S^和其^I^體 干重計(jì)，可從0.5 40%。這是為增加白^^載體的娜性和韌性。本發(fā)明將普通白賺商品進(jìn)行，純化，得到滿剁艮科鄉(xiāng)要求的麟伯賺 白賺的純化制備工藝(1)將普通商品化白^^溶于最小術(shù)P冰中，Sevag法脫 蛋白至考馬斯離G-250法檢測幾無蛋白質(zhì)被測出，然后用)^1/K3it斤三天，真空冷凍 千燥，得一級(jí)純化白tt; (2)將戰(zhàn)的一級(jí)純化白賺400mg溶于20ml蒸餾水中， 離心W:清液，在陰離子交換辯隹素DE-52ftJ:層析，先以2 5個(gè)柱術(shù)只的蒸餾水洗 脫，再用0 4mol/LNaCl溶體線梯度^i兌，？繊為24ml/h，以4ml麟一管，蒽酮畫硫酸法檢測M定多糖的、w^a并ii^^^產(chǎn)物，冷凍千燥，得二級(jí)純化白TO; (3)再將戰(zhàn)的二級(jí)純化白賺50mg溶于2ml蒸餾水中，離心:|0:清液，上SephadexG-100 柱以0.02mol/LNaCl洗脫，流速16ml/h，以2ml收集一管，H^^酸法樹則并確定多糖 的、 ^健，1| ^物，冷凍千燥即得麟啲白賺。本發(fā)明的載#^跑到緩侵釋放藥物的作用，同時(shí)，載體本身具有對(duì)受損組織的保 護(hù)作用、防治腫瘤、抗氧化、抑制新她體臨床需要的活性，對(duì)所載藥物具有一定的 協(xié)同治療作用，1W起到更好的治療效果。如麟眼用劑型能長時(shí)間控制藥物的穩(wěn)定釋 放，^1^身鋼部常夫Iii接合藥的用量和用藥7爐，明顯提高藥物的生物利用度和降 低毒副作用。il^卜，在眼內(nèi)的有效治療劑量僅為全身用藥的1%，而維持時(shí)間在34個(gè) 月，這樣可以大幅度斷氐醫(yī)藥費(fèi)用開支，有利于患者支付費(fèi)用和支持醫(yī)療保險(xiǎn)改革。 具鵂施力式本發(fā)明的藥物緩M;體是白皿，且該白^ltt要成分為由甘露糖和^W糖以l: 4 聚合而成的翻己甘露聚糖，i^^平均^ 量99658 3t^頓，白 以 ￡甘露聚^+， ^^85%。，的白，中加有起固化作用的交 1」，這是為使載,眼內(nèi)保辦對(duì)5^^基本 不變，同時(shí)確保藥物和載體白賺會(huì),緩釋，且白^l^和交職啲質(zhì)量比為100: 0.01 20。即交raU入量為白，和交ra啲質(zhì)量比100: 0.01 20。本發(fā)明的白，可以iM:將交聯(lián)后的白S^冷凍千燥后壓制自，^t接將交聯(lián)后 的白鵬口熱真空千燥后直接鵬，也可在白^l^溶液中力口入藥物，再M(fèi)J^方法制■，即可制j^tt片狀、粒狀、±央狀、條狀a它適合目艮內(nèi)用的大小尺寸和皿。 本發(fā)明的白^^載體可以柳艮科廣創(chuàng)頓的藥物合用而制備成新翻艮科制劑，即其具有廣泛的iSiS性。其中這些藥物包括免疫抑制劑雷帕霉素、環(huán)孢素、FK506等；皮質(zhì)類固麟藥物ilkS米松、醋酸曲安奈德、醋酸可的松等抗炎| ^藥物如環(huán) 丙沙星、莫西沙星、諾氟沙星、克霉唑、妥布霉素等；抗增殖藥物5-繊嘧啶、柔紅 霉素、紫杉醇、稱K仙堿、阿霉素、卡莫司汀等；阮新她管類藥稱重纟IAiflL管內(nèi)皮 抑素、Avastin;抗真菌類藥物兩性霉素B、另II他霉素(natamycin)、匹馬霉素(pimaricin)、 繊唑、酮康唑、咪康唑、纖唑、依曲康唑；抗白內(nèi)Pt^后后翻ltl5稱肝素、低另外，本發(fā)明和以上藥物結(jié)合可使藥物具有長效特性，釋藥周期為一周到辨；具 有用藥S^、，且能長時(shí)間在眼內(nèi)緩侵釋放藥物的特點(diǎn)；對(duì)于藥物吸收困難的離，H腿 到很好的用藥 媒?？捎糜谘劭祁A(yù)防和治療高危角膜移植后的排斥反應(yīng)，也可用于角膜 新^J&M殖、慢性葡萄膜炎和眼內(nèi)新^lfc管'fe^。具有一次IIA長期有效，皿物 濃度穩(wěn)定、生物利用度高、無毒副作用和不良反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn)。以下列多個(gè)實(shí)施例，詳細(xì)說明本發(fā)明。 娜列l(wèi)白 的提取以如下工藝提取和純4W發(fā)明所需的白皿。 本發(fā)明所需的m鵬白 的制備包括下列二大步驟一、 粗多糖提取把白芨±^^ 1脇粉碎、M、烘干，加20 ^f^只蒸餾水，6(TC回^^取4h。重 復(fù)提取一次。合并兩7^^取液。離心(5000xg， 10min) ，W:清，70。CMJE鄉(xiāng)，加三倍體 積95%乙,淀。離心ll^^淀，冷凍千燥，得粗白繊，即普通商品化的白繊。二、 分離純化(1)將普通商品化白OT^溶于最小^KR7jC中，Sevag法脫蛋白至考馬斯皿G-250 法檢測幾無蛋白質(zhì)被測出，然后用對(duì)2feKil析三天，真空冷凍千燥，得^^化白M;(2)將戰(zhàn)的一級(jí)純化白賺400mg溶于20ml蒸餾水中，離心祉清液，在陰離子交 換纖維素DE-52feJl層析，先以2 5個(gè)柱^f只的蒸餾7jC繊，再用0 4mol/LNaCl溶 髓線梯度tt， $臓為24 ml/h，以4ml收集一管，蒽酮l酸法檢測并確定多糖的洗 脫隨并收磐 ，冷凍干燥，得二^^屯化白賺；(3)再將戰(zhàn)的二級(jí)純化白芨 膠50mg溶于2ml蒸餾xK中，離心社清液，上SephadexG-100柱以0.02mol/LNaCl洗 脫，、 16ml/h，以2ml收集1，蒽酮魂酸法檢測并確定多糖的 ^健， 產(chǎn)物，冷凍千燥即得麟啲白賺。白l:^^鑒定為翻己甘露聚糖單體纟帔為95.8 % ，好量為99658跡頓。 實(shí)施例2翻^^例1制備的白賺，配制12%的白^7夂溶溶液，取白M^K溶液20.0ml 于無Ml^ffi中，力口入乙二醇M水甘油醚20.0mg， ^均勻，55。C水浴方爐3 5小 時(shí)，用ffil^用水充分洗滌以去除未反應(yīng)的乙二醇鵬水甘油醚。取出，將交聯(lián)的膠液倒 入聚四氟乙烯的模具中，置于4(TC的烘箱千燥制膜。待J^t充^P燥后，取出方^Aftl^ 生a&7jC充分浸泡洗滌，將膜片取出，待完^P燥后，得到厚度為1.5-2就的片狀物，可根據(jù)需要裁制#同的^:和大小。實(shí)施例3將實(shí)施例1中乙二醇鵬水甘油醚艦丙二醇鵬7jC甘油醚，其余割牛不變，亦可得到同樣的交駒乍用。 實(shí)施例4將實(shí)施例1中乙二醇雙縮7K甘油醚賊丁二醇雙縮水甘油醚，其余割牛不變，亦可得到同樣的交駒乍用。鄉(xiāng)例5細(xì)實(shí)施例1制備的白微，配制W/o的白^7jC溶液，取l亂的白^7jC溶液 10.0ml，加入無 ^瓶中，無菌^f牛下，力口入10%戊二醛7乂溶液lmL， ^均勻，55°C 水浴方燈3 5小時(shí)，用、鄉(xiāng)用水充分洗滌以去除未鵬的戊二醛。取出，將交聯(lián)的膠液 倒入聚四氟乙烯的模具中，置于4(TC的烘箱^f燥制膜。待膜片充^PM^，取出MA注 射生a^7jC充分浸泡洗滌，將膜片取出，待完^P燥后，得到厚度為1.5-2就、呈12 納米小孔結(jié)構(gòu)的膜。根據(jù)需要，可將lt,成條狀、片機(jī)不同微。 實(shí)施例6將^^例4中戊二醛艦甲醛，其余斜牛不變，亦可得到同樣的固化作用。 實(shí)施例7選用實(shí)施例1審U備的白賺，配制20%的白 7乂溶液，取20%的白 *溶液 5.0ml于無^M瓶中，加入0.25§的明膠，5(TC7jC浴方爐一夜以溶脹明鵬，,分散 均勻，再加入10X甲醛7jC溶液1.5mL，,均勻，55。C水浴方爐3 5小時(shí)，用ffi^J"用 7jC充分洗滌以去除未反應(yīng)的乙醛。取出，將交聯(lián)的膠液倒入聚四氟乙烯的模具中，置于 45。C的烘箱^^燥制膜。待膜片充^P燥后，取出方iCA旨生S^水充分浸泡洗滌，將膜 片取出，待完^^願(yuàn)，得到厚度為1.5-2就、呈15納米小孔結(jié)構(gòu)的片 ，再用孔 徑為1.5-2 S^的沖tl^厚為1.0~2 、直徑為1.5-2 的小片。 實(shí)施例8取10%的白^7]0溶'賺#^液50.0ml于100ml燒杯中，乙二醇雙縮水甘油醚 500.0mg，加入0,25g的阿拉伯膠，5(TC7jC浴體一夜以溶脹明膠后，,分鵬勻，55°C 水浴方燈3 5小時(shí)以充分交聯(lián)固化白M，固化結(jié)束后用ait生S^K充分浸泡洗滌以 去除未鵬的交 0。洗滌扁 ^燒杯置于冷凍千燥機(jī)中，冷凍千燥72小時(shí)以充分去 除水。粉令凍千燥后的疏松狀物用^JSJLffi審lM^約0.5ml的致密薄膜，4(TC的jft箱干 燥制膜，再用孑L徑為1.0"2.0就的沖餅壓^a:徑為1.0-2.0就小片。 實(shí)施例9細(xì)實(shí)施例1制備的白 ，配制10%的白 ^溶液，取10"/。的白S^K溶液 50.0ml于100mlj^不中，乙二醇 水甘油醚500.0mg，加入0.25§的白蛋白，溶解分 散均勻，55'C水浴，3 5小時(shí)以充分交聯(lián)固化白，，固^束后用、，生Ji^K充 分浸泡洗滌以去除未反應(yīng)的交聯(lián)劑。洗滌后夂^^燒杯置于冷凍千燥機(jī)中，冷凍千燥72 小時(shí)以充分去除水。粉令凍千燥后的疏松狀物掛ffimffi制成后約0.5ml的致密薄膜， 4(TC的;)ft來rp^^膜，再用孑L徑為1.0"2.0 的沖豐莫沖]5^1^5為1.0-2.0 *小片。 實(shí)施例10翻實(shí)施例1制備的白賺，配制5%的白M^JC溶液，取5%的白^7K溶液5.0ml 于無W^瓶中，力口入0.25g的明膠，5(TC水浴體一夜以溶脹明鵬，無菌斜牛下， 加入全反式維甲酸微粉化粉末300mg， 分 勻，再加入10X甲醛水溶液1.0mL， 均勻，55。C7jC浴體3 5小時(shí)。取出洗被除殘余的乙醛，將交聯(lián)的膠液倒入聚四氟乙烯的模具中，置于40。C的烘箱千燥制膜。待膜片充^B喿后，取出方JCA湖生鵬 水充分浸泡洗滌，將膜片取出，待完^P燥后，得到厚度為1.5-2.0就的Mi^劑，再 用孑L徑為1.5-2.0就的沖模沖壓成厚為1.0-2.0 、直徑為1.5-2.0就的帝擠U。將此 帝擠,環(huán)氧乙，蒸24小時(shí)滅菌消毒、再方 1周即可。 實(shí)施例11100g的阿拉伯膠浸泡在3升7(TC的ait用水中，約12h后加入白賺300g，無菌 斜牛下，加入那他霉素280g， it^溶解，再加入戊二醛3.0L， It^均勻，55。C水浴方燈 3—5小時(shí)。取出取出洗滌去除殘余的戊二醛，將交聯(lián)的膠液倒入聚四氟乙烯的豐躲中， 置于4(TC的烘箱千燥制膜。待膜片充^B喿后，取出&A激生a^7乂充分浸泡洗滌， 將膜片取出，待完^B跪，得到厚度為1.5-2就、趙勺20納米小孔結(jié)構(gòu)的片狀藥劑， 再用孔徑為1.5-2.0就的沖牛餅壓鵬為1.0"2.0就、直徑為1.5-2.0就的制劑。將 此制劑用環(huán)氧乙^l^24小時(shí)滅菌消毒、再隨l周后即可。 實(shí)施例12白^K載體的眼內(nèi)相容性按$^例2方法制^5白白^^緩 體，將空白白^1$緩 體、空白PLGA植 入劑分別gA剣艮前房、后囊或^g體腔中，于l、 2、 4、 6、 8、 14、 20周分別處死兔 子，取全眼球切片，HE她，可見視網(wǎng)麟度正常，各層結(jié)構(gòu)清晰，魏胞丟^S壞 死，無炎性細(xì)胞浸潤。對(duì)各組的肝臟檢査可見肝小葉排列^S^f狀，細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，中 央靜鵬n匯管區(qū)結(jié)構(gòu)無異常，鄉(xiāng)胞 ，無炎性細(xì)胞浸潤。腎臟檢査可見腎小球結(jié)構(gòu) 識(shí)，未ML管系M^且織增生，細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，未見炎性細(xì)胞浸潤，可見白M同PLGA 一樣，具有良好的生物相容性，適合目艮內(nèi)4頓。 鄉(xiāng)例13雷帕霉素白^^緩釋禾tA劑的體外釋藥特性將制得的載藥03mg的植雷帕霉素白SI^I[A劑艘于25mL含0.05%疊氮化鈉的 pH7.4磷麟緩沖液中，gA37。C恒M7jCM蕩器以72ipm的M水頓蕩，前兩周每 天更換介質(zhì)并用高效液相測定介質(zhì)中雷帕霉素的藥物量，兩周后每周領(lǐng)啶一次，麟測 定12周，結(jié)果表明體外具有明顯的緩稱寺性。 鄉(xiāng)例14低好翻素白SI^緩釋tlA劑的體外釋藥特性將制得的載藥l.Omg的樹氏好翻素白^i^IA劑體于25.0mL含0.05%疊氮 化鈉的pH7.4磷麟緩沖液中，gA 37。C恒M/KM蕩器以72rpm的 7夂平振蕩，前 兩周每天更換介質(zhì)并用,免疫法測定介質(zhì)中低W肝素的藥物量，兩周后每周測定一 次，3i^則定12周，結(jié)果表明體外具有明顯的緩##性。
權(quán)利要求
1、一種有協(xié)同治療作用的眼用藥物緩釋載體，其特征在于該藥物緩釋載體是白芨膠，且該白芨膠主要成分為由甘露糖和葡萄糖以1∶4聚合而成的葡配甘露聚糖，平均分子量在65000～150000道爾頓，優(yōu)選平均分子量99658道爾頓，白芨膠以葡配甘露聚糖計(jì)，含量＞85％。
2、 如權(quán)利要求1所述的有協(xié)同治療作用的眼用藥物緩釋載體，其特征 在于上述的白芨膠中加有起固化作用的交聯(lián)劑，且白芨膠和交聯(lián)劑的質(zhì)量 比為100: 0.01 20。
3、 如權(quán)利要求2所述的有協(xié)同治療作用的眼用藥物緩釋載體，其特征 在于上述的交聯(lián)劑為甲醛、戊二醛、乙二醇雙縮水甘油醚、丙二醇雙縮水 甘油醚或丁二醇雙縮水甘油醚。
4、 如權(quán)利要求1所述的有協(xié)同治療作用的眼用藥物緩釋載體，其特 征在于上述白芨膠中又加有白蛋白、明膠或阿拉伯膠，其中加入量以白芨 膠和其他膠體干重計(jì)，從0.5 40%。
5、 白芨膠的純化制備工藝(1)將普通商品化白芨膠溶于最小體積水 中，Sevag法脫蛋白至考馬斯亮藍(lán)G-250法檢測幾無蛋白質(zhì)被測出，然后 用對(duì)流水透析三天，真空冷凍干燥，得一級(jí)純化白芨膠；(2)將上述的一 級(jí)純化白芨膠400mg溶于20ml蒸餾水中，離心取上清液，在陰離子交換 纖維素DE-52柱上層析，先以2 5個(gè)柱體積的蒸餾水洗脫，再用0 4mol/L NaCl溶液直線梯度洗脫，流速為24ml/h,以4ml收集一管，蒽酮-硫酸法 檢測并確定多糖的洗脫位置并收集洗脫產(chǎn)物，冷凍干燥，得二級(jí)純化白芨 膠；(3)再將上述的二級(jí)純化白芨膠50mg溶于2ml蒸餾水中，離心取上 清液，上SephadexG-100柱以0.02mol/LNaCl洗脫，流速16ml/h，以2ml 收集一管，蒽酮-硫酸法檢測并確定多糖的洗脫位置，收集洗脫產(chǎn)物，冷凍 干燥即得精制的白芨膠。
全文摘要
本發(fā)明公開一種有協(xié)同治療作用的眼用藥物緩釋載體，其特征在于該藥物緩釋載體是白芨膠，且該白芨膠主要成分為由甘露糖和葡萄糖以1∶4聚合而成的葡配甘露聚糖，平均分子量在65000～150000，優(yōu)選平均分子量100000，白芨膠以葡配甘露聚糖計(jì)，含量＞85％。上述的白芨膠中加有起固化作用的交聯(lián)劑，且其質(zhì)量比為100∶0.01～20。上述交聯(lián)劑為甲醛、戊二醛、乙二醇雙縮水甘油醚、丙二醇雙縮水甘油醚或丁二醇雙縮水甘油醚。上述白芨膠中又加有白蛋白、明膠或阿拉伯膠。本發(fā)明不僅起到緩慢釋放藥物的作用，而且具有對(duì)受損組織的保護(hù)作用、防治腫瘤、抗氧化、抑制新生血管等臨床需要的活性，對(duì)所載藥物具有一定的協(xié)同治療作用而起到更好的治療效果。
文檔編號(hào)C08B37/00GK101269221SQ200810093990
公開日2008年9月24日 申請(qǐng)日期2008年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月25日
發(fā)明者史偉云, 吳祥根, 謝立信 申請(qǐng)人:山東省眼科研究所