專利名稱：3’硫代-2’脫氧核糖-3’硝基吡咯亞磷酰胺單體及其合成方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及3’硫代-2’脫氧核糖-3’硝基吡咯亞磷酰胺單體及其合成方法和應(yīng)用，化學(xué)基團(tuán)修飾的硫代-2’脫氧核糖_3’硝基吡咯亞磷酰胺分子可以用于固相核酸合成的單體原料，其固相合成寡核苷酸產(chǎn)物除了具有傳統(tǒng)寡核苷酸的生物學(xué)性能外，還具有被化學(xué)切割的性能，可以用于核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子的檢測。
背景技術(shù)：
在分子生物學(xué)研究中，DNA的序列分析是進(jìn)一步研究和改造目的基因的基礎(chǔ)，對(duì)生命科學(xué)至關(guān)重要。隨著人類基因組計(jì)劃和各種模式生物基因組計(jì)劃的開展和完成，使人類步入了后基因時(shí)代，分子生物學(xué)相關(guān)學(xué)科得到了迅猛的發(fā)展。從基因水平上認(rèn)識(shí)生命的差異，疾病發(fā)生、發(fā)展的規(guī)律，以及藥物與生命體的相互作用將成為可能。在基礎(chǔ)研究方面，研究疾病基因的遺傳規(guī)律，克隆致病基因；在應(yīng)用方面，直接尋找疾病的易感基因突變位點(diǎn)， 可以獲得有關(guān)與該疾病相關(guān)基因型的信息。通過DNA序列信息的分析可以為理解生命的起源、疾病發(fā)生、以及個(gè)體化醫(yī)療等提供有用的相關(guān)核酸序列信息。對(duì)DNA序列的分析包括位點(diǎn)(如單堿基多態(tài)性、甲基化、突變等)，片段序列(如片段重復(fù)、缺失等)、全基因組序列分析和DNA蛋白質(zhì)相互作用。針對(duì)這些不同的分析對(duì)象，目前已有各種不同的方法相應(yīng)方法被廣泛應(yīng)用，而這些方法中有許多涉及到核酸需要被切割的手段。如在橋式PCR擴(kuò)增中需要對(duì)一條鏈進(jìn)行切除，以獲得單鏈DNA模板用來進(jìn)行核酸分析；在DNA與蛋白質(zhì)的序列特異性識(shí)別和相互作用檢測中，需要借助核酸片段是否能夠切割來判斷雙鏈DNA是否與蛋白質(zhì)發(fā)生了結(jié)合，從而達(dá)到非標(biāo)記檢測蛋白的目的；在基于標(biāo)記熒光的高通量測序過程中，需要將每次測序中的標(biāo)識(shí)熒光分子切除，以便順利進(jìn)行下一個(gè)位置堿基的序列測定等。要實(shí)現(xiàn)這些不同的切割的手段，目前需要針對(duì)核酸片段進(jìn)行特殊的修飾，或者采用特定的酶切或者化學(xué)切割方法，這些方法中要么合成難度大，或者難于找到合適的切割試劑而給研究工作帶來困難。本發(fā)明制備的是3’硫代-2’脫氧核糖-3’硝基吡咯亞磷酰胺分子可以作為固相核酸合成的基本原料，通過廣泛使用的核酸合成儀在合成的序列片段中很方便的引入硫代-2’脫氧核糖_3’硝基吡咯來實(shí)現(xiàn)核酸序列分析中切割方法的實(shí)現(xiàn)。由于引入的硫代-2’脫氧核糖_3’硝基吡咯(簡寫成“M”)具有通用堿基的性能，能很好的和4種堿基配對(duì)，在任何位置均能滿足與四個(gè)堿基的雜交效果，且比其它通用堿基具有更平均的雜交溫度(Bergstrom, D. E.，et al. Synthesis, structure, and deoxyribonucleic acid sequencing with a universal nucleoside :1-(2' -Deoxy-β -D-rinbofuranosyl)-3-nit ropyrrole. J. Am. Chem. S0C. 1995，117，1201-1209)，能夠在核酸分析中得到廣泛的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
解決的技術(shù)問題本發(fā)明的目的是提供3’硫代-2’脫氧核糖-3’硝基吡咯亞磷酰胺單體及其合成方法和應(yīng)用，為新的核酸序列分析技術(shù)所能利用的試劑，為新核酸序列分析技術(shù)的低成本、高速度和高通量奠定基礎(chǔ)。技術(shù)方案3’硫代-2’脫氧核糖-3’硝基吡咯亞磷酰胺單體，結(jié)構(gòu)為
權(quán)利要求
1.3’硫代-2’脫氧核糖-3’硝基吡咯亞磷酰胺單體，其特征在于結(jié)構(gòu)為
2.權(quán)利要求1所述的3’硫代-2’脫氧核糖-3’硝基吡咯亞磷酰胺單體的合成方法，其特征在于具有如下結(jié)構(gòu)
3.權(quán)利要求1所述3’硫代-2’脫氧核糖_3’硝基吡咯亞磷酰胺單體在核酸、蛋白質(zhì)生物大分子檢測中的應(yīng)用。
全文摘要
3’硫代-2’脫氧核糖-3’硝基吡咯亞磷酰胺單體及其合成方法和應(yīng)用，其結(jié)構(gòu)為 。本發(fā)明的最大優(yōu)點(diǎn)是作為核酸固相合成的基本原料可以很方便地在寡核苷酸片段中引入一個(gè)或者多個(gè)硫-磷橋鍵，合成新型的寡核苷酸序列及其探針。
文檔編號(hào)C07H19/044GK102516337SQ201110341249
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月2日
發(fā)明者王文捷, 肖鵬峰, 謝宏梅, 錢曉婷, 陸祖宏 申請(qǐng)人:東南大學(xué)