專利名稱：發(fā)酵濾液中側(cè)耳素的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗生素提取技術(shù)，是一種用鹽析法提取發(fā)酵濾液中殘 留的短截側(cè)耳素。
背景技術(shù)：
短截側(cè)耳素pleuromulin(以下稱側(cè)耳素)是由傘菌科的斜頂菌 pleuarotus mutifis經(jīng)液體發(fā)酵產(chǎn)生。側(cè)耳素主要是胞內(nèi)產(chǎn)物，但是還 有約300~1000ug/ml側(cè)耳素被釋放到胞外，尤其是當發(fā)酵條件控制不 當時其胞外側(cè)耳素可達2000ug/ml以上?；厥瞻l(fā)酵濾液中的側(cè)耳素可 以提高收率降低側(cè)耳素的生產(chǎn)成本。側(cè)耳素在乙酸乙酯、4-甲基-2-戊酮等疏水溶劑中的溶解度大都在15%左右，從發(fā)酵濾液中萃取殘留 的側(cè)耳素，溶劑用量大，成本分析表明單獨用溶劑萃取側(cè)耳素并不合 算。本發(fā)明用氯化鈉、硫酸鈉等無機鹽采用鹽析的方法使側(cè)耳素從濾 液中析出，或采用少量的溶劑并在濾液中加入少量的氯化鈉或硫酸鈉 來萃取側(cè)耳素，可顯著的降低提取成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明技術(shù)是關(guān)于側(cè)耳素提取方法，其特征在于向含有側(cè)耳素的 發(fā)酵濾液中加入足夠量的氯化鈉或硫酸鈉，從而使側(cè)耳素從濾液中析 出，然后用離心或過濾的方法將析出的側(cè)耳素分離出來。 一般而言， 在發(fā)酵濾液中加入25~35%氯化鈉(重量/體積比)或加入10~25%硫 酸鈉(重量/體積比)即可使側(cè)耳素的析出率達80~99%，隨著鹽的加入量越多側(cè)耳素析出率越高，當鹽在發(fā)酵濾液中達到飽和時，側(cè)耳素 析出率為最大。
還可以在發(fā)酵濾液中加入少量的氯化鈉或硫酸鈉(大約在
5~10%)，同時加入乙酸乙酯或4-甲基-2-戊酮等疏水性溶劑，進行萃 取，由于鹽的加入可提高側(cè)耳素在有機相中的分配系數(shù)。同樣可以減 少溶劑用量，降低提取成本。 脈雄^ 實例1、
發(fā)酵結(jié)束，發(fā)酵液用高壓板框壓濾，得含側(cè)耳素的菌素濾餅(干 燥后，進一步用有機溶劑提取)和含少量側(cè)耳素(大于300ug/ml)的 發(fā)酵濾液。向濾液中加入重量/體積比為35%的氯化鈉，充分攪拌使 氯化鈉全部溶解，然后過濾或離心，即得含側(cè)耳素的粗提取物。經(jīng) HPLC分析，側(cè)耳素的回收率達99%。 實例2、
發(fā)酵結(jié)束，發(fā)酵液用高壓板框壓濾，得含側(cè)耳素的菌素濾餅(干 燥后，進一步用有機溶劑提取)和含少量側(cè)耳素(大于300ug/ml)的 發(fā)酵濾液。向濾液中加入重量/體積比為22%的硫酸鈉，充分攪拌使 氯化鈉全部溶解，然后過濾或離心，即得含側(cè)耳素的粗提取物。經(jīng) HPLC分析，側(cè)耳素的回收率達99%。 實例3、
發(fā)酵結(jié)束，發(fā)酵液用高壓板框壓濾，得含側(cè)耳素的菌素濾餅(干 燥后，進一步用有機溶劑提取)和含少量側(cè)耳素(大于300ug/ml)的發(fā)酵濾液。向濾液中加入重量/體積比為20%的氯化鈉，充分攪拌使 氯化鈉全部溶解，然后過濾或離心，即得含側(cè)耳素的粗提取物。經(jīng)
HPLC分析，側(cè)耳素的回收率達82~88%。 實例4、
發(fā)酵結(jié)束，發(fā)酵液用高壓板框壓濾，得含側(cè)耳素的菌素濾餅(千 燥后，進一步用有機溶劑提取)和含少量側(cè)耳素(大于300ug/ml)的 發(fā)酵濾液。向濾液中加入重量/體積比為15%的硫酸鈉，充分攪拌使 氯化鈉全部溶解，然后過濾或離心，即得含側(cè)耳素的粗提取物。經(jīng) HPLC分析，側(cè)耳素的回收率達84~88%。 實例5、
發(fā)酵結(jié)束，發(fā)酵液用高壓板框壓濾，得含側(cè)耳素的菌素濾餅(干 燥后，進一步用有機溶劑提取)和含少量側(cè)耳素(大于300ug/ml)的 發(fā)酵濾液。向濾液中加入相當于濾液5%的4-甲基-2-戊酮和15%的硫 酸鈉，充分攪拌萃取，然后靜置或離心分相，得含側(cè)耳素的有機相， 萃取率達97%以上，不加入鹽的對照組，其萃取率為88%。
權(quán)利要求
1、一種短截側(cè)耳素的提取方法，其特征在于向含有短截側(cè)耳素的發(fā)酵濾液中加入重量/體積比為10～40％氯化鈉或硫酸鈉，充分混合，待短截側(cè)耳素析出完成，進行固液分離，即得含短截側(cè)耳素的粗提物。
2、 一種短截側(cè)耳素的提取方法，其特征在于向含有短截側(cè)耳素 的發(fā)酵濾液中加入重量/體積比為5~30%氯化鈉或硫酸鈉，同時加入 相當于發(fā)酵濾液體積的5~100%的乙酸乙酯或4-甲基-2-戊酮，充分混 合，然后靜置或離心分相，即可獲得含短截側(cè)耳素的有機相。
全文摘要
本發(fā)明技術(shù)是用鹽析法從發(fā)酵濾液中回收殘留的短截側(cè)耳素，方法要點是向含有短截側(cè)耳素的發(fā)酵濾液中加入足夠量的氯化鈉或硫酸鈉，殘留在發(fā)酵濾液中的側(cè)耳素從濾液中析出，經(jīng)固液分離，得含側(cè)耳素的粗提物，粗提物收率大于98％。
文檔編號C07C67/00GK101531592SQ200810084608
公開日2009年9月16日 申請日期2008年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月13日
發(fā)明者孫玉勝, 戴曉曦, 潘貞德, 王玉萬, 蘭 馬 申請人:邁德金生物技術(shù)(北京)有限公司