專利名稱：基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可抑制基質(zhì)金屬蛋白酶，特別是stromelysin(基質(zhì)溶素)和matrilysin的化合物和其可藥用鹽，它們可用于治療哺乳動(dòng)物的由于該基質(zhì)金屬蛋白酶的被抑制而可減輕的疾病。
基質(zhì)金屬蛋白酶是一族與結(jié)締組織降解和改型有關(guān)的蛋白酶。該族酶的成員有一系列性能，包括鋅或鈣依賴性，作為酶原的分泌作用，及有40-50％的氨基酸序列同源性?；|(zhì)金屬蛋白酶族包括間質(zhì)膠原酶，它是由成纖維細(xì)胞/巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞衍生的，它催化天然膠原I、II、III和X型的初始與限速裂解。
膠原為哺乳動(dòng)物的一種主要結(jié)構(gòu)蛋白，它是許多組織如軟骨、骨頭、腱、皮膚基質(zhì)的基本成分。間質(zhì)膠原酶為特異性很強(qiáng)的基質(zhì)金屬蛋白酶，它裂解膠原以得到兩個(gè)片斷，它們同時(shí)在生理溫度下變性，因而易于被較弱特異性的酶來(lái)裂解。由于通過(guò)膠原酶裂解導(dǎo)致目標(biāo)組織的結(jié)構(gòu)完整性的損失，它是一種基本上不可逆的過(guò)程，因而對(duì)治療干涉作用為優(yōu)良的對(duì)象。
除了間質(zhì)膠原酶外，基質(zhì)金屬蛋白酶族包括兩種特殊但高度相關(guān)的明膠酶由成纖維細(xì)胞分泌的72-KD酶和由單核吞噬細(xì)胞釋放的92-KD酶。這些明膠酶能夠降解明膠(變性的膠原)、天然膠原IV型和V型、纖維連接素和不溶性彈性硬蛋白。
基質(zhì)金屬蛋白酶族也包括stromelysin 1和2，它們能夠使寬范圍的基質(zhì)底物包括層粘連蛋白、纖維連接素、蛋白聚糖和膠原IV和IX型在其非螺區(qū)域(non-helical domains)裂解。
Matrilysin(相關(guān)的金屬蛋白酶或PUMP)為一種近來(lái)描述的基質(zhì)金屬蛋白酶族的一員。Matrilysin能夠降解寬范圍的基質(zhì)底物，包括蛋白聚糖、明膠、纖維連接素、彈性硬蛋白和層粘連蛋白。它的表達(dá)記載在單核吞噬細(xì)胞、大鼠子宮移植物，并偶爾發(fā)生在腫瘤中。
基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制劑被認(rèn)為提供了對(duì)關(guān)節(jié)疾病、骨吸收疾病(如骨質(zhì)疏松癥)、與糖尿病有關(guān)的增強(qiáng)性膠原損壞、牙周疾病、角膜潰瘍、皮膚潰瘍和腫瘤轉(zhuǎn)移的有益治療手段。例如，膠原酶抑制劑的設(shè)計(jì)與潛在的應(yīng)用描述在J.Enzyme Inhibition(1987)，vol.2，pp.1-22，和Drug News & Prospectives(1990)，vol.3，No.8，pp.453-458。基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑也是各種專利及專利申請(qǐng)的主題，例如U.S.專利5,189,178(Galardy)和5,183,900(Galardy)，EP-A-0438223(Beecham)和0276436(F.Hoffmann-La Roche)，PCT國(guó)際申請(qǐng)92/21360(Merck)，92/06966(Beecham)和92/09563(Glycomed)。
本發(fā)明提供了一種可用于抑制基質(zhì)金屬蛋白酶特別是stromel-ysin和matrilysin的新化合物，該化合物可有效地用于治療以基質(zhì)金屬蛋白酶過(guò)量活性為特征的疾病。
本發(fā)明的一個(gè)方面是涉及一種作為單一立體異構(gòu)體或其混合物的式(I)化合物或其可藥用鹽 其中R1為巰基、乙酰基硫基、羧基、羥基氨基甲?；?、烷氧羰基、芳氧羰基、芳烷氧羰基、芐氧基氨基羰基或 (其中，R6為任意被取代的芳基，其中芳基為喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基)；R2為烷基、芳烷基或環(huán)烷基烷基；R3為環(huán)烷基、烷基(任意被環(huán)烷基、羥基、巰基、烷硫基、芳烷氧基、羧基、氨基、烷氨基、胍基、氨基甲?；?、吡啶基或吲哚基取代)，或芳烷基(任意被羥基、羧基、烷基或烷氧基取代)；R4為硝基、氨基、氰基、羥基、烷氧基、羧基、烷氧羰基、烷基磺?；?、鹵代烷基、烷氧羰基烷基、四唑基、氨基甲?；?任意被烷基或二烷基氨基烷基取代)或氨基磺?；?任意被烷基取代)；和R5為氫、鹵原子或羥基。
本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及抑制哺乳動(dòng)物中基質(zhì)金屬蛋白酶活性的方法，該方法包括以治療有效量的如上所述的單一立體異構(gòu)體或其混合物的式(I)的化合物或其可藥用鹽向需要的哺乳動(dòng)物給藥。
本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及一種藥物組合物，它包含治療有效量的如上定義的式(I)化合物或其可藥用鹽，并含有一種或多種可藥用的賦形劑。
在本說(shuō)明書及附加的權(quán)利要求中，除非另有說(shuō)明，下列術(shù)語(yǔ)具有如下含義“BOC”指叔丁氧羰基。
“CBZ”指芐氧羰基。
“DMAP”指N，N-二甲基氨基吡啶。
“DMF”指N，N-二甲基甲酰胺。
“EDCI”指N-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺。
“HOBT”指1-羥基苯并三唑。
“羥基”指-OH。
“氨基”指-NH2。
“乙?；蚧敝?SC(O)CH3。
“鹵素”指溴、氯或氟。
“氨基甲?；敝?C(O)NH2。
“羧基”指-C(O)OH。
“羥基氨基”指-NHOH。
“羥基氨基甲酰基”指-C(O)NHOH。
“巰基”指-SH。
“芐氧基氨基甲?；敝?C(O)N(H)CH2C6H5。
“烷基”指直鏈或支鏈的僅由碳和氫組成的、不包含不飽和鍵、具有1-4個(gè)碳原子的一價(jià)基團(tuán)，如甲基、乙基、正丙基、2-甲基丙基(異丁基)、1-甲基乙基(異丙基)、正丁基、1，1-二甲基乙基(叔丁基)等。
“烷氨基”指式-NHRa基團(tuán)，其中Ra為如上定義的烷基，如甲氨基、乙氨基、異丙氨基、正丁氨基等。
“鹵代烷基”指式-RaRd基團(tuán)，其中Ra被一個(gè)或多個(gè)如上定義的鹵素基團(tuán)(Rd)取代的如上定義的烷基，如，2-氯乙基、2-溴乙基、三氟甲基等。
“二烷氨基烷基”指式-RaN(Ra)2基團(tuán)，其中每一個(gè)Ra獨(dú)立為如上定義的烷基，如，二甲氨基乙基、二乙氨基正丙基、二甲氨基正丙基等。
“氨基磺?；敝?S(O)2NH2。
“烷基磺?；敝甘?S(O)2Ra基團(tuán)，其中Ra為如上定義的烷基，如，甲磺酰基、乙磺?；惐酋；取?br> “烷硫基”指式-SRa的基團(tuán)，其中Ra為如上定義的烷基，如甲硫基、乙硫基、異丙硫基、正丁硫基等。
“烷氧基”指式-ORa基團(tuán)，Ra為如上定義的烷基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、1-甲基乙氧基、正丁氧基、叔丁氧基等。
“烷氧羰基烷基”指式-RaC(O)Rb基團(tuán)，其中Ra為如上定義的烷基，Rb為如上定義的烷氧基，如，甲氧羰基乙基、乙氧羰基乙基、甲氧羰基異丙基等。
“芳基”指喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基或苯基。
“芳氧基”指式-ORb基團(tuán)，其中Rb為如上定義的芳基，如苯氧基、喹啉-2-基氧基、萘-1-基氧基或萘-2-基氧基。
“芳烷基”指式-RaRb基團(tuán)，其中Ra為如上定義的烷基，Rb為如上定義的芳基，如芐基、苯亞乙基、3-苯基丙基、2-喹啉-2-基乙基等。
“芳烷氧基”指式-ORaRb基團(tuán)，其中Ra為如上定義的烷基，Rb為如上定義的芳基，如，芐氧基、2-喹啉-2-基乙氧基、3-萘-2-基丙氧基等。
“烷氧羰基”指式-C(O)Rb的基團(tuán)，其中Rb為如上定義的烷氧基，如甲氧羰基、乙氧羰基、叔丁氧羰基等。
“芳氧羰基”指式-C(O)Rc，其中Rc為如上定義的芳氧基，如芐氧羰基、2-喹啉-2-基乙氧羰基等。
“環(huán)烷基”指僅由碳和氫原子組成、不包含不飽和鍵、具有5-7個(gè)碳原子的單價(jià)環(huán)基，如環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。
“環(huán)烷基烷基”指式-ReRa基團(tuán)，其中Ra為如上定義的烷基，Re為如上定義的環(huán)烷基，如環(huán)己基甲基、環(huán)己基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)戊基甲基等。
“氧膦基”指式H2P(O)-基團(tuán)，其中兩個(gè)H原子可被其它基團(tuán)取代。
“任選的(地)”指隨后描述的事情可發(fā)生或不發(fā)生，還指某種描述包括了發(fā)生所述事情的情形或未發(fā)生所述事情的情形，如“任選地取代的喹啉-2-基”是指喹啉-2-基可被取代或未被取代，這種描述包括取代了的喹啉-2-基和無(wú)取代基的喹啉-2-基。
“任選取代的芳基”指被一個(gè)或多個(gè)選自如下基團(tuán)取代或未取代的喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基，取代基為鹵素、烷基、烷氧基、羥基和硝基，所說(shuō)基團(tuán)的實(shí)例為6-硝基喹啉-2-基、6-氟喹啉-2-基、6-羥基喹啉-2-基、6-甲氧基喹啉-2-基、6-硝基萘-1-基、6-氯萘-1-基、6-羥基萘-1-基、6-甲氧基萘-1-基、6-硝基萘-2-基、6-氯萘-2-基、6-羥基萘-2-基、6-甲氧基萘-2-基、6-硝基苯基、6-氯苯基、6-羥基苯基、6-甲氧基苯基等。
“氨基保護(hù)基”指那些能保護(hù)氮原子在合成過(guò)程中不發(fā)生不需反應(yīng)的基團(tuán)，它們包括但不限于芐基、?；?、乙?；?、芐氧羰基、對(duì)甲氧基芐氧羰基、對(duì)硝基芐氧羰基、叔丁氧羰基等。
“可藥用鹽”指保留游離酸或游離堿的生物活性和性能并且不是生理不可接受的那些鹽。如果化合物以游離酸存在，所希望的鹽可按公知技術(shù)制備，如用無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸處理化合物，無(wú)機(jī)酸的實(shí)例為鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；有機(jī)酸的實(shí)例為乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、馬來(lái)酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸等。如果化合物以游離堿存在，所希望的鹽可按公知的技術(shù)制備，如用無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿進(jìn)行處理。由無(wú)機(jī)堿得到的鹽包括但不限于鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁鹽等。由有機(jī)堿得到的鹽包括但不限于以下化合物的鹽伯、仲、叔胺，包括天然存在的取代的胺在內(nèi)的取代的胺，環(huán)胺和堿性離子交換樹脂，如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、三甲胺、二環(huán)己基胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、羥胺(hydraba-mine)、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺樹脂等。
“哺乳動(dòng)物”包括人類和所有家養(yǎng)和野生動(dòng)物，包括但不限于牛、馬、豬、綿羊、山羊、狗、貓等。
“治療有效量”指當(dāng)向需要的哺乳動(dòng)物給藥時(shí)，對(duì)由基質(zhì)金屬蛋白酶活性特別是stromelysin和matrilysin活性抑制可減輕的疾病足以進(jìn)行有效治療的式(I)化合物的用量。構(gòu)成“治療有效量”的式(I)化合物的用量隨化合物、疾病狀態(tài)及其嚴(yán)重程度、待治療的哺乳動(dòng)物的不同而變化，但本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可根據(jù)其掌握的知識(shí)及本說(shuō)明書作出決定。
“治療”包括了對(duì)哺乳動(dòng)物特別是人類的疾病進(jìn)行治療。所說(shuō)的疾病是由于基質(zhì)金屬蛋白酶活性，特別是stromelysin和matril-ysin活性被抑制而減輕的；包括(1)當(dāng)哺乳動(dòng)物易受所述疾病的感染但還未診斷出已感染該疾病時(shí)，預(yù)防該哺乳動(dòng)物發(fā)生疾??；(2)抑制該疾病，即停止該疾病的發(fā)展；或(3)減緩該疾病，即使該疾病得到消退。
“立體異構(gòu)體”指化合物具有相同的分子式和鍵的種類或順序，但它們的原子在空間的排列方式不同。
本文所用的命名法基本上為I.U.P.A.C命名法的改進(jìn)方式，其中，本發(fā)明的化合物被命名為肽衍生物。式(I)的化合物或其可藥用鹽在其結(jié)構(gòu)中至少包含兩個(gè)不對(duì)稱碳原子，因而可能以單一立體異構(gòu)體、外消旋物形式存在，及以對(duì)映體與非對(duì)映體的混合物存在。所有這些單一立體異構(gòu)體、外消旋物及它們的混合物均屬于本發(fā)明范圍之內(nèi)。
當(dāng)命名式(I)化合物的單一立體異構(gòu)體時(shí)，可以按照Cahn、Ingold和Prelog的“順序原則”對(duì)手性碳原子的絕對(duì)構(gòu)型予以描述，如R或S。
此外，包括R3及鄰近的氮原子和羰基的式(I)化合物的那部分可定義為α-氨基酸殘基并如是命名。
例如下式(I)化合物 其中R1為羥基氨基甲?；?；R2為2-甲基丙基；R3為2-甲基丙基；R4為甲氧羰基；R5為氫；該化合物被命名為N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺。實(shí)用性與給藥A.實(shí)用性式(I)的化合物用于抑制哺乳動(dòng)物的基質(zhì)金屬蛋白酶，特別是stromelysin和matrilysin，因而可預(yù)防哺乳動(dòng)物膠原的降解。因而，該化合物用于治療與金屬基質(zhì)蛋白酶活性增加，特別是strom-elysin和matrilsin活性增加相關(guān)的疾病，如關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)病、瘤轉(zhuǎn)移、牙周疾病和角膜潰瘍。參見如，Arthritis and Rheum-atism(1993)，Vol.36，No.2，pp.181-189；Arthritis and Rheum-atism(1991)，Vol.34，No.9，pp.1073-1075；Seminars in Arthri-tis and Rheumatism(1990)，Vol.19，No.4，Supplement 1(Feb-ruary)，pp.16-20；Drugs of the Future(1990)，Vol.15，No.5，pp.495-508；和J.Emzyme Inhibition(1987)，Vol.2，pp1-22。
B.試驗(yàn)按照各種本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的不同的體內(nèi)和體外試驗(yàn)方法，如在Anal.BioChem.(1985)，Vol.147，p.437或其改進(jìn)方法可表明式(I)化合物在抑制基質(zhì)金屬蛋白酶活性，特別是stromelysin和matrilysin活性的能力。
C.給藥可以采用任何一種可接受的給藥方式或類似效用的試劑實(shí)現(xiàn)以純的形式或以適宜的藥物組合物形式使式(I)化合物或其可藥用鹽給藥。因此，給藥方式可以是，例如，口服、鼻給藥、非腸道給藥、表面給藥、皮下給藥、直腸給藥，以固體形式、半固體形式、凍干粉、或液體制劑形式，如片劑、栓劑、丸劑、軟塑料膠囊和硬明膠膠囊、粉劑、溶液劑、懸浮液劑或氣溶膠劑，優(yōu)選適用于準(zhǔn)確劑量的簡(jiǎn)單給藥的單位劑量方式。組合物將包括常規(guī)的藥用載體或賦形劑和作為活性成分的式(I)化合物，此外還可包括其它的醫(yī)藥試劑或制藥試劑、載體、佐劑等。
通常，根據(jù)所采用的給藥方式，可藥用組合物包含約1％-99％(wt)的式(I)化合物或其可藥用鹽，99-1％(wt)的適宜的藥物賦形劑。優(yōu)選地，組合物為約5％-75％(wt)的式(I)化合物或其可藥用鹽，其余為適宜的藥物賦形劑。
優(yōu)選的給藥途徑是口服，使用常規(guī)的日常劑量制度，它可按照欲治療疾病的嚴(yán)重程度調(diào)節(jié)。對(duì)這種口服給藥形式，含式(I)化合物或其可藥用鹽的藥物組合物可通過(guò)摻入常規(guī)賦形劑的任一種而制成，賦形劑的實(shí)例是，藥品級(jí)的甘露糖醇、乳糖、淀粉、預(yù)膠化淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素醚衍生物、葡萄糖、明膠、蔗糖、檸檬酸酯、丙基gallate等。該組合物采用溶液劑、懸浮液劑、片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、緩釋劑等形式。
該組合物優(yōu)選采用膠囊劑、caplet或片劑，因而將包含稀釋劑如乳糖、蔗糖、磷酸二鈣等；崩解劑如croscarmellose sodium或其衍生物；潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂等；粘合劑如淀粉、阿拉伯膠、聚乙烯基吡咯烷酮、明膠、纖維素醚衍生物等。
式(I)的化合物或其可藥用鹽也可配制成栓劑，例如，使用約0.5％-50％的活性成分分散在載體中，載體可緩慢地在體內(nèi)溶解，如聚氧乙烯乙二醇和聚乙二醇(PEG)，如PEG 1000(96％)和PEG4000(4％)。
液體藥物可給藥的組合物可通過(guò)例如下述過(guò)程制備將式(I)的化合物(約0.5％-20％)或其可藥用鹽及任選的藥用佐劑溶解、分散等在載體中以形成溶液或懸浮液，載體的實(shí)例為水、鹽水、右旋糖液、甘油、乙醇等。
如果需要的話，本發(fā)明的藥物組合物也可包含少量的輔助物，如潤(rùn)濕劑或乳化劑，pH緩沖劑、抗氧化劑等，如，檸檬酸、脫水山梨醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、丁基化的羥基甲苯等。
該種劑型的制備方法是公知的，或?qū)Ρ绢I(lǐng)域的技術(shù)人員是明顯的，如參見，Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th Ed.，(Mack Publishing Company，Easton，Pennsylvania；1990)。按照本發(fā)明的技術(shù)，欲給藥的組合物無(wú)論如何均包含一種治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽，用于治療由基質(zhì)金屬蛋白酶活性抑制而減輕的疾病。
式(I)化合物或其可藥用鹽以治療有效量給藥，該量取決于如下的因素所采用的具體化合物的活性、化合物作用的代謝穩(wěn)定性和時(shí)間、病人年齡、體重、健康狀況、性別、飲食、給藥方式和時(shí)間、排泄率、聯(lián)合用藥、特定疾病的嚴(yán)重性及宿主承受治療(host under-going therapy)。通常，每日的有效劑量為每天約0.14mg-14.3mg式(I)化合物或其可藥用鹽/kg體重，優(yōu)選每天約0.7mg-10mg/kg體重，最優(yōu)選每天約1.4mg-7.2mg/kg體重。例如，對(duì)70kg的患者，式(I)化合物或其可藥用鹽一天的劑量為約10mg-1.0g，優(yōu)選約50mg-700mg，最優(yōu)選約100mg-500mg。優(yōu)選的實(shí)施方式如上發(fā)明概述中所述的優(yōu)選式(I)化合物為R1為巰基或乙酰基硫基的那些化合物。
在該化合物組中，優(yōu)選的亞組化合物為如下的化合物其中，R2為烷基、芳烷基、環(huán)烷基烷基；R3為環(huán)烷基或烷基(任選被環(huán)烷基、羥基、芳烷氧基、烷硫基、吡啶基或吲哚基取代)；R4為氰基、羧基、羥基、烷氧基、烷氧羰基、烷氧羰基烷基、氨基甲?；?任選被芳烷基氨基烷基取代)或氨基磺酰基(任選被烷基取代)；和R5為氫。
在該化合物亞組中，優(yōu)選如下一類的化合物其中，R2為烷基；R3為環(huán)己基、烷基(任選被環(huán)己基、羥基、芐氧基、甲硫基、吡啶基或吲哚基取代)；R4為羧基、烷氧羰基或氨基磺?；?。
在該類化合物中，優(yōu)選R2為2-甲基丙基的化合物。特別優(yōu)選其中R3為2-甲基丙基的化合物。
如上發(fā)明概述中所述的式(I)化合物優(yōu)選R1為羧基的那些化合物。
在該化合物組中，優(yōu)選的亞組化合物為如下的化合物其中，R2為烷基、芳烷基、環(huán)烷基烷基；R3為環(huán)烷基或烷基(任選被環(huán)烷基、羥基、芳烷氧基、烷硫基、吡啶基或吲哚基取代)；R4為氰基、羥基、烷氧基、羧基、烷氧羰基、烷氧羰基烷基、氨基甲酰基(任選被芳烷基氨基烷基取代)或氨基磺?；?任選被烷基取代)；和R5為氫。
在該化合物亞組中，優(yōu)選如下一類的化合物其中，R2為烷基；R3為環(huán)己基、烷基(任選被環(huán)己基、羥基、芐氧基、甲硫基、吡啶基或吲哚基取代)；和R4為羧基、烷氧羰基或氨基磺?；?br> 在該類化合物中，優(yōu)選R2為2-甲基丙基的化合物。特別優(yōu)選如下的化合物其中R3為環(huán)己基、2-甲基丙基、吡啶-3-基甲基、1-芐氧基乙基、1-甲基丙基、1，1-二甲基乙基、1-羥基乙基和吲哚-2-基甲基；R4為甲氧羰基。
如上發(fā)明概述中所述的式(I)化合物另外優(yōu)選R1為羥基氨基甲?；哪切┗衔?。
在該化合物組中，優(yōu)選的亞組化合物為如下的化合物其中，R2為烷基、芳烷基、環(huán)烷基烷基；R3為環(huán)烷基或烷基(任選被環(huán)烷基、羥基、芳烷氧基、烷硫基、吡啶基或吲哚基取代)；R4為氰基、羥基、烷氧基、羧基、烷氧羰基、烷氧羰基烷基、氨基甲酰基(任選被芳烷基氨基烷基取代)或氨基磺?；?任選被烷基取代)；和R5為氫。
在該化合物亞組中，優(yōu)選如下一類的化合物其中，R2為烷基；R3為環(huán)己基、烷基(任選被環(huán)己基、羥基、芐氧基、甲硫基、吡啶基或吲哚基取代)；R4為羧基、烷氧羰基或氨基磺?；?br> 在該類化合物中，優(yōu)選R2為2-甲基丙基的化合物。特別優(yōu)選如下的化合物其中R3為環(huán)己基、2-甲基丙基、吡啶-3-基甲基、1-芐氧基乙基、1-甲基丙基、1，1-二甲基乙基、1-羥基乙基和吲哚-2-基甲基。
最優(yōu)選的式(I)化合物為N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-色氨酸-N′-(4-羧基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-羧基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-巰基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-乙?；蚧谆祯；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-羧基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-環(huán)己基甘氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-t-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺。式(I)化合物的制備單一立體異構(gòu)體或其混合物的式(I)化合物或其可藥用鹽為肽衍生物，它們可通過(guò)構(gòu)分α-氨基酸衍生物制備。形成肽鍵的標(biāo)準(zhǔn)方法在如下文獻(xiàn)中有述M.Bodanszky等，The Practice of Pept-ide Synthesis(1984)，Springer-Verlag；M.Bodanszky，Princ-iples of Peptide Synthesis(1984)，Springer-Verlag；J.P.Greenstein等，Chemistry of the Amino Acids(1961)，Vol.1-3，John Wiley and Sons Inc.；G.R.Pettit，Synthetic Peptid-es(1970)，Vol.1-2，Van Nostrand Reinhold Company。
通常，在惰性溶劑如二甲基甲酰胺(DMF)中，在1-羥基苯并三唑(HOBT)存在下，采用試劑如二環(huán)己基碳化二亞胺或N′-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(EDCI)通過(guò)碳化二亞胺法實(shí)現(xiàn)用于形成式(I)化合物的酰胺偶合。其它形成酰胺或肽鍵的方法包括但不限于經(jīng)酰氯、酰基疊氮化物、混合酸酐或活性酯如硝基苯基酯的合成路徑。通常，在有或沒(méi)有肽片斷存在下進(jìn)行溶液相酰胺偶合。
用于制備式(I)化合物的化合物的末端氨基或羧基基團(tuán)的保護(hù)基的選擇部分是由特定的酰胺或肽偶合條件決定，部分是由與偶合相關(guān)的氨基酸和/或肽成分決定。通常采用的氨基保護(hù)基包括眾所周知的那些，例如，芐氧羰基、對(duì)甲氧基芐氧羰基、對(duì)硝基芐氧羰基、叔丁氧羰基(BOC)等。優(yōu)選使用BOC或芐氧羰基(CBZ)作α-氨基的保護(hù)基，這是因?yàn)槌ニ恍枰跛幔缛宜?TFA)，或乙酸乙酯中的鹽酸；或通過(guò)催化氫化除去。
可以按照本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的方法將式(I)的各個(gè)立體異構(gòu)體分開，例如通過(guò)選擇結(jié)晶法或通過(guò)色譜法，和/或本文公開的方法。
式(I)化合物和其中間體的取代基和/或變量的組合是允許的，只要這種組合導(dǎo)致穩(wěn)定的化合物。A.式(E)化合物的制備式(E)的化合物為用于制備式(I)化合物的中間體，它按照下述的反應(yīng)路線1制備，其中R2和R6如發(fā)明概述中的定義，R12為甲磺酰基或甲苯磺?；磻?yīng)路線1 式(Ea)的化合物可以按照本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的方法(如參見歐洲專利公開號(hào)0276436)或按照以下實(shí)施例1的方法制備。式(Ed)的化合物可商購(gòu)，或按公知的方法制備。
通常，首先在非質(zhì)子傳遞溶劑，優(yōu)選四氫呋喃和二氯甲烷中，在0-15℃，優(yōu)選0℃，在堿優(yōu)選二異丙基乙基胺和雙(三甲基甲硅烷基)乙酰胺存在下，用仲甲醛處理式(Ea)化合物來(lái)制備式(E)的化合物。將形成的溶液控溫于25-37℃，優(yōu)選37℃下18小時(shí)。然后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法分離出式(Eb)化合物，優(yōu)選通過(guò)溶劑蒸發(fā)、萃取和過(guò)濾進(jìn)行分離。
然后將于非質(zhì)子傳遞溶劑優(yōu)選二氯甲烷中的式(Eb)化合物冷卻至-20℃～約0℃，優(yōu)選冷卻至-20℃。然后式(Ec)化合物通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行酯化，該方法是采用至少化學(xué)計(jì)量量至100％過(guò)量的甲磺酰氯或甲苯磺酰氯在-20℃下處理該醇一段時(shí)間，優(yōu)選約15分鐘，然后在室溫下處理一段時(shí)間，優(yōu)選約3.5小時(shí)。隨后按常規(guī)方法，優(yōu)選通過(guò)萃取、過(guò)濾和蒸發(fā)從反應(yīng)混合物中分離出式(Ec)化合物。
此后，于非質(zhì)子傳遞溶劑，優(yōu)選DMF中的式(Ec)化合物在開始溫度為0℃，緩慢升溫至室溫的溫度下，使其與式(Ed)化合物的鹽(優(yōu)選為鈉鹽，該鹽是在非質(zhì)子傳遞溶劑，優(yōu)選DMF中由式(Ed)化合物與氫化鈉反應(yīng)形成的)反應(yīng)約16～20小時(shí)，優(yōu)選約18小時(shí)。此后通過(guò)常規(guī)的分離技術(shù)如萃取、蒸發(fā)和快速色譜從反應(yīng)混合物中分離出式(Ee)化合物。
然后，在堿性條件下，優(yōu)選在氫氧化鈉存在下水解式(Ee)的化合物以形成式(E)的化合物，通過(guò)常規(guī)分離技術(shù)從反應(yīng)混合物中將其分離出來(lái)。B.式(Ia)化合物的制備式(Ia)化合物為其中R1為 R6為任選取代的芳基，其中芳基為喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基；R2為烷基；R3如發(fā)明概述中所述；R4如發(fā)明概述中所述；R5為氫的式(I)化合物。式(Ia)的化合物按下面的反應(yīng)路線2所述進(jìn)行制備，其中R2為烷基；R3如發(fā)明概述中所述；R4如發(fā)明概述中所述；R5為氫；R6為如上所述，BOC為叔丁氧羰基反應(yīng)路線2 式(A)的N-保護(hù)氨基酸和式(B)的化合物可商購(gòu)或按公知的方法制備。式(E)的化合物按如上A部分所述的方式制備。
通常，在常規(guī)酰胺偶合條件下，首先用式(B)的化合物偶合式(A)的化合物以形成式(C)的化合物來(lái)制備式(Ia)的化合物。例如，向冷(0-5℃)的式(A)化合物與過(guò)量摩爾量的HOBT的DMF溶液中加入過(guò)量摩爾量的EDCI。在0-5℃，優(yōu)選0℃下，攪拌形成的溶液約1-2小時(shí)，優(yōu)選約1小時(shí)。然后，在堿，優(yōu)選DMAP存在下，向冷的溶液中加入等摩爾量的式(B)化合物。在室溫，優(yōu)選25℃下，攪拌形成的混合物12-24小時(shí)，優(yōu)選24小時(shí)。然后，按照肽化學(xué)中的常規(guī)分離技術(shù)，如蒸發(fā)、萃取、柱色譜和/或HPLC從反應(yīng)混合物中分離式(C)化合物。
隨后，在弱酸性條件下，優(yōu)選在三氟乙酸存在下除去式(C)化合物的氨基保護(hù)基，得到式(D)的化合物。
之后，在常規(guī)肽偶合條件下，用式(E)化合物偶合如此形成的式(D)化合物。例如，向惰性溶劑，優(yōu)選THF中的冷(0-5℃，優(yōu)選0℃)的式(D)化合物的溶液中加入1，1′-碳酰二咪唑(carbonyldiimidazo-le)。在0-5℃，優(yōu)選0℃下攪拌形成的混合物60-90分鐘，優(yōu)選75分鐘，然后與式(E)的化合物反應(yīng)約12-17小時(shí)，優(yōu)選約15小時(shí)。隨后，采用肽化學(xué)中常規(guī)的技術(shù)，如萃取和反相HPLC從反應(yīng)混合物中分離出式(Ia)化合物。C.式(F)化合物的制備式(F)化合物 其中R2如發(fā)明概述中所述，R8為叔丁基，該式(F)化合物為式(I)化合物制備過(guò)程中的中間體，按照如下的反應(yīng)路線3制備，其中R2如發(fā)明概述中所述，R8為叔丁基反應(yīng)路線3 按照類似的方式，只是用D-(-)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺代替L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺，制得相應(yīng)(S)構(gòu)型的單一的立體異構(gòu)體。
式(Fa)的化合物可商購(gòu)，或按照公知技術(shù)制備，例如按實(shí)施例11的方法制得。L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺和D-(-)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺可商購(gòu)，如從Aldrich Chemical Company(Milwauk-ee，Wisconsin，U.S.A.)購(gòu)得。
通常，首先由式(Fa)化合物與L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺進(jìn)行縮合反應(yīng)形成式(Fb)化合物來(lái)制得式(F)化合物。使用NaHMDS以產(chǎn)生陰離子1小時(shí)，反應(yīng)用溴乙酸叔丁酯驟冷結(jié)束，形成式(Q)化合物相應(yīng)的酯。隨后在堿性條件下除去樟腦基團(tuán)以產(chǎn)生式(F)化合物的一種單一立體異構(gòu)體，其中，與R2取代基相連的碳原子為(R)構(gòu)型。D.式(Ib)、(Ic)、(Id)和(Ie)化合物的制備式(Ib)化合物為式(I)的化合物，其中R1為烷氧羰基或芳烷氧羰基；R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中定義。
式(Ic)化合物為式(I)化合物，其中R1為羧基；R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中定義。
式(Id)化合物為式(I)化合物，其中R1為芐氧基氨基甲?；籖2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中定義。
式(Ie)化合物為式(I)化合物，其中R1為羥基氨基甲?；?；R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中定義。
式(Ib)、(Ic)、(Id)和(Ie)化合物按照如下的反應(yīng)路線4制備，其中R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中定義；R8為叔丁基。
反應(yīng)路線4 式(F)化合物如上述C部分制備。
式(D)化合物如上述B部分制備。
鄰-芐基羥基胺可商購(gòu)，如從Aldrich Chemical Co.以其鹽酸鹽購(gòu)得。
通常，在常規(guī)的酰胺偶合條件下，首先使式(F)的化合物與式(D)的化合物偶合形成式(Ib)化合物而制備式(Ib)、(Ic)、(Id)和(Ie)化合物。例如，向含略為過(guò)量摩爾量的HOBT的式(F)化合物在非質(zhì)子傳遞溶劑優(yōu)選DMF中的溶液中加入過(guò)量摩爾量的EDCI。在0-5℃下，優(yōu)選0℃下攪拌形成的混合物約1-2小時(shí)，優(yōu)選1小時(shí)。然后，在堿優(yōu)選DMAP存在下，向冷的溶液中加入等摩爾量的式(D)化合物。在室溫，優(yōu)選約25℃下，攪拌形成的混合物12-24小時(shí)，優(yōu)選約24小時(shí)。之后，按照肽化學(xué)中常規(guī)的分離技術(shù)，如溶劑蒸發(fā)、萃取、快速色譜和/或HPLC從反應(yīng)混合物中分離出式(Ib)化合物。
隨后，在弱酸性條件下，優(yōu)選采用三氟乙酸水解式(Ib)的化合物以得到式(Ic)的化合物。
隨后，在常規(guī)的酰胺偶合條件下由鄰-芐基羥基胺處理所得的式(Ic)化合物，形成了式(Id)化合物。例如，于惰性溶劑優(yōu)選DMF中的式(Ic)化合物的冷(0-5℃)溶液用過(guò)量摩爾量的EDCI處理。在0-5℃，優(yōu)選0℃下攪拌形成的混合物約30分鐘～約1小時(shí)，再加入等摩爾量的鄰-芐基羥基胺。使反應(yīng)混合物過(guò)夜升溫至室溫。隨后，按照常規(guī)分離技術(shù)，如通過(guò)萃取和快速色譜法從反應(yīng)混合物中分離出式(Id)的化合物。
以后，在催化氫化(Pd/C)下除去式(Id)化合物的羥基保護(hù)基(芐基)，得到式(Ie)化合物。E.式(G)化合物的制備式(G)化合物 其中R2如發(fā)明概述中定義，該化合物為式(I)化合物制備過(guò)程中的中間體，由下述反應(yīng)路線5制備，其中R2如發(fā)明概述中定義。
反應(yīng)路線5 式(Ga)化合物和硫代乙酸可商購(gòu)，如從TCI America Organic Ch-emicals和Aldrich Chemical Company分別購(gòu)得。
通常，首先用等摩爾量的堿如氫氧化鉀水解式(Ga)的化合物以得到式(Gb)的化合物而制得式(G)化合物。然后，在堿性條件下，如在三乙胺存在下，在0-5℃，優(yōu)選0℃下，對(duì)式(Gb)化合物進(jìn)行去質(zhì)子處理，然后，與甲醛反應(yīng)，再用堿液，優(yōu)選碳酸鉀處理，得到式(Gc)化合物，再按常規(guī)分離方法從反應(yīng)混合物中分離出式(Gc)化合物。
隨后，在堿性條件下，優(yōu)選在氫氧化鋰存在下水解式(Gc)化合物以得到式(Gd)化合物。之后，在惰性氣氛下，在90-100℃，優(yōu)選95℃下，用過(guò)量摩爾量的硫代乙酸與式(Gd)化合物反應(yīng)。然后，按照常規(guī)的分離技術(shù)如通過(guò)萃取和蒸發(fā)從反應(yīng)混合物中分離出式(G)的化合物。F.式(If)和(Ig)化合物的制備式(If)的化合物為式(I)的化合物，其中R1為乙?；蚧?；R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中定義。
式(Ig)的化合物為式(I)的化合物，其中R1為巰基；R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中定義。
式(If)和(Ig)的化合物按照如下的反應(yīng)路線6制備，其中R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中定義
反應(yīng)路線6 式(D)化合物如上述B部分制備。
式(G)化合物如上述E部分制備。
通常，在酰胺偶合條件下，首先使式(G)化合物與式(D)化合物偶合得到式(If)化合物而制備式(If)和(Ie)化合物。例如，向非質(zhì)子傳遞溶劑，優(yōu)選DMF中的式(G)化合物和HOBT的溶液中加入過(guò)量摩爾量的EDCI。在室溫下過(guò)夜攪拌形成的混合物。隨后，按照常規(guī)分離技術(shù)，如通過(guò)溶劑蒸發(fā)、萃取和快速色譜從反應(yīng)混合物中分離出所得式(If)化合物。之后，在堿性條件下，優(yōu)選在氫氧化銨存在下在質(zhì)子傳遞溶劑如甲醇中水解式(If)化合物以形成式(Ig)化合物。
此外，所有以游離酸或游離堿形式存在的式(I)化合物可轉(zhuǎn)化成它們的可藥用鹽，即分別用適宜的無(wú)機(jī)或有機(jī)堿或者用適宜的無(wú)機(jī)或有機(jī)酸進(jìn)行處理。式(I)化合物的鹽也可轉(zhuǎn)化成游離酸或游離堿形式或轉(zhuǎn)化成另一種鹽。
簡(jiǎn)而言之，式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)和(Ig)的化合物(均為式(I)的化合物)的制備過(guò)程如下1、使式(D)的化合物(其中R3和R4如發(fā)明概述中定義；R5為氫)與式(E)的化合物(其中R6為任選取代的芳基，芳基為喹啉-2-基、奈-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基；R2為烷基)反應(yīng)形成式(Ia)的化合物(其中R1為 其中R6如式(E)化合物中的定義；R2、R3、R4和R5如式(D)或(E)化合物中的定義)；或2、式(F)的化合物(其中R2如發(fā)明概述中的定義；R3為烷基或芐基)與式(D)化合物(其中R3、R4和R5如發(fā)明概述中的定義)反應(yīng)形成式(Ib)的化合物(其中R1為烷氧羰基或芳烷氧羰基；R2、R3、R4、R5和R8如式(F)或(D)化合物中的定義)；或3、處理式(Ib)化合物(其中R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中的定義；R8為烷基或芐基)形成式(Ic)的化合物(其中R1為羧基；R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中的定義)；或4、使式(Ic)化合物(其中R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中的定義)與鄰-芐基羥基胺反應(yīng)形成了式(Id)化合物(其中R1為芐氧基氨基甲酰基；R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中的定義)；或5、處理式(Id)的化合物(其中R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中的定義)形成式(Ie)的化合物(其中R1為羥基氨基甲?；籖2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中的定義)；或6、使式(G)的化合物(其中R2如發(fā)明概述中的定義)與式(D)的化合物(其中R3、R4和R5如發(fā)明概述中的定義)反應(yīng)形成式(If)化合物(其中R1為乙?；蚧?；R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中的定義)；或7、處理式(If)化合物(其中R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中的定義)形成式(Ig)的化合物(其中R1為巰基；R2、R3、R4和R5如發(fā)明概述中的定義)。
以下給出具體的制備過(guò)程和實(shí)施例，它們用來(lái)幫助實(shí)施本發(fā)明，但它們并不作為對(duì)本發(fā)明范圍的限定。
實(shí)施例1式(Ea)的化合物A.在室溫下，將細(xì)晶次膦酸(8.4g，0.13mol)在純?cè)姿崛阴?22ml，0.20mL)中攪拌90分鐘。然后經(jīng)套管轉(zhuǎn)移至攪拌中的異丁基丙烯酸乙酯(ethylisobutylacrylate)(8g，0.036mol)和四甲基胍(4.5ml，0.036mol)的溶液中，該溶液已冷卻至0℃ 10分鐘。去除冰浴，反應(yīng)物再攪拌4小時(shí)?；旌衔镉?00ml乙醚稀釋，溶液用1N HCl(100ml)洗滌，水洗(4×100ml)，鹽水洗(100ml)，用硫酸鎂干燥。經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到8.15g的2-(乙氧基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸乙酯，淺黃色油，MS349(M-H2O)+。
B.按照類似的方法，制備下述式(Ea)的化合物2-(乙氧基)氧膦基甲基-5-苯基戊酸乙酯；2-(乙氧基)氧膦基甲基-4-苯基丁酸乙酯；2-(乙氧基)氧膦基甲基-3-苯基丙酸乙酯；2-(乙氧基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酸乙酯；2-((乙氧基)氧膦基甲基)戊酸乙酯。
實(shí)施例2式(Eb)的化合物A.將粗產(chǎn)物2-(乙氧基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸乙酯(26g)溶解于600ml THF/CH2Cl2(50/50)中，并冷卻至0℃。向溶液中加入N，N-二異丙基乙基胺(32ml)和90.8ml的雙-(三甲基甲硅烷基)乙酰胺，形成的混合物攪拌20分鐘，然后加入仲甲醛(5.5g)。將溶液加溫至室溫，并在37℃下加熱18小時(shí)。通過(guò)蒸發(fā)除去溶劑，形成的油溶解于200ml的乙酸乙酯中。溶液用50ml的1N HCl(2次)、50ml的鹽水(2次)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過(guò)濾及蒸發(fā)后，得到19.3g的2-(乙氧基)(羥甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸乙酯，淡黃色油，MS281.2(MH+)。
B.按照類似的方法，制備下述式(Eb)的化合物2-(乙氧基)(羥甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊酸乙酯；2-(乙氧基)(羥甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁酸乙酯；2-(乙氧基)(羥甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙酸乙酯；
2-(乙氧基)(羥甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酸乙酯；2-((乙氧基)(羥甲基)氧膦基甲基)戊酸乙酯。
實(shí)施例3式(Ec)的化合物A.將2-(乙氧基)(羥甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸乙酯(5g)溶解于20ml CH2Cl2中并冷卻至-20℃(兩份)。向溶液中滴加甲磺酰氯(1.5ml)和三乙胺(3.0ml)。15分鐘后，撤去冰浴，在室溫下使反應(yīng)進(jìn)行3.5小時(shí)。每一份溶液用10ml冷的2％HCl、10mlNaHCO3(飽和)、10ml鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過(guò)濾及蒸發(fā)后，得到12.8g(合并產(chǎn)生)的2-(乙氧基)(甲磺酰基氧基甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸乙酯。
B.按照類似的方法，只是用對(duì)甲苯磺酰氯代替甲磺酰氯，制備2-(乙氧基)-(對(duì)甲苯磺酰氧基甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸乙酯。
C.按照類似的方法，制備下述式(Ec)的化合物2-(乙氧基)(甲磺酰氧基甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊酸乙酯；2-(乙氧基)(甲磺酰氧基甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁酸乙酯；2-(乙氧基)(甲磺酰氧基甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙酸乙酯；2-(乙氧基)(甲磺酰氧基甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酸乙酯；2-((乙氧基)(甲磺酰氧基甲基)氧膦基甲基)戊酸乙酯；2-(乙氧基)(對(duì)甲苯磺酰氧基甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊酸乙酯；2-(乙氧基)(對(duì)甲苯磺酰氧基甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁酸乙酯；2-(乙氧基)(對(duì)甲苯磺酰氧基甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙酸乙酯；2-(乙氧基)(對(duì)甲苯磺酰氧基甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酸乙酯；和2-((乙氧基)(對(duì)甲苯磺酰氧基甲基)氧膦基甲基)戊酸乙酯。
實(shí)施例4式(Ee)的化合物在0℃下，將氫化鈉(1.52g(60％))和2-喹啉硫醇(6g)在50ml DMF中一起攪拌。在最初的H2釋放平息后，混合物在室溫下攪拌2.5小時(shí)。然后，將混合物冷卻至0℃，經(jīng)套管加入于10ml DMF中的2-(乙氧基)(甲磺酰基氧基甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸乙酯(12.8g)。形成的混合物攪拌18小時(shí)后，緩慢升溫至室溫。蒸發(fā)除去DMF后，殘余物溶于50ml乙酸乙酯并用50ml水(2次)、鹽水(50ml)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，蒸發(fā)，得到黃色的半固體。使用10％的乙酸乙酯/己烷-80％的乙酸乙酯/己烷洗脫進(jìn)行的快速色譜純化后，得到10g的2-(乙氧基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸乙酯(Rf0.35 80％乙酸乙酯/己烷)，MS424.1(MH+)。
B.按照類似的方法，只是用1-萘硫醇、2-萘硫醇或苯硫酚代替2-喹啉硫醇，制備下述式(Ee)的化合物2-(乙氧基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸乙酯；2-(乙氧基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸乙酯；和
2-(乙氧基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸乙酯。
C.按照類似的方法，制備下述式(Ee)的化合物2-(乙氧基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊酸乙酯；2-(乙氧基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁酸乙酯；2-(乙氧基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙酸乙酯；2-(乙氧基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酸乙酯；2-((乙氧基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基)戊酸乙酯；2-(乙氧基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊酸乙酯；2-(乙氧基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁酸乙酯；2-(乙氧基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙酸乙酯；2-(乙氧基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酸乙酯；2-((乙氧基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基)戊酸乙酯；2-(乙氧基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊酸乙酯；2-(乙氧基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁酸乙酯；
2-(乙氧基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙酸乙酯；2-(乙氧基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酸乙酯；2-((乙氧基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基)戊酸乙酯；2-(乙氧基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊酸乙酯；2-(乙氧基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁酸乙酯；2-(乙氧基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙酸乙酯；2-(乙氧基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酸乙酯；2-((乙氧基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基)戊酸乙酯。
實(shí)施例5式(E)的化合物A.將2-(乙氧基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸乙酯(4.5g)溶于100ml THF中，向其中一起加入12.5ml的2NNaOH和足量的甲醇，使溶液均勻。18小時(shí)后，經(jīng)蒸發(fā)除去THF。殘余物用50ml H2O稀釋，用50ml乙酸乙酯洗滌。水相酸化至pH為4，產(chǎn)物用50ml乙酸乙酯萃取(2次)。乙酸乙酯用20ml鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，蒸發(fā)，得到3.8g的2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸，黃色油，MS368(MH+)。
B.按照類似的方法，制備下述式(E)的化合物2-(羥基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸；2-(羥基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸；2-(羥基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸。
C.按照類似的方法，制備下述式(E)的化合物
2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊酸；2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁酸；2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙酸；2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酸；2-((羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基)戊酸；2-(羥基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊酸；2-(羥基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁酸；2-(羥基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙酸；2-(羥基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酸；2-((羥基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基)戊酸；2-(羥基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊酸；2-(羥基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁酸；2-(羥基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙酸；2-(羥基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酸；2-((羥基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基)戊酸；2-(羥基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊酸；2-(羥基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁酸；2-(羥基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙酸；2-(羥基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酸；2-((羥基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基)戊酸。
實(shí)施例6式(E)化合物的拆分將2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基-甲基-4-甲基戊酸(5.3g)溶解于50ml熱的乙醇(無(wú)水)中，加入4.2g(-)-辛可尼定。室溫下30分鐘后，鹽開始沉淀出來(lái)。用薄片蓋住燒瓶使其靜置2天。隨后，通過(guò)抽濾除去鹽，將濾液蒸發(fā)至黃色泡沫。將鹽和濾液分別溶解于100ml乙酸乙酯，連接用1％HCl洗滌以除去辛可尼定，同時(shí)保持pH在4以上。兩份溶液分別經(jīng)MgSO4干燥，蒸發(fā)得到2.4g的單一立體異構(gòu)體，[α]D24＝+10.68°(9.73mg于甲醇中(2ml))和2.5g的另一單一立體異構(gòu)體，[α]D24＝-8.70°(9.88mg于甲醇中(2ml))。
實(shí)施例7式(B)的化合物A.向CH2Cl2(40ml)中的4-乙酰氨基苯磺酰氯(4.0g，17mmol)的冷(0℃)懸浮液中加入吡啶(1.7ml，20mmol)和DMAP(209mg，1.7mmol)。形成澄清的溶液。在0℃下1小時(shí)內(nèi)鼓泡加入無(wú)水甲胺，然后使溶液在25℃下攪拌2小時(shí)。溶液用1M NaOH(3×15ml)萃取，合并后的萃取液在0℃下用3M HCl調(diào)節(jié)pH至6。以松散的白色結(jié)晶沉淀出的產(chǎn)物濾出后，用冷水洗滌，得到3.2g(82％)的4-乙酰氨基-N-甲基苯磺酰胺；1H NMR(300MHz，MeOH)δ 2.35(s，3H)，2.70(s，3H)，7.96(s，4H)。
B.在氬氣氛下，將4-乙酰氨基-N-甲基苯磺酰胺(3.2g，14mmol)和100ml 1M的HCl的混合物回流3小時(shí)。冷卻至25℃后，加入CH2Cl2(10ml)，水相在0℃下用1M NaOH中和。分離水相，并用CH2Cl2(2×25ml)萃取。合并后的有機(jī)相用鹽水(10ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮，得到1.5g(58％)的式(B)化合物，其中R4為N-甲基磺酰胺，為無(wú)色固體；1H NMR(300MHz，MeOH)δ 2.46(s，3H)，6.67-6.72(AA1XX1的部分AA1，2H)，7.48-7.52(AA1XX1的部分XX1，2H)。
實(shí)施例8式(C)的化合物A.分批向DMF(30ml)中的N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸(1.4g，6.3mmol)與HOBT(1.5g，9.8mmol)的冷(0℃)溶液中加入EDCI(2.5g，14mmol)。在0℃下攪拌1小時(shí)后，形成的溶液用4-氨基苯甲酸甲酯(1.09ml，6.8mmol)和DMAP(0.32g，2.6mmol)處理。在25℃下攪拌24小時(shí)后，真空除去DMF。將殘余物溶解于CH2Cl2中，用飽和NaHCO3溶液、1MHCl(兩次)和鹽水洗滌。經(jīng)Na2SO4干燥后，真空濃縮，得到粗產(chǎn)物，該產(chǎn)物經(jīng)SiO2快速色譜(20％乙酸乙酯/己烷洗脫液)純化。得到1.0g(85％)的N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，為泡沫狀固體，MS(FAB)363(M-H)-。
B.按照類似的方法，制備下述式(C)的化合物N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-N′-苯基甲基甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-N′-苯基甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-N′-(4-乙氧羰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-(4-(N″-甲氨基磺?；?苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-蛋氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-(3-乙氧羰基苯基)甲酰胺；
N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-(2-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-(4-(1-甲基乙氧)羰基)苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-(氨基磺酰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基甲基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-吡啶-3-基丙氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-環(huán)己基甘氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-異亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-O-芐基蘇氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-t-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-(4-氰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-(4-(N″-(2-二甲基氨基乙基氨基甲酰基)苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-(4-(N″-(3-二甲基氨基丙基氨基甲?；?苯基)甲酰胺。
C.按照類似的方法，制備下述式(C)的化合物N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-N′-(4-硝基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-N′-(4-氨基苯基)甲酰胺；
N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-(4-甲基磺酰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-(4-乙基磺酰基苯基)甲酰胺；N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-(4-四唑基苯基)甲酰胺。
實(shí)施例9式(D)的化合物A.向無(wú)水CH2Cl2(10ml)中的N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸-N′-苯基甲酰胺(3.4g，11mmol)的冷(0℃)溶液中加入TFA(2ml)。溶液在25℃下攪拌6小時(shí)，隨后進(jìn)行真空濃縮。用CH2Cl2和H2O使殘余物分層，水層在0℃下用飽和K2CO3溶液堿化。分離出有機(jī)相，水層用CH2Cl2萃取3次。合并后的有機(jī)層用鹽水洗滌，Na2SO4干燥。濃縮后得到L-亮氨酸-N′-苯基甲酰胺。
B.按照類似的方法，制備下述化合物L(fēng)-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；L-色氨酸-N′-苯基甲基甲酰胺；L-色氨酸-N′-苯基甲酰胺；L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；L-色氨酸-N′-(4-乙氧羰基苯基)甲酰胺；L-亮氨酸-N′-(4-(N″-甲氨基磺?；?苯基)甲酰胺；L-丙氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；L-蛋氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；L-亮氨酸-N′-(3-乙氧羰基苯基)甲酰胺；L-亮氨酸-N′-(2-甲氧羰基苯基)甲酰胺；
L-亮氨酸-N′-(4-(1-甲基乙氧羰基)苯基)甲酰胺；L-亮氨酸-N′-(氨基磺?；交?甲酰胺；L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基甲基苯基)甲酰胺；L-吡啶-3-基丙氨基-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；L-螺環(huán)戊基甘氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；L-環(huán)己基甘氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；L-異亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；L-O-芐基蘇氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；L-t-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；L-亮氨酸-N′-(4-氰基苯基)甲酰胺；L-亮氨酸-N′-(4-(N″-(2-二甲基氨基乙基)氨基甲酰基)苯基)甲酰胺；L-亮氨酸-N′-(4-(N″-(3-二甲基氨基丙基)氨基甲酰基)苯基)甲酰胺。
C.按照類似的方法，制備下述式(D)的化合物L(fēng)-色氨酸-N′-(4-硝基苯基)甲酰胺；L-色氨酸-N′-(4-氨基苯基)甲酰胺；L-亮氨酸-N′-(4-甲基磺?；交?甲酰胺；L-亮氨酸-N′-(4-乙基磺?；交?甲酰胺；L-亮氨酸-N′-(4-四唑基苯基)甲酰胺。
實(shí)施例10式(Ia)的化合物A.向THF(6ml)中的2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酸(0.20g，0.54mmol)的冷(0℃)溶液中加入1，1′-羰基二咪唑(0.12g，0.7mmol)。在0℃下攪拌混合物75分鐘，然后，用L-色氨酸-N′-(4-乙氧羰基苯基)甲酰胺(0.22g，0.62mmol)，在25℃下攪拌15小時(shí)。蒸出THF，將殘余物溶解于乙酸乙酯(60ml)中。溶液用H2O(10ml)、鹽水(10ml)洗滌，用MgSO4干燥。隨后，使用乙腈和50mM NH4OAc緩沖液梯度(gradient)經(jīng)反相HPLC濃縮，得到30mg的N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊?；?-L-色氨酸-N′-(4-乙氧羰基苯基)甲酰胺，為灰白色固體，MS(FAB)701(M-H)+(非對(duì)映體的混合物)。
B.按照類似的方法，制備下述式(Ia)化合物N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酰基)-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；MS(FAB)687(M＋H)+；N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊?；?-L-丙氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；MS(FAB)572(M＋H)+；N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊?；?-L-蛋氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；MS(FAB)632(M＋H)+；化合物1N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；MS(FAB)614(M＋H)+；N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(3-乙氧羰基苯基)甲酰胺，
1H NMR(300MHz，MeOH)，δ0.73-1.01(m，12H)，1.28-2.00(m，14H)，2.4-3.61(m，2H)，4.27-4.45(m，3H)，7.23-7.44(m，3H)，7.65-7.98(m，6H)，8.29(s，0.5H)，8.50(s，0.5H)；N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(2-甲氧羰基苯基)甲酰胺；1H NMR(300MHz，MeOH)，δ0.78-0.99(m，13H)，1.3-2.4(m，7H)，2.90-3.05(m，1H)，3.5-3.75(m，2H)，3.89，3.90，3.94(3s，3H總和)，4.35-3.50(m，1H)，7.05-8.10(m，11H)，8.32，8.55 8.60(3d，J＝8.7，1H)；N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-(1，1-二甲基乙氧羰基)苯基)甲酰胺，MS(FAB)642(MH)+；N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-氨基磺?；交?甲酰胺；1H NMR(300MHz，MeOH)，δ0.76(d，J＝6.5，3H)，0.81(d，J＝6.5，3H)，0.85-1.1(m，7H)，1.2-2.1(m，7H)，2.92-2.95(m，1H)，3.45-3.70(m，2H)，4.35-4.45(m，1H)，7.28(d，J＝8.7，1H)，7.45(t，J＝8.7，1H)，7.68(t，J＝8.7，1H)，7.7-7.8(m，3H)，7.87(d，J＝8.7，1H)，7.95-8.1(m，3H)；N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基甲基苯基)甲酰胺，MS(FAB)628(MH)+。
C.按照類似的方法，制備下述式(Ia)的化合物N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-((羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基)戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-((羥基)(萘-1-基硫甲基)氧膦基甲基)戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-((羥基)(萘-2-基硫甲基)氧膦基甲基)戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-5-苯基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-4-苯基丁?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-3-苯基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-(羥基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基-3-環(huán)己基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-((羥基)(苯基硫甲基)氧膦基甲基)戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺。
D.在25℃下，將THF(2ml)和1M NaOH(1ml)中的N-(2-(羥基)喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊?；?-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺的溶液攪拌24小時(shí)。蒸出有機(jī)溶劑后，將殘余物溶解于乙酸乙酯/H2O中。水相用1M HCl酸化，分離出的水相用乙酸乙酯萃取兩次。合并后的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，濃縮至27mg的N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)-氧膦基甲基-4-甲基戊?；?-L-色氨酸-N′-(4-羧基苯基)甲酰胺，為黃色粉末。
E.用類似的方法，只是開始用N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺(30mg，0.048mmol)，在用乙酸乙酯研制后，得到10mg的N-(2-(羥基)(喹啉-2-基硫甲基)氧膦基甲基-4-甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-羧基苯基)甲酰胺，為半固體；1H NMR1(300MHz，MeOH)0.81-1.02(m，12H)，1.1-2.3(m，10H)，2.82-3.00(m，1H)，3.49-3.56(2s，2H)，3.5-3.8(m，2H)，4.45-4.55(m，1H)，7.09(d，J＝8.2，1H)，7.19(d，J＝8.2，1H)，7.45(t，J＝8.2，1H)，7.45-7.6(m，3H)，7.65-7.80(m，1H)，7.82-7.98(m，2H)，8.10-8.20(m，1H)。
實(shí)施例11式(Fa)的化合物A.在25℃水浴中的4-甲基戊酸(25g，0.215mmol)中緩慢地加入亞硫酰氯(20.4ml，1.3g)。在氬氣氛下在50℃下加熱混合物3小時(shí)(直至氣體釋出停止)。在大氣壓下蒸餾粗反應(yīng)混合物得到4-甲基戊酰氯(25.3g，87.3％)，b.p.143℃。
B.以類似的方法，只是用5-苯基戊酸(5g)代替4-甲基戊酸，得到5-苯基戊酰氯(4.4g)，為無(wú)色液體，b.p.91-93℃。
實(shí)施例12式(Fb)的化合物A.在室溫及氬氣氛下，向甲苯(200ml)中的60％NaH(836mg，1.5當(dāng)量)的懸浮液中分批加入L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺(3.0g，3.9mmol)。室溫下劇烈攪拌混合物1小時(shí)。隨后，在0℃下向溶液中小心滴加4-甲基戊酰氯。在室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí)后，用10ml水使反應(yīng)停止，加入70ml乙醚。反應(yīng)混合物依次用0.5N HCl(2×50ml)、5％K2CO3(3×50ml)及鹽水(1×50ml)洗滌。有機(jī)層用MgSO4干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)至干。經(jīng)柱色譜(1∶6乙酸乙酯/石油醚作洗脫液)純化，得到N-4-甲基戊酰基-L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺(3.39g，78％)。
B.以類似的方法，只是用相應(yīng)的氯化物代替4-甲基戊酰氯，得到下式(Fb)的化合物N-3-苯基丙?；?L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺，MS347(M+)；N-5-苯基戊?；?L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺；MS375 M+；N-戊?；?L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺，MS300(M＋H)+。
實(shí)施例13式(Fc)的化合物A.向在氬氣氛及-78℃下，75ml無(wú)水THF中的N-4-甲基戊酰基-L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺(3.39g，10.8mmol)的溶液中在5分鐘內(nèi)滴加NaN(TMS)2(1.0M的THF溶液，11.34ml，1.05當(dāng)量)。于-78℃攪拌1小時(shí)后，向混合物中加入六甲基磷酰胺(5ml)，隨后加入溴乙酸叔丁酯(5.2ml，3當(dāng)量)，再一次加入400mg的碘化四正丁基銨。形成的溶液在-78℃氬氣氛下過(guò)夜放置。第二天早上，用水(100ml)停止反應(yīng)，然后用乙醚(3×100ml)萃取。合并后的乙醚層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，過(guò)濾，濃縮。經(jīng)柱色譜(5∶95乙酸乙酯/石油醚-10∶90乙酸乙酯/石油醚作洗脫液)純化，得到N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基)戊?；?L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺(4g，86.5％)。
B.以類似的方法，只是用合適的式(Fb)化合物代替N-4-甲基戊?；?L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺，得到如下式(Fc)的化合物N-(3-苯基-2-叔丁氧羰基甲基)丙酰基-L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺，MS461(M+)；N-(5-苯基-2-叔丁氧羰基甲基)戊?；?L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺；MS490.1(M＋H)+；N-(2-叔丁氧羰基甲基)戊酰基-L-(+)-樟腦磺內(nèi)酰胺，MS414(M＋H)+。
實(shí)施例14式(F)的化合物A.在0℃，氬氣氛下，向于50％含水THF(150ml)中的N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基)戊酰基-L-(+)-2，10-樟腦磺內(nèi)酰胺(5.45g，12.7mmol)的攪拌溶液中加入LiOH·H2O晶體(2.14g，4當(dāng)量)，再加入30％的H2O2(11.5ml)。除去冰浴，在形成的乳液變得澄清之前，攪拌3小時(shí)。在35℃下減壓除去大部分THF。加入CH2Cl2(150ml)，攪拌下加入4N HCl至pH＝2。加入NaCl后，水層用CH2Cl2(3×150ml)萃取。35℃減壓除去CH2Cl2后，將殘余物吸收入乙酸乙酯(150ml)中。該溶液用5％K2CO3(3×50ml)萃取，合并后的萃取液用乙醚(50ml)洗滌。向水層中加入CH2Cl2，攪拌下再加入NaCl。水層用CH2Cl2(3×70ml)萃取，合并后的萃取液用Na2SO4干燥，過(guò)濾，濃縮，得到(2R)-4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊酸，為無(wú)色油(2.95g，定量產(chǎn)出)。
B.以類似的方法，只是用合適的式(Fc)的化合物代替N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基)戊酰基-L-(+)-2，10樟腦磺內(nèi)酰胺，制備下式(F)的化合物(2R)-3-苯基-2-叔丁氧羰基甲基丙酸，MS265(M＋H)+；(2R)-5-苯基-2-叔丁氧羰基甲基戊酸，MS293.1(M＋H)+；(2R)-2-叔丁氧羰基甲基戊酸，(無(wú)色油，1.09g)。
C.將(2R)-3-苯基-2-叔丁氧羰基甲基丙酸(55mg)吸收于冰醋酸(20ml)中，PtO2(25mg)加在乙酸中。將燒杯放置在帕爾彈(Parr bomb)中，將其抽空，充入100psi的H2。攪拌3天后，通過(guò)1cm的硅藻土(Celite)床抽濾混合物。將濾液濃縮至黃色油，(2R)-3-環(huán)己基-2-叔丁氧羰基甲基丙酸(56mg)，MS269.5(M-H)-。
實(shí)施例15A.向含HOBT(0.22g，1.8mmol)于DMF(5ml)中的4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊酸(0.28g，1.2mmol)的溶液中加入EDCI(0.31g，1.8mmol)。在0℃下攪拌混合物1小時(shí)，然后用L-環(huán)己基甘氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺(1.2mmol)和DMAP(27mg，0.24mmol)處理。繼續(xù)在25℃下攪拌24小時(shí)，然后蒸出DMF。將殘余物溶于CH2Cl2(20ml)中，溶液用1M HCl(10ml)、飽和NaHCO3(10ml)、鹽水(10ml)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，真空濃縮得到一種油，它經(jīng)SiO2快速色譜(20％乙酸乙酯/己烷作洗脫液)純化，得到0.22g(22％)的N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊?；?-L-環(huán)己基甘氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，為固體，MS(FAB)503(MH)+。
B.按照類似的方法，制備下述化合物N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊酰基)-L-吡啶-3-基丙氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊?；?-L-鄰-芐基蘇氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊?；?-L-異亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基甲基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊?；?-L-t-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-氰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-(N″-(3-二甲基氨基丙基)氨基甲酰基)苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-(N″-(2-二甲基氨基乙基)氨基甲?；?苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-氨基磺?；交?甲酰胺；N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲基氨基磺?；交?甲酰胺；N-(2-叔丁氧羰基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；
N-(3-苯基-2-叔丁氧羰基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(3-環(huán)己基-2-叔丁氧羰基甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-苯基-2-叔丁氧羰基甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(5-苯基-2-叔丁氧羰基甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺。
實(shí)施例16式(Ic)的化合物A.向CH2Cl2(2ml)中的N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊?；?-L-環(huán)己基甘氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺(70mg，0.14mmol)的冷(0℃)溶液中加入TFA(0.5ml)。在25℃下攪拌5小時(shí)后，真空濃縮該溶液，產(chǎn)物用反相HPLC(乙腈和50mM NH4OAc緩沖液梯度)純化，得到44mg(71％)的N-(4-甲基-2-羧基甲基戊?；?-L-環(huán)己基甘氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，為白色固體，MS(FAB)445(M－H)-。
B.按照類似的方法，制備下述化合物N-(4-甲基-2-羧甲基戊酰基)-L-異亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)419(M－H)-；N-(4-甲基-2-羧甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)419(M－H)-；N-(4-甲基-2-羧甲基戊?；?-L-t-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；
N-(4-甲基-2-羧甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-氰基苯基)甲酰胺，1H NMR1(300MHz，MeOH)δ0.84-0.99(m，12H)，1.15-1.82(m，6H)，2.36-2.41(m，1H)，2.52-2.65(m，1H)，2.8-2.95(m，1H)，4.49-4.54(m，1H)，7.4-7.9(m，4H)；N-(4-甲基-2-羧甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-氨基磺?；交?甲酰胺，1H NMR1(300MHz，MeOH)δ0.85-1.00(m，12H)，1.1-1.3(m，2H)，1.52-1.85(m，4H)，2.31-2.95(m，3H)，4.49-4.55(m，1H)，7.75-7.91(m，4H)；N-(4-甲基-2-羧甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲基氨基磺酰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)459(M－H)-；N-(2-羧甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)405(M－H)-；N-(3-苯基-2-羧甲基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)455(M＋H)+；N-(3-環(huán)己基-2-羧甲基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)459(M－H)-；N-(4-苯基-2-羧甲基丁?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)467(M－H)-；N-(4-苯基-2-羧甲基丁酰基)-L-環(huán)己基甘氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-苯基-2-羧甲基丁?；?-L-t-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；
N-(5-苯基-2-羧甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)481(M－H)-；N-(4-甲基-2-羧甲基戊?；?-L-鄰-芐基蘇氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)497(M－H)-。
C.按照類似的方法，只是用乙醚研制粗產(chǎn)物，然后潷析出乙醚，得到下列作為TFA鹽的化合物N-(4-甲基-2-羧甲基戊?；?-L-吡啶-3-基丙氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)456(M＋H)+；N-(4-甲基-2-羧甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-(N″-(3-二甲基氨基丙基)氨基甲酰基)苯基)甲酰胺，MS(FAB)491(M＋H)+；N-(4-甲基-2-羧甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-(N″-(2-二甲基氨基乙基)氨基甲?；?苯基)甲酰胺，MS(FAB)491(M＋H)+。
D.在1atm下，過(guò)夜氫化N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊酰基)-L-鄰-芐基蘇氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺(60mg)與Pd/C在乙酸乙酯/THF(1∶1，25ml)中的混合物。通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濃縮濾液，殘余物用乙醚/己烯研制，得到N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基-戊?；?-L-蘇氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)407(M－H)-。
實(shí)施例17式(Id)的化合物A.將無(wú)水DMF(20ml)中的N-(4-甲基-2-羧甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺(0.28g，0.66mmol)與HOBT(0.12g)的溶液冷卻至0℃，用EDCI(0.32g)處理。在0℃攪拌0.5小時(shí)后，加入鄰-芐基羥基胺(0.30ml)，反應(yīng)物加溫至25℃過(guò)夜。真空除去DMF，殘余物吸收于CH2Cl2中，用5％HCl/5％NaHCO3及鹽水洗滌，用Na2SO4干燥。濃縮后，經(jīng)快速色譜(SiO2，Rf＝0.6，10％MeOH/CH2Cl2)純化。含產(chǎn)物的餾分進(jìn)一步用CH2Cl2研制而純化，得到N-(4-甲基-2-(N″-芐氧基氨基甲?；?甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，為固體，mp198-199℃。
B.按照類似的方法，制備下述化合物N-(2-(N″-芐氧基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-苯基-2-(N″-芐氧基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-(N″-芐氧基氨基甲酰基)甲基戊?；?-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺。
C.用1M NaOH(1.4ml)在50-60℃下，于THF(20ml)和MeOH(5ml)中水解N-(4-甲基-2-(N″-芐氧基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺(210mg)。蒸出有機(jī)溶劑，殘余物吸收于10ml H2O中，用乙醚(2×10ml)洗滌。水相用10％HCl酸化至pH為2，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。合并后的萃取液用鹽水洗滌、經(jīng)Na2SO4干燥，濃縮，得到N-(4-甲基-2-(N″-芐氧基氨基甲?；?甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-羧基苯基)甲酰胺(110mg)。
實(shí)施例18
式(Ie)的化合物A.向于20ml MeOH和10ml THF中的N-(4-苯基-2-(N″-芐氧基氨基甲酰基)甲基丁?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺(25mg)的溶液中加入10％Pd/C(20mg)。懸浮液被氫化1小時(shí)，然后通過(guò)硅藻土抽濾。濃縮，得到的產(chǎn)物用硅膠(2.5％MeOH/CH2Cl2)純化，得到8mg的N-(4-苯基-2-(N″-羥基氨基甲酰基)甲基丁?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)482(M－H)-。
B.按照類似的方法，制備下述化合物N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲酰基)甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-羧基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)436(M＋H)+；化合物2N-(2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)420(M－H)-；N-(4-苯基-2-(N″-羥基氨基甲酰基)甲基丁?；?-L-t-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-苯基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基丁?；?-L-環(huán)己基甘氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-苯基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲酰基)甲基戊?；?-L-t-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；
N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，MS(FAB)507(M－H)-；化合物3(2R)；化合物4(2S)；和N-(4-苯基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基丁?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺。
C.按照類似的方法，制備下述化合物N-(3-苯基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基丙酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(5-苯基-2-(N″-羥基氨基甲酰基)甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(3-環(huán)己基-2-(N″-羥基氨基甲酰基)甲基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺。
實(shí)施例19式(Gb)的化合物A.在30分鐘內(nèi)，向150ml乙醇中的異丁基丙二酸二乙酯(21.6g，0.1mol)的冷(0℃)溶液中，緩慢加入KOH溶液(5.89g，0.1mol)。在25℃下攪拌該澄清溶液60小時(shí)。減壓除去乙醇，將固體殘余物溶解于50ml H2O中。用4M HCl酸化該水溶液至pH為2，用乙醚(2×50ml)萃取。合并后的萃取液用MgSO4干燥，蒸發(fā)以得到19.0g(100％)的異丁基丙二酸乙酯，為無(wú)色油。
B.以類似的方法，制備下式(Gb)的化合物叔丁基丙二酸乙酯；丙基丙二酸乙酯；芐基丙二酸乙酯；和環(huán)己基甲基丙二酸乙酯。
實(shí)施例20式(Gc)和(Gd)的化合物A.向0℃下純的異丁基丙二酸乙酯(25g，0.13mol)中緩慢地加入冰冷的二乙胺(15.1ml，0.15mol)。攪拌15分鐘后，滴加福爾馬林(11.1ml的37％甲醛水溶液)，混合物在25℃下攪拌3天。反應(yīng)物用20g K2CO3在40ml H2O中的溶液處理，用乙醚萃取(2×100ml)。合并后的乙醚層用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器20℃下蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物4-甲基-2-亞甲基戊酸乙酯(含有一些醚)溶解于250ml無(wú)水乙醇中，用乙腈(250ml)、1M LiOH(9.7g在250ml H2O中，0.23mol)處理。攪拌過(guò)夜后，蒸出有機(jī)溶劑，含水殘余物用乙酸乙酯萃取(2×150ml)。合并后的萃取液用鹽水洗滌、干燥(MgSO4)，蒸發(fā)，得到10.5g的4-甲基-2-亞甲基戊酸，為無(wú)色油。
B.以類似的方法，制備下式(Gd)的化合物4-苯基-2-亞甲基丁酸；3-環(huán)己基-2-亞甲基丙酸；5-苯基-2-亞甲基戊酸；2-亞甲基戊酸；和3，3-二甲基-2-亞甲基丁酸。
實(shí)施例21式(G)的化合物A.在氬氣氛下將4-甲基-2-亞甲基戊酸(5.0g)和硫代乙酸(25ml)的混合物在95℃下加熱3天。蒸出過(guò)量的硫代乙酸，將殘余的油溶于乙酸乙酯(40ml)中，用飽和NaHCO3(3×40ml)萃取。合并后的NaHCO3萃取液用1M HCl在0℃下酸化至pH為2。水層用CH2Cl2(3×40ml)萃取，合并后的有機(jī)相經(jīng)MgSO4干燥，最后進(jìn)行蒸發(fā)，得到3.0g的4-甲基-2-乙酰硫基甲基戊酸；1H NMR(80MHz，CDCl3)δ0.95(d，J＝8.0，6H)，1.20-1.90(m，4H)，2.35(s，3H)，2.50-3.20(m，3H)，6.7(br s，1H)。
實(shí)施例22式(If)的化合物A.向無(wú)水DMF(15ml)中含HOBT(92mg，0.6mmol)和L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺(0.6mmol)的4-甲基-2-乙酰硫基甲基戊酸(204mg，1.0mmol)的溶液中，加入EDCI(345mg，1.8mmol)。溶液在25℃下過(guò)夜攪拌，隨后真空除去DMF。將殘余物溶解于乙酸乙酯(35ml)中，用1M HCl、1M NaOH和鹽水洗滌。經(jīng)MgSO4干燥及蒸發(fā)后，得到一種半固體，將其在硅膠(乙酸乙酯1石油醚2)上快速色譜純化，得到N-(4-甲基-2-乙酰硫基-甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺(190mg)，為白色固體。
B.按照類似的方法，制備下述式(If)的化合物N-(5-苯基-2-乙?；蚧谆祯；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-苯基-2-乙?；蚧谆□；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(3-苯基-2-乙?；蚧谆；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；
N-(3-環(huán)己基-2-乙酰基硫基甲基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-乙?；蚧谆祯；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(5-苯基-2-乙?；蚧谆祯；?-L-亮氨酸-N′-(4-氨基羰基苯基)甲酰胺；N-(4-苯基-2-乙?；蚧谆□；?-L-亮氨酸-N′-(4-羧基苯基)甲酰胺；N-(3-苯基-2-乙酰基硫基甲基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲磺?；交?甲酰胺；N-(3-環(huán)己基-2-乙?；蚧谆；?-L-亮氨酸-N′-(4-氨基甲?；交?甲酰胺；N-(2-乙?；蚧谆祯；?-L-亮氨酸-N′-(4-氰基苯基)甲酰胺；N-(5-苯基-2-乙?；蚧谆祯；?-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-苯基-2-乙?；蚧谆□；?-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(3-苯基-2-乙?；蚧谆；?-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(3-環(huán)己基-2-乙酰基硫基甲基丙?；?-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-乙?；蚧谆祯；?-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺。
實(shí)施例23式(Ig)的化合物A.在0℃下向于MeOH(8ml)中的N-(4-甲基-2-乙酰硫基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺(85mg，0.19mmol)的溶液中加入濃NH4OH(0.4ml)。在0℃下攪拌5小時(shí)后，蒸出甲醇，加入乙醚(30ml)。乙醚溶液用0.5M HCl、鹽水洗滌，用MgSO4干燥。濃縮后，得到定量產(chǎn)出的N-(4-甲基-2-巰基甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺，為白色泡沫，MS(FAB)407(M－H)-。
B.按照類似的方法，制備下述式(Ig)的化合物N-(5-苯基-2-巰基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-苯基-2-巰基甲基丁?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(3-苯基-2-巰基甲基丙酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(3-環(huán)己基-2-巰基甲基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-巰基甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(5-苯基-2-巰基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-氨基羰基苯基)甲酰胺；N-(4-苯基-2-巰基甲基丁?；?-L-亮氨酸-N′-(4-羧基苯基)甲酰胺；
N-(3-苯基-2-巰基甲基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲磺?；交?甲酰胺；N-(3-環(huán)己基-2-巰基甲基丙?；?-L-亮氨酸-N′-(4-氨基甲酰基苯基)甲酰胺；N-(2-巰基甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-氰基苯基)甲酰胺；N-(5-苯基-2-巰基甲基戊?；?-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-苯基-2-巰基甲基丁?；?-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(3-苯基-2-巰基甲基丙酰基)-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(3-環(huán)己基-2-巰基甲基丙酰基)-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(2-巰基甲基戊?；?-L-色氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺。
實(shí)施例24本實(shí)施例表明代表性口服給藥形式的藥用組合物的制備方法，該組合物包含式(I)的化合物或其可藥用鹽，如，N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-羧基羰基苯基)甲酰胺A.組分 ％wt./wt.
式(I)的化合物 20.0％乳糖 79.5％
硬脂酸鎂0.5％將上述組分混合，并分配入硬殼的明膠膠囊中，每個(gè)包含100mg，一個(gè)膠囊大約為一天的劑量。
B.組分 ％wt./wt.
式(I)的化合物 20.0％硬脂酸鎂0.9％淀粉8.6％乳糖 69.6％PVP(聚乙烯基吡咯烷酮) 0.9％將上述除硬脂酸鎂外的組分合并，用水作為造粒液體進(jìn)行造粒。將制劑干燥，與硬脂酸鎂混合，用適宜的壓片機(jī)進(jìn)行壓片。
C.組分式(I)的化合物0.1g丙二醇 20.0g聚乙二醇400 20.0g多乙氧基醚 1.0g0.9％水 足量至100ml將式(I)化合物溶解于丙二醇、聚乙二醇400和多乙氧基醚中。然后攪拌下加入足量的水以得到100ml的溶液，將其過(guò)濾，裝瓶。
D.組分 ％wt./wt.
式(I)的化合物 20.0％花生油 78.0％山梨糖醇酯類(span 60)2.0％將上述組分熔化、混合后，裝入軟塑料膠囊中。
實(shí)施例25本實(shí)施例表明代表性胃腸外給藥形式的藥用組合物的制備方法，該組合物包含式(I)的化合物或其可藥用鹽，如，N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-色氨酸-N′-(4-羧基苯基)甲酰胺組分式(I)的化合物 0.02g丙二醇 20.0g聚乙二醇40020.0g多乙氧基醚 1.0g0.9％鹽水溶液足量至100ml將式(I)化合物溶解于丙二醇、聚乙二醇400和多乙氧基醚中。然后攪拌下加入足量的0.9％鹽水溶液以得到100ml的靜脈注射溶液，將其通過(guò)0.2μ的膜過(guò)濾，在無(wú)菌條件下包裝。
實(shí)施例26本實(shí)施例表明代表性栓劑形式的藥用組合物的制備方法，該組合物包含式(I)的化合物或其可藥用鹽，如N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-羰基苯基)甲酰胺組分 ％wt./wt.
式(I)的化合物 1.0％聚乙二醇1000 74.5％聚乙二醇4000 24.5％將上述組分在蒸氣浴上熔化、混合，然后將其倒入塑模(molds)中，每個(gè)包含2.5g(總量)。
實(shí)施例27本實(shí)施例表明代表性吹入劑形式的藥用組合物的制備方法，該組合物包含式(I)的化合物或其可藥用鹽，如，N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲酰基)甲基戊?；?-L-環(huán)己基甘氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺組分％wt./wt.
細(xì)微化的式(I)的化合物 1.0％細(xì)微化的乳糖 99.0％將上述組分粉碎、混合，將其裝入備有劑量泵的吹入器中。
實(shí)施例28本實(shí)施例表明代表性噴霧劑形式的藥用組合物的制備方法，該組合物包含式(I)的化合物或其可藥用鹽，如，N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-t-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺組分 ％wt./wt.
式(I)的化合物 0.005％水 89.995％乙醇 10.000％將式(I)化合物溶解于乙醇并與水混和。然后將制劑裝入備有劑量泵的噴霧器中。
實(shí)施例29本實(shí)施例表明代表性氣溶膠形式的藥用組合物的制備方法，該組合物包含式(I)的化合物或其可藥用鹽，如，N-(4-甲基-2-巰基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺組分％wt./wt.
式(I)的化合物0.10％推進(jìn)劑11/12 98.90％油酸 1.00％將式(I)化合物分散于油酸和推進(jìn)劑中。將形成的混合物倒入備有計(jì)量閥的氣溶膠容器中。
實(shí)施例30體外測(cè)定Matrilysin是通過(guò)藍(lán)瓊脂糖(Blue-Sepharose)和鋅-鏊合瓊脂糖柱由克隆哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基純化，并隨之在MONO S柱上由快速蛋白質(zhì)液相色譜純化。該酶通過(guò)用1mmol APMA在35-37℃下培養(yǎng)1小時(shí)活化。
將式(I)的化合物溶解于DMSO中，并被加至一個(gè)包含0.4μg ma-trilysin于1ml TC緩沖液(20mM Tris，5mM CaCl2，pH7.5)(2％DMSO最終濃度)的小池中。選擇式(I)化合物的濃度使每20％活性變化時(shí)有一個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)。酶與化合物允許在37℃下預(yù)培養(yǎng)3分鐘。為了起動(dòng)該反應(yīng)，分別加入N-(7-二甲基氨基-4-甲基)香豆素(coumarinyl)(“DACM”)(Sigma)和硫肽(Ac-Pro-Leu-Gly-S“Leu”-Leu-Gly-OEt，Bachem Bioscience Inc.)至20μM。分別用395和485mm激發(fā)與發(fā)射波長(zhǎng)記錄熒光的增加。每一個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)為兩次單行實(shí)驗(yàn)的平均值。使用Enzfitter程序的IC50Fit來(lái)分析對(duì)化合物濃度的每分鐘熒光變化來(lái)表示的至少六個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)。
本測(cè)定中試驗(yàn)表明式(I)化合物抑制matrilysin的能力。
IC50(nM)HFC PUMPHNG STROM.化合物2 8.4 k1＝140fM 1.4實(shí)施例31體外測(cè)定本次測(cè)定確定式(I)的化合物是否抑制來(lái)自軟骨移植物的35S標(biāo)記的葡糖氨基聚糖(GAG′s)的釋放。
小的軟骨移植物(直徑3mm)由通過(guò)新殺的牛膝關(guān)節(jié)制備的，并用35SO4標(biāo)記。35S標(biāo)記的葡糖氨基聚糖(GAG′s)被釋放入培養(yǎng)基中以響應(yīng)rhIL-1-alpha的加入，它引導(dǎo)軟骨細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP′s)包括stromelysin和膠原酶的表達(dá)。標(biāo)記的GAG′s的抑制百分?jǐn)?shù)在不存在rhIL-1-alpha時(shí)對(duì)自發(fā)釋放進(jìn)行校正。每組的結(jié)果對(duì)五個(gè)移植物表示平均±S.E.M.。
在該測(cè)定中，式(I)化合物顯示出抑制由軟骨移植物35S標(biāo)記的GAG′s的釋放的能力。
EC50(摩爾)化合物23.5×10-6實(shí)施例31體外測(cè)定體外鼠胎兒長(zhǎng)骨模型被用于研究式(I)化合物的抗骨吸收效果。牛PTH用于誘導(dǎo)體外的骨吸收。骨吸收效果通過(guò)由45Ca預(yù)標(biāo)記的鼠胎兒長(zhǎng)骨釋放的進(jìn)入培養(yǎng)基的45Ca量來(lái)表示。式(I)化合物對(duì)牛PTH誘導(dǎo)骨吸收的抑制效果由平均百分抑制率±sem表示。
由45Ca預(yù)標(biāo)記的鼠胎兒長(zhǎng)骨(來(lái)自前臂)被分割開，在37℃下于補(bǔ)充有1mg/ml BSA的BGJb培養(yǎng)基中，在Linbro皿中過(guò)夜培養(yǎng)。在每組中包含有五對(duì)骨頭。式(I)化合物先溶解于乙醇中，然后稀釋至各種濃度，在第一天同時(shí)加入1×10-8M的牛PTH(1-34)。在化合物溶液中的乙醇濃度小于0.05％不會(huì)干擾該測(cè)定。該測(cè)定在第6天終止，一個(gè)培養(yǎng)基在第3天改變。
在每一培養(yǎng)基改變終了時(shí)，對(duì)存在于培養(yǎng)基中的45Ca量進(jìn)行計(jì)數(shù)。其余的骨頭用0.1N HCl蒸煮，同時(shí)對(duì)蒸煮的骨頭中存在的45Ca量進(jìn)行計(jì)數(shù)。結(jié)果以總的由每對(duì)骨頭釋放的45Ca的％表示。1×10-8M的牛PTH引起骨吸收至最大量，該值設(shè)定為100％，該濃度用作標(biāo)準(zhǔn)。存在培養(yǎng)基時(shí)骨吸收的基線僅設(shè)定為0％。所有經(jīng)化合物處理的組與1×10-8M的牛PTH(1-34)比較。在化合物抑制骨吸收率為50％的濃度被定義為IC50。
在本次測(cè)定中，式(I)的化合物顯示出抑制由牛PTH吸引的骨吸收的能力。
IC50(摩爾)化合物1≥5×10-6化合物22.7×10-7化合物35×10-8化合物4≥5×10-6毒性在上述測(cè)定中未觀察到嚴(yán)重的毒理作用。
權(quán)利要求
1.一種單一立體異構(gòu)體或其混合物的式(I)的化合物或其可藥用鹽 其中R1為巰基、乙?；蚧?、羧基、羥基氨基甲?；?、烷氧羰基、芳氧羰基、芳烷氧羰基、芐氧基氨基甲?；?(其中，R6任意被取代的芳基，其中芳基為喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基)；R2為烷基、芳烷基或環(huán)烷基烷基；R3為環(huán)烷基、烷基(任意被環(huán)烷基、羥基、巰基、烷硫基、芳烷氧基、羧基、氨基、烷氨基、胍基、氨基甲酰基、吡啶基或吲哚基取代)，或芳烷基(任意被羥基、羧基、烷基或烷氧基取代)；R4為硝基、氨基、氰基、羥基、烷氧基、羧基、烷氧羰基、烷基磺?；Ⅺu代烷基、烷氧羰基烷基、四唑基、氨基甲?；?任意被烷基或二烷基氨基取代)或氨基磺酰基(任意被烷基取代)；和R5為氫、鹵原子或羥基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1為巰基或乙?；蚧?br> 3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R3為環(huán)烷基或烷基(任意被環(huán)烷基、羥基、芳烷氧基、烷硫基、吡啶基或吲哚基取代)；R4為氰基、羥基、烷氧基、羧基、烷氧羰基、烷氧羰基烷基、氨基甲酰基(任意被芳烷基氨基烷基取代)或氨基磺?；?任意被烷基取代)；和R5為氫。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中R2為烷基；R3為環(huán)己基或烷基(任意被環(huán)己基、羥基、芐氧基、甲硫基、吡啶基或吲哚基取代)；和R4為羧基、烷氧羰基或氨基磺?；?。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中R2和R3為2-甲基丙基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中R1為巰基或乙酰基硫基，R4為甲氧羰基。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物的單一立體異構(gòu)體或其可藥用鹽，即N-(4-甲基-2-巰基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；或N-(4-甲基-2-乙?；蚧谆祯；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1為羧基或羥基氨基甲?；?。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中R3為環(huán)烷基或烷基(任意被環(huán)烷基、羥基、芳烷氧基、烷硫基、吡啶基或吲哚基取代)；R4為氰基、羥基、烷氧基、羧基、烷氧羰基、烷氧羰基烷基、氨基甲?；?任意被芳烷基氨基烷基取代)或氨基磺?；?任意被烷基取代)；和R5為氫。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中R2為烷基；R3為環(huán)己基或烷基(任意被環(huán)己基、羥基、芐氧基、甲硫基、吡啶基或吲哚基取代)；和R4為羧基、烷氧羰基或氨基磺?；?br> 11.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中R2為2-甲基丙基。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其中R3為環(huán)己基、2-甲基丙基、吡啶-3-基甲基、1-芐氧乙基、1-甲基丙基、1，1-二甲基乙基、1-羥基乙基和吲哚-2-基甲基。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的化合物，其中R3為2-甲基丙基，R4為羧基或甲氧羰基。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的化合物的單一立體異構(gòu)體或其可藥用鹽，即N-(4-甲基-2-羧基甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊酰基)-L-亮氨酸-N′-(4-羧基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊酰基)-L-色氨酸-N′-(4-羧基苯基)甲酰胺；N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊?；?-L-環(huán)己基甘氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺；或N-(4-甲基-2-(N″-羥基氨基甲?；?甲基戊酰基)-L-t-亮氨酸-N′-(4-甲氧羰基苯基)甲酰胺。
15.一種藥物組合物，它包含治療有效量的權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽，并含有一種或多種可藥用的賦形劑。
16.單一立體異構(gòu)體或其混合物的下式(I)的化合物或其可藥用鹽在制造用于抑制哺乳動(dòng)物基質(zhì)金屬蛋白酶活性的藥物中的應(yīng)用， 其中，R1為巰基、乙?；蚧Ⅳ然?、羥基氨基甲酰基、烷氧羰基、芳氧羰基、芳烷氧羰基、芐氧基氨基甲?；?(其中，R6為任意被取代的芳基，其中芳基為喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基)；R2為烷基、芳烷基或環(huán)烷基烷基；R3為環(huán)烷基、烷基(任意被環(huán)烷基、羥基、巰基、烷硫基、芳烷氧基、羧基、氨基、烷氨基、胍基、氨基甲酰基、吡啶基或吲哚基取代)，或芳烷基(任意被羥基、羧基、烷基或烷氧基取代)；R4為硝基、氨基、氰基、羥基、烷氧基、羧基、烷氧羰基、烷基磺?；?、鹵代烷基、烷氧羰基烷基、四唑基、氨基甲?；?任意被烷基或二烷基氨基烷基取代)或氨基磺?；?任意被烷基取代)；和R5為氫、鹵原子或羥基。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種作為單一立體異構(gòu)體或其混合物的式(I)的化合物或其可藥用鹽，其中R
文檔編號(hào)C07C323/60GK1134153SQ94194001
公開日1996年10月23日 申請(qǐng)日期1994年11月3日 優(yōu)先權(quán)日1993年11月4日
發(fā)明者阿林多·L·卡斯特漢諾, 袁征宇, 斯蒂芬·霍恩, 陸圣炎 申請(qǐng)人:辛太克斯(美國(guó))公司