一種稻米發(fā)酵原漿化妝品及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種稻米發(fā)酵原漿化妝品及其制備方法與應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 稻米，是我國(guó)的主要糧食作物之一，具有悠久的種植歷史。稻米可提供豐富維生 素、谷維素、蛋白質(zhì)、花青素等營(yíng)養(yǎng)成分，具有補(bǔ)中益氣、健脾養(yǎng)胃、益精強(qiáng)志、和五臟、通血 脈、聰耳明目、止煩、止渴、止瀉的功效，米粥具有補(bǔ)脾、和胃、清肺功效。稻米還有護(hù)膚用途 功效，以稻米提取液作為主要成分（其富含y-谷維素、稻糠留醇、原花青素等成分），有性質(zhì) 溫和安全，具有較強(qiáng)的潤(rùn)白功效，并可補(bǔ)充肌膚所缺失水分，使肌膚光滑細(xì)膩，充滿彈性功 效。我國(guó)稻米資源豐富，為開發(fā)應(yīng)用稻米提供有利條件。隨著稻米栽培業(yè)迅速發(fā)展及應(yīng)用 范圍拓寬，對(duì)稻米營(yíng)養(yǎng)成分及在醫(yī)療保健作用方面研究也逐步深入。對(duì)稻米活性物質(zhì)的提 取工藝也不斷完善，但是提取方法主要以酶法提取、堿法提取和超聲波提取等。
[0003] 現(xiàn)有的稻米活性物提取最常采用的是堿法：高濃度的堿液可以提取大部分活性物 質(zhì)，但堿的處理也會(huì)引起化學(xué)性質(zhì)的變化，促進(jìn)美拉德反應(yīng)，產(chǎn)品顏色發(fā)暗，產(chǎn)生有毒物質(zhì) 藍(lán)氨酰丙氨酸，對(duì)腎臟功能有一定損害。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種稻米發(fā)酵原漿化妝品及其制備方法與應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明提供的制備稻米發(fā)酵原漿的方法，包括如下步驟：
[0006] 對(duì)由發(fā)酵菌、稻米干粉和水組成的初始體系進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，經(jīng)滅菌、離心得到的上 清液為所述稻米發(fā)酵原漿。
[0007] 上述方法中，所述發(fā)酵菌和所述稻米干粉與水的用量比為25_40mL : 15_25g : 300g，具體為30mL :20g :300g。發(fā)酵菌菌液的濃度為106-109CFU/mL。
[0008] 所述發(fā)酵培養(yǎng)步驟中，時(shí)間為25h_35h，具體為28h ;溫度為37°C -47°C，具體為 38。。。
[0009] 所述發(fā)酵菌為雙歧桿菌，具體為兩歧雙歧桿菌Bifidobacteriumbifidum，ATCC編 號(hào)為29521 ;
[0010] 所述稻米干粉的目數(shù)為20-50目。
[0011] 所述發(fā)酵菌以其培養(yǎng)液或懸浮液的形式存在；
[0012] 所述發(fā)酵菌的培養(yǎng)液或懸浮液的pH值為6. 5-7. 5。
[0013] 所述方法還包括如下步驟：將發(fā)酵培養(yǎng)所得發(fā)酵液依次進(jìn)行滅菌、離心、取上清 液。
[0014] 其中，所述滅菌步驟中，滅菌溫度為110-125 °C，具體為115°C ;滅菌時(shí)間為 15min_30min，具體為 20min ;
[0015]所述離心步驟中，離心轉(zhuǎn)速為5800-7000r/min，具體為6000r/min ;離心時(shí)間為 25_35min，具體為30min ;離心半徑為8_12cm，具體為9cm。
[0016] 另外，按照上述方法在制備具有如下至少一種功能的化妝品中的應(yīng)用或直接作為 具有如下至少一種功能的化妝品中的應(yīng)用，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍：
[0017] 1)美白；
[0018] 2)抗衰老；
[0019] 3)清除DPPH自由基；
[0020] 4)抑制酪氨酸酶的活性。
[0021 ] 所述化妝品具體可為面膜、精華液或爽膚水。
[0022] 本發(fā)明提供了一種稻米發(fā)酵原漿的制備方法，該方法選擇合適的菌種對(duì)原料進(jìn)行 發(fā)酵而得，使產(chǎn)品更加天然，且不需要添加酶等外來物質(zhì)，不僅節(jié)約生產(chǎn)成本，而且最大化 的簡(jiǎn)化了生產(chǎn)步驟，使該發(fā)酵技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)大量生產(chǎn)、工業(yè)化生產(chǎn)，并能夠充分保證產(chǎn)品質(zhì) 量的穩(wěn)定性。通過實(shí)驗(yàn)證明：本發(fā)明制備的稻米發(fā)酵原漿不含任何化學(xué)成分，可以直接作為 面膜或精華液或爽膚水的成品使用，比現(xiàn)有市面上的其他產(chǎn)品更加天然，不會(huì)給肌膚造成 任何負(fù)作用；且發(fā)酵成分中含有小分子多肽，易于讓皮膚充分吸收。
【附圖說明】
[0023] 圖1為稻米發(fā)酵原漿的活性多肽分子量分布HPLC圖譜。
[0024] 圖2為稻米發(fā)酵原漿的清除DPPH自由基結(jié)果示意圖。
[0025] 圖3為稻米發(fā)酵原漿的抑制酪氨酸酶活性示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0027] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0028] 下述實(shí)施例中的液體培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)及其在液體培養(yǎng) 基中的濃度為：葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，pH值為7. 0。
[0029] 下述實(shí)施例中的YTO培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)及其在液體培養(yǎng) 基中的濃度為：酵母提取物1% (質(zhì)量分?jǐn)?shù)），胰蛋白胨2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù)），葡萄糖2% (質(zhì) 量分?jǐn)?shù)），PH值為7. 0。
[0030] 下述實(shí)施例中的稻米來自市面銷售。
[0031] 下述實(shí)施例中的兩歧雙歧桿菌Zygosaccharomycesrouxii的ATCC編號(hào)為13356， 可從ATCC獲得。
[0032] 實(shí)施例1、一種稻米發(fā)酵原漿的制備方法
[0033] 1、菌種的活化
[0034] 挑取兩歧雙歧桿菌（Zygosaccharomycesrouxii)菌落一環(huán)于液體培養(yǎng)基中，放入 搖床中將菌種活化，得到活化后兩歧雙歧桿菌菌液。
[0035] 2、菌種的純化
[0036] 將步驟1得到的活化后的菌液梯度稀釋鋪板，以便獲取單菌落，得到純化后巴兩 歧雙歧桿菌。
[0037] 3、菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)
[0038] 將步驟2得到的純化后的菌種接種到Y(jié)ro培養(yǎng)基（PH值為7. 0)中，在32°C的搖床 中培養(yǎng)，當(dāng)OD值=0. 6-1. 2時(shí)，得到發(fā)酵菌菌液（菌種處在對(duì)數(shù)期，濃度為106-109CFU/ml， pH 值為 6. 5-7. 5)。
[0039] 4、稻米發(fā)酵原漿的獲得
[0040] 將30mL步驟3得到的發(fā)酵菌菌液接種到20g的稻米干粉和300g的水中，得到發(fā) 酵體系（發(fā)酵體系中菌液總量和稻米干粉與水的配比為30mL :20g :300g);將發(fā)酵體系在 38°C搖床中發(fā)酵28小時(shí)，得到發(fā)酵產(chǎn)物；將發(fā)酵產(chǎn)物115°C高壓滅菌20min，使菌失活，得 到滅菌后的發(fā)酵產(chǎn)物；將滅菌后的發(fā)酵產(chǎn)物在6000r/min、離心半徑為9cm的條件下離心 30min，棄沉淀，收集上清液，即為本發(fā)明提供的稻米發(fā)酵原漿。
[0041] 實(shí)施例2、稻米發(fā)酵原漿在作為化妝品中的應(yīng)用
[0042] 一、稻米發(fā)酵原漿的性質(zhì)
[0043] 將實(shí)施例1所制備所得的發(fā)酵提取物外觀為粘稠液體、顏色為淡白色至淡黃色。 pH值5. 2-6. 3,粘度200-500cP，可溶性固含物含量1. 5-5. 0%，菌落總數(shù)小于50CFU/ml，無 致病菌檢出。根據(jù)化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB7916-87,化妝品細(xì)菌總數(shù)不高于1000CFU/ml，所以此 發(fā)酵提取物符合化妝品質(zhì)量要求。
[0044] 對(duì)該稻米發(fā)酵原漿進(jìn)行成分分析，蛋白質(zhì)檢測(cè)方法參照GB5009. 5-2010 ;粗多糖 檢測(cè)方法參照GB/T 5009. 8-2008 ;黃酮檢測(cè)方法參照GB/T 5009. 124-2003 ;總酚檢測(cè)方法 參照GB/T8313-2008所得結(jié)果如下：
[0045] 本發(fā)明制得的稻米發(fā)酵原衆(zhòng)含蛋白質(zhì)2. 893g/kg、粗多糖9. 521g/kg、總黃酮 0? 036g/kg (以蘆丁計(jì)）、總酸 0? 058g/kg。
[0046] 二、稻米發(fā)酵原漿的安全性檢測(cè)
[0047] 人體斑貼試驗(yàn)主要是用于檢測(cè)化妝品終產(chǎn)品或原料的刺激性。本發(fā)明對(duì)實(shí)施例1 獲得的稻米發(fā)酵原漿進(jìn)行人體封閉式斑貼試驗(yàn)，旨在對(duì)其潛在皮膚刺激性進(jìn)行評(píng)估。
[0048] 1、試驗(yàn)對(duì)象
[0049] 選擇合適的志愿者30人，年齡范圍在18-60歲隨機(jī)選擇。
[0050] 2、試驗(yàn)方法
[0051] 稱取0. 020g_0. 025g固體樣品或半固體的樣品放入斑試器中備用。將液體樣品 0. 2mL到0. 025mL滴加在濾紙片上，再將濾紙片置于斑試器內(nèi)。每個(gè)樣品均設(shè)置空白對(duì)照， 在對(duì)照斑試器孔內(nèi)加入與樣品等量的樣品溶劑，如蒸餾水或橄欖油。
[0052] 試驗(yàn)部位選為人體背部，利用無刺激性的膠帶將斑試器固定貼敷于受試者背部。 測(cè)試周期持續(xù)24h。為了試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可信和科學(xué)，在測(cè)試期間志愿者按照要求，不能摘 掉斑試器，亦不可使受試部位接觸水。24h后去除斑試器，靜置30min后，等待壓痕消失，觀 察皮膚的反應(yīng)。如果試驗(yàn)結(jié)果為陰性，則需要在斑貼試驗(yàn)后24h和48h分別再觀察一次。
[0053] 3、試驗(yàn)結(jié)果
[0054] 斑貼試驗(yàn)結(jié)果如表1所示：*〃_〃=陰性反應(yīng)；〃±〃 =可疑反應(yīng)：僅有微弱紅斑； 〃+〃 =弱陽性反應(yīng)（紅斑反應(yīng)）：紅斑、浸潤(rùn)、水腫、可有丘疹；〃++〃 =強(qiáng)陽性反應(yīng)（皰疹反 應(yīng)）；紅斑、浸潤(rùn)、水腫、丘疹、皰疹；反應(yīng)可超出受試區(qū)；〃+++〃=極強(qiáng)陽性反應(yīng)（融合性皰