專利名稱：胸腺素α1活性片段環(huán)肽類似物及其聚乙二醇化衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及天然或非天然氨基酸取代的胸腺素α1活性片段和環(huán)肽類似物，及其聚乙二醇化衍生物，及其制備方法，含他們的藥物組合物及其在治療或者預防與免疫缺陷、免疫功能低下等有關疾病當中的用途。
背景技術：
胸腺素α1(Tα1)是一種重要的多肽類免疫調(diào)節(jié)因子，具有顯著的增強免疫功能的作用是一種針對T淋巴細胞的免疫增強劑，能促進T細胞的成熟和分化，并且促使成熟的淋巴細胞分泌多種淋巴因子(如白介素-2和γ-干擾素等)還能促進白介素-2受體的生成。Tα1由28個氨基酸殘基組成，分子量3108，等電點4.2，N-端為乙?；Y構，其氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asp-OH近年來，Tα1的研究主要集中于臨床應用，關于其構效關系的研究報道不多。1980年，Wong等合成Tα1和desAc-Tα1，通過體外的硫唑嘌呤抑制E-玫瑰花結形成試驗顯示它們的活性與天然Tα1相當，說明Tα1的N-端乙酰化與否對其活性無影響。除Frasca等報道Tα1的N-端片段1-14能在成年大鼠(6-18月)體內(nèi)促進IL-2受體表達，增強輔助性T細胞的活性外，其它研究表明Tα1的N-端片段基本上無活性，C-端部分片段具有較好的活性。Abiko等用體外的E-玫瑰花結形成試驗證實Tα1的某些C-端片段具有部分活性Tα1(100％)，14-28(9.83％)，19-28(1.04％)。Felix等用體內(nèi)的免疫抑制小鼠試驗證實N-端片段1-4、4-10、1-10和1-14基本無活性；C-端片段15-28和18-28與Tα1活性相當；21-28(75％)、23-28(50％)和25-28(50％)具有部分活性。Ciaredelli等用體外的混合淋巴細胞增殖試驗(MLC)證實Tα1的C-端20-26、25-27及25-28具有約90％活性。Ho等報道C-端片段13-19與Tα1在體外具有相同的促臍帶血T淋巴細胞分化成熟的活性，20-25和20-28具有部分活性。Ciaredelli等用體外的硫唑呤抑制E-玫瑰花結形成試驗發(fā)現(xiàn)C-端17-28區(qū)域部分片段有較好的活性。
Grottesi等通過圓二色譜(CD)和2D-NMR對Tα1在溶液中的構象進行了研究，結果表明Tα1在水溶液中并不形成優(yōu)勢的二級構象，但在疏水環(huán)境中能形成一定的二級結構。在40％的三氟乙醇(TFE)水溶液中，Val5和Glu8之間形成β-轉角，Lys17和Glu24之間形成α-螺旋。由于Tα1受體結構還尚未被發(fā)現(xiàn)，Grottesi等推測Tα1與淋巴細胞的作用機制可能是Tα1首先通過極性氨基酸殘基與細胞膜形成靜電作用，然后誘導Lys17至Glu24之間序列形成α-螺旋結構并嵌入細胞膜，進而與IL-2受體跨膜區(qū)發(fā)生靜電作用。這一作用模型有助于解釋Tα1與IL-2在生物活性中的協(xié)同作用。
病毒性乙型肝炎和丙型肝炎可以導致肝硬化引起肝癌，全球目前有3.5億乙型肝炎病毒攜帶者和1.5億丙型肝炎攜帶者。我國是乙肝大國，有1.2億以上的乙型肝炎攜帶者，有三千萬以上的乙型肝炎患者，化學合成的Tα1(日達仙)已于1996年首先在中國上市，單獨使用或與α-干擾素聯(lián)合使用治療慢性乙型肝炎。日達仙在治療乙型肝炎方面的療效等同于或好于現(xiàn)有處方藥品。日達仙對于許多其它疾病(如丙型肝炎、非小細胞肺癌、黑色素瘤和艾滋病等)都有一定的療效。另外，日達仙還可作為疫苗輔助藥，來加強流感疫苗和乙型肝炎疫苗的免疫效果。目前，日達仙正在美國進行治療HCV的3期臨床試驗和治療肝癌的2期臨床試驗，治療HBV的3期臨床試驗正在日本進行，治療惡性黑色素瘤的2期臨床試驗正在歐洲進行。由此可見，研究Tα1及其類似物，尋找更高效的免疫增強劑和抗病毒藥具有良好的前景。
目前臨床使用的Tα1(日達仙)為化學合成品，價格昂貴、用藥劑量大、周期長，因此進行構效關系研究發(fā)現(xiàn)更好的類似物有較好的應用前景。與其它肽類藥物一樣，Tα1具有諸如半衰期短、在體內(nèi)易被降解等缺點，因此設計活性高、抗體內(nèi)降解的Tα1類似物具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人及其所在實驗室研究現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)Tα1及其衍生物具有良好的預防或治療免疫缺陷、免疫功能低下有關疾病的生物活性，它們與聚乙二醇形成的衍生物在能夠保持活性的同時，延長了如下(I)、(IV)、(VII)、(VIII)組的化合物在體內(nèi)代謝的半衰期，從而降低了如下(I)、(IV)、(VII)、(VIII)組的化合物的用量并且延長了其在體內(nèi)作用時間。
具體的，本發(fā)明涉及如下所示的Tα1活性片段衍生物及其立體異構體。
本發(fā)明的一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其為(I)組的化合物X1-Y1-Y2-X2X1-X2-Y1-Y2-X3X1-X2-X3-Y1-Y2-X4X1-X2-Y1-Y2-X3-X4X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5
X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7(I)其中，X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7獨立地為L-或D-型的天然或非天然的堿性、酸性或芳香性氨基酸及其衍生物，所述堿性氨基酸選自Arg、Lys、Glu、Cys、His、Trp、Mob、Nal、Pya、Phe(X)、和Phg(X)，其中X為氫、鹵素、硝基、羧基、或C1-C4烷基任選的單取代或者二取代，取代基選自H、4-F、3-F、2-F、4-Cl、2-Cl、4-Br、2-Br、3-Br、2、5-2Cl、4-F、3-Cl、3-NO2；酸性氨基酸選自Asp、Glu、His、Tyr、Trp、Mob、Nal、Pya、和Phg(X)，其中X為氫、鹵素、硝基、羧基、或C1-C4烷基任選的單取代或者二取代，取代基選自H、4-F、3-F、2-F、4-Cl、2-Cl、4-Br、2-Br、3-Br、2、5-2Cl、4-F、3-Cl、3-NO2；Y1、Y2、Y3、Y4獨立的為L-或D-型的天然或非天然中性、親脂性或者芳香性氨基酸及其衍生物，選自Gly、Ala、β-Ala、GABA、Val、Leu、Ile、Pro、His、Tyr、Trp、Mob、Nal、Pya、Phe(X)、Phg(X)，其中X為氫、鹵素、硝基、羧基、或C1-C4烷基任選的單取代或者二取代，取代基選自H、4-F、3-F、2-F、4-Cl、2-Cl、4-Br、2-Br、3-Br、2、5-2Cl、4-F、3-Cl、3-NO2。
本發(fā)明的另一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中上述(I)組中的化合物中任意位點的氨基經(jīng)過PEG修飾，成為如下的(II)組所示的化合物，其中所述氨基包括N-端氨基和氨基酸側鏈氨基[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-Y1-Y2-X2[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-Y1-Y2-X3[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5 Z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7(II)其中PEG表示RO(CH2CH2O)n-CH2CH2，R＝H或C和CH3，其中n＝5-1000；X＝O、NH或NHCO；m＝0-6；Z＝1-3、X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如上述所示。
本發(fā)明的又一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中(I)組化合物的任意位點的羧基經(jīng)PEG共價修飾為如下所示的(III)組的化合物，其中所述羧基包括C-端羧基，天冬氨酸和谷氨酸側鏈羧基[PEG-X-CO]z-X1-Y1-Y2-X2[PEG-X-CO]z-X1-X2-Y1-Y2-X3[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4[PEG-X-CO]z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5[PEG-X-CO]z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3[PEG-X-CO]z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6[PEG-X-CO]z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4 z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7[PEG-X-CO]z-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7(III)其中X1、X2、Y1、Y2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如前述所示，X＝O或NH，Z＝1-3。
本發(fā)明的又一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中在(I)組化合物所示肽序列中任意位置，包括N端和C端以及肽片段中引入半胱氨酸，形成如下所示的(IV)組的化合物Cys-X1-Y1-Y2-X2Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4Cys-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5Cys-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6Cys-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7(IV)本發(fā)明的又一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其進一步將所述(IV)組的化合物經(jīng)選自PEG-MAL、PEG-VS和PEG-IODS的方法修飾后形成如下所示的(V)組的化合物，其中PEG可以為鏈狀、星狀、環(huán)狀、多臂型結構PEG-M-Cys-X1-Y1-Y2-X2PEG-M-Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3PEG-M-Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4PEG-M-Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4PEG-M-Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5PEG-M-Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3PEG-M-Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3PEG-M-Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5PEG-M-Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6PEG-M-Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4PEG-M-Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4PEG-M-Cys-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5PEG-M-Cys-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6PEG-M-Cys-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7PEG-M-Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7PEG-M-Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7(V)，其中 Cys為半胱氨酸，通過側鏈硫原子和M基團共價相連；X1、X2、Y1、Y2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如前述。
本發(fā)明的又一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中在所述(I)組的化合物之C端引入親電性基團或者親核性基團，而對應在N端引入相反的親核性基團或者親電性基團，得到如下所示的(VI)組的化合物，其中所述親核試劑選自碘負離子、水、羥基負離子、甲氧基負離子、乙?；撾x子、氨基、硝酸根負離子、亞硝酸根負離子、疊氮基負離子、氰基負離子、1-丙炔基負離子、丙二酸二甲酯負離子、巰基負離子、甲硫基負離子、硫氰基負離子、二甲硫醚、三甲磷；所述親電試劑選自硫代羧基乙酰氨、鹵素、無機酸、有機酸、醛、活潑酮、羧酸、酯、硝基化合物Z1-X1-Y1-Y2-X2-Z2Z1-X1-X2-Y1-Y2-X3-Z2Z1-X1-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-Z2Z1-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Z2Z1-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Z2Z1-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-Z2Z1-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4-Z2Z1-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4-Z2Z1-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5-Z2Z1-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6-Z2Z1-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7-Z2Z1-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7-Z2Z1-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7-Z2(VI)，其中Z1和Z2為一組具有親核性基團和親電性基團的氨基酸殘基或者其它片段，當Z1帶有親核性基團時Z2帶有親電性基團，當Z1帶有親電性基團時Z2帶有親核性基團。
優(yōu)選的，上述四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其為CEVVE-SCH2CH2CONH2CKEVVE-SCH2CH2CONH2CKKEVVE-SCH2CH2CONH2CKEVVEE-SCH2CH2CONH2CEKKEVVE-SCH2CH2CONH2CKEKKEVVE-SCH2CH2CONH2CKEVVEKEVVE-SCH2CH2CONH2
CKEVVEEAE-SCH2CH2CONH2CKEVVEEA-SCH2CH2CONH2，或CKEVVEEAEN-SCH2CH2CONH2。
本發(fā)明的又一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中在(IV)和(VI)組的化合物的任意位點引入脂肪族鏈、脂肪醚鏈、硫醚鏈、氨基酸以及其它柔性的鏈狀結構單元，得到如下所示的(VII)組的化合物Cys-Ln-X1-Y1-Y2-X2Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4Cys-Ln-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5Cys-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6Cys-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7，或者是以下結構Z1-Ln-X1-Y1-Y2-X2-Z2Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-Z2Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Z2
Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-Z2Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7-Z2Z1-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7-Z2(VII)其中，L表示任何柔性的鏈狀結構單元，n＝1-4，以上通式中所示的L所在位點并不是可以引入的唯一位點，L可以在肽序列中除兩端以外的任意位置。
優(yōu)選的，本發(fā)明所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其包括CLEVVECLKEVVECLKKEVVECLKEVVEECLEKKEVVECLKEKKEVVECLKEVVEKEVVECLKEVVEEAECLKEVVEEACLKEVVEEAENCLLEVVECLLKEVVECLLKKEVVECLLKEVVEECLLEKKEVVECLLKEKKEVVE
CLLKEVVEKEVVECLLKEVVEEAECLLKEVVEEACLLKEVVEEAEN，或者是以下結構的化合物CLEVVE-SCH2CH2CONH2CLKEVVE-SCH2CH2CONH2CLKKEVVE-SCH2CH2CONH2CLKEVVEE-SCH2CH2CONH2CLEKKEVVE-SCH2CH2CONH2CLKEKKEVVE-SCH2CH2CONH2CLKEVVEKEVVE-SCH2CH2CONH2CLKEVVEEAE-SCH2CH2CONH2CLKEVVEEA-SCH2CH2CONH2CLKEVVEEAEN-SCH2CH2CONH2CLLEVVE-SCH2CH2CONH2CLLKEVVE-SCH2CH2CONH2CLLKKEVVE-SCH2CH2CONH2CLLKEVVEE-SCH2CH2CONH2CLLEKKEVVE-SCH2CH2CONH2CLLKEKKEVVE-SCH2CH2CONH2CLLKEVVEKEVVE-SCH2CH2CONH2CLLKEVVEEAE-SCH2CH2CONH2CLLKEVVEEA-SCH2CH2CONH2CLLKEVVEEAEN-SCH2CH2CONH2，其中，L＝-NHCH2CH2OCH2COO-。
本發(fā)明的又一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中將任一前述(I)、(IV)、(VII)組的化合物以任何已知的環(huán)合方法進行環(huán)合，得到(VIII)組所示的環(huán)狀化合物
環(huán)(X1-Y1-Y2-X2)環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3)環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)環(huán)(X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)環(huán)(X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)環(huán)(X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)或是以下結構環(huán)(Cys-X1-Y1-Y2-X2)環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)
環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)或者是以下化合物環(huán)(Z1-Ln-X1-Y1-Y2-X2)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)(VIII)其中，X1、X2、Y1、Y2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如前述所示，Z1的定義如前述所示、Ln的定義如前述所示。
優(yōu)選的，本發(fā)明所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其為以下結構環(huán)(EVVE)環(huán)(KEVVE)環(huán)(KKEVVE)環(huán)(KEVVEE)環(huán)(EKKEVVE)環(huán)(KEKKEVVE)環(huán)(KEVVEKEVVE)環(huán)(KEVVEEAE)
環(huán)(KEVVEEA)環(huán)(KEVVEEAEN)或者是環(huán)(CEVVE)環(huán)(CKEVVE)環(huán)(CKKEVVE)環(huán)(CKEVVEE)環(huán)(CEKKEVVE)環(huán)(CKEKKEVVE)環(huán)(CKEVVEKEVVE)環(huán)(CKEVVEEAE)環(huán)(CKEVVEEA)環(huán)(CKEVVEEAEN)或者是環(huán)(CLEVVE)環(huán)(CLKEVVE)環(huán)(CLKKEVVE)環(huán)(CLKEVVEE)環(huán)(CLEKKEVVE)環(huán)(CLKEKKEVVE)環(huán)(CLKEVVEKEVVE)環(huán)(CLKEVVEEAE)環(huán)(CLKEVVEEA)環(huán)(CLKEVVEEAEN)或者是環(huán)(CLLEVVE)環(huán)(CLLKEVVE)環(huán)(CLLKKEVVE)環(huán)(CLLKEVVEE)
環(huán)(CLLEKKEVVE)環(huán)(CLLKEKKEVVE)環(huán)(CLLKEVVEKEVVE)環(huán)(CLLKEVVEEAE)環(huán)(CLLKEVVEEA)環(huán)(CLLKEVVEEAEN)。
本發(fā)明的又一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中所述(VIII)組的化合物中任意位點的氨基經(jīng)過PEG修飾的，得到如下所示(XI)組的化合物，其中所述氨基包括N-端氨基和天然氨基酸或者非天然氨基酸的側鏈氨基，[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-Y1-Y2-X2)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-Y1-Y2-X2)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3) Z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)或者是[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Z1-Ln-X1-Y1-Y2-X2)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]Z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)(XI)，其中所述PEG表示RO(CH2CH2O)n-CH2CH2，R＝H或C和CH3，n＝5-1000；X＝O、NH或NHCO；m＝0-6；Z＝1-3、X1、X2、Y1、Y2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如前述所示，Z1、Ln的定義如前述所示。
本發(fā)明的又一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，包括以下化合物PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKEVVEE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CEKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKEKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKEVVEKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)xCO-環(huán)(CKEVVEEAE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKEVVEEA)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKEVVEEAEN)或者是以下結構PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CL KEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKEVVEE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLEKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKEKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKEVVEKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKEVVEEAE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKEVVEEA)
PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKEVVEEAEN)或者是以下結構的化合物PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEVVEE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLEKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEVVEKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEVVEEAE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEVVEEA)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEVVEEAEN)其中，X＝O、NH、或NHCO；M＝0-6。
本發(fā)明的又一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中(VIII)組的化合物中任意位點的羧基經(jīng)過PEG修飾，得到如下(IX)所示的化合物，其中所述氨基包括C-端氨基和天然氨基酸或者非天然氨基酸的側鏈羧基[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-Y1-Y2-X2)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6) z-環(huán)(X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-Y1-Y2-X2)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)或者是以下結構[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-Y1-Y2-X2)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6) z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)(IX)其中，X1、X2、Y1、Y2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如權利要求1所示，Z1、Ln的定義如前述所示；X＝O或NH，Z＝1-3。
本發(fā)明的又一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，選自[PEG-X-CO]z-環(huán)(EVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEVVEE)[PEG-X-CO]z環(huán)(EKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEVVEKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEVVEEAE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEVVEEA)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEVVEEAEN)[PEG-X-CO]z-環(huán)(CEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEVVEE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEVVEKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEVVEEAE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEVVEEA)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEVVEEAEN)
或者是以下結構[PEG-X-CO]z環(huán)(CLEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEVVEE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEVVEKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEVVEEAE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEVVEEA)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEVVEEAEN)或者是以下結構的化合物[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEVVEE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEVVEKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEVVEEAE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEVVEEA)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEVVEEAEN)。
本發(fā)明的又一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中(VIII)組的化合物在肽序列或已有半胱氨酸位置或序列中任意位置引入半胱氨酸后，經(jīng)選自PEG-MAL，PEG-VS和PEG-IODS的方法修飾，得到如下所示的(X)組的化合物，其中PEG可以為鏈狀、星狀、環(huán)狀、多臂型結構PEG-M-環(huán)(Cys-X1-Y1-Y2-X2)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3)
PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)也可以是以下結構PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-Y1-Y2-X2)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1一X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)(X)其中，
其中X1、Z1可以為半胱氨酸，通過側鏈硫原子和M基團共價相連；X1、X2、Y1、Y2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如前述所示，Z1、Ln的定義如前述所示。
本發(fā)明的又一個方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其選自[PEG-M]-環(huán)(CEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CKEVVEE)[PEG-M]-環(huán)(CEKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CKEKKEVVE)[PEG-M]環(huán)(CKEVVEKEVVE)[PEG-M]環(huán)(CKEVVEEAE)[PEG-M]-環(huán)(CKEVVEEA)[PEG-M]-環(huán)(CKEVVEEAEN)或者是以下結構[PEG-M]-環(huán)(CLEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLKEVVEE)[PEG-M]-環(huán)(CLEKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLKEKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLKEVVEKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLKEVVEEAE)[PEG-M]-環(huán)(CLKEVVEEA)[PEG-M]-環(huán)(CLKEVVEEAEN)
或者是以下結構的化合物[PEG-M]-環(huán)(CLLEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEVVEE)[PEG-M]環(huán)(CLLEKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEVVEKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEVVEEAE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEVVEEA)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEVVEEAEN)。
本發(fā)明還涉及至少一種選自上述(I)、(II)、(III)、、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)、(X)組的化合物或其任一組合在制備用于治療和/或預防免疫缺陷或免疫力低下有關疾病的藥物中用途。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其中包括至少一種選自上述(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)、(X)組的化合物，及藥用載體或賦形劑。
本發(fā)明還涉及制備上述(I)、(II)、(III)、、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)、(X)組的化合物的方法，其包括用已知的溶液法和固相法合成。
本發(fā)明所用的PEG-OH結構為RO(CH2CH2O)NCH2CH2OH，其中R＝H或者CH3，平均分子量由幾百到幾萬的PEG-OH可以作為商品化試劑購買到，PEG-NH2、PEG-NHCOCH2CH2COOH可以通過如下途徑反應獲得
具體的，在PEG的一端先引入氨基、羧基或制備PEG化的氨基酸，再用溶液法或者固相合成法偶聯(lián)到肽序列中去，可實現(xiàn)對多肽的N-端氨基，C-端羧基，Lys側鏈氨基，Asp或Glu側鏈羧基的修飾，將PEG-NH2與馬來酸酐，乙烯基亞砜、碘代乙酸酐反應可得到PEG-MAL、PEG-VS、PEG-IODO。
本發(fā)明所涉及的Wang Resin、MBHA Resin、DCC、HOBt、HBTU、BOP、Fmoc氨基酸、BOC保護氨基酸，TFA、DIEA、m PEG-OH、NMM等試劑均通過購買獲得。所有非天然氨基酸均由本實驗室合成并拆分。
根據(jù)本發(fā)明，與免疫缺陷或免疫功能低下有關的疾病有乙型肝炎、丙型肝炎、非小細胞肺癌、黑色素瘤、艾滋病等。
根據(jù)本發(fā)明，所用的術語如Tα1(17-27)，指的是在Tα1中從N-端到C-端相應位置的序列。
本發(fā)明所示(I)-(X)組的Tα1活性片段衍生物及其立體異構體或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。
給藥劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、脂質體、透皮劑、口含片、栓劑、凍干粉針劑等?？梢允瞧胀ㄖ苿⒕忈屩苿?、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子，包括例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、硫酸鈣、氯化鈉、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進劑，如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進一步制成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。為了將給藥單元制成栓劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高級醇、高級醇的酯、明膠、半合成甘油酯等。為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分式(I)-(X)Tα1活性片段衍生物或其立體異構體與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分(I)-(X)組的三肽衍生物或其立體異構體制成微囊劑，混懸于水性介質中制成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應用。為了將給藥單元制成注射用制劑，如溶液劑、乳劑、凍干粉針劑和混懸劑，可以使用本領域常用的所有稀釋劑，如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧基化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑等。
此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
本發(fā)明(I)-(X)組的化合物，衍生物或其立體異構體的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預防或治療(I)-(X)組的Tα1活性片段衍生物疾病的性質和嚴重程度，患者或動物的性別、年齡、體重及個體反應，所用的具體化合物，給藥途徑及給藥次數(shù)等。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、在、四個劑量形式給藥。
在本發(fā)明中使用的縮寫具有下面的含義

離子化飛行時間質譜本發(fā)明中，所有氨基酸構型除注明為D-型外，均為L-型。
實施例下列實施例代表本發(fā)明的說明性實施方案，但并不意味本發(fā)明受此實施例的限制。
實施例所用的固相合成載體Wang樹脂從ACT公司購得，DCC、HOBt、HBTU、Fmoc保護氨基酸均由上海吉爾生化購得，TFA為ACROS公司產(chǎn)品，平均分子量為2000的PEG-OH為Sigma公司產(chǎn)品。
實施例1BocNHCH2CH2OCH2COOH的合成BocNHCH2OCH2COOH
●BocNHCH2CH2OH的合成將水30ml加入250ml反應器中，NH2CH2CH2OH6.1g(100mmol)加入反應器中，冷卻到0℃。在冰浴條件下，(Boc)2O21.82g(100mmol)溶于30ml二氧六環(huán)中加入到反應器中，控制溫度在0℃以下，滴加1mol/LnaOH溶液100ml，40min滴加完，自然升至室溫，繼續(xù)反應12小時，(Boc)2O消失，停止反應，點板檢測，反應液用乙酸乙酯萃取三次，用飽和NaCl溶液洗滌，用無水Na2SO4干燥，減壓蒸干，得到15.6g無色油狀物，收率97.2％。
●BocNHCH2CH2OCH2COOH的合成于500ml三口瓶中加入重蒸DMF350ml，BocNH2CH2OH10.54g(0.1mol)，加入NaH(52％)8.15g(0.2mol)，至溶液中無氣泡冒出，然后滴加BrCH2COOH13.65g(0.15mmol)的DMF溶液，室溫攪拌20小時，進行處理，減壓蒸去DMF，以適量水溶解，用適量乙醚萃取兩次，水相用飽和硫酸鈉調(diào)節(jié)pH值于2-3之間，用乙酸乙酯萃取水相三次，然后用飽和NaCl溶液洗滌，最后用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得到5.51g淺黃色油狀物，收率38％。
實施例2Cys-Glu-Val-Val-Glu-SCH2CH2CONH2的合成350mgMBHA樹脂(負載量為0.57mmol/g，0.2mmol)，懸浮于DMF中，依次加入0.12gHOBt， 150μL 3-巰基丙酸(1.2mmol)，160mg DCC，加入少量的DCM溶解充分，在室溫下磁力攪拌4個小時，用DMF、DCM、MeOH、DCM各洗滌兩次，每次兩分鐘。茚三酮檢驗呈陰性。然后用50mg半胱氨酸甲酯鹽酸鹽(0.2mmol)，100mg(0.2mmol)三苯基磷和120μIDIEA(0.2mmol)混合溶于DMF，五分鐘后加入樹脂中，室溫反應兩小時，用DMF、DCM、MeOH、DCM洗滌各兩次，4倍量的BOC保護的氨基酸、BOP、6倍量的DIEA混合，溶于DMF，五分鐘后混合物加入到反應器中，室溫反應2小時，以DMF、DCM、MeOH、DCM洗滌，用定性的Ellman實驗檢測，陰性溶液樹脂為無色或淡黃色，如果呈橘紅色則再以上述縮合配料量減半反應一個小時，應用BOC/Bzl固相縮合體系從C端逐步延長肽鏈，以4NHCl/DIOX(0.05％吲哚)脫保護，縮合反應以2倍量的BOC-AA與2倍量的DCC/HOBt反應1小時，每步縮合均用茚三酮實驗檢測，如果為陽性則再用4倍量的BOC-AA、BOP和6倍量的DIEA反應半個小時，肽鏈合成結束以后，線性肽硫酯用HF/P-thiocresol/m-cresol(93/2/5，v/v/v)，在0℃反應1.5小時后從樹脂上切下，HF抽干后用鈉絲干燥的冰凍的無水乙醚洗滌數(shù)次，用10％的冰醋酸提取粗肽，凍干保存。
實施例三環(huán)(CEVVE)的合成350mgMBHA樹脂(負載量為0.57mmol/g，0.2mmol)，懸浮于DMF中，依次加入0.12gHOBt，150μL 3-巰基丙酸(1.2mmol)，160mg DCC，加入少量的DCM溶解充分，在室溫下磁力攪拌4個小時，用DMF、DCM、MeOH、DCM各洗滌兩次，每次兩分鐘。茚三酮檢驗呈陰性。然后用50mg半胱氨酸甲酯鹽酸鹽(0.2mmol)，100mg(0.2mmol)三苯基磷和120μlDIEA(0.2mmol)混合溶于DMF，五分鐘后加入樹脂中，室溫反應兩小時，用DMF、DCM、MeOH、DCM洗滌各兩次，4倍量的BOC保護的氨基酸、BOP、6倍量的DIEA混合，溶于DMF，五分鐘后混合物加入到反應器中，室溫反應2小時，以DMF、DCM、MeOH、DCM洗滌，用定性的Ellman實驗檢測，陰性溶液樹脂為無色或淡黃色，如果呈橘紅色則再以上述縮合配料量減半反應一個小時，應用BOC/BZL固相縮合體系從C端逐步延長肽鏈，以4NHCl/DIOX(0.05％吲哚)脫保護，縮合反應以2倍量的BOC-AA與2倍量的DCC/HOBt反應1小時，每步縮合均用茚三酮實驗檢測，如果為陽性則再用4倍量的BOC-AA、BOP和6倍量的DIEA反應半個小時，肽鏈合成結束以后，線性肽硫酯用HF/P-thiocresol/m-cresol(93/2/5，v/v/v)，在0℃反應1.5小時后從樹脂上切下，HF抽干后用鈉絲干燥的冰凍的無水乙醚洗滌數(shù)次，用10％的冰醋酸提取粗肽，凍干保存。也可將環(huán)合的緩沖溶液直接提取線性肽硫酯進行環(huán)合反應。如果肽硫酯溶解度不好，還可以考慮使用CH3CN/H2O提取粗肽，然后減壓抽去CH3CN后凍干保存。
線性肽硫酯在用凝膠柱層析初步純化或者HPLC純化后進行環(huán)合反應，反應在NaHCO3的水溶液中進行，如果溶解度不好可以適當加入CH3CN的濃度，控制pH值在7.3-7.6，加入TCEP防止巰基的氧化，反應由HPLC監(jiān)控，反應在4小時內(nèi)完成，產(chǎn)物用ESI-MS進行鑒定。
實施例四PEG-MAL-環(huán)(CKEVVEE的合成1 mPEG5000-MAL的合成稱取mPEG5000-OH 20g(4mmol)置于250ml反應瓶中，加入100mlCH2Cl2，固體溶解后再加入3.0ml Et3N(20mmmol)和3.8g Ts-Cl(20mmol)，室溫攪拌反應。TLC(CH3OH∶CH2Cl2＝1∶6)監(jiān)測反應完全后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，加100ml無水乙醚沉淀出固體，再用無水乙醇重結晶兩次，得15.2g mPEG5000-OTs，收率70％。
將15g mPEG5000-OTs(3mmol)溶于30ml DMF，加入1.68g(18mmol)鄰苯二甲酰亞胺鉀鹽，在N2保護下，120℃反應4小時。減用蒸去溶劑，將殘余物溶于50ml無水乙醇，加入2.0ml水合肼，回流反應4小時。旋轉蒸發(fā)除去溶劑，將殘余物溶于CH2Cl2，過濾除去不溶物，再將濾液旋轉蒸發(fā)除去溶劑，用無水乙醚沉淀出固體，再以無水乙醇-乙醚重結晶，得12.5g mPEG5000-NH2，收率83％。
將1.25g mPEG5000-NH2溶于10ml二氧六環(huán)，加入馬來酸酐0.1g，80C攪拌反應30min。減壓蒸去溶劑，加入50ml無水乙醚，冷卻沉淀出固體，濾集固體，干燥后得1.10g。將所得固體溶于15ml乙酸酐，加入0.5g乙酸鈉，100℃攪拌反應45min。減壓蒸去溶劑，將殘余物用二氯甲烷溶解，濾去不溶物，向濾液中加入適量活性炭，放置30min，濾除活性炭，將濾液濃縮至干，加入無水乙醚，沉淀出國體，濾集、干燥后得淺黃色固體0.61g mPEG5000-MAL，收率48％。RP-HPLC分析tR＝36.79min。
色譜條件Waters 600 HPLC色譜柱Inersil ODS-3(10×250mm) 紫外檢測波長215nm流動相A-0.05％TFA/H2O B-0.05％TFA/70％CH3CN/H2O流速2.0mL/min

350mgMBHA樹脂(負載量為0.57mmol/g，0.2mmol)，懸浮于DMF中，依次加入0.12gHOBt，150μL 3-巰基丙酸(1.2mmol)，160mg DCC，加入少量的DCM溶解充分，在室溫下磁力攪拌4個小時，用DMF、DCM、MeOH、DCM各洗滌兩次，每次兩分鐘。茚三酮檢驗呈陰性。然后用50mg半胱氨酸甲酯鹽酸鹽(0.2mmol)，100mg(0.2mmol)三苯基磷和120μlDIEA(0.2mmol)混合溶于DMF，五分鐘后加入樹脂中，室溫反應兩小時，用DMF、DCM、MeOH、DCM洗滌各兩次，4倍量的BOC保護的氨基酸、BOP、6倍量的DIEA混合，溶于DMF，五分鐘后混合物加入到反應器中，室溫反應2小時，以DMF、DCM、MeOH、DCM洗滌，用定性的Ellman實驗檢測，陰性溶液樹脂為無色或淡黃色，如果呈橘紅色則再以上述縮合配料量減半反應一個小時，應用BOC/Bzl固相縮合體系從C端逐步延長肽鏈，以4NHCl/DIOX(0.05％吲哚)脫保護，縮合反應以2倍量的BOC-AA與2倍量的DCC/HOBt反應1小時，每步縮合均用茚三酮實驗檢測，如果為陽性則再用4倍量的BOC-AA、BOP和6倍量的DIEA反應半個小時，肽鏈合成結束以后，線性肽硫酯用HF/P-thiocresol/m-cresol(93/2/5，v/v/v)，在0℃反應1.5小時后從樹脂上切下，HF抽干后用鈉絲干燥的冰凍的無水乙醚洗滌數(shù)次，用10％的冰醋酸提取粗肽，凍干保存。
2、環(huán)(CEVVE)的合成350mgMBHA樹脂(負載量為0.57mmol/g，0.2mmol)，懸浮于DMF中，依次加入0.12gHOBt，150μL 3-巰基丙酸(1.2mmol)，160mg DCC，加入少量的DCM溶解充分，在室溫下磁力攪拌4個小時，用DMF、DCM、MeOH、DCM各洗滌兩次，每次兩分鐘。茚三酮檢驗呈陰性。然后用50mg半胱氨酸甲酯鹽酸鹽(0.2mmol)，100mg(0.2mmol)三苯基磷和120μlDIEA(0.2mmol)混合溶于DMF，五分鐘后加入樹脂中，室溫反應兩小時，用DMF、DCM、MeOH、DCM洗滌各兩次，4倍量的BOC保護的氨基酸、BOP、6倍量的DIEA混合，溶于DMF，五分鐘后混合物加入到反應器中，室溫反應2小時，以DMF、DCM、MeOH、DCM洗滌，用定性的Ellman實驗檢測，陰性溶液樹脂為無色或淡黃色，如果呈橘紅色則再以上述縮合配料量減半反應一個小時，應用BOC/BZL固相縮合體系從C端逐步延長肽鏈，以4NHCl/DIOX(0.05％吲哚)脫保護，縮合反應以2倍量的BOC-AA與2倍量的DCC/HOBt反應1小時，每步縮合均用茚三酮實驗檢測，如果為陽性則再用4倍量的BOC-AA、BOP和6倍量的DIEA反應半個小時，肽鏈合成結束以后，線性肽硫酯用HF/P-thiocresol/m-cresol(93/2/5，v/v/v)，在0℃反應1.5小時后從樹脂上切下，HF抽干后用鈉絲干燥的冰凍的無水乙醚洗滌數(shù)次，用10％的冰醋酸提取粗肽，凍干保存。也可將環(huán)合的緩沖溶液直接提取線性肽硫酯進行環(huán)合反應。如果肽硫酯溶解度不好，還可以考慮使用CH3CN/H2O提取粗肽，然后減壓抽去CH3CN后凍干保存。
線性肽硫酯在用凝膠柱層析初步純化或者HPLC純化后進行環(huán)合反應，反應在NaHCO3的水溶液中進行，如果溶解度不好可以適當加入CH3CN的濃度，控制pH值在7.3-7.6，加入TCEP防止巰基的氧化，反應由HPLC監(jiān)控，反應在4小時內(nèi)完成，產(chǎn)物用ESI-MS進行鑒定。
3、環(huán)肽的PEG-MAL修飾將經(jīng)RP-HPLC純化后的環(huán)(CEVVE)溶于水中，以碳酸氫鈉調(diào)pH至8，加入3倍當量的mPEG5000-MAL，室溫反應，用RP-HPLC監(jiān)測反應進程和分離產(chǎn)物，反應一般在四小時內(nèi)完成。Cys(mPEG5000-MAL)-Tα1(17-24)經(jīng)MALDI-TOF-MS分析，在6173附近有一系列峰，相鄰兩峰分子量相差約44，具有聚乙二醇的典型結構特征。通過和沒有接上環(huán)肽分子的mPEG-NH2比較，減去作為活化官能團的馬來酰亞氨的式量，其值基本和環(huán)肽的分子量相對應，證明成功實現(xiàn)了環(huán)肽類化合物的mPEG化修飾。
實施例53H-tdR摻入法檢測對小鼠脾淋巴細胞的增值反應脾細胞懸液的制備無菌取出脾臟，用毛玻璃片將小鼠脾臟磨碎，制成脾細胞懸液。裂解紅細胞后，洗滌三次，計數(shù)(活細胞在95％以上)。用含10％FBS的RPMI1640培養(yǎng)液將脾細胞濃度調(diào)為4×106細胞/ml。本實驗加入ConA(刀豆蛋白A)5ug/ml誘導T淋巴細胞增殖。以3H-TdR摻入法定量測定細胞的增殖。在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。在結束培養(yǎng)前7-8小時，每孔加入25μl3H-胸腺嘧啶核苷酸(含2×104Bq)。在培養(yǎng)結束后，用細胞收集儀(HARVESTER，TOMTEC)收集細胞于玻璃纖維膜上，用液閃記數(shù)儀(MicroBeta Trilux，PerkinElmer)檢測[3H]-胸腺嘧啶核苷在DNA中的摻入量，以cpm值代表細胞增殖情況。具體檢測結果參見表1。
結果評定淋巴細胞的增殖反應采用被檢測樣品cpm值減去陽性對照樣品cpm值，然后除陽性對照樣品cpm值，標記為+增強/-抑制的％。鑒于測試樣品沒有非特異細胞毒性作用，結果標記為+(增強)/-(抑制)的15％以上(根據(jù)P值時通常10％以上也可)，就表示樣品有活性。
表1 Tα1及其類似物的T淋巴細胞增殖反應結果

cpm值代表細胞增殖情況，SD為數(shù)據(jù)的標準差，P值表示實驗數(shù)據(jù)與ConA對照組數(shù)據(jù)這間進行統(tǒng)計分析的有無差異的概率，P＜0.05表示兩組數(shù)據(jù)間有顯著性差異。L＝-NHCH2CH2OCH2COOH-
權利要求
1.四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其為(I)組的化合物X1-Y1-Y2-X2X1-X2-Y1-Y2-X3X1-X2-X3-Y1-Y2-X4X1-X2-Y1-Y2-X3-X4X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7(I)其中，X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7獨立地為L-或D-型的天然或非天然的堿性、酸性或芳香性氨基酸及其衍生物，所述堿性氨基酸選自Arg、Lys、Glu、Cys、His、Trp、Mob、Nal、Pya、Phe(X)、和Phg(X)，其中X為氫、鹵素、硝基、羧基、或C1-C4烷基任選的單取代或者二取代，取代基選自H、4-F、3-F、2-F、4-Cl、2-Cl、4-Br、2-Br、3-Br、2、5-2Cl、4-F、3-Cl、3-NO2；酸性氨基酸選自Asp、Glu、His、Tyr、Trp、Mob、Nal、Pya、和Phg(X)，其中X為氫、鹵素、硝基、羧基、或C1-C4烷基任選的單取代或者二取代，取代基選自H、4-F、3-F、2-F、4-Cl、2-Cl、4-Br、2-Br、3-Br、2、5-2Cl、4-F、3-Cl、3-NO2；Y1、Y2、Y3、Y4獨立的為L-或D-型的天然或非天然中性、親脂性或者芳香性氨基酸及其衍生物，選自Gly、Ala、β-Ala、GABA、Val、Leu、Ile、Pro、His、Tyr、Typ、Mob、Nal、Pya、Phe(X)、Phg(X)，其中X為氫、鹵素、硝基、羧基、或C1-C4烷基任選的單取代或者二取代，取代基選自H、4-F、3-F、2-F、4-Cl、2-Cl、4-Br、2-Br、3-Br、2、5-2Cl、4-F、3-Cl、3-NO2。
2.權利要求1所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中任意位點的氨基經(jīng)過PEG修飾為如下的(II)組所示的化合物，其中所述氨基包括N-端氨基和氨基酸側鏈氨基[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-Y1-Y2-X2[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-Y1-Y2-X3[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7(II)其中PEG表示RO(CH2CH2O)n-CH2CH2，R＝H或C和CH3，其中n＝5-1000；X＝O、NH或NHCO；m＝0-6；Z＝1-3、X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如權利要求1所示。
3.權利要求1所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中任意位點的羧基經(jīng)PEG共價修飾為如下所示的(III)組的化合物，其中所述羧基包括C-端羧基，天冬氨酸和谷氨酸側鏈羧基[PEG-X-CO]z-X1-Y1-Y2-X2[PEG-X-CO]z-X1-X2-Y1-Y2-X3[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4[PEG-X-CO]z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5[PEG-X-CO]z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3[PEG-X-CO]z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6[PEG-X-CO]z-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7[PEG-X-CO]z-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7[PEG-X-CO]z-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7(III)其中X1、X2、Y1、Y2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如權利要求1所示，X＝O或NH，Z＝1-3。
4.權利要求1所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中在肽序列中任意位置，包括N端和C端以及肽片段中引入半胱氨酸后形成如下所示的(IV)組的化合物Cys-X1-Y1-Y2-X2Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4Cys-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5Cys-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6Cys-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7(IV)
5.權利要求4所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其進一步經(jīng)選自PEG-MAL、PEG-VS和PEG-IODS的方法修飾后形成如下所示的(V)組的化合物，其中PEG可以為鏈狀、星狀、環(huán)狀、多臂型結構PEG-M-Cys-X1-Y1-Y2-X2PEG-M-Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3PEG-M-Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4PEG-M-Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4PEG-M-Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5PEG-M-Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3PEG-M-Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3PEG-M-Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5PEG-M-Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6PEG-M-Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4PEG-M-Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4PEG-M-Cys-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5PEG-M-Cys-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6PEG-M-Cys-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7PEG-M-Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7PEG-M-Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7(V)，其中 Cys為半胱氨酸，通過側鏈硫原子和M基團共價相連；X1、X2、Y1、Y2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如權利要求1所示。
6.權利要求1所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中在C端引入親電性基團或者親核性基團，而對應在N端引入相反的親核性基團或者親電性基團，得到如下所示的(VI)組的化合物，其中所述親核試劑選自碘負離子、水、羥基負離子、甲氧基負離子、乙?；撾x子、氨基、硝酸根負離子、亞硝酸根負離子、疊氮基負離子、氰基負離子、1-丙炔基負離子、丙二酸二甲酯負離子、巰基負離子、甲硫基負離子、硫氰基負離子、二甲硫醚、三甲磷；所述親電試劑選自硫代羧基乙酰氨、鹵素、無機酸、有機酸、醛、活潑酮、羧酸、酯、硝基化合物Z1-X1-Y1-Y2-X2-Z2Z1-X1-X2-Y1-Y2-X3-Z2Z1-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-Z2Z1-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Z2Z1-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Z2Z1-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-Z2Z1-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4-Z2Z1-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4-Z2Z1-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5-Z2Z1-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6-Z2Z1-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7-Z2Z1-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7-Z2Z1-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7-Z2(VI)，其中Z1和Z2為一組具有親核性基團和親電性基團的氨基酸殘基或者其它片段，當Z1帶有親核性基團時Z2帶有親電性基團，當Z1帶有親電性基團時Z2帶有親核性基團。
7.權利要求6所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其為CEVVE-SCH2CH2CONH2CKEVVE-SCH2CH2CONH2CKKEVVE-SCH2CH2CONH2CKEVVEE-SCH2CH2CONH2CEKKEVVE-SCH2CH2CONH2CKEKKEVVE-SCH2CH2CONH2CKEVVEKEVVE-SCH2CH2CONH2CKEVVEEAE-SCH2CH2CONH2CKEVVEEA-SCH2CH2CONH2，或CKEVVEEAEN-SCH2CH2CONH2。
8.權利要求4或6所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中在(IV)和(VI)組的化合物的任意位點引入脂肪族鏈、脂肪醚鏈、硫醚鏈、氨基酸以及其它柔性的鏈狀結構單元，得到如下所示的(VII)組的化合物Cys-Ln-X1-Y1-Y2-X2Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4Cys-Ln-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5Cys-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6Cys-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7，或者是以下結構Z1-Ln-X1-Y1-Y2-X2-Z2Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-Z2Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Z2Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-Z2Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7-Z2Z1-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7-Z2Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7-Z2(VII)其中，L表示任何柔性的鏈狀結構單元，n＝1-4，以上通式中所示的L所在位點并不是可以引入的唯一位點，L可以在肽序列中除兩端以外的任意位置。
9.權利要求8所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其包括CLEVVECLKEVVECLKKEVVECLKEVVEECLEKKEVVECLKEKKEVVECLKEVVEKEVVECLKEVVEEAECLKEVVEEACLKEVVEEAENCLLEVVECLLKEVVECLLKKEVVECLLKEVVEECLLEKKEVVECLLKEKKEVVECLLKEVVEKEVVECLLKEVVEEAECLLKEVVEEACLLKEVVEEAEN，或者是以下結構的化合物CLEVVE-SCH2CH2CONH2CLKEVVE-SCH2CH2CONH2CLKKEVVE-SCH2CH2CONH2CLKEVVEE-SCH2CH2CONH2CLEKKEVVE-SCH2CH2CONH2CLKEKKEVVE-SCH2CH2CONH2CLKEVVEKEVVE-SCH2CH2CONH2CLKEVVEEAE-SCH2CH2CONH2CLKEVVEEA-SCH2CH2CONH2CLKEVVEEAEN-SCH2CH2CONH2CLLEVVE-SCH2CH2CONH2CLLKEVVE-SCH2CH2CONH2CLLKKEVVE-SCH2CH2CONH2CLLKEVVEE-SCH2CH2CONH2CLLEKKEVVE-SCH2CH2CONH2CLLKEKKEVVE-SCH2CH2CONH2CLLKEVVEKEVVE-SCH2CH2CONH2CLLKEVVEEAE-SCH2CH2CONH2CLLKEVVEEA-SCH2CH2CONH2CLLKEVVEEAEN-SCH2CH2CONH2，其中，L＝-NHCH2CH2OCH2COO-。
10.權利要求1、4或8所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中任一所述(I)、(IV)、(VII)組的化合物以任何已知的環(huán)合方法進行環(huán)合，得到(VIII)組所示的環(huán)狀化合物環(huán)(X1-Y1-Y2-X2)環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3)環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)環(huán)(X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)環(huán)(X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)環(huán)(X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)或是以下結構環(huán)(Cys-X1-Y1-Y2-X2)環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)或者是以下化合物環(huán)(Z1-Ln-X1-Y1-Y2-X2)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7) (VIII)其中，X1、X2、Y1、Y2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如權利要求1所示，Z1的定義如權利要求6所示、Ln的定義如權利要求8所示。
11.權利要求10所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中所述化合物為以下結構環(huán)(EVVE)環(huán)(KEVVE)環(huán)(KKEVVE)環(huán)(KEVVEE)環(huán)(EKKEVVE)環(huán)(KEKKEVVE)環(huán)(KEVVEKEVVE)環(huán)(KEVVEEAE)環(huán)(KEVVEEA)環(huán)(KEVVEEAEN)或者是環(huán)(CEVVE)環(huán)(CKEVVE)環(huán)(CKKEVVE)環(huán)(CKEVVEE)環(huán)(CEKKEVVE)環(huán)(CKEKKEVVE)環(huán)(CKEVVEKEVVE)環(huán)(CKEVVEEAE)環(huán)(CKEVVEEA)環(huán)(CKEVVEEAEN)或者是環(huán)(CLEVVE)環(huán)(CLKEVVE)環(huán)(CLKKEVVE)環(huán)(CLKEVVEE)環(huán)(CLEKKEVVE)環(huán)(CLKEKKEVVE)環(huán)(CLKEVVEKEVVE)環(huán)(CLKEVVEEAE)環(huán)(CLKEVVEEA)環(huán)(CLKEVVEEAEN)或者是環(huán)(CLLEVVE)環(huán)(CLLKEVVE)環(huán)(CLLKKEVVE)環(huán)(CLLKEVVEE)環(huán)(CLLEKKEVVE)環(huán)(CLLKEKKEVVE)環(huán)(CLLKEVVEKEVVE)環(huán)(CLLKEVVEEAE)環(huán)(CLLKEVVEEA)環(huán)(CLLKEVVEEAEN)。
12.權利要求10所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中所述(VIII)組的化合物中任意位點的氨基經(jīng)過PEG修飾的，得到如下所示(XI)組的化合物，其中所述氨基包括N-端氨基和天然氨基酸或者非天然氨基酸的側鏈氨基，[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-Y1-Y2-X2)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-Y1-Y2-X2)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)或者是[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-Y1-Y2-X2)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)[PEG-X-(CH2)MCO-NH]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7) (XI)其中所述PEG表示RO(CH2CH2O)n-CH2CH2，R＝H或C和CH3，n＝5-1000；X＝O、NH或NHCO；m＝0-6；Z＝1-3、X1、X2、Y1、Y2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如權利要求1所示，Z1、Ln的定義如權利要求10所示。
13.權利要求12所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，包括以下化合物PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKEVVEE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CEKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKEKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKEVVEKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKEVVEEAE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKEVVEEA)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CKEVVEEAEN)或者是以下結構PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKEVVEE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLEKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKEKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKEVVEKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKEVVEEAE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKEVVEEA)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLKEVVEEAEN)或者是以下結構的化合物PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEVVEE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLEKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEKKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEVVEKEVVE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEVVEEAE)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEVVEEA)PEG-CH2CH2-X-(CH2)mCO-環(huán)(CLLKEVVEEAEN)其中，X＝O、NH、或NHCO；M＝0-6。
14.權利要求10所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中(VIII)組的化合物中任意位點的羧基經(jīng)過PEG修飾，得到如下(IX)所示的化合物，其中所述氨基包括C-端氨基和天然氨基酸或者非天然氨基酸的側鏈羧基[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-Y1-Y2-X2)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)[PEG-X-CO]z-環(huán)(X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-Y1-Y2-X2)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)或者是以下結構[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-Y1-Y2-X2)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)[PEG-X-CO]z-環(huán)(Z1-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)(IX)其中，X1、X2、Y1、Y2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如權利要求1所示，Z1、Ln的定義如權利要求10所示；X＝O或NH，Z＝1-3。
15.權利要求14所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，選自[PEG-X-CO]z-環(huán)(EVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEVVEE)[PEG-X-CO]z環(huán)(EKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEVVEKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEVVEEAE)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEVVEEA)[PEG-X-CO]z環(huán)(KEVVEEAEN)[PEG-X-CO]z-環(huán)(CEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEVVEE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEVVEKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEVVEEAE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEVVEEA)[PEG-X-CO]z環(huán)(CKEVVEEAEN)或者是以下結構[PEG-X-CO]z環(huán)(CLEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEVVEE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEVVEKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEVVEEAE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEVVEEA)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLKEVVEEAEN)或者是以下結構的化合物[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEVVEE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEKKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEVVEKEVVE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEVVEEAE)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEVVEEA)[PEG-X-CO]z環(huán)(CLLKEVVEEAEN)。
16.權利要求10所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，其中(VIII)組的化合物在肽序列或已有半胱氨酸位置或序列中任意位置引入半胱氨酸后，經(jīng)選自PEG-MAL，PEG-VS和PEG-IODS的方法修飾，得到如下所示的(X)組的化合物，其中PEG可以為鏈狀、星狀、環(huán)狀、多臂型結構PEG-M-環(huán)(Cys-X1-Y1-Y2-X2)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)也可以是以下結構PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-Y1-Y2-X2)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-Y1-Y2-X3-X4-Y3-X5-Y4)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-Y3-X6-Y4)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-X6-Y1-Y2-X7)PEG-M-環(huán)(Cys-X1-X2-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-X3-Y1-Y2-X4-X5-X6-Y3-Y4-X7)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-X3-X4-Y1-Y2-X5)PEG-M-環(huán)(Cys-Ln-X1-X2-X3-X4-X5-Y1-Y2-X6) (X)其中， 其中X1、Z1可以為半胱氨酸，通過側鏈硫原子和M基團共價相連；X1、X2、Y1、Y2、X3、X4、X5、X6、X7，Y1、Y2、Y3、Y4的定義如權利要求1所示，Z1、Ln的定義如權利要求11所示。
17.權利要求16所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體，選自[PEG-M]-環(huán)(CEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CKEVVEE)[PEG-M]-環(huán)(CEKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CKEKKEVVE)[PEG-M]環(huán)(CKEVVEKEVVE)[PEG-M]環(huán)(CKEVVEEAE)[PEG-M]-環(huán)(CKEVVEEA)[PEG-M]-環(huán)(CKEVVEEAEN)或者是以下結構[PEG-M]-環(huán)(CLEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLKEVVEE)[PEG-M]-環(huán)(CLEKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLKEKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLKEVVEKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLKEVVEEAE)[PEG-M]-環(huán)(CLKEVVEEA)[PEG-M]-環(huán)(CLKEVVEEAEN)或者是以下結構的化合物[PEG-M]-環(huán)(CLLEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEVVEE)[PEG-M]環(huán)(CLLEKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEKKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEVVEKEVVE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEVVEEAE)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEVVEEA)[PEG-M]-環(huán)(CLLKEVVEEAEN)。
18.選自權利要求1所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體的任一化合物及其任意組合用于制備治療和/或預防免疫缺陷、免疫功能低下相關疾病的藥物的用途。
19.選自權利要求1所述的四肽至十一肽衍生物及其立體異構體的任一化合物及其任意組合用于制備保健品及化妝品的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一類含有天然或者非天然氨基酸取代的胸腺素α1活性片段的環(huán)肽類衍生物，其制備方法，含它們的藥物組合物，及它們在治療或預防免疫缺陷、免疫功能低下等相關疾病的藥物。
文檔編號C07K7/00GK1781933SQ200410096459
公開日2006年6月7日 申請日期2004年12月1日 優(yōu)先權日2004年12月1日
發(fā)明者劉克良, 蔣志龍, 王良友, 梁遠軍, 許笑宇, 吳萍, 韓寒 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所