專利名稱：白介素-21受體結(jié)合蛋白的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及結(jié)合白介素-21受體(IL-21R)，特別是人IL-21R的結(jié)合蛋白及其抗原 結(jié)合片段，及其在調(diào)節(jié)IL-21R相關活性中的用途。本文中公開的結(jié)合蛋白在治療和/或診 斷IL-21R相關病癥例如炎性病癥、自身免疫性疾病、變態(tài)反應、移植排斥、高增殖性血液病 癥、和其它免疫系統(tǒng)病癥中有用。
背景技術：
抗原激起免疫應答并激活最大的兩群淋巴細胞T細胞和B細胞。遭遇抗原后，T 細胞增殖并分化成效應器細胞，而B細胞增殖并分化成抗體分泌漿細胞。這些效應器細胞 分泌和/或響應細胞因子，細胞因子是由淋巴細胞和其它細胞類型分泌的小蛋白質(zhì)(小于 約 30kDa)。人IL-21是與IL-2、IL-4和IL-15顯示序列同源性的細胞因子(Parrish-Novak 等0000)Nature 408:57-63)。盡管白介素細胞因子間序列同源性低，但是細胞因子分享 共同的折疊，折疊成該家族代表性的“四螺旋束”結(jié)構。大多數(shù)細胞因子結(jié)合I類或II類 細胞因子受體。II類細胞因子受體包括IL-10和干擾素的受體，而I受細胞因子受體包括 IL-2至IL-7、IL-9、IL-11、IL-12、IL-13、和IL-15以及造血生長因子、瘦蛋白、和生長激素 的受體(Cosman (1993) Cytokine 5:95-106)。人IL-21R是I類細胞因子受體。編碼人IL-21及其受體(IL-21R)的核苷酸和氨基 酸序列記載于國際申請公開號WO 00/053761和WO 0 1/085792 ;Parrish_Novak等Q000) supra ；及 Ozaki 等(2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:11439-44。IL-21R 與 IL-2 受體 β鏈和IL-4受體α鏈具有最高的序列同源性(Ozaki等Q000) supra)。在配體結(jié)合時， IL-21R與IL-2、IL-3、IL-4、IL-7、IL-9、IL-13和IL-15的受體復合物分享的共同伽馬細 胞因子受體鏈(Y c)聯(lián)合(Ozaki 等 Q000) supra ；Asao 等 Q001)J. Immunol. 167 :1_5)。IL-21R在淋巴樣組織中，特別是在T細胞、B細胞、天然殺傷(NK)細胞、樹突 細胞(DC)和巨噬細胞上表達(Parrish-Novak等(2000) supra)，這容許這些細胞響應 IL-21 (Leonard and Spolski (2005) Nat. Rev. Immunol. 5 :688-98)。IL-21R 的廣泛淋巴 樣分布指示IL-21在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。體外研究顯示了 IL-21顯著調(diào)控B細 胞、CD4+ 和 CD8+ T 細胞、及 NK 細胞的功能(Parrish-Novak 等 Q000) supra ；Kasaian 等 (2002) Immunity 16 :559-69)。最新的證據(jù)提示IL-21介導的信號傳導可具有抗腫瘤活性 (Sivakumar等Q004) Immunology 112 :177-82)，而且IL-21能在小鼠中預防抗原誘導的消 除(Shang 等 Q006)Cell. Immunol. 241 :66-74)。在自身免疫中，破壞IL-21基因和注射重組IL-21顯示出分別調(diào)控實驗性自身免 疫性重癥肌無力(EAMG)和實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)的發(fā)展(King等Q004)Cell117 :265-77 ；Ozaki 等(2004) J. Immunol. 173 :5361-71 ；Vollmer 等(2005) J. Immunol. 174 2696-2701 ；Liu 等(2006) J. Immunol. 176 :5247-54)。在這些實驗系統(tǒng)中，提示操縱 IL-21 介導的信號傳導直接改變CD8+細胞、B細胞、T輔助細胞、和NK細胞的功能。發(fā)明概述本發(fā)明描述了特異性結(jié)合人和鼠IL-21R的結(jié)合蛋白例如人抗體及其片段的分離 和表征。本文中描述的結(jié)合蛋白衍生自抗體18A5，其披露于美國專利No. 7，495，085，通過 述及將其全部收入本文。本發(fā)明的結(jié)合蛋白具有程度比親本18A5抗體大得多的對人和/ 或鼠IL-21R的親和力。本發(fā)明至少部分提供以高親和力和特異性結(jié)合IL-21R，特別是人IL-21R的 IL-21R結(jié)合劑(諸如結(jié)合蛋白及其抗原結(jié)合片段)。本發(fā)明的結(jié)合蛋白及其抗原結(jié)合片段 在本文中也分別稱作“抗IL-21R結(jié)合蛋白”及“其片段”。在一個實施方案中，結(jié)合蛋白或 其片段降低、抑制、或拮抗IL-21R活性。此類結(jié)合蛋白可用于通過拮抗IL-21R活性來調(diào)節(jié) 免疫應答或IL-21R相關病癥。在其它實施方案中，抗IL-21R結(jié)合蛋白可用于診斷，或作為 靶向結(jié)合蛋白用于將治療劑或細胞毒劑投遞至IL-21R表達細胞。如此，本發(fā)明的抗IL-21R 結(jié)合蛋白在診斷和治療IL-21R相關病癥例如炎性病癥、自身免疫性疾病、變態(tài)反應、移植 排斥、高增殖性病癥、和其它免疫系統(tǒng)病癥中有用。因而，在一個方面，本發(fā)明的結(jié)合蛋白特征為一種結(jié)合IL-21R，特別是人IL-21R 的分離的結(jié)合蛋白(例如分離的抗體)或其抗原結(jié)合片段。在某些實施方案中，抗IL-21R 結(jié)合蛋白(例如抗體)可具有一項或多項下述特征(1)它是單克隆或單特異性結(jié)合蛋白； ⑵它是人結(jié)合蛋白；(3)它是體外生成的結(jié)合蛋白；(4)它是體內(nèi)(例如轉(zhuǎn)基因小鼠系統(tǒng)) 生成的結(jié)合蛋白；(5)它抑制IL-21結(jié)合IL-21R;(6)它是IgGl ； (7)它以至少約IO5M4iT1 的結(jié)合常數(shù)結(jié)合人IL_21R;(8)它以至少約^clO4M4iT1的結(jié)合常數(shù)結(jié)合鼠IL-21R; (9)它以 約ΙΟ、—1或更少的解離常數(shù)結(jié)合人IL-21R ;(10)它以約ΙΟ、—1或更少的解離常數(shù)結(jié)合鼠 IL-21R ； (11)它以約1. 75ηΜ或更少的IC50抑制人IL-21R介導的人IL-21R表達性BaF3細 胞增殖；(12)它以約0. 5nM或更少的IC50抑制鼠IL-21R介導的鼠IL-21R表達性BaF3細 胞增殖；(13)它以約14. OnM或更少的IC50抑制人IL-21R介導的人IL-21R表達性TFl細 胞增殖；(14)它以約1.9nM或更少的IC5tl抑制IL-21介導的人原代B細胞增殖；(15)它以 約1. 5nM或更少的IC5tl抑制IL-21介導的人原代⑶4+ T細胞增殖；和(16)它以約5. OnM 或更少的IC5tl抑制IL-21介導的鼠原代⑶4+ T細胞增殖。本發(fā)明的結(jié)合蛋白(術語“結(jié)合蛋白”根據(jù)需要還包括及指其抗原結(jié)合片段) 的非限制性例示性實施方案在本文中稱作AbA-AbZ，而且這些術語與美國臨時專利申請 No. 61/055，500中使用的術語的關系呈現(xiàn)于表2A。本發(fā)明的結(jié)合蛋白的其它例示性實施方 案，即scFv，在本文中稱作H3-H6、L1-L6、L8-L21、和L23-L25，如表2B中詳述的。本發(fā)明的一個實施方案是結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其 中該結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段包含至少一種與選自下組的氨基酸序列至少約95%相同 的氨基酸序列:SEQ ID NO :14,16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48， 50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98， 100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136， 138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，165—168，171—193，213—229，240, 242, 244, M6，和M8。分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段可以是例如抗體、scFv、VH、\、 或 CDR。本發(fā)明的另一個實施方案是結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段， 其中該結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段包含至少一種由與選自下組的核苷酸序列至少約95% 相同的核苷酸序列編碼的氨基酸序列=SEQ ID NO :13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33， 35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83， 85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125， 127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161,239， 241，243，245，和 247。本發(fā)明的又一個實施方案是包含至少一種選自下組的氨基酸序列的分離的結(jié)合 蛋白或抗原結(jié)合片段SEQ ID NO :14,16,18,20,22,24,26,28,30,32,34,36,38,40,42, 44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92， 94,96,98,100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132， 134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，165-168，171-193， 213-229，240，242，244，246，和 248。本發(fā)明的又一個實施方案是結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段， 其中該結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段包含至少一種與選自下組的氨基酸序列至少約95%相 同的氨基酸序列:SEQ ID NO 6,8,10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40， 42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90， 92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130， 132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162—195，213—229， 240, 242, 244, M6，和M8，且其中，如果所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含至少一種與選自 下組的序列至少約95%相同的氨基酸序列=SEQ ID NO :6，8，10，12，163，164，169，170，194， 和195，那么所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段必須還包含至少一種與選自下組的氨基酸序列 至少約 95%相同的氨基酸序列=SEQ ID NO 14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38， 40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88， 90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128， 130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，165-168， 171-193，213-229，240，242，244，246，和 248。本發(fā)明的又一個實施方案是結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段， 其中該結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段包含至少一種由與選自下組的核苷酸序列至少約95% 相同的核苷酸序列編碼的氨基酸序列=SEQ ID NO :5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27， 29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77， 79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121， 123，125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159， 161，239，M1，M3，M5，和M7，且其中，如果所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含至少一種由 與選自下組的序列至少約95%相同的核苷酸序列編碼的氨基酸序列SEQ ID NO :5,7,9, 和11，那么所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段必須還包含至少一種由與選自下組的核苷酸序列 至少約95%相同的核苷酸序列編碼的氨基酸序列=SEQ ID NO 13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77， 79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121， 123，125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159， 161, 239, 241, 243, 245,^P 247。本發(fā)明的又一個實施方案是包含至少一種選自下組的氨基酸序列的分離的結(jié)合 蛋白或抗原結(jié)合片段:SEQ ID NO :6,8,10,12,14,16,18,20,22,24,26,28,30,32,34,36, 38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86， 88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126， 128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162—195， 213-229，240, 242, 244, M6，和M8，其中，如果所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含至少一種 與選自下組的序列至少約95%相同的氨基酸序列=SEQ ID NO :6，8，10，12，163，164，169， 170，194，和195，那么所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段必須還包含至少一種與選自下組的氨 基酸序列至少約95%相同的氨基酸序列=SEQ ID NO :14，16，18，20，22，24，26，28，30，32， 34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82， 84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124， 126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162， 165-168，171-193，213-229，240，242，244，246，和 248。本發(fā)明的另一個實施方案是結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段， 其中該結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈和重鏈，且其中該重鏈包含至少一種選自下 組的氨基酸序列:SEQ ID NO :14,16，18，20，68，70，72，88，90，92，94，213，218，219，240，和 242,或與其基本上相同的序列(例如與其基本上相同的序列包括與其至少約85 %，90 %， 95 %，96%，97%，98%，99%，或更多相同的序列)，或與其基本上同源的序列(例如與其 基本上同源的序列包括與其至少約50%，55%，60%，65%，70%，75%，80%，85%，90%， 95%,96%,97%,98%,99%,或更多相同的序列)。在又一個實施方案中，結(jié)合蛋白或抗原 結(jié)合片段包含\域和Vh域，且該￥11域包含至少一種選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO 14, 16，18，和20，或與其基本上相同或同源的序列。本發(fā)明的另一個實施方案是結(jié)合IL-21R的 分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈和重鏈， 且其中該輕鏈包含至少一種選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO =22,24,26,28,30,32,34, 36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，74，76，78，80，82，84，86，96，98， 100，102，104，106，108，214-217，220-229，244，246，和 248，或與其基本上相同或同源的序 列。在又一個實施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含\域和Vh域，且該\域包含至少 一種選自下組的氨基酸序列:SEQ ID NO =22,24,26,28,30,32,34,36,38,40,42,44,46,48, 50，52，54，56，58，60，62，64，66，215，217，221，223，225，227，和 229，或與其基本上相同或同 源的序列。在又一個實施方案中，重鏈包含選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO =88,90,92, 94，213，218，219，M0，和M2，且輕鏈包含選自下組的氨基酸序列=SEQ ID NO =96,98,100, 102，104，106，108，214，216，220，222，224，226，228，244，246，和 248，或與其基本上相同或 同源的序列。本發(fā)明的結(jié)合蛋白，例如抗體，可以是種系的或非種系的。它們可以特異性結(jié)合與 AbA-AbZ, H3-H6、L1-L6、L8-L21、或L23-L25結(jié)合的表位相同的IL-21R表位或相似的表位(例如交疊表位)。在其它實施方案中，結(jié)合蛋白特異性結(jié)合IL-21R片段，例如SEQ ID NO 2或4所示氨基酸序列或與其至少85%，90%，95%，96%，97%，98%，99%或更多相同的序 列的至少10，20，50，75，100，150，或200個連續(xù)氨基酸的片段。本發(fā)明的另一個實施方案是結(jié)合選自下組的結(jié)合蛋白識別的IL-21R表位的分 離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段AbA-AbZ，H3-H6，L1-L6，L8-L21，和L23-L25，其中該結(jié) 合蛋白或抗原結(jié)合片段競爭性抑制選自下組的結(jié)合蛋白結(jié)合人IL-21R:AbA-AbZ，H3-H6， L1-L6，L8-L21，和L23-L25。在另一個實施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含重鏈、輕 鏈、或Fv片段，其包含選自下組的氨基酸序列=SEQ ID NO :14，16，18，20，22，24，洸，28，30， 32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80， 82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122， 124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160， 162，165-168，171-193，213-229，240，242，244，246，和 248，或與其基本上相同或同源的序 列。在又一個實施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含重鏈、輕鏈、或Fv片段，其包含由 選自下組的核苷酸序列編碼的氨基酸序列=SEQ ID NO 13，15，17，19，21，23，25，27，29，31， 33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81， 83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123， 125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161， 239，241,243, M5，和M7，或與其基本上相同或同源的序列。在其它實施方案中，結(jié)合蛋白包含這些Vh和\域的至少一種互補決定區(qū)(OTR) (例如一種或更多種、兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、或五種或更多種鄰近的 CDR(例如由框架區(qū)(FR)或接頭隔開的兩種或更多種CDR)或非鄰近的CDR(例如由至少一 種其它CDR和例如FR隔開的兩種或更多種CDR))。例如，結(jié)合蛋白可包括Vh域和/或八域 的一種、兩種、三種或更多種⑶R。本公開提供來自AbA-AbZ、H3-H6、L1-L6、L8-L21、和 L23-L25 之 Vh 和 \ 域的核酸 序列。還涵蓋包含至少一種來自AbA-AbZ、H3-H6、Ll-L6、L8-L21、和L23-L25的CDR的核酸 序列。本公開還提供包含此類核酸的載體和宿主細胞。本發(fā)明的結(jié)合蛋白可以是全長的(例如包括至少一條完整重鏈和至少一條完整 輕鏈)，或者可以只包括抗原結(jié)合片段(例如，保留特異性結(jié)合抗原的能力的全長結(jié)合蛋白 的Fab、Fab，、F(ab，)2、Fv、單鏈Fv片段、Fd片段、dAb片段、CDR、或其它片段)。結(jié)合蛋白 可以包括選自卡帕(κ)、拉姆達(λ)、阿爾法(α)、伽馬(Y)、德爾塔(δ)、厄普西隆(ε) 和謬(μ)恒定區(qū)基因任一的恒定區(qū)或其一部分。例如，可以使用各種同種型的重鏈恒定 區(qū)，包括=IgGl, IgG2，IgG3，IgG4，IgM, IgAl, IgA2，IgD，和IgE0輕鏈恒定區(qū)可以選自卡帕 或拉姆達。結(jié)合蛋白可以是IgG，或者它也可以是IgGl κ或IgGl λ。本文中描述的抗IL-21R結(jié)合蛋白可以衍生化或連接至另一功能性分子(諸如另 一肽或蛋白質(zhì)，例如Fab片段)。例如，本發(fā)明的結(jié)合蛋白可以功能性連接(例如通過化學偶 聯(lián)、遺傳融合、非共價聯(lián)合或其它方式)至至少一種其它分子實體，諸如另一結(jié)合蛋白(例 如雙特異性或多特異性結(jié)合蛋白)、毒素、放射性同位素、細胞毒劑或細胞抑制劑、等等。在本發(fā)明的一個實施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段對人IL-21R的結(jié)合常數(shù) 為至少約IO5M4sA在另一個實施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段以約1. 75ηΜ或更少的IC50抑制IL-21介導的BaF3細胞增殖，且所述BaF3細胞包含人IL-21R。在另一個實施方案 中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段以約14. OnM或更少的IC5tl抑制IL-21介導的TFl細胞增殖， 且所述TFl細胞包含人IL-21R。在另一個實施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段以約1. 9nM 或更少的IC5tl抑制IL-21介導的原代人B細胞增殖，且所述B細胞包含人IL-21R。在又一 個實施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段以約1. 5nM或更少的IC5tl抑制IL-21介導的原代 人⑶4+細胞增殖，且所述⑶4+細胞包含人IL-21R。在一個實施方案中，本發(fā)明提供結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，所述蛋白或抗原結(jié)合 片段與和SEQ ID NO 2的至少100個連續(xù)氨基酸的任何序列至少約95%相同的氨基酸序 列特異性結(jié)合。另一個實施方案提供抑制IL-21結(jié)合IL-21R的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段。 在至少一個實施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段是IgGl。在至少一個實施方案中，結(jié)合蛋 白或抗原結(jié)合片段是人的。在另一個方面，本發(fā)明特征為一種藥物組合物，其含有至少一種抗IL-21R結(jié)合蛋 白和藥學可接受載體。藥物組合物可進一步包括至少一種抗IL-21R結(jié)合蛋白和至少一種 其它治療劑(例如細胞因子和生長因子抑制劑、免疫抑制劑、抗炎劑、代謝抑制劑、酶抑制 劑、細胞毒劑、細胞抑制劑、或其組合，如本文中更詳細描述的)的組合?？笽L-21R結(jié)合蛋 白和治療劑的組合也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的組合物和組合可用于調(diào)節(jié)IL-21R相關 免疫病癥，例如通過調(diào)控IL-21R信號傳導來進行。在一個實施方案中，本發(fā)明的結(jié)合蛋白是抗體。在進一步的實施方案中，抗體是多 克隆的、單克隆的、單特異性的、多特異性的、非特異性的、人源化的、人的、單鏈的、嵌合的、 合成的、重組的、雜合的、突變的、嫁接的(grafted)、體外生成的和/或多特異性的(例如自 至少兩種完整抗體形成的雙特異性抗體)。本發(fā)明的其它實施方案包括編碼抗IL-21R結(jié)合蛋白的分離的核酸、包含該核酸 的表達載體、和經(jīng)該載體轉(zhuǎn)化的宿主細胞。宿主細胞可以是細菌、哺乳動物細胞、酵母細胞、 植物細胞、或昆蟲細胞。結(jié)合蛋白可以用可檢測物質(zhì)直接或間接標記以便于結(jié)合的或未結(jié)合的結(jié)合蛋白的 檢測。合適的可檢測物質(zhì)包括但不限于各種酶、輔基、熒光材料、發(fā)光材料、和放射性材料。在另一個方面，本發(fā)明提供用于在體內(nèi)將藥劑例如治療劑或細胞毒劑投遞或靶 向至IL-21R表達細胞的方法。該方法包括在容許結(jié)合蛋白結(jié)合IL-21R的條件下對受試 者施用抗IL-21R結(jié)合蛋白。結(jié)合蛋白可以偶聯(lián)至第二治療性模塊(second therapeutic moiety)，例如毒素。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供診斷試劑盒，其包含本發(fā)明的結(jié)合蛋白或抗原 結(jié)合片段。本公開的別的方面會在說明中部分列出，而且根據(jù)說明會部分顯而易見，或者通 過實踐本發(fā)明可學會。本發(fā)明在權利要求中列出和具體指出，而且本公開不應解釋為限制 權利要求的范圍。下面的詳細說明包括本發(fā)明各種實施方案的例示性呈現(xiàn)，它們對于要求 保護的發(fā)明不是限制性的。附圖構成本說明書的一部分，而且與說明一起只用來例示實施 方案，而非限制本發(fā)明。附圖簡述圖l(a-c)描繪scFv對人IL_21R_BaF3細胞增殖的中和。將細胞與所示scFv
12混合，然后與100pg/ml人IL-21 —起溫育。48小時后通過CELLTITER GLO (Promega Corporation, Madison, WI) ij jfi±f·。圖2 (a-c)描繪scFv對人IL-21R-TF1細胞增殖的中和。將細胞與所示scFv混合， 然后與100pg/ml人IL-21 —起溫育。48小時后通過CELLTITER-GL0 測量增殖。圖3 (a-c)描繪scFv對鼠IL_21R_BaF3細胞增殖的中和。將細胞與所示scFv混 合，然后與400pg/ml鼠IL-21 —起溫育。48小時后通過CELLTITER-GL0 測量增殖。圖4(a_c)描繪scFv與親本抗體18A5IgG競爭對鼠IL-21R的結(jié)合。將scFv與 生物素化的鼠IL-21R H/F混合，并將混合物添加至在ELISA板上固定化的抗體18A5。用 HRP-鏈霉親合素檢測mIL-21R捕捉，并以A450信號的降低指示對mIL_21R結(jié)合的競爭。圖5描繪21對重鏈/輕鏈對IL-21依賴性增殖的中和。將圖中所示抗體添加至細 胞。隨后添加IL-21，并在48小時后用CELLTITER GLO 測量增殖。對人IL_21R_BaF3細 胞用 100pg/ml 人 IL-21 (圖 5a_c)、對人 IL-2IR-TFl 細胞用 100pg/ml 人 IL-21 (圖 5d-f)、 或?qū)κ驣L-21R-BaF3細胞用400pg/ml鼠IL-21 (圖5g_i)來進行測定。圖6描繪21種抗IL-21R IgG對瞬時表達人IL-21R(圖6a_c)、大鼠IL-21R(圖 6d-f)、獼猴IL-21R(圖6g-i)、和人伽馬(γ)共同鏈(圖6j-l)的CHO細胞的結(jié)合。用 IL-21R或?qū)φ召ゑR(Y)共同鏈瞬時轉(zhuǎn)染CHO細胞，并在基于細胞的ELISA中用HRP偶聯(lián)的 抗人IgG測量結(jié)合。圖 7 (a-c)描繪特定抗 IL-21R 抗體(圖 7a，AbS ；圖 7b，AbQ、AbT、AbO ；圖 7c， AbR、AbP、和AbU)的結(jié)合特異性，這是通過表面等離振子共振測量得出的。在抗人IgG上 捕捉抗IL-21R抗體，并在BIAC0RE (GE Healthcare, Piscataway，NJ)儀器中測量隨后對 鼠IL-21R-H/F、人IL-13-H/F、人IL_2R0、或人可溶性IL-4R任一的結(jié)合。圖7d顯示人 IL-2Ri3和人可溶性IL-4R分別被特異性抗IL_2Ri3和抗IL-4R抗體所捕捉(對照)。圖8(a_d)描繪抗IL-21R抗體對人和鼠IL-21R的結(jié)合。在BIAC0RE 芯片上固定 化的抗人IgG上捕捉所示人抗IL-21R抗體。讓不同濃度的人IL-2IR-His/FLAG(圖8a_b) 和鼠IL-2IR-His/FLAG(圖8c_d)流過芯片，并監(jiān)測結(jié)合和解離。圖9描繪抗IL-21R抗體對人和獼猴IL-21R的結(jié)合。在BIAC0RE 芯片上固定化 的抗人IgG上捕捉人抗IL-21R抗體AbS和AbT。讓不同濃度的人和獼猴IL_21R-His/FLAG 流過芯片，并監(jiān)測結(jié)合和解離。圖9a顯示獼猴IL-2IR-His/FLAG結(jié)合至AbS。圖9b顯示 人IL-2IR-His/FLAG結(jié)合至AbS。圖9c顯示獼猴IL-2IR-His/FLAG結(jié)合至AbT。圖9d顯 示人 IL-2IR-His/FLAG 結(jié)合至 AbT。

圖10描繪IL-21R抗體的表位評估。在圖IOa所示實驗中(還可見Y軸左邊的圖 解)，通過BIAC0RE 芯片上固定化的抗IL-21R抗體AbS來捕捉鼠IL-21R-H/F (His-Flag融 合蛋白)。使別的抗IL-21R抗體(AbS、AbT、D5 (D5-20，一種中和性抗鼠IL-21R抗體)、和 7C2(—種非中和性抗鼠IL-21R對照抗體))流過芯片，并監(jiān)測它們對捕捉到的IL-21R-H/F 的結(jié)合。在圖IOb所示實驗中，通過BIAC0RE 芯片上固定化的抗IL-21R抗體AbS來捕捉 人IL-21R-H/F。使別的抗IL-21R抗體(AbS、AbT、和9D2( —種非中和性抗人IL-21R對照 抗體))流過芯片，并監(jiān)測它們對捕捉到的IL-21R-H/F的結(jié)合。圖11描繪所示抗體對人IL-21R_BaF3細胞和鼠IL_21R_BaF3細胞增殖的中和。 將抗體添加至細胞。隨后添加IL-21，并在48小時后用CELLTITER GLO 測量增殖。對人IL-21R-BaF3 細胞用 100pg/ml 人 IL-21 (圖 Ila)、對鼠 IL_21R_BaF3 細胞用 200pg/ml 鼠 IL-21 (圖lib)、及對人IL-21R-TF1細胞用100pg/ml人IL-21 (圖lie)來進行測定。圖12描繪對人原代B細胞的IL-21依賴性增殖的中和。與抗⑶40抗體和人IL-21 一起將所示抗體添加至原代人B細胞。3天后測量3H-胸苷摻入。圖1 描繪AbQ、AbR、 AbS、AbT、AbU、IL-13三重突變體、和18A5親本抗體之間的比較；圖12b描繪AbT、AbV、AbW、 AbU、和人IgGl對照(hlgl)之間的比較。圖13描繪對人原代⑶4+ T細胞的IL-21依賴性增殖的中和。與人IL-21 —起將 所示抗體添加至活化的原代人CD4+ T細胞，并在3天后測量3H-胸苷摻入。圖14描繪對鼠原代⑶8+ T細胞的IL-21依賴性增殖的中和。與人IL-21 —起將 所示抗體添加至活化的原代鼠CD8+ T細胞，并在3天后測量3H-胸苷摻入。圖15描繪由抗IL-21R抗體誘導的抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)的測量。通 過碘化丙啶的摻入來測量經(jīng)所示抗IL-21R抗體包被的CFSE標記的BJAB細胞的PBMC依賴 性殺傷。包括抗CD20抗體利妥昔單抗(RITUXAN ,Genentech，Inc.，South San Francisco, CA)作為陽性對照，而且包括抗IL-13抗體作為陰性對照。圖16描繪抗IL-21R抗體的補體Clq結(jié)合。在ELISA板上固定化所示抗IL-21R 抗體，并在與人血清一起溫育后，用雞抗人Clq和HRP偶聯(lián)的抗雞IgY抗體測量Clq結(jié)合。 包括抗⑶20抗體利妥昔單抗(RITUXAN )作為陽性對照，并包括抗IL-13抗體作為陰性 對照。圖17 (a-c)描繪 AbQ 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、
和恒定區(qū)。圖18 (a-c)描繪 AbR 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、 和恒定區(qū)。圖19 (a-c)描繪 Abff 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、
和恒定區(qū)。圖20 (a-c)描繪 AbS 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、 和恒定區(qū)。圖21 (a-c)描繪 AbT 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、 和恒定區(qū)。圖22 (a-c)描繪 AbO 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、
和恒定區(qū)。圖23 (a-c)描繪 AbP 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、 和恒定區(qū)。圖 24 (a-c)描繪 AbU 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、 和恒定區(qū)。圖25 (a-c)描繪 AbV 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、 和恒定區(qū)。圖沈(『0描繪與產(chǎn)生圖5、11、12、13、和14(上文描述的)所示結(jié)果的研究類似 實施的別的研究產(chǎn)生的結(jié)果。圖27描繪IL-21細胞因子與抗體AbT競爭對鼠IL-21R的結(jié)合。將媒介(vehicle)或漸增量的IL-21與生物素化的鼠IL-2IR-His/FLAG混合，并將混合物添加至在ELISA板 上固定化的AbT。用HRP-鏈霉親合素檢測mIL-2 IR捕捉，并以A450信號的降低指示mIL_2 IR 結(jié)合的競爭。發(fā)明詳述本發(fā)明的結(jié)合蛋白最初衍生自親本抗體18A5，但是在重鏈和/或輕鏈互補決定區(qū) 3(CDR3)部分氨基酸序列方面不同于18A5。另外，本發(fā)明的結(jié)合蛋白顯示結(jié)合和中和人和 鼠IL-21R 二者方面與等同形式(例如scFv或IgG)的18A5相比改良的效力。先前沒有報 告單一結(jié)合蛋白對來自這兩個物種(人和小鼠)的IL-21R的高效力中和。具有比它們的 親本抗體更大的中和效力的本發(fā)明結(jié)合蛋白可轉(zhuǎn)化為與先前記載的藥劑相比更高的功效。 另外，已經(jīng)改變了 Vh和\框架區(qū)的氨基酸序列以匹配由人基因組序列編碼的序列，由此降 低用本發(fā)明結(jié)合蛋白處理的患者中人抗人抗體應答的潛力。定義為了更容易理解本發(fā)明，首先定義某些術語。別的定義遍及詳述和說明書中的其 它地方列出。術語“結(jié)合蛋白”如本文中使用的包括如下的任何天然發(fā)生的、重組的、合成的、 或遺傳工程的蛋白質(zhì)或其組合，其結(jié)合抗原、靶蛋白質(zhì)、或肽，或其片段。本發(fā)明的結(jié)合蛋 白可包括抗體，或衍生自至少一種抗體片段。結(jié)合蛋白可包括天然發(fā)生的蛋白質(zhì)和/或合 成工程的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的結(jié)合蛋白可結(jié)合抗原或其片段以形成復合物，并引發(fā)生物學應 答(例如激動或拮抗特定生物學活性)。結(jié)合蛋白可包括分離的抗體片段。由抗體重和 輕鏈的可變區(qū)組成的“Fv”片段、其中輕和重鏈可變區(qū)經(jīng)肽接頭相連接的重組單鏈多肽分 子(“scFv蛋白質(zhì)”)、和由模擬高變區(qū)的氨基酸殘基組成的最小識別單元。結(jié)合蛋白片段 還可包括功能性抗體片段，諸如例如Fab、Fab，、F(ab，)2、Fe、Fd、Fd，、Fv、和單抗體可變域 (dAb)。結(jié)合蛋白抗原是雙鏈或單鏈，而且可包含單個結(jié)合域或多個結(jié)合域。結(jié)合蛋白還可包括結(jié)合域-免疫球蛋白融合蛋白，其中結(jié)合域多肽融合或以其它 方式連接至免疫球蛋白鉸鏈或鉸鏈作用區(qū)多肽，后者繼而融合或以其它方式連接至包含來 自免疫球蛋白重鏈的一個或多個天然或工程化恒定區(qū)的區(qū)域，所述恒定區(qū)不同于CH1，例如 IgG和IgA的Ch2和Ch3區(qū)或者IgE的CH3和CH4區(qū)(更完整的說明參見例如Ledbetter等， 美國專利公開文本2005/0136049)。結(jié)合域-免疫球蛋白融合蛋白可進一步包括如下的區(qū) 域，其包括融合或以其它方式連接至鉸鏈區(qū)多肽的天然或工程化免疫球蛋白重鏈Ch2恒定 區(qū)多肽(或CH3，在構建物完全或部分衍生自IgE的情況中)和融合或以其它方式連接至 Ch2恒定區(qū)多肽(或Ch3，在構建物完全或部分衍生自IgE的情況中)的天然或工程化免疫 球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)多肽(或CH4，在構建物完全或部分衍生自IgE的情況中)。通常，此 類結(jié)合域-免疫球蛋白融合蛋白具有至少一項選自下組的免疫學活性抗體依賴性細胞介 導的細胞毒性、補體結(jié)合、和/或?qū)Π形?例如靶抗原)的結(jié)合。本發(fā)明的結(jié)合蛋白可衍生 自任何物種，包括但不限于小鼠、人、駱駝、美洲駝、魚、鯊魚、山羊、家兔、雞、和牛。術語“抗體”如本文中使用的指對指定蛋白質(zhì)或肽或其片段有反應性的免疫球蛋 白。此類抗體包括但不限于人抗體、靈長類化抗體、嵌合抗體、單克隆抗體、單特異性抗體、 多克隆抗體、多特異性抗體、非特異性抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、人源化抗體、合 成抗體、重組抗體、雜合抗體、突變型抗體、嫁接偶聯(lián)抗體(即偶聯(lián)或融合至其它蛋白質(zhì)、放射性標記物、細胞毒素的抗體)、和體外生成的抗體。抗體可來自任何類的抗體，包括但不限 于IgG, IgA、IgM, IgD、和IgE，及來自任何亞類(例如IgGl、IgG2、IgG3、和IgG4)的抗體。 抗體可具有選自例如IgGl、IgG2、IgG3、或IgG4的重鏈恒定區(qū)?？贵w還可具有選自例如卡 帕(κ)或拉姆達(λ)的輕鏈。本發(fā)明的抗體可衍生自任何物種，包括但不限于小鼠、人、 駱駝、美洲駝、魚、鯊魚、山羊、家兔、雞、和牛?？贵w的恒定區(qū)可進行改變，例如突變，以修飾 抗體的特性(例如以提高或降低下述一項或多項Fc受體結(jié)合、抗體糖基化、半胱氨酸殘基 的數(shù)目、效應器細胞功能、或補體功能)。通常，抗體特異性結(jié)合預定抗原，例如與病癥有關 的抗原，病癥例如炎性的、免疫性的、自身免疫性的、神經(jīng)變性性的、代謝的、和/或惡性的 病癥。術語“單域結(jié)合蛋白”如本文中使用的包括結(jié)合抗原、蛋白質(zhì)、或多肽的任何單域 結(jié)合支架。單域結(jié)合蛋白可包括如下的任何天然的、重組的、合成的、或遺傳工程的蛋白質(zhì) 支架或其組合，其結(jié)合抗原或其片段以形成復合物，并引發(fā)生物學應答(例如激動或拮抗 特定生物學活性)。單域結(jié)合蛋白可衍生自天然發(fā)生的蛋白質(zhì)或抗體，或者它們可以合成 工程化或通過重組技術來生成。單域結(jié)合蛋白可以是任何現(xiàn)有技術的單域結(jié)合蛋白或任 何未來的單域結(jié)合蛋白，而且可衍生自任何物種，包括但不限于小鼠、人、駱駝、美洲駝、魚、 鯊魚、山羊、家兔、雞、和牛。在本發(fā)明的一些實施方案中，單域結(jié)合蛋白支架可衍生自在魚 中找到的免疫球蛋白的可變區(qū)，諸如例如衍生自在鯊魚血清中找到的稱作新型抗原受體 (NAR)的免疫球蛋白同種型的可變區(qū)。生成衍生自NAR可變區(qū)(“IgNAR”)的單域結(jié)合支架的 方法記載于國際申請公開號 No. WO 03/014161 及 MreltsovQ005)Protein Sci. 14(11) 2901-09。在其它實施方案中，單域結(jié)合蛋白是現(xiàn)有技術中描述為不含輕鏈的重鏈抗體的天 然發(fā)生的單域結(jié)合蛋白。此類單域結(jié)合蛋白披露于例如國際申請公開號WO 94/004678。出 于清楚原因，衍生自天然不含輕鏈的重鏈抗體的可變域結(jié)合蛋白在本文中稱作VHH或“納 米抗體” (nanobody)以將它與常規(guī)四鏈免疫球蛋白的Vh區(qū)分開。此類VHH分子可衍生自在 駱駝科(Camelidae)物種中產(chǎn)生的抗體，例如在駱駝、美洲駝、單峰駝、羊駝、和原駝中。駱 駝科以外的其它科也可用于生成天然不含輕鏈的重鏈結(jié)合蛋白。VHH分子比傳統(tǒng)的IgG分 子小大約10倍。它們是單一多肽，而且非常穩(wěn)定，對極端pH和溫度條件有抗性。此外，它們 對蛋白酶的作用有抗性，常規(guī)抗體則不然。此外，體外表達VHH能生成高產(chǎn)量的、正確折疊 的功能性VHH。另外，在camelids中生成的結(jié)合蛋白能識別經(jīng)抗體文庫或經(jīng)免疫camelids 以外的哺乳動物在體外生成的抗體識別的表位以外的表位(參見例如國際申請公開號WO 97/049805和WO 94/004678，通過述及將二者收入本文)。術語“抗原結(jié)合域”和“抗原結(jié)合片段”指結(jié)合蛋白的一部分，其包負責含結(jié)合蛋白 和抗原之間特異性結(jié)合的氨基酸?？乖惺艿浇Y(jié)合蛋白特異性識別和結(jié)合的部分稱作“表 位”?？乖Y(jié)合域可包含抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)(Vh)；然而，它不必包含二者。 例如，F(xiàn)d片段具有兩個Vh區(qū)，而且常常保留完整抗原結(jié)合域的抗原結(jié)合功能。結(jié)合蛋白的 抗原結(jié)合片段的例子包括但不限于(I)Fab片段，即具有\(zhòng)、Vh、(^和ChI域的單價片段；(2) F(ab' )2片段，即具有通過鉸鏈區(qū)處的二硫橋相連接的兩個Fab片段的二價片段；(3)Fd 片段，其具有兩個Vh和一個ChI域；(4) Fv片段，其具有抗體單臂的\和Vh域；(5) dAb片段 (參見例如Ward等(1989) Nature 341力44-46)，其具有Vh域；(6)分離的CDR;和(7)單鏈可變片段(scFv)。雖然Fv片段的兩個域(即\和Vh)由分開的基因編碼，但是它們能接合 在一起，這使用重組方法，通過合成的接頭，使得它們能夠作為單一蛋白質(zhì)鏈生成，其中八 和Vh區(qū)配對以形成單價分子(稱作scFv)(參見例如Bird等(1988) Science 242 :423-26 ； Huston 等(1988)Proc. Natl. Acad. ki. USA 85:5879-83)。這些結(jié)合域片段可使用本領域 技術人員知道的常規(guī)技術來獲得，而且可以以與完整結(jié)合蛋白諸如例如抗體相同的方式對 片段評估功能。術語“中和”指結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段(例如抗體)降低或阻斷信號傳導途 徑或抗原，例如IL-21/IL-21R信號傳導途徑或IL-21R抗原的活性。術語“有效量”指足以調(diào)節(jié)IL-21R活性以改善或減輕臨床癥狀的嚴重程度或?qū)崿F(xiàn) 期望的生物學結(jié)果，例如降低T細胞和/或B細胞活性、遏制自身免疫、遏制移植排斥的劑
量或量。術語“人結(jié)合蛋白”包括具有基本上與本領域已知的人種系免疫球蛋白序列(包 括例如 Kabat 等(5th ed. 1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest， U. S. Department of Health and Human ServicesiNIH Publication No. 91 3242記載的) 對應的可變和恒定區(qū)的結(jié)合蛋白。本發(fā)明的人抗體可包括不是由人種系免疫球蛋白序列 編碼的氨基酸殘基(例如在體外通過隨機或定點誘變或在體內(nèi)通過體細胞突變引入的突 變)，例如在⑶R中，特別是在⑶R3在。人抗體中可以有至少一個、兩個、三個、四個、五個、 或更多個位置被不是由人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基替換。短語“抑制”、“拮抗”、“阻斷”、或“中和” IL-21R活性及其類似短語指IL-21R的至 少一種活性由于結(jié)合抗IL-21R抗體而降低、抑制、或以其它方式減弱，其中降低是相對于 IL-21R在該抗體缺失下的活性。IL-21R活性可使用本領域已知的任何技術來測量。抑制或 拮抗不必指示完全消除IL-21R生物學活性?；钚缘慕档涂梢允羌s10^,20^,30^,40%, 50%，60%，70%，80%，90%，95%，或更多。術語“白介素-21受體”或“IL-21R”等等指結(jié)合IL-21配體的I類細胞因子 家族受體，也稱作MU-I (參見例如美國專利申請No. 09/569，384和美國申請公開文本 No. 2004/0265960 ；2006/0159655 ；2006/0024268 ；和 2008/0241098) ,NILR 或 zalphall (參 見例如國際申請公開號 WO 01/085792 ；Parrish Novak 等 Q000) supra ;0zaki 等 QOOO) supra)。IL-21R與 IL-2 和 IL-15 受體分享的 β 鏈、和 IL-4 α 同源(Ozaki 等 Q000) supra)。 在配體結(jié)合時，IL-21R能夠與共同伽馬細胞因子受體鏈(Yc)相互作用并誘導STATl和 STAT3(Asao 等 Q001) supra)或 STAT5 (Ozaki 等 Q000) supra)磷酸化。IL-21R 顯示廣泛 的淋巴樣組織分布。術語“白介素-21受體”或“IL-21R”等等還指能夠與IL-21 (優(yōu)選哺乳 動物起源的IL-21，例如鼠或人IL-21)相互作用且具有至少一項下述特征的多肽(優(yōu)選哺 乳動物起源的，例如鼠或人IL-21R)或(在上下文需要時)編碼此類多肽的多核苷酸(1) 天然發(fā)生的哺乳動物IL-21R多肽的氨基酸序列或其片段，例如SEQ ID N0:2(人-對應于 GENBANK (U. S. Dept. of Health and Human Services, Bethesda,MD)登錄號 NP_068570) 或SEQ ID NO :4(鼠-對應于GENBANK .登錄號NP_068687)所列氨基酸序列或其片段； (2)與SEQ ID NO 2或SEQ ID NO 4所列氨基酸序列或其片段基本上同源例如至少85%， 90 %，95%，98%，或99%同源的氨基酸序列；C3)由天然發(fā)生的哺乳動物IL-21R核苷酸序 列或其片段(例如SEQ ID NO :1(人-對應于GENBANK 登錄號NM_021798)或SEQ ID N0:3 (鼠-對應于GENBANK 登錄號NM_021887)或其片段)編碼的氨基酸序列；(4)由與SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :3所列核苷酸序列或其片段基本上同源例如至少85%，90%，95%， 98%，或99%同源的核苷酸序列編碼的氨基酸序列；( 由與天然發(fā)生的IL-21R核苷酸序 列或其片段例如SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :3或其片段簡并的核苷酸序列編碼的氨基酸 序列；或(6)在嚴格條件(例如高嚴格條件)下與前述核苷酸序列之一雜交的核苷酸序列。 另外，涵蓋在所公開的方法中有用的其它非人和非哺乳動物IL-21R。術語“白介素-21 ”或“ IL-21，，指與IL-2、IL-4和IL-15顯示序列同源性 (Parrish-Novak等Q000) supra)且結(jié)合IL-21R的細胞因子。此類細胞因子分享共同的 折疊，折疊成該家族特征性的“四螺旋束”結(jié)構。IL-21主要在活化的CD4+ T細胞中表達， 而且據(jù)報告對 NK、B 和 T 細胞有效果(Parrish Novak 等(2000) supra ；Kasaian 等(2002) supra)。在IL-21結(jié)合至IL-21R時，IL-21R的活化引起例如STAT5或STAT3信號傳導 (Ozaki等(2000) supra)。術語“白介素-21”或“ IL-21”還指能夠與IL-21R (優(yōu)選哺乳動 物起源的，例如鼠或人IL-21R)相互作用且具有至少一項下述特征的多肽(優(yōu)選哺乳動物 起源的，例如鼠或人IL-21)或(在上下文需要時)編碼此類多肽的多核苷酸(1)天然發(fā) 生的哺乳動物IL-21的氨基酸序列或其片段，例如SEQ ID NO :212 (人)所列氨基酸序列或 其片段；(2)與SEQ ID NO :212所列氨基酸序列或其片段基本上同源例如至少85%，90%， 95%，98%，或99%同源的氨基酸序列；C3)由天然發(fā)生的哺乳動物IL-21核苷酸序列或其 片段(例如SEQ ID NO :211 (人)或其片段)編碼的氨基酸序列；⑷由與SEQ ID NO :211 所列核苷酸序列或其片段基本上同源例如至少85 %，90 %，95 %，98 %，或99 %同源的核苷 酸序列編碼的氨基酸序列；(5)由與天然發(fā)生的IL-21核苷酸序列或其片段簡并的核苷酸 序列編碼的氨基酸序列；或(6)在嚴格條件(例如高嚴格條件)下與前述核苷酸序列之一 雜交的核苷酸序列。術語“IL-21R活性”等等(例如“IL-21R的活性”、“IL-21/IL-21R活性”)指因 IL-21R結(jié)合而發(fā)起或中斷的至少一種細胞過程。IL-21R活性包括但不限于(1)與配體 (例如IL-21多肽)相互作用(例如結(jié)合)；(2)聯(lián)合或活化信號轉(zhuǎn)導(也稱作“信號傳導”， 指響應特定刺激發(fā)生的細胞內(nèi)級聯(lián))和信號轉(zhuǎn)導分子(例如伽馬鏈(Yc)和JAK1)，和/或 刺激STAT蛋白質(zhì)(例如STAT5和/或STAT3)的磷酸化和/或活化；及( 調(diào)控免疫細胞 (例如T細胞、NK細胞、B細胞、巨噬細胞、調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)和巨核細胞)的增殖、分化、 效應器細胞功能、細胞溶解活性、細胞因子分泌、和/或存活。如本文中使用的，“體外生成的抗體”指如下的抗體，其中整個或部分可變區(qū)(例如 至少一個CDR)是在非免疫細胞選擇(例如體外噬菌體展示、蛋白質(zhì)芯片、或能對候選序列 測試它們結(jié)合抗原的能力的任何其它方法)中生成的。術語“分離的”指基本上不含其天然環(huán)境的分子。例如，分離的蛋白質(zhì)基本上不含 細胞材料或來自衍生它的細胞或組織來源的其它蛋白質(zhì)。該術語還指如下的制備物，其中 分離的蛋白質(zhì)對于藥物組合物是足夠純的，或者至少70-80% (w/w)純的、至少80-90% (w/ w)純的、至少 90-95% (w/w)純的、或至少 95%，96%，97%，98%，99%，或 100% (w/w)純 的。短語“百分比相同”或“百分比同一性”指至少兩種不同序列之間的相似性。此百 分比同一性可通過標準算法來確定，例如Altshul等((1990) J. Mol. Biol. 215 :403-10)記載的基本局部比對搜索工具(Basic Local Alignment Search Tool, BLAST) ；Needleman 等((1970) J. Mol. Biol. 48 :444-53)的算法；或 Meyers 等((1988) Comput. App 1. Biosci. 4 11-17)的算法。一組參數(shù)可以是Blosum 62評分矩陣及缺口罰分12、缺口延伸罰分4、 和移碼缺口罰分5。兩種氨基酸或核苷酸序列之間的百分比同一性還可以使用Meyers和 Miller ((1989) CABIOS 4 :11-17)的算法來確定，該算法已經(jīng)摻入ALIGN程序(2. O版)，使 用PAM120權重殘基表、缺口長度罰分12、和缺口罰分4。百分比同一性通常通過比較相似 長度的序列來計算。術語“全集(r印ertoire)”指完全或部分地自編碼至少一種免疫球蛋白的至少一 種序列衍生的至少一種核苷酸序列?？梢酝ㄟ^在體內(nèi)重排重鏈的V、D、和J區(qū)段及輕鏈的V 和J區(qū)段來生成序列?；蛘?，可以自響應例如體外刺激而發(fā)生重排的細胞生成序列。或者， 可以通過DNA剪接、核苷酸合成、誘變、或其它方法來獲得部分或整個/所有序列(參見例 如美國專利No. 5，565，332)。全集可以只包括一種序列，或者可以包括多種序列，包括遺傳 上多樣的集合中的多種序列。術語“特異性結(jié)合”等等指兩個分子形成在生理條件下相對穩(wěn)定的復合物。特異 性結(jié)合以高的親和力和低至中的能力來表征，與通常具有低的親和力和中至高的能力的非 特異性結(jié)合區(qū)分開。通常，當結(jié)合常數(shù)Ka高于約IOl1iT1時，認為結(jié)合是特異性的。如果 必要，通過改變結(jié)合條件，能降低非特異性結(jié)合且基本上不影響特異性結(jié)合。熟練技術人員 能使用常規(guī)技術來改進適宜的結(jié)合條件，諸如結(jié)合蛋白的濃度、溶液的離子強度、溫度、容 許結(jié)合進行的時間、封閉劑(例如血清清蛋白或乳酪蛋白)的濃度、等。本文中列出了例示 性的條件，但是本領域普通技術人員知道的其它條件落在本發(fā)明的范圍內(nèi)。如本文中使用的，術語“嚴格”、“嚴格性”、等等描述用于雜交和清洗的條件。本發(fā) 明的分離的多核苷酸可用作雜交探針和引物來鑒定和分離具有如下序列的核酸，該序列與 編碼所公開的多核苷酸的序列相同或相似。因此，以此方式分離得到的多核苷酸可用于生 成針對IL-21R的結(jié)合蛋白或鑒定表達此類結(jié)合蛋白的細胞。用于鑒定和分離核酸的雜交 方法包括聚合酶鏈式反應(PCR) ,Southern雜交、原位雜交和Northern雜交，而且是本領域 技術人員公知的?？梢栽诰哂胁煌瑖栏裥缘臈l件下實施雜交反應。雜交反應的嚴格性包括任意兩個 核酸分子會彼此雜交的難度和它們會保持雜交的條件。優(yōu)選的是，在低嚴格性條件、更優(yōu)選 嚴格條件、和最優(yōu)選高嚴格條件下，每個雜交的多核苷酸雜交至其對應多核苷酸。嚴格條件 是本領域技術人員知道的，而且可見于例如Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (1989)6.3. 1-6.3.6。含水的和不含水的方法均在此文獻中有記 載，而且均可使用。嚴格雜交條件的一個例子是在6X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中于約45°C 雜交，接著在0. 2X SSC/0. 1% SDS中于50°C清洗至少一次。嚴格雜交條件還可用在例如 0. 2X SSC/0. SDS中于551、601、或651清洗來實現(xiàn)。高嚴格條件包括例如在0. 5M磷 酸鈉/7% SDS中于65°C雜交，接著在0. 2X SSC/1 % SDS中于65 °C清洗至少一次。嚴格條 件的其它例子顯示于下文表1 高嚴格條件指至少像例如條件A-F那樣嚴格的條件；嚴格條 件指至少像例如條件G-L那樣嚴格的條件；而低嚴格條件指至少像例如條件M-R那樣嚴格 的條件。表1 雜交條件
19
權利要求
1.一種結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗原 結(jié)合片段包含至少一種與選自下組的氨基酸序列至少約95%相同的氨基酸序列SEQ ID NO :14,16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60， 62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108， 110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146， 148，150，152，154，156，158，160，162，165-168，171-193，213-229，240，242，244，246，和 248。
2.權利要求1的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是抗體。
3.權利要求1的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是 ScFv0
4.權利要求1的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是VH。
5.權利要求1的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是VL。
6.權利要求1的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是 CDR。
7.一種結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗原 結(jié)合片段包含至少一種由與選自下組的核苷酸序列至少約95%相同的核苷酸序列編碼的 氨基酸序列:SEQ ID NO :13,15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47， 49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93，95，97， 99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129，131，133，135， 137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，239，241，243，245，和 247。
8.權利要求7的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是抗體。
9.權利要求7的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是 ScFv0
10.權利要求7的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是VH。
11.權利要求7的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是\。
12.權利要求7的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是CDR。
13.權利要求1的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，包含至少一種選自下組的氨基酸序列 SEQ ID NO 14,16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56， 58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104， 106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142， 144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，165-168，171-193，213-229，240，242，244， 246，和 248。
14.權利要求13的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是抗體。
15.權利要求13的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是scFv。
16.權利要求13的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是VH。
17.權利要求13的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是八。
18.權利要求13的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是CDR。
19.一種結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗 原結(jié)合片段包含至少一種與選自下組的氨基酸序列至少約95%相同的氨基酸序列SEQ ID NO 6,8,10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52， 54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102， 104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140， 142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162-195，213-229，240，242，244，246，和 248，且其中，如果該結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含至少一種與選自下組的序列至少約95% 相同的氨基酸序列=SEQ ID NO :6，8，10，12，163，164，169，170，194，和195，那么該結(jié)合蛋 白或抗原結(jié)合片段必須還包含至少一種與選自下組的氨基酸序列至少約95%相同的氨基 酸序列=SEQ ID NO :14,16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52， 54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102， 104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140， 142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，165-168，171-193，213-229，240，242， 244，246，和 248。
20.一種結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗 原結(jié)合片段包含至少一種由與選自下組的核苷酸序列至少約95%相同的核苷酸序列編碼 的氨基酸序列:SEQ ID NO :5,7,9,11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41， 43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91， 93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129，131， 133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，239，241，243，245， 和247，且其中，如果該結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含至少一種由與選自下組的序列至少約95% 相同的核苷酸序列編碼的氨基酸序列SEQ ID N0:5，7，9，和11，那么該結(jié)合蛋白或抗原 結(jié)合片段必須還包含至少一種由與選自下組的核苷酸序列至少約95%相同的核苷酸序列 編碼的氨基酸序列:SEQ ID NO :13,15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43， 45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93， 95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129，131，133， 135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，239，241，243，245，和，247。
21.權利要求19的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，包含至少一種選自下組的氨基酸序列 SEQ ID NO 6,8,10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50， 52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100， 102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138， 140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162-195，213-229，240，242，244，246， 和 248，其中，如果該結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含至少一種與選自下組的序列至少約95% 相同的氨基酸序列=SEQ ID NO :6，8，10，12，163，164，169，170，194，和195，那么該結(jié)合蛋 白或抗原結(jié)合片段必須還包含至少一種與選自下組的氨基酸序列至少約95%相同的氨基 酸序列=SEQ ID NO :14,16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52， 54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102， 104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140， 142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，165—168，171—193，213—229，240，242， 244，246，和 248。
22.—種結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗 原結(jié)合片段包含輕鏈和重鏈，且其中該重鏈包含至少一種選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO 14,16，18，20，68，70，72，88，90，92，94，213，218，219，240，和 242。
23.—種結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗 原結(jié)合片段包含輕鏈和重鏈，且其中該輕鏈包含至少一種選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO :22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，74， 76,78,80,82,84,86,96,98,100，102，104，106，108，214-217，220-229，244，246，和 248。
24.權利要求22的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含 Vl域和Vh域，且其中該Vh域包含至少一種選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO =14,16,18, 和20。
25.權利要求23的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含 Vl域和Vh域，且其中該VL域包含至少一種選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO =22,24,26, 28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，215，217，221，223， 225，227，和 229。
26.權利要求22或23的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈包含選自下組的氨基 酸序列=SEQ ID NO :88，90，92，94，213，218，219，240，和對2，且所述輕鏈包含選自下組的氨 基酸序列:SEQ ID NO :96,98,100，102，104，106，108，214，216，220，222，224，226，228，244， 246，和 248。
27.一種結(jié)合受選自下組的結(jié)合蛋白識別的IL-21R表位的分離的結(jié)合蛋白或其抗原 結(jié)合片段AbA-AbW，H3-H6，L1-L6，L8-L21，和L23-L25，其中該結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 競爭性抑制選自下組的結(jié)合蛋白對人IL-21R的結(jié)合AbA-AbW，H3-H6，L1-L6，L8-L21，和 L23-L250
28.權利要求27的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，包含重鏈、輕鏈、或Fv片段，所述重鏈、輕 鏈、或Fv片段含有選自下組的氨基酸序列=SEQ ID NO 14，16，18，20，22，24，洸，28，30，32，.34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82， 84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124， 126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162， 165-168，171-193，213-229，240，242，244，246，和 248。
29.權利要求27的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，包含重鏈、輕鏈、或Fv片段，所述重鏈、輕 鏈、或Fv片段含有由選自下組的核苷酸序列編碼的氨基酸序列SEQ ID NO 13,15,17,19, 21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69， 71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115， 117，119，121，123，125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153， 155，157，159，161，239，241，243，245，和 247。
30.權利要求1，2，19，或20任一項的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段對人IL-21R的結(jié)合常數(shù)為至少約IO5M4sA
31.權利要求1，2，19，或20任一項的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段以約1.75nM或更少的IC5tl抑制IL-21介導的BaF3細胞增殖，且其中所述BaF3 細胞包含人IL-21R。
32.權利要求1，2，19，或20任一項的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段以約14. OnM或更少的IC5tl抑制IL-21介導的TFl細胞增殖，且其中所述TFl 細胞包含人IL-21R。
33.權利要求1，2，19，或20任一項的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段以約1.9nM或更少的IC5tl抑制IL-21介導的原代人B細胞增殖，且其中所述 B細胞包含人IL-21R。
34.權利要求1，2，19，或20任一項的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段以約1. 5nM或更少的IC5tl抑制IL-21介導的原代人CD4+細胞增殖，且其中所 述CD4+細胞包含人IL-21R。
35.權利要求1，2，19，或20任一項的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合與SEQ ID NO :2的至少100個連續(xù)氨基酸的任何序列至少約95% 相同的氨基酸序列。
36.權利要求1，2，19，或20任一項的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段抑制IL-21結(jié)合IL-21R。
37.權利要求1，2，19，或20任一項的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是IgGl。
38.權利要求1，2，19，或20任一項的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是人的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段。
39.一種藥物組合物，其包含權利要求1，2，19，或20任一項的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段。
40.一種分離的核酸，其編碼權利要求1，2，19，或20任一項的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段。
41.一種表達載體，其包含權利要求40的核酸。
42.一種宿主細胞，其經(jīng)權利要求41的載體轉(zhuǎn)化。
43.權利要求42的宿主細胞，其中所述宿主細胞是細菌、哺乳動物細胞、酵母細胞、植 物細胞、或昆蟲細胞。
44.一種診斷試劑盒，包含權利要求1，2，19，或20任一項的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段。
45.權利要求19-38任一項的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是抗體。
46.權利要求19-38任一項的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是scFv。
47.權利要求19-38任一項的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是VH。
48.權利要求19-38任一項的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是\。
49.權利要求19-38任一項的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是CDR。
全文摘要
本發(fā)明提供特異性結(jié)合人白介素-21受體(IL-21R)的結(jié)合蛋白及其抗原結(jié)合片段。該結(jié)合蛋白能起例如IL-21R活性拮抗劑的作用，由此調(diào)控一般而言的免疫應答，及具體而言的由IL-21R介導的免疫應答。所公開的組合物和方法可以例如在診斷和/或治療IL-21R相關病癥例如炎性病癥、自身免疫性疾病、變態(tài)反應、移植排斥、癌癥、和其它免疫系統(tǒng)病癥中使用。
文檔編號C07K16/28GK102105491SQ200980128968
公開日2011年6月22日 申請日期2009年5月26日 優(yōu)先權日2008年5月23日
發(fā)明者尤利亞·武格梅斯特, 德博拉·A·揚, 戴維·洛, 維亞·瓦爾格-阿徹, 萊爾德·布盧姆, 達文德·吉爾 申請人:醫(yī)學免疫有限公司, 惠氏有限責任公司