一種含有殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌發(fā)酵產物的殺菌劑及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及抗植物病原真菌的菌株及其應用，具體設及一種殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌、 含有殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌的殺菌劑及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 微生物殺菌劑是利用微生物的寄生、括抗、競爭、溶菌等作用來抑制甚至滅殺植物 病原微生物生長的生物制劑。微生物殺菌劑開發(fā)潛力巨大、應用前景廣闊，將可能成為繼微 生物殺蟲劑之后第二個重要的商品化生物農藥。
[0003] 自然界中的有害細菌、真菌和病毒等是引起大量植物病害的主要原因之一，如農 作物中常見的引起水稻紋枯病、棉花立枯病的立枯絲核菌等。在過去的幾十年中，人們大都 采用抗病品種與化學防治的方法對植物病害進行防治，取得了良好的成效。然而隨著化學 農藥使用量的增大及使用范圍的擴張，特別是高毒、高殘留化學農藥的持續(xù)使用，使得農藥 對環(huán)境的負面影響日趨嚴重。社會的進步和人類的發(fā)展要求開發(fā)出新型環(huán)保型農藥產品， 能夠保護農產品穩(wěn)產高產，又不影響農產品質量，不影響生態(tài)環(huán)境和其它生物安全。農藥研 究人員發(fā)現(xiàn)從生物中尋找防治有害生物的活性物質最有可能達到選擇性強、效率高、成本 低、不污染環(huán)境、對人畜無害的理想要求。有效利用微生物間的括抗作用及其代謝產物的有 效活性成分制備生物農藥進行有害生物防治將是一個必然的發(fā)展方向。
[0004] 微生物源農藥不僅具有高效、安全、低殘留、易降解等特點，而且微生物源農藥作 用機理復雜，作用位點多樣，能夠有效的抑制害物抗藥性的發(fā)展，因此倍受人們所關注。放 線菌是應用最廣泛的生防微生物之一，是具有巨大實用價值的一類微生物。目前從微生物 發(fā)現(xiàn)的大約8000種生物活性物質中，近70 %是由放線菌產生的。放線菌產生的抗生素在農 作物病蟲害防治方面有重要作用。目前，主要應用的農用抗生素有9種，如殺菌劑有春日霉 素、鏈霉素、多氧霉素、有效霉素、灰黃霉素、滅攝素、滅胞素；殺蛾劑有殺蛾素；除草劑有雙 丙胺麟等。我國農用抗生素的研究和應用始于20世紀50年代初。我國于20世紀60年代 研制成功了放線菌酬和滅攝素，70年代研制成功了春雷霉素、慶豐霉素、井岡霉素、多抗霉 素，80年代研制成功了公主嶺霉素、多效霉素、農抗120、瀏陽霉素、莫能霉素等抗生素，90 年代又研制成功了阿維菌素、中生菌素、寧南霉素和華光霉素等農用抗生素品種。在微生物 農藥的研究與開發(fā)領域做出了重大貢獻。
[000日]殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌（Streptomyceseurocidicus)的研究始于上世紀中頁D0sata(1955年）和Lancini(1967年）等人先后從殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌（Streptomyces eurocidicus)菌株中分離到叔霉素（tei^tiomycin)、優(yōu)洛殺菌素（eurocidin)和氮霉素 (azomycin)等特殊結構。但關于殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌的抗真菌活性未見研究與報道。本發(fā)明 確定殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌皿2014(StreptomycesSP.皿2014)對抗植物病原真菌具有較強的 抗菌活性，在不同種類病原真菌間具備一定的選擇性。該菌株代謝產物及菌體提取物對小 麥紋枯病菌（Rhizoctoniacerealis)、水稻紋枯病菌（Thanatephoruscucumeris)、灰霉病 菌度otrytis cinerea)等病原真菌均有很好的抑制效果，適用于開展植物病害領域的的防 治研究。

【發(fā)明內容】

[0006] 為了解決現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供了一種含有殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌發(fā)酵產物的 殺菌劑及其制備方法和應用。
[0007] 本發(fā)明的技術方案是：一種抗植物病原真菌的殺菌劑，包含殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌的 發(fā)酵產物。
[0008] 本發(fā)明的進一步改進包括：
[0009]所述殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌為殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌皿2014 (Streptomyces sp.皿2014)， 保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中屯、（CCTCC)，保藏號為CCTCCNO:M2015207。
[0010] 所述殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌皿2014(str巧tomyces sp.皿2014)的發(fā)酵培養(yǎng)基質為包 括：酵母提取物5g，大豆蛋白腺5g，葡萄糖20g，加入lOOOmL水后加熱溶解，初始抑值為 7. 0。
[0011] 所述殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌皿2014(Str巧tomycessp.皿2014)的發(fā)酵培養(yǎng)基為ME、 GYM、GPY、PS或PD。
[0012] 一種制備上述殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌的發(fā)酵產物的方法，包括W下步驟：（1)菌種活 化；將保存在4°C冰箱里PDA的試管斜面上的殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌皿2014(Str巧tomyces sp.皿2014)菌種取出，在室溫下放置lOmin;然后用接種針采用劃線法接入預先制作好的 PDA平板上，24-25C下進行活化培養(yǎng)一周，備用；（2)種子液的制備；將平板上培養(yǎng)的活化 菌株接入到裝有300mLGPY培養(yǎng)基的500mLS角瓶中，24-25°C，130r.min1，振蕩培養(yǎng)12化； (3)發(fā)酵培養(yǎng)；將上述培養(yǎng)好的種子液，按1 %的體積比例接種至GPY培養(yǎng)基中，25°C，振 蕩培養(yǎng)1個月；(4)分離菌體與發(fā)酵液；將發(fā)酵培養(yǎng)好的培養(yǎng)物，在轉速SOOOrpm下離屯、 lOmin，然后分別收集濕菌體和發(fā)酵液。
[0013] 一種上述的殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌的發(fā)酵產物在制備抑制水稻紋枯病菌、灰霉病菌或 小麥紋枯病菌藥物中的應用
[0014] 本發(fā)明具有積極有益的效果：
[0015] 本發(fā)明提供了防治作物中一些病害的微生物殺菌劑，其中殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌 皿2014 (Streptomyces sp.皿2014)發(fā)酵產物對小麥紋枯病菌、水稻紋枯病菌和灰霉病菌 等病原真菌均有很好的抑制效果，并具有廣泛的溫度、酸堿適應性和儲藏穩(wěn)定性，適于用于 農作物病害防治加W開發(fā)利用。
[0016] 本發(fā)明所述的殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌皿2014(St;r巧tomyces sp.皿2014)已經保藏于 中國典型培養(yǎng)物保藏中屯、。
[0017] 本發(fā)明的殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌皿2014(Str巧tomycessp.皿2014)在PDA培養(yǎng)基、高 氏一號培養(yǎng)基、ISP2和ISP5培養(yǎng)基中，生長狀況良好，基內菌絲發(fā)達，淡黃色至黃色，氣生 菌絲豐富，白色。在ISP1培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基中菌落較濕潤，基內菌絲發(fā)達，黃色，氣生菌絲 較稀疏，其中，在LB培養(yǎng)基上有黃色可溶性色素生成。在ISP4和ISP7培養(yǎng)基中生長狀況一 般，菌落略稀少，氣生菌絲較不發(fā)達，基內菌絲淡黃色。在ISP3培養(yǎng)基和蔡氏培養(yǎng)基中生長 狀況較差，菌落少且細小，生長緩慢，氣生菌絲白色。在顯微鏡下觀察，菌種氣生菌絲豐富， 抱子絲波曲形至松螺旋形。
[0018] 參照《鏈霉菌鑒定手冊》對殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌皿2014 (Str巧tomyces SP.皿2014) 進行鑒定，可初步鑒定該菌種為鏈霉菌屬白色類群白抱亞群。
[0019] 本發(fā)明的殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌皿2014(Str巧tomycessp.皿2014)與NCBI數(shù)據(jù) 庫中相近菌株進行同源性比對分析，與鏈霉菌屬（Str巧tomyces)的16SrDNA序列的同 源性最高，保守區(qū)相似性為99%，通過結合菌體形態(tài)特征、生長條件、鑒定其為鏈霉菌屬 (Streptomyces)殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌（Streptomyceseurocidicus)。
【附圖說明】
[0020] 圖1為殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌皿2014與NCBI數(shù)據(jù)庫中相近菌株進行同源性比對構建 的系統(tǒng)發(fā)育樹圖。
【具體實施方式】
[0021] 下面結合附圖對本發(fā)明做詳細說明。 陽02引實施例1 : W23] 本實施方式抑制植物病原真菌的殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌為殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌 皿2014 (Streptomyces sp.皿2014)，該菌株保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中屯、（CCTCC)，保 藏地址是武漢市武昌塔挪山武漢大學，保藏日期為2015年4月7日，保藏號為CCTCCNO: M2015207〇
[0024] 本發(fā)明的殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌皿2014(Str巧tomycessp.皿2014)在PDA培養(yǎng)基、高 氏一號培養(yǎng)基、ISP2和ISP5培養(yǎng)基中，生長狀況良好，基內菌絲發(fā)達，淡黃色至黃色，氣生 菌絲豐富，白色。在ISP1培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基中菌落較濕潤，基內菌絲發(fā)達，黃色，氣生菌 絲較稀疏，其中，在LB培養(yǎng)基上有黃色可溶性色素生成。在ISP4和ISP7培養(yǎng)基中生長狀 況一般，菌落略稀少，氣生菌絲較不發(fā)達，基內菌絲淡黃色。在ISP3培養(yǎng)基和蔡氏培養(yǎng)基中 生長狀況較差，菌落少且細小，生長緩慢，氣生菌絲白色。在顯微鏡下觀察，菌種氣生菌絲豐 富，抱子絲波曲形至松螺旋形。 W25] 參照《鏈霉菌鑒定手冊》和國際鏈霉菌計劃（IS巧對殺優(yōu)洛菌素鏈霉菌 皿2014(St;r巧tomycessp.皿2014)生長形態(tài)進行鑒定，可初步判斷該菌種為鏈霉菌屬白色 類群白抱亞群。
[0026] 本發(fā)明的殺