專利名稱：環(huán)狀九肽酰胺類的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及式(Ib)的化合物，
其中 R6表示氫或甲基， R7表示下式的基團
其中 *是與所述胺的鍵合位點， R1表示C1-C6-烷基，C2-C6-鏈烯基，C3-C6-環(huán)烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、鏈烯基、環(huán)烷基和芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，芐氧基，C3-C6-環(huán)烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元雜環(huán)基，5-至10-元雜芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和芐氧羰基氨基， 其中對于它們的部分的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元雜環(huán)基， R2表示C1-C6-烷基，C2-C6-鏈烯基，C3-C6-環(huán)烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、鏈烯基、環(huán)烷基和芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，芐氧基，C3-C6-環(huán)烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元雜環(huán)基，5-至10-元雜芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和芐氧羰基氨基， 其中對于它們的部分的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元雜環(huán)基， R4表示C1-C6-烷基，C2-C6-鏈烯基，C3-C6-環(huán)烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、鏈烯基、環(huán)烷基和芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，芐氧基，C3-C6-環(huán)烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元雜環(huán)基，5-至10-元雜芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和芐氧羰基氨基， 其中對于它們的部分的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元雜環(huán)基， R5表示C1-C6-烷基，C2-C6-鏈烯基，C3-C6-環(huán)烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、鏈烯基、環(huán)烷基和芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，芐氧基，C3-C6-環(huán)烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元雜環(huán)基，5-至10-元雜芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和芐氧羰基氨基，其中對于它們的部分的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元雜環(huán)基， 和它們的鹽、它們的溶劑合物和它們的鹽的溶劑合物。
本發(fā)明的化合物是式(I)，(Ia)和(Ib)的化合物和它們的鹽、溶劑合物及其鹽的溶劑合物和前藥，由式(I)，(Ia)和(Ib)包括的以下提及的各式的化合物和它們的鹽、溶劑合物、所述鹽的溶劑合物和前藥，以及由式(I)，(Ia)和(Ib)包括的作為示例性實施方案的在下文提及的化合物和它們的鹽、溶劑合物、所述鹽的溶劑合物和前藥，就由式(I)，(Ia)和(Ib)所涵蓋并且在后來提及的化合物而言，它們還不是鹽、溶劑合物、所述鹽的溶劑合物和前藥。
取決于它們的結(jié)構(gòu)，本發(fā)明的化合物以立體異構(gòu)型(對映異構(gòu)體，非對映異構(gòu)體)存在。因此，本發(fā)明涉及對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體及其各自的混合物。從對映異構(gòu)體和/或非對映異構(gòu)體的這些混合物中，立體異構(gòu)純的組分可以以已知方式分離出來是可能的。
如果本發(fā)明的化合物可以以互變異構(gòu)形式存在，本發(fā)明包括所有的互變異構(gòu)形式。
優(yōu)選用于本發(fā)明的目的鹽是本發(fā)明的化合物的生理可接受的鹽。然而，本身不適合于藥物應(yīng)用但是可以用于例如分離或純化本發(fā)明的化合物的鹽也被包括在內(nèi)。對于本發(fā)明的目的而言，混合鹽是指含有兩種或多種不同酸或堿的加成鹽，例如三氟乙酸鹽甲磺酸鹽。
本發(fā)明化合物的生理可接受的鹽包括無機酸、羧酸和磺酸的酸加成鹽，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸和苯甲酸的鹽。
本發(fā)明的化合物的生理可接受的鹽還包括常用的堿的鹽，諸如，作為實例，并且優(yōu)選地堿金屬鹽(例如，鈉和鉀鹽)，堿土金屬鹽(例如鈣和鎂鹽)和衍生自氨或具有1-16個碳原子的有機胺的銨鹽，所述有機胺諸如作為實例，并且優(yōu)選地，乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二異丙胺、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環(huán)己胺、二甲基氨基乙醇、普魯卡因、二芐基胺、N-甲基嗎啉、精氨酸、賴氨酸、乙二胺和N-甲基哌啶。
對于本發(fā)明的目的而言，溶劑合物指通過與溶劑分子的配位作用形成固體或液體狀態(tài)的復(fù)合物的本發(fā)明的化合物的那些形式。水合物是溶劑合物的特殊形式，其中與水發(fā)生配位作用。
對于本發(fā)明的目的而言，除非另外指出，取代基具有下列含義 烷基本身以及烷氧基，烷基氨基，烷基羰基，烷氧基羰基和烷基羰基氨基中的“alk(烷基)”和“alkyl(烷基)”表示通常具有1至6個、優(yōu)選1至4個、特別優(yōu)選1至3個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，作為實例并且優(yōu)選甲基、乙基、正丙基、異丙基、叔丁基、2，2-二甲基丙-1-基、2，2-二甲基丁-1-基、正戊基和正己基。
烷氧基，作為實例并且優(yōu)選表示甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、叔丁氧基、正戊氧基和正己氧基。
鏈烯基表示具有2至6個碳原子的直鏈或支鏈鏈烯基基團。優(yōu)選具有2至4個、特別優(yōu)選具有2至3個碳原子的直鏈或支鏈鏈烯基基團。例如并且優(yōu)選，可以提及下列各項乙烯基，烯丙基，正-丙-1-烯-1-基，正-丁-2-烯-1-基，2-甲基丙-1-烯-1-基和2-甲基丙-2-烯-1-基。
烷基氨基表示具有一個或兩個(彼此獨立地選擇)烷基取代基的烷基氨基，例舉并且優(yōu)選甲基氨基，乙基氨基，正-丙基氨基，異丙基氨基，叔-丁基氨基，正-戊基氨基，正-己基氨基，N，N-二甲基氨基，N，N-二乙基氨基，N-乙基-N-甲基氨基，N-甲基-N-正-丙基氨基，N-異丙基-N-正-丙基氨基，N-叔-丁基-N-甲基氨基，N-乙基-N-正-戊基氨基和N-正-己基-N-甲基氨基。C1-C3-烷基氨基，例如，表示具有1至3個碳原子的單烷基氨基基團或每個烷基取代基具有1至3個碳原子的二烷基氨基基團。
芳基氨基表示經(jīng)由氨基鍵合的芳基取代基，另一個取代基任選地與所述氨基鍵合，如例如芳基或烷基，例舉并優(yōu)選為苯基氨基，萘基氨基，苯基甲基氨基或二苯基氨基。
烷基羰基例舉并優(yōu)選表示甲基羰基，乙基羰基，正-丙基羰基，異丙基羰基，叔-丁基羰基，正-戊基羰基和正-己基羰基。
烷氧基羰基例舉并優(yōu)選表示甲氧基羰基，乙氧基羰基，正-丙氧基羰基，異丙氧基羰基，叔-丁氧羰基，正-戊氧基羰基和正-己氧基羰基。
芳基羰基表示經(jīng)由羰基鍵合的芳基取代基，例舉并優(yōu)選為苯基羰基，萘基羰基和菲基羰基。
烷基羰基氨基例舉并優(yōu)選表示，甲基羰基氨基，乙基羰基氨基，正-丙基羰基氨基，異丙基羰基氨基，叔-丁基羰基氨基，正-戊基羰基氨基和正-己基羰基氨基。
芳基羰基氨基例舉并優(yōu)選表示，苯基羰基氨基，萘基羰基氨基和菲基羰基氨基。
環(huán)烷基表示通常具有3至6個碳原子的環(huán)烷基基團，例舉并優(yōu)選為環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基和環(huán)己基。
芳基表示通常具有6至10個碳原子的單環(huán)至三環(huán)芳族、碳環(huán)基團；例舉并優(yōu)選為苯基和萘基。
雜環(huán)基表示單環(huán)-或多環(huán)、優(yōu)選單環(huán)-或二環(huán)的雜環(huán)基團，通常具有5至7個環(huán)原子和最多3個、優(yōu)選最多2個選自N，O，S，SO，SO2的雜原子和/或雜基團。雜環(huán)基基團可以是飽和的或部分飽和的。優(yōu)選具有最多2個選自O(shè)，N和S的雜原子的5-至7-元單環(huán)飽和雜環(huán)基基團，諸如，例舉并優(yōu)選為四氫呋喃基，吡咯烷基，吡咯啉基，哌啶基，四氫吡喃基，哌嗪基，嗎啉基和全氫氮雜革基(perhydroazepinyl)。
雜芳基表示通常具有5至10個、優(yōu)選5至6個環(huán)原子和最多5個、優(yōu)選最多4個選自S、O和N的雜原子的芳族、單環(huán)-或二環(huán)基團，例舉并優(yōu)選為噻吩基，呋喃基，吡咯基，噻唑基，噁唑基，咪唑基，吡啶基，嘧啶基，噠嗪基，吲哚基，吲唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩基，喹啉基和異喹啉基。
鹵素表示氟，氯，溴和碘，優(yōu)選氟和氯。
附圖簡述

圖1實施例12A的單晶X射線結(jié)構(gòu)，Ortep圖(50％)。
圖2實施例21A的1H NMR(500MHz，d5-吡啶) 優(yōu)選式(Ib)的化合物，其中 R6表示甲基， R7表示下式的基團
其中 *是與所述胺的鍵合位點， R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羥基-2-甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羥基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羥基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羥基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基， 其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基， R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羥基-2-甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羥基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羥基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羥基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基， 其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基， R4表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羥基-2-甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羥基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羥基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羥基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基， 其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基， R5表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羥基-2-甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羥基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羥基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羥基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基， 其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基，和它們的鹽，它們的溶劑合物和它們的鹽的溶劑合物。
還優(yōu)選式(Ib)的化合物，其中 R6表示甲基， R7表示下式的基團
其中 *是與所述胺的鍵合位點， R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基， 其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基， R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基， 其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基， R4表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基， 其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基， R5表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基， 其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基， 和它們的鹽，它們的溶劑合物和它們的鹽的溶劑合物。
還優(yōu)選式(Ib)的化合物，其中 R6表示甲基， R7表示下式的基團
其中 *是與所述胺的鍵合位點， 并且R1和R2具有以上給出的含義。
還優(yōu)選式(Ib)的化合物，其中 R6表示甲基， R7表示下式的基團
其中 *是與所述胺的鍵合位點， 并且R4和R5具有以上給出的含義。
本發(fā)明還涉及式(I)的化合物，
其中 R1表示C1-C6-烷基，C2-C6-鏈烯基，C3-C6-環(huán)烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、鏈烯基、環(huán)烷基和芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，芐氧基，C3-C6-環(huán)烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元雜環(huán)基，5-至10-元雜芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和芐氧羰基氨基， 其中對于它們的部分的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元雜環(huán)基， R2表示C1-C6-烷基，C2-C6-鏈烯基，C3-C6-環(huán)烷基或C6-C10-芳基， 其中烷基、鏈烯基、環(huán)烷基和芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，芐氧基，C3-C6-環(huán)烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元雜環(huán)基，5-至10-元雜芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和芐氧羰基氨基， 其中對于它們的部分的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元雜環(huán)基，和它們的鹽，它們的溶劑合物和它們的鹽的溶劑合物。
還優(yōu)選式(I)的化合物，其中 R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羥基-2-甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基-丁-1-基，1-羥基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羥基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羥基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基， 其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基， R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羥基-2-甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基-丁-1-基，1-羥基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羥基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羥基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基， 其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基，和它們的鹽，它們的溶劑合物和它們的鹽的溶劑合物。
還優(yōu)選式(I)的化合物，其中 R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基， 其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基， R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基， 其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基，和它們的鹽，它們的溶劑合物和它們的鹽的溶劑合物。
本發(fā)明還涉及式(Ia)的化合物，
其中 R1表示C1-C6-烷基，C2-C6-鏈烯基，C3-C6-環(huán)烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、鏈烯基、環(huán)烷基和芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，芐氧基，C3-C6-環(huán)烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元雜環(huán)基，5-至10-元雜芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和芐氧羰基氨基， 其中對于它們的部分的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元雜環(huán)基， R2表示C1-C6-烷基，C2-C6-鏈烯基，C3-C6-環(huán)烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、鏈烯基、環(huán)烷基和芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，芐氧基，C3-C6-環(huán)烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元雜環(huán)基，5-至10-元雜芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和芐氧羰基氨基， 其中對于它們的部分的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元雜環(huán)基，和它們的鹽，它們的溶劑合物和它們的鹽的溶劑合物。
本發(fā)明還涉及制備式(Ib)的化合物的方法，其中 [A]式(II)的化合物，
其中 R6具有以上所示含義， 首先與下式的化合物反應(yīng)，
其中 R1，R2，R4和R5具有以上所示含義， R3表示叔-丁氧羰基或芐氧羰基，并且 X1表示鹵素，優(yōu)選溴，氯或氟，或羥基，并然后與酸和/或通過氫解反應(yīng)， 或 [B]式(IV)的化合物，
其中 R6具有以上所示含義， 首先與下式的化合物反應(yīng)，
其中 R1，R2，R4和R5具有以上所示含義， 并且然后，在4-步合成中， a)與氟化物試劑如氟化四丁基銨反應(yīng)， b)與酸反應(yīng)， c)當(dāng)適合時在堿的存在下與脫水劑反應(yīng)，和 d)通過氫解反應(yīng)。
方法[A] 如果X1是鹵素，第一步的反應(yīng)通常在惰性溶劑中發(fā)生，當(dāng)合適時存在堿，優(yōu)選在大氣壓下在-30℃至50℃的溫度范圍內(nèi)。
惰性溶劑是，例如，四氫呋喃、二氯甲烷、吡啶、二噁烷、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷或二甲基甲酰胺；優(yōu)選吡啶或二甲基甲酰胺。
堿是，例如，三乙胺、二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉；優(yōu)選二異丙基乙胺。
如果X1是羥基，第一步的反應(yīng)一般在脫水劑存在下在惰性溶劑中進行，當(dāng)合適時在堿存在下，優(yōu)選在大氣壓下在-30℃至50℃的溫度范圍內(nèi)。
惰性溶劑是，例如，鹵代烴諸如二氯甲烷或三氯甲烷，烴諸如苯、硝基甲烷、二噁烷、二甲基甲酰胺或乙腈。同樣可以采用這些溶劑的混合物。特別優(yōu)選二氯甲烷或二甲基甲酰胺。
適合的脫水劑的實例有碳二亞胺諸如N，N′-二乙基-，N，N′-二丙基-，N，N′-二異丙基-，N，N′-二環(huán)已基碳二亞胺，N-(3-二甲基氨基異丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，N-環(huán)已基碳二亞胺-N’-丙基氧基甲基聚苯乙烯(PS-碳二亞胺)或羰基化合物諸如羰二咪唑，或1，2-噁唑鎓(oxazolium)化合物諸如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-硫酸鹽或2-叔-丁基-5-甲基異噁唑鎓高氯酸鹽，或?；被衔镏T如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氫喹啉，或丙烷膦酸酐，或氯甲酸異丁酯，或二(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯，或苯并三唑基氧基-三-(二甲基氨基)六氟膦酸鏻，或O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)，2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TPTU)或O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU)，或1-羥基苯并三唑(HOBt)，或苯并三唑-1-基氧基三-(二甲基氨基)六氟磷酸鏻(BOP)，或N-羥基琥珀酰亞胺，或這些與堿的混合物。
堿是，例如，堿金屬碳酸鹽，諸如，例如，碳酸鈉或碳酸鉀，或碳酸氫鹽，或有機堿諸如三烷基胺，例如，三乙胺、N-甲基嗎啉、N-甲基哌啶、4-二甲基氨基吡啶或二異丙基乙胺。
優(yōu)選利用HATU或利用EDC在HOBt存在下進行所述縮合。
該方法第二步中與酸的反應(yīng)優(yōu)選在0℃至40℃的溫度范圍內(nèi)在大氣壓下發(fā)生。
因此適當(dāng)?shù)乃崾嵌f烷中的氯化氫，乙酸中的溴化氫或二氯甲烷中的三氟乙酸。
該方法第二步中的氫解通常在溶劑中在氫和披鈀活性碳的存在下、優(yōu)選在0℃至40℃的溫度范圍內(nèi)在大氣壓下進行。
溶劑例如有醇，如甲醇，乙醇，正丙醇或異丙醇，混合以水和乙酸或鹽酸水溶液；乙醇、水和乙酸的混合物，或異丙醇和鹽酸水溶液的混合物是優(yōu)選的。
方法[B] 式(IV)化合物與式(V)或(VII)化合物的反應(yīng)通常在惰性溶劑中、在脫水劑的存在下發(fā)生，當(dāng)合適時存在堿，優(yōu)選在大氣壓下在-30℃至50℃的溫度范圍內(nèi)。
惰性溶劑是，例如，鹵代烴諸如二氯甲烷或三氯甲烷，烴諸如苯、硝基甲烷、二噁烷、二甲基甲酰胺或乙腈。同樣可以采用這些溶劑的混合物。特別優(yōu)選二氯甲烷或二甲基甲酰胺。
適合的脫水劑的實例有碳二亞胺諸如N，N′-二乙基-，N，N′-二丙基-，N，N′-二異丙基-，N，N′-二環(huán)已基碳二亞胺，N-(3-二甲基氨基異丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，N-環(huán)已基碳二亞胺-N’-丙基氧基甲基聚苯乙烯(PS-碳二亞胺)或羰基化合物諸如羰二咪唑，或1，2-噁唑鎓(oxazolium)化合物諸如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-硫酸鹽或2-叔-丁基-5-甲基異噁唑鎓高氯酸鹽，或酰基氨基化合物諸如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氫喹啉，或丙烷膦酸酐，或氯甲酸異丁酯，或二(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯，或苯并三唑基氧基-三-(二甲基氨基)六氟膦酸鏻，或O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)，2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TPTU)或O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU)，或1-羥基苯并三唑(HOBt)，或苯并三唑-1-基氧基三-(二甲基氨基)六氟磷酸鏻(BOP)，或苯并三唑-1-基氧基三-(吡咯烷子基)六氟磷酸鏻(PyBOP)，或N-羥基琥珀酰亞胺，或這些與堿的混合物。
堿是，例如，堿金屬碳酸鹽，諸如，例如，碳酸鈉或碳酸鉀，或碳酸氫鹽，或有機堿諸如三烷基胺，例如，三乙胺、N-甲基嗎啉、N-甲基哌啶、4-二甲基氨基吡啶或二異丙基乙胺。
優(yōu)選利用HATU或利用EDC在HOBt存在下進行所述縮合。
該另外的方法的第一步(a)中與氟化四丁基銨的反應(yīng)通常在惰性溶劑中、優(yōu)選在0℃至40℃的溫度范圍內(nèi)在大氣壓下發(fā)生。
惰性溶劑是，例如，鹵代烴諸如二氯甲烷或三氯甲烷，或醚如四氫呋喃或二噁烷。特別優(yōu)選四氫呋喃。
該方法第二步(b)中與酸的反應(yīng)優(yōu)選在0℃至40℃的溫度范圍內(nèi)在大氣壓下發(fā)生。
其中適當(dāng)?shù)乃崾嵌f烷中的氯化氫，乙酸中的溴化氫或二氯甲烷中的三氟乙酸。
該方法第三步(c)中的反應(yīng)的發(fā)生類似于式(IV)化合物與式(V)或(VII)化合物的反應(yīng)。
該方法第四步(d)中的氫解通常在溶劑中在氫和披鈀活性碳的存在下、優(yōu)選在0℃至40℃的溫度范圍內(nèi)在大氣壓下發(fā)生。
溶劑例如有醇，如甲醇，乙醇，正丙醇或異丙醇，混合以水和乙酸或鹽酸水溶液；乙醇、水和乙酸的混合物，或異丙醇和鹽酸水溶液的混合物是優(yōu)選的。
可以從溶桿菌素(實施例1A)或片野菌素A通過氫化、酶促裂解和再環(huán)化合成式(II)的化合物，如實驗部分中實施例2A，3A和20A至26A的實驗部分中所述。式(IV)化合物是該合成順序中的中間體。
式(III)，(V)，(VI)和(VII)的化合物是已知的或者可以從相應(yīng)的原材料通過已知方法或通過以下所述方法合成。
本發(fā)明化合物的制備可以通過下列合成反應(yīng)路線舉例說明。

合成反應(yīng)路線2
本發(fā)明另外涉及制備下式化合物的方法2-(三甲代甲硅烷基)乙基-(3R)-3-氨基-N2-[(芐氧基)羰基]-L-苯丙氨酸酯三氟乙酸鹽(實施例19A)
其特征在于在6-步合成中，將下式化合物(rac)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-3-苯基丙酸甲酯
a)在堿(優(yōu)選六甲基二硅疊氮化鋰(lithium hexamethyldisilazide))的存在下，與氮雜二羧酸二芐酯反應(yīng)， b)與N，N，N，N，-四甲基胍反應(yīng)， c)在阮內(nèi)鎳的存在下與氫反應(yīng)， d)在堿(優(yōu)選N-甲基嗎啉)的存在下與N-芐氧基羰氧基琥珀酰亞胺酯反應(yīng)， e)與堿(優(yōu)選氫氧化鋰)反應(yīng)和隨后色譜法分離對映體，和 f)與在二氯甲烷中的三氟乙酸或二噁烷中的氯化氫反應(yīng)。
在實施例12A至實施例19A的實驗部分描述了詳細合成。
本發(fā)明進一步涉及下式化合物 (3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸(實施例17A和實施例35A)
或 (3R)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯(實施例18A)
或 (3R)-3-氨基-N2-[(芐氧基)羰基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯三氟乙酸鹽(實施例19A)
或 (2S，3R)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(實施例33A)
或 (2S，3R)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(實施例34A)
或 (3S)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸(實施例36A)
或 (3S)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯(實施例37A)
或 (3S)-3-氨基-N2-[(芐氧基)羰基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯三氟乙酸鹽(實施例38A)
本發(fā)明的化合物顯示有價值的藥理學(xué)活性譜。它們顯示抗菌活性。
它們因此適用于用作治療和/或預(yù)防人和動物中疾病的藥物。
本發(fā)明的化合物特征在于與溶桿菌素相比更低的腎毒性。
本發(fā)明化合物的特征在于在中性至堿性水性介質(zhì)中改善的穩(wěn)定性。該性質(zhì)改善了本發(fā)明化合物的貯存和作為藥物的給藥。
所述九酯肽類作為細菌細胞壁生物合成的抑制劑。
本發(fā)明的制劑針對細菌和類細菌的微生物是特別有效的。它們因此特別適于由這些病原體在人和獸醫(yī)學(xué)中所引起的局部和全身感染的預(yù)防和化學(xué)療法。
原則上，可以將本發(fā)明的制劑用于針對具有細菌細胞壁(胞壁質(zhì)球囊)或相應(yīng)酶系統(tǒng)的全部細菌和類細菌的微生物，例如下列病原體或下列病原體的混合物 革蘭氏陰性球菌(淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae))還有革蘭氏陰性桿菌諸如腸桿菌科(Enterobacteriaceae)，例如大腸桿菌(Escherichia coli)、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、檸檬酸桿菌屬(Citrobacter)(弗氏檸檬酸桿菌(C.freundii)、C.divernis)、沙門氏菌屬(Salmonella)和志賀氏桿菌屬(Shigella)；此外還有腸桿菌屬(Enterobacter)(產(chǎn)氣腸桿菌(E.aerogenes)、成團腸桿菌(E.agglomerans))、哈夫尼菌屬(Hafnia)、沙雷氏菌屬(Serratia)(粘質(zhì)沙雷氏菌(S.marcescens)、普羅威登斯菌屬(Providencia)、耶爾森氏菌屬(Yersinia)，還有不動桿菌屬(Acinetobacter)、布蘭漢氏球菌屬(Branhamella)和衣原體(Chlamydia)。而且，所述抗菌譜包括嚴格厭氧菌諸如，例如，脆弱擬桿菌(Bacteroides fragilis)，消化球菌屬(Peptococcus)、消化鏈球菌屬(Peptostreptococcus)、以及梭狀芽胞桿菌屬(Clostridium)的代表；此外還有分枝桿菌屬(Mycobacteria)，例如結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosus)。本發(fā)明的化合物對于革蘭氏陽性球菌顯示特別顯著的效果，所述革蘭氏陽性球菌例如葡萄球菌(Staphylococci)(金黃色葡萄球菌(S.aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、溶血葡萄球菌(S.haemolyticus)、肉葡萄球菌(S.carnosus))、腸球菌屬(enterococci)(糞腸球菌(E.faecalis)、屎腸球菌(E.faecium))和鏈球菌屬(streptococci)(無乳鏈球菌(S.agalactiae)、肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)、化膿鏈球菌(S.pyogenes))。
上述病原體列表僅應(yīng)被解釋為是例舉性的而絕非限制性的。可以提到的由所述病原體或混合感染所引起并且可以通過本發(fā)明的制劑預(yù)防、改善或治愈的疾病例如有 在人中的感染性疾病，例如，無并發(fā)癥的和并發(fā)的尿路感染，無并發(fā)癥的皮膚和表皮感染，并發(fā)的皮膚和軟組織感染，醫(yī)院中獲得性肺炎和作為門診患者、醫(yī)院的肺炎，慢性支氣管炎的急性惡化和繼發(fā)細菌感染，急性中耳炎，急性鼻竇炎，鏈球菌咽炎，細菌性腦膜炎，無并發(fā)癥的淋球菌和非-淋球菌尿道炎/宮頸炎，急性前列腺炎，心內(nèi)膜炎，無并發(fā)癥的和并發(fā)的腹內(nèi)感染，婦科感染，盆腔炎疾病，細菌性陰道病，急性和慢性骨髓炎，急性細菌性關(guān)節(jié)炎，發(fā)熱性中性白細胞減少患者(febrile neutropenicpatients)中的經(jīng)驗療法，還有菌血癥(bacteraemias)，MRSA感染，急性傳染性腹瀉，幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)感染，手術(shù)后的感染，牙原性感染(odontogenic infections)，眼科感染，手術(shù)后的感染(包括門靜脈周膿腫、創(chuàng)傷感染、膽道感染，乳腺炎和急性闌尾炎)，囊性纖維化病和支氣管擴張癥。
除人之外，還可以在其它物種中治療細菌感染?？梢蕴岬降膶嵗? 豬腹瀉、腸源性毒血癥(enterotoxaemia)、敗血癥、痢疾、沙門氏菌病、子宮炎-乳腺炎-乳泌缺乏綜合征(agalactiae syndrome)、乳腺炎； 反芻動物(牛、綿羊、山羊)腹瀉、敗血癥、支氣管性肺炎、沙門氏菌病、巴斯德菌病、生殖器感染； 馬支氣管性肺炎、關(guān)節(jié)病、分娩的和分娩后感染、沙門氏菌??； 狗和貓支氣管肺炎、腹瀉、皮炎、耳炎、尿路感染、前列腺炎； 家禽(小雞、火雞、鵪鶉、鴿子、觀賞鳥類及其它)大腸桿菌感染、慢性呼吸道疾病、沙門氏菌病、巴斯德菌病、鸚鵡熱。
它同樣可以在飼養(yǎng)和撫養(yǎng)生產(chǎn)性和觀賞用魚類中治療細菌病，所述抗菌譜從而在上述病原體上還延伸到病原體諸如，例如，巴斯德菌屬(Pasteurella)、布魯氏菌屬(Brucella)、彎曲桿菌屬(Campylobacter)、李斯特菌屬(Listeria)、丹毒絲菌屬(Erysipelothris)、棒狀桿菌(Corynebacteria)、疏螺旋體屬(Borellia)、密螺旋體(Treponema)、諾卡氏菌屬(Nocardia)、立克次氏體(Rickettsia)、耶爾森氏菌屬(Yersinia)。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防疾病，特別是細菌感染性疾病的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防疾病，特別是上述疾病的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物用于生產(chǎn)治療和/或預(yù)防疾病、特別是上述疾病的藥物的應(yīng)用。
優(yōu)選將本發(fā)明的化合物用于生產(chǎn)適于預(yù)防和/或治療細菌疾病的藥物。
本發(fā)明還涉及利用抗菌有效量的本發(fā)明化合物治療和/或預(yù)防疾病的方法，所述疾病特別是上述疾病。
本發(fā)明還涉及包含至少一種本發(fā)明化合物和至少一種或多種另外的活性化合物的藥物，特別是用于治療和/或預(yù)防上述疾病。組合用的優(yōu)選活性化合物是抗菌活性的化合物，其具有不同的活性譜，特別是補充的活性譜，和/或?qū)Ρ景l(fā)明的化合物是有協(xié)同作用的。
本發(fā)明的化合物可以全身和/或局部起作用。為此目的，它們可以以適合的方式進行施用，所述方式諸如，例如通過口服的、腸胃外的、經(jīng)肺的、經(jīng)鼻的、舌下的、舌的、頰的、直腸的、皮膚的、透皮的、結(jié)膜的、耳的途徑，或作為植入物或支架。
本發(fā)明的化合物可以以適合于這些給藥途徑的給藥形式進行施用。
適合于口服給藥的是這樣的給藥形式，其按照現(xiàn)有技術(shù)發(fā)揮功能并且快速地和/或以改進的方式遞送本發(fā)明的化合物，并且其包括晶體形式和/或非晶形形式和/或溶解形式的本發(fā)明的化合物，諸如，例如片劑(未包衣的或包衣片劑，例如具有延遲溶解或者是不可溶的并且控制本發(fā)明化合物釋放的腸溶衣或包衣)，快速在口腔中崩解的片劑或薄膜/糯米紙囊劑，薄膜/凍干物，膠囊(例如硬或軟明膠膠囊)，糖衣片劑，顆粒劑，丸劑，粉末，乳劑，混懸劑，氣溶膠或溶液。
腸胃外給藥的發(fā)生可以避免吸收步驟(例如，靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、心臟內(nèi)、脊髓內(nèi)或腰椎內(nèi))，或包含吸收(例如，肌內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、經(jīng)皮或腹膜內(nèi))。適合于腸胃外給藥的給藥形式特別是，用于注射和輸注的，以溶液、混懸液、乳劑、凍干物或無菌粉末形式存在的制劑。
適合于其它給藥途徑的實例是用于吸入的藥物形式(特別是粉末吸氣器，噴霧器)，滴鼻劑，溶液，噴霧劑；可以通過舌、舌下或頰施用的片劑，薄膜/糯米紙囊劑或膠囊；栓劑，用于眼和耳的制劑，陰道膠囊，水性混懸液(洗劑，振搖混合物)，親脂性混懸液，軟膏劑，乳膏劑，透皮治療系統(tǒng)(如，例如貼片)，乳，糊劑，泡沫，撲粉，植入物或支架。
可以將本發(fā)明的化合物轉(zhuǎn)化成為所述的給藥形式。這可以以本身已知的方式通過混合以惰性、非毒性的藥用的賦形劑來進行。這些賦形劑包括，特別是，載體(例如微晶纖維素，乳糖，甘露醇)，溶劑(例如液體聚乙二醇)，乳化劑和分散劑或濕潤劑(例如十二烷基硫酸鈉，聚氧基失水山梨糖醇油酸酯)，粘合劑(例如聚乙烯吡咯烷酮)，合成的和天然的聚合物(例如白蛋白)，穩(wěn)定劑(例如抗氧化劑諸如抗壞血酸)，顏料(例如無機顏料諸如氧化鐵)或味道和/或氣味矯正劑。
本發(fā)明還涉及這樣的藥物和將其用于前述目的的應(yīng)用，所述藥物包括至少一種本發(fā)明的化合物，以及通常地一種或多種惰性、非毒性藥用的賦形劑。
通常，以約0.001到100mg/kg，優(yōu)選地約0.1到10mg/kg體重的靜脈內(nèi)給藥量施用從而獲得有效效果被證明有利的，并且口服給藥所用的劑量是約0.01到50mg/kg，優(yōu)選地0.5到10mg/kg體重。
然而，可能需要的是，當(dāng)需要時偏離提及的量，其具體地作為體重、給藥途徑、對活性成分的個體行為、制劑類型和在施用發(fā)生過程中的時間或間隔的函數(shù)。因此，在某些情形中以少于前述最小量進行的施用可以是充分的，而在其它情形中，必須超過提及的上限。在更大量的施用的情形中，可以推薦將這些分成一天內(nèi)的多個單獨劑量。
除非另外指出，在下述測試和實施例中的百分比是重量百分比；份是重量份。液體/液體溶液的溶劑比率、稀釋比率和濃度在每種情形中都是基于體積。
A.實施例 縮寫 aq. 水性 面積(Area)(峰)面積 BHI 腦心浸液 Boc 叔-丁氧羰基 br. 寬信號(在NMR光譜中) calc. 計算值 conc. 濃縮的 d 雙峰(在NMR光譜中) DCC 二環(huán)己基碳二亞胺 DCI 直接化學(xué)電離(在MS中) DCM 二氯甲烷 DIEA N，N-二異丙基乙胺 DMAP 4-N，N-二甲基氨基吡啶 DMF N，N-二甲基甲酰胺 DMSO 二甲亞砜 EA乙酸乙酯(乙酸乙基酯) EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(也為 EDCI) EDCxHCl 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽 EDTA 乙二胺四乙酸 EI電子碰撞電離(MS中) ESI 電噴霧電離(MS中) Ex. 實施例 h 小時 HATU 鄰-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六 氟磷酸鹽 HOBt 1-羥基苯并三唑 HPLC 高壓或高效液相色譜法 HR高分辨率 i.V 真空 LC-MS 液相色譜-偶聯(lián)質(zhì)譜法 LDA 二異丙基氨基化鋰 LLA(3-環(huán)己基) D-Leu-Leu-(3-環(huán)己基)Ala LLF D-Leu-Leu-Phe m 中間(在UV和IR光譜中) m 多重峰(在NMR光譜中) MALDI 基體-輔助的激光脫附/電離 MIC 最低抑制濃度 min 分鐘(單數(shù))/分鐘(復(fù)數(shù)) Mp. 熔點 MRSA 耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌 MS質(zhì)譜法 NCCLS 國家臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會(National Committee for Clinical Laboratory Standards) neg. 負的 NMM N-甲基嗎啉 NMR 核磁共振光譜法 p.a. 分析級(pro analysi) Pd鈀 Pd-C 披鈀碳 pos. 正的 PTFE 聚四氟乙烯 quant.定量 RP-HPLC 反相HPLC RT室溫 Rt保留時間(在HPLC中) s 強(在UV和IR光譜中) s 單峰(在NMR光譜中) sat. 飽和的 TBAF 氟化四丁基銨 TBTU 鄰-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓四氟硼酸 鹽 TCTU 鄰-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四 氟硼酸鹽 TFA 三氟乙酸 TFE 2，2，2-三氟乙醇 THF 四氫呋喃 TLC 薄層色譜法 TMG N，N，N，N-四甲基胍 TMSE 2-(三甲代甲硅烷基)乙基 TOF 飛行時間 UV紫外線 vis 可見的 VRSA 耐萬古霉素的金黃色葡萄球菌 w 弱(在UV和IR光譜中) Z，Cbz芐氧羰基 文獻 對于肽和環(huán)酯肽(cyclodepsipeptides)的命名法，參考 1.A Guide to IUPAC Nomenclature of Organic Compounds(Recommendations 1993)，1993，Blackwell Scientific publications. 2.Nomenclature and symbolism for氨基acids and peptides.Recommendations 1983.IUPAC-IUB Joint Commission on BiochemicalNomenclature，UK.Biochemical Journal 1984，219，345-373.以及引用的文獻。
通用方法GC-MS，LC-MS，HR-MS，HPLC和凝膠色譜法 方法1(TOF-HR-MS)使用Micromass LCT儀器(毛細管電壓3.2KV，錐形電壓(cone voltage)42V，源極溫度120℃，去溶劑化溫度280℃)記錄TOF-HR-MS-ESI+光譜。為此，將輸液泵(來自Harvard Instrument)用于進樣。將亮氨酸腦磷脂(enkephalin)(Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu)用作標(biāo)準(zhǔn)。
方法2(分析HPLC；Synergi)儀器類型HPLCHP 1100系列；UV DAD；柱Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20mmx4mm；洗脫劑A1l水+1.0ml的50％甲酸，洗脫劑B1l的乙腈；梯度0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min.2ml/min；爐50℃；UV檢測210nm. 方法3(分析HPLC；Synergi)儀器類型HPLCHP 1050系列；UV DAD；柱Phenomenex Synergi 2μ Max-RP Mercury 20mm×4mm；洗脫劑A1l水+0.05％三氟乙酸，洗脫劑B1 l的乙腈；梯度0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min.2ml/min；爐50℃；UV檢測210nm. 方法4(分析HPLC)儀器類型HPLCHP 1050系列；UV DAD 1100系列；柱Kromasil C18，60×2mm，3.5μm；洗脫劑A水/0.5％高氯酸，洗脫劑B乙腈；梯度0-0.5min 2％B，0.5-4.5min 2-90％B，4.5-6.5min 90％B，6.5-6.7min 90-2％ B，6.7-7.5min 2％B；流速0.75ml/min，爐30℃，UV檢測210nm. 方法5(LC-MS)儀器類型MSMicromass LCT(ESI pos./neg.)；儀器類型HPLCHP 1100系列；UV DAD 1100系列；柱SymmetryPrepTMC18，Waters，50×2.1mm，3.5μm；洗脫劑A水/0.1％甲酸，洗脫劑B乙腈/0.1％甲酸；梯度0-1min 0％B，1-6min 0-90％B，6-8min 90-100％B，8-10min100％B，10-10.1min 100-0％B，10.1-12min 0％B，然后將色譜柱再生。爐40℃，流速0.5ml/min(在10.1min簡短地至1ml/min)，UV檢測210nm. 方法6(制備HPLC；Xterra，C18，0.1％TFA)儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Xterra，Waters，5μm；150×10mm；洗脫劑A水/0.1％三氟乙酸，洗脫劑B乙腈；梯度0-7min 5％B，7-9min 5-40％B，9-11min40％B，11-18min 40-90％B，然后將色譜柱再生；流速8ml/min；UV檢測器210nm. 方法7(LC-MS)儀器類型MSMicromass ZQ；儀器類型HPLCWatersAlliance 2795；柱Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20mmx4mm；洗脫劑A1l水+0.5ml的50％甲酸，洗脫劑B1l的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；爐50℃；UV檢測210nm. 方法8(LC-MS)儀器Micromass Quattro LCZ with HPLC Agilent系列1100；柱Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20mm×4mm；洗脫劑A1l水+0.5ml的50％甲酸，洗脫劑B1l的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；爐50℃；UV檢測208-400nm. 方法9(氨基酸分析)用來自Eppendorf/Biotronik的LC3000氨基酸分析儀進行氨基酸分析。使用稍微改進的來自Eppendorf/Biotronik的標(biāo)準(zhǔn)分離程序。分離程序和分析儀的功能在儀器手冊中詳細描述(Handbuch desAmniosureanalysators LC 3000[Handbook of the LC 3000 Amino AcidAnalyzer]，Wissenschaftliche Gerte GmbH Biotronik，Maintal，1996)。
方法10(制備HPLC，Nucleodur，TFA)儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱NucleodurC18 Gravity，Macherey-Nagel，5μm；250x21mm；洗脫劑A水/0.1％三氟乙酸，洗脫劑B乙腈；梯度0-8min 5％B，8-40min5-60％B，40-60min 60％B，60-75min 60-100％B，75-80min 100％B，然后將色譜柱再生；流速7-15ml/min；UV檢測器210nm. 方法11(制備HPLC，Nucleodur，乙酸)儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Nucleodur C18 Gravity，Macherey-Nagel，5μm；250×40mm；洗脫劑A水/0.2％乙酸，洗脫劑B乙腈/0.2％乙酸；梯度0-10min 10％B，10-24min 10-30％B，24-28min 30-50％B，28-35min 50％B，35-45min50-60％B，45-53min 60-70％B，53-60min 60-90％B，60-70min 100％B，然后將色譜柱再生；流速15-45ml/min；UV檢測器210nm. 方法12(制備HPLC，Symmetry，乙酸)儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱SymmetryPrepTMC18，Waters，7μm；300x19mm；洗脫劑A水/0.5-0.25％乙酸，洗脫劑B乙腈；梯度0-2min 5％B，2-60min 5-90％B，60-80min 100％B，然后將色譜柱再生；流速7ml/min；UV檢測器210nm. 方法13(制備HPLC；Kromasil，乙酸)儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Kromasil-100A C18，5μm；250×30mm；洗脫劑A水/0.25％乙酸，洗脫劑B乙腈；梯度0-3min 5％B，3-30min 5-100％B，30-38min100％B，然后將色譜柱再生；流速25ml/min；UV檢測器210nm. 方法14(在Sephadex LH-20上的凝膠色譜法)在不加壓下在Sephadex LH-20(來自Pharmacia)上進行凝膠色譜分離。根據(jù)UV活性(UV檢測器，254nm，Knauer)進行分級(ISCO Foxy 200級分收集器)，柱尺寸32×7cm(1000-100μmol規(guī)模)；30×4cm(100-10μmol規(guī)模)；25×2cm(10-1μmol規(guī)模)。將甲醇或甲醇/0.2％乙酸用作洗脫劑。
方法15(手性制備HPLC)柱(鋼柱，尺寸250×30mm)；固定相(手性硅石/聚酰胺復(fù)合物KBD 5326，基于選擇劑聚(N-異丁烯酰基-L-亮氨酸-二環(huán)丙基甲基-酰胺)；洗脫劑乙酸乙酯，恒溶劑；流速25ml/min；溫度24℃；UV檢測225nm；樣品重復(fù)注射2000μl。
方法16(對映體純度的測定)柱(鋼柱，尺寸250×4.6mm)；固定相(手性硅石/聚酰胺復(fù)合物KBD 5326，基于選擇劑聚(N-異丁烯酰基-L-亮氨酸-二環(huán)丙基甲基-酰胺)；洗脫劑乙酸乙酯，恒溶劑；流速1ml/min；溫度25℃；UV檢測220nm；樣品注射10μl。
方法17(分析HPLC)儀器類型HPLCHP 1100系列；UV DAD柱Zorbax Eclipse XBD-C8(Agilent)，150mmx4.6mm，5μm；洗脫劑A5ml的HClO4/l水，洗脫劑B乙腈；梯度0-1min 10％B，1-4min 10-90％B，4-5min 90％B；流速2.0ml/min；爐30℃；UV檢測210和254nm. 方法18(分析HPLC)柱Kromasil RP-18，60mmx2mm，3.5μm；洗脫劑A5ml的HClO4/l水，洗脫劑B乙腈；梯度0min 2％B，0.5min 2％B，4.5min 90％B，9min 90％B；流速0.75ml/min；爐30℃；UV檢測210nm. 方法19(分析HPLC)柱Kromasil RP-18，250mmx4mm，5μm；洗脫劑A5ml的HClO4/l水，洗脫劑B乙腈；梯度0min 5％B，10min 95％B；流速1ml/min；爐40℃；UV檢測210nm. 方法20(分析HPLC)柱Kromasil RP-18，250mmx4mm，5μm；洗脫劑A2ml的HClO4/l水，洗脫劑B乙腈；恒溶劑45％B，55％A；流速1ml/min；爐40℃；UV檢測210nm. 方法21(制備HPLC；Nucleodur，0.05-0.1％TFA)儀器Gilson AbimedHPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Nucleodur C18 Gravity，Macherey-Nagel，5μm，250x21mm；洗脫劑A水/0.05-0.1％TFA，洗脫劑B乙腈；梯度0-8min 5％B，8-40min 5-60％B，40-60min 60％B，60-75min 60-100％B，75-80min 100％B，然后將色譜柱再生；流速7-15ml/min；UV檢測210nm. 方法22(分析HPLC)儀器類型HPLCHP 1050系列；UV DAD 1100系列；柱Kromasil C18，60mmx2mm，3.5μm；洗脫劑A水/0.5％高氯酸，洗脫劑B乙腈；梯度0-0.5min 2％B，0.5-4.5min 2-90％B，4.5-9.0min 90％B，9.0-9.2min 90-2％B，9.2-10.0min 2％B；流速0.75ml/min，爐30℃，UV檢測210nm. 方法23(分析HPLC)Agilent 1100，具有DAD(G1315B)，雙泵(G1312A)，自動進樣器(G1313A)，脫氣器(G1379A)和柱恒溫器(G1316A)；柱Synergi 4μHydro-RP 80A，4.6x150x5mm；洗脫劑A水+0.05％70％高氯酸；洗脫劑B乙腈；梯度0-1min 10％B，坡度，4-5min 90％B，坡度，5.5min 10％B；流速2.00ml/min；爐溫30℃. 方法24(分析HPLC)儀器Agilent 1100，具有DAD(G1315B)，雙泵(G1312A)，自動進樣器(G1313A)，溶劑脫氣器(G1379A)和柱恒溫器(G1316A)；柱Agilent Eclipse XDB-C8 4.6x150x5mm；洗脫劑A0.05％水中的70％高氯酸；洗脫劑B甲醇；恒溶劑0-7min 55％B；流速2.00ml/min；柱溫度40℃. 方法25(分析HPLC)儀器類型HPLCHP 1050系列；UV DAD；柱Zorbax 300 mSB-C18 3.5μ，4.6mm×150mm；洗脫劑A11水+0.1％三氟乙酸，洗脫劑B400ml的乙腈/600ml水+0.1％三氟乙酸；梯度0.0min 100％A，1.3min 10％B，18.0min 80％B，20.0min 80％B，21.0min100％B，25.0min 100％B，26.0min 0％B，30.0min 0％B.流速1ml/min；爐40℃；UV檢測210nm. 方法26(手性HPLC)Gilson Abimed HPLC；柱Daicel Chiralpak AD-H5μm；250mm×20mm；洗脫劑A異己烷，洗脫劑B0.2％乙酸/1％水/2-丙醇；恒溶劑；流速15ml/min；UV檢測器212nm. 方法27(對映體純度的測定)鋼柱尺寸250mm×4.6mm；固定相Daicel Chirapak AD-H，5μm；洗脫劑∶乙醇/水/乙酸1000∶10∶2，恒溶劑；流速0.7ml/min；溫度45℃；UV檢測215nm；樣品注射5μl. 方法28(對映體純度的測定)柱(鋼柱尺寸250mm×4.6mm)；固定相(Chirapak IA)；洗脫劑異己烷/異丙醇4∶1，恒溶劑；流速1ml/min；溫度25℃；UV檢測254nm；樣品注射10μl. 方法29(LC-MS)UV檢測210nm.儀器類型MSMicromass ZQ；儀器類型HPLCWaters Alliance 2795；柱Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RPMercury 20mmx4mm；洗脫劑A1l水+0.5ml的50％甲酸，洗脫劑B1l的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；爐50℃；UV檢測210nm. 方法30(LC-MS)儀器Micromass Platform LCZ，具有HPLC Agilent系列1100；柱Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20mmx4mm；洗脫劑A1l水+0.5ml的50％甲酸，洗脫劑B1l的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min5％A；流速0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；爐50℃；UV檢測210nm. 方法31(MALDI-MS)使用裝配了TOF/TOF離子光學(xué)系統(tǒng)和200HzNd:YAG激光器(355nm)的4700 Proteomics Analyzer(Applied Biosystems，F(xiàn)ramingham，MA，USA)上進行MALDI-MS/MS研究。準(zhǔn)分子離子在離子源中使用8kV加速，使用電子偏轉(zhuǎn)器(MS1)選擇，并在布置在MS1和MS2之間的沖擊室中與氬原子撞擊。獲得的碎片離子使用15kV再加速，并使用第二次飛行質(zhì)量分析儀(MS2)進行表征。
方法32(手性制備HPLC)鋼柱尺寸420mm×75mm；固定相硅膠相，具有選擇劑聚(N-異丁烯?；?L-亮氨酸-二環(huán)丙基甲基-酰胺)；洗脫劑A叔-丁基甲基醚，洗脫劑B甲醇；梯度0-22.17min 100％A，22.18-27.24min 100％B，27.25-40.30min 100％A；流速100ml/min；溫度24℃；UV檢測260nm；樣品重復(fù)注射50000μl. 方法33(制備HPLC，Nucleodur，0.05-0.1％TFA)儀器Gilson AbimedHPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Nucleodur C18 Gravity，Macherey-Nagel，5μm；250mm×40mm；洗脫劑A水/0.05-0.1％三氟乙酸，洗脫劑B乙腈；梯度0-10min 10％B，10-24min 10-30％B，24-28min 30-50％B，28-35min50％B，35-45min 50-60％B，45-53min 60-70％B，53-60min 60-90％B，60-70min 100％B，然后將色譜柱再生；流速15-45ml/min；UV檢測器210nm. 方法34(制備HPLC Kromasil 0.05％TFA)儀器Gilson Abimed HPLC；UV-檢測器210nm；雙泵系統(tǒng)；柱Kromasil C18，5μm，100，250mmx20mm；洗脫劑A在水中0.05％三氟乙酸，洗脫劑B在乙腈中0.05％三氟乙酸流速20ml/min；0-3min 10％B，坡度，30-38min 90％B，38-45min 10％B. 方法35(制備HPLC，Nucleodur C18 Gravity，0.05-0.1％TFA)儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Nucleodur C18 Gravity，5μm；250mmx40mm；洗脫劑A水/0.05-0.1％三氟乙酸，洗脫劑B乙腈；0-10min10％B，坡度，10.01-55min 100％B；流速10-60ml/min；UV檢測器210nm. 方法36(制備HPLC，Kromasil，0.05％TFA)儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Kromasil-100A C18，5μm；250mm×30mm；洗脫劑A水/0.05％三氟乙酸，洗脫劑B乙腈；0-10min 10％B，坡度，10.01-55min100％B；流速30ml/min；UV檢測器210nm. 方法37(制備HPLC，Kromasil，0.05％TFA)儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Kromasil-100A C18，5μm；250mmx21mm；洗脫劑A水/0.05％三氟乙酸，洗脫劑B乙腈；0-10min 10％B，坡度，10.01-55min100％B；流速20ml/min；UV檢測器210nm. 方法38(制備HPLC，Kromasil，0.05％TFA)儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Kromasil-100A C18，5μm；250mmx21mm；洗脫劑A水/0.05％三氟乙酸，洗脫劑B乙腈/水50/50；0-10min 10％B，坡度，10.01-55min 100％B；流速20ml/min；UV檢測器210nm. 方法39(制備HPLC，Kromasil，0.05％TFA)儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Kromasil-100A C18，5μm；250mmx30mm；洗脫劑A水/0.05％三氟乙酸，洗脫劑B乙腈；0-10min 10％B，坡度，10.01-55min100％B；流速10-60ml/min；UV檢測器210nm. 方法40(制備HPLC)儀器Gilson Abimed HPLC；UV-檢測器210nm；雙泵系統(tǒng)；柱Waters Symmetry-PrepTM C18，7μm，300mmx19mm；洗脫劑A在水中0.05％三氟乙酸，洗脫劑B在乙腈中0.05％三氟乙酸流速20ml/min；0-3min 10％B，坡度，30-38min 90％B，38-45min 10％B. 方法41(制備HPLC，Grom-Sil，0.1％TFA)儀器Gilson Abimed HPLC；UV-檢測器210nm；雙泵系統(tǒng)；柱Grom-Sil SNr.4051 120 ODS-4HE，10μm，250mmx40mm；洗脫劑A在水中0.1％三氟乙酸，洗脫劑B在乙腈中0.1％三氟乙酸；流速50ml/min；0-3min 10％B，3-27min梯度坡度，27-35min 95％B，35-40min 10％B. 方法42(手性制備HPLC)柱(鋼柱，尺寸500mm×50mm)；固定相(Chirapak AD，20μm)；洗脫劑A異己烷，洗脫劑B異丙醇；梯度0-11.74min 15％B，11.74-11.75min 100％B，15.74min 100％B，15.75min15％B，21.25min 15％B；樣品制備溶解于50ml異丙醇/200ml異己烷中；注射體積30ml，溫度24℃；UV檢測220nm. 方法43(制備HPLC)儀器Gilson Abimed HPLC；UV檢測器254nm；雙泵系統(tǒng)；柱Nucleosil RP-18，7μm；250x50mm；流速30ml/min；洗脫劑A水/0.1％三氟乙酸，洗脫劑B乙腈/0.1％三氟乙酸；梯度0-40min20-25％B，40-60min 25％B，60-110min 25-50％B，110-120min 50％B，120-130min 50-100％B，130-160min 100％B，然后將色譜柱再生。方法44(制備HPLC)儀器Gilson Abimed HPLC；UV檢測器254nm；雙泵系統(tǒng)；柱Nucleosil RP-18，7μm；250x50mm；流速40ml/min；洗脫劑A水/0.05％三氟乙酸，洗脫劑B乙腈/0.05％三氟乙酸；梯度0-105min 20-25％B，105-111min 25％B，111-131min 25-27％B，131-157min27-35％B，157-192min 35-40％B，192-207min 40-45％B，然后將色譜柱再生。
一般工作步驟 工作步驟1(用TFA去除Boc保護基) 將Boc-保護的化合物懸浮在二氯甲烷(1/5-l/10的反應(yīng)溶液)中，然后在氬氣保護氣氛下加入二氯甲烷中的三氟乙酸(30％；在100-1毫摩爾的級別上約1ml/10mg的原材料，在100-1微摩爾的基本上約1ml/1mg)，將混合物在室溫下攪拌直至HPLC色譜圖顯示完全轉(zhuǎn)化(方法2)。然后真空蒸餾掉溶劑，其中浴溫應(yīng)當(dāng)超過30℃。將粗產(chǎn)物懸浮在甲苯中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上再次濃縮并在高真空下干燥。用甲苯或用二氯甲烷重復(fù)該步驟數(shù)次(2-5次)。
工作步驟2(去除N-叔-丁氧羰基保護基，二噁烷，4N氯化氫) 在氬氣保護氣氛下將N-(叔-丁氧羰基)-保護的化合物(1mmol)提供到二噁烷(2-3ml)中。在RT和劇烈攪拌下，滴加二噁烷(30ml)中的4N鹽酸。攪拌混合物直至分析HPLC(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約2h)。將反應(yīng)混合物在RT下真空蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物置入少量二氯甲烷并再次在真空中去除溶劑。用甲苯(兩次)和用二氯甲烷(兩次)重復(fù)該操作數(shù)次。最后，將粗產(chǎn)物凍干或在高真空干燥后直接進一步反應(yīng)。
工作步驟3(氫解酯裂解，去除Cbz保護基) 將肽芐基酯或肽N-Cbz-保護的胺(1.2mmol)溶解在甲醇(60ml)中，在氬氣保護氣氛下加入10％披鈀碳(100mg)。將混合物在RT和大氣壓下氫化直至分析HPLC(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物過濾(例如通過硅藻土，Celite)，真空濃縮并在高真空下干燥。
工作步驟4(水解性酯裂解，水解) 在氬氣保護氣氛下將羧酸酯(3mmol)提供到THF/水/DMF 200/100/2.5(20ml)中。在嚴格溫度控制0℃下，將粉末氫氧化鋰(3.6mmol，1.2當(dāng)量)分份加入劇烈攪拌的溶液中。當(dāng)在2h后通過分析HPLC觀察到?jīng)]有完全轉(zhuǎn)化時，再次加入固體氫氧化鋰(3.3mmol，1.1當(dāng)量)。重復(fù)該操作直至完全轉(zhuǎn)化，于是將反應(yīng)混合物在0℃下用0.1N鹽酸調(diào)整到pH3-4，然后冷凍干燥。然后將粗產(chǎn)物凝膠-色譜分離(方法14)和/或通過制備HPLC(方法13)精純化。
工作步驟5(酰胺偶聯(lián)) 將HATU(1.5-1.8當(dāng)量)首先在-20℃下在氬氣保護氣氛下加入胺(aminic)環(huán)肽(1.0當(dāng)量)、二肽酸(1.5-1.8當(dāng)量)和NMM(1.0-2.0當(dāng)量)在無水DMF中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌(約15min)，再次加入NMM(2.5-3.0當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物緩慢從-10℃升溫至RT，將混合物在該溫度下進一步攪拌直至發(fā)現(xiàn)胺組分的完全轉(zhuǎn)化。加入固體磷酸二氫鉀(10當(dāng)量，500μmol)，然后在高真空下蒸發(fā)反應(yīng)混合物，通過色譜法純化。
備選地，在轉(zhuǎn)化完成后，可以將水和甲醇加入反應(yīng)，然后在經(jīng)由制備RP-HPLC或凝膠色譜法純化之后獲得產(chǎn)物。
起始化合物 實施例1A D-亮氨酰-Nl-{(3S，6S，12S，15S，18R，21S，24S，27S，28R)-6-[(1S)-2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基]-18-(3-{[氨基(亞氨基)甲基]氨基}丙基)-12-[(1S)-1-羥基乙基]-3-(羥基甲基)-24-[(1R)-1-羥基-2-甲基丙基]-21-異丁基-15-[(1S)-1-甲基-丙基]-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-28-苯基-1-氧雜-4，7，10，13，16，19，22，25-八氮雜環(huán)二十八碳烷-27-基}-L-亮氨酰胺雙三氟乙酸鹽(溶桿菌素)
發(fā)酵 培養(yǎng)基 YM酵母-麥芽瓊脂D-葡萄糖(4g/l)，酵母提取物(4g/l)，麥芽提取物(10g/l)，1升的離子交換樹脂水(Lewatit water)。在滅菌(121℃下20分鐘)之前將pH調(diào)節(jié)至7.2。
HPM甘露糖醇(5.4g/l)，酵母提取物(5g/l)，肉蛋白胨(3g/l)。工作保藏將凍干的菌株(ATCC 53042)在50ml的YM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。燒瓶發(fā)酵用2ml所述工作保藏接種物1升錐形瓶中的150ml的YM培養(yǎng)基或100ml的HPM培養(yǎng)基并且使其在28℃在240rpm的振蕩器上培養(yǎng)30-48小時。
30l的發(fā)酵將300ml的燒瓶發(fā)酵(HPM培養(yǎng)基)用于接種無菌的30l營養(yǎng)培養(yǎng)基溶液(每升1ml消泡劑SAG 5693)。將該培養(yǎng)物在28℃，300rpm并用0.3vvm的無菌空氣通氣下生長21小時。用1M鹽酸將pH在pH＝7.2保持恒定?？傆?，在培養(yǎng)周期期間加入880ml的1M鹽酸。
主要培養(yǎng)(200l)將1l錐形瓶中的15×150ml的YM培養(yǎng)基用2ml的工作保藏接種并使其在振蕩器上在28℃和240rpm下生長48小時。將2250ml的該培養(yǎng)物用于接種無菌的200l營養(yǎng)培養(yǎng)基溶液(YM)(每升1ml消泡劑SAG 5693)并使其在28℃，150rpm和用0.3vvm無菌空氣通氣下生長18.5小時。
每小時取樣(50ml)以檢驗所述發(fā)酵過程。將1ml的甲醇(0.5％三氟乙酸)加入到2ml的該培養(yǎng)液并且將所述混合物通過0.45μm過濾器過濾。將30μl的該懸浮液通過HPLC(方法17和方法18)分析。
在18.5小時后，將主要培養(yǎng)物的培養(yǎng)液在17000rpm下分成上清液和沉淀物。
離析 利用濃縮的三氟乙酸或氫氧化鈉溶液將所述上清液(183l)調(diào)節(jié)到pH6.5-7并且裝載到Lewapol柱(OC 1064，60l容量)上。隨后用純水、水/甲醇1∶1并隨后用純甲醇(含有0.1％三氟乙酸)進行洗脫。將該有機相真空濃縮成11.5l的殘留水殘液。
將殘留的水相結(jié)合到硅膠C18并分離(MPLC，Biotage Flash 75，75×30cm，KP-C18-WP，15-20μm，流速30ml；洗脫劑含有0.1％三氟乙酸的乙腈/水；梯度10％，15％和40％乙腈)。將含有實施例1A主要量的40％乙腈相真空濃縮并隨后冷凍干燥(約13g)。將該固體混合物首先在制備HPLC(方法43)上，隨后通過Sephadex LH-20(5×70cm，乙腈/水1∶1，在每個情況下含有0.05％三氟乙酸)上的凝膠過濾和進一步的制備HPLC(方法44)分離成1.2g的部分。
該過程提供2250mg的實施例1A。
將所述沉淀物置入4l的丙酮/水4∶1中，加入2kg的C鹽，將所述混合物利用三氟乙酸調(diào)節(jié)到pH＝6，攪拌并離心。將所述溶劑真空濃縮，并且將殘余物冷凍干燥。將獲得的凍干物(89.9g)置入甲醇中，過濾，濃縮并在硅膠(方法20)上分離。然后將實施例1A通過凝膠過濾(Sephadex LH-20，5×68cm，水/乙腈9∶1(含有0.05％三氟乙酸)，流速2.7ml/min，級分大小13.5ml)純化而得到純物質(zhì)。
該過程得到447mg的實施例1A。
HPLC(方法17)Rt＝6.19min MS(ESIpos)m/z＝1277(M+H)+ 1H NMR(500.13MHz，d6-DMSO)δ＝0.75(d，3H)，0.78(d，6H)，0.80(t，3H)，0.82(d，3H)，0.90(d，3H)，0.91(d，3H)，0.92(d，3H)，0.95(d，3H)，0.96(d，3H)，1.05(m，1H)，1.19(d，3H)，1.25(m，2H)，1.50(m，4H)，1.51(m，2H)，1.55(m，1H)，1.61(m，1H)，1.65(m，1H)，1.84(m，1H)，1.85(m，1H)，1.86(m，1H)，1.89(m，1H)，1.95(m，1H)，2.75(m，2H)，3.40(m，1H)，3.52(m，2H)，3.53(dd，1H)，3.64(m，2H)，3.66(m，1H)，3.68(dd，1H)，3.73(m，2H)，4.00(dd，1H)，4.02(br.，1H)，4.13(br.，1H)，4.32(dd，1H)，4.39(t，1H)，4.55(m，1H)，4.75(dd，1H)，5.19(t，1H)，5.29(d，1H)，5.30(br.，1H)，5.58(m，2H)，6.68(m，3H)，6.89(d，1H)，6.93(m，3H)，6.94(br.，1H)，6.98(d，1H)，7.12(br.，1H)，7.20(br.，2H)，7.23(m，2H)，7.42(m，2H)，7.54(d，1H)，7.58(d，1H)，8.32(br.，1H)，9.18(br.，1H)，9.20(m，2H)，9.50(br.，1H)。
13C NMR(125.77MHz，d6-DMSO)δ＝10.3，15.3，19.0，19.2，19.6，20.0，20.9，22.0，22.4，23.0，23.2，24.3，24.4，25.0，25.4，26.0，27.8，30.9，35.4，39.5，40.8，40.9，41.6，44.1，51.5，52.7，55.9，56.2，56.4，57.9，58.8，60.2，61.1，62.6，70.1，71.6，71.7，75.5，128.1，128.6，136.7，156.8，168.2，170.1，170.4，171.2，171.5，171.9，172.2，172.4，173.7. 根據(jù)文獻(T.Kato，H.Hinoo，Y.Terui，J.Antibiot.，1988，61，719-725)中描述的指定進行所述信號的指定(assignment)。
實施例2A 二氫溶桿菌素三氟乙酸鹽{D-Leu-Leu-Phe-[(3R)-Leu(3-OH)]-Leu-D-Arg-Ile-aThr-Gly-[(3S)-3-Asn(3-OH)]-Ser三氟乙酸鹽}和八氫溶桿菌素三氟乙酸鹽{D-Leu-Leu-Ala(3-環(huán)己基)-[(3R)-Leu(3-OH)]-Leu-D-Arg-Ile-aThr-Gly-[(3S)-3-Asn(3-OH)]-Ser三氟乙酸鹽}的混合物

將溶桿菌素雙三氟乙酸鹽(實施例1A，500mg，0.33mmol)溶解在異丙醇/水2∶1(30ml)中。在氬氣保護氣氛下，加入披鈀碳(10％；100mg)。將反應(yīng)混合物(在脫氣后)在壓力高壓滅菌器中在80-70巴氫氣壓力下和在RT下攪拌48小時。對于該反應(yīng)，再次加入披鈀碳(10％；100mg)。將反應(yīng)混合物(在脫氣后)再次在壓力高壓滅菌器中在80-70巴氫氣壓力下和在RT下攪拌48小時?，F(xiàn)在，通過HPLC(方法2)不能再檢測到溶桿菌素。將反應(yīng)混合物過濾通過玻璃粉(glass frit)(孔徑4)或通過硅藻土，真空濃縮，再次置入甲醇/0.2％乙酸中，過濾通過注射器濾器(來自Biotage，PTFE)，真空濃縮并在高真空下干燥。獲得496mg(quant.)的產(chǎn)物(80％二氫溶桿菌素，20％八氫溶桿菌素)。
實施例3A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸三氟乙酸鹽{Edman3.0降解產(chǎn)物三氟乙酸鹽}
將775mg的二氫溶桿菌素和八氫溶桿菌素溶解在77.5ml的甲醇中，然后加入667ml的裂解緩沖液(0.1M碳酸氫銨溶液/0.5M脲，pH8)。在加入酶之前，將溶液在干燥箱中加熱至37℃。加入31mg的糜蛋白酶(在1∶1水/乙二醇中31ml的糜蛋白酶溶液，1mg/ml；1∶25；預(yù)熱至37℃)，在37℃下進行反應(yīng)。在60min后，用30ml的乙腈和約6ml的TFA終止酶反應(yīng)。溶液的pH為1-2。溶液可以貯存在-20℃直至制備分離。
片段1-3和4-11的制備分離 將約800ml的裂解溶液過濾通過濾器(0.2μm)和以兩份每份約400ml在Source 15RPC柱(40ml)上利用乙腈/TFA梯度色譜分離。條件洗脫劑A0.1％TFA，洗脫劑B0.1％TFA/乙腈；梯度在40min內(nèi)0％B至45％B；流速2ml/min；UV檢測210nm；級分大小1.5ml。
將片段4-11(Rt＝約15min)和1-3(LLF)(Rt＝約25min)和1-3(LLA(3-環(huán)己基))(Rt＝約30min)合并和凍干。這樣，獲得作為片段4-11的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝1.2min. LC-MS(方法7)Rt＝1.0min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝453.5(100)[M+2H]2+，906(10)[M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝904(100)[M-H]-. LC-MS(方法5)Rt＝3.6min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝453.5(100)[M+2H]2+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝904(100)[M-H]-. 實施例4A (Z)-2-[(叔-丁氧羰基)氨基]-4，4-二甲基戊-2-烯甲酯
將新戊醛(303.2g，3.41mol，10當(dāng)量)和{[叔-丁氧羰基]氨基}-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(101.5g，0.341mol，1.0當(dāng)量)溶解在四氫呋喃(800ml)中并冷卻至-70℃。在-70℃下，緩慢滴加N，N，N，N-四甲基胍(78.7g，0.683mmol，6.95ml，2.0當(dāng)量)，然后將混合物在-70℃下攪拌4小時，隨后，將混合物在RT下攪拌4天。濃縮反應(yīng)混合物，然后用乙酸乙酯(2×500ml)對水萃取，將合并的有機相用飽和氯化鈉溶液(100ml)洗滌并通過硫酸鈉干燥。在濃縮后，將粗產(chǎn)物色譜分離(1.5kg的硅膠，洗脫劑環(huán)己烷/乙酸乙酯5∶1)。獲得67g(76％理論值)的標(biāo)題化合物。
備選地，在水性后加工后，促產(chǎn)物可以通過從環(huán)己烷/乙酸乙酯結(jié)晶來純化。
Rf(硅膠，4∶1環(huán)己烷/乙酸乙酯)＝0.5 LC-MS(方法7)Rt＝2.5min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝158(100)[M-Boc+H]+，280(5)[M+Na]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.08(s，9H，C(CH3)3)，1.38(s，9H，OC(CH3)3)，3.61(s，3H，CO2CH3)，6.40(s，1H，CβH)，8.14(s，1H，NH)。HR-TOF-MS(方法1)C13H23NO4[M+H]+實驗值258.1696，計算值258.1700. 實施例5A N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酸甲酯
將(2Z)-2-[(叔-丁氧羰基)氨基]-4，4-二甲基戊-2-烯甲酯(實施例4A，60g，233.2mmol)溶解在乙醇p.a./二噁烷3∶1(1000ml)中。使用套管將氬氣通過約10min。將溶液置入超聲波槽(約5min)，加入(+)-1，2-雙[(2R，5R)二乙基phospholano]苯(環(huán)辛二烯)銠(I)三氟甲磺酸鹽(600mg，1重量％)。將混合物在3.5巴氫壓力下和RT下氫化3天。將反應(yīng)混合物過濾通過硅藻土并濃縮洗脫液。將粗產(chǎn)物色譜分離(硅膠，洗脫劑環(huán)己烷/乙酸乙酯4∶1)。獲得60g(99％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝+5°(c＝0.33在CHCl3)。
DCI-MS(NH3)m/z(％)＝221(100)，260(40)[M+H]+，277(100) [M+NH4]+. 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.93(s，9H)，1.40(m，10H)，1.68(dd，J＝3.7，14.5Hz，1H)，3.68(s，3H)，4.30(t，J＝7.9Hz，1H)，4.81(d，br，J＝7.7Hz，1H)。
13C NMR(126MHz，CDCl3)δ＝28.30(3C)，29.52(3C)，30.61，46.27，51.19，52.17，79.79，155.11，174.39. HR-TOF-MS(方法1)C26H51N2O8計算值519.3640，實驗值519.3634[M+H]+. 實施例6A N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酸
將N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酸甲酯(實施例5A，60g，231mmol)溶解在四氫呋喃p.a.(463ml)中。在RT下，緩慢滴加氫氧化鋰一水合物(19.4g，462.7mmol)在水(463ml)中的溶液。當(dāng)HPLC色譜圖(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約20h)時，用1N鹽酸水溶液在冰冷卻下將反應(yīng)混合物緩慢調(diào)節(jié)至pH 3-4。將氯化鈉(150g)加入反應(yīng)混合物以便隨后用乙酸乙酯(2×500ml)萃取它。將合并的有機相用飽和氯化鈉溶液干燥，然后用硫酸鈉干燥并過濾。將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮并在高真空下干燥。獲得55.4g(98％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.2min. DCI-MS(NH3)m/z(％)＝263(100)[M+NH4]+，280(5)[M+N2H7]+. 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.96(s，9H，C(CH3)3)，1.42(m，10H，OC(CH3)3，Hβ)，1.79(“d”，J＝14.4Hz，1H，Hβ)，4.31(t，J＝8.0Hz，1H，Hα)，4.82(d，J＝8.4Hz，1H，NH)。
13C NMR(126MHz，CDCl3)δ＝28.32(3C)，29.54(3C)，30.74，45.92，51.24，80.19，155.41，178.93. HR-TOF-MS(方法1)C24H47N2O8計算值491.3327，實驗值491.3328[2M+H]+. 實施例7A 3-叔-丁基-L-丙氨酸甲酯鹽酸鹽
為了制備標(biāo)題化合物，參見S.D.Bull，S.G.Davies，A.C.Garner，M.D.O′Shea，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2001，3281-3287。按照工作步驟2，由N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-L-丙氨酸甲酯(28.0g，108mmol)和在二噁烷(280ml)中的4N鹽酸獲得標(biāo)題化合物。產(chǎn)率22g(定量)。在不純化下使產(chǎn)物進一步反應(yīng)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝0.95(s，br，9H，tBu)，1.65(dd，1H)，1.80(dd，1H)，3.75(s，3H，OCH3)，3.90(dd，1H)，8.60(s，br，3H)。
實施例8A N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸甲酯
在-20℃下將HOBt(3當(dāng)量，39.4g，292mmol)，N-甲基嗎啉(3當(dāng)量，32.1ml，291.8mmol)，N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酸(實施例6A，1.0當(dāng)量，97.3mmol)，EDC(2當(dāng)量，37.3g，194.6mmol)和再次N-甲基嗎啉(2當(dāng)量，21.4ml，194.5mmol)連續(xù)加入3-叔-丁基-L-丙氨酸甲酯鹽酸鹽(1.1當(dāng)量，21g，107mmol)在二氯甲烷p.a.(1.41)中的溶液。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(約12h)至RT，其中通過HPLC觀察到胺組分的完全轉(zhuǎn)化。然后將反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(300ml)，5％檸檬酸水溶液(2×500ml)，飽和碳酸氫鈉水溶液(500ml)和飽和氯化鈉溶液洗滌。將反應(yīng)混合物通過硫酸鈉干燥并過濾。將混合物真空濃縮至干燥，然后在高真空下進一步干燥。獲得36g(96％理論值)的標(biāo)題化合物，其在不進一步純化下反應(yīng)。
DCI-MS(NH3)m/z(％)＝387(40)[M+H]+，404(100)[M+NH4]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝0.95(s，br，18H，tBu)，1.35(dd，1H)，1.45(s，9H，OtBu)，1.50(dd，1H)，1.65(dd，1H)，1.95(dd，br，1H)，3.70(s，3H，OCH3)，4.15(“t”，br，1H)，4.55(“t”，br，1H)，4.80(d，1H)，6.65(d，br，1H)。
實施例9A N-(叔-丁氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸芐酯
在-10℃下將HOBt(4當(dāng)量，540mg，4mmol)，N-甲基嗎啉(3當(dāng)量，3mmol)，N-叔-丁氧羰基-D-亮氨酸(1.0當(dāng)量，230mg，1mmol；Bachem)，EDC(2當(dāng)量，380mg，2mmol)和再次N-甲基嗎啉(2當(dāng)量，2mmol)連續(xù)加入L-亮氨酸芐酯鹽酸鹽(1.1當(dāng)量，300mg，1.1mmol；cf.T.Wakamiya，M.Kamata，S.Kusumoto，H.Kobayashi，Y.Sai，et al.，Bull.Chem.Soc.Jpn.，1998，71，699-710)在二氯甲烷p.a.(30ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(約12h)至RT，將反應(yīng)混合物緩慢升溫(約12h)至RT，其中通過HPLC觀察到胺組分的完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物真空濃縮，置入乙腈中并通過制備HPLC(方法13)純化。獲得362mg(80％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝5.3min. [α]20Na＝+19°(c＝0.10，在二氯甲烷中)。
實施例10A N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸
將N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸甲酯(實施例8A，36g，93.1mmol)溶解在四氫呋喃p.a.(279ml)中。在約10℃，緩慢滴加氫氧化鋰一水合物(7.82g，186.3mmol，2當(dāng)量)在水(187ml)中的溶液。當(dāng)HPLC色譜圖(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化時(約20h)，在200毫巴下從反應(yīng)混合物去除THF，然后用甲基叔-丁基醚(200ml)萃取。將有機相用乙酸乙酯(500ml)稀釋有機相，然后加入水，隨后用1N鹽酸水溶液將混合物小心調(diào)節(jié)至pH3-4。用飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機相，通過硫酸鈉干燥，過濾，真空蒸發(fā)并在高真空下干燥。加入97.4g(97％理論值)的標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法7)Rt＝2.26min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝373(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法1)C19H37N2O5計算值373.2702，實驗值373.2717[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝0.83(s，br，18H，tBu)，1.31(s，9H，OtBu)，1.40(d，J＝6.1Hz，2H，ββ-CH2)，1.48(dd，J＝14.1，9.4Hz，1H，ββ-CH)，1.59(dd，J＝14.1，2.7Hz，1H，β-CH′)，3.98(m，1H，α-CH)，4.12(m，1H，α-CH)，6.73(d，J＝9.1Hz，1H，NH)，7.72(d，J＝7.9Hz，1H，NH)，12.42(s，br，1H，CO2H)。
13C NMR(125MHz，d6-DMSO)δ＝28.49(3C)，29.66(3C)，29.78(3C)，30.52，30.58，44.63(β-CH2)，45.24(β-CH2)，49.67(α-CH)，52.40(α-CH)，78.29，155.05，172.97，174.61. 實施例11A N-(叔-丁氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸
根據(jù)工作步驟3將N-(丁氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸芐酯(實施例9A，308mg，0.69mmol)反應(yīng)。獲得244.6mg(99％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.5min. HR-TOF-MS(方法1)C18H35N2O5[M+H]+實驗值359.2535，計算值359.2546. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝0.85(m，14H，4×CH3，2×γ-CH)，1.35(m，10H，OtBu，β-CH)，1.50-1.65(m，3×β-CH)，4.00(dd，1H，α-CH)，4.20(“t”，1H，α-CH)，6.70(d，1H，NH)，7.90(d，1H，NH)，12.50(s，br，1H，CO2H)。
實施例12A (2R*，3R*)-N2-[(芐氧基)羰基]-N2-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氬氣保護氣氛下，將THF中的1N六甲基二硅疊氮化鋰溶液(157.5mmol，157.5ml，2.2當(dāng)量)提供在反應(yīng)溶劑THF(300ml)中。在-78℃下，緩慢滴加(rac)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-3-苯基丙酸甲酯(A.V.Rao Rama，A.K.Singh，Ch.V.N.S.Varaprasad，Tetrahedron Lett.，32，1991，4393-4396)(20g，71.2mmol)的溶液。將混合物在-25℃下攪拌10分鐘，然后再次冷卻至-78℃。將氮雜二羧酸二芐酯(34.2g，114.6mmol，1.6當(dāng)量)一次性加入反應(yīng)混合物。將混合物在-60至-45℃下攪拌3小時。為了終止反應(yīng)，將混合物再次冷卻至-78℃，加入乙酸(20.5ml，358mmol，5當(dāng)量)，然后升溫至0℃和最終RT。將反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)和置入乙酸乙酯(1000ml)。將懸浮液用飽和碳酸氫鈉水溶液(兩次)，水(一次)，5％檸檬酸水溶液(兩次)和飽和氯化鈉水溶液(一次)洗滌。所有水相單獨地用乙酸乙酯反萃取。將所有的有機相真空蒸發(fā)并再次置入二氯甲烷(2000ml)中，過濾，通過硫酸鈉干燥，再次過濾，真空蒸發(fā)并在高真空下干燥。獲得作為固體的7.2g(18％理論值)的標(biāo)題化合物。將二氯甲烷相的濾液(見上)濃縮并然后從甲醇中再次再結(jié)晶，獲得13.2g(26％理論值)的標(biāo)題化合物。
備選合成方法在氬氣保護氣氛下，將在THF中的1N六甲基二硅疊氮化鋰溶液(590.7mmol，590.7ml，2.2當(dāng)量)提供給反應(yīng)溶劑THF(2500ml)中。在-78℃下，緩慢滴加(rac)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-3-苯基丙酸甲酯(75g，268.5mmol)的溶液(內(nèi)部溫度約-70℃)。將混合物在-25℃下攪拌10分鐘，然后再次冷卻至-70℃。將無水氮雜二羧酸二芐酯(128.2g，429.6mmol，1.6當(dāng)量)作為固體以四份加入反應(yīng)混合物。將混合物在-60至-50℃下攪拌2小時。為了終止反應(yīng)，將混合物再次冷卻至-78℃，加入乙酸(76.9ml，1342mmol，5當(dāng)量)，將混合物然后升溫至0℃和最終RT。由此，標(biāo)題化合物作為固體沉淀，其在真空干燥箱中干燥(4.1g，2.2％理論值，晶體1)。將反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，將殘余物在乙酸乙酯中再結(jié)晶，由此獲得作為固體的標(biāo)題化合物(38.8g，24.3％理論值，晶體2)。將母液用乙酸乙酯稀釋，然后用水(兩次)和飽和氯化鈉水溶液(兩次)洗滌。將有機相通過硫酸鈉干燥，過濾，真空蒸發(fā)并在高真空下干燥。從乙酸乙酯-二乙基醚中再結(jié)晶粗產(chǎn)物。獲得作為固體的標(biāo)題化合物(50.4g，28％理論值，晶體3)。蒸發(fā)母液和通過快速色譜法純化(1.5kg的硅膠，甲苯/乙酸乙酯4∶1)。獲得4.7g(1.7％理論值)的標(biāo)題化合物。總產(chǎn)率98.0g的標(biāo)題化合物(56.2％理論值)。LC-MS(方法5)Rt＝6.8min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝578(40)[M+H]+，1156(100)[2M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝576(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C31H36N3O8[M+H]+實驗值578.2490，計算值578.2497. 通過X-射線結(jié)構(gòu)(圖1)證實標(biāo)題化合物的相對立體化學(xué)。
實施例13A (2S*，3R*)-N-[(芐氧基)羰基]-N-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氬氣保護氣氛下，在0℃下將N，N，N，N-四甲基胍(50ml，399mmol)加入(2R*，3R*)-N2-[(芐氧基)羰基]-N2-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(實施例12A，20.5g，35.5mmol)在無水DMF p.a.(750ml)中的溶液。使得反應(yīng)混合物解凍，并攪拌直至HPLC色譜圖(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約60％產(chǎn)品)(約12h)，為了終止反應(yīng)加入乙酸(pH4-6)。將反應(yīng)混合物在RT下真空蒸發(fā)并置入乙酸乙酯。將有機相用水(兩次)，5％檸檬酸(兩次)，水(一次)，飽和碳酸氫鈉水溶液(兩次)，飽和氯化鈉水溶液(一次)洗滌，通過硫酸鈉干燥，過濾，蒸發(fā)并在高真空下干燥。將粗產(chǎn)物通過制備HPLC(方法11)或快速色譜法(硅膠，環(huán)己烷/乙酸乙酯3∶1)純化。獲得7.7g(37％理論值)的標(biāo)題化合物和5g的起始化合物(25％理論值)。
備選的合成方法在氬氣保護氣氛下，在0℃下將N，N，N，N-四甲基胍(50ml，399mmol)加入(2R*，3R*)-N2-[(芐氧基)羰基]-N2-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(實施例13A，22.0g，38.1mmol)在無水二氯甲烷p.a.(540ml)中的溶液。使得反應(yīng)混合物解凍并攪拌直至HPLC色譜圖顯示完全轉(zhuǎn)化(約65％產(chǎn)品)(約12h)，通過加入乙酸(23ml，pH4-6)以便終止反應(yīng)。將有機相用水(兩次)，飽和碳酸氫鈉水溶液(兩次)和飽和氯化鈉水溶液(一次)洗滌。將水相用二氯甲烷反萃取。合并的有機相通過硫酸鈉干燥，過濾，真空蒸發(fā)并在高真空下干燥。將粗產(chǎn)物通過快速色譜法純化(6l的硅膠，環(huán)己烷/乙酸乙酯3∶1)。獲得13.7g(62％理論值，基于回收的原材料69％)的標(biāo)題化合物和3.1g的起始化合物(10％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝3.0min. LC-MS(方法8)Rt＝3.0min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝478(100)[M-Boc+H]+，578(30)[M+H]+. LC-MS(方法5)Rt＝7.0min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝578(40)[M+H]+，1156(100)[2M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝576(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C31H36N3O8[M+H]+實驗值578.2483，計算值578.2497. 實施例14A (2S*，3R*)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氬氣保護氣氛下，將阮內(nèi)鎳(61mg，約10mol％)加入(2S*，3R*)-N-[(芐氧基)羰基]-N-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(實施例13A，705mg，1.22mmol)在甲醇/二氯甲烷1∶1(42ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物在壓力高壓滅菌器中在80巴氫壓力下和RT下氫化(40h)。HPLC色譜圖顯示完全轉(zhuǎn)化。在氬氣保護氣氛下將反應(yīng)混合物過濾通過玻璃粉；將玻璃粉用甲醇/水/0.2％乙酸洗滌數(shù)次。將濾液真空蒸發(fā)并在高真空下干燥。獲得固體(約3g)，其然后在超聲槽中懸浮在乙酸乙酯中。將EDTA(400mg)在7％碳酸氫鈉水溶液(400ml)中的溶液加入懸浮液。用乙酸乙酯(100ml，三次)萃取水相。合并的有機相然后用飽和碳酸氫鈉溶液(一次)和飽和氯化鈉水溶液(兩次)洗滌。所有水相單獨地用乙酸乙酯反萃取。合并的有機相然后通過硫酸鈉干燥，過濾并在高真空下干燥。獲得的產(chǎn)品為固體(1.26g，quant.)，其在不精-純化下進一步反應(yīng)。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝1.7min. LC-MS(方法5)Rt＝4.1min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝239(100)，295(80)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.36(s，9H)，3.34(s，3H)，3.60(d，J＝5.3Hz，1H)，4.89(dd，J＝9.6，4.9Hz，1H)，7.20-7.34(m，5H)，7.41(d，J＝9.4Hz，1H)。
13C NMR(125MHz，d6-DMSO)δ＝28.24(3C)，52.84，54.91，56.86，79.23，127.14(2C)，128.44，128.88(2C)，137.28，154.86，168.16. HR-TOF-MS(方法1)C15H22N2O4[M+H]+實驗值295.1658，計算值295.1653. 實施例15A (2S*，3R*)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氬氣保護氣氛下，在0℃下將N-甲基嗎啉(260mg，2.6mmol，2.1當(dāng)量)加入(2S*，3R*)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(實施例14A，360mg，1.2mmol)和N-芐氧羰基氧基琥珀酰亞胺酯(610mg，2.44mmol，2當(dāng)量)在THF(25ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(12h)，由此通過HPLC(方法2)觀察到完全轉(zhuǎn)化。隨后，加入乙酸(0.7ml)，將混合物真空濃縮，通過制備HPLC(方法13)純化。獲得396mg(76％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝2.7min. LC-MS(方法5)Rt＝6.4min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝329(100)[M-Boc+H]+，429(80)[M+H]+，858(60)[2M+H]+. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝1.35(s，9H)，3.63(s，3H)，4.57(dd，J＝9.5，4.0Hz，1H)，4.93(m，2H)，5.27(dd，J＝10.1，4.1Hz，1H)，7.19-7.34(m，10H)，7.50(d，J＝10.2Hz，1H)，7.59(d，J＝10.2Hz，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝28.26(3C)，52.33，54.67，59.06，65.73，78.73，126.66(2C)，127.42，127.65(2C)，128.00，128.44(2C)，128.53(2C)，136.91，139.26，154.98，156.25，170.91. HR-TOF-MS(方法1)C23H28N2O6Na[M+Na]+實驗值451.1823，計算值451.1845. 實施例16A (2S*，3R*)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸
在氬氣保護氣氛下，將(2S*，3R*)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(實施例15A，755mg，1.76mmol)的溶液提供在THF/水2∶1(30ml)中。在0℃下在劇烈攪拌下，緩慢滴加脫氣的氫氧化鋰一水合物(86.5mg，3.6mmol，2當(dāng)量)的1％水溶液。將混合物在RT下攪拌直至HPLC色譜圖(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約1h)。隨后，將乙酸(0.5ml)加入反應(yīng)混合物，將反應(yīng)混合物真空濃縮和用乙酸乙酯(100ml)分層?，F(xiàn)在用5％檸檬酸(pH 2-3)將水相酸化，然后用乙酸乙酯(50ml，三次)萃取。用飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機相(20ml，兩次)，通過硫酸鈉干燥，過濾，真空濃縮并在高真空下干燥。獲得750mg(quant.)的粗產(chǎn)物標(biāo)題化合物，其通過制備HPLC(方法13)精純化。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.4min. LC-MS(方法5)Rt＝6.1min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝359(100)，415(60)[M+H]+，829(60)[2M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝413(100)[M-H]-. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝1.31(s，9H)，4.42(dd，J＝10.0，3.9Hz，1H)，4.87(s，2H)，5.22(dd，J＝10.0，3.7Hz，1H)，7.14-7.28(m，10H)，7.43-7.46(m，2H)，12.91(s，br，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝28.33(3C)，54.84(Cα)，58.94(Cβ)，65.54，78.56，126.52(2C)，127.22，127.53(2C)，127.92，128.37(2C)，128.49(2C)，137.03，140.14，155.08，156.29，171.60. HR-TOF-MS(方法1)C22H26N2O6[M+H]+實驗值415.1860，計算值415.1864. 實施例17A (3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸
通過制備HPLC(方法15)分離(2S*，3R*)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸(實施例16A，750mg，1.8mmol)的對映體混合物。獲得334mg(98％ee，45％理論值)的(2S，3R)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸(標(biāo)題化合物)和275mg(98％ee，37％理論值)的(2R，3S)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸(另一個對映體)。通過方法16測定對映體。
[α]20Na＝+22°(c＝0.50，在氯仿中)(標(biāo)題化合物)。
[α]20Na＝-20°(c＝0.49，在氯仿中)(另外的對映體)。
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝1.35(s，9H)，4.46(dd，J＝9.6，3.6Hz，1H)，4.91(s，2H)，5.26(dd，J＝9.9，3.6Hz，1H)，7.18-7.32(m，10H)，7.48-7.51(m，2H)，12.95(s，br，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝28.34(3C)，54.84，58.96，65.55，78.56，126.53(2C)，127.23，127.55(2C)，127.93，128.39(2C)，128.51(2C)，137.05，140.16，155.09，156.30，171.62. HR-TOF-MS(方法1)C22H26N2O6[M+H]+實驗值415.1864，計算值415.1864. 實施例18A (3R)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯
將(3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸(實施例17A，151mg，0.36mmol)，2-(三甲代甲硅烷基)乙醇(431mg，3.64mmol，10當(dāng)量)和4分子篩(約10mg)在無水二氯甲烷p.a.(2.7ml)中的混合物在氬氣保護氣氛下在RT下攪拌30min。隨后，在-30℃下加入DCC(150mg，0.73mmol，2當(dāng)量)和DMAP(44.5mg，0.36mmol，1當(dāng)量)。使得反應(yīng)混合物解凍(約12h)并在RT下攪拌直至HPLC色譜圖顯示完全轉(zhuǎn)化(12-72h)。將反應(yīng)混合物在RT下真空蒸發(fā)并通過制備HPLC(方法13)純化。獲得145mR(77％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝+7.8°(c＝0.45，在氯仿中) HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝3.3min. LC-MS(方法5)Rt＝7.3min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝515(100)[M+H]+，1030(60)[2M+H]+. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝-0.02(s，9H)，0.88(t，J＝8.6Hz，2H)，1.31(s，9H)，4.01-4.15(m，2H)，4.48(dd，J＝9.5，4.0Hz，1H)，4.86(d，J＝13.1Hz，1H)，4.90(d，J＝12.6Hz，1H)，5.25(dd，J＝10.0，4.0Hz，1H)，7.14-7.29(m，10H)，7.48(d，1H，J＝10.2Hz)，7.51(d，1H，J＝9.5Hz)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝-1.67(3C)，16.78，27.96(3C)，54.38，58.83，62.95，65.34，78.30，126.29(2C)，127.06，127.30(2C)，127.66，128.13(2C)，128.20(2C)，136.63，139.17，154.58，155.95，170.02. HR-TOF-MS(方法1)C27H38N2O6Si[M+H]+實驗值515.2564，計算值515.2572. 實施例19A (3R)-3-氨基-N2-[(芐氧基)羰基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯三氟乙酸鹽
根據(jù)工作步驟1將(3R)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯(實施例18A，550mg，1.7mmol)反應(yīng)(保留時間10min)。將粗產(chǎn)物通過制備HPLC(方法21)純化。獲得424mg(75％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝-11.2°(c＝0.47，在氯仿中) HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝1.9min. LC-MS(方法7)Rt＝2.0min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝387.2(60)，415(100)[M+H]+. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝-0.07(s，9H)，0.52(m，2H)，3.77(m，1H)，3.88(m，1H)，4.50(d，J＝9.0Hz，1H)，4.58(“t”，J＝約8.2Hz，1H)，5.08(s，2H)，7.34-7.43(m，10H)，8.12(d，1H，J＝8.5Hz，1H)，8.67(s，br，2H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝-1.46(3C)，16.51，55.14，57.92，63.36，66.28，128.02(2C)，128.18，128.22(2C)，128.56(2C)，128.95(2C)，129.54，134.00，136.70，156.14，169.06. HR-TOF-MS(方法1)C22H30N2O4Si[M+H]+實驗值415.2036，計算值415.2048. 實施例20A N2.1-叔-丁氧羰基[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
在氬氣保護氣氛下，將二碳酸二叔丁酯(369mg，1.69mmol，2.5當(dāng)量)和N-甲基嗎啉(68mg，680μmol，1當(dāng)量)加入Edman3.0前體(實施例3A，690mg，680μmol，1當(dāng)量)在水/二噁烷1∶2(30ml)中的溶液。攪拌反應(yīng)混合物直至HPLC色譜圖顯示完全轉(zhuǎn)化(約48h)。將磷酸二氫鉀(5當(dāng)量)加入反應(yīng)混合物，將混合物真空濃縮并通過制備HPLC(方法21或方法11接著隨后通過加入TFA(2000μmol，作為在乙腈-水1∶1中的0.05％溶液)將色譜產(chǎn)物進行鹽交換)純化。獲得531mg(70％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝1.7min. LC-MS(方法5)Rt＝4.6min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝453.5(60)[M-Boc+2H]2+，1006(100)[M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝1004(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C42H77N12O16[M+H]+實驗值1005.5560，計算值1005.5576. 實施例21A N2-(芐氧羰基)-N3-{N2.1-叔-丁氧羰基[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-1-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙基酯三氟乙酸鹽
在氬氣保護氣氛下，在0℃下首先將HATU(1.5當(dāng)量，38.2mg，100μmol)加入二氨基酸(實施例19A，1.2當(dāng)量，42.5mg，80μmol)，八肽酸(實施例20A，1.0當(dāng)量，75.0mg，70μmol)和N-甲基嗎啉(1.0當(dāng)量，70μmol)在無水二甲基甲酰胺(2ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌(約15min)和再次加入N-甲基嗎啉(2.5當(dāng)量，175μmol)。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(約12h)至室溫和然后顯示胺組分的完全轉(zhuǎn)化(HPLC監(jiān)視)。將固體磷酸二氫鉀(5當(dāng)量，350μmol)加入反應(yīng)混合物和在高真空下將混合物然后蒸發(fā)，并通過色譜法(方法21或方法13接著隨后通過加入TFA(200μmol，作為在乙腈-水1∶1中的0.05％溶液)將色譜產(chǎn)物進行鹽交換)純化。獲得73.5mg(72％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.3min. LC-MS(方法5)Rt＝5.5min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝637.6(60)，1402(100)[M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝1400(100)[M-H]-，1447(20)[M-HCO2H-H]-. 實施例22A N2-(芐氧羰基)-N3-{N2.1-叔-丁氧羰基[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸三氟乙酸鹽
在氬氣保護氣氛下將九肽三甲代甲硅烷基酯(實施例21A，70mg，46μmol)和4分子篩(約10mg)提供于無水THF(3ml)中。在RT下，在劇烈攪拌下滴加1N TBAF-THF溶液(320μl，7當(dāng)量)，將混合物攪拌直至HPLC色譜圖(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約1h)?，F(xiàn)在將反應(yīng)混合物用乙酸(50μl，約20當(dāng)量)中和。將反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，通過制備HPLC(方法21或方法13，接著隨后通過加入TFA(200μmol，作為在乙腈-水1∶1中的0.05％溶液)將色譜產(chǎn)品進行鹽交換。獲得50.2mg(77％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.1min. LC-MS(方法5)Rt＝5.2min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝601.6(60)[M-Boc+2H]2+，1302(100)[M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝1300(100)[M-H]-. 實施例23A N2-(芐氧羰基)-N3-{N2.1-叔-丁氧羰基[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸五氟苯基酯三氟乙酸鹽
在氬氣保護氣氛下將九肽酸(實施例22A，54.4mg，38μmol)提供在二氯甲烷(1ml)中。在-20℃下，連續(xù)加入五氟苯酚(71mg，380μmol，10當(dāng)量)，EDC(17mg，192μmol，2.3當(dāng)量)和DMAP(1mg，8μmol，0.2當(dāng)量)。使得混合物緩慢解凍(約3h)并在RT下攪拌(約12h)直至HPLC色譜圖顯示完全轉(zhuǎn)化(方法2)。將促產(chǎn)物在不純化下進一步反應(yīng)。
LC-MS(方法8)Rt＝2.3min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝685(100)[M-Boc+2H]2+，1468(10)[M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝1282(100)，1465(40)[M-H]-. 實施例24A N2-(芐氧羰基)-N3-{[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸五氟苯基酯二鹽酸鹽
根據(jù)工作步驟2，在氬氣保護氣氛下使得N-(叔-丁氧羰基)環(huán)肽(實施例23A，60mg，40μmol)反應(yīng)。在冰凍干燥后，獲得50mg(96％理論值)的產(chǎn)物，其在不進一步純化下直接反應(yīng)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝1.9min， λmax(定性)＝210nm(s)，255-270(w)。
LC-MS(方法5)Rt＝4.7min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝684.3(100)[M+2H]2+，1368(50)[M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝1366(100)[M-H]-. 實施例25A N2.1-(芐氧羰基)-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
將五氟苯酚酯(實施例24A，15.8mg，11μmol)在DMF(1ml)中的溶液用二噁烷(20ml)稀釋，然后在劇烈攪拌下在氬氣保護氣氛下滴加(作為懸浮液)到預(yù)熱至80℃的吡啶p.a.(80ml)中。在85℃下攪拌反應(yīng)混合物直至HPLC色譜圖(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約1h)。將混合物然后真空濃縮。將粗產(chǎn)物首先凝膠色譜分離(方法14)和然后通過制備HPLC(方法10)精純化。獲得4.3mg(33％理論值)的標(biāo)題化合物。
備選的合成方法(游離九肽氨基酸的直接環(huán)化) 在0℃下將HATU(245mg，0.65mmol，3當(dāng)量)加入游離的九肽(N2-(芐氧羰基)-N3-{[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸三氟乙酸鹽，280mg，0.22mmol)在DMF(70ml)和NMM(142μl，6當(dāng)量)中的溶液。攪拌反應(yīng)混合物直至完全轉(zhuǎn)化(1.5h，HPLC監(jiān)視)。隨后，反應(yīng)混合物用甲醇(10ml)猝滅，真空濃縮和直接通過制備HPLC(方法35)純化。獲得作為固體的產(chǎn)品(201.5mg，70％理論值)。
LC-MS(方法5)Rt＝4.8min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝592.6(20)[M+2H]2+，1184(100)[M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝1182(100)[M-H]-. LC-MS(方法7)Rt＝1.8min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝592.7(50)[M+2H]2+，1184(100)[M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝536.6(100)，1182(50)[M-H]-，1229[M-H+HCO2H]-. HR-TOF-MS(方法1)C54H83N14O16[M+H]+實驗值1183.6122，計算值1183.6106. 實施例26A [(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸-C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺二鹽酸鹽
將Cbz-保護的環(huán)肽(實施例25A，4.3mg，3.3μmol)溶解在甲醇(4ml)中并在氬氣保護氣氛下加入10％披鈀碳(100mg)和1N鹽酸水溶液(200μl)。將混合物在RT和大氣壓下氫化(約1h)直至分析HPLC(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物過濾(通過硅藻土，Celite或注射器濾器，Biotage，PTFE)，真空濃縮并在高真空下干燥。獲得4mg(quant.)的標(biāo)題化合物。
備選的制備方法(標(biāo)題化合物，為三氟乙酸鹽)將Cbz-保護的環(huán)肽(實施例25A，330mg，254μmol)溶解在甲醇(200ml)中，在氬氣保護氣氛下加入10％披鈀碳(127mg)和鹽酸(1526μl，6當(dāng)量)。將混合物氫化約1h，再次加入催化劑(100mg)和鹽酸(3當(dāng)量，760μl)。在RT下和大氣壓下繼續(xù)氫化，直至(約1h)分析HPLC(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物過濾(通過硅藻土，Celite)，真空濃縮并在高真空下干燥。將粗產(chǎn)物通過制備HPLC(方法33)純化。獲得作為三氟乙酸鹽的250mg(77％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝1.4min， λmax(定性)＝210nm(s)，255-270(w)。
LC-MS(方法7)Rt＝1.1min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝525.6(100)[M+2H]2+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝1048(100)[M-H]-，1095[M-H+HCO2H]-. HR-TOF-MS(方法1)C46H77N14O14[M+H]+實驗值1049.5728，計算值1049.5739. 實施例27A N2.1-(叔-丁氧羰基)-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-叔-丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
在氬氣保護氣氛下，在0℃下首先將HATU(4.1當(dāng)量，14.6mg，40μmol)加入環(huán)肽(實施例26A，1.0當(dāng)量，11.0mg，10μmol)，二肽酸N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸(4.0當(dāng)量，14.6mg，40μmol)和N-甲基嗎啉(2.0當(dāng)量，20μmol)在無水二甲基甲酰胺(270μl)中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌(約15min)并再次加入N-甲基嗎啉(5.0當(dāng)量，50μmol)。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(約12h)至室溫和然后顯示胺組分的完全轉(zhuǎn)化(HPLC監(jiān)視，方法3)。將固體磷酸二氫鉀(10當(dāng)量，500μmol)加入反應(yīng)混合物和然后將混合物在高真空下蒸發(fā)并通過色譜法純化(方法21或方法13，接著通過加入TFA(100μmol，作為在乙腈-水1∶1中的0.05％溶液)隨后將色譜產(chǎn)品進行鹽交換)。獲得10.5mg(70％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝2.5min， λmax(定性)＝210nm(s)，255-270(w)。
LC-MS(方法5)Rt＝5.5min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝702.6(30)[M+2H]2+，1404(20)[M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝700.7(50)[M-2H]2-，1402(10)[M-H]-，1448[M-H+HCO2H]-. LC-MS(方法7)Rt＝2.3min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝653(100)[M-Boc+2H]2+，1404(50)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法1)C65H111N16O18[M+H]+實驗值1403.8232，計算值1403.8257. 實施例28A N2.1-(芐氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酰-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-n3.3-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
類似于實施例27A，由來自實施例26A的化合物(900μg，0.8μmol)和N-(芐氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸(實施例30A，1200μg，3.2μmol，4當(dāng)量)制備。將粗產(chǎn)物通過凝膠色譜法純化(方法14)，由此在冷凍干燥后獲得作為固體的500μg(41％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝2.3min， LC-MS(方法5)Rt＝5.2min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝706.2(100)[M+2H]2+，1410(20)[M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝1408(100)[M-H]-. 實施例29A N-(芐氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯
在-10℃下將HOBt(4當(dāng)量，2038mg，15.08mmol)，N-甲基嗎啉(3當(dāng)量，11.3mmol)，N-芐氧羰基-D-亮氨酸(1.0當(dāng)量，1000mg，3.8mmol)，EDC(2當(dāng)量，1441mg，7.5mmol)和再次N-甲基嗎啉(2當(dāng)量，7.5mmol)連續(xù)加入L-亮氨酸甲酯鹽酸鹽(1.1當(dāng)量，753.2mg，4.15mmol)在二氯甲烷p.a.(20ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(約12h)至RT，由此通過HPLC觀察到胺組分的完全轉(zhuǎn)化。濃縮反應(yīng)混合物，置入乙酸乙酯(約200ml)和然后用飽和碳酸氫鈉水溶液(一次)，5％檸檬酸水溶液(兩次)，飽和碳酸氫鈉水溶液(一次)和飽和氯化鈉溶液洗滌。將混合物通過硫酸鈉干燥和過濾。將混合物真空蒸發(fā)至干燥和然后進一步在高真空下干燥。獲得1483mg(93％理論值)的標(biāo)題化合物，使其在不進一步純化下反應(yīng)。
LC-MS(方法7)Rt＝2.59min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝393(100)[M+H]+. 實施例30A N-(芐氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸
在0℃下將N-(芐氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯(實施例29A，1.12g，2.85mmol)提供在THF/水2∶1(15ml)中和然后加入氫氧化鋰一水合物(140mg，5.71mmol，2當(dāng)量)。當(dāng)HPLC色譜圖(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化時(約1h)，用乙酸將反應(yīng)混合物調(diào)節(jié)至pH 3-4，在冷卻條件下真空濃縮和然后通過冷凍干燥過夜去除溶劑。將粗產(chǎn)物通過制備HPLC(方法13)純化，由此獲得958mg(88.7％理論值)的標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法7)Rt＝2.33min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝379(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法1)C20H31N2O5[M+H]+實驗值379.2227，計算值379.2233. 實施例31A (2R，3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-N2-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
方法A(5g級別)在氬氣保護氣氛下，將1N六甲基二硅疊氮化鋰(39.4mmol，39.4ml，2.2當(dāng)量)在THF中的溶液提供在反應(yīng)溶劑THF(200ml)中。在-78℃下，緩慢滴加(S)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-3-苯基丙酸甲酯(5.0g，17.9mmol)的溶液。將混合物在-25℃下攪拌10分鐘，然后再次冷卻至-78℃。將氮雜二羧酸二芐酯(8.54g，28.6mmol，1.6當(dāng)量)一次性加入反應(yīng)混合物。將混合物在-50至-60℃下攪拌3小時。為了終止反應(yīng)，將混合物再次冷卻至-78℃和加入乙酸(5.1ml，89.5mmol，5當(dāng)量)，將混合物然后升溫至0℃和最終RT。類似于實施例12A(方法B)后加工。獲得作為固體的4.8g(44％理論值)的標(biāo)題化合物。
方法B(50g級別)在氬氣保護氣氛下，將1N六甲基二硅疊氮化鋰(452.9mmol，452.9ml，2.2當(dāng)量)在THF中的溶液提供在反應(yīng)溶劑THF(1800ml)中。在-70℃下，緩慢滴加(S)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-3-苯基丙酸甲酯(57.5g，205.8mmol)在THF(600ml)中的溶液。將混合物在-25℃下攪拌10分鐘，然后再次冷卻至-70℃。將氮雜二羧酸二芐酯(98.2g，329.4mmol，1.6當(dāng)量)以4份加入反應(yīng)混合物。將混合物在-50至-60℃下攪拌2小時。為了終止反應(yīng)，將混合物再次冷卻至-70℃和加入乙酸(61.7ml，1mol，5當(dāng)量)，將混合物然后升溫至RT過夜。通過抽吸過濾收集反應(yīng)溶液中的沉淀。將濾器殘余物在50℃下在高真空下干燥(46.1g，粗產(chǎn)物1)。將過濾的母液(反應(yīng)混合物)真空濃縮(粗產(chǎn)物2)。將兩種粗產(chǎn)物1和2從熱乙酸乙酯(2×500ml)(回流，1h；產(chǎn)品級分1(31.7g)和2(37.4g))中再結(jié)晶。將母液再次蒸發(fā)和從叔-丁基甲基醚(370ml)中再結(jié)晶。由此獲得產(chǎn)品級分3(14.5g)?？偣玻@得作為固體的83.6g(70％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝-13°(c＝0.20，在氯仿中)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.88min. LC-MS(方法29)Rt＝2.8min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝478(100)[M-Boc+H]+，578(70)[M+H]+，1156(20)[2M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝576(100)[M-H]-. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO，335K，寬信號)δ＝1.35(s，9H)，3.15(s，3H)，3.30(s，3H)，4.90-5.15(m，6H)，7.20-7.40(m，10H)，8.30，8.95(3s，br，2H)。
實施例32A (2S，3R)-N-[(芐氧基)羰基]-N-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氬氣保護氣氛下，在0℃下將N，N，N，N-四甲基胍(16.6ml，132mmol)加入(2R，3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-N2-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(3.95g，6.84mmol)在無水二氯甲烷p.a.(170ml)中的溶液。使得反應(yīng)混合物解凍并攪拌直至HPLC色譜圖(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約60％產(chǎn)品)(約12h)，通過加入乙酸(10.5ml，pH4-6)以便終止反應(yīng)。將有機相用水(兩次)，飽和碳酸氫鈉水溶液(兩次)和飽和氯化鈉水溶液(一次)洗滌。將水相用二氯甲烷反萃取。合并的有機相通過硫酸鈉干燥，過濾，真空蒸發(fā)并在高真空下干燥。將粗產(chǎn)物通過快速色譜法純化(硅膠，甲苯/乙酸乙酯4∶1)。獲得2.4g(61％理論值，基于回收的原材料68％)的標(biāo)題化合物和490mg的起始化合物(12％理論值)。
[α]20Na＝-120.7°(c＝0.52，在氯仿中)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.99min. LC-MS(方法29)Rt＝2.9min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝478(100)[M-Boc+H]+，578(50)[M+H]+，1156(10)[2M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝502(100)，576(40)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C31H36N3O8[M+H]+實驗值578.2505，計算值578.2497. 實施例33A (2S，3R)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氬氣保護氣氛下，將阮內(nèi)鎳(86mg)加入(2S，3R)-N-[(芐氧基)羰基]-N-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(600mg，1.04mmol)在甲醇/二氯甲烷1∶1(12ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物在壓力高壓滅菌器中在80巴氫壓力下和RT下氫化(72h)。HPLC色譜圖顯示完全轉(zhuǎn)化。在氬氣保護氣氛下將反應(yīng)混合物過濾通過(硅藻土-成層的)玻璃粉。將玻璃粉重復(fù)用甲醇/水/0.2％乙酸洗滌。將濾液用水(兩次)洗滌并然后真空蒸發(fā)。獲得作為固體的粗產(chǎn)物(280mg，92％理論值)，其在不精純化下進一步反應(yīng)。為了分析目的，可以進行凝膠色譜精純化(方法14，甲醇/0.1％TFA)。
[α]20Na＝+11°(c＝0.25，在氯仿中)(TFA鹽)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝1.5min. LC-MS(方法29)Rt＝1.2min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝239(100)，295(40)[M+H]+. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO，TFA鹽)δ＝1.36(s，9H)，3.50(s，3H)，4.30(d，J＝7.2Hz，1H)，5.05(“t”，J＝8.0Hz，1H)，7.30-7.39(m，5H)，7.60(d，J＝9.7Hz，1H)。
13C NMR(125MHz，d6-DMSO，TFA鹽)δ＝28.25(3C)，52.87，54.88，56.87，79.29，127.12(2C)，128.45，128.89(2C)，137.18，154.83，168.14. HR-TOF-MS(方法1)C15H22N2O4[M+H]+實驗值295.1663，計算值295.1653. 實施例34A (2S，3R)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氬氣保護氣氛下，將固體碳酸氫鈉(80mg，0.93mmol，1.5當(dāng)量)在0℃下加入(2S，3R)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(250mg，0.62mmol)和N-芐氧羰基氧基琥珀酰亞胺酯(180mg，0.71mmol，1.15當(dāng)量)在二氯甲烷(20ml)和水(45ml)的混合物中的溶液。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(12h)，由此通過HPLC(方法2)觀察到完全轉(zhuǎn)化。將水相用二氯甲烷反萃取，然后用5％檸檬酸水溶液，飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌，通過硫酸鈉干燥，過濾和真空濃縮。隨后，通過快速色譜法(硅膠，甲苯/乙酸乙酯4∶1)進行純化。獲得144mg(47％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝+13.3°(c＝0.70，在氯仿中)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.6min. LC-MS(方法7)Rt＝2.7min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝329(100)[M-Boc+H]+，373(80)，429(60)[M+H]+，858(10)[2M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.37(s，9H)，3.62(s，3H)，4.58(dd，J＝9.5，4.2Hz，1H)，4.94(m，2H)，5.27(dd，J＝10.4，4.0Hz，1H)，7.21-7.35(m，10H)，7.50(d，J＝10.5Hz，1H)，7.59(d，J＝9.4Hz，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝28.25(3C)，52.31，54.66，59.03，65.71，78.72，126.64(2C)，127.40，127.63(2C)，127.99，128.42(2C)，128.51(2C)，136.90，139.24，154.97，156.23，170.89. HR-TOF-MS(方法1)C23H29N2O6[M+H]+實驗值429.2011，計算值429.2021. 實施例35A (3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸
在氬氣保護氣氛下提供(2S，3R)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(152mg，0.30mmol)在THF/水2∶1(22.5ml)中的溶液。在0℃下，在劇烈攪拌下緩慢滴加脫氣的1％的氫氧化鋰一水合物(14.8mg，0.62mmol，2當(dāng)量)水溶液。將混合物在RT下攪拌直至HPLC色譜圖(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約1h)。隨后，將乙酸(0.1ml)加入反應(yīng)混合物和將反應(yīng)混合物真空濃縮，將殘余物冷凍干燥。將粗產(chǎn)物通過制備HPLC(方法13)精純化。獲得作為產(chǎn)物的74mg(59％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝+22°(c＝0.50，在氯仿中)(通過手性色譜法)； [α]20Na＝+21.5°(c＝0.51，在氯仿中)(通過對映體選擇性合成) LC-MS(方法7)Rt＝2.4min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝315(90)，359(100)，415(80)[M+H]+，729(30)，829.5(50)[2M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝413(100)[M-H]-. 手性HPLC/UV-Vis(方法24)Rt＝5.4min(窄峰)。
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝1.35(s，9H)，4.46(dd，J＝9.6，3.6Hz，1H)，4.91(s，2H)，5.26(dd，J＝9.9，3.6Hz，1H)，7.18-7.32(m，10H)，7.48-7.51(m，2H)，12.95(s，br，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝28.34(3C)，54.84，58.96，65.55，78.56，126.53(2C)，127.23，127.55(2C)，127.93，128.39(2C)，128.51(2C)，137.05，140.16，155.09，156.30，171.62. HR-TOF-MS(方法1)C22H26N2O6[M+H]+實驗值415.1864，計算值415.1864. 實施例36A (3S)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸
關(guān)于制備方法參見實施例35A。
[α]20Na＝-20°(c＝0.49，在氯仿中)。
手性HPLC/UV-Vis(方法24)Rt＝11.4min(寬峰)。
LC-MS(方法7)Rt＝2.5min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝315(40)，359(40)，415(50)[M+H]+，729(20)，829.5(10)[2M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝413(100)[M-H]-. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝1.35(s，9H)，4.45(dd，J＝9.6，3.2Hz，1H)，4.91(s，2H)，5.26(dd，J＝9.4，3.6Hz，1H)，7.18-7.30(m，10H)，7.47-7.52(m，2H)，12.95(s，br，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)C22H26N2O6[M+H]+實驗值415.1869，計算值415.1864. 實施例37A (3S)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯
將(3S)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸(3.96g，9.55mmol)，2-(三甲代甲硅烷基)乙醇(11.3g，95.6mmol，10當(dāng)量)和4分子篩(約200mg，新鮮粉碎)在無水二氯甲烷p.a.(77ml)中的混合物在RT下在氬氣保護氣氛下攪拌3小時。隨后，在-30℃下加入DCC(3.94g，19.11mmol，2當(dāng)量)和DMAP(1.17g，9.55mmol，1當(dāng)量)。使得反應(yīng)混合物解凍(約12h)并在RT下攪拌直至HPLC色譜圖(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約12h)。將反應(yīng)混合物過濾通過硅藻土和然后在RT下真空蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物在RP18柱體(洗脫劑水，然后乙腈)上預(yù)分級并通過制備快速色譜法(1.5kg的硅膠，甲苯/乙酸乙酯4∶1)純化。獲得3.6g(73％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝-8.0°(c＝0.52，在氯仿中) HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝3.2min. LC-MS(方法7)Rt＝3.3min；MS(ESIpos.)m/z(％)＝387(100)，515(90)[M+H]+. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝-0.02(s，9H)，0.88(t，J＝8.0Hz，2H)，1.31(s，9H)，4.02-4.15(m，2H)，4.48(dd，J＝9.6，4.3Hz，1H)，4.86(d，J＝12.6Hz，1H)，4.90(d，J＝12.6Hz，1H)，5.25(dd，J＝10.0，3.8Hz，1H)，7.14-7.29(m，10H)，7.47(d，J＝10.3Hz，1H)，7.50(d，J＝9.7Hz，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)C27H38N2O6Si[M+H]+實驗值515.2567，計算值515.2572. 實施例38A (3S)-3-氨基-N2-[(芐氧基)羰基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯三氟乙酸鹽
根據(jù)工作步驟1使得(3S)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯(3600mg，7.0mmol)反應(yīng)(保留時間10min)。將粗產(chǎn)物通過制備HPLC(方法13，方法21)純化。獲得3060mg(83％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝+15.0°(c＝0.22，在氯仿中) HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝1.9min. LC-MS(方法8)Rt＝1.8min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝387.2(60)，415(100)[M+H]+. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝-0.06(s，9H)，0.52(m，2H)，3.76(m，1H)，3.88(m，1H)，4.49(d，J＝9.3Hz，1H)，4.58(“t”，J＝9.0Hz，1H)，5.08(s，2H)，7.34-7.44(m，10H)，8.12(d，J＝8.5Hz，1H)，8.62(s，br，2H)。
HR-TOF-MS(方法1)C22H30N2O4Si[M+H]+實驗值415.2042，計算值415.2048. 實施例39A (3S)-N-Boc-β-苯丙氨酸甲酯
將(rac)-N-Boc-β-苯丙氨酸甲酯(62.8g，224.8mmol)的對映體混合物通過制備HPLC(方法32)分離成對映體。獲得29.1g的(3R)-N-Boc-β-苯丙氨酸甲酯(95.7％ee，46％理論值，實施例40，較后洗脫物)和30.5g的(3S)-N-Boc-β-苯丙氨酸甲酯(＞99％ee，49％理論值，標(biāo)題化合物，較早洗脫物)。
[α]20Na＝-30°(c＝0.52，在氯仿中)。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝2.5min. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝1.35(s，9H)，2.67(dd，J＝15.4，6.0Hz，1H)，2.75(dd，J＝15.7，8.6Hz，1H)，3.55(s，3H)，4.92(m，1H)，7.23(m，1H)，7.29-7.33(m，4H)，7.48(d，J＝8.3Hz，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝28.38(3C，(C(CH3)3))，41.19(CβH2)，51.25(CαH)，51.54(OCH3)，78.07(C(CH3)3)，126.47(2C)，127.17，128.46(2C)，142.95，154.90，170.86. HR-TOF-MS(方法1)C15H22NO4[M+H]+實驗值280.1533，計算值280.1544. 實施例40A (3R)-N-Boc-β-苯丙氨酸甲酯
根據(jù)實施例39A進行合成。
[α]20Na＝+30°(c＝0.52，在氯仿中)。
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝1.35(s，9H)，2.68(dd，J＝15.2，6.0Hz，1H)，2.75(dd，J＝15.6，8.8Hz，1H)，3.55(s，3H)，4.92(m，1H)，7.23(m，1H)，7.30-7.33(m，4H)，7.48(d，J＝8.7Hz，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)C15H21NO4[M+H]+實驗值280.1555，計算值280.1544. 實施例41A 3-(6-甲基吡啶-2-基)-L-丙氨酸甲酯
將N-(芐氧羰基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-L-丙氨酸甲酯(7.25g，22.1mmol)[S.W.Jones，C.F.Palmer，J.M.Paul，P.D.Tiffin，TetrahedronLett.1999，40，1211-1214]和10％披鈀碳(0.690g)在乙醇(80ml)中的混合物在RT和在大氣壓下氫化1小時。將反應(yīng)混合物通過注射器濾器(Millipore，0.45μ，疏水PTFE)，用乙醇(2×10ml)洗滌。將殘余物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮(通過用甲苯夾帶去除溶劑殘余物，兩次)并在高真空下干燥。獲得作為油的產(chǎn)物(3.89g，產(chǎn)率91％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝0.3min. LC-MS(方法30)Rt＝0.70min，寬峰；MS(ESIpos.)m/z(％)＝195(100)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.95(m，2H)，2.41(s，3H)，2.86(dd，J＝7.4Hz，1H)，2.99(dd，J＝5.9Hz，1H)，3.59(s，3H)，3.73(dd，J＝7.4，5.7Hz，1H)，7.02(d，J＝7.5Hz，1H)，7.06(d，J＝7.1Hz，1H)，7.56(t，J＝7.5Hz，1H)。
實施例42A N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-(6-甲基吡啶-2-基)-L-丙氨酸甲酯
在0℃下將NMM(2當(dāng)量，13.1mmol)和最終HATU(1.3當(dāng)量，3.2g，8.5mmol)緩慢加入N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酸(實施例6A，1.0當(dāng)量，1.6g，6.6mmol)和3-(6-甲基吡啶-2-基)-L-丙氨酸甲酯(實施例41A，1.1當(dāng)量，1.4g，7.2mmol)在無水DMF(26ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(約12h)至RT，由此通過HPLC(方法2)觀察到完全轉(zhuǎn)化。對于后處理，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(水浴35℃)上濃縮反應(yīng)混合物，用乙酸乙酯(100ml)稀釋和隨后用飽和碳酸氫鈉溶液(2×20ml)、5％檸檬酸(2×20ml)和飽和氯化鈉水溶液洗滌。將有機相通過硫酸鈉干燥，過濾和濃縮。獲得作為固體的產(chǎn)物(2.88g，99％理論值)，其可以通過制備HPLC(方法13)精純化。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.1min. LC-MS(方法29)Rt＝1.73min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝422(100)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝420(20)[M-H]-，466(100)[M-H+HCO2H]-. HR-TOF-MS(方法1)C21H34N3O5[M+H]+計算值408.2498，實驗值408.2503. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝0.79(s，9H)，1.23-1.43(m，11H)，2.42(s，3H)，2.99-3.13(m，2H)，3.60(s，3H)，3.95(dt，J＝8.9，3.8Hz，1H)，4.64(m，1H)，6.83(d，J＝8.9Hz，1H)，7.02(d，J＝7.8Hz，1H)，7.07(d，J＝7.7Hz，1H)，7.54(t，J＝7.7Hz，1H)，8.18(d，J＝7.9Hz，1H)。
實施例43A N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-(6-甲基-2-吡啶基)-L-丙氨酸
根據(jù)一般工作步驟4轉(zhuǎn)化N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-(6-甲基-2-吡啶基)-L-丙氨酸甲酯(實施例42A，850mg，2.02mmol)。獲得766mg(93％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝1.8min. LC-MS(方法8)Rt＝1.63min；MS(ESIpos.)m/z(％)＝353(100)，408(90) [M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝332(70)，406(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C21H34N3O5[M+H]+計算值408.2498，實驗值408.2503. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝0.79(s，9H)，1.26-1.37(m，11H)，2.43(s，3H)，3.01(dd，J＝8.6Hz，1H)，3.10(dd，J＝5.3Hz，1H)，3.94(dt，J＝9.2Hz，3.4Hz，1H)，4.57(m，1H)，6.81(d，J＝8.9Hz，1H)，7.02(d，J＝7.7Hz，1H)，7.07(d，J＝7.1Hz，1H)，7.54(t，J＝7.7Hz，1H)，8.08(d，J＝7.9Hz，1H)。
實施例44A N2.1-(叔-丁氧羰基)-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-(6-甲基吡啶-2-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
根據(jù)工作步驟5，將環(huán)肽(實施例26A，40.0mg，31.32μmol)和二肽酸(實施例43A，22.9mg，56.37μmol，1.8當(dāng)量)，借助NMM(17.2μl，156.58μmol，5當(dāng)量)和HATU(21.43mg，56.36μmol，1.8當(dāng)量)，在-10℃在DMF(15ml)中在2.5小時內(nèi)反應(yīng)為酰胺。在色譜純化(方法37)后獲得作為固體的標(biāo)題化合物(29.4mg，55％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.25min. LC-MS(方法7)Rt＝2.05 min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1439(5)[M+H]+，720(100)[M+2H]2+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝1436(100)[M-H]-，718[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法1)C67H108N17O18[M+H]+計算值1438.8053，實驗值1438.8060. 實施例45A N2.1-(叔-丁氧羰基)-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-(吡啶-2-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
根據(jù)工作步驟5，將環(huán)肽(實施例26A，100.0mg，78.29μmol)和N-(叔-丁氧羰基)-4-甲基-D-亮氨酰-3-吡啶-2-基-L-丙氨酸(55.5mg，140.63μmol，1.8當(dāng)量)(參見WO2004099239)，借助NMM(43.0μl，156.58μmol，5當(dāng)量)和HATU(21.43mg，391.46μmol，1.8當(dāng)量)，在DMF(8ml)中在RT下反應(yīng)過夜為酰胺。在色譜分離(方法35)后獲得作為固體的標(biāo)題化合物(111.3mg，86％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝19.44min. LC-MS(方法7)Rt＝2.15min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1424(25)[M+H]+，713(100)[M+2H]2+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝1422(100)[M-H]-，711[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法1)C66H106N17O18[M+H]+計算值1424.7897，實驗值1424.7906. 實施例46A 4-甲基-D-亮氨酸三氟乙酸鹽
如工作步驟1所述，由Boc-保護的氨基酸(實施例6A，20.0g，81.53mmol)獲得標(biāo)題化合物，粗產(chǎn)率為21.7g(quant.)。
MS(ESIpos)m/z(％)＝146(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法1)C7H16N2O2·C2H3N[M+CH3CN+H]+計算值187.1442，實驗值187.1450. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝0.95(m，9H)，1.58(dd，J＝14.5Hz，5.2Hz，1H)，1.81(dd，J＝14.5Hz，6.3Hz，1H)，3.79(t，J＝5.4Hz，1H)，8.32(s，br.，3H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝29.27(3C)，30.26，44.30，50.01，172.23. 實施例47A N-[(芐氧基)羰基]-4-甲基-D-亮氨酸
將氨基酸(實施例46A，10.0g，38.6mmol)和N-芐氧羰基氧基琥珀酰亞胺酯(11.1g，44.4mmol，1.15當(dāng)量)溶解在二氯甲烷/水4∶1(250ml)中。將固體碳酸氫鈉(4.86g，57.9mmol，1.5當(dāng)量)和固體溴化四-正丁基銨(1.2g.3.9mmol，0.1當(dāng)量)在0℃下加入反應(yīng)混合物，以便在RT下攪拌反應(yīng)混合物過夜。HPLC色譜圖顯示完全轉(zhuǎn)化。用二氯甲烷(六次)洗滌堿性水相。隨后，用1N鹽酸水溶液將pH調(diào)節(jié)至2-3。然后用乙酸乙酯萃取水相(三次)。合并的有機相用濃氯化鈉水溶液洗滌，通過硫酸鈉干燥，過濾和真空濃縮。將獲得的粗產(chǎn)物通過制備HPLC(方法35)純化。獲得6.86g(64％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝+2°(c＝0.17在CHCl3)。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝2.2min. LC-MS(方法29)Rt＝2.0min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝236(100)，280(50)[M+H]+； MS(ESIneg)m/z(％)＝170(100)，278(40)[M-H]-. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝0.81(d，J＝6.3Hz，3H)，0.86(d，J＝6.4Hz，3H)，0.89(s，9H)，1.48(m，3H)，1.57(m，2H)，3.61(s，3H)，4.14(m，1H)，4.23(m，1H)，5.03(s，2H)，7.27-7.40(m，6H)，8.19(d，J＝7.9Hz，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝29.53(3C)，30.50，44.11，51.49，65.47，127.75(2C)，127.95，128.51(2C)，137.34，156.03，174.97. HR-TOF-MS(方法1)C15H22NO4計算值280.1544，實驗值280.1535[M+H]+. 實施例48A N-[(芐氧基)羰基]-4-甲基-D-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯
將甲基-L-亮氨酸酯鹽酸鹽(600.9mg，3.31mmol，1.1當(dāng)量)在氬氣保護氣氛下提供在二氯甲烷(250ml)中，在-10℃下將HOBt(1625.3mg，12.03mmol，4當(dāng)量)，NMM(992μl，9.02mmol，3當(dāng)量)，芐氧羰基-保護的氨基酸(實施例47A，840.0mg，3.0mmol，1當(dāng)量)，EDC(1149.7mg，6.01mmol，2當(dāng)量)和另外NMM(661μl，6.02mmol，2當(dāng)量)加入到該溶液中，在攪拌下使得反應(yīng)混合物過夜完全轉(zhuǎn)化。對于后處理，將反應(yīng)溶液在30℃浴溫下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，將殘余物溶解在乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉溶液中，將分離的水相用乙酸乙酯萃取，將合并的有機相連續(xù)用5％檸檬酸溶液，用飽和碳酸氫鈉溶液和用飽和氯化鈉溶液洗滌，通過硫酸鈉干燥。在去除干燥劑后，在30℃浴溫下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上完全去除溶劑。在凍干后，獲得產(chǎn)品，產(chǎn)率為1200mg(98％理論值)。
HPLC(方法2)Rt＝2.65min. LC-MS(方法7)Rt＝2.84min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝407(100)，813(27)[2M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝0.81(d，J＝6.3Hz，3H)，0.86(d，J＝6.3Hz，3H)，0.89(s，9H)，1.42-1.55(m，5H)，3.61(s，3H)4.15(m，1H)，4.23(m，H)，5.03(s，2H)，7.28-7.41(m，6H)，8.01(d，J＝7.9Hz，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)C22H35N2O5計算值407.2541，實驗值407.2534[M+H]+. 實施例49A N-[(芐氧基)羰基]-4-甲基-D-亮氨酰-L-亮氨酸
通過根據(jù)工作步驟4水解，由甲酯(實施例48A，1.1g，2.71mmol)制備標(biāo)題化合物。在4小時的保留時間后，HPLC色譜圖(方法2)顯示幾乎完全轉(zhuǎn)化。對于精純化，將粗產(chǎn)物經(jīng)由制備RP-HPLC(方法36)色譜分離，隨后獲得980mg(92％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法2)Rt＝2.40min. LC-MS(方法7)Rt＝2.56min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝393(100)[M+H]+，785(72)[2M+H]+， MS(ESIneg)m/z(％)＝391(57)[M-H]-，783(100)[2M-H]-. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝0.81(d，J＝6.3Hz，3H)，0.86(d，J＝6.3Hz，3H)，0.88(s，9H)，1.42-1.55(m，5H)，4.11-4.23(m，2H)，5.03(s，2H)，7.27-7.39(m，6H)，8.01(d，J＝8.0Hz，1H)，12.52(s，br.，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)C21H33N2O5計算值393.2384，實驗值393.2383[M+H]+. 實施例50A N2.1-(芐氧羰基)-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-L-亮氨酰-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)工作步驟5，環(huán)肽(實施例26A，120.0mg，93.95μmol)和二肽酸(實施例49A，63.38mg，169.11μmol，1.8當(dāng)量)，借助NMM(52μl，469.75μmol，5當(dāng)量)和HATU(64.3mg，169.11μmol，1.8當(dāng)量)，在RT下在在DMF(15ml)中過夜反應(yīng)為酰胺。在色譜分離后獲得標(biāo)題化合物(方法35)，產(chǎn)率為138mg(96％理論值)。
HPLC(方法25)Rt＝21.46min. LC-MS(方法7)Rt＝2.19min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1424(25)[M+H]+，712(100)[M+2H]2+， MS(ESIneg)m/z(％)＝1422(22)[M-H]-，710(100)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法1)C67H107N16O18計算值1423.7944，實驗值1423.7964[M+H]+. 實施例51A (2Z)-2-{[(芐氧基)羰基]氨基}-3-(6-三氟甲基吡啶-3-基)丙烯酸甲酯
將6-三氟甲基吡啶-3-甲醛(4.85g，27.70mmol)和{[芐氧羰基]氨基}(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(9.17g，27.70mmol，1.0當(dāng)量)溶解在THF(70ml)中并冷卻至-70℃。在-70℃下，緩慢滴加N，N，N，N-四甲基胍(6.38g，55.39mmol，6.95ml，2.0當(dāng)量)，然后將混合物在-70℃下攪拌4小時，隨后在RT下攪拌12小時。濃縮反應(yīng)混合物，用乙酸乙酯(2×100ml)對水萃取。用飽和氯化鈉溶液洗滌合并的有機相，通過硫酸鈉干燥和過濾。在濃縮后，將粗產(chǎn)物色譜分離(硅膠，洗脫劑甲苯，然后甲苯∶乙酸乙酯10∶1)。獲得6.93g(66％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法22)Rt＝4.60min. HPLC/UV-Vis(方法17)Rt＝4.54min. LC-MS(方法29)Rt＝2.44min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝381(100)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝379(100)[M-H]-. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝3.74(s，3H)，5.10(s，2H)，7.27(s，1H)，7.33-7.38(m，5H)，7.94(d，J＝8.5Hz，1H)，8.27(d，J＝8.5Hz，1H)，8.93(s，1H)，9.51(s，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)C18H16N2O4F3[M+H]+計算值381.1062，實驗值381.1065. 實施例52A N-[(芐氧基)羰基]-3-(6-三氟甲基吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯
將實施例化合物51A(10.15g，26.69mmol)溶解在甲醇p.a.(100ml)中。使用套管將氬氣通過約5min，然后加入(+)-1，2-雙[(2S，5S)二乙基phospholano]苯(環(huán)辛二烯)銠(I)三氟甲磺酸鹽(289mg，400μmol，0.015當(dāng)量)。將混合物在4巴氫壓力和RT下在12小時內(nèi)氫化。將混合物然后過濾通過硅藻土(甲醇)和將洗出液濃縮。將粗產(chǎn)物色譜分離(硅膠，洗脫劑甲苯∶乙酸乙酯5∶1)。獲得9.9g(97％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝-24°(c＝0.093在甲醇)。
HPLC/UV-Vis(方法22)Rt＝4.5min. HPLC/UV-Vis(方法17)Rt＝4.49min. LC-MS(方法29)Rt＝2.40min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝383(100)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝273(100)，381(50)[M-H]-. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝2.99(dd，J＝3.5和11.0Hz，1H)，3.22(dd，J＝3.5和11.0Hz，1H)，3.66(s，3H)，4.40(m，1H)，4.97(s，2H)，7.23(d，J＝5.5Hz，1H)，7.29-7.33(m，3H)，7.83(d，J＝6.5Hz，1H)，7.93-7.98(m，2H)，8.65(s，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)C18H18N2O4F3[M+H]+計算值383.1219，實驗值383.1223. 實施例53A 3-(6-三氟甲基吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯
將實施例化合物52A(9.90g，25.89mmol)溶解在甲醇(100ml)中。使用套管將氬氣通過約5min，然后加入披鈀碳(10％，990mg)。將混合物在4巴氫壓力和RT下氫化12小時。將混合物然后過濾通過硅藻土，濃縮并在高真空下干燥。產(chǎn)率5.8g(90％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]19.9Na＝+3°(c＝0.186在甲醇)。
HPLC/UV-Vis(方法22)Rt＝3.34min. HPLC/UV-Vis(方法17)Rt＝3.22min. IR vmax(NaCl，cm-1)3415，1734，1339，1136，1087. LC-MS(方法29)Rt＝1.74min； MS(ESIpoS.)m/z(％)＝249(100)[M+H]+. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝2.85(dd，J＝5.5和13.5Hz，1H)，3.01(dd，J＝5.5和13.5Hz，1H)，3.61(s，3H)，3.63-3.69(m，1H)，7.82(d，J＝7.5Hz，1H)，7.93(d，J＝7.5Hz，1H)，8.61(s，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)C12H15N3O2F3[M+H]+計算值290.1116，實驗值290.1122. 實施例54A N-(叔-丁氧羰基)-3-(叔-丁基)-D-丙氨酰-3-(6-三氟甲基吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯
在-30℃下將NMM(12.92g，127.72mmol，14.04ml，5當(dāng)量)和HATU(9.71g，25.54mmol，1當(dāng)量)緩慢加入實施例化合物53A(6.34g，25.54mmol)和N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酸(6.27g，25.54mmol，1.0當(dāng)量)在無水DMF(240ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(約3h)至RT，由此通過HPLC(方法17)觀察到完全轉(zhuǎn)化。加入磷酸二氫鉀(34.76g，255.44mmol，10當(dāng)量)，將反應(yīng)混合物攪拌20min，然后過濾，加入乙酸乙酯并用飽和碳酸氫鈉溶液(10ml)洗滌混合物。將有機相通過硫酸鈉干燥，過濾和濃縮。將粗產(chǎn)物通過快速色譜法純化(硅膠，洗脫劑環(huán)己烷∶乙酸乙酯梯度10∶1至2∶1)，由此獲得9.74g(73％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]19.9Na＝+7.0°(c＝0.044在甲醇)。
HPLC/UV-Vis(方法22)Rt＝4.89min. HPLC/UV-Vis(方法17)Rt＝4.75min. LC-MS(方法29)Rt＝2.67min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝476(100)，[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝400(80)，474(40)[M-H]-. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝0.74(s，9H)，0.97-1.00(m，1H)，1.20-1.25(m，1H)，1.35(s，9H)，2.99-3.05(m，1H)，3.23-3.26(m，1H)，3.66(s，3H)，3.94(m，1H)，4.60(m，1H)，6.82(d，J＝8.5Hz，1H)，7.78(d，J＝8.0Hz，1H)，7.94(d，J＝8.0Hz，1H)，8.34(d，J＝8.5Hz，1H)，8.64(s，1H)。
IR vmax(NaCl，cm-1)2959，1742，1655，1520，1336，1160，1136，1087，1050，1027. HR-TOF-MS(方法1)C22H33N3O5F3[M+H]+計算值476.2372，實驗值476.2364. 實施例55A N2.1-(叔-丁氧羰基)-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-(6-三氟甲基吡啶-3-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)工作步驟5，環(huán)肽(實施例26A，175.0mg，0.14mmol)和二肽酸(實施例54A，113.8mg，0.25μmol，1.8當(dāng)量)，借助NMM(75μl，0.69mmol，5當(dāng)量)和HATU(93.8mg，0.25mmol，1.8當(dāng)量)，在-10℃在DMF(15ml)中過夜反應(yīng)為酰胺。在色譜分離后獲得標(biāo)題化合物(方法35)，產(chǎn)率為190mg(86％理論值)。
HPLC(方法25)Rt＝21.51min. LC-MS(方法7)Rt＝2.27min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1494(33)[M+H]+，747(100)[M+2H]2+， MS(ESIneg)m/z(％)＝1492(10)[M-H]-，745(100)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法1)C67H105N17O18F3計算值1492.7771，實驗值1492.7778[M+H]+. 實施例56A (2Z)-2-[(叔-丁氧羰基)氨基]-3-環(huán)戊基丙烯酸甲酯
將{[叔-丁氧羰基]氨基}(二甲氧基磷?；?乙酸甲酯(39.2g，132.00mmol)和環(huán)戊烷甲醛(38.9g，396.00mmol，3當(dāng)量)提供于THF(320ml)中，在-70℃下將N，N，N，N-四甲基胍(24.8ml，22.81g，198.00mmol，1.5當(dāng)量)加入該溶液。當(dāng)冷卻浴解凍時，使得反應(yīng)緩慢至RT。在2天內(nèi)，實現(xiàn)完全轉(zhuǎn)化。對于后處理，將乙酸乙酯(1600ml)和水(800ml)加入反應(yīng)，通過硫酸鈉干燥分離的有機相。通過過濾分離干燥劑和將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮。通過柱色譜法(硅膠60∶1kg，洗脫劑環(huán)己烷/乙酸乙酯4∶1)從殘余物中分離產(chǎn)物，產(chǎn)率為34.8g(98％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.76min. 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ＝1.28-1.43(m，2H)，1.46(s，9H)，1.52-1.78(m，4H)，1.83-1.97(m，2H)，2.71(m，1H)，3.78(s，3H)，5.79(s，br.，1H)，6.50(d，J＝9.9Hz，1H)。
實施例57A N-(叔-丁氧羰基)-3-環(huán)戊基-L-丙氨酸甲酯
將實施例化合物56A(13.0g，48.27mmol)溶解在乙醇(220ml)中，將溶液用氬氣沖洗10分鐘，并置入超聲槽中5分鐘。在加入(+)-1，2-雙[(2S，5S)二乙基phospholano]苯(環(huán)辛二烯)銠(I)三氟甲磺酸鹽(100.0mg，0.13mmol)后，將混合物再次用氬氣沖洗一次30分鐘，在超聲槽中脫氣5分鐘，然后在RT下在3.5巴的氫壓力下氫化3天。對于后處理，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上完全去除溶劑，將殘余物在硅膠60(300ml，洗脫劑環(huán)己烷/乙酸乙酯2/1)上色譜分離。獲得標(biāo)題化合物12.9g(94％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.88min. DCI-MS(NH3)m/z＝289(100)[M+NH4]+，560(15)[2M+NH4]+. 1H NMR(200MHz，CDCl3)δ＝1.00-1.25(m，2H)，1.45(s，9H)，1.48-1.95(m，9H)，3.72(s，3H)，4.28(m，1H)，4.95(d，J＝8.4Hz，1H)。
實施例58A 3-環(huán)戊基-L-丙氨酸甲酯鹽酸鹽
根據(jù)工作步驟2，由N-保護的氨基酸(實施例57A，5.0g，18.43mmol)獲得標(biāo)題化合物，粗產(chǎn)率為3.9g(quant.)。
LC-MS(方法30)Rt＝2.02min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝172(100)[M+H]+. 1H NMR(300MHz，d6)δ＝0.98-1.18(m，2H)，1.40-1.67(m，4H)1.68-1.85(m，4H在there 1.82(d，J＝6.6Hz，2H))，1.92(m，1H)，3.75(s，3H)，3.90(t，J＝8.4Hz，1H)，8.63(s，br.，3H)。
實施例59A N-(叔-丁氧羰基)-3-環(huán)戊基-D-丙氨酸甲酯
如實施例57A的方法所述，將丙烯酸酯(實施例56A，13.0g，48.27mmol)和(+)-1，2-雙[(2R，5R)二乙基phospholano]苯(環(huán)辛二烯)銠(I)三氟甲磺酸鹽(100.0mg，0.13mmol)用于制備12.6g(96％理論值)的標(biāo)題化合物。
MS(DCI，NH3)m/z(％)＝289(100)[M+NH4]+，560(15)[2M+NH4]+. 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ＝1.00-1.21(m，2H)，1.45(s，9H)，1.48-1.93(m，9H)，3.73(s，3H)，4.28(m，1H)，4.95(m，1H)。
實施例60A N-(叔-丁氧羰基)-3-環(huán)戊基-D-丙氨酸
根據(jù)工作步驟4，在2小時內(nèi)實施例化合物59A(5.0g，18.43mmol)反應(yīng)為N-保護的氨基酸。獲得5.11g(quant.)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝+7°(c＝0.13在CH2Cl2)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.33min. LC-MS(方法7)Rt＝2.26min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝158(100)[M-C4H8-CO2+H]+； MS(ESIneg)m/z(％)＝256(58)[M-H]-. 1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ＝1.05(m，2H)，1.38(s，9H)，1.42-1.78(m，8H)，1.83(m，1H)，3.85(m，1H)，7.04(d，J＝8.2Hz，1H)，12.27(s，br.，1H)。
實施例61A N-(叔-丁氧羰基)-3-環(huán)戊基-D-丙氨酰-3-環(huán)戊基-L-丙氨酸甲酯
在氬氣保護氣氛下將肽胺(實施例58A，0.9g，4.27mmol，1.1當(dāng)量)提供在二氯甲烷(250ml)中，將溶液冷卻至-10℃，連續(xù)加入HOBt(2.1g，15.54mmol，4當(dāng)量)，NMM(1.3ml，1.2g，11.67mmol，3當(dāng)量)，肽酸(實施例60A，1.0g，3.89mmol)，EDC(1.5g，7.77mmol，2當(dāng)量)和再次NMM(0.8ml，0.8g，7.76mmol，2當(dāng)量)。在冷卻浴中將反應(yīng)緩慢達到RT，過夜完全轉(zhuǎn)化。對于后處理，將水加入反應(yīng)，將混合物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(水浴35℃)上濃縮，加入乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉溶液，用乙酸乙酯萃取分離的水相兩次，合并的有機相隨后用飽和5％檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液連續(xù)洗滌。將有機相通過硫酸鈉干燥，過濾和濃縮。獲得1.64g(quant.)的標(biāo)題化合物作為粗產(chǎn)物。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.97min. LC-MS(方法7)Rt＝2.94min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝411(100)[M+H]+，311(57)[M-C4H8-CO2+H]+. 實施例62A N-(叔-丁氧羰基)-3-環(huán)戊基-D-丙氨酰-3-環(huán)戊基-L-丙氨酸
根據(jù)工作步驟4，將二肽(實施例61A，1.5g，3.65mmol)在1小時內(nèi)反應(yīng)為二肽羧酸。在精純化(方法13)凍干粗產(chǎn)物后，分離標(biāo)題化合物923.4mg(64％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.65min. LC-MS(方法7)Rt＝2.60min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝397(100)[M+H]+，297(60)[M-C4H8-CO2+H]+，793(46)[2M+H]+； MS(ESIneg)m/z(％)＝395(57)[M-H]-，791(100)[2M-H]-. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.05(m，4H)1.38(s，9H)，1.43(m，4H)，1.55(m，6H)，1.61-1.86(m，8H)，3.96(m，1H)，4.16(m，1H)，6.75(d，J＝8.5Hz，1H)，7.96(d，J＝7.9Hz，1H)12.55(s，br.，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)C21H38N2O5計算值397.2702，實驗值397.2697[M+H]+. 實施例63A N2.1-(叔-丁氧羰基)-[3-環(huán)戊基-D-丙氨酰]-[3-環(huán)戊基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)工作步驟5，環(huán)肽(實施例26A，30.0mg，23.49μmol)和二肽酸(實施例62A，16.8mg，42.28μmol，1.8當(dāng)量)，借助NMM(13μl，117.43μmol，5當(dāng)量)和HATU(16.1mg，40.54mmol，1.8當(dāng)量)，在-10℃下在DMF(2ml)中在2.5小時內(nèi)反應(yīng)為酰胺。在色譜分離(方法37)后獲得標(biāo)題化合物，產(chǎn)率為26.6mg(67％理論值)。
HPLC(方法2)Rt＝2.30min. LC-MS(方法7)Rt＝2.21min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1428(35)[M+H]+，664(100)[M+2H]2+， MS(ESIneg)m/z(％)＝1426(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C67H111N16O18計算值1427.8257，實驗值1427.8242[M+H]+. 實施例64A N-[(芐氧基)羰基]-3-(叔-丁基)-D-丙氨酰-3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯三氟乙酸鹽
在0℃下將3-吡啶-3-基-L-丙氨酸(800mg，3.16mmol)和N-(芐氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酸(1.47g，3.16mmol，1當(dāng)量)溶解在DMF(12ml)中。然后加入4-甲基嗎啉(1.74ml，15.8mmol，5當(dāng)量)和HATU(1.8g，4.74mmol，1.5當(dāng)量)，將混合物在RT下攪拌約2小時。將混合物用乙酸乙酯(兩次)針對濃碳酸氫鈉萃取，將合并的有機相用1M檸檬酸洗滌和再次用濃碳酸氫鈉洗滌，通過硫酸鈉干燥，過濾和真空濃縮。在色譜純化(方法39)后，獲得1.1g(63％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]19.9Na＝+6°(c＝0.13在甲醇)。
HPLC(方法17)Rt＝3.92min. HPLC(方法23)Rt＝4.06min. LC-MS(方法7)Rt＝2.03min，MS(ESIpos.)m/z(％)＝442(100)[M+H]+. IR vmax(NaCl，cm-1)3295，2952，2359，1715，1659，1522，1435，1365，1283，1243，1138，1048，1326. HR-TOF-MS(方法1)C24H32N3O5[M+H]+計算值442.2342，實驗值442.2342. 實施例65A N-(芐氧羰基)-3-(叔-丁基)-D-丙氨酰-3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酸
將實施例64A(1.1g，1.98mmol)置入THF-水3∶1(48ml)中并冷卻至-20℃。加入氫氧化鋰(119mg，2.5mmol，4.95當(dāng)量)，將混合物在RT下攪拌12小時。通過加入磷酸二氫鉀(1.35g)終止反應(yīng)并真空濃縮。在色譜純化(方法14)后，獲得作為固體的0.57g(67％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝+44°(c＝0.15在甲醇)。
HPLC(方法17)Rt＝3.73min. HPLC(方法23)Rt＝3.88min. LC-MS(方法7)Rt＝1.72min， MS(ESIpos.)m/z(％)＝428(100)[M+H]+. IR vmax(NaCl，cm-1)3290，2956，1659，1613，1537，1414，1251，1205，1184，1136，1050，1028. HR-TOF-MS(方法1)C23H29N3O5[M+H]+計算值428.2180，實驗值428.2169. 實施例66A N2.1-(芐氧羰基)-[3-(叔-丁基)-D-丙氨酰]-[3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
根據(jù)工作步驟5，環(huán)肽(實施例26A，20.0mg，15.66μmol)和二肽酸(實施例65A，12.0mg，28.19μmol，1.8當(dāng)量)，借助NMM(9μl，78.3μmol，5當(dāng)量)和HATU(10.7mg，28.19μmol，1.8當(dāng)量)，在-20℃至-10℃下在DMF(6ml)中在2.5小時內(nèi)反應(yīng)為酰胺。在色譜分離(例如方法36)后，獲得16.5mg(61％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法25)Rt＝18.55min. LC-MS(方法29)Rt＝1.73min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1458(20)[M+H]+，730(100)[M+2H]2+， MS(ESIneg)m/z(％)＝1456(27)[M-H]-，728(100)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法1)C69H104N17O18計算值1458.7740，實驗值1458.7739[M+H]+. 實施例67A 3-(叔-丁基)-L-丙氨酸甲酯三氟乙酸鹽
將三氟乙酸/二氯甲烷3∶1(220ml)加入N-(叔-丁氧羰基)-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸甲酯(16g，61.70mmol)[J.A.Bajgrowicz，et al.，TetrahedronLett.，1984，2759-2762]，將混合物在RT下攪拌1.5小時。將混合物隨后真空濃縮并將殘余物在HV下干燥。將產(chǎn)率定量(16.5g)。
MS(DCI，NH3)m/z＝160(100)[M+H]+. 1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ＝0.92(s，9H)，1.59(dd，J＝4.7，14.5Hz，1H)，1.80(dd，J＝7.6，14.5Hz，1H)，3.75(s，3H)，3.95(dd，J＝4.7，7.6Hz，1H)，8.5-8.3(br.s，3H)。
實施例68A N-(叔-丁氧羰基)-D-亮氨酰-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸甲酯
在氬氣保護氣氛下將肽胺(實施例77A，4.0g，14.68mmol，1.1當(dāng)量)提供在二氯甲烷(365ml)中，在-10℃下向該溶液中連續(xù)加入HOBt(7.2g，53.23mmol，4當(dāng)量)，NMM(4.3ml，39.92mmol，3當(dāng)量)，N-(叔-丁氧羰基)-D-亮氨酸(3.1g，13.31mmol，1當(dāng)量)[T.Kato，N.Izumiya，Bull.Chem.Soc.Jpn.，1966，39，2242-2249]，EDC(5.1g，26.62mmol，2當(dāng)量)和另外NMM(3ml，26.61mmol，2當(dāng)量)，在攪拌過夜下使得混合物完全轉(zhuǎn)化。對于后處理，將反應(yīng)溶液在30℃浴溫下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，然后通過制備HPLC(例如方法35)色譜分離。獲得5.5g(80％理論值)的標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法7)Rt＝2.72min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝373(78)[M+H]+，273(100)[M-C4H8-CO2+H]+. 實施例69A N-(叔-丁氧羰基)-D-亮氨酰-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸
根據(jù)工作步驟4，在1小時內(nèi)使得實施例化合物68A(400mg，1.07mmol)反應(yīng)為二肽羧酸。對于后處理，將磷酸二氫鉀(219.2mg，1.61mmol，1.5當(dāng)量)加入溶液，將混合物在冷卻條件下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，通過制備HPLC(例如方法35)精純化。獲得標(biāo)題化合物，為凍干物(282.0mg，65％理論值)。(關(guān)于分析數(shù)據(jù)參見WO2004099239)。
實施例70A N2.1-(叔-丁氧羰基)-D-亮氨酰-[3-(叔-丁基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺氟乙酸酯
根據(jù)工作步驟5，環(huán)肽(實施例26A，30.0mg，23.49μmol)和二肽酸(實施例69A，15.2mg，42.28μmol，1.8當(dāng)量)，借助NMM(13μl，117.45μmol，5當(dāng)量)和HATU(16.1mg，42.28μmol，1.8當(dāng)量)，在RT下在DMF(10ml)中過夜反應(yīng)為酰胺。在色譜分離(方法36)后獲得標(biāo)題化合物，產(chǎn)率為34.0mg(96％理論值)。
HPLC(方法2)Rt＝2.25min. LC-MS(方法7)Rt＝2.18min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1390(77)[M+H]+，645(100)[M-C4H8-CO2+2H]2+， MS(ESIneg)m/z(％)＝1387(73)[M-H]-，693(100)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法1)C64H109N16O18計算值1389.8101，實驗值1389.8101[M+H]+. 實施例71A和實施例72A (2S)-N-(叔-丁氧羰基)-3-(三甲代甲硅烷基)-D-丙氨酸(71A)和(2R)-N-(叔-丁氧羰基)-3-(三甲代甲硅烷基)-L-丙氨酸(72A) 根據(jù)M.Merget，et al.，J.Organomet.Chem.2001 628，183-194進行合成。通過在手性相上的制備HPLC(方法26)進行對映體的分離。通過與N-(叔-丁氧羰基)-L-3-三甲代甲硅烷基丙氨酸的真實樣品(2R化合物，Mercachem AMR 39.260)HPLC比較，指定異構(gòu)體。
實施例71A，N-(叔-丁氧羰基)-3-三甲代甲硅烷基-D-丙氨酸
手性HPLC(方法26)Rt＝4.16min，e.e.＞99％. [α]D20＝+1.1(c＝0.83，甲醇) 實施例72A，N-(叔-丁氧羰基)-3-三甲代甲硅烷基-L-丙氨酸
手性HPLC(方法26)Rt＝9.27min，e.e.＞99％ [α]D20＝-1.6(c＝0.66，甲醇) 實施例73A 3-三甲代甲硅烷基-L-丙氨酸甲酯鹽酸鹽
將來自實施例72A(300mg)的化合物溶解在甲醇(3ml)中并冷卻至0℃。在30分鐘內(nèi)滴加氯化三甲基硅烷(590mg，4.7當(dāng)量)，將混合物升溫至RT過夜。將揮發(fā)性組分在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上和隨后在高真空下去除。獲得目標(biāo)化合物(224mg，92％理論值)。
1H NMR(d6-DMSO，300MHz)δ＝0.03(s，9H)，0.97-1.71(m，2H)，3.73(s，3H)，3.93(dd，J＝5.3，10.9Hz，1H)，8.40(br s，3H)。
實施例74A N-芐氧羰基-3-三甲代甲硅烷基-L-丙氨酸甲酯
在0℃下在氬氣下將來自實施例73A的化合物(2.0g)提供在THF(40ml)中。加入三乙胺(2.3g，2.4當(dāng)量)，然后滴加N-芐氧羰基氧代琥珀酰亞胺(2.83g，1.2當(dāng)量)在THF(20ml)中的溶液。將混合物然后在RT下攪拌過夜，濃縮一半，用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌兩次和用飽和氯化鈉溶液洗滌一次。將有機相通過硫酸鈉干燥和在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮。將殘余物通過制備HPLC(方法41)純化。獲得目標(biāo)化合物(2.32g，79％理論值)。
HPLC(方法18)Rt＝4.96min. MS(DCI，NH3)m/z＝327[M+NH4]+(100)，310(3)[M+H]+. 實施例75A (2R)-N-芐氧羰基-3-三甲代甲硅烷基-L-丙氨醇(alaninol)
將氯化鋰(0.64g，15mmol)和硼氫化鈉(0.57g，15mmol)和然后乙醇(22ml)加入實施例74A(2.32g，7.5mmol)在THF(14ml)中的溶液。將混合物在RT下攪拌過夜。對于后處理，用檸檬酸溶液(10％在水)將混合物調(diào)節(jié)至pH 4，同時用冰水冷卻，然后用200ml水稀釋，用二氯甲烷萃取三次。通過硫酸鎂干燥合并的有機相，過濾和真空濃縮。將殘余物通過HPLC(方法41)分離殘余物，將適當(dāng)?shù)募壏终婵諠饪s。獲得作為油的標(biāo)題化合物(1.24g，59％理論值)。
HPLC(方法4)Rt＝4.48min. MS(DCI，NH3)m/z＝299[M+NH4]+(100)，282(13)[M+H]+. 1H NMR(CDCl3，300MHz)δ＝0.03(s，9H)，0.58-0.84(m，2H)，2.13(br.s，1H)，3.45(br.m，1H)，3.65(br.m，1H)，3.83(br.m，1H)，4.72(br.m，1H)，5.08(s，2H)，7.33(m，5H)。
實施例76A (2R)-N-芐氧羰基-3-三甲代甲硅烷基-L-丙氨醛(alaninal)
將吡啶-SO3復(fù)合物(2.04g，12.8mmol)在無水DMSO(12ml)中的溶液在10℃在氬氣下加入實施例75A(0.36g，1.28mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(1.65g，12.8mmol)在7ml的DMSO中的溶液。去除冷卻浴，攪拌混合物另外20分鐘。加入400ml的冰-水并用二乙基醚萃取溶液三次。合并的有機相用檸檬酸溶液(10％在水)洗滌兩次，用水洗滌一次，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌一次，和用飽和氯化鈉溶液洗滌一次，通過硫酸鎂干燥，過濾和在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮。獲得作為油的標(biāo)題化合物(0.39g，93％理論值)并作為粗產(chǎn)物直接使用。
MS(DCI，NH3)m/z＝297[M+NH4]+(100)，280(25)[M+H]+. 1H NMR(CDCl3，300MHz)δ＝0.07(s，9H)，0.78(dd，J＝9.4，14.0Hz，1H)，1.12(dd，J＝5.8，14.0Hz，1H)，5.13(s，2H)，7.35(m，5H)，9.53(s，1H)。
實施例77A 3-(叔-丁基)-L-丙氨酸甲酯三氟乙酸鹽
在RT下在TFA/二氯甲烷1∶3(3ml)中攪拌(2S)-N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-L-丙氨酸甲酯(529mg，2.04mmol)，將溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮并在高真空下干燥。獲得540mg(97％理論值)的產(chǎn)物。
1H NMR(d6-DMSO，300MHz)δ＝0.92(s，9H)，1.59(dd，J＝4.7，14.4Hz，1H)，1.80(dd，J＝7.5，14.4Hz，1H)，3.76(s，3H)，3.95(dd，J＝4.7，7.5Hz，1H)，8.33(br.s，3H)。
實施例78A N-[(2R)-2-芐氧羰基氨基-3-三甲代甲硅烷基丙基]-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸甲酯三氟乙酸氫鹽
在氬氣下，將實施例化合物77A(4.33g，15.9mmol)，實施例化合物76A(7.2g，20.6mmol)和乙酸鈉(1.3g，15.9mmol)在0℃下提供于DMF(140ml)中。加入氰基硼氫鈉(1.99g，31.7mmol)，將混合物在0℃下攪拌2小時。對于后處理，將混合物用1l的乙酸乙酯稀釋，用5％溶液的碳酸氫鈉洗滌兩次。水相用乙酸乙酯反萃取。合并的有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌，通過硫酸鎂干燥，過濾和濃縮。通過制備HPLC(方法39)純化殘余物。獲得作為晶體的6.02g(71％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法4)Rt＝4.8min. ESI-MS(pos.)m/z＝423(100)[M+H]+. 1H NMR(CDCl3，300MHz)δ＝0.03(s，9H)，0.76(dd，J＝5.1，14.7Hz，1H)，0.94(s，9H)，0.95(dd，J＝10.2，14.7Hz，1H)，1.95-1.80(m，2H)，2.93(dd，J＝2.5，12.5Hz，1H)，3.35(dd，J＝9.8，11.3Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.85(dd，J＝4.5，7.9Hz，1H)，4.07-3.90(m，1H)，5.05(d，J＝11.5Hz，1H)，5.16(d，J＝11.5Hz，1H)，5.63(d，J＝0.9Hz，1H)，7.33(s，5H)。
實施例79A N-[(2R)-2-芐氧羰基氨基-3-三甲代甲硅烷基丙基]-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸鹽酸鹽
將實施例化合物78A(6.02g，11.2mmol)溶解在甲醇(225ml)中，加入在水(9當(dāng)量)中的1N氫氧化鋰溶液(101ml)。在RT下將反應(yīng)混合物在RT下攪拌過夜(18h)，然后用1N鹽酸酸化并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上去除甲醇。將剩余的懸浮液用200ml水稀釋，用乙酸乙酯萃取三次。合并的有機相通過硫酸鈉干燥，過濾和濃縮。在高真空下干燥殘余物。獲得5.3g(定量)的標(biāo)題化合物，其在不純化下進一步反應(yīng)。
HPLC(方法4)Rt＝4.6min. MS(ESIpos)m/z(％)＝409(100)[M+H]+， MS(ESIneg)m/z(％)＝407(10)[M-H]-. 1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)δ＝0.03(s，9H)，0.82(m，2H)，0.95(s，9H)，1.68(br.d，J＝14.5，1H)，1.84(dd，J＝9.0，14.5，1H)，2.88(m，1H)，3.10(m，1H)，3.80-4.03(m，2H)，5.01(d，J＝12，1H)，5.13(d，J＝12，1H)，7.29(d，J＝9.0，1H)，7.43-7.56(m，5H)，8.7-9.2(br，2H，NH2+)。
實施例80A N2.1-[(2R)-2-(芐氧羰基氨基)-3-(三甲代甲硅烷基)丙基]-[3-(叔-丁基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.10-N3.2-內(nèi)酰胺雙氟乙酸酯
根據(jù)工作步驟5，環(huán)肽(實施例26A，30.0mg，23.49μmol)和二肽酸(實施例69A，18.8mg，42.28μmol，1.8當(dāng)量)，借助NMM(13μl，117.45μmol，5當(dāng)量)和HATU(16.1mg，42.28μmol，1.8當(dāng)量)，在-20℃至-10℃在DMF(15ml)中在2.5小時內(nèi)轉(zhuǎn)化為酰胺。在色譜分離后獲得標(biāo)題化合物(方法36)，產(chǎn)率為34.0mg(96％理論值)。
HPLC(方法25)Rt＝19.59min. LC-MS(方法7)Rt＝1.97min；MS(ESIpos.)m/z(％)＝720(100)[M+2H]2+. HR-TOF-MS(方法1)C67H111N16O17計算值1439.8077，實驗值1439.8036[M+H]+. 實施例81A (2S)-N-芐氧羰基-3-叔-丁基-L-丙氨醛
類似于實施例75A和實施例76A的反應(yīng)順序，由Z-β-叔-丁基-丙氨酸甲酯制備化合物。
MS(DCI，NH3)m/z＝281[M+NH4]+(100)；264(20)[M+H]+. 1H NMR(CDCl3，300MHz)δ＝1.00(s，9H)，1.30(dd，J＝8.3，14.7Hz，1H)，1.83(dd，J＝3.8，14.6Hz，1H)，4.33(dt，J＝3.8，8.7Hz，1H)，5.06(m，1H)，5.12(s，2H)，7.36(m，5H)，9.58(s，1H)。
實施例82A N-[(2S)-2-芐氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸甲酯三氟乙酸鹽
類似于實施例78A，由實施例81A和實施例77A制備化合物。產(chǎn)率860mg(36％理論值)。
HPLC(方法4)Rt＝4.7min. MS(ESI pos)m/z＝407(100)[M+H]+. 1H NMR(CDCl3，300MHz)δ＝0.91(s，1H)，0.93(s，9H)，1.34(br.d，J＝15，1H)，1.53(dd，J＝8.7，14.7，1H)，1.68-1.95(m，2H)，2.89(dd，J＝3.5，12Hz，1H)，3.33(dd，J＝10.5，12Hz，1H)，3.84(m，1H)，3.80(s，3H)，3.99(m，1H)，5.04(d，J＝12Hz，1H)，5.13(d，J＝12Hz，1H)，5.73(br.d，J＝8.5Hz，1H)，7.32(m，5H)。
實施例83A N-[(2S)-2-芐氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-3-叔-丁基-L-丙氨酸三氟乙酸鹽
類似于實施例79A，由實施例83A(1.10g，2.11mmol)和1N氫氧化鋰溶液(19ml)制備該化合物。產(chǎn)率895mg(83％理論值)。
HPLC(方法4)Rt＝4.47min. MS(ESIpos.)m/z(％)＝393(100)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝391(4)[M-H]-. 1H NMR(d6-DMSO，300MHz)δ＝0.89(s，9H)，0.93(s，9H)，1.30-1.45(m，2H)，1.64(dd，J＝2，14Hz，1H)，1.81(dd，J＝9.7，14Hz，1H)，2.88(m，1H)，2.98(m，1H)，3.85-3.99(m，2H)，4.99(d，J＝12.7Hz，1H)，5.12(d，J＝12.7Hz，1H)，7.07(d，J＝9.0Hz，1H)，7.27-7.40(m，5H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝29.00(3C)，29.38(3C)，29.96(2C)，42.22，45.10，45.64，50.52，56，97，65，39，127.56(2C)，127.73，128.23(2C)，136.83，155.47，171.47. HR-TOF-MS(方法1)C22H37N2O4[M+H]+實驗值393.2753，計算值393.2748 實施例84A N2.1-[(2S)-2-(芐氧羰基氨基)-3-(叔-丁基)丙基]-[3-(叔-丁基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.10-N3.2-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
根據(jù)工作步驟5，環(huán)肽(實施例26A，170.0mg，0.13mmol)，二肽酸(實施例83A，121.4mg，0.24mmol，1.8當(dāng)量)，NMM(73μl，0.67μmol，5當(dāng)量)和HATU(91.1mg，42.28μmol，1.8當(dāng)量)在-20℃至-10℃在DMF(6ml)中在2.5小時內(nèi)反應(yīng)為酰胺。將標(biāo)題化合物色譜分離(例如方法35)，由此獲得34.0mg(96％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法2)Rt＝2.08min. LC-MS(方法7)Rt＝1.9min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝712.7(100)[M+2H]2+，1424(5)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝1422.7(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C68H111N16O17[M+H]+實驗值1423.8318，計算值1423.8313. 實施例85A N2.1-[(2R)-2-(芐氧羰基氨基)-3-(叔-丁基)丙基]-[3-(叔-丁基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.10-N3.2-內(nèi)酰胺雙氟乙酸酯
根據(jù)工作步驟5，環(huán)肽(實施例26A，42.0mg，32.88μmol)，N-((2R)-2-{[(芐氧基)羰基]氨基}-4，4-二甲基戊基)-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸三氟乙酸鹽(29.98mg，59.18μmol，1.8當(dāng)量)，NMM(18μl，164.40μmol，5當(dāng)量)和HATU(22.5mg，59.18μmol，1.8當(dāng)量)在-20℃至-10℃在DMF(15ml)中在2.5小時內(nèi)反應(yīng)為酰胺。在色譜分離后獲得標(biāo)題化合物(方法10)(37.5mg，69％理論值)。
類似于實施例82A的順序，由化合物77A和N-芐氧羰基-3-(叔-丁基)-D-丙氨醛和隨后水解(參見實施例83A)可以制備二肽酸， N-((2R)-2-{[(芐氧基)羰基]氨基}-4，4-二甲基戊基)-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸三氟乙酸氫鹽。
HPLC(方法2)Rt＝2.13min. LC-MS(方法7)Rt＝1.98min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝712(100)[M+2H]2+， MS(ESIneg.)m/z(％)＝1422(100)[M-H]-，710(40)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法1)C68H111N16O17[M+H]+實驗值1423.8282，計算值1423.8308. 實施例86A N-(叔-丁氧羰基)-3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯
在氬氣下將(2S)-N-(叔-丁氧羰基)-3-(吡啶-3-基)丙氨酸(25.00g，93.88mmol)溶解在300ml的二氯甲烷中。加入甲醇(11.4ml，9.02g，281mmol，3當(dāng)量)和一粒DMAP。將混合物然后冷卻至0℃。加入EDC(19.80g，103mmol，1.1當(dāng)量)。在5分鐘后，去除冰浴，將混合物在RT下攪拌1小時。將混合物然后真空濃縮，將乙酸乙酯加入殘余物，將混合物針對飽和碳酸氫鈉溶液萃取。用乙酸乙酯反萃取水相一次，然后合并的有機相用0.5M檸檬酸洗滌和然后再次用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌。將有機相通過硫酸鈉干燥，過濾和真空濃縮。剩下油，其在油泵真空干燥期間結(jié)晶。產(chǎn)率23.60g(90％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法17)Rt＝3.28min. LC-MS(方法7)Rt＝1.21min，MS(ESIpos.)m/z(％)＝281(100)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.30(s，9H)，2.86(m，1H)，3.04(m，1H)，3.63(s，3H)，4.22(m，1H)，7.28-7.39(m，2H)，7.69(d，1H)，8.43(m，2H)。
實施例87A 3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯雙三氟乙酸鹽
將來自實施例86A的化合物(11.8g，42.09mmol)溶解在二氯甲烷中的三氟乙酸(160ml；30％溶液)中，在RT下攪拌30分鐘。將混合物然后真空濃縮。將殘余物置入少量水中并凍干。然后將甲苯加入凍干物并將混合物真空濃縮。最終，將產(chǎn)物在油泵真空中干燥至恒重。產(chǎn)率17.15g(quant.)。
HPLC/UV-Vis(方法23)Rt＝0.88min. LC-MS(方法7)Rt＝0.46min， MS(ESIpos.)m/z(％)＝181(100)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝2.79(dd，1H)，2.92(dd，1H)，3.60(s，3H)，3.63(m，1H)，7.30(m，1H)，7.62(d，1H)，8.41(m，2H)。
實施例88A N-(叔-丁氧羰基)-3-(三甲代甲硅烷基)-D-丙氨酰-3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯
將來自實施例87A的化合物(10.31g，39.4mmol)和來自實施例71A的化合物(16.10g，39.4mmol，1當(dāng)量)在0℃下溶解在DMF(186ml)中。然后加入NMM(17.34ml，16.00g，4當(dāng)量)和HATU(22.49g，59.16mmol，1.5當(dāng)量)。將混合物在RT下攪拌2小時。將叔丁基甲基醚加入混合物，將混合物用飽和碳酸鈉溶液洗滌。將水相用叔丁基甲基醚反萃取一次，合并的有機相然后用1M檸檬酸水溶液洗滌和再次用飽和碳酸鈉溶液洗滌，通過硫酸鈉干燥，過濾和真空濃縮。將混合物過濾通過硅膠(環(huán)己烷/乙酸乙酯2∶1)。產(chǎn)率14.1g(84％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法17)Rt＝3.91min. LC-MS(方法7)Rt＝1.90min， MS(ESIpos.)m/z(％)＝424(100)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝-0.09(s，9H)，0.56-0.75(m，2H)，1.47(s，9H)，2.90(dd，1H)，3.09(dd，1H)，3.62(s，3H)，3.98(m，1H)，4.49(m，1H)，6.68(d，1H)，7.26(dd，1H)，7.61(m，1H)，8.20(d，1H)，8.40(m，2H)。
實施例89A N-(叔-丁氧羰基)-3-(三甲代甲硅烷基)-D-丙氨酰-3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酸
將來自實施例88A(7.4g，17.56mmol)的化合物置入THF-水(6∶4)中，冷卻至0℃，加入氫氧化鋰一水合物(1.47g，35.13mmol，2當(dāng)量)。將混合物在0℃下攪拌。在1小時后，加入另一當(dāng)量(0.74g)的氫氧化鋰一水合物，將混合物攪拌另一小時。在真空中蒸餾掉大部分THF，將殘余物用兩份MTBE洗滌，然后通過加入檸檬酸將水相調(diào)節(jié)至pH4。固體沉淀。將混合物用三份乙酸乙酯萃取，由此固體溶解。合并的有機相通過硫酸鈉干燥，過濾和濃縮。將粗產(chǎn)物通過凝膠色譜法(方法3，洗脫劑甲醇)純化。產(chǎn)率6.67g(93％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法17)Rt＝3.73min. LC-MS(方法7)Rt＝1.68min， MS(ESIpos.)m/z(％)＝410(40)[M+H]+. 1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ＝-0.090(s，9H)，0.56-0.75(m，2H)，1.35(s，9H)，2.90(dd，1H)，3.09(dd，1H)，3.98(m，1H)，4.41(m，1H)，6.70(d，1H)，7.26(dd，1H)，7.60(m，1H)，8.00(d，1H)，8.37(m，2H)。
實施例90A N-(叔-芐氧羰基)-3-(三甲代甲硅烷基)-D-丙氨酰-3-吡啶-3-基-L-丙氨酸
將來自實施例89A的化合物(500mg，1.22mmol)溶解在二氯甲烷(20ml)中的30％TFA中，并在RT下攪拌30分鐘。將混合物然后濃縮，將殘余物置入水中并凍干。將凍干物(600mg的固體)在氬氣下提供在THF(25ml)中，然后在0℃下加入N-(芐氧羰基氧基)琥珀酰亞胺(320mg，1.28mmol，1.15當(dāng)量)和最終4-甲基嗎啉(150μl，1.34mmol，1.2當(dāng)量)。使得混合物升溫至RT并進一步攪拌過夜。通過加入冰醋酸終止反應(yīng)并真空濃縮。將殘余物置入乙酸乙酯中并對0.5M的檸檬酸振蕩兩次。將有機相通過硫酸鈉干燥，過濾和真空濃縮。通過色譜法(方法34)純化殘余物。產(chǎn)率395mg(0.71mmol，58％理論值)。
HPLC(方法17)Rt＝3.79min. LC-MS(方法7)Rt＝1.84min，MS(ESIpos.)m/z(％)＝444.1(100)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝-0.07(s，9H)，0.60-0.75(m，2H)，2.97-3.03(m，1H)，3.28(m，1H)，3.88(m，1H)，4.54(m，1H)，4.98(d，J＝12.7，1H)，4.98(d，J＝12.7，1H)，5.07(d，J＝12.7，1H)7.27-7.35(m，6H)，7.65(m，1H)，8.08(d，J＝7.04，1H)，8.19(d，J＝8.8，1H)，8.62(s，2H)。
實施例91A N2.1-(芐氧羰基)-[3-(三甲代甲硅烷基)-D-丙氨酰]-[3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
將HATU(1.6當(dāng)量，8.9mg，23μmol)首先在氬氣保護氣氛下在-20℃下加入環(huán)肽(實施例26A，1.0當(dāng)量，18.6mg，15μmol)，二肽酸(實施例90A，1.5當(dāng)量，9.7mg，22μmol)和NMM(1.0當(dāng)量，15μmol)在無水DMF(200μl)中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌(約15min)和再次加入NMM(2.5當(dāng)量，38μmol)。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(約12h)至RT和然后顯示胺組分的完全轉(zhuǎn)化(HPLC監(jiān)視，方法2)。將固體磷酸二氫鉀(10當(dāng)量，500μmol)加入反應(yīng)混合物，將混合物然后真空蒸發(fā)并通過色譜法純化(方法21)。獲得15.8mg(63％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝1.9min，λmax(定性)＝210nm(s)，255-270(m)。
LC-MS(方法7)Rt＝2.0min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝738(100)[M-Boc+2H]2+，1475(15)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝682(100)，736(80)[M-2H]2-，1473(60)[M-H]-. 實施例92A 3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸鹽酸鹽
將N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸(4.5g，12.1mmol，實施例10A)預(yù)溶解在二噁烷(3ml)中。在RT下，滴加氯化氫在二噁烷(30.2mmol，120mmol，10當(dāng)量)中的4N溶液。將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，真空蒸發(fā)并在高真空下干燥。獲得作為固體的標(biāo)題化合物(3.5g，99％理論值)。
LC-MS(方法7)Rt＝1.52min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝273.6(100)[M+H]+； MS(ESIneg)m/z(％)＝271.5(100)[M-H]-. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝0.85(s，9H)，0.86(s，9H)，1.49(dd，J＝14.3，1.6Hz，1H)，1.50(d，J＝13.8Hz，1H)，1.64(dd，J＝14.3，4.0Hz，1H)，1.71(dd，J＝14.3，6.9Hz，1H)，3.77(“t”，J＝6.5Hz，1H)，4.14(m，1H)，8.27(s，br，3H)，8.94(d，J＝8.2Hz，1H)，12.58(s，br，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝28.41(3C)，29.50(3C)，30.08，30.38，44.46，44.80，50.03，50.30，169.10，173.98. HR-TOF-MS(方法1)C14H29N2O3計算值273.2173，實驗值273.2167[M+H]+. 實施例93A N-(芐氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸
在氬氣保護氣氛下將3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸(3.73g，12.1mmol，實施例92A)溶解在THF(170ml)中。在0℃下加入水(170ml)，芐氧羰基氧基琥珀酰亞胺酯(4.52g，18.1mmol，1.5當(dāng)量)和N-甲基嗎啉(4.28g，4.23mmol，3.5當(dāng)量)以后，將混合物在RT下劇烈攪拌直至所有原材料已經(jīng)轉(zhuǎn)化(數(shù)小時，HPLC監(jiān)視，方法2)。將混合物用冰醋酸猝滅。真空抽掉THF。將剩余水相用乙酸乙酯分層，用4N鹽酸調(diào)節(jié)至pH＜3，然后用乙酸乙酯萃取數(shù)次。用鹽水洗滌有機相，通過硫酸鈉干燥，過濾和濃縮。將獲得的泡沫用乙腈攪拌，由此形成固體，其通過過濾收集，然后用少量乙腈洗滌。一旦已經(jīng)濃縮，該過程可以用濾液再重復(fù)數(shù)次。將合并的固體在高真空下干燥，由此獲得作為固體的標(biāo)題化合物。將剩余的母液濃縮并通過制備HPLC(方法10)純化。獲得標(biāo)題化合物(合并的固體和來自HPLC分離的純化產(chǎn)物)，為固體(3.49g，71％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.6min. LC-MS(方法8)Rt＝2.46min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝363(60)，407(100)[M+H]+. MS(ESIneg)m/z(％)＝297(100)，405.5(40)[M-H]-. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝0.81(s，9H)，0.83(s，9H)，1.40-1.44(m，2H)，1.49(dd，J＝14.3，9.7Hz，1H)，1.58(dd，J＝13.5，1.4Hz，1H)，4.07(m，1H)，4.13(m，1H)，4.94(d，J＝12.3Hz，1H)，4.99(d，J＝12.5Hz，1H)，7.25-7.32(m，5H)，7.92(d，J＝8.5Hz，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝29.49(3C)，29.75(3C)，30.41，30.46，44.52，45.11，49.55，52.73，65.49，127.70(2C)，127.91，128.48(2C)，137.31，155.59，172.52，174.50. HR-TOF-MS(方法1)C22H34N2O5計算值407.2541，實驗值407.2531[M+H]+. 實施例94A N2-(芐氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-[(3R)-3-叔-丁基氨基-L-苯丙氨酸]甲酯
將HOBt(4當(dāng)量，5.51g，40.77mmol)，N-甲基嗎啉(4當(dāng)量，40.77mmol)，N-芐氧羰基二肽(N-芐氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸，1.1當(dāng)量，4.56g，11.21mmol，實施例93A)和EDC(2當(dāng)量，3.91g，20.38mmol)在-30℃下連續(xù)加入外消旋氨基酸甲酯(1.0當(dāng)量，4.16g，10.19mmol，實施例14)在二氯甲烷p.a.(100ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(約12h)至RT，由此通過HPLC(方法2)觀察到胺組分的完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用磷酸二氫鉀(5.0當(dāng)量，6.93g，50.96mmol)猝滅，真空濃縮，置入乙酸乙酯(約400ml)并然后用5％檸檬酸水溶液(兩次)、蒸餾水和飽和氯化鈉溶液洗滌。將混合物通過硫酸鈉干燥和過濾。將粗產(chǎn)物隨后過濾通過硅膠。將溶液真空濃縮至干燥，然后進一步在高真空下干燥。獲得5.36g(77％理論值)的標(biāo)題化合物，為外消旋混合物，在氨基苯丙氨酸上具有相對(2S*，3R*)立體化學(xué)。在進一步的色譜分離步驟(方法42)上將非對映體彼此分離。獲得2.87g(41％理論值)的標(biāo)題化合物(de＞99％，方法28)。用對映體純的氨基酸甲酯也可以類似地進行該反應(yīng)。可以直接獲得非對映體純的產(chǎn)物。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝3.1min. HPLC/UV-Vis(方法28)Rt＝4.84min. LC-MS(方法8)Rt＝2.7min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝583.5(100)[M+H-CO2-C4H8]+，683.5(60)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝681.6(10)[M-H]-，727.6(100)[M-H+HCO2H]-.LC-MS(方法7)Rt＝3.1min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝583.5(100)[M+H-CO2-C4H8]+，683.5(40)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝573(100)，681.6(5)[M-H]-，727.6(40)[M-H+HCO2H]-. 實施例95A N2-(芐氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-[(3R)-3-叔-丁基氨基-L-苯丙氨酸]
在氬氣保護氣氛下，將三肽甲酯(實施例94A，1.00g，1.46mmol)溶液提供在THF/水2∶1(300ml)中。在0℃下，在劇烈攪拌下緩慢滴加脫氣的5％氫氧化鋰(59.6mg，2.5mmol，1.7當(dāng)量)水溶液。將混合物在0℃下攪拌直至HPLC色譜圖(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約6h)。如果保留時間過長，存在差向異構(gòu)化的風(fēng)險。隨后，加入乙酸(0.4ml)，將反應(yīng)混合物真空濃縮和用乙酸乙酯(100ml)分層?，F(xiàn)在將水相用5％檸檬酸(pH2-3)酸化，然后用乙酸乙酯(50ml，三次)萃取。用飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機相(20ml，兩次)，通過硫酸鈉干燥，過濾，真空濃縮并在高真空下干燥。將粗產(chǎn)物通過制備HPLC(方法38)精純化。獲得682mg(56％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.9min. HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝24.6min. LC-MS(方法7)Rt＝2.9min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝569.2(100)，669.3(50)[M+H]+，1337.4(40)； MS(ESIneg.)m/z(％)＝667.2(100)[M-H]-，1335.4(80)。
HR-TOF-MS(方法1)C36H53N4O8[M+H]+實驗值669.3881，計算值669.3858. 實施例96A N2-(芐氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-[(3R)-3-叔-丁基氨基-L-苯丙氨酸]2-(三甲代甲硅烷基)乙基酯
將三肽酸(實施例96A，733mg，1.10mmol)，2-(三甲代甲硅烷基)乙醇(1.30g，11.0mmol，10當(dāng)量)和4分子篩(約100mg)在無水二氯甲烷p.a.(6.5ml)中的混合物在氬氣保護氣氛下在RT下攪拌30min。隨后，在-30℃下加入DCC(452mg，2.20mmol，2當(dāng)量)和DMAP(134mg，1.10mmol，1當(dāng)量)。使得反應(yīng)混合物解凍(約12h)并在RT下攪拌直至HPLC色譜圖(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約12h)。將反應(yīng)混合物用冰醋酸(125μl)猝滅，然后在RT下真空蒸發(fā)，懸浮在少量二氯甲烷(6.5ml)中，過濾通過ecRP18-HPLC柱體(Macherey Nagel)，再次濃縮并然后通過制備HPLC(方法35)精純化。獲得706mg(84％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝3.4min. LC-MS(方法7)Rt＝3.4min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝669.5(80)，769.6(100)[M+2H]2+，1556(30)。
HR-TOF-MS(方法1)C41H65N4O8Si[M+H]+實驗值769.4548，計算值769.4567. 實施例97A N2-(芐氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙基酯三氟乙酸鹽
在氬氣保護氣氛下提供N-(叔-丁氧羰基)-保護的三肽(720mg，0.94mmol，實施例96A)。在RT和在劇烈攪拌下，滴加在二噁烷(40ml)中的4N鹽酸。攪拌混合物直至分析HPLC(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約30min)。將反應(yīng)混合物在RT下真空蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物通過制備HPLC(方法10)純化并凍干。獲得標(biāo)題化合物，為凍干物(394mg，54％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝25.2min. HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.4min. LC-MS(方法8)Rt＝2.3min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝669.6(100)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝703.6(100)[M-H+HCO2H]-. LC-MS(方法7)Rt＝2.6min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝669.4(100)[M+H]+. 實施例98A N2-(芐氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-N3-{叔-丁氧羰基-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙基酯三氟乙酸鹽
將HATU(1.5當(dāng)量，58.3mg，0.15mmol)首先在-15℃、在氬氣保護氣氛下加入Boc-八肽(實施例20A，1.0當(dāng)量，114.4mg，0.10mmol)，三肽(實施例97A，1.0當(dāng)量，80.0mg，0.10mmol，實施例97A)和N-甲基嗎啉(1.0當(dāng)量，0.10mmol)在無水DMF(3.0ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌(約15min)和再次加入NMM(1.0當(dāng)量，0.10mmol)。將反應(yīng)混合物升溫至0℃和再次加入HATU(2.5當(dāng)量，0.25mmol)。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(約12h)至RT和然后顯示胺組分的完全轉(zhuǎn)化(HPLC監(jiān)視，方法3)。將固體磷酸二氫鉀(5當(dāng)量，0.50mmol)加入反應(yīng)混合物和然后將混合物在高真空下蒸發(fā)并通過色譜法純化(方法21或13)，接著通過加入TFA(100μmol，作為在乙腈-水1∶1中的0.05％溶液)將色譜產(chǎn)物隨后進行鹽交換。獲得140.5mg(78％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.6min. HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝26.6min. LC-MS(方法7)Rt＝2.5min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1656.8(100)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝1655(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C78H131N16O21Si[M+H]+實驗值1655.9467，計算值1655.9439. 實施例99A N2-(芐氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-N3-{叔-丁氧羰基-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸三氟乙酸鹽
將4分子篩加入TMSE酯(460mg，0.260mmol，實施例98A)在無水THF(8ml)中的溶液，將混合物在RT下在氬氣保護氣氛下攪拌(15min)。隨后在2小時的時期內(nèi)將1N氟化四丁基銨溶液(4.16ml，4.16mmol，16當(dāng)量)以兩份加入干燥的溶液中。將混合物攪拌直至觀察到完全轉(zhuǎn)化(HPLC，方法2)。將反應(yīng)混合物用冰醋酸(298μl，5.198mmol，20當(dāng)量)猝滅，真空濃縮和通過制備HPLC(方法21)直接純化。在凍干后，獲得作為凍干物的產(chǎn)物(375mg，86％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.4min. LC-MS(方法7)Rt＝2.3min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝728.8(100)[M+2H-CO2-C4H8]2+，778.8(30)[M+2H]2+，1556.9(40)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝1554(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C73H119N16O21[M+H]+實驗值1555.8737，計算值1555.8731. 實施例100A N2-(芐氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-N3-{(3R)-3-羥基-L-亮氨酰-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸雙三氟乙酸鹽
在氬氣保護氣氛下提供N-(叔-丁氧羰基)-保護的化合物(100mg，0.06mmol，實施例99A)。在RT和在劇烈攪拌下，滴加在二噁烷(15ml)中的4N鹽酸。攪拌混合物直至分析HPLC(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約30min)。將反應(yīng)混合物在RT下真空蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物通過制備HPLC(方法35)純化并凍干。獲得標(biāo)題化合物，為凍干物(85.5mg，85％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝1.9min. HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝18.4min，λmax(定性)＝210nm(s)，255-270(w)。
LC-MS(方法7)Rt＝1.8min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝728.7(100)[M+2H]2+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝1454(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C68H111N16O19[M+H]+實驗值1455.8192，計算值1455.8206. 實施例101A N2-(芐氧羰基)-N3-{[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸三氟乙酸鹽
在氬氣保護氣氛下提供在二噁烷(10ml)中的N-(叔-丁氧羰基)-保護的九肽(實施例22A，1200mg，0.848mmol)。在RT和在劇烈攪拌下，滴加在二噁烷(230ml)中的4 N鹽酸。攪拌混合物直至分析HPLC(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化(約1h)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮反應(yīng)混合物，然后將殘余物在RT下與水混合，然后真空蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物通過制備HPLC(方法11)純化并凍干。獲得標(biāo)題化合物，為無色固體(918mg，95％純度，83％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝1.6min. HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝14.3min. LC-MS(方法7)Rt＝1.4min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝601.6(100)[M+2H]2+，1201.7(20)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝1199.8(100)[M-H]-. 實施例102A N2.1-(芐氧羰基)-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-叔-丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
將HATU(1.6當(dāng)量，9.4mg，25μmol)首先在0℃、在氬氣保護氣氛下加入環(huán)肽(實施例26A，1.0當(dāng)量，16.1mg，15μmol)，二肽酸N-(芐氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸(9.4mg，23μmol，1.5當(dāng)量，實施例93A)和N-甲基嗎啉(1.0當(dāng)量，15μmol)在無水DMF(250μl)中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌(約15min)和再次加入N-甲基嗎啉(3.5當(dāng)量，54μmol)。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(約12h)至RT和然后顯示胺組分的完全轉(zhuǎn)化(HPLC監(jiān)視，方法3)。將固體磷酸二氫鉀(10當(dāng)量，150μmol)加入反應(yīng)混合物和然后將混合物在高真空下蒸發(fā)并通過色譜法純化(方法10)。獲得17.7mg(74％理論值)的產(chǎn)物。
備選制備方法在0℃下，將HATU(47mg，125μmol，3當(dāng)量)加入游離的十一肽(N2-(芐氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-N3-{(3R)-3-羥基-L-亮氨酰-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸雙三氟乙酸鹽，實施例100A，70mg，42μmol)在DMF(30ml)和NMM(32μl，6當(dāng)量)中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌直至完全轉(zhuǎn)化(12h，HPLC監(jiān)視)。隨后，將反應(yīng)混合物用磷酸二氫鉀(10當(dāng)量，56.6mg)猝滅，真空濃縮和通過制備HPLC(方法36)直接純化。獲得的產(chǎn)物為固體(74.4mg，73％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.3min. HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝24.0min，λmax(定性)＝210nm(s)，255-270(w)。
1H NMR(500MHz，d5-吡啶)δ0.98-1.21(m，39H，12CH3)，1.36(m，1H)，1.52(s，br，1H)，1.60(d，J＝4.1Hz，3H，CH3)，1.89(m，1H)，1.96-2.03(m，2H)，2.09-2.35(m，5H)，2.47(“d”，J＝15.3Hz，1H)，3.15(s，br，2H)，3.87(“d”，J＝14.2Hz，1H)，4.04(“d”，J＝9.5Hz，1H)，4.17(s，br，1H)，4.37-4.55(m，4H)，4.66(s，br，1H)，4.74(q，J＝5.2Hz，1H)，4.83(“t”，J＝9.3Hz，1H)，4.91(s，br，1H)，5.20(s，1H)，5.36-5.42(m，2H)，5.62(d，J＝12.1Hz，1H)，5.70(d，J＝12.5Hz，1H)，5.99-6.06(m，2H)，6.73(s，br，2H)，7.24(“t”，J＝7.6Hz，1H)，7.28(d，J＝6.8Hz，1H)，7.34(“t”，J＝7.6Hz，2H)，7.40(m，1H)，7.46(“t”，J＝7.2Hz，2H)，7.57(m，2H)，7.62(s，br，1H)，7.68(s，br，1H)，7.82(s，br，1H)，7.97(“d”，J＝6.5Hz，2H)，8.19(s，br，1H)，8.24-8.29(m，2H)，8.35(s，1H)，8.52(s，1H)，8.57(m，1H)，8.63(m，1H)，8.85(s，br，1H)，9.05(s，1H)，9.75(s，1H)，11.30(s，br，1H)。對于8質(zhì)子，不能對信號賦值。
LC-MS(方法7)Rt＝2.1min；MS(ESIpos.)m/z(％)＝719.8(100)[M+2H]2+，1437.9(30)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝663.7(100)，1435.9(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C68H109N16O18[M+H]+實驗值1437.8135，計算值1437.8101. 實施例103A D-亮氨酰-N1-{(3S，6S，12S，15S，18R，21S，24S，27S，28R)-6-[(1S)-2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基]-18-(3-{[氨基(亞氨基)甲基]氨基}丙基)-12-[(1S)-1-羥基乙基]-3-(羥基甲基)-24-[(1R)-1-羥基-2-甲基丙基]-21-異丁基-15-異丙基-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-28-苯基-1-氧雜-4，7，10，13，16，19，22，25-八氮雜環(huán)二十八碳烷-27-基}-L-亮氨酰胺雙三氟乙酸鹽
關(guān)于片野菌素A的合成，參見WO 04/099239實施例2A。
例舉性實施方案 實施例1 [3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-叔-丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
根據(jù)工作步驟1，使得N-(叔-丁氧羰基)環(huán)肽(實施例27A，10mg，10μmol)反應(yīng)。在通過制備HPLC(方法10)色譜純化后，通過冷凍干燥獲得6.5mg的產(chǎn)物(64％理論值)。
在備選方法中，根據(jù)工作步驟3，由Cbz-保護的環(huán)肽(實施例102A)制備標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝1.9min， λmax(定性)＝210nm(s)，265(m)。
LC-MS(方法5)Rt＝4.51min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝652.8(100)[M+2H]2+，1304.9(10)[M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝650.7(10)，1301.9(10)[M-H]-，1347.9[M-H+HCO2H]-. 1H NMR(500MHz，d5-吡啶)δ＝0.82(3H)，0.95(3H)，0.99(3H)，1.05(9H)，1.07(3H)，1.11(9H)，1.12(3H)，1.18(3H)，1.32，1.46，1.61(3H)，1.93，1.97，2.02，2.03，2.13(2H)，2.19(2H)，2.27，2.32，2.35，2.35，2.35，3.18(2H)，3.94，4.02，4.15，4.31，4.36，4.37，4.47，4.50，4.58，4.59，4.75，4.99，5.17，5.33，5.38，6.00，6.00，6.40，7.21(2H)，7.45(2H)，7.64，7.72，7.73，7.92，8.02，8.17，8.23，8.30，8.50，8.55，8.85，9.09，11.29.對于tBuAla1 NH2，tBuAla2 NH，HyLeu4NH，HyLeu4 OH，Arg6 NζH，Arg6 NζH2，allo Thr8 OH，HyAsn10 OH，Ser11 OH，沒有發(fā)現(xiàn)明確的1H信號。
13C NMR(126MHz，d5-吡啶)δ＝10.40，16.00，19.20，19.20，20.70，21.30，23.90，24.70，26.20，26.50，28.60，29.40(3C)，29.80(3C)，30.90，36.00，41.10，41.30，44.00，44.23，44.60，47.00，47.20，51.50，52.80，54.30，55.50，55.60，56.60，57.70，58.40，60.30，60.60，62.60，63.00，70.20，71.90，75.20，128.20(2C)，128.30，129.10(2C)，137.70，158.23，169.38，171.04，172.23，172.43(2C)，173.12，174.04，174.29，174.66，174.84，175.41，176.64. HR-TOF-MS(方法1)C60H103N16O16[M+H]+實驗值1303.7719，計算值1303.7733. 通過單晶X-射線結(jié)構(gòu)分析，證實結(jié)構(gòu)。
實施例2 D-亮氨酰-L-亮氨酰-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
在氬氣保護氣氛下，將Cbz-保護的環(huán)肽(實施例28A，800μg，0.5μmol)溶解在甲醇(1ml)中，然后加入1N鹽酸水溶液(50μl)和10％披鈀碳(1mg)。將混合物在RT和在大氣壓下氫化直至(約1h)分析HPLC(方法2)顯示完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物過濾(注射器濾器Biotage，PTFE)，真空濃縮并在高真空下干燥。將粗產(chǎn)物通過制備HPLC(方法10)純化。獲得600μg(76％理論值)的固體產(chǎn)物。
[α]20Na＝-66.0°(c＝0.24在甲醇)。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝1.7min， λmax(定性)＝210nm(s)，265(m)。
LC-MS(方法5)Rt＝4.3min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝638.7(100)[M+2H]2+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝1274(100)[M-H]-. 1H NMR(500MHz，d5-吡啶)δ＝0.72(3H)，0.77(3H)，0.89(3H)，0.96(3H)，0.99(3H)，1.02(3H)，1.02(3H)，1.08(3H)，1.09(3H)，1.22(3H)，1.29，1.44，1.58(3H)，1.75，1.99，2.00，2.09(2H)，2.10，2.14(2H)，2.17，2.21(2H)，2.21，2.29，2.29，2.39，2.39，3.18，3.33，4.00，4.10，4.21，4.35，4.35，4.48，4.53，4.61，4.71，4.80，5.06，5.17，5.35，5.36，6.04，6.05，6.63，7.25(2H)，7.50(2H)，7.67，7.70，7.88，8.07，8.11，8.24，8.24，8.26，8.47，8.54，8.95，9.23，9.31，11.26.對于Leu1NH2，Leu2 NH，HyLeu4 OH，Arg6 NζH，Arg6 NζH2，allo Thr8 OH，HyAsn10 OH，Ser11 OH沒有發(fā)現(xiàn)明顯的1H信號。
13C NMR(126MHz，d5-吡啶)δ＝16.27，19.17，19.90，20.49，20.87，21.11，21.70，22.63，23.40，24.19，24.81，25.23，25.23，26.06，26.61，21.70，28.97，31.04，36.52，40.00，41.3 1，41.94，42.40，45.43，52.60，53.26，53.72，56.09，56.62，57.94，58.53，58.75，60.83，60.83，62.61，63.47，70.50，72.11，75.39，128.09(2C)，128.19，128.99(2C)，138.52，158.12，169.39，170.44，172.25，172.46，173.13，173.58，174.16，174.32，174.59，174.59，174.69，176.64. MALDI-MSm/z(％)＝1275(100)[M+H]+，1297(5)[M+Na]+，1313(5)[M+K]+. MALDI-MS/MS@1275m/z(％)＝86(100)，199(50)，1049(20)。
HR-TOF-MS(方法1)C58H99N16O16[M+H]+實驗值1275.7424，計算值1275.7420. 通過單晶X-射線結(jié)構(gòu)分析，證實結(jié)構(gòu)。
進行氨基酸分析(方法9)(表A)。
表A 1mg/ml溶解在20％甲醇中 Hy-Asn，Hy-Leu不能定量，因為沒有標(biāo)準(zhǔn)。
Hy-Asn很可能作為Hy-Asp存在。
實施例3 [3-(三甲代甲硅烷基)-D-丙氨酰]-[3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三(三氟乙酸鹽)
根據(jù)工作步驟3使得Cbz-保護的環(huán)肽(實施例91A，19.9mg，12μmol)反應(yīng)。在通過制備HPLC(方法21)色譜純化后，通過冷凍干燥獲得14.7mg(99％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝1.4min，λmax(定性)＝210nm(s)，265(m)。
LC-MS(方法5)Rt＝1.50min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝671.0(100)[M+2H]2+，1340.4(10)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝668.8(100)，1338.4(10)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C60H97N17O16Si[M+H]+實驗值1340.7117，計算值1340.7142. 通過單晶X-射線結(jié)構(gòu)分析，證實結(jié)構(gòu)。
實施例4 [3-(叔-丁基)-D-丙氨酰]-[3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三(三氟乙酸鹽)
根據(jù)工作步驟3使得Cbz-保護的環(huán)肽(實施例66A，15.0mg，8.89μmol)反應(yīng)。在通過制備HPLC(方法38)色譜純化后，通過冷凍干燥獲得11.7mg(79％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝1.51min. LC-MS(方法7)Rt＝1.36min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1326(10)[M+H]+，663(100)[M+2H]2+， MS(ESIneg.)m/z(％)＝1324(28)[M-H]-，662(100)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法1)C61H98N17O16[M+H]+實驗值1324.7352，計算值1324.7372. 實施例5 N2.1-[(2S)-2-氨基-3-(叔-丁基)丙基]-[3-(叔-丁基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.10-N3.2-內(nèi)酰胺三(三氟乙酸鹽)
類似于工作步驟3，使得Cbz-保護的環(huán)肽(實施例84A，169.0mg，0.11mmol)反應(yīng)。在通過制備RP-HPLC(例如方法35)精純化后，分離產(chǎn)物，產(chǎn)率為140.0mg(84％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝15.01min. LC-MS(方法7)Rt＝1.54min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝645(100)[M+2H]2+， MS(ESIneg.)m/z(％)＝1288(100)[M-H]-，643.8(16)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法1)C60H105N16O15[M+H]+實驗值1289.7950，計算值1289.7940. 實施例6 [3-(叔-丁基)-D-丙氨酰]-[3-(6-甲基吡啶-2-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三(三氟乙酸鹽)
類似于工作步驟1，使得叔-丁氧羰基-保護的環(huán)肽(實施例44A，142.0mg，85.20μmol)反應(yīng)。在通過制備RP-HPLC(方法39)精純化后，分離產(chǎn)物，產(chǎn)率為118.0mg(82％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝12.88min. LC-MS(方法7)Rt＝1.58min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1339(5)[M+H]+，670(100)[M+2H]2+， MS(ESIneg.)m/z(％)＝1337(100)[M-H]-，668(6)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法1)C62H101N17O16[M+H]+實驗值1338.7507，計算值1338.7529. 實施例7 [3-(叔-丁基)-D-丙氨酰]-[3-(6-三氟甲基吡啶-3-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
類似于工作步驟1，使得叔-丁氧羰基-保護的環(huán)肽(實施例55A，180.0mg，0.11mmol)反應(yīng)。在通過制備RP-HPLC(方法39)精純化后，分離產(chǎn)物，產(chǎn)率為182.0mg(97％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝1.71min. LC-MS(方法29)Rt＝1.30min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1392(10)[M+H]+，697(100)[M+2H]2+， MS(ESIneg.)m/z(％)＝1391(20)[M-H]-，695(100)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法1)C62H97N17O16F3[M+H]+實驗值1392.7267，計算值1392.7260. 實施例8 N2.1-[(2R)-2-氨基-3-(三甲代甲硅烷基)丙基]-[3-(叔-丁基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.10-N3.2-內(nèi)酰胺三(三氟乙酸鹽)
類似于工作步驟3，使得芐氧羰基-保護的環(huán)肽(實施例80A，32mg，19.19μmol)反應(yīng)。在通過制備RP-HPLC(方法39)精純化后，分離產(chǎn)物，產(chǎn)率為21.3mg(67％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝15.60min. LC-MS(方法7)Rt＝1.74min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝653(100)[M+2H]2+， MS(ESIneg.)m/z(％)＝1304(100)[M-H]-，651(95)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法1)C59H105N16O15Si[M+H]+實驗值1305.7667，計算值1305.7710. 實施例9 D-亮氨酰-[3-叔-丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
類似于工作步驟3，使得芐氧羰基-保護的環(huán)肽(實施例70A，32.0mg，21.28μmol)反應(yīng)。在通過制備RP-HPLC(方法35)精純化后，分離產(chǎn)物，產(chǎn)率為22.7mg(70％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝14.00min. LC-MS(方法7)Rt＝1.63min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1289(4)[M+H]+，645(100)[M+2H]2+， MS(ESIneg.)m/z(％)＝1287(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C59H101N16O16[M+H]+實驗值1289.7583，計算值1289.7576. 實施例10 [3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-(吡啶-2-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三(三氟乙酸鹽)
類似于工作步驟1，使得叔-丁氧羰基-保護的環(huán)肽(實施例45A，105.0mg，63.53μmol)反應(yīng)。在通過制備RP-HPLC(方法35)精純化后，分離產(chǎn)物，產(chǎn)率為84.4mg(80％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝14.16min. LC-MS(方法7)Rt＝1.30min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1325(15)[M+H]+，663(100)[M+2H]2+， MS(ESIneg.)m/z(％)＝1323(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C61H98N17O16[M+H]+實驗值1324.7351，計算值1324.7372. 實施例11 [3-叔-丁基-D-丙氨酰]-L-亮氨酰-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三(三氟乙酸鹽)
類似于工作步驟1，使得叔-丁氧羰基-保護的環(huán)肽(實施例50A，131.0mg，85.19μmol)反應(yīng)。在通過制備RP-HPLC(方法35)精純化后，分離產(chǎn)物，產(chǎn)率為49.5mg(38％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝14.56min. LC-MS(方法7)Rt＝1.58min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝1290(5)[M+H]+，645(100)[M+2H]2+， MS(ESIneg.)m/z(％)＝1288(100)[M-H]-，643(100)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法1)C59H101N16O16[M+H]+實驗值1289.7567，計算值1289.7576. 實施例12 [3-環(huán)-戊基-D-丙氨酰]-[3-環(huán)-戊基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
類似于工作步驟1，使得叔-丁氧羰基-保護的環(huán)肽(實施例63A，25.0mg，15μmol)反應(yīng)。在通過制備RP-HPLC(方法35)精純化后，分離產(chǎn)物，產(chǎn)率為24.5mg(quant.)。
HPLC/UV-Vis(方法25)Rt＝17.2min. LC-MS(方法7)Rt＝1.66min； MS(ESIpos.)m/z(％)＝664.8(100)[M+2H]2+，1328(10)[M+H]+， MS(ESIneg.)m/z(％)＝1326(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法1)C62H103N16O16[M+H]+實驗值1327.7761，計算值1327.7733. B.生理活性的評價 可以在下列測定中顯示本發(fā)明化合物的體外活性 最低抑制濃度(MIC)的測定 根據(jù)NCCLS準(zhǔn)則在液體稀釋試驗中測定MIC。將金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)133、屎腸球菌(Entercococcus.faecalis)27159、糞腸球菌(E.faecium)4147和肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)G9a的過夜培養(yǎng)物在1∶2的稀釋系列中與所述的測試物質(zhì)溫育。用Isosensitest培養(yǎng)基(Difco，Irvine/USA)中每ml細胞數(shù)為105微生物進行MIC測定，除肺炎鏈球菌在含有10％牛血清的BHI肉湯(Difco，Irvine/USA)中以每ml細胞數(shù)為106微生物以外。將所述培養(yǎng)在37℃溫育18-24小時，肺炎鏈球菌在10％CO2的存在下。
將不再有可見的細菌生長發(fā)生的每種情況中的最低物質(zhì)濃度定義為MIC。MIC的值以μg/ml報道。
在表B中顯示了本發(fā)明化合物的典型體外活性數(shù)據(jù) 表B 可以在下列動物模型中顯示本發(fā)明化合物對于細菌感染治療的適合性 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)133的全身感染 將金黃色葡萄球菌(S.aureus)133的細胞在BHI肉湯(Oxoid，New York/USA)中過夜培養(yǎng)。將過夜的培養(yǎng)物在新鮮BHI肉湯中1∶100稀釋并溫育3小時。將當(dāng)時在對數(shù)生長期中的細胞離心出并用緩沖的生理鹽水洗滌兩次。然后將鹽水中的細胞懸浮液光度測定地調(diào)節(jié)到50個消光單位。在稀釋步驟(1∶15)后，將所述懸浮液與10％粘蛋白溶液1∶1混合。腹膜內(nèi)給藥0.25ml/20g小鼠的該感染溶液(相當(dāng)于1×106微生物/小鼠)。在感染后30分鐘在腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)進行治療。將雌性CFW1小鼠用于感染實驗。在6天的時期內(nèi)記錄所述動物的存活率。
本發(fā)明化合物的腎耐受性的性質(zhì)可以在下列動物模型中顯示 用于測定腎毒性作用的小鼠模型 通過組織學(xué)觀察在多次給藥具體劑量后的小鼠的腎來分析九酯肽的腎毒性副作用。為此，用溶解在水溶液或加入Solutol的物質(zhì)每日靜脈內(nèi)(i.v.)或腹膜內(nèi)(i.p.)處理5-6只動物。通過光學(xué)顯微鏡評估腎臟的蘇木精和曙紅(H&E)染色石蠟切片來確定腎毒性作用。任選地進行′高碘酸Schiff(PAS)反應(yīng)來更好地顯示糖蛋白。作為管型嗜堿粒細胞增多和變性/再生發(fā)生的嚴重程度(嚴重程度0＝無作用；1＝最小作用；2＝輕微作用；3＝中度作用；4＝嚴重損傷)，對于每只動物半定量地確定腎毒性作用。每個動物組或衍生系計算管型變性/再生的平均嚴重程度和發(fā)生率(涉及的動物的數(shù)目)。超出這的腎臟變化，如管膨脹和壞死以及壞死物質(zhì)的累積也被列出。
C.藥物組合物的例舉性實施方案 本發(fā)明的化合物可以以下列方式轉(zhuǎn)化成藥物制劑 片劑 組成 100mg實施例1的化合物，50mg乳糖(一水合物)，50mg玉米淀粉(天然的)，10mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP 25)(BASF，Ludwigshafen，德國)和2mg硬脂酸鎂。
片劑重量212mg。直徑8mm，曲率半徑12mm。
制備 將活性化合物、乳糖和淀粉的混合物用水中的5％PVP溶液(m/m)造粒。將所述粒劑干燥然后與硬脂酸鎂混合5分鐘。將該混合物用常規(guī)壓片機擠壓(參見上面用于片劑的形式)。用于壓縮的壓縮力指標(biāo)是15kN。
可以口服給藥的混懸劑 組成 1000mg實施例1的化合物，1000mg乙醇(96％)，400mg的Rhodigel(來自FMC的黃原膠，賓夕法尼亞，USA)和99g水。
10ml的口服混懸劑對應(yīng)于100mg本發(fā)明化合物的單一劑量。
制備 將Rhodigel懸浮在乙醇中，并將所述活性化合物加入到所述懸浮液。攪拌的同時加入水。將所述混合物攪拌約6h直到Rhodigel的溶脹是完全的。
可以靜脈內(nèi)給藥的溶液劑 組成 100-200mg實施例1的化合物，15g聚乙二醇400和250g注射用水。
制備 在攪拌下將實施例1的化合物和聚乙二醇400一起溶解在水中。通過過濾(孔徑0.22μm)將所述溶液消毒并在無菌條件之下分配到熱滅菌的輸液瓶中。將后者用輸注塞和卷曲帽封閉。
權(quán)利要求
1.式(Ib)的化合物，
其中
R6表示氫或甲基，
R7表示下式的基團
其中
*是與所述胺的鍵合位點，
R1表示C1-C6-烷基、C2-C6-鏈烯基、C3-C6-環(huán)烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、鏈烯基、環(huán)烷基和芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，芐氧基，C3-C6-環(huán)烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元雜環(huán)基，5-至10-元雜芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和芐氧羰基氨基，
其中對于它們的部分的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基可以被0、1、2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元雜環(huán)基，
R2表示C1-C6-烷基、C2-C6-鏈烯基、C3-C6-環(huán)烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、鏈烯基、環(huán)烷基和芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，芐氧基，C3-C6-環(huán)烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元雜環(huán)基，5-至10-元雜芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和芐氧羰基氨基，
其中對于它們的部分的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元雜環(huán)基，
R4表示C1-C6-烷基、C2-C6-鏈烯基、C3-C6-環(huán)烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、鏈烯基、環(huán)烷基和芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，芐氧基，C3-C6-環(huán)烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元雜環(huán)基，5-至1 0-元雜芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基-氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和芐氧羰基氨基，
其中對于它們的部分的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元雜環(huán)基，
R5表示C1-C6-烷基、C2-C6-鏈烯基、C3-C6-環(huán)烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、鏈烯基、環(huán)烷基和芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，芐氧基，C3-C6-環(huán)烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元雜環(huán)基，5-至10-元雜芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基-氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和芐氧羰基氨基，
其中對于它們的部分的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組鹵素，羥基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元雜環(huán)基，
或它的鹽、它的溶劑合物或它的鹽的溶劑合物中的一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其特征在于
R6表示甲基，
R7表示下式的基團
其中
*是與所述胺的鍵合位點，
R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羥基-2-甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羥基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羥基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羥基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基，
R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羥基-2-甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羥基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羥基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羥基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基，
R4表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羥基-2-甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基-丁-1-基，1-羥基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羥基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羥基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基，
R5表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羥基-2-甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羥基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羥基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羥基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羥基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基，或它的鹽、它的溶劑合物或它的鹽的溶劑合物中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其特征在于
R6表示甲基，
R7表示下式的基團
其中
*是與所述胺的鍵合位點，
R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基，
R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基，
R4表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基，
R5表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2個取代基取代，所述取代基彼此獨立地選自由下列各項組成的組羥基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和嗎啉基，或它的鹽、它的溶劑合物或它的鹽的溶劑合物中的一種。
4.制備根據(jù)權(quán)利要求1的式(Ib)化合物的方法，其特征在于[A]式(II)的化合物，
其中
R6具有在權(quán)利要求1中指出的含義，
首先與下式的化合物反應(yīng)，
其中
R1，R2，R4和R5具有在權(quán)利要求1中指出的含義，
R3表示叔-丁氧羰基或芐氧羰基，并且
X1表示鹵素，優(yōu)選溴，氯或氟，或羥基，并然后與酸和/或通過氫解反應(yīng)，或
[B]式(IV)的化合物，
其中
R6具有在權(quán)利要求1中指出的含義，
首先與下式的化合物反應(yīng)，
其中
R1，R2，R4和R5具有在權(quán)利要求1中指出的含義，
并且然后，在4-步合成中，
a)與氟化物試劑反應(yīng)，
b)與酸反應(yīng)，
c)當(dāng)適合時在堿的存在下與脫水劑反應(yīng)，和
d)通過氫解反應(yīng)。
5.用于治療和/或預(yù)防疾病的根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項的化合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項的化合物在制備用于治療和/或預(yù)防疾病的藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項的化合物在制備用于治療和/或預(yù)防細菌感染的藥物中的應(yīng)用。
8.藥物，其含有與惰性的、非毒性的藥用賦形劑組合的根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項的化合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的藥物，其用于治療和/或預(yù)防細菌感染。
10.用于在人和動物中控制細菌感染的方法，其中施用抗菌有效量的根
據(jù)權(quán)利要求1至3任一項的至少一種化合物、根據(jù)權(quán)利要求8的藥
物或根據(jù)權(quán)利要求6或7獲得的藥物。
11.用于制備下式化合物的方法，2-(三甲代甲硅烷基)乙基-(3R)-3-氨基-N2-[(芐氧基)羰基]-L-苯丙氨酸酯三氟乙酸鹽(實施例19A)
其特征在于在6-步合成中，下式的化合物(rac)-3-[(叔-丁氧羰基)氨
基]-3-苯基丙酸甲酯
a)在堿的存在下，與氮雜二羧酸二芐酯反應(yīng)，
b)N，N，N，N，-四甲基胍反應(yīng)，
c)在阮內(nèi)鎳的存在下與氫反應(yīng)，
d)在堿的存在下與N-芐氧基羰氧基琥珀酰亞胺酯反應(yīng)，
e)與堿反應(yīng)和隨后色譜法對映體分離，和
f)與在二氯甲烷中的三氟乙酸或二噁烷中的氯化氫反應(yīng)。
12.下式的化合物
(3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸(實施例17A和實施例35A)
或
(3R)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯(實施例18A)
或
(3R)-3-氨基-(N2-[(芐氧基)羰基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯三氟乙酸鹽(實施例19A)
或
(2S，3R)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(實施例33A)
或
(2S，3R)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(實施例34A)
或
(3S)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸(實施例36A)
或
(3S)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯(實施例37A)
或
(3S)-3-氨基-N2-[(芐氧基)羰基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯三氟乙酸鹽(實施例38A)
全文摘要
本發(fā)明涉及環(huán)狀九肽酰胺類，它們的制備方法，和它們在制備用于治療和/或預(yù)防疾病、特別是細菌感染性疾病的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號C07K7/00GK101107265SQ200580045935
公開日2008年1月16日 申請日期2005年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月5日
發(fā)明者弗朗茨·馮努斯鮑姆, 尼娜·布呂納, 昌塔爾·菲爾斯特納, 賴納·恩德曼, 雅克·拉戈, 約阿希姆·泰爾塞, 維爾納·施羅德, 索尼亞·安勞夫, 約阿希姆·舒馬赫爾, 埃爾克·哈特曼 申請人:艾庫里斯有限及兩合公司